Экспрессия генов фактора роста эндотелия сосудов и тромбоспондина-1 в клетках тимуса и перитонеальных макрофагах мышей при опухолевом росте тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Крылов, Андрей Витальевич

• Крылов, Андрей Витальевич
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Крылов, Андрей Витальевич

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. АНГИОГЕНЕЗ И КЛЕТКИ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ (ОБЗОР

ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1 Введение.

1.2 Структура VEGF и его рецепторов.

1.3 Структура TSP-1 и его рецепторов.

1.4 VEGF и TSP-1 - разнонаправленные регуляторы процессов ангиогенеза.

1.5 Синтез VEGF и TSP-1 клетками иммунной системы.

1.6 Клетки иммунной системы - мишени действия VEGF и TSP-1.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1.Синтез мРНК VEGF, VEGFR1, VEGFR2 и TSPклетками иммунной системы интактных мышей.

3.2. Изучение способности клеток гепатомы синтезировать VEGF и TSP-1 in vitro.

3.3. Исследование концентрации VEGF в сыворотке крови мышей в динамике роста опухоли.

3.4. Инволюция тимуса при росте экспериментальной гепатомы.

3.4.1. Влияние роста гепатомы на синтез мРНК VEGF, VEGFR1, VEGFR2, и TSPв строме тимуса мышей.

3.4.2. Влияние роста гепатомы на синтез мРНК VEGF, VEGFR1, VEGFR2, и TSP-1 в тимоцитах мышей.

3.4.3. Синтез белка VEGFR2 в тимусе мышей.

3.5. Влияние роста гепатомы на экспрессию мРНК VEGF, VEGFR1, VEGFR2, и TSP-1 в перитонеальных макрофагах мышей.

3.6. Влияние VEGF на экспрессию мРНК VEGF, VEGFR1, VEGFR2, и TSP-1 в перитонеальных макрофагах интактных мышей in vitro.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экспрессия генов фактора роста эндотелия сосудов и тромбоспондина-1 в клетках тимуса и перитонеальных макрофагах мышей при опухолевом росте»

Актуальность проблемы. Клетки иммунной системы являются основным эффекторным механизмом, обеспечивающим антигенный гомеостаз организма. Считается, что иммунный надзор осуществляет контроль за появлением трансформированных клеток в организме. Однако, этот контроль не является достаточно эффективным вследствие развития иммунодепрессивных состояний, сопровождающих рост большинства опухолей. Хотя механизм, с помощью которого опухоли избегают иммунного надзора не вполне ясен, многие связывают его развитие с выделением различных иммуносупрессорных факторов, как самими опухолевыми клетками, так и нормальными клетками организма. В последнее время появились данные о том, что к таким факторам можно также отнести и ангиорегуляторные молекулы, такие как ростовой фактор эндотелия сосудов (VEGF) и белок внеклеточного матрикса тромбоспондин-1 (TSP-1). VEGF играет важную роль, в инициации неоангиогенеза и является необходимым компонентом опухолевой, прогрессии, в то время как TSP-1 является антиангиогенным фактором, оказывающим подавляющее влияние на рост клеток эндотелия в различных моделях.

Показано, что VEGF может оказывать ряд иммуносупрессорных эффектов; в частности вызывать развитие инволюции тимуса (Ohm et al., 2003). Инволюция тимуса сопровождает развитие многих опухолей человека и животных и может создавать основу для развития Т-клеточного иммунодефицита в организме. Изучение механизмов этого процесса является актуальным, поскольку разработка методов, препятствующих этому процессу, могла бы существенно увеличить продолжительность жизни онкологических больных. Одним из возможных механизмов действия VEGF является усиление апоптоза тимоцитов (Киселева, 2002). TSP-1 способен оказывать подавляющее действие на периферические Т-лимфоциты (Doyen et al., 2003), а также вызывать в них апоптоз (Manna, Frazier, 2003).

Многие опухолевые клетки продуцируют оба этих фактора (Lawler. 2002; Senger et al., 1986). Известно, что сывороточные концентрации VEGF при росте опухолей могут увеличиваться (Kondo et al., 1994), а уровень содержания TSP-1 может значительно варьировать и быть как пониженным, так и повышенным

Tuszynski, Nicosia, 1996). Накопление VEGF и TSP-1 в циркуляции может оказывать системный эффект и подавлять нормальное функционирование иммунной системы.

Многие нормальные клетки организма и, в частности, клетки иммунной системы также способны синтезировать VEGF и TSP-1, что показано in vitro (Carpizo, Iruela-Arispe, 2000; Bottomley M.J. et.al., 1999). Мы предположили, что усиление внутриорганного синтеза VEGF и TSP-1 в тимусе может влиять на развитие Т-клеточного иммунодефицита при опухолевом росте. Поскольку хорошо известно, что активными продуцентами VEGF и TSP-1 и основными регуляторами ангиогенеза в организме являются макрофаги, мы проводили сравнительное изучение системного влияния опухолевого роста на тимус и перитонеальные макрофаги.

Перспективность исследования связана с возрастающим интересом клиницистов к применению антиангиогенных препаратов для лечения новообразований. В качестве мишеней для создания таких препаратов широко используются молекулы VEGF и TSP-1, причем без учета их иммуномодулирующих эффектов. Поэтому изучение синтеза VEGF и TSP-1 клетками иммунной системы является актуальной задачей исследования.

Цель работы. Оценка локального синтеза VEGF и TSP-1 в тимусе и перитонеальных макрофагах мышей при росте сингенной опухоли гепатома 22а. Для этого решались следующие задачи:

1. Оценить изменение синтеза мРНК VEGF и TSP-1, а также рецепторов VEGF (VEGFR1 и VEGFR2) в клетках тимуса мышей в норме и при росте экспериментальной гепатомы.

2. Сопоставить эти изменения с изменением массы и клеточности тимуса и изменением уровня VEGF в циркуляции при росте гепатомы.

3. Изучить изменение синтеза мРНК VEGF и TSP-1, а также рецепторов VEGF (VEGFR1 и VEGFR2) в перитонеальных макрофагах мышей при росте гепатомы и сопоставить их с теми же показателями в клетках тимуса.

4. Оценить синтез мРНК VEGF, его рецепторов и TSP-1 перитонеальными макрофагами под действием VEGF in vitro.

Основные положения выносимые на защиту.

1. Инволюция тимуса при росте опухоли сопровождается усилением синтеза мРНК VEGF внутри тимуса и не сопровождается повышением уровня содержания VEGF в циркуляции.

2. Инволюция тимуса при росте гепатомы сопровождается усилением синтеза мРНК VEGF в строме тимуса и мРНК VEGFR2 и TSP-1 в тимоцитах.

3. VEGF усиливает синтез мРНК своих рецепторов (VEGFR1 и VEGFR2), экспрессию мРНК своей собственной молекулы, а также TSP-1 в макрофагах мышей in vitro.

Научная новизна. Впервые было показано наличие конститутивной экспрессии генов VEGF и VEGFR2 и TSP-1 в тимоцитах. Также установлено, что запустевание тимуса при росте гепатомы сопровождается повышением локального синтеза мРНК VEGF в строме тимуса и усилением экспрессии мРНК VEGFR2 и TSP-1 в тимоцитах. Нами впервые было показано, что в тимоцитах и макрофагах при росте опухоли наблюдается однонаправленное изменение синтеза мРНК VEGFR2. Кроме того, установлено, что экспрессия мРНК VEGF и TSP-1 в макрофагах может быть усилена в присутствии VEGF in vitro.

Теоретическое и практическое значение. Работа носит экспериментально-теоретический характер. На основании проведенных экспериментальных исследований дополнена концепция развития инволюции тимуса при росте опухоли, заключающаяся в локальном усилении синтеза мРНК ангиогенного фактора VEGF стромой тимуса и усилении синтеза мРНК VEGFR2 тимоцитами. При этом показано, что развитие инволюции тимуса, сопровождающее опухолевый рост, может не зависеть от повышения уровня VEGF в циркуляции. Дополнены данные по взаимодействию VEGF и клеток иммунной системы на примере влияния VEGF на синтез ангиорегуляторных молекул макрофагами.

Апробация. Основные результаты работы были представлены на четырех научных конференциях "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (2002-2006), на конференции молодых ученых «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань 2006) и Всероссийской конференции молодых ученых «Иммунитет и аллергия: от эксперимента к клинике» (Пермь 2006).

Материалы докладывались на заседании С.Петербургского отделения Российского научного общества иммунологов (2007).

Диссертационная работа апробирована на научной конференции отдела иммунологии ГУ НИИЭМ РАМН 18 декабря 2007г.

Публикации. Результаты работы отражены в 17 публикациях (4 статьи и 13 тезисов).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 103 страницах, включает введение, обзор литературы, описание методов исследования, полученные результаты и их обсуждение, выводы и список литературы. Работа иллюстрирована 4 таблицами и 48 рисунками. Библиографический указатель включает 177 литературных источников (10 отечественных и 167 иностранных).

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Крылов, Андрей Витальевич

выводы

1. Тимоциты интактных мышей способны конститутивно экспрессировать мРНК VEGF и TSP-1, а также мРНК VEGFR2, но не VEGFR1.

2. Перитонеальные макрофаги интактных мышей способны конститутивно экспрессировать мРНК VEGF и TSP-1, а также мРНК рецепторов VEGF: VEGFR1 и VEGFR2.

3. Инволюция тимуса при росте гепатомы 22а сопровождается усилением синтеза мРНК VEGF стромальными клетками тимуса и не сопровождается изменением уровня содержания VEGF в сыворотке крови.

4. Рост экспериментальной гепатомы вызывает однонаправленное изменение синтеза мРНК VEGFR2 и TSP-1 в тимоцитах и перитонеальных макрофагах, удаленных от опухолевого узла, что может рассматриваться в. качестве системного эффекта роста опухоли.

5. Синтез мРНК VEGF, VEGFR1 и VEGFR2 в перитонеальных макрофагах интактных мышей усиливается в присутствии VEGF in vitro, что может создавать дополнительную петлю усиления ангиогенной активности макрофагов в тканях.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Крылов, Андрей Витальевич, 2008 год

1. Алексанян Ю.Т., Бесмаджан М.Е., Мовсесян К.С. и др. Линия перевиваемых клеток, полученная из перевиваемой мышиной гепатомы.// Бюлл.Экспер.Биол.Мед. -1972. N5. - С.94-95.

2. Герштейн Е.С., Грицаенко Е.В., Щербаков М.Е., Щербаков A.M., Огнерудов H.A., Кушлинский Н.Е. Фактор роста эндотелия сосудов и активаторы плазминогена при карциноме и гиперплазии эндометрия //Вопр.Онкол. 2003. - Т.49. - С.725-729.

3. Киселева Е.П. Механизмы инволюции тимуса и активации системы мононуклеарных фагоцитов при росте экспериментальных опухолей: Автореф.дис.докт.мед.наук. СПб.: Ин-т эксперим. медицины РАМН, 2002. 38 с.

4. Киселева Е.П. Механизмы инволюции тимуса при опухолевом росте //Успехи современной биологии. 2004. - Т. 124. - С.589-601.

5. Киселева Е.П., Суворов А.Н., Огурцов Р.П. Роль апоптоза в процессе инволюции тимуса при росте сингенной перевиваемой опухоли у мышей //Изв.АН Сер.Биол. -1998. -№2. -С.172-179.

6. Кузнецова О.М., Кушлинский Н.Е., Березов Т.Т. Фактор роста эндотелия сосудов: особенности секреции в костной ткани в норме и при патологии //Биомедицинская химия. 2003. - Т.49. - С.360-373.

7. Кушлинский Н.Е., Герштейн Е.С. Роль фактора роста эндотелия сосудов при раке молочной железы// Бюлл.Эксп.Биол.Мед. 2002. - Т. 133. - С.604-612.

8. Ю.Щербаков A.M., Герштейн Е.С., Анурова О.А., Кушлинский Н.Е. Фактор роста эндотелия сосудов и его рецепторы первого и второго типа при раке молочной железы// Вопр.Онкол. 2005. - Т.51. - С.317-321.

9. Adams J.C. Thrombospondin-1 //Int.J.Biochem. Cell Biol. 1997. - Vol.29. -P.861-865.

10. Adams J.C., Lawler J. The thrombospondins //Int.J.Biochem. Cell Biol. 2004. -Vol.36.-P.961-968.

11. Agah A., Kyriakides T.R., Lawer J. The lack of thrombospondin-1 (TSP-1) dictates the course of wound healing in double-TSPl/TSP-2-null mice //Am.J.Pathol. -2002. Vol.161. -P.831.

12. Avice M.N., Rubio M., Sergerie M., Delespesse G., Sarfati M. CD47 ligation selectively inhibits the development of human naive T cells into Thl effectors //J.Immunol. 2000. - Vol.165. - P.4624-4631.

13. Baenziger N.L., Brodie G.N., Majerus P.W. A thrombin-sensitive protein of human platelet membranes //Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1971. - Vol.68. - P.240-249.

14. Bagavandoss P., Wilks J.W. Specific inhibition of endothelial cell proliferation by thrombospondin //Biochem.Biophys.Res.Comm. 1990. - Vol.170. -P.867-872.

15. Barleon В., Sozzani S., Zhou D., Weich H.A., Mantovani A., Marme D. Migration of human monocytes in response to vascular endothelial growth factor (VEGF) is mediated via the VEGF receptor flt-1 //Blood. 1996. - Vol.87. - P.336-3343.

16. Brown E.J., Hooper L., Ho T., Gresham H. Integrin-associated protein: a 50-kDa plasma membrane antigen physically and functionally associated with integrins //J.Cell Biol. 1990. - Vol.111. - P.2785-2794.

17. Brown E.J., Frazier A. Integrin-associated protein (CD47) and its ligands //Trends in Cell Biol. -2001. Vol.11. - P. 130-135.

18. Burn worth B., Arendt S., Muffler S., SteinKraus V., Brocker E.B., Birek C., Hartschuh W., Jauch A., Boukamp P. The multi step process of human skin cancerogenesis: a role for p53, cycline Dl, hTERT, pl6 and TSP-1 //Eur.J.Cell.Biol. 2006. - In press.

19. Canfield A.E., Boot-Handford R.P., Schor A.M. Thrombospondin gene expression by endothelial cells in culture is modulated by cell proliferation. Cell shape and the substratum //Biochem.J. 1990. - Vol.268. - P.225-230.

20. Caprizo D., Iruela-Arispe M.L. Endogenous regulators of angiogenesis emphasis on proteins with thrombospondin - type I motifs //Cancer Metastasis Rev. - 2000. -Vol.19.-P.159-165.

21. Chung J., Gao A., Frazier W.A. Thrombospondin acts via integrin-associated protein to activate the platelet integrin auflB3 //J.Biol.Chem. 1997. - Vol.272. -P. 14740-14746.

22. Clauss M., Weich H., Breier G., Knies U., Rockl W., Waltenberger J., Risau W. The vascular endothelial growth factor receptor Flt-1 mediates biological activities //J.Biol.Chem. 1996. - Vol.271. - P. 17629-17634.

23. Dikov M.M., Ohm J.E., Ray N., Tchekneva E.E., Burlison J., Moghanaki D., Nadaf S., Carbon D.P. Differential roles of vascular endothelial growth factor receptors 1 and 2 in dendritic cell differentiation //J.Immunol. 2005. - Vol.174. -P.215-222.

24. DiPietro L.A., Polverini P.J. Angiogenic macrophages produce the angiogenic inhibitor thrombospondin 1 //Am.J.Path. 1993. - Vol.143. - P.678-684. .

25. DiPietro L.A., Nebgen D.R., Polverini P.J. Downregulation of endothelial cell thrombospondin 1 enhances in vitro angiogenesis //J.Vasc.Res. 1994. - Vol.31. -P.178-185.

26. DiPietro L.A., Nissen N.N., Gamelli R.L., Koch A.E., Pyle J.M., Polverini P.J. Thrombospondin 1 synthesis and function in wound repair //Am.J.Path. 1996. -Vol.148.-P.1851-1860.

27. DiPietro L.A., Polverini P.J. The role of thrombospondin in angiogenesis //Molecular, cellular, and clinical aspects of angiogenesis. 1996. - P.105-113.

28. DiPietro L.A. Thrombospondin as a regulator of angiogenesis //Regulation, of angiogenesis. 1997. - P.295-314.

29. Doyen V., Rubio N., Braun D., Nakajima T., Abe J., Saito H., Delespesse D., Sarfati M. Thrombospondin 1 is an autocrine negative regulator of human dendric cell activation //J.Exp.Med. 2003. - Vol.8. - P.1277-1283.

30. Dvorak H.F., Harvey V.S., Estrella P., Brown L.F., McDonagh J., Dvorak A.M. Fibrin containing gels induce angiogenesis. Implications for tumor stroma generation and wound healing //Lab.Invest. 1987. - Vol.57. - P.673-686.

31. Dvorak H.F., Brown L.F., Detmar M., Dvorak A.M. Vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor, microvascular hyperpermeability and angiogenesis //Am.J.Pathol. 1995. - Vol.146. - P.1029-1039.

32. Eubank T.D., Roberts R., Galloway M., Wang Y., Cohn D.E., Marsh C.B. GM-CSF induces expression of soluble VEGF receptor-1 from human monocytes and inhibits angiogenesis in mice //Immunity. 2004. - Vol.21. - P.831-842.

33. Eum S.Y., Lee Y.W., Hennig B., Toborek M. VEGF regulates PCB 104 mediated stimulation of permeability and transmigration of breast cancer cells in human microvascular endothelial cells //Exp. Cell Res. 2004. - Vol.296. - P.231-244.

34. Febbario M., Hajjar D.P., Silverstein R.L. CD36: a class B scavenger receptor involved in angiogenesis, atherosclerosis, inflammation and lipid metabolism //J.Clin.Invest. 2001. - Vol.108. - P.785-791.

35. Ferrara N., Davis-Smyth T. The biology of vascular endothelial growth factor //Endocr.Rev. 1997. - Vol.18. - P.4-25.

36. Ferrara N. Vascular Endothelial Growth Factor: molecular and biological aspects //Curr.Top.Microbiol.Immunol. 1999. - Vol.237. - P. 1-30.

37. Ferrara N., Gerber H.P., LeCouter J. The biology of VEGF and its receptors //Nat.Med. 2003. - Vol.9. - P.669-676.

38. Folkman J. Endothelial cells and angiogenic growth factors in cancer growth and metastasis. Introduction. //Cancer Metastasis Rev. 1990. - Vol.9. - P.171-174.

39. Forslow A., Liu Z., Sundqvist K.G. Receptor communication within the lymphocyte plasma membrane: a role for the thrombospondin family of matricellular proteins //Cell.Mol.Life Sci. 2007. - Vol.64. - P.66-76.

40. Frantz S., Vincent K., Feron O., Kelly R. Innate immunity and angioginesis //Circ.Res. 2005. - Vol.7. - P. 14-26.

41. Gabrilovich D.I., Velders M.P., Sotomayor E.M., Kast W.M. Mechanism of immune dysfunction in cancer mediated by immature Gr-1+ myeloid cells //J.Immunol. 2001. - Vol.166. - P.5398-53406.

42. Gao A.G., Frazier W.A. Identification of a receptor candidate for the carboxyl-terminal' cell binding domain of thrombospondins //J.Biol.Chem. 1994. -Vol.269.-P.29650-29657.

43. Gitay-Goren H., Soker S., Vlodavsky I., Neufeld G. The binding of vascular endothelial growth factor to its receptors is dependent on cell surface-associated heparin-like molecules //J.Biol.Chem. 1992. - Vol.267. - P.6093-6098.

44. Griffioen A.W., Molema G. Angiogenesis: potentials for pharmacologic intervention in> the treatment cancer, cardiovascular diseases, and chronic inflammation //Pharm.Rev. 2000. - Vol.52. - P.237-268.

45. Hiratsuka S., Minowa O., Kuno J., Noda T., Shibuya M. Flt-1 lacking the tyrosine kinase domain is sufficient for normal development and angiogenesis in mice //Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1998. - Vol.4. - P.9349-9354.

46. Hagedorn M., Bikfalvi A. Target molecules for anti-angiogenic therapy: from basic research to clinical trials //Crit.Rev.Oncol. 1999. - Vol.34. - P.89-110.

47. Imada A., Shijubo N., Kojima N., Abe S. Mast cells correlate with angiogenesis and poor outcome in stage I lung adenocarcinoma //Eur.Respir.J. 2000. - Vol.15. - P.1087-1093.

48. Iruela-Arispe M.L., Bornstein P., Sage H. Thrombospondin exerts an antiangiogenic effect on cord formation by endothelial cells in vitro //Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1991. - Vol.88. - P.5026-5030.

49. Jaffe E.A., Ruggiero J.T., Leung L.K., Doyle MJ., McKeown-Longo P.J., Mosher D.F Cultured human fibroblasts synthesize and secrete trombospondin and incorporate it into extracellular matrix // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1983. -Vol.80. -P.998-1002.

50. Jaffe E.A., Ruggiero J.T., Falcone D.J. Monocytes and macrophages synthesize and secrete thrombospondin //Blood. 1985. - Vol.65. - P.79-84.

51. Jimenez B., Volpert O.V., Crawford S.E., Febbario M., Silverstain R.L., BouckN. Signals leading to a apoptosis-dependent inhibition of neovascularization by thrombospondin-1 //Nat.Med. 2000. - Vol.6. - P.41-48.

52. Johansson U., Londei M. Ligation of CD47 dutring monocyte differentiation into dendritic cells results in reduced capacity for interleukin-12 production //Scand.J.Imminol. 2004. - Vol.59. - P.50-57.

53. Johanson U., Higginbottomy K., Londei M. CD47 Ligation induces a rapid caspase-independent apoptosis-like cell death in human monocytes and dendritic cells //ScandJ. of Immun. 2004. - Vol.59. - P.40-49.

54. Kay N.E., Bone N.D., Tschumper R.C., Howell K.H., Geyer S.M., Dewald G.W., Hanson C.A., Jelinek D.F. Leukemia B cells secrete VEGF and TSP //Leukemia. — 2002,-Vol.16.-P.911-919.

55. Kendall R.L., Thomas K.A. Inhibition of vascular endothelial cell growth factor activity by an endogenously encoded soluble receptor //Proc.Nat.Acad.Sci.USA. -1993. Vol.90. - P.10705-10709.

56. Kim S.A., Um S.J., Kang J.H., Hong K.J. Expression of thrombospondin-1 in human hepatocarcinoma cell lines and its regulation by transcription factor Jun/AP-1 //Mol.Cell Biochem. 2001. - Vol.216. -P.21-29.

57. Kitajima K., Liu E., Morimoto M., Koike T., Yu., Watanabe T., Fan J. Transgenic rabbits with increased VEGF expression develop hemangiomas in the liver: a new model for Kasabach-Merritt syndrome //Lab.Invest. 2005. - Vol.85. - P. 15171527.

58. Kitsukawa T., Shimono T., Kawakami A., Kondoh H., Fujisawa H. Overexpression of a membrane protein, neuropilin, in chimeric mice causes anomalies in the cardiovascular system, nervous system and limbs //Development. 1995. -Vol.121. -P.4309-4318.

59. Kitsukawa T., Shimizu M., Sanbo M., Hirata T., Taniguchi M., Bekku Y., Yagi T., Fujisawa H. Neuropilin semaphorin III/D mediated chemorepulsive signals play a crucial role in peripheral nerve projection in mice //Neuron. - 1997. - Vol.19. -P.995-1005.

60. Kondo S., Asano M., Matsuo K., Ohmori I., Suzuki H. Vascular endothelial growth factor/vascular permeability factor is detectable in the sera of tumorbearing mice and cancer patients //Biochim. Biophys. Acta. 1994. - Vol.1221. - P.211-214.

61. Koning N., Bo L., Hoek R.M., Huitinga I. Downregulation of macrophage inhibitory molecules in multiple sclerosis lesions //Ann.Neurol. 2007. - In press.

62. Kosfeld M.D., Frazier W.A. Identification of a new cell adhesion motif in two homologous peptides from the COOH-terminal cell binding domain of human thrombospondin //J.Biol.Chem. 1993. - Vol.268. - P.8808-8814.

63. Laemmli U.K. Cleavage of the structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 //Nature. 1970. - Vol.227. - P.680-682.

64. Landgren E., Schiller P., Cao Y., Claesson-Welsh L. Placenta growth factor stimulates MAP kinase and mitogeniciti but not phopholipase C-gamma and migration of endothelial cells expressing Fltl //Oncogene. 1998. - Vol.19. -P.359-367.

65. Lawler J.W., Slayter H.S., Coligan J.E. Isolation and characterization of a high molecular weight glycoprotein from human blood platelets //J.Biol.Chem. 1978. - Vol.260.-P.3762-3772.

66. Lawler J., Sunday M., Thibert V., Duquette M., George E.L., Rayburn H., Hynes O. Thrombospondin-1 is required for normal murine pulmonary homeostasis and its absence causes pneumonia //J.Clin.Invest. 1998. - Vol.101. - P.982-992.

67. Lawler J. Thrombospondin-1 as an endogenous inhibitor of angiogenesis and tumor growth //J.Cell.Mol.Med. 2002. - Vol.6. - P.l-12.

68. Lee Y.K., Shanafeld T.D., Bone N.D., Strege A.K., Jelinek D.F., Kay N.E. VEGF receptors on chronic lymphocytic leukemia (CLL) B cells interact with STAT 1 and 3: implication for apoptosis resistance // Leukemia. 2005. - Vol.19. - P.513-523.

69. Leung D.W., Cachianes G., Kuang W.J., Goeddel D.V., Ferrara N. Vascular endothelial growth factor is a secreted angiogenic mitogen //Science. 1989. -Vol.246.-P.1306-1309.

70. Li Z., Calzada M.J., Sipes J.M., Cashel J.A., Krutzch H.C., Annis D.S., Mosher D.F., Roberts D.D. Interactions of thrombospondins with a4Bl integrin and CD47 differentially modulate T cell behavior //J.Cell.Biol. 2002. - Vol.157. - P.509-519.

71. Li S.S., Liu Z., Uzunel M., Sundqvist K.G. Endogenous thrombospondin-1 is a cell-surface ligand for regulation of integrin-dependent T-lymphocyte adhesion //Blood. 2006.-Vol.108.-P.3112-3120.

72. Lubick K., Jutila M.A. LTA recognition by bovine gammadelta T cells involves CD36 //J.Leukoc.Biol. 2006. - Vol.79(6). - P.1268-1270.

73. Ludlow A., Yee K.O.,.Lipman R., Bronson R., Weinreb P., Huang X., Sheppard D., Lawler J. Characterization of integrin p6 and thrombospondin-1 double-null mice //J.Cell.Mol.Med. 2005. - Vol.9. - P.421-437.

74. Lummen G., Blass-Kampmann S., Rubben H., Suhr J., Otto T. Tumor-infiltrating lymphocytes express vascular endothelial growth factor in renal cell carcinomas //Onkologie. 2000. - Vol.23. - P.458-462.

75. Magner W., Chang A.C., Owens J., Hong M.-J.P., Brooks A., Coligan J.E. Aberrant development of thymocytes in mice lacking laminin-2 //Dev.Immunol. -1999.-Vol.7.-P. 179-193.

76. Mantovani A., Allavena P., Sica A. Tumor-associated macrophages as a prototypic type II polarized phagocyte population: role in tumor progression //Eur.J.Cancer. 2004. - Vol.40. - P.1660-1667.

77. Marteau F., Suares Gonzales N., Communi D., Goldman M., Boeynaems J.M., Communi D. Thrombospondin-1 and indoleamine 2,3-dioxygenase are major targets of extracellular ATP in hu,an dendric cells //Blood. 2005. -Vol.106.-P.3860-3866.

78. Matzinger P Friendly and dangerous signals: is the tissue in control? //Nature Immunology. 2007. - Vol.8. - P.l 1-13.

79. Mohle R., Rafii S., Moore M.A. The role of endothelium in the regulation of hematopoetic stem cell migration //Stem Cells. 1998. - Vol.16. - P.159-165.

80. Moldovan L., Moldovan N.I. Role of monocytes and macrophages in angiogenesis //Mechanisms of angiogenesis. 2005.-Vol.94. - P. 127-146.

81. Mor F., Quintana F.J., Cohen I.R. Angiogenesis-inflammation cross talk: Vascular endothelial growth factor is secreted by activated T Cells and induces TH1 polarization //J.Immunol. -2004. Vol.172. - P.4618-4623.

82. Mosher D.F., Doyle M.J., Jaffe E.A. Synthesis and secretion of thrombospondin by cultured human endothelial cells //J.Cell.Biol. 1982. -Vol.93.-P.343-348.

83. Mueller G., Behrens J., Nussbaumer U., Bohlen P., Birchmeier W. Inhibitory action of TGF-ß on endothelial cells //Proc.Acad.Sci.USA. 1987. -Vol.84.-P.5600-5604.

84. Muller S.M., Terszowski G., Blum C., Haller C., Anquez V., Kuschert S., Carmellet P., Augustin H.G., Rodewald H.R. Gene targeting of VEGF-A in thymus epithelium disrupts thymus blob vessel //Proc.Acad.Sci.USA. 2005. -Vol.102. -P.10587-10592.

85. Murphy-Ullrich J.E., Schultz-Cherry S., Hook M. Transforming growth factor-ß complexes with thrombospondin //Mol.Biol.Cell. 1992. - Vol.3. -P.181-188.

86. Neufeld G., Cohen T., Gengrinvitch S., Poltorak Z. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors //FASEB J. 1999. - Vol.13. - P.9-22.

87. Nicosia R.F., Tuszynski G.P. Matrix-bound thrombospondin promotes angiogenesis in vitro //J. Cell Biol. 1994. - Vol.124. - P. 183-193.

88. Nozawa H., Chiu C., Hanahan D. Infiltrating neutrophils mediate the initial angiogenic switch in a mouse model of multistage carcinogenesis //Proc.Acad.Sci.USA. -2006. Vol.103. - P. 12493-12498.

89. Ohm J.E., Gabrilovich D.I., Sempowski G.D., Kisseleva E., Parman K.S., Nadaf S., Carbone D.P. VEGF inhibits T-cell development and may contribute to tumor-induced immune suppression //Blood. 2003. - Vol.101. - P.4878-4886.

90. Olofsson B., Jeltsch M., Eriksson U., Alitalo K. Current bioilogy of VEGF-B and VEGF-C //Curr.Opin.Biotech. 1999. - Vol.10. - P.528-535.

91. Oquendo P., Hundt E., Lawler J., Seed B. CD36 directly mediates cytoadherence of Plasmodium falciparum parasitized erythrocytes //Cell: 1989. -Vol.58. -P.95-101.

92. Ortega N., Hutchings H., Plouet J. Signal relays in the VEGF system //FrontBiosci. 1999. - Vol.4. - P.141-152.

93. Pepper M.S., Ferrara N., Orci L., Montesano R. Vascular endothelial growth facror (VEGF) induces plasminogen activatirs and plasminogen activator inhibitor-1 inmicrovascular endothelial cells //Biochem.Biophys.Res.Commun. -1991. Vol. 181. - P.902-906.

94. Petrova T.V., Makinen T., Alitalo K. Signaling via vascular endothelial growth factor receptors //Exp.Cell Res. 1999. - Vol.253. - P.l 17-130.

95. Phillips G.D., Stone A.M., Jones B.D., Schultz J.C., Whitehead R.A., Knighton R.D. Vascular endothelial growth factor (rhVEGF165) stimulates direct angiogenesis in the rabbit cornea //In Vivo. 1994. - Vol.8. - P.961-965.

96. Poltorak Z., Cohen T., Sivan R., Kandelis Y., Spira G., Vlodavsky I., Keshet E., Neufeld G. VEGF145, a secreted vascular endothelial growth factor isoform that binds to extracellular matrix //J.Biol.Chem. 1997. - V.272. -P.7151-7158.

97. Polverini P.J., Leibovich S.J. Induction of neovascularization in vivo and endothelial proliferation in vitro by tumor-associated macrophages //J.Lab.Inves. -1984.-Vol.51.-P.635-642.

98. Polverini P.J. Role of the macrophage in angiogenesis-dependent diseases //Regulation of angiogenesis.- 1997. P.l 1-28.

99. Quinn T.P., Peters K.G., De Vries C., Ferrara N., Williams L.T. Fetal liver kinase-1 is a receptor for vascular endothelial growth factor and is selectively expressed in vascular endothelium ////Proc.Acad.Sci.USA. 1993. - V.90. -P.7533-7537.

100. Rastinejad F., Polverini P.J., Bouck N.P. Regulation of thr activity of a new inhibitor of angiogenesis by cancer suppressor gene //Cell. 1989. - Vol.56. -P.345-355.

101. Robinson C.J., Stringer S.E. The splice variants of human vascular endothelial growth factor (VEGF) and their receptors //J.Cell Sci. 2001': - V. 114. -P.853-865.

102. Salvesen H.B., Akslen L.A. Significance of tumor-associated macrophages, vascular endothelial growth factor and thrombospondin-1 expression for tumor angiogenesis and prognosis in endometrial carcinomas //Int.J.Cancer. 1999. -Vol.84. -P.538-543.

103. Savino W., Dalmau S.R., Dealmeida V.C. Role of extracellular matrixmediated interactions in the thymocyte migration //Dev.Immunol. 2000. - Vol.7. -P.279-291.

104. Savino W. The thymus is a common target organ in infectious diseases //PLoS Pathog. 2006. - Vol.2. - P.62.

105. Sawano A., Iwai S., Sakurai Y., Ito M., Shitara K., Nakahata T., Shibuya M. Fit-1, vascular endothelial growth factor receptor 1, is a novel cell surface marker for the lineage of monocyte-macrophages in humans //Blood. 2001. -Vol.97.-P.785-791.

106. Sargiannidou I., Zhou J., Tuszynski G.P. The role of thrombospondin-1 in tumor progression //Exp.Biol.Med. 2001. - Vol.226. - P.726-733.

107. Schwartz B.S. Monocyte synthesis of thrombospondin //J.Biol.Chem. -1989. Vol.264. - P.7512-7517.

108. Seetharam L., Gotoh N., Maru Y., Neufeld G., Yamaguchi S., Shibuya M. A unique signal transduction from FLT tyrosine kinase, a receptor for vascular endothelial growth factor VEGF //Oncogene. 1995. - Vol.10. - P.l35-147.

109. Senger D.R., Perruzzi C.A., Feder J., Dvorak H.F. A highly conserved vascular permeability factor secreted by a variety of human and rodent tumor cell lines //Cancer Res. 1986. - Vol.11. - P.5629-5632.

110. Shalaby F., Rossant J., Yamaguchi T.P., Gertsenstein M., Wu X.F., Breitman M.L., Schuh A.C. Failure of blood-island formation and vasculogenesis in Flk-l-deficien mice //Nature. -1995. Vol.376. - P.62-66.

111. Soker S., Takashima S., Miao H.Q., Neufeld G., Klagsbrun M. Neuropilin-1 is expressed by endothelial and tumor cells as an isoform-specific receptor for vascular endothelial growth factor// Cell. 1998. - Vol.92. - P.735-745.

112. Streit M., Riccardi L., Velasco P., Brown L.F., Hawighorst T., Bornstein P., Detmar M. Thrombospondin-2: A potent endogenous inhibitor of tumor growth and angiogenesis //Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1999. - Vol.96. - P. 14888-14893

113. Tada K., Tanaka M., Hanayama R., Miwa K., Shinohara A., Iwamatsu A., Nagata S. Tethering of apoptotic cells ti phagocytes through binding of CD47 to

114. Src homology 2 domain-bearing protein tyrosine phosphate substrate-1 //J.Immunol. 2003. - Vol.171. - P.5718-5726.

115. Taraboletti. G., Roberts D., Liotta L.A., Giavazzi R. Platelet thrombospondin modulates endothelial cell adhesion, motility and growth: a potential angiogenesis regulatory factor //J. Cell Biol. 1990. - Vol. 111. — P.765-772.

116. Tessler S., Rockwell P., Hicklin D., Cohen T., Levi B.Z., Witte L., Lemischka I.R., Neufeld G. Heparin modulates the interaction of VEGF165 with soluble and cell associated Flk-1 receptors //J.Biol.Chem. 1994. - Vol.269. -P.12456-12461.

117. Tolsma S.S., Volpert O.V., Good D.J., Frazier W.A., Polverini P.J., Bouck N. Peptides derived from two separate domains of the matrix protein Thrombospondin-1 have anti-angiogenic activity//J.Cell Biol. -1993. -Vol.122. -P.497-511.

118. Waltenberger J., Claessn-Welsh L., Siegbahn A., Shibuya M., Heldin C.H. Different signal transduction properties of KDR and Fltl. two receptors for vascular endothelial growth factor //J.Biol.Chem. 1994. - Vol.269. - P.26988-26995.

119. Wang X.Q., Frazier W.A. The thrombospondin receptor CD47 (IAP) modulates and associates with a2J31 integrin in vascular smooth muscle cells //Mol.Biol.Cell. 1998. - Vol.9. - P.865-874.

120. Wang D., Lehman R.E., Donner D.B., Matli M.R., Warren R.S., Welton M.L. Expression and endocytosis of VEGF and its receptors in human colonic vascular endothelial cells //Am.J.Physiol.Gastrointest.Liver.Physiol. 2002. -Vol.282.-P.1088-1096.

121. Xiong M., Elson G., Legarda D., Leibovich S.J. Production of vascular endothelial growth factor by murine macrophages: regulation by hypoxia, lactate, and the inducible nitric oxide synthase pathway //Am.J.Pathol. 1998. - Vol.153. -P.587-598.

122. Yang R., Thomas G.R., Bunting S., Ko A., Ferrara N., Keyt B., Ross J., Jin H. Effects of vascular endothelial growth factor on hemodynamics and cardiac performance //J.Cardiovasc.Pharmacol. 1996. - Vol.27. - P.838-844.

123. Yano A., Fujii Y., Iwai A., Kageyama Y., Kihara K. Glucocorticoids suppress tumor angiogenesis and in vivo growth of prostate cancer cells //Clin.CancerRes. 2006. - Vol.12. - P.3003-3009.

124. Zamiri P., Masli S., Kitaichi N., Taylor A., Streilein J.W. Thrombospondin plays a vital role in the immune privilege of the eye //Invest.Ophtalmol.Vis.Sci. -2005. Vol.46. - P.908-919.

125. Zhang H., Issektus A.C. Growth factor regulation of neutrophil-endothelial cell interactions //J.Leukoc.Biol. 2001. - Vol.70. - P.225-232.