Биологические и генетические характеристики цирковирусов свиней тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат биологических наук Малоголовкин, Александр Сергеевич

• Малоголовкин, Александр Сергеевич
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Малоголовкин, Александр Сергеевич

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Краткая характеристика цирковпруспых инфекций.

1.2. Таксономическое положение цпрковирусов евппеп.

1.3. Морфологические и структурные особенности цпрковирусов.

1.4. Физико-химические свойства цпрковирусов.

1.5. Молекулярно-бнологнческие особенности строения ЦВС.

1.6. Генетическая вариабельность геномов цпрковирусов свиней.

1.7. Механизм репродукции цпрковирусов свиней.

1.7.1. Чувствительность клеток к заражению ЦВС-2 в условиях in vivo.

1.7.2. Культивирование ЦВС-2 in vitro.

1.8. Распространение ЦВС-1 и ЦВС-2.

1.9. Цнрковнрус человека.

1.10. Синдром мультнснстемного истощения отьемышей.

1.11. Патологоанатомнческне изменения при СМИО.

1.12. Дерматит и синдром нефропатнн (ДСНП).

1.13. Заболевания, ассоциируемые с цнрковнрусом свиней 2 типа.

1.13.1. Инфекционный врожденный (конгенитальный) тремор.

1.13.2. Нарушения репродуктивной функции.

1.13.3. Комплекс респираторной патологии свиней.

1.13.4. Смешанные инфекции.

1.14. Методы диагностики цнрковнруснон инфекции свиней.

1.15. Специфическая профилактика и лечение.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биологические и генетические характеристики цирковирусов свиней»

смио 6 - синдром мультисистемного истощения оъемышей тгэс - трансмиссивный гастроэнтерит свиней тт - Torque teno virus

ТОД50 - тканевая цитопатическая доза

ФБР - фосфатно-буферный физиологический раствор

ФВК - фосворновольфрамовая кислота

ЦВС-1 - цирковирус свиней первого типа

ЦВС-2 - цирковирус свиней второго типа

ЦИС - цирковирусная инфекция свиней цпэ - цитопатический эффект

ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В последние годы в связи с активным развитием свиноводства, большое значение приобретают заболевания, ранее не зарегистрированные на территории Российской Федерации. В ряде регионов страны значимой проблемой в промышленных свинокомплексах стала цирковирусная инфекция свиней (ЦИС). Результаты проведённых эпизоотологических исследований свидетельствуют о широком распространении цирковирусной инфекции свиней не только в зарубежных странах, но и в нашей стране (Орлянкин Б. Г. и др., 2003, 2006; Тимина A.M., 2006; Allan G.M. et al., 2000, 2003; Ellis J. et al., 2007; Krakowka S. et al., 2007; Segales J. et al., 2007; Stadejek T. et al., 2007).

Обнаруженный впервые I. Tisher, N. Rasch и G. Tochterman в 1974 г. цирковирус свиней 1-го типа (ЦВС-1) был охарактеризован как нецитопатогенный контаминант перевиваемой культуры клеток почек поросят РК-15.

Первые сведения о патогенном цирковирусе свиней появились в 1991 г., когда в Канаде было выявлено новое заболевание — синдром мультисистемного истощения отъемышей (СМИО). У поросят 6-14 недельного возраста наблюдали истощение, одышку, диарею, желтушность кожи. Полученные впоследствии данные охарактеризовали новый вирус, как цирковирус свиней 2-го типа (ЦВС-2) (Сатина Т.А., 2003; Allan G.M. et al., 1998; Clark E. et al., 1997; Ellis J. et al., 1998; Gagnon C. et al., 2007).

Изучение роли ЦВС в инфекционной патологии свиней, свидетельствует об участии ЦВС-2 в патогенезе таких заболеваний, как СМИО, дерматит и синдромом нефропатии (ДСНП) (Сатина Т.А., 2003; Allan G. М. et al., 2000; Drolet R. et al., 1997; Elbers A.R., 2000; Kiupel M. et al., 2005). К этому списку также относят конгенитальный (врожденный) тремор, некротизирующие и пролиферативные плевропневмонии, эксудативные эпидермиты и энтериты. Существуют предположения о способности ЦВС-2 вызывать нарушения репродуктивных функций у свиноматок.

Возникновению данного комплекса заболеваний способствует развитие смешанных инфекций ЦВС-2 с другими патогенами вирусной и бактериальной природы (Drolet R. et al., 1999; Lainson L.A. et al., 2002; Grasland B. et al., 2005; Rapp-Gabrielson V. J. et al., 2008; Keith H. West et al., 1999; Meehan B.M. et al., 2006).

Первые сведения о наличии цирковирусов в популяциях свиней на территории Российской Федерации были получены Щербаковым A.B. в 2000 г. В дальнейших исследованиях представлены генетические характеристики изолятов вируса, циркулирующих на территории России, разработаны методы лабораторной диагностики цирковирусной инфекции свиней на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР) и иммуноферментного анализа (ИФА) (Тимина A.M. и др., 2005, 2006; Кукушкин С.А. и др., 2006, Шкаева М.А., 2006).

Тем не менее, в отечественной литературе отсутствуют данные о биологических свойствах изолятов цирковируса свиней 2-го типа, циркулирующих в популяциях домашних свиней.

Исследования репродукции вируса в условиях in vitro таюке являются важным этапом в разработке диагностических систем для индикации цирковирусов свиней.

Остаются не выясненными вопросы клинического проявления болезней, ассоциированных с цирковирусами при смешанной инфекции. Патологические изменения при полиэтиологичном инфекционном процессе, с участием ЦВС, являются чрезвычайно разнообразными, в связи с чем, необходимо их детальное изучение для установления диагностического значения.

Цель работы и задачи исследования. В связи с вышеизложенным основной целью наших исследований являлось изучение патоморфологических изменений при цирковирусной инфекции свиней, биологических свойств возбудителя и генетического родства изолятов цирковируса 2-го типа, циркулирующих в популяциях свиней на территории Российской Федерации.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

- изучить патологоанатомические и гистологические изменения у поросят при СМИО и ДСНП;

- адаптировать цирковирус свиней 2-го типа для репродукции в перевиваемых клеточных линиях;

- выделить цирковирус свиней 2-го типа из патологического материала от больных животных;

- изучить морфологию вирионов ЦВС-2 методом электронной микроскопии;

- разработать набор препаратов для обнаружения и дифференциации цирковирусов свиней 1-го и 2-го типов на основе полимеразной цепной реакции и её модификаций;

- изучить филогенетические взаимоотношения изолятов ЦВС-2, циркулирующих в популяциях свиней на территории РФ.

Научная новизна результатов исследований.

Показано, что патоморфологические изменения у поросят при СМИО и ДСНП характеризуются продуктивными воспалениями кровеносных сосудов мелкого и среднего диаметра во всех системах органов. Гистологические изменения в органах лимфоидной системы проявляются исчезновением зоны лимфатических фолликулов и замещением её ретикулярной основой.

Установлена способность ЦВС-2 к репродукции в перевиваемой культуре клеток А4С2 с развитием клеточных альтераций.

Разработан набор препаратов для обнаружения цирковируса свиней 2-го типа с применением полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ТаяМап).

Установлено филогенетическое родство изолятов ЦВС-1, выделенных из перевиваемых культур клеток РК-15, ЭК-б, ПСГК, ПСГК-60, а также изолятов цирковируса свиней 2-го типа, выявленных от поросят с синдромом мультисистемного истощения отъемышей и дерматитом с синдромом нефропатии на территории Российской Федерации.

Практическая значимость работы.

Представленные данные патологоанатомических и гистологических изменений при синдроме мультисистемного истощения отъемышей и дерматите с синдромом нефропатии важны для дифференциальной диагностики инфекционных заболеваний свиней.

Разработанные методы выявления генома цирковирусов свиней на основе ПЦР и ПЦР в режиме реального времени применяются в ГНУ ВИЭВ и ГНУ ВНИИВВиМ при диагностике цирковирусной инфекции свиней.

Публикации результатов исследований. По теме диссертационной работы опубликовано 6 научных статей, в том числе 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов» ВНИТИБП (г. Щёлково, 20-21 декабря 2007 г.), на международном семинаре «Porcine circovirus diseases: towards improved food quality & safety within new member states & associated candidate countries.Workshop №3» (Budapest, Hungary, 18th-20th May 2008), на международной конференции « Laboratory diagnostics today iL and its future challenges. Dedicated to the 90 anniversary of the Food and veterinary Service of Latvia (Riga 28-29 August 2008), заседаниях ученого совета ГНУ ВИЭВ и ГНУ ВНИИВВиМ в 2006-2008 гг.

Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые на защиту:

1. Патоморфологические изменения у поросят с СМИО и ДСНП;

2.0собенности репродукции ЦВС-2 в перевиваемых клеточных культурах;

3. Морфологические характеристики цирковируса свиней 2-го типа;

4. Метод выявления ДНК ЦВС-2 с использованием полимеразной цепной реакции в режиме реального времени;

5. Филогенетическое родство изолятов ЦВС-1, выделенных из перевиваемых культур клеток, и изолятов цирковируса свиней 2-го типа, циркулирующих в популяциях свиней на территории Российской Федерации.

Структура и объем диссертационной работы. Диссертация изложена на 131 странице и содержит следующие главы: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований и обсуждение, заключение, выводы, практические предложения и приложения. Работа иллюстрирована 29 рисунками, 8 таблицами. Список литературы включает 161 источник, в том числе 145 иностранных.

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Малоголовкин, Александр Сергеевич

5. ВЫВОДЫ

1. Основными патоморфологическими изменениями у поросят при синдроме мультисистемного истощения отъемышей и дерматите с синдромом нефропатии являются поражения респираторного тракта, характеризующиеся некротическими и интерстициальными пневмониями и изменениями в лимфатических узлах, проявляющимися гиперплазиями различной степени и нарушением структуры органа. Микроскопические изменения в тканях при цирковирусной инфекции свиней характеризуются периваскулярными инфильтрациями незрелыми клетками лимфоидного типа. В лимфоидных органах отмечаются дегенеративные изменения.

2. Образцы интактных культур клеток линий РК-15 (Португалия), SK-6, ПСГК, ПСГК-60, (ГНУ ВНИИВВиМ) являются инфицированными цирковирусом свиней 1-го типа, в то время как культуры клеток Vero, CV-1, ПТП (ГНУ ВНИИВВиМ), А4С2, СПЭВ (ГНУ ВИЭВ) свободны от вирусной контаминации. Все исследованные культуры клеток не содержат цирковирус свиней 2-го типа.

3. Установлена пермиссивность клеточной линии А4С2 к ЦВС-2 с развитием клеточных альтераций в ходе репродукции вируса.

4. Разработаны наборы препаратов для ПЦР и ПЦР в режиме реального времени, позволяющие идентифицировать и дифференцировать цирковирус свиней 1-го типа и цирковирус свиней 2-го типа в различных пробах патологического материала, сыворотках крови, а также инфицированных культурах клеток.

5. Методом электронной микроскопии в пробах патологического материала от поросят с признаками синдрома мультисистемного истощения отъемышей и дерматита с синдромом нефропатии, а также в пробах культур клеток, инфицированных цирковирусом свиней 2-го типа, обнаружены вирусные частицы цирковируса свиней 2-го типа, имеющие шестиугольный профиль капсомерного слоя и обладающие икосаэдрическом типом симметрии, с отсутствием суперкапсидной оболочки и средним значением диаметра 20,13±0,08 нм.

6. На основе филогенетического анализа показано близкое генетическое родство изолятов цирковируса 1-го типа, выявленного из различных перевиваемых культур клеток. Нуклеотидным секвенированием полевых изолятов цирковируса свиней 2-го типа установлен сходство отечественных изолятов со штаммами цирковируса свиней 2-го типа, циркулирующими в зарубежных странах.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для практического применения предложены:

1. «Методические рекомендации по выявлению и дифференциации цирковирусов свиней 1-го и 2-го типа с использованием метода полимеразной цепной реакции», утвержденные директорм ГНУ ВИЭВ 6 августа 2008 г.

2. «Методические рекомендации по применению набора препаратов для выявления ДНК ЦВС-2 методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени», утвержденные академиком - секретарем РАСХН 26 октября 2008 г.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Малоголовкин, Александр Сергеевич, 2009 год

1. Генетическая характеристика изолятов цирковируса диких кабанов / С.А. Чупин и др.//Мат. международной научно — практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных».ГНУ ВИЭВ, 2006.-С.402.

2. Герилович, А.П. Разработка системы индикации и дифференциации цирковирусов свиней методом полимеразной цепной реакции/ А.П. Герилович, Б.Т. Стегний// Сб. тр. 6-ой всеросс. науч.-практ. конф. «Молекулярная диагностика 2007», T.II.-M.,- 2007 г.-С. 14-15.

3. Гринин, A.C., Очистка, концентрирование и фракционирование вирусов животных/ A.C. Гринин, И.Н. Титов.- М.: Колосс ,1971.- 213 с.

4. Дягилев, К.К. Цирковирусная инфекция свиней и борьба с ней/ К.К Дягилев// Совершенствование технологии производства свинины на комплексах и фермах промышленного типа Минской области: науч.-практ. конф./РНИУПИЭВ.-Минск, -2003.-С.39-43.

5. Меркулов, Г. А. Курс патологической техники/ Г.А. Меркулов. -М.: Медицина, 1969.-422с.

6. Орлянкин, Б.Г. Респираторные нарушения свиней./ Б.Г. Орлянкин// Мат. международной научно практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии и иммунологии животных». ГНУ ВИЭВ, 2006.-С.135-138.

7. Орлянкин, Б.Г. Цирковирусная инфекция свиней/ Б.Г. Орлянкин, Т.Н. Алипер, Е.А. Непоклонов //Животноводство России.- 2003.- №8.- С. 24-25.

8. Разработка и применение непрямого варианта ИФА для обнаружения Ат к ЦВС-2/ A.M. Тимина и др.// Труды Федерального центра охраны здоровьяживотных / ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГУ «ВНИИЗЖ»). Т.4. Владимир.-2006.-С. 102-113.

9. Респираторная болезнь на свинокомплексах Сибири: диагностика, симптоматика, патология./ Афонюшкин A.M. и др.//Российский ветеринарный журнал.-2007. №2.-С. 12-13.

10. П.Сатина, Т.А. Цирковирусные инфекции свиней/ Т.А. Сатина //Обзор литературы/ ФГУ ВНИИЗЖ. Владимир, -2003. - 101 с.

11. Серологический мониторинг репродуктивно-респираторного синдрома, цирковирусной инфекции и парвовирусной инфекции свиней в Удмуртской республике/ Ю.Г. Крисенко и др.// Вет. врач,- 2007.-№2-С.7-9.

12. М.Тимина, A.M. Разработка методов лабораторной диагностики цирковирусной инфекции свиней: автореф. дис. канд. вет. наук: 16.00.03/ Тимина Анна Михайловна.-Владимир,- 2006.-27с.

13. Шкаева, М.А. Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления антител к цирковирусу свиней второго типа: автореф. дис. канд. биол. наук: 03.00.06/ Шкаева Мария Александровна.-М.,-2006.-25 с.

14. Absence of evidence for porcine circovirus type 2 in cattle and humans, and lack of seroconversion or lesions in experimentaly infected sheep / G.M. Alan et al.// Arch.Virol.-2000.-Vol. 145, N4.-P.853-857.

15. Activation of the immune system is the pivotal event in the production of wasting disease in pigs infected with porcine circovirus-2 (PCV-2)/ S. Krakowka et al. // Vet.Pathol.-2001.-Vol. 38, N1.-P.31-42.

16. Alan, G.M. Porcine circovirus: a review / G.M. Alan, J.A. Ellis//J.Vet.Diagn.lnvest.-2000.-Vol. 12,N1.-P. 13-14.

17. Alan, G.M. Porcine circovirus: Epidemiology and pathogenesis / G. M. Alan// PigJ.-1996.-Vol. 37.-P.14-19.

18. A sequential study of experimental infection of pigs with porcine circovirus and porcine parvovirus: immunostaining of cryostat sections and virus isolation / G.M. Alan et al.// J.Vet.Med.Ser.B-2000.-Vol.47, N2.-P.81-94.

19. An experimental model of Post-weaning Multisystemic Wasting Syndrome (PMWS) in growing piglets / E. Albina et al.// J. Comp.Pathol.-2001.-Vol. 125.-P.292-303.

20. Analysis of seroconversion to porcine circovirus 2 among veterinarians from the United States and Canada / J.A. Ellis et al.// J.Am.Vet.Med.Assoc.-2000.-Vol. 217, N11.-P.1645-1646.

21. Analysis of transcription and replication of porcine circovirus PCV / A. Mankertz et al.// IXth lnt.Congr.Virol.-1993.-P.76.

22. Association of porcine circovirus 2 with reproductive failure in pigs: a retrospective study, 1995-1998 / J. Bogdan et al.// Can.Vet.J.-2001.-Vol. 42, N7.-P.548-550.

23. Association of porcine circovirus-2 with swine diseases other than post-weaning multisystemic wasting syndrome / Ellis J. et al.// Vet.Pathol.-1999.-Vol. 36, N5.-P.498.

24. A very small porcine virus with circular single-stranded DNA / I. Tisher et al.//Nature.-1982- Vol. 295. P.64-66.

25. Beak and feather disease virus and porcine circovirus genomes: intermediates between the geminiviruses and plant circoviruses / F.D. Niagro et al. // Arch.Virol.-1998.-Vol. 143, N9.-P.1723-1744.

26. Binding and entry characteristics of porcine circovirus 2 in cells of the porcine monocytic line 3D4/31/ G. Misinzo Journal of General Virology.-2005.- 86.-P. 2057-2068.

27. Boevink, P. Sequence of subterranean clover stunt virus DNA: affinities with the geminiviruses / P. Boevink, P.W. Chu, P. Keese// Virology.-1995.-Vol. 207,-P.354-361.

28. Buhk, H.J. Cloning and sequencing of the porcine circovirus PCV genome / H.J. Buhk, I. Tischer, M.A. Koch // Zbl. Bakteriol. Microbiol. Hyg. Ser.A, Meet. Abstr.-1985.-P.260-465.

29. Buhk, H.J. Replication of negative strand DNA of the singe-stranded porcine circovirus genome / H.J. Buhk, I. Blab, I. Tischer// Abstr. Joint Meeting of Section Virol, and Virus Group of Soc.Gen.Microbiol.-1988.-P.54.

30. Carlton, J. Another new viral disease? / J. Carlton //Swine Practitioner.-1997. -N4.-P.14-15.

31. Cellular localization of porcine circovirus in postweaning pigs with chronic wasting disease / M. Kiupel et al. // Europ.J.Vet.Pathol.-1999.-Vol. 5.-P.77-82.

32. Change of porcine circovirus 2 target cells in pigs during development from fetal to early postnatal life/ R.E. Sanchez et al.// Vet Microbiol.-2003.- 95.-P.15-25.

33. Changes in peripheral blood leukocyte populations in pigs with natural postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) / J. Segales et al. // Vet. Immunopathol.-2001.-Vol. 30, N1-2.-P.37-44.

34. Characterization of novel circovirus DNAs associated with wasting syndromes in pigs / B.M. Meehan et al. // J.Gen.Virol.-1998.-Vol. 79, N9.-P.2171-2179.

35. Characterization of PCV-2 isolates from Spain, Germany and France / A. Mankertz et al.// Virus Res.-2000.-Vol. 66, N1.-P.65-77.

36. Charreyre, C. Natural decrease of anti PCV II material antibodies in conventional piglets / C. Charreyre, L. Boeuf, G. Reynaud//Proc.of the 16th IVPS Congr.-Melbourne, Australia, 2000. P.630.

37. Charreyre, C. Natural transmission of PCV II in seronegative 9 week old pigs / C. Charreyre, L. Boeuf, Brunet S., G. Reynàud// Proc. of the 16th IPVS Congr,-Melboume, Australia, 2000.-P.574.

38. Cheung, A. Transcriptional analysis of porcine circovirus/ A. Cheung// J. Virol. -2003 .-305.-P. 168-180.

39. Choi, C. In situ hybridization for the detection of porcine circovirus in pigs with postweaning multisystemic wasting syndrome / C. Choi, C. Chae //J. Pathol. -1999.-Vol. 121, N3.-P.265-270.

40. Choi, C. Distribution of porcine parvovirus in porcine circovirus 2-infected pigs with postweaning multisystemic wasting syndrome as shown by in-situ hybridization / C. Choi, C. Chae //J.Comp.Pathol.-2000.-Vol. 123, N4.-P.302-305.

41. Circovirus-like viral associated disease in weaned pigs in Indiana / M. Kiupel et al. // Vet.Pathol.-1998.-Vol. 35, N4.-P.303-307.

42. Clark E.G. Pathology of the postweaning multisystemic wasting syndrome of pigs / E.G. Clark // Proc.West. Can.Assoc.Swine Pract.-1996.-P. 22-25.

43. Clark, E.G. Circovirus an emerging swine pathogen / E.G. Clark, J.C. Harding// ISU Swine Disease Conf.Proc.-1997.-P.63-64.

44. Clinicopathological findings related to the first description in Spain of porcine dermatitis/nephropathy syndrome / J. Segales et al.// Proc. of the 14th IPVS Congr. Bologna, Italy, 1996.-P.709.

45. Coinfection by porcine circoviruses and porcine parvvovirus in pigs with naturaly acquired postweaning multisystemic wasting syndrome / J.A. Ellis et al.// J.Vet.Diagn.Invest.-2000.-Vol. 12, N1.-P.21-27.

46. Comparison of the Structures of Three Circoviruses: Chicken Anemia Virus, Porcine Circovirus Type 2, and Beak and Feather Disease Virus/ R.A. Crowther et al.// J.of Virology.-2003 .-P. 13036-13 041.

47. Cutlip, B.C. Experimentaly induced infection of neonatal swine with porcine parvovirus / B.C. Cutlip, W.L. Mengeling //Am.J.Vet.Res.-1975.-Vol. 36.-P. 1179-1182.

48. Differential recognition of ORF2 protein from type 1 and type 2 porcine circoviruses and identification of immunorelevant epitopes / D. Mahe et al.// J.Gen. Virol.-2000.-V81, N7.-P. 1815-1824.

49. Detection of porcine circovirus from lesions of a pig with wasting disease in Japan/A. Onuki et al.// J.Vet.Med.Sci.-1999.-Vol. 61, N10. -P.l 119-1123.

50. Development of a polyclonal-antibody-based immunohistochemical method for the detection of type 2 porcine circovirus in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue / S.D. Sorden et al. //J.Vet.Diagn.lnvest.-1999.-Vol. 11, N6.-P.528-530.

51. Development of probes to differentiate porcine circovirus types 1 and 2 in vitro by in situ hybridization / P. Nawagitgul et al. // Vet.Microbiol.-2000.-Vol. 75, N1.-P.83-89.

52. Differentiation of porcine circovirus 1 and 2 in formalin-fixed, paraffin-wax-embedded tissues from pigs with postweaning multisystemic wasting syndrome by in situ hybridization / J. Kim, C. Chae // Res.Vet.Sci.-2001.-. Vol. 70.-P.265-269.

53. Diffuse hepatic necrosis characterized by infiltration of multinucleated giant ceils associated with porcine circovirus type 2 in a piglet / Okuda K. et al.// JJapan Vet.Med.Assn.-2001.-Vol. 54,N3.-P. 181-184.

54. Double in situ hybridization for simultaneous detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and porcine circovirus (PCV) / T. Sirinarumitr et al. // J.Vet.Diagn.lnvest.-2001.-Vol. 13, N1.-P.68-71.

55. Dulac, G.C. Porcine circovirus antigens in PK-15 cell line (ATCC CCL-33) and evidence of antibodies to circovirus in Canadian pigs / G.C. Dulac, A. Afshar// Canad. J.Vet.Res.-1989.-Vol. 53,N4.-P.431 -433.

56. Edwards, S. Evidence of oncovirus infection in British pigs // S. Edwards, J.Sands // J. Vet. Rec-1994.-Vol. 134, N26.-P.680-681.

57. Ellis, J.A. The natural history of porcine circoviruses / J.A. Ellis, G.M. Alan //MERIAL -PMWS Symposium. Melbourne, 2000.-P.3-19.

58. Epidemiology of post-weaning multisystemic wasting syndrome in Ontario / T.S. Cotrell et al.// Proc.Am.Assoc. Swine Pract.-1999.-P.389-390.

59. Evidence of porcine circovirus infection in pigs with wasting disease syndrome from 1985 to 1999 in Hokkaido, Japan / K. Sato et al. // J.Vet.Med.Sci.-2000.-Vol. 62, N6.-P.627-633.

60. Evidence of shedding of porcine circovirus type 2 (PCV2) in boar semen following experimental infection / R. Larochelle et al. // Proc.of the 16lh IPVS Congr. -Melbourne, Australia, 2000.-P.580.

61. Experimental inoculation of conventional pigs with tissue homogenates from pigs with post-weaning multisystemic wasting syndrome // M. Balasch et al.// J.Comp.Pathol.-1999.-Vol. 121,N2.-P. 139-148.

62. Experimental reproduction of severe wasting disease by co-infection of pigs with porcine circovirus and porcine parvovirus / G.M. Alan et al.// J.Comp.Pathol.-1999.-Vol. 121, N1.-P. 1-11.

63. First report of postweaning multisystemic wasting syndrome in pigs in Spain / J. Segales Vet.Rec.-1997.-Vol. 141, N23.-P.600-601.

64. Gibbs, M J.Evidence that a plant virus switched hosts to infect a vertebrate and then recombined with a vertebrate-infecting virus / M J. Gibbs, F.W. Weiller// Proc. Natl.Acad.Sci.USA.-1999.-Vol. 96.-P .8022-8027.

65. Haematological parameters in postweaning multisystemic wasting syndrome-affected pigs / J. Segales et al. // Vet.Rec-2000.-V146, N23.-P.675-676.

66. Hamel, A.L. Nucleotide sequence of porcine circovirus associated with postweaning multisystemic wasting syndrome in pigs / A.L. Hamel, L.L. Lin, G.P Nayar// J.Virol.-1998.-Vol. 72, N6.-P.5262-5267.

67. Harding, J.C, Recognizing and diagnosing postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) / J.C. Harding, E.G. Clark// Swine Health and Prod.-1987.-N5. -P.201-203.

68. Harding, J.C. Postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS): preliminary epidemiology and clinical presentation / J.C. Harding // 28th AASP.-1997.-P.503-504.

69. Identification and incidence of porcine circovirus in routine field cases in Quebec as determined by PCR / R. Larochelle et al. // Vet.Rec.-1999.-Vol. 145, N5.-P. 140-142.

70. Identification of a novel GC-rich 113-nucleotide region to complete thecircular, single-stranded DNA genome of TT virus, the first human circovirus /

71. Miyata Hironori et al. // J.Virol.-1999.-Vol. 73, N5.-P.3582-3586.

72. Identification of a protein essential for replication of porcine circovirus / A.

73. Mankertz et al.// J.Gen.Virol.-1998.-Vol. 79, N2.-P.381-384.

74. Immunostimulation, PCV-2 and PMWS/ G.M. Alan et al.// Vet.Rec.-2000.1. Vol.147, N6.-P. 170-171.

75. Infection of leucocyte cell cultures derived from different species with pig circovirus / G.M. Alan et al.// Vet.Microbiol.-1994-Vol. 41, N3.-P.267-279.

76. Interstitial pneumonia and lymphadenopathy associated with circoviral infection in a six-week-old pig / B. Daft et al.// 39th Meeting of the Am.Assoc.Vet. Lab.Diagn. 1996.-P.32-39.

77. Intestinal chlamydial infection concurrent with post weaning multisystemic wasting syndrome in pigs / L. Carrasco et al.// Vet.Rec.-2000.-Vol. 146,. N1.-P.21 -23.

78. Increase in PDNS diagnoses in the Netherlands/ A.R. Elbers et al.// Vet.Rec.-2000.-Vol. 147, Nll.-P.311.

79. Isolation and characterisation of circoviruses from pigs with wasting syndromes in Spain, Denmark and Northern Ireland/ G.M. Alan et al.// Vet.Microbiol.1999,-Vol. 66, N2.-P.115-123.

80. Isolation and characterization of porcine circovirus 2 from cases of sow abortion and porcine dermatitis and nephropathy syndrome / B.M. Meehan et al. // Arch.Virol.-2001 .-Vol. 146, N4.-P.835-842.

81. Isolation of circovirus from lesions of pigs with postweaning multisystemic wasting syndrome / J. Ellis et al.// Can.Vet.J.-1998.-V39, N1.-P.44-51.

82. Isolation of porcine circovirus-like viruses from pigs with a wasting disease in the USA and Europe / G.M. Alan et al.// J.Vet.Diagn.lnvest.-1998.-Vol.lO, N1.-P.3-10.

83. Kawachima, K. Association of porcine circovirus type 2 with respiratory disease in a swine herd with porcine reproductive and respiratory syndrome / K. Kawachima, F. Tsunemitsu // Proc.of the 16th IPVS Cong.-Melbourne, Australia,2000.-P.520.

84. Knell, S. Comparative genetic characterization of Porcine Circovirus type 2 isolates from German wild boar populations /S. Knell //Veterinary Microbiology.-2005.- 109.-P. 169-77.

85. Lack of antibodies to porcine oncovirus type 2 virus in beef and dairy cattle and horses in Western Canada / J.A.Ellis et al.// Can.VetJ.-2001.-Vol.42, N6.-P.461-464.

86. Lack of PCV-2 Infection innon porcine species in spain/M. Rodriguez-Arrioja et al.// Vet. Rec.-2003.-371-372.

87. Larochelle R. Typing of porcine circovirus in clinical specimens by multiplex PCR / R. Larochelle et al. //J.Virol.Methods.-1999.-Vol. 80, N1.-P.69-75.

88. LeCann, P. Identification of porcine circovirus associated with piglet wasting disease / LeCann P. et al. // Proc.of Int.Pig Vet.Soc. Congr.-1998.-V15.-P.402.

89. Liu, Q. Nuclear localization of the ORF2 protein encoded by porcine circovirus type 2 / S.K. Tikoo, L.A. Babiuk//Virology. -2001.-Vol. 285, N1.-P.91-99.

90. Magar, R. Experimental transmission of porcine circovirus type 2 (PCV2) in weaned pigs: a sequential study / R. Magar, R. Larochelle, S. Thibault// J.Comp.Pathol.-2000.-Vol. 123, N4.-P.258-269.

91. Magar, R. Retrospective serological survey of antibodies to porcine circovirus type 1 and type 2 / R. Magar, P. Muller, R. Larochelle //Can.J.Vet.Res.-2000.-Vol.64, N3. -P. 184-186.

92. Mankertz, A. Molecular biology of porcine circovirus/ A. Mankertz// Porcine circovirus diseases: towards improved food quality & safety within new member states & associated candidate countries.Workshop №3. Budapest, Hungary, 18th-20th May 2008.

93. Mapping and characterization of the origin of DNA replication of porcine circovirus/ J. Mankertz et al.//J.ViroI.-1997.-Vol.71, N3. P.2562-2566.

94. Meerts, P. The complex interaction between porcine circovirus type 2 and the pig's immune system: PhD thesis/ Peter Meerts.-Universiteit Gent, 2005.-p.195.

95. Molecular and biophysical characterization of TT virus: evidence for a new virus family infecting humans / I.K. Mushahwar et al. // Proc.Natl.Acad.Sci.USA-1999.-Vol. 96, N6.-P.3177-3182.

96. Morphological characterization of chicken anaemia agent (CAA)/ H. Gelderblom et al.// Arch.Virol. -1998.-Vol. 109.-P.115-120.

97. Morozov, I. Detection of a novel strain of porcine circovirus in pigs with postweaning multisystemic wasting syndrome / I. Morozov et al. // J.Clin. Microbiol.-1998.-Vol. 36, N9.-P.2535-2541.

98. Multiple porcine circovirus 2-associated abortions and reproductive failure in a multisite swine production unit / B. O'Connor et al. // Can.Vet. J.-2001.-Vol.42, N7.-P.551-553.

99. Multiplex PCR for detection and typing of porcine circoviruses / M. Ouardani et al. // J.Clin.Microbiol.-1999.-Vol. 37, N12.-P.3917-3924.

100. Myocarditis associated with high PCV-2 DNA-load in aborted fetuses and young piglets/ I.M. Brunborg et al.// 5th international symposium on emerging and re-emerging pig diseases Krakow, Poland 24th - 27th June 2007.-p.57.

101. Nayar, G.P. Detection and characterization of porcine circovirus associated with postweaning multisystemic wasting syndrome in pigs/ G.P. Nayar// Can.Vet.J.-1997.-V38, N6.-P.385-386.

102. Nayar, G.P. Evidence for circovirus in cattle with respiratory disease and from aborted fetuses / G.P. Nayar, A. Hamel, L. Lin //Can.Vet.J.-1999.-V40.-P.277-278.

103. New pig disease in Hungary: postweaning multisystemic wasting syndrome caused by circovirus (short communication) / I. Kiss et al. // Acta Vet.Hung.-2000.-Vol. 48, N4.-P.469-475.

104. Novel porcine circoviruses from pigs with wasting disease syndromes / G.M. Alan et al.// Vet.Rec.-1998.-Vol. 142, N17.-P.467-468.

105. Open reading frame 2 of porcine circovirus type 2 encodes a major capsid protein / P. Nawagitgul et al. // J. Gen. Virol. 2000. -Vol. 81, N9.-P.2281-2287.

106. Oraveerakul, K., Choi C.S., MolitorT.W. Tissue tropisms of porcine parvl.l.virus in swine // K. Oraveerakul, C.S. Choi, T.W. Molitor// Arch Virol. -1993. Vol. 130. - P.377-389.

107. Palmer, K.E. The molecular biology of mastreviruses / K.E. Palmer, E.P. Rybicki//Adv. Virus.Res.-1998.-Vol. 50.-P. 183-234.

108. Pathogenesis of porcine circovirus; experimental infections of colostrum deprived piglets and examination of pig foetal material / G.M. Alan et al.// Vet.Microbiol.-1995.-Vol. 44, N1.-P.49-64.

109. Pathological findings of pigs infected with porcine circovirus type 2 / K. Sato et al. //J.Japan Vet.Med.Assn.-2001.-Vol. 54, Nl.P.13-17.

110. Pathological observations on pigs with porcine dermatitis and nephropathy syndrome in Croatia/ Z. Grabarevich et al.// Veterinarski arhiv.-2004.-74 (1).-P.3-11.

111. PCR detection and characterization of type-2 porcine circovirus / A.L. Hamel et al. // Can.J.Vet.Res.-2000.-Vol. 64, N1.-P.44-52.

112. PCR detection and evidence of shedding of porcine circovirus type 2 in boar semen / R. Larochelle et al. // J. Clin. Microbiol. -2000. Vol. 38, V12. - P.4629-4632.

113. PCV-2-associated PDNS in Northern Ireland in 1990. Porcine dermatitis and nephropathy syndrome / G.M. Alan et al.// Vet. Rec. 2000. - Vol. 146, N24. -P.711-712.

114. Piglet wasting disease // P. LeCann et al. // Vet.Rec-1997.-Vol. 141, N25.-P.660.

115. Pigs confirmed to be infected with porcine circovirus 2 as early as 1988 / M. Hasegawa et al. // J.Japan Vet.Med.Assn.-2001.-Vol. 54, N10.-P.757-760.

116. PMWS and porcine dermatitis nephropathy syndrome in Great Britain // A. Gresham et al.//Vet.Rec.-2000.-Vol. 146, N5.-P.143.

117. Porcine circovirus and PRRS virus co-infection in pigs with chronic bronchointerstitial pneumonia and lymphoid depletion: an emerging syndrome in Midwestern swine / S.D. Sorden et al. // Proc. Am.Assoc.Vet.Lab.Diagn.-1998.-V41.-P.75.

118. Porcine circovirus infection in Northern Ireland / S. Kennedy et al. // Vet.Rec.-1998.-Vol. 142, N18.-P.495-496.

119. Porcine circovirus is present in cases of porcine dermatitis and nephropathy syndrome / J. Segales et al. // 15th Int.Pig.Vet.Soc.Proc. Birmingham, 1998. -P.215.

120. Porcine dermatitis and nephropathy syndrome (PDNS): an overview of the disease / R. Drolet et al.// Swine Health Prod.-1997. -V7.-P.241-245.

121. Porcine dermatitis nephropathy syndrome: a new condition to include into the differential diagnosis list for skin discoloration in swine / M. Duran et al.// Swine Health Prod.-1997.-V5.-P.241 -245.

122. Porcine immune complex glomerolonephritis dermatitis (PIGD) syndrome / M.A. Sierra et al. // Europ.J.Vet.Pathol. 1997. - Vol. 3, N2. - P.63-70.

123. Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) infection in pigs naturaly affected with postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) in Spain / J. Segales et al. // Proc. of the 16th IPVS Congr.-Melbourne, Australia, 2000.-P.582.

124. Postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS): epidemiology and clinical presentation / J.C. Harding et al. // Swine Health Prod.-1998.-N6.-P.249-254.

125. Presence of antibodies reacting with porcine circovirus in sera of humans, mice, and cattle./I. Tisher et al.// Arch. Virol.- 1995-. Vol. 140.-P. 1427-1439.

126. Production, characterisation and applications of monoclonal antibodies to porcine circovirus 2 / F. McNeilly et al. // Arch.Virol.-2001.-Vol. 146, N5.-P.909-922.

127. Prevalence of swine Torque teno virus in post weaning multisystemic wasting syndrome (PMWS)-affected and non-PMWS-affected pigs/T. Kekarainen et al.// J. General Virology.-2006.-Vol. 87.-P.833-837.

128. Psittacine beak and feather disease virus nucleotide sequence analysis and its relationship to porcine circovirus, plant circoviruses, and chicken anaemia virus /M.R. Bassami et al.// Virology.-1998.-Vol. 249, N2.-P.453-459.

129. Quantitative, competitive PCR analysis of porcine circovirus DNA in serum from pigs with postweaning multisystemic wasting syndrome / Q. Liu et al. // J.CIin.Microbiol.-2000.-Vol. 38, N9.-P.3474-3477.

130. Receptor determined resistance of preimplantation embryos to porcine respiratory syndrome virus/ H. Nauwynck et al.// 5lh international symposium onemerging and re-emerging pig diseases Krakow, Poland 24th - 27th June 2007.-p.164.

131. Renal failure in PRRSV and PCV2 natural infected swine / Gelmetti D. et al. // Virol, in new Millenium: Proc.5lh Int.Congr.Europ.Soc.Vet.Virol.-Brescia, 2000.-P.350-351.

132. Replication of singlestranded porcine circovirus DNA by DNA polymerase-alpha and polymerase-delta // M. Gassmann et al.// Biochem.Biophys.Acta.-1988.-Vol. 951.-P.280-289.

133. Reproduction of lesions of postweaning multisystemic wasting syndrome in gnotobiotic piglets / Ellis J. et al.// J.Vet.Di-agn.lnvest.-1999.-Vol. 11, N1 .-P.3-14.

134. Sequence of porcine cir-s covirus DNA: affinities with plant circovirus / B.M. Meehan et al. // J.Gen.Virol.-1997.-Vol. 78, N1.-P.221-227.

135. Seroprevalence of porcine circovirus types 1 and 2 in the Belgian pig population / G.G. Labarque et al. //Vet.Q.-2000.-Vol. 22, N4.-P.234-236.

136. Shibahara, T. Porcine circovirus induces B lymphocyte depletion in pigs with wasting disease syndrome / T. Shibahara, K. Sato, Y. Ishikawa// J.Vet,Med.Sci.-2000.-Vol. 62, N11.-P. 1125-1131.

137. Smith, WJ. Dermatitis/nephropathy syndrome of pigs / W.J. Smith, J.R. Thomson, S. Done // Vet.Rec.-1993.-Vol. 132.-P.47.

138. Some biological and physicochemical properties of porcine circovirus / G.M. Alan et al.// J.Vet.Med.Ser.B.-1994.-Vol.41, N1.-P. 17-26.

139. Systemic necrotizing vasculitis and glomerulonephritis in grower pigs in southwestern Quebec/ P. Helie et al. // Can. Vet. J.-1995.-Vol. 36.-P. 150-154.

140. The Circoviridae / P. Lukert et al.// Virus Taxonomy. Sixth Rep.lnt.Comm. on Taxonomy of Viruses.-Vienna etc., 1995. P. 166-168.

141. The clinical scope of porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection has expanded since 1987 an alternative perspective/ J.A. Ellis et al.// Vet.Pathol.-1999.-Vol. 36, N3.-P.262-265.

142. The serological characterization of PCV2 isolates using an established virus neytralisation test for PCV-2 antibodies/ C. Duffy et al.// 5th international symposium on emerging and re-emerging pig diseases Krakow, Poland 24th - 27th June 2007.-p.52.

143. Three cases of postweaning multisystemic wasting syndrome (PMWS) due to porcine circovirus type 2 (PCV 2) in Switzerland // N.Borel et al.// Schweiz. Arch.Tierheild.-2001.-Vol. 143, N5.-P.249-255.

144. Tissue distribution and genetic typing of porcine circoviruses in pigs with naturaly occurring congenital tremors / G.W. Stevenson et al. // J. Vet.Diagn.lnvest.-2001 Vol. 13, N1.-P.57-62.

145. Todd, D. Circoviruses: immunosuppressive threats to avian species: a review/D.Todd// Avian Pathol.-2000.- 29.-P.373-394.

146. Transcription analysis of porcine circovirus (PCV)/ A. Mankertz et al.//Virus Genes.-1998.-Vol. 16, N3.-P.267-276.

147. Transfusion transmitted virus: A review on its molecular characteristics and role in medicine/ M. Irshad et al.// World J Gastroenterol.-2006.- 12(32).P. 5122-5134.

148. Viral replication and lesions in BALB/c mice experimentaly inoculated with porcine circovirus isolated from a pig with postweaning multisystemic wasting disease / M. Kiupel et al. // Vet. Pathol.-2001.-Vol. 38, N1.-P.74-82.

149. Reproduction of lesions of postweaning multisystemic wasting syndrome by infection of conventional pigs with porcine circovirus type 2 alone or in combination with porcine parvovirus/ B. Meehan et al.// J. Comp. Pathol. -2000,-Vol. 122.-P. 9-24.

150. Pathogenesis of porcine circovirus experimental infections of colostrum deprived piglets and examination of pig foetal material/F. McNeilly et al.//. Veterinary Microbiology.-1995.-Vol. 44.-P.49-64.