Адсорбционная иммобилизация глюкоамилазы на ионогенных и неионогенных носителях тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Шкутина, Ирина Викторовна

• Шкутина, Ирина Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шкутина, Ирина Викторовна

Введение

Глава I. Обзор литературы

1.1. Структура и физико-химические свойства гидролитического фермента глюкоамилазы

1.2. Особенности гидролиза полисахаридов глюкоамилазой

1.3. Способы иммобилизации глюкоамилазы

1.4. Влияние инактивационных процессов на стабильность свободного и иммобилизованного фермента

Глава II. Характеристика объектов и методов исследования

2.1. Объекты исследования

2.2. Подготовка сорбентов к работе

2.3. Методика адсорбционной иммобилизации

2.4. Метод Лоури

2.5. Глюкозооксидазный метод

2.6. Подготовка образцов для исследования методом

ИК спектроскопии

Глава III. Иммобилизация глюкоамилазы на сорбентах различного типа

3.1. Иммобилизация глюкоамилазы на ионогенных носителях

3.2. Иммобилизация глюкоамилазы на неионогенном сорбенте Стиросорб

3.3. Каталитические свойства иммобилизованного биокатализатора

3.4. Идентификация каталитически активных групп свободной и иммобилизованной глюкоамилазы

Глава IV. Исследование характера взаимодействия глюкоамилазы с функциональными группами сорбентов методом ИК спектроскопии 82 4.1. Интерпретация спектрограмм свободной и иммобилизованной глюкоамилазы

4.2. Расчет энергетических параметров водородной связи глюкоамилаза-носитель

4.3. Исследование характера взаимодействия глюкоамилазы со Стиросорбом

4.4. Влияние иммобилизации на изменение вторичной структуры белка

Глава V. Кислотная и термическая инактивация свободной и иммобилизованной глюкоамилазы

5.1. Сравнительная характеристика стабильности иммобилизованной глюкоамилазы на разных носителях

5.2. Зависимость термостабильности свободного и иммобилизованного биокатализатора от концентрации ионов водорода

5.3. Определение кинетико-термодинамических параметров реакции гидролиза крахмала свободной и иммобилизованной глюкоамилазой

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Адсорбционная иммобилизация глюкоамилазы на ионогенных и неионогенных носителях»

Актуальность работы. В последнее время в области химической энзимологии достигнуто глубокое понимание физико-химической сущности биологического катализа, определены механизмы регуляции таких важных свойств ферментов, как активность и стабильность. Все уникальные качества ферментов обусловлены обычными молекулярно-физическими и химическими закономерностями, но проявляющимися только в особых условиях. Объяснение огромных преимуществ, которыми ферментативный катализ отличается от небиологического гетерогенного и гомогенного катализа, заложено фактически в исключительно сложной структуре макромолекулы ферментов и функционировании их активных центров.

Исследование механизма действия амилолитических ферментов, осуществляющих гидролиз сложных природных субстратов, позволяет создать теоретическую базу ферментации возобновляемого растительного сырья и получать продукты с заданными свойствами. К подобным процессам относится ферментативный гидролиз крахмала - важнейшая технологическая операция на пищевых предприятиях, перерабатывающих крахмалосодержащее сырье. Гидролиз с помощью глюкоамилазы (КФ 3.2.1.3, а-1,4-глюкангидролаза) протекает в более мягких условиях по сравнению с кислотным, требующим большой концентрации ионов водорода и высокой температуры. Вместе с тем использование растворимых ферментов сдерживается их обычными недостатками: однократность действия, относительно низкая стабильность, трудность регулирования глубины ферментативной реакции.

Иммобилизация ферментов, т.е. их закрепление на поверхности носителя, переводит фермент из разряда гомогенных растворимых катализаторов в разряд гетерогенных со всеми вытекающими из этого технологическими преимуществами. В ряде случаев удается повысить также стабильность биокатализатора по отношению к денатурирующим факторам среды. Подбор же носителей в каждом конкретном случае представляет специальную экспериментальную задачу. Кроме того немаловажное значение имеет экономическая доступность метода и экологическая безопасность.

Из существующих методов иммобилизации адсорбционный отличается простотой, носители можно легко регенирировать, структура фермента изменяется в меньшей степени, чем при ковалентном связывании. Адсорбционный метод является одновременно способом моделирования биоструктуры и позволяет изучать не только свойства ферментов, но и дает определенные сведения о строении биомембран. Известны работы по иммобилизации глюкоамилазы как на неорганических, так и на органических носителях, среди которых можно отметить иммобилизацию на цеолите, целлюлозе, силохроме, сефадексе, силикагеле, ионообменных смолах. Однако полученные препараты иммобилизованного фермента не обладают достаточной активностью и стабильностью для широкого использования в производственных условиях.

Поэтому актуальным остается решение ряда теоретических и практических вопросов, связанных с изучением влияния природы носителя на сохранение и поддержание активности фермента, анализ устойчивости надмолекулярных структур, определение кинетико-термодинамических параметров катализа иммобилизованными ферментами.

Цель работы заключалась в исследовании закономерностей адсорбционной иммобилизации гидролитического фермента глюкоамилазы на ионогенных аминокарбоксильных носителях и неионогенном сорбенте Стиросорб и изучении физико-химических свойств иммобилизованной глюкоамилазы.

Задачи работы:

1. Исследование процесса адсорбции глюкоамилазы в зависимости от структуры (гранульной и волокнистой), ионной формы (Н-С1, Н-ОН, NaOH) сорбентов, концентрации ионов водорода и фермента.

2. Идентификация функциональных групп, входящих в активный центр глюкоамилазы.

3. Исследование характера связывания глюкоамилазы с функциональными группами ионообменников.

4. Расчет энергетических параметров водородной связи комплекса глюкоамилаза - сорбент.

5. Исследование кислотной и термической инактивации свободной и иммобилизованной глюкоамилазы. Определение кинетико-термодинамических параметров реакции гидролиза крахмала.

Научная новизна. Впервые проведена иммобилизация глюкоамилазы на амфотерных гранульных: АНКБ-2, АНКБ-10, АНКБ-35, АНКБ-50 и волокнистых: АК-22, АК-22-1, К-3, К-4, К-5 ионообменниках и на неионо-генном сорбенте Стиросорб. Определены условия иммобилизации глюкоамилазы в зависимости от концентрации ионов водорода и фермента в растворе, времени контакта фаз, ионной формы ионита, величины удельной поверхности.

Выявлена высокая каталитическая активность глюкоамилазы, иммобилизованной на волокнистых полиэлектролитах и неионогенном сорбенте Стиросорб, в процессе гидролитического расщепления крахмала. Установлены оптимальные условия функционирования иммобилизованного фермента. Показано, что при иммобилизации происходит уменьшение максимальной скорости Vmax и увеличение константы Михаэлиса Кт.

Проведена идентификация групп, ионизационное состояние которых определяет процессы превращения субстрата в активном центре. Доказано, что в активный центр как свободного, так и иммобилизованного фермента входит система карбоксилат-имидазолий.

Методом РЖ-спектроскопии исследован ферментативный комплекс носитель-глюкоамилаза. Рассчитаны некоторые параметры водородных связей, образованных между функциональными группами сорбента и функциональными группами аминокислот, входящих в глюкоамилазу. Изучено влияние иммобилизации на изменение конформации белка.

Исследована кислотная и термическая инактивация свободного и иммобилизованного биокатализаторов в интервале температур 50-75°С. Рассчитаны активационные параметры термоинактивации глюкоамилазы (кинакт, Еакт, АН, AS ). Выявлено, что адсорбционный способ иммобилизации глюкоамилазы повышает устойчивость фермента к денатурирующим факторам среды (рН, Т).

Практическая значимость. Результаты диссертационной работы расширяют представления о функционировании амилолитических ферментов в свободном и мембранносвязанном состоянии, строении и характере связи комплекса глюкоамилаза-сорбент. Рассчитанные кинетико-термодинамические параметры реакции гидролиза крахмала свободной и иммобилизованной глюкоамилазой позволяют прогнозировать поведение фермента в реакциях гидролиза полисахаридов в производственных условиях.

Полученные данные могут быть использованы при конструировании биореакторов периодического и непрерывного действия, при разработке технологии промышленного получения глюкозы из возобновляемого природного сырья.

Положения, выносимые на защиту;

1. Представления о взаимодействии глюкоамилазы с различными носителями при адсорбционной иммобилизации: определение оптимальных условий получения гетерогенного биокатализатора в зависимости от природы носителя, ионной формы сорбента, концентрации глюкоамилазы и ионов водорода, времени достижения равновесия; выявление влияния иммобилизации на каталитическую активность гетерогенного биокатализатора;

2. Состояние воды в комплексе глюкоамилаза-носитель.

3. Термическая и кислотная инактивация свободной и иммобилизованной глюкоамилазы с определением кинетико-термодинамических параметров процесса.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 22 печатных работы, в том числе 14 статей и 8 тезисов докладов.

Апробация работы. Результаты работы были доложены и обсуждены на VII Всероссийской конференции "Физико-химические основы и практическое применение ионообменных процессов" (Воронеж, 1996), III Областной научно - технической конференции "Вопросы региональной экологии" (Тамбов, 1996), VIII, IX Региональных конференциях "Проблемы химии и химической технологии" (Воронеж, 2000, Тамбов 2001), Международной конференции "Мембранные и сорбционные процессы" (Краснодар,2000), Международной конференции молодых ученых "Химия и биотехнология пищевых веществ. Экологически безопасные технологии на основе возобновляемых природных ресурсов" (Москва,2000), Всероссийской конференции "Химический анализ веществ и материалов" (Москва,2000), Международной конференции "Крахмал и крахмалосодержащие источники - структура, свойства и новые технологии" (Москва,2001), III Всероссийской конференции молодых ученых "Современные проблемы 9 теоретической и экспериментальной химии" (Саратов,2001), Международной конференции молодых ученых "От фундаментальной науки к новым технологиям. Химия и биотехнология биологически активных веществ, пищевых продуктов и добавок. Экологически безопасные технологии " (Москва-Тверь, 2001), VIII Всероссийском симпозиуме по жидкостной хроматографии и капиллярному электрофорезу (Москва, 2001), IX Международной конференции "Физико-химические основы ионообменных процессов"(Воронеж, 2001), на научных сессиях Воронежского госуниверситета 1998-2001 г.г.

Структура диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части и обсуждения результатов, заключения, выводов, списка литературы (172 источника). Иллюстративный материал включает 34 рисунка и 16 таблиц.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Шкутина, Ирина Викторовна

Выводы

2. Получены гетерогенные биокатализаторы реакции гидролиза крахмала. Показано, что каталитическая активность глюкоамилазы, иммобилизованной на ионообменниках типа АНКБ, в зависимости от разных ионных форм полиамфолита составляет 40-79%. При адсорбционной иммобилизации на волокнах сохраняется 38-95% активности нативной глюкоамилазы. Применение в качестве носителя неионогенного сорбента Стиросорб приводит к сохранению 86% активности растворимого фермента.

3. Изучены зависимости активности фермента от концентрации ионов водорода и температуры, определены оптимальные условия функционирования иммобилизованного фермента: рН = 4,0-5,0, температура-60-65°С.

4. Обнаружено, что иммобилизация приводит к уменьшению VMax реакции гидролиза крахмала и увеличению константы Михаэлиса Кт вследствие диффузионных затруднений при доступе субстрата к функциональным группам активного центра фермента.

5. Установлено, что в активный центр иммобилизованной глюкоамилазы входит система карбоксилат - имидазолий. На основании определения величин рК ионогенных групп и теплот ионизации доказано, что карбоксильная группа принадлежит аспарагиновой и глутаминовой аминокислотам, имидазол -гистидину.

6. Проведено исследование характера взаимодействия глюкоамилазы с носителями, а также изучено состояние воды в фазе носителя методами ИК-спектроскопии и гравиметрии. Впервые рассчитаны параметры водородных связей, обуславливающих связь фермента с носителем при адсорбционной иммобилизации.

7. Исследована кислотная и термическая инактивация свободной и иммобилизованной глюкоамилазы при температурах 50-75° в интервале рН 3,0-6,4. Рассмотрено влияние концентрации ионов водорода на величину константы скорости термоинактивации глюкоамилазы. Для иммобилизованной глюкоамилазы отмечено снижение константы инактивации во всем

124 исследуемом диапазоне концентраций ионов водорода, что свидетельствует о большей стабильности гетерогенного катализатора. а $

8. Рассчитаны термодинамические параметры (Еакт, АН , AS ) для свободной и иммобилизованной глюкоамилазы в реакции гидролиза крахмала. Показана возможность интерпретации процесса инактивации с учетом изменения термодинамических параметров.

9. Рекомендовано применение аминокарбоксильных волокнистых полиэлектролитов и неионогенного сорбента Стиросорб в качестве носителей для иммобилизации фермента глюкоамилазы и дальнейшего использования гетерогенных катализаторов в процессе гидролитического расщепления крахмала.

Заключение

В диссертационной работе продемонстрирована возможность адсорбционной иммобилизации глюкоамилазы на гранульных и волокнистых носителях: АНКБ-2, АНКБ-10, АНКБ-35, АНКБ-50, К-3, К-4, К-5, АК-22,АК-22-1, Стиросорбе в зависимости от ионной формы ионита (Н-С1, НОН, Na-OH) в широком концентрационном интервале (0,2-2,0- 10"6моль/л). Определены оптимальные условия иммобилизации: рН 4,0-5,0, концентрация фермента в растворе-1,5-2,0-10"6моль/л, время адсорбции - 6 часов. Установлено, что применение волокнистых сорбентов в кислотно-хлоридной форме приводит к образованию комплекса фермент-носитель с наибольшей каталитической активностью (90-95%).

Как известно, на каталитическую активность адсорбированного фермента оказывает влияние не только физико-химическая структура матрицы носителя, но и поверхностные аминокислотные остатки белковой молекулы, количество полярных и неполярных R-радикалов. При иммобилизации мобильность третичной структуры фермента может уменьшаться, что приводит к снижению активности иммобилизованного биокатализатора, а иногда к изменению избирательности действия субстрата. Определенные нами значения рК ионогенных групп и теплот их ионизации, протяженность спиральных участков вторичной структуры в молекуле белка дают основание считать, что конформация глюкоамилазы при иммобилизации не изменяется.

Одной из главных причин, сдерживающих широкое применение ферментов в промышленности, является их относительно низкая стабильность. В связи с возрастающим значением реакций гидролиза полисахаридов в биотехнологии и возможностью использования для этих целей иммобилизованной глюкоамилазы в настоящей работе было проведено сравнение термостабильности свободного и иммобилизованного биокатализатора в интервале 55-75°С. Полученные значения констант инактивации во всем исследуемом температурном интервале для иммобилизованного биокатализатора ниже, чем для глюкоамилазы в нативном состоянии.

Изучение процесса термоинактивации позволило также получить информацию о структурных изменениях в белковой молекуле. Сравнительно низкое значение прироста энтропии в интервале температур 55-65°С свидетельствует о прочности и жесткости глобулы фермента. При температуре 65-75°С для свободной глюкоамилазы наблюдается резкое jj увеличение Еакх и AS , что связано с интенсивным переходом белковой глобулы фермента в хаотический клубок и дает основание предположить, что в формирование ее структуры существенный вклад вносят гидрофобные взаимодействия. Для иммобилизованного биокатализатора сохраняется постоянство Еакх во всем исследуемом температурном интервале. Анализируя зависимость константы инактивации от концентрации ионов водорода, можно отметить, что, благодаря пространственному разделению фермента и неблагоприятных факторов среды, интервал рН-стабильности иммобилизованного фермента расширяется.

При адсорбционной иммобилизации важно достичь наибольшего числа супрамолекулярных взаимодействий между носителем и ферментом. Нами установлено, что при взаимодействии глюкоамилазы с амфотерными ионообменниками связывание протекает по карбоксильным группам глюкоамилазы (аспарагиновой и глутаминовой аминокислот) и аминогруппами ионитов, а также аминогруппами остатков лизина и карбоксильными группами носителей по типу водородных, электростатических и индукционных взаимодействий. Рассчитанные значения параметров водородных связей характеризуют вклад диполь-дипольных взаимодействий при адсорбционной иммобилизации.

Известно, что молекула глюкоамилазы может иметь до 500 молекул воды (Alechin А.Е. et al., 1992). На обоих концах щели активного центра располагаются два кластера молекулы воды, причем один содержит 12 молекул Н20 (в области Leu-58), другой - 7 молекул, расположенных упорядочение. Кроме того, вблизи активного центра имеются еще 3 кластера молекул Н20, один из которых представляет собой раздвоенную цепь, начинающуюся в двух локусах активного центра (Asp-155 и Arg-54) и сливающуюся в одиночную цепь у Thr-53. Конец данного кластера находится на поверхности молекулы (Gly-90). Два других кластера молекул воды отделены от раствора субстрата О-гликозильной цепью Asp-171 (рис.34) [12].

Рис.34. Схематическое изображение укладки полипептидной цепи глюкоамилазы.

Методами ИК спектроскопии и гравиметрии нами было установлено, что включение фермента в фазу носителя позволяет более или менее полно исключить растворитель из области связывания глюкоамилаза-сорбент, минимизируя тем самым число молекул растворителя, которые должны быть замещены молекулами фермента.

По данным спектроскопических исследований предлагается наиболее вероятная схема образования комплекса полиамфолит АНКБ-2 - глюкоамилаза.

Полученные в настоящей работе данные показали принципиальную возможность использования в качестве носителей волокнистых полиэлектролитов и неионогенного сорбента Стиросорб. Предлагаемый метод иммобилизации прост, не требует предварительной активации носителя, гетерогенные биокатализаторы обладают высокой удельной активностью и могут быть неоднократно использованы в циклах расщепления углеводов.

1. Проведено систематическое исследование иммобилизации глюкоамилазы с применением адсорбционно-кинетического, гравиметрического и ИК-спектроскопического методов. Впервые в качестве носителей применены гранульные: АНКБ-2,10,35,50 (в кислотно-хлоридной, внутрисоле-вой, натрий-основной формах) и волокнистые: К-3,4,5, АК-22,22-1 (в кислотно-хлоридной форме) аминокарбоксильные полиэлектролиты, а также неионогенный сорбент Стиросорб. Для волокнистых полиэлектролитов количество связанной глюкоамилазы составляет-16,2-28,0 мг/г, грануль-ных-3,3-6,8 мг/г, для Стиросорба-11,2 мг/г носителя. р-н.о;н

R и н ми

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шкутина, Ирина Викторовна, 2001 год

1. Номенклатура ферментов /Под ред. А.Е.Браунштейна.- М.: ВИНИТИ, 1979.-320 с.

2. Филиппович Ю.Б. Основы биохимии. -М.: Высшая школа, 1993.- 496с.

3. Грачева И.М., ЛущикТ.А., Тырсин Ю.А., Пинчукова Е.Е. Очистка и свойства глюкоамилазы Endomycopis SP.20-9 // Биохимия.-1977.- Т.42, №9,- С.1603-1609.

4. ДианьИ., ФирсовЛ.М. Определение нуклеотидной последовательности и локализация гена глюкоамилазы гриба Aspergillus awamori Х-100. Создание электрофоретического кариотипа // Биотехнология.- 1995.-№9-10,- С. 14-21.

5. Жеребцов Н.А. Исследование механизма кислотной инактивации амилаз солода и плесневых грибов рода Aspergillus: Автореф.дис.докт. биол. наук.-Воронеж, 1971.-39с.

6. Яковлев А.Н., Жеребцов Н.А., Григоров B.C. и др. Амилазы термотолерантного микромицета Aspergillus awamori BYDT-2: препаративное получение //Биотехнология.-1994.-№3.- с. 11-14.

7. Савельев А.Н., Яковлева М.Ф., Фирсов JI.M. Углеводный состав и некоторые свойства глюкоамилазы из Aspergillus awamori // Биохимия. -1984.- Т.49, №11.- С.1754-1761.

8. T.Ashikari, N.Nakamura, Y.Tanaka et.al. Rhizopus raw-starch-degrading glucoamulase: Its cloning and expression in yeast // Agr. Biol. Chem.-1986.- Vol.50 (4).- p.957-964.

9. Ковалева T.A. , Селеменев В.Ф., Плохих A.M. и др. Изучение некоторых свойств глюкоамилазы сорбционными и спектральными методами // Теория и практика сорбционных процессов.-Воронеж, 1985.-Вып. 17.-С.58-61.

10. Ковалева Т.А. Кинетико-термодинамические аспекты катализа полисахаридов свободными и иммобилизованными амилазами //Биофизика.-2000.-Т.45, №3.-0.439-444.

11. Golubev A., Aleshin A., Neustroev К., Firsov L. Crystallization and preliminary X-ray study of minor glucoamylase from Asp. awamori var. X-100 // J. Mol. Biol. -1992.- Vol. 226, №1. -P.271-272.

12. Aleshin A., Golubev A., Firsov L., Honzatko R. Crystal structure of glucoamylase from Aspergillus awamori var. X-100 to 2.2 A resolution // J.Biol.Chem. -1992.- Vol. 267, №27. P. 19291-19298.

13. Неустроев K.H., Голубев A.M., Фирсов ji.M. и др. Влияние ферментативного и химического дегликозилирования на физико-химические свойства глюкоамилазы из Aspergillus awamori XI00/ D27 //Биохимия.-1993.-Т.58, №4.-С.562-573.

14. Neustroev К., Golubev A., Firsov L. et.al. Effect of modification of carbohydrate component on proper ties of glucoamylase //FEBS Lett.-1993.-Vol.316, №2.- P. 157-160.

15. Williamson G., Belshaw N.J. Williamson M.P. O- Glycosylation in Aspergillus glucoamylase: Conformation and role in binding //Biochem.J.-1992.-282, №2.-P.423-428.

16. Yamashita I., Suzuki K., Fukui S. Proteolytic processing of glucoamylase in the yeast Saccharomyces diastaticus //Agr.Biol.Chem.-1986.-Vol.50(2).-P.475-482.

17. Неустроев K.H., Фирсов ji.m. Кислая протеиназа и множественность форм глюкоамилазы из Aspergillus awamori // Биохимия.-1995.-Т.55, №5.-С.776-785.

18. Aleshin A.E., Hoffmann С., Firsov L.M. et.al. Refined crystal structures of glucoamylase Aspergillus awamori Var. X100 //J.Mol.Biol.-1994.-Vol.238.-P.575-591.

19. Tanaka J., Ashikari T. Comparison of amino acid sequenses of three glu-coamylases and their structure function relationships //Agr. and Biol. Chem.-1986.-Vol.50, №4.-P.965-969.

20. Hayashida S., Nakahara K., Kuroda K. et.al. Structure of the raw starch affinity site on the Aspergillus awamori var. Kawachi glucoamylase //Agr.Biol.Chem.-1989.-Vol.53.-P.135-141.

21. Алешин A.E., Фирсов Л.М. Глюкоамилаза / в сб. Белки и пептиды // Под ред. Иванов В.Т., Липкин В.М.- М.:Наука, 1995.- С. 187-198.

22. Савельев А.Н., Фирсов Л.М. Карбоксильные группы в активном центре глюкоамилазы из Aspergillus awamori //Биохимия. Т.47,№10.-С.1618-1620.

23. Sierhs M.R., Ford С., Reilly P., Swensson В. Functional rolles and subsite locations of Leu 177, Trp 178 and Asn 182 of Aspergillus awamori glucoamylase determined by site directed mutagenesis //Protein. Eng. -1993.-Vol.6, №1.- P.75-79.

24. Coutinho P.M., Reilly P.J. Structural similarities in glucoamylases by hydrophobic cluster analysis //Protein Eng.-1994.-Vol.7, №6.-P.749-760.

25. Staffer В., Frandsen T.P., Busk P.K. et.al. Production, purification and characterization of the catalytic domain of glucoamylase from Aspergillus niger //Biochem.J. -1993,- Vol.292.-P. 197-202.

26. Ковалева T.A. Влияние ионов Ca2+ на физико-химические свойства глюкоамилазы //Физико-химические основы функционирования белков и их комплексов: Материалы II Международного симпозиума. Воронеж, 1998.-С.112-116.

27. Жеребцов Н.А. О каталитическом центре |3-амилазы. //Биохимия.-1968.-Т.ЗЗ, №3.-С.435-438.

28. Жеребцов Н.А., Пащенко Л.П., Житенева Т.Д. Выделение и изучение свойств кислотоустойчивой а-амилазы Aspergillus awamori //Прикладная биохимия и микробиология.-1974.-Т.10, №2.-С.236-241.

29. ЖеребцовН.А. Амилолитические ферменты в пищевой промышленности.- М.: Легкая и пищевая промышленность, 1984.-160с.

30. Жеребцов Н.А., Руадзе И.Д., Яковлев А.Н. О механизме кислотного и ферментативного гидролиза крахмала //Прикладная биохимия и микробиология. 1995.-Т.31, №6.-С.599-603.

31. Kochland D. Application of a theory of enzyme specifity to protein synthesis //Proc. natl. Acad. Sci.(USA). 1958.- Vol.44.-P.98-101.

32. Жеребцов H.A., Корнеева O.C., Тертычная Т.Н. О механизме каталитического действия карбогидраз (обзор) //Прикладная биохимия и микробиология. -1999.-Т.35, №2.-С.123-132.

33. Thoma J.A., Brothers С., Spradlin J. Subsite mapping of enzymes. Studies on Bacillus subtilis amylase //Biochemistry. -1970.- Vol.9, №8.-P.1768-1775.

34. Hiromi K. Interpretation of dependency of rate parameters on the degree of polymerization of substrate in enzyme-catalyzed reactions. Evaluation of subsite affinities of exo-enzyme. //Biochem.Biophys. Res. Commun.-1970.-Vol.40, №l.-P.l-6.

35. Thoma J.A., Allen J.D. Subsite mapping of enzumes: collecting and processing experimental data a case study of an amylase - maltooligosaccha-ride system //Carbohydr. Res.-1976. - Vol.48, №1.-P. 105-124.

36. Савельев A.H., Сергеев B.P., Фирсов Jl.M. Изучение дополнительного субстратсвязывающего центра глюкоамилазы. 1.0 влиянии циклодекст-ринов на реакции, катализируемые глюкоамилазой //Биохимия.- 1989.-Т.54, №10. С.1725-1730.

37. Савельев А.Н., Цендина М.Л., Фирсов Л.М. Об отсутсвии множественной атаки олигомерного субстрата глюкоамилазы из Aspergillus awamori //Биохимия. 1985,- Т.50, №1.- С.1743-1748.

38. Клесов А.А. Ферментативный катализ.- М.: Изд-во МГУ, 1984.-216с.

39. Савельев А.Н., Сергеев В.Р., Фирсов Л.М. Изучение активного центра глюкоамилазы из Aspergillus awamori //Биохимия.-1982.-Т.47, №3.-С.390-397.

40. Napy Е., Belafi-Bako К., Szabo L. Kinetic study of the hydrolysis of mal-todextrin by soluble glucoamylase //Starke. 1992.- Vol.44, №4.- P. 145149.

41. Tsekova K.V., Foutekova M. Product inhibition of glucoamylase from the Aspergillus niger B77 strain // Докл. Болг.АН,- 1987.-Vol.40, №4.- P.97-99.

42. Шевелькова A.H., Синицын А.П. Изучение эффекта синергизма в совместном действии а- и глюкоамилазы на растворимую и нерастворимую амилозу // Биохимия,- 1993. Т.58, №10.-С. 1548-1554.

43. Шевелькова А.Н., Синицын А.П. Гидролиз нерастворимой амилозы: адсорбция амилолитических ферментов // Биохимия.-1993.-Т.58, №10.-С.1555-1561.

44. Гладнева А.В. Влияние ди- и тетрагидрохинолинов на физико-химические свойства глюкоамилазы // Тезисы докладов VIII Региональной конференции Проблемы химии и химической технологии.-Воронеж, 2000. С.223.

45. Sigurskjold B.W., Berland C.R., Svensson В. Thermodynamice of inhibitor binding to the catalytic site of glucoamylase from Aspergillus niger determined by displacement titration calorimetry //Biochemistry. 1994.- Vol.33, №3. -P.10191-10199.

46. Капрельянц JI.В., Тарахтий JI.В., Стынгач И.В. Ферментативный гидролиз пшеничного крахмала различными амилазами //Биотехнология.-1991.-№6.- С.50-52.

47. Крахмал и крахмалопродукты / Под ред. Н.Г.Гулюка.- М.:Пищевая промышленность, 1996. С. 132-234.

48. Нечаев А.П. Пищевые добавки // Пищевая промышленность. 1996.-№5. - С.9-13.

49. Пащенко Л.П., Зубченко А.В., Жеребцов Н.А. Влияние высокоосаха-ренных ферментативных гидролизатов на газообразование при тесто-ведении // Известия вузов СССР. Пищевая технология. 1976.- №6. -С.45-46.

50. Поландова Р.Д. Применение пищевых добавок в хлебопечении //Хлебопечение России. 1996. - №1. - С. 10-11.

51. Поландова Р.Д., Турчанитова Т.П., Увайтхэст Б. Проблема промышленного производства комплексных хлебопекарных улучшителей //Хлебопечение России. 1998.- №3. - С.25-27.

52. Бейли Дж., Оллис Д. Основы биохимической инженерии. Ч.2.-М.:Мир, 1989.-216 с.

53. Технология спирта /Под ред. В.А.Смирнова.- М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981. 416 с.

54. Жеребцов Н.А., Краюшкина Э.А. Роль ос-амилазы, |3-амилазы и глюкоамилазы при сбраживании крахмалсодержащих заторов //Ферментная и спиртовая промышленность.-1971 №2. - С.21-24.

55. Ферментные препараты в пищевой промышленности /Под ред. В.Л.Кретовича, В.Л.Яровенко.-М.:Пищевая промышленность, 1975.535 с.

56. Родзевич В.И., Добролинская Г.М. Получение кристаллических препаратов глюкоамилазы из плесневого гриба Aspergillus awamori //Ферментная и спиртовая промышленность.-1966.-№1.-С.5-9.

57. Тривен М. Иммобилизованные ферменты.-М.Мир, 1983.-213с.

58. Иммобилизованные ферменты//Под ред. И.В.Березин, В.А.Антонова, К.Мартинека.- М.: Изд-во МГУ, 1976.-Т.1.-296с.

59. Кестнер А.И. Иммобилизованные ферменты //Успехи химии. 1974.-T.XLIII, вып.8.-С. 1480-1511.

60. Можаев В. Иммобилизация ферментов как новый подход к решению фундаментальных проблем энзимологии //Успехи биологической хи-мии.-1983.-Т.ХХ1У.-С.99-134.

61. Евтюгин Г.А., Будников Г.А., Никольская Е.Б. Биосенсоры для определения ингибиторов ферментов в окружающей среде //Успехи химии.-1999.-Т.68,№12.-С.1142-1167.

62. Егоров Н.С., Олескин А.В., Самуилов В.Д. Биотехнология. Проблемы и перспективы.-М.: Высшая школа, 1987.-459с.

63. Биотехнология /Под ред. А.А.Баева.-М.: Высшая школа,1984.-309с.6 8. Биотехнология. Принципы и применение /Под ред.И.Хиггинса, Д.Беста, Д.Джонса.-М.: Мир, 1988.-479с.

64. Березин И.В., Клесов А.А., Швядас В.К. и др. Биотехнология. Инженерная энзимология.-М.: Высшая школа, 1987.-143с.

65. Сассон А. Биотехнология: свершения и надежды.- М.Мир, 1987.-411с.

66. Блинов Н.П. Основы биотехнологии.-С-Пб.: Наука, 1995.-600с.

67. Синицын А.П., Райнина Е.И., Лозинский В.И., Спасов С.Д. Иммобилизованные клетки микроорганизмов.- М.: Изд-во МГУ, 1994.-288с.

68. Иммобилизованные клетки и ферменты. Методы /Под ред. Дж.Вудворда.-М. Мир, 1988.-215с.

69. Черкасов А.Н., Пасечник В.А. Мембраны и сорбенты в биотехнологии.-Л.:Химия,1991.-239.

70. Полторак О.М., Чухрай Е.С. Физико-химические основы ферментативного катализа.-М.:Высш.школа,1971 .-311с.

71. Жирков Ю.А., Чухрай Е.С., Полторак О.М. Свойства адсорбционных слоев гексокиназы на поверхности силикагеля //Вестн. МГУ. Сер.2., Химия. -1971.-№4.-С.405-408.

72. Муронец И.В., Наградова Н.К. Иммобилизованные олигомерные фер-менты.-М. :Наука, 1984.-208с.

73. Введение в прикладную энзимологию /Под ред. И.В.Березина, К.Мартинека.-М.: Высшая школа, 1982.-383с.

74. Халгаш Я. Биокатализаторы в органическом синтезе.-М.:Мир, 1991.-204с.

75. Микробные ферменты и биотехнология /Под ред. В.М.Фогарти, К.Бек, К.Т.Кели и др.-М.:Агропромиздат,1986.- 317с.

76. Weetall Н. Immobilized biochemicals and affinity chromatography //Ed. R.B.Dunlap.-Plenum.Press.-1974.- Vol.42.-P.191-212.

77. Mijmoto K., Fujii Т., Miura J. On the insolubilized enzyme activities using adsorbents jonexchanges //J.Ferment. Technol.-1971.-Vol.49.-P.565-573.

78. А.с. RU 2007456 С1, кл.12 №11/08. Способ получения иммобилизованного препарата с глюкоамилазной активностью, используемого предпочтительно для кормления цыплят / В.Г.Герасименко, В.С.Битюцкий, Селезнева А.Л.-1994.- 7с.

79. А.с. RU 3873154/31-13 С1, кл.12 №11/08. Способ получения иммобилизованных гидролаз О-гликозильных соединений / М.О.Мандель, Е.И.Христофоров, Н.М.Самошина, Л.А.Нахапетян.-1987.-14с.

80. Ma Lin, Luo Gui-Min, Huang Zhong-Li, Chen Yu-Hua Stabilization of glu-coamulase by means of hudrophobe absorption //Chin.Biochem.J.-1992.-Vol.8,№3.-P.364-367.

81. Bhumibhamon O., Leelawatcharamos V. The effect of the dryness of activated cellulose microcrystalline on the immobilization of glucoamylase //Proc. 4th Eur.Congr.Biotechnol., Amsterdam, June 14-19. -1987.-Vol.2.Amsterdam.-P.29-32.

82. Gao Dawei, Chen Manxiang, Liang Hang et.al. Study of the influence of starch hydrolysis acceleration affected by means of supersound //J.S.China Univ. Technol. Natur. Sci. -1994,- Vol.22,№l.-P.70-74.

83. Yahkov D., Peeva L., Beschkov V. Maltodextrin hydrolysis with glucoamylase immunobilized in polyaerylanide gel //Starke.-1992.-Vol.44,№8.-P.315-318.

84. Патент США №4066504 кл. 195/63. Способ получения иммобилизованной глюкоамилазы / Л.Ласло, И.Дароци, А.Хошке.-1982.- 12с.

85. Li Yuanxun, Ye Qingling Use of PF gel as a new support for enzume immobilization //Progr. Biochem. and Biophys.-1994.- Vol.21, №6.-P.523-527.

86. Kokupeta E., Jinbo E. A hydrogel capable of facilitating polymer diffusion through the gel porosity and its application in enzyme immobilization //Macromolecules.-1992.-Vol.25,№ 13 .-P.3 549-3 552.

87. Кирш Ю.Э. Поли-Ы-винилпирролидон и другие поли-Ы-виниламиды.-М.:Наука, 1998.-252с.

88. Иммобилизованные ферменты. Биотехнология. /Под ред. И.В.Березина, Н.Л.Клячко, А.В.Левашова и др.-М.:Высшая школа, 1987.-159с.

89. Патент 5130243 США, МКИ5 С12Р 19/22, С12Р 19/20. Process for production of starch sugar /Kimura Takashi, Ogata Masafuni, Nogueli Ma-saaki.-1992.-5p.

90. Pieters B.R., Bardeletti G., Conlet P.R. Glucoamylase immobilization on a magnetic micropatiele for the coutinous hydrolysis of maltodextrin in a flu-idized bed reactor //Appl. Biochem.and Biotechnol.-1992.-Vol.32.-P.37-53.

91. Wawrzyniak В., Krauze J. Glucoamylase covalently bound to acrylic carries starch // Nauka, infarmacja, biznes.-1993.-Vol.l,№2.-P.14.

92. Krauze J., Wawrzyniak В., Krauze A. Obtaining and study of glucoamylase immobilized preparations' characteristics. The improvement of biotechno-logical process//Nauka, infarmacja, biznes -1993.-Vol.l,№12.-P.18.

93. Борисова B.H., Стальная И.Д., Меняйлова И.И.и др.Иммобилизация ферментов на носителях с азидными группами //Прикладная биохимия имикробиология.-1978.-Т.Х1У,№5.-С.709-714.

94. Борисова В.Н., Ломако О.В., Мотина Л.И. и др. Иммобилизация глюкоамилазы и кислотной протеиназы на модифицированном сило-хроме с использованием ^карбоэтокси-2-этокси-1,2-дигидрохинолина //Прикладная биохимия и микробиология.-1979.-T.XV,№6.-С.744-746.

95. Яровенко В.Л., Писаренко Т.Н., Устинников Б.А. и др. Иммобилизация технической глюкоамилазы на полимерном носителе //Прикладная биохимия и микробиология.-1979.-T.XV,№6.-C.869-873.

96. Norowzian D., Jaffar M.B. Immobilization of glucoamylase produced by fungus Arthrobotrys awerospora //Indian.J.Exp.Biol.-1993.-Vol.31,№8.-P.680-681.

97. Toldra F., Jansen N.B., Tsao G. Immobilization of glucoamylase in porous glass gibers //J.Chem.Technol.and Biotechnol.-1987.-Vol.40,№4.-P.275-284.

98. Li Lisheng, Qi Jingshao, Yuan Jingming Metacrilate resin and glucoamylase immobilization //J.Shanxy Univ.Natur.Sci.Ed.-1994.-Vol.17, №4.-P.402-406.

99. Коваленко Г.А., Ванина М.П. Иммобилизация ферментов на угле-родминеральных носителях. Некоторые закономерности адсорбционной иммобилизации ферментов //Биотехнология.-1997.-№4.-С.3-12.

100. Черкасова Т.А., Вонский В.Е., Лейкин Ю.А. Ковалентная иммобилизация протеиназ на полимерных матрицах с эпоксигруппами //Прикладная биохимия и микробиология.-1991.-Т.27,№6.-809-813.

101. А.с. RU 2 031120 С1, кл. C12N 11/08. Способ получения иммобилизованной уреазы /Ю.Л.Кульчицкий, Горчаков В.Д., Петров В.Р. и др,-1995-7с.

102. А.с. RU 2081170 С1, кл. C12N 11/08. Соединение на основе макропористого сополимера стирола и дивинилбензола в качестве иммуносор-бента для удаления дифтерийного токсина из биологических жидкостей организма.-1997.-8с.

103. Рудометова Н.В., Ефимова Т.Б., Глазова Н.В., Дмитренко Л.В. Сорбция ферментов на ионитах различной структуры //Прикладная биохимия и микробиология.-1992.-Т.28,№5.-С.694-697.

104. Sakai S., Joshida S. Continuous conversion of maltose to glucose with immobilized glucoamylase //JJap.Soc.Starch.Sci.-1991.-Vol.38,№1.- P.37-39.

105. Ковалева Т.А., Мелешко В.П. Иммобилизация глюкоамилазы сорб-ционным методом на ионообменных смолах карбоксильного типа //Теория и практика сорбционных процессов.-Воронеж, 1981.-Вып. 14.-С.38-41.

106. Ковалева Т.А. Физико-химические и кинетико-термодинамические аспекты катализа свободными и иммобилизованными амилазами: Дис. . докт.биол.наук.-ВоронежД998.-269 с.

107. Ковалева Т.А., Шмырева Ж.В., Клочкова Т.А., Крыгина А.Ю. Катеонит КБ-2э-0,5 как носитель глюкоамилазы //Теория и практика сорбционных процессов.-Воронеж, 1983 .-Вып. 16.-С. 117-120.

108. Ковалева Т.А., Шмырева Ж.В., Клочкова Т.А, Примакова Г.М. Иммобилизация глюкоамилазы ковалентным способом на некоторых анионитах //Теория и практика сорбционных процессов.-Воронеж, 1987.-Вып.20.-С. 101 -103.

109. Мартинек К., Березин И.В. Стабилизация ферментов-ключевой фактор при внедрении биокатализа в практику //Успехи химии.-1980.-T.XLIX,№5.-C.737-770.

110. Александров В.Я. Клетки, макромолекулы и температура.-JI.: Наука, 1975.-223с.

111. Березин И.В., Мартинек К. Основы физической химии ферментативного катализа.-М.:Высшая школа, 1977.-279с.

112. Блюменфельд Л.А. Проблемы биофизики.-М.:Наука,-1974.-365с.

113. Фрайнфелдер Л. Физическая биохимия.-М.:Мир, 1980.-582с.

114. Полторак О.М., Чухрай Е.С. Кинетика и механизм каталитической инактивации ферментов с четвертичной структурой // Вестн.МГУ .Сер.2.,Химия.-1979.-Т.20,№3 .-С. 195-211.

115. Чухрай Е.С., Кирсис В.Х. Трехстадийная диссоциативная термоинактивация кислой фосфатазы из Aspergillus terreus в растворе // Вестн.МГУ.Сер.2.,Химия.-1980.-Т.21,№5.-С.432-437.

116. Полторак О.М., Чухрай Е.С. Кинетический анализ термоинактивации сложных белков на примере щелочной фосфатазы //Журнал физ.химии.-1995.-Т.69,№2.-С.330-335.

117. Денякина Е.К., Неклюдов А.Д., Логинова Т.А. Изучение и свойства иммобилизованного ферментного препарата с пептидазной активностью //Прикладная биохимия и микробиология.-1985.-Т.21,№2.- С. 177183.

118. Клесов А.А., Герасимас В.Б. Термостабилизация растворимой и иммобилизованной глюкоамилазы под действием субстрата //Биохимия.-1979.-Т.44, №б.-С. 1084-1093.

119. Герасимас В.Б., Черноглазов В.М., Клесов А.А. Влияние последовательной химической модификации на активность и термостабильность растворимой и иммобилизованной глюкоамилазы //Биохимия.-1980.-Т.45, №6.-С.1086-1091.

120. Moszczynski P., Miller Е., Przybyt М. Alkylation of glucoamylase with acrolein and proper ties of obtained conjugiate //Zesz.nauk.Bud.-1994.-Vol.48.-P.5-13.

121. Poig M.G., Slade A., Kennedi et.al. Investigations of stabilities, pH, and temperature profiles and kinetic parameters of glucoamylase immobilized on plastic supports //Appl.Biochem. and Biotechnol.-1995.-Vol.50, №1.-P.ll-33.

122. Варфоломеев С.Д., Зайцев C.B. Кинетические методы в биохимических исследованиях.-Изд-во МГУ, 1982.-344 с.

123. Шишкин А.А., Атякшева Л.Ф., Полторак О.М., Нахапетян Л.А. Влияние рН на скорость термоинактивации р-галактозидазы // Вестн.МГУ.Сер.2.,Химия.-1990.-Т.31,№3.-С.232-236.

124. Атякшева Л.Ф., Чухрай О.М., Полторак О.М. Диссоциативная термоинактивация Р-галактозидазы //Журн. физ. химии.-1997.-Т.71,№5.-С.926-930.

125. Ташлицкий В.Н., Шишкин А.А., Атякшева Л.Ф., Полторак О.М. рН-зависимость термостабильности р-галактозидазы //Журн. физ. химии.-1991.-Т.65, №3.- С.2568-2572.

126. Смирнов И.Н., Волжанский А.И., Константинов В.А. Расчет и моделирование ионообменных реакторов.-Л.: Химия, 1984.-188с.

127. Солдатов B.C., Марцинкевич Р.В., Сергеев Г.И., Покровская А.И. Влияние щелочной обработки на физико-химические свойства волокнистого ионита ФИБАН АК-22 //Журнал прикладной химии.-1988.-Т.61, №10.-С.2271-2275.

128. Солдатов B.C., Марцинкевич Р.В., Покровская А.И., Шункевич А.А. Гидролитическая устойчивость, набухание и потенциометрическое титрование аминокарбоксильного ионита ФИБАН АК-22-1 //Журнал прикладной химии.-1994.- Т.67, №10.-С. 1644-1647.

129. Цюрупа М.П. Сверхсшитый полистирол-новый вид полимерных сеток : Автореф. дис. . докт. хим. наук.-М., 1983.-50с.

130. Полянский Н.Г., Горбунов Г.В., Полянская Н.Л. Методы исследования ионитов.-М.: Химия, 1976.-208с.

131. Полторак О.М. Лекции по теории гетерогенного катализа.-М.:Изд-во МГУ, 1968.-156 с.

132. Шатаева Л.К., Кузнецова Н.Н., Елькин Г.Э. Карбоксильные катеониты в биологии.-М.: Наука, 1979.-287с.

133. Самсонов Г.В., Меленевский А.Т. Сорбционные и хроматографиче-ские методы физико-химической биотехнологии.-Л. :Наука, 1986.-229 с.

134. Самсонов Г.В., Тростянская Е.Б., Елькин Г.Э. Ионный обмен. Сорбция органических веществ.-Jl.: Наука, 1969.-336с.

135. Вирник А.Д., Кильдеева Н.Р., Красовская С.Б. и др. Иммобилизация ферментов в структуре волокон и пленок в процессе их формования. I. Иммобилизация немодифицированных ферментов //Биотехнология,-1987.-Т.З, №5. С.602-613.

136. Лен Ж-М. Супрамолекулярная химия.-Новосибирск: Наука, 1998.-334с.

137. Орос Г.Ю., Селеменев В.Ф., Хохлов В.Ю. и др. Механизм сорбции тРНК неионогенным сорбентом // Журнал физ. химии.-1998.-Т.72, №5.-С.926-932.

138. Брежнева Т.А., Селеменев В.Ф., Орос Г.Ю. и др. Сорбция тритерпе-новых сапонинов сахарной свеклы макропористым неионогенным сорбентом //Теория и практика сорбционных процессов.- Воронеж, 1999.-Вып.24.-С.40-42.

139. Царенко О.В. Хроматографическая очистка гидролитических ферментов из поджелудочной железы : Автореф. дис. . канд. биол. наук.-С-Пб., 2000.-22с.

140. Иванова Е.В., Брежнева Т.А., Селеменева Л.А. Санитарно-химические свойства сорбента СТИРОСОРБ-1БП, предлагаемого к использованию в производстве триптофана //Теория и практика сорбционных процессов.-Воронеж, 1998.-Вып.23.-с.343-347.

141. Цюрупа М.П., Маслова Л.А., Мрачковская Т.А., Даванков В.А. Внутримолекулярно сшитый полистирол как модель сверхсшитой сетки //Высокомолекулярные соединеия.-1991.-Т(А).33, №12.-С.2645-2651.

142. Даванков В.А., Ильин М.М., Тимофеева Г.И., Цюрупа М.П. Самосборка регулярных кластеров при ассоциации молекулвнутримолекулярно сшитого полистирола //Доклады Академии Наук.-1997.-Т.352, №4.-С.494-496.

143. Сярейкате Й.А., Герасимеие Г.Б., Денис Г.Й. и др. Выделение и характеристика внеклеточных а-глюкозидазы, инвертазы и глюкоамилазы из Aspergillus awamori //Прикладная биохимия и микробиология. -1989,- Т.25, №4. С.458-466.

144. Григоров B.C., Руадзе И.Д., Слепокурова Ю.И., Яковлев А.Н. Глю-коамилаза микромицета Aspergillus awamori 466. Препаративное получение //Биотехнология. 1999. - №4.- С.45-48.

145. Яковлев В.А. Кинетика ферментативного ктализа.-М.:Наука, 1965.-248с.

146. Диксон м., Уэбб Э. Ферменты.-М.: Мир, 1966.-816 с.

147. Келети Т. Основы ферментативной кинетики.-М.: Мир,1990.-350с.

148. Чиргадзе Ю.Н. Инфракрасные спектры и структура полипептидов и белков.-М.: Наука, 1965.-136 с.

149. Казицына JI.A., Куплетская Н.Б. Применение УФ-, ИК- и ЯМР-спектроскопии в органической химии.- М.:Высшая школа, 1971.-264с.

150. Иванов А.А., Филипчик В.И., Кирковский В.В. Исследование структуры сывороточного альбумина человека с помощью ИК спектроскопии // Журнал прикладной спектроскопии.-1989.-Т.51, №1(135). -С.135-138.

151. Семушин A.M., Яковлев В.А., Иванов Е.В. ИК-спектры поглощения ионообменных материалов.-Д.: Химия, 1989.-96 с.

152. Наканиси К. Инфракрасная спектроскопия и строение органических соединений.-М.: Мир, 1965.-216 с.

153. Беллами J1. Новые данные по ИК спектрам сложных молекул.-М.: Изд-во иностр.лит., 1963.-590 с.

154. Углянская В.А., Чикин Г.А., Селеменев В.Ф., Завьялова Т.А. Инфракрасная спектроскопия ионообменных материалов.-Воронеж.: Изд-во ВГУ, 1989.-208 с.

155. Орос Г.Ю., Сапожкова А.Н., Селеменев В.Ф. и др. Влияние растворителя на механизм сорбции т-РНК на неионогенном собенте // Журнал физ. химии.-1998.-Т.72, №8.-С.1461-1463.

156. Юхневич Г.В. Инфракрасная спектроскопия воды.-М.:Наука,1973.-208с.

157. Жижина Г.П., Олейник Э.Ф. Инфракрасная спектроскопия нуклеиновых кислот // Успехи химии.-1972.-T.XLI, №3.-С.474-511.

158. Gabel D., Steinberg I.Z., Katchalski Е. Investigation of immobilized ferment conformation // Biochemistry.-1971. -Vol.10.- P.4661-4669.

159. Лаш Ю., Козлов Л.В., Бессмертная Л.Я., Антонов В.К. Химическая этимология.- М.: Изд-во МГУ, 1983.- С.250-260.

160. Кантор Ч., Шиммел П. Биофизическая химия.-М.: Мир, 1984.-Т.2.-495 с.

161. Попов Е.М. Структурно-функциональная организация белка.- М.: Наука, 1992.-260 с.

162. Степанов В.М. Молекулярная биология. Структура и функции бел-ков.-М.: Высшая школа, 1996.-334.

163. Жоли М. Физическая химия денатурации белков.-М.:Мир, 1968.-364с.

164. Березин И.В. Исследования в области ферментативного катализа и инженерной энзимологии.-М.: Наука, 1990.-383 с.