Электронно-микроскопическое изучение характера кристаллизации при замораживании водных растворов криопротекторов и некоторых клеток тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.22, кандидат биологических наук Репин, Николай Васильевич

• Репин, Николай Васильевич
• кандидат биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Репин, Николай Васильевич

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА I. РОЛЬ ЛЬДООБРАЗОВАНИЯ В КРИОПОВРЕШДЕНИИ МЕТОК. 10 1,1. Некоторые методические подходы при замораживании биологических объектов

ГЛАВА II. ХАРАКТЕР КРИСТАЛЛИЗАЦИИ В ВОДНЫХ РАСТВОРАХ

КРИОПРОТЕКТОРОВ

ГЛАВА III. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

ГЛАВА 1У. РАЗРАБОТКА АППАРАТУРНОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ МЕТОДА

ЗАМОРАЖИВАНИЯ-СКАЛЫВАНИЯ.

ГЛАВА У. КРИСТАЛЛИЗАЦИЯ ВОДНЫХ РАСТВОРОВ ГЛИЦЕРИНА И

ПЭ0-1500 ПРИ РАЗЛИЧНЫХ УСЛОВИЯХ ОХЛАЖДЕНИЯ

V.1. Характер кристаллизации водно-глицериновых растворов

У»2. Изучение характера кристаллизации ПЭ0-1500.

ГЛАВА У1. ВЛИЯНИЕ РЕЖИМОВ ЗАМОРАЖИВАНИЯ НА ХАРАКТЕР

КРИСТАЛЛИЗАЦИИ ВЗВЕСИ ЭРИТРОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА

VI.1. Изучение вне- и внутриклеточной кристаллизации в суспензии эритроцитов человека при различных условиях охлаждения в присутствии глицерина. 103 У1.2. Влияние ПЭ0-1500 на характер кристаллизации в суспензии эритроцитов при различных условиях охлаждения.

ГЛАВА УП. РЕКРИСТАЛЛИЗАЦИЯ ВНЕ- И ВНУТРИКЛЕТОЧНОГО ЛЬДА И ОБЕЗВОЖИВАНИЯ КЛЕТОК НА ЭТАПЕ ТЕМПЕРАТУРНОЙ

ОСТАНОВКИ ПРИ ДВУХСТУПЕНЧАТОМ ЗАМОРАЖИВАНИЙ

УП.1. Двухступенчатое замораживание эритроцитов . . 139 УП.2. Двухступенчатое замораживание ядросодержащих клеток крови

УП.З. Двухступенчатое замораживание клеток культуры ткани.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Электронно-микроскопическое изучение характера кристаллизации при замораживании водных растворов криопротекторов и некоторых клеток»

К настоящему времени в криобиологии накопилось значительное число гипотез, объясняющих механизмы криоповреждения биологических объектов [2,116,148,161] • Все авторы единодушны в том, что образующиеся при замораживании кристаллы льда могут вызвать повреждение как непосредственно, механически действуя на биологические структуры, так и опосредованно, в результате увеличения концентрации электролитов, обезвоживания клеток и других явлений, вызываемых кристаллообразованием.

Однако ни одна из этих гипотез не смогла охватить всего многообразия процессов, протекающих в живых объектах при действии отрицательных температур. Более того, наличие целого ряда противоречивых данных, полученных при изучении сходных процессов, но для разных биологических структур, указанывает на необходимость индивидуального подхода к изучению биологических объектов.

О роли льдообразования в повреждении биологических структур высказывалось много точек зрения [64,106,117,132,172]. Тем не менее конкретные механизмы взаимодействия кристаллов льда с клетками на этапах замораживания-отогрева не нашли удовлетворительного объяснения в литературе.

Основная повреждающая роль при быстром замораживании биообъектов отводится обычно кристаллам внутриклеточного льда[64,65,117,118]. Вместе с тем, имеются сообщения, указывающие на способность клеток переносить присутствие внутриклеточных кристаллов размером до нескольких микрон, сохраняя при этом свои основные биологические свойства [40,88,89,112,113]. Попытка определить минимальные размеры внутриклеточных кристаллов, не вызывающих повреждения, не дала однозначного результата для объектов, замороженных с большими скоростями [172,174].

В оценке повреждающей роли вюклеточного льда также не существует единой точки зрения. Долгое время этот вопрос практически не обсуждался в литературе, так как считалось доказанным, что внеклеточные кристаллы в присутствии криопротектора не действуют непосредственно на клетки [8 3* В то же время имеются сообщения, указывающие, что характер повреждения клеток при быстром замораживании невозможно объяснить только образованием внутриклеточных кристаллов [173].

Представляет несомненный интерес мнение о необходимости пересмотра роли вне- и внутриклеточного льда в повревдении биологических объектов [155]. Так, существует точка зрения [ 64] что решающую роль в повреждении клеток играет не размер внутриклеточных кристаллов, а общее количество льда в клетке.

Основная масса исследований, посвященных процессам кристаллообразования в различных физико-химических и биологических системах выполнена методами криомикроскопии [20,62,141,185] рентгеноструктурного анализа [34,35,36] и просвечивающей электронной микроскопии [15,144,145,186]. В то же время известные методические ограничения их не позволили дать однозначного ответа на ряд важных вопросов криобиологии [107]. По мнению ряда авторов применение высокоразрешающего, электронно-микроскопического метода замораживания-скалывания, позволящего с помощью низкотемпературного воздействия за доли секунды зафиксировать состояние того или иного биологического объекта« Возможность изучения клеток и их окружения при любых отрицательных температурах с последующей быстрой фиксацией позволяет наряду с мембранными характеристиками изучать процессы кристаллообразования как внутри клеток, так и во внеклеточном пространстве.

В связи с вышеизложенным целью настоящей работы явилось изучение влияния скорости охлаждения и концентрации криопротек-тора на характер кристаллообразования в растворах и клеточных суспензиях, а также роли вне- и внутриклеточной кристаллизации в повреждении биологических структур.

В работе помимо электронно-микроскопического метода замораживания-скалывания использован метод дифференциальной сканирующей калориметрии для определения фазовых переходов в растворах криопротекторов и выбора температуры скалывания, методспектрофотометрии для определения величины гемолиза эритроцитов' после отогрева и световой микроскопии, позволившей оценить динамику изменения формы эритроцитов после добавления криопротек-тора.

В качестве объектов исследования в работе использованы эритроциты и ядросодержащие клетки донорской крови человека, клетки перевиваемой культуры ткани (ГШБовечья почка), а также растворы глицерина и полиэтиленоксида молекулярного веса 1500-криопротекторов эндо- и экэоцеллголярного действия.

Изучение кристаллообразования в указанных криопротекторах различной концентрации позволило определить характер кристаллизации их водных растворов, а также размеры, форму и вид образующихся кристаллов для случая кристаллизации в объеме.

Использование ряда биологических объектов, отличающихся проницаемостью мембран для воды, дало возможность определить временную зависимость процессов растворения внутриклеточного льда и обезвоживания клеток на этапе экспозиции при субнулевых температурах.

Согласно данным литературы 14,23 протекание в клетках процессов таяния внутриклеточного льда и их обезвоживание на этапе температурной остановки определяется поверхностно-объемным отношением клеток, проницаемостью их мембраны для воды и размерами внутриклеточных кристаллов, в работе предложена физико-математическая модель, позволившая связать время растворения внутриклеточного льда с некоторыми характеристиками клеток - их размерами и коэффициентом фильтрации мембраны для воды.

Основные положения, выносящиеся на защиту1. При замораживании растворов криопротекторов, образуются различные типы кристаллических структур вплоть до эвтектических концентраций. Быстрое замораживание таких систем приводит к формированию мелкокристаллической структуры льда, характерной особенностью которой является незавершенность формы и наличие острых выступов у кристаллов и утончение каналов эвтектики.

2. При быстром замораживании клеточных суспензий наблюдается сильная неоднородная деформация поверхности клеток кристаллами внеклеточного льда в результате уменьшения соотношения ширина канала - размер клетки, что коррелирует со снижением целостности клеток.

3. На этапе температурной остановки происходит рекристаллизация вне- и внутриклеточного льда и обезвоживание клеток, Время растворения внутриклеточных кристаллов определяется величиной проницаемости мембраны клеток для воды. Дляисследованных нами типов клеток, значения времени обезвоживания в порядке возрастания располагались следующим образом: эритроцит <^клетки культуры ткани < лейкоциты.

Выполненные исследования являются частью научной работы Института проблем криобиологии и криомедицины АН УССР по теме: "Теоретическое и экспериментальное изучение деформации клеток как фактора криоповреждения на различных этапах низкотемпературного консервирования" (№ Государственной регистрации 01820086771), входящей в общесоюзную программу 0.74.05, задание 07.НКС).

Работа состоит из обзора литературы, описания материала и методов исследования, 4-х глав собственных исследований с обсуждением результатов, заключения, выводов, списка цитируемой литературы.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на научно-практической конференции "Эффективность использования современных технических средств в медико-биологических исследованиях" (Харьков, 1980), конференциях молодых ученых ИПКиК АН УССР (Харьков, 1983,1984), совместном заседании Европейского общества низкотемпературной биологии и АН УССР (Харьков, 1983), У1 совещании по проблемам автоматиза ции, анализа изображения микроструктур (Пущино, 1984), П Всесоюзной конференции "Механизмы криоповреждения и криозащиты биологических объектов" (Харьков, 1984), П Всесоюзной конференции по анабиозу (Рига, 1984).

Основные положения диссертации опубликованы в 8 научных работах.

0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Криобиология», Репин, Николай Васильевич

ВЫВОДЫ

1. При быстром замораживании эритроцитов (2000°С/мин и выше) в присутствии криопротекторов глицерина (0-30%) и ПЭО-1500 (10%) наблюдается сильная неоднородная деформация клеток кристаллами внеклеточного льда, что сопровождается увеличением гемолиза после отогрева.

2. При замораживании эритроцитов со скоростью меньшей 2000°С/мин образования внутриклеточных кристаллов не происходит. Скорость замораживания б000°С/мин и вше приводит к внутриклеточному кристаллообразованию в основной массе клеток независимо от концентрации криопротектора. Значение критической скорости внутриклеточной кристаллизации находится в интервале 2000-б000°С/мин.

3. На этапе температурной остановки наблюдается процесс рекристаллизации вне- и внутриклеточного льда, приводящий к растворению внутриклеточных кристаллов и обезвоживанию клеток. Время растворения внутриклеточных кристаллов составляет: для эритроцитов при температурах -20 и -30°С - около 30 мин ; для клеток культуры ткани (ПКБ) при температуре -23°С - 70 мин ; для лейкоцитов при температурах -20 и -30°С - превышает 150 мин.

4. Время растворения внутриклеточного льда зависит от величины коэффициента фильтрации -// плазматической мембраны для молекул воды и может быть оценено по формуле гДе

До - размер клетки, & - коэффициент поверхностного натяжения границы кристалл льда - расплав.

5. Максимальная сохранность клеток культуры ткани (6770%) получена после 80-90-минутной экспозиции при -23°С, что совпадает со временем растворения внутриклеточных кристаллов.

6. В растворах глицерина до 30% увеличение скорости охлаждения от 200 до 2000°С/мин приводит к уменьшению размеров кристаллов в 3,3-3,9 раза, а в интервале значений скоростей 2000-50000°С/мин - в 1,6-2,8 раза. Зависимость размеров кристаллов от концентрации глицерина наиболее сильно проявлялась в области малых (до 20%) концентраций. При 40% и выше размер кристаллов не превышает десятых долей микрона независимо от скорости замораживания.

7. В растворах ПЭ0-1500 концентрацией до 40% увеличение скорости охлаждения от 200 до 2000°С/мин приводит к уменьшению размеров кристаллов в 1,1-1,7 раза, а увеличение концентрации от 10 до 30% уменьшает размеры кристаллов в 1,1 раза, что свидетельствует о более слабой зависимости размеров кристаллов от указанных характеристик в сравнении с глицерином.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исходя из цели и задач исследования в работе было проведено изучение характера кристаллизации растворов 2-х широко используемых в практике НТК криопротекторов глицерина и ПЭ0-1500, различающихся по своей молекулярной массе, что позволило установить общность и различие в их влиянии на процесс кристаллообразования. Показано, что при медленных режимах замораживания (200°С/мин) растворов глицерина до 30-процентной концентрации являлось образование кристаллических структур дендритного типа с контурами в виде гладкой кривой. Ширина каналов эвтектики составляла, в среднем,0,6-2,0мк.

Увеличение скорости охлаждения до 2000 и 50000°С/мин наряду с уменьшением размеров кристаллических структур и утончением каналов эвтектики до 0,1-1,5 мк вызывало качественное изменение в морфологии кристаллов, заключающееся в формировании структур дендритного типа с многочисленными выступами и изрезанными контурами, что свидетельствует о незавершенности формирования кристаллов при таких режимах охлаждения.

Замораживание растворов, содержащих от 30 до 40% глицерина, приводило к образованию микросферулитов, хаотически распределенных в аморфном матриксе.

Максимальные размеры кристаллов мы наблюдали в области малых значений скорости охлаждения и концентраций криопротек-тора. Изучение льдообразования в водных растворах ПЭ0-1500 до 40-процентной концентрации при охлаждении их с теми же скоростями, в общем, подтвердило качественную направленность характера кристаллизации как и у глицерина. Однако был отмечен ряд существенных отличий. Не наблюдалось сильной зависимости размеров кристаллических образований от скорости охлаждения и концентрации криопротектора. Кристаллические структуры, в отличие от глицерина, имели более сглаженные контуры, поверхность их была лишена включений. Каналы эвтектики в отличие от растворов глицерина имеют сложное строение и представляют собой скопление плотно упакованных, мицеллоподобных глобул размером от 0,02 до 0,08 мк.

Эти и некоторые другие особенности кристаллизации растворов ПЭ0-1500 в настоящее время не представляется возможным истолковать однозначно и требуют дальнейшего изучения.

Следует также отметить, что полученные нами в работе качественные и количественные характеристики кристаллизации растворов глицерина и ПЭ0-1500 в области малых значений концентрации криопротектора и скорости охлаждения достаточно хорошо совпадают с данными литературы о линейных размерах и характере кристаллизации, полученными с помощью других методов [20,36,62, 80] и являются их дополнением в области больших скоростей охлаждения и концентраций криопротекторов.

В результате изучения характера взаимодействия вне- и внутриклеточного льда с клетками при различных условиях охлаждения было показано, что для всех режимов замораживания отсутствие криопротектора в клеточной суспензии приводило к захвату клеток кристаллами внеклеточного льда, что сопровождалось их сжатием в межкристаллическом пространстве. В присутствии криопротектора (при замораживании) клетки располагались в каналах эвтектики. При медленном замораживании наблюдалось примерное соответствие значений ширины канала и размера клетки в результате чего деформации поверхности клеток кристаллами внеклеточного льда не отмечалось.

Качественное изменение в характере взаимодействия кристаллов льда с клеткой происходило при быстром охлаждении. Образование мелкокристаллической структуры льда и утончение каналов до 0,1-1,5 мк приводило к множественному контакту кристаллов внеклеточного льда с поверхностью клеток, что неизбежно вызывало сильную неоднородную деформацию клеточной поверхности, наблюдаемую в виде вмятин и выдавливания части клеточного объема в прилегающие микроканалы. Измеренная величина гемолиза достаточно хорошо коррелирует с морфологическими изменениями в эритроцитах. В тоже время образования внутриклеточных кристаллов в эритроцитах не отмечалось еще при скоростях охлаждения 2000°С/мин.

Изучение морфологического состояния эритроцитов при их одноэтапном охлаждении в присутствии 10-процентного ПЭ0-1500 также показало, что характерной особенностью быстрого замораживания в присутствии непроникающего криопротектора также является неоднородная деформация клеточной поверхности кристаллами внеклеточного льда.

На основании проведенных исследований характера кристаллизации при замораживании суспензий эритроцитов, лейкоцитов и клеток культуры ткани, а также данных литературы, можно следующим образом представить изменение морфологического состояния вне- и внутриклеточной среды в зависимости от различных условий охлаждения (табл.4). Из таблицы видно, что характер взаимоотно

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Репин, Николай Васильевич, 1984 год

1. Белоус A.M., Боццаренко В.А. Криоповреждения биомембран. Структурно-функциональные нарушения митохондрий и лизосом.-В кн.: Актуальные проблемы криобиологии. К., 1981, с.41-88.

2. Белоус A.M., Бондаренко В,А. Механизмы развития холодового поверждения мембран клеток. Криобиология и криомедицина. К., 1981, вып.9, с.3-17.

3. Белоус A.M., Бондаренко В.А., Бондаренко Т.П. Молекулярные механизмы криоповреждений биомембран. М. : ВИНИТИ, 1978, с.80-114 (Итоги науки и техники; т.9).

4. Боровягин В.Л. Клеточные мембраны Биофизика, 1971, ХУ1. № 4, с.746-766.

5. Боровягин В.Л. Методы ультратонких срезов, негативного контраста и скалывания в исследованиях ультраструктурной организации модельных и клеточных мембран. Успехи совр.биол., 1974, 77, вып.З, с.399-421.

6. Бредихина Л.П. Функциональная сохранность эритроцитов при низкотемпературном консервировании в растворе полиэтиленокси-да: Автореф. Дис. . канд.биол.наук. Харьков,1983.- 17 с.

7. Бронштейн В.Л. Физико-математический анализ повреждения клеток при замораживании: Автореф. Дис. . канд.физ.-мат.наук.-Харьков, 1979. 23 с.

8. Бронштейн В.Л., Розанов Л.Ф. Начальное переохлаждение как фактор повреждения при замораживании клеточных суспензий. -Криобиология и криомедицина. К., 1977, вып.З, с.26-29.

9. Буторин Г.Т., Скрипов В.П. Кристаллизация переохлажденной воды. Кристаллография. 1972, 17, №2, с.379-384.

10. Верцнер В.Н., }Нданов Г.А. Электронно-микроскопическое исследование низкотемпературных модификаций льда. Кристаллография, 1965, 10, вып.5.

11. Волькенштейн М.В. Молекулярная биофизика. -М.: Наука, 1975, 616 с.

12. Воскобойникова Т.Н. Криоконсервирование лимфоидных клеток под защитой криопротекторов из группы полиэтиленоксидов: Автореф. Дис. . канд.биол.наук. Харьков, 1983. - 21 с.

13. Гордиенко Е.А. Количественный анализ механизмов криоповреж-дения и криозащиты при низкотемпературном консервировании биологических суспензий: Автореф. Дис. . канд.биол.наук.-Киев, 1980. 25 с.

14. Гордиенко Е.А., Бронштейн В.Л., Козьмин Ю.В. Особенности внутриклеточной кристаллизации в эритроцитах. В кн.: Актуальные вопросы криобиологии и криомедицины. К., 1974,с.10-12.

15. Гордиенко Е.А., Ишков Г.С., Розанов Л.§. Обезвоживание инекоторые механизмы криоповреждения клеток при низкотемпературном консервировании суспензий. Криобиология и криомеди-цина. К., 1977, вып.З, с.29-34.

16. Зинченко A.B., Манк В.В., Овчаренко Ф.Д., Репин Н.В., Скорняков Б.А. Строения и фазовые состояния водно-глицериновых растворов. Докл.АН УССР, сер.Б, 1982, № 8, с.38-42.

17. Зинченко A.B., Моисеев В.А. Исследование низкотемпературных фазовых переходов в водных растворах ПЭГ-400 калориметрическим методом. Криобиология и криомедицина, К., 1979, вып.5, с.27-30.

18. Иванов Л.В., Гаврилова И.И., Моисеев В.А. Исследование действия низких температур и криопротекторов на структуру мембран эритроцитов методом спиновых меток. В кн.: Механизмы криоповреждения и криозащиты биологических структур. К., 1977, с.33-34.

19. Иткин Ю.А. Исследование некоторых биофизических процессов, происходящих в клетках костного мозга при замораживании: Автореф. Дис. . канд.биол.наук. Харьков, 1972, - 23 с.

20. Иткин Ю.А. Исследование некоторых физико-химических процессов, протекающих при низкотемпературном консервировании биологических объектов. В кн.: Актуальные вопросы криобиологии и криомедицины. К., 1974, с.18-20.

21. Иткин Ю.А., Бронштейн B.JI., Розанов Изучение влияния структуры льда на процесс обезвоживания и внутриклеточную кристаллизацию при замораживании клеточной суспензии. -Криобиология и криомедицина. К., 1977, вып.З, с.35-41.

22. Иткин Ю.А., Гордиенко Е.А., Бронштейн B.JI. К вопросу о быстром двухступенчатом замораживании клеточных суспензий. Вкн. : Криоконсервирование иммунокомпетентной ткани. К., 1979, с.127-131.

23. Иткин Ю.А., Гордиенко Е.А., Бронштейн В.Л. Физико-математический анализ механизмов криоповреждения и криозащиты клеток. В кн.: Актуальные проблемы криобиологии. К., 1981, с.300-329.

24. Иткин Ю.А., Полякова А.И., Гордиенко Е.А. Влияние скоростей замораживания на жизнеспособность лейкоцитов периферической крови. Криобиология и криомедицина. К., 1975, вып.1,с.127-128.

25. Иткин Ю.А., Розанов Л.<5., Гордиенко Е.А., Сагалов В.Л. Процессы кристаллизации при низкотемпературной консервации биологических объектов. В кн.: Механизмы криоповреждения и криопротекции биологических структур. К., 1976, с.36-39.

26. Каменецкая Д.С. О влиянии примесей на зарождение центров кристаллизации. В кн.: Рост кристаллов. M., 1957, с.39.

27. Капрельянц A.C. Электронно-микроскопическое исследование охлажденных до -196°С эритроцитов. Тез.докл.II Всесоюзн. симпоз. "Криогенные методы в электронной микроскопии". Пущино, 1977, с.44-45.

28. Керча Ю.Ю., Липатов Ю.С. Низкотемпературные переходы в некоторых мономерных и олигомерных гликолях и эфирогликолях.-В кн.: Синтез и физико-химия полиуретанов. К., 1967, с.120-125.

29. Кириллов В.А., Конев C.B. Изменение ориентации плоскости скола клеточных мембран при использовании метода замораживания-скалывания как показатель изменения структуры мембран. Цитология, 1984, 16, № 5, с.521-525.

30. Комиссарчик Я.Ю., Филатов С.Е. Упрощенная установка для препарирования электронно-микроскопических объектов методом замораживания-травления. Цитология, 1973, ХУ» № 120, с.1539-1542.

31. Кост Е.Н. Справочник по клиническим лабораторным методам исследования.-М.: Медицина, 1968. 433 с.

32. Кудряшова С.Н. Рентгенографические исследования процессов замораживания. Современные проблемы гематологии и переливания крови, 1965, 37, с.173-178.

33. Кудряшова С.Н. Рентгенографическое исследование характера затвердевания эритроцитов, консервированных при ультранизких температурах. ПТ и ПК, 1966, № 9, с.11-15.

34. Кузьминых С.Б., Аллахвердов Б.Л., Хуцян С.С. Проблемы развития и аппаратура криометодов. Тез.докл.II Всесоюзн.симп. "Криогенные методы в электронной микроскопии". Пущино, 1977, с.101-107.

35. Кулешова Л.Г., Моисеев В.А., Иткин Ю.А. Кристаллизация водных растворов некоторых криопротекторов. Криобиология и криомедицина. К., 1976, вып.2, с.27-31.

36. Кулешова Л.Г. Кинетика льдообразования в живых клетках и модельных системах: Автореф. Дис. . канд.биол.наук -Харьков, 1983. 21 с.

37. Леонтович В,А., Абезгаид Н.Н., Перфильев В.Я. и др. Разработка оптимальных программ охлаждения для замораживания гра-нулоцитов и лимфоцитов человека. Проблемы гематол., 1973, 9, с.44-47.

38. Лобынцева Г.С., Щербак Г.Н., Полякова А.И, Низкотемпературное консервирование ядросодержащих клеток крови под защитойполиэтиленоксида различного молекулярного веса. В кн.: Актуальные вопросы криобиологии и криомедицины. К., 1974, с.69-70.

39. Лозина-Лозинский Л.К. Устойчивость насекомых к глубокому охлаждению и внутриклеточному замерзанию. В кн.: Клетка и температура среды. М.-Л., 1964, с.66-72.

40. Лозина-Лозинский Л.К. Очерки по криобиологии. Л.: Наука,1972, 287 с.

41. Максимов H.A. О вымерзании и холодоустойчивости растений. Экспериментальные и критические исследования. Изв.С-Пб. лесн.инст., 1913, 25,с.I.

42. Медведев П.М., Фисанович Т.Н. Роль криопротекторов как стабилизаторов воды в биологических средах. Успехи сов.биол.,1973, № I, с. 46-61.

43. Медведев П.М., Фисанович Т.И, 0 травматизации клеток крови глубоким охлаждением. Цитология, 1973, № 2, с.129-143.

44. Мейер К. Физико-химическая кристаллография. -М.: Металлургия, 1972.

45. Михнович Е.П., Рождественский М.А., Недельский Г.Т. Крио-консервация эритроцитов при 196°С с проникающими и непроникающими веществами. - В кн.: Актуальные вопросы криобиологии и криомедицины. К., 1974, с.161-164.

46. Недельский Г.Т., Рождественский М.А., Михнович Е.П. и др. Разработка оптимальных режимов криоконсервации эритроцитов В кн.: Актуальные вопросы криобиологии и криомедицины. К., 1974, с.164-167.

47. Платов Е.М. Осмотическое действие глицерина на спермии быка. Вестник сельскохоз.науки, i960, II, с. 59-63.

48. Пушкарь Н.С. Консервирование глубоким охлаждением костного мозга и его использование в клинических целях: Автореф. Дис. . докт.мед.наук. Харьков, 1968, - 24 с.

49. Пушкарь Н.С., Белоус A.M. Введение в криобиологию.- К.; Наукова думка, 1975. 343 с.

50. Пушкарь Н.С., Бронштейн B.JI., Розанов Jl.i. Механизм обезвоживания замороженных клеток при отогреве. ДАН СССР, 1976, 230, № I, с.217-219.

51. Пушкарь Н.М., Белоус A.M., Иткин Ю.А. и др. Низкотемпературная кристаллизация в биологических системах. К.: Наукова думка, 1977. - 243 с.

52. Пушкарь Н.С., Иткин Ю.А., Козьмин Ю.В., Розанов Л.#. Микроскопическое и рентгеноструктурное изучение процессов кристаллизации при замораживании биологических объектов. Биофизика, 1973, Ш, № 2, с.389.

53. Пушкарь Н.С., Капрельянц А.С., Панков Е.Я. Ультраструктура клетки при низких температурах. Киев: Наукова думка, 1978.- 144 с.

54. Пушкарь Н.С., Розанов Л.Ф., Гордиенко Е.А., Иткин Ю.А. Некоторые аспекты повреждения клеток при замораживании (обзор литературы). Проблемы гематол. и переливан.крови, № 4,с.44-47, 1974.

55. Пушкарь Н.С., Шраго М.И., Белоус A.M. и др. Криопротекторы.- К.: Наукова думка, 1978 204 с.

56. Радюк М,С. Реконденсация паров воды как причина артефактов при исследовании сколов мембран, получаемых методом замораживания-скалывания. Цитология, 1982, ХХ1У, № I, с.115-116.

57. Репин Н.В. Изучение внутриклеточных кристаллов в эритроцитахпри различных условиях охлаадения. Криобиология и крио-медицина, 1985, вып.16 (в печати).

58. Репин Н.В., Скорняков Б.А. Методические особенности и техническое обеспечение электронно-микроскопического метода замораживания-скалывания. Криобиология и криомедицина. К., 1982, вып.10, с.89-92.

59. Репин Н.В., Скорняков Б.А., Бронштейн В.Л. Рекристаллизация льда и обезвоживание клеток при двухступенчатом замораживании. Харьков., 1983, - 12 с (деп.ВШИТИ 13.12.83 № 6723-83 Деп.).

60. Рождественская М.А. Определение гемоглобина в плазме консервированной крови. В кн.: Актуальные вопросы переливания крови. М.: Медгиз, 1955, с.55-567

61. Розанов Л.Ф. Криомикроскопическое изучение процессов замораживания и отогрева клеточных суспензий: Автореф. Дис. . канд.биол.наук. Киев, 1977.- 23 с.

62. Рэ Л. Консервация жизни холодом. М.: Гос.изд.мед.лит.,1962.

63. Самыгин Г.А. Обезвоживание цитоплазмы как одна из причин гибели клеток при внеклеточным образовании льда. В кн.: Клетка и температура окружающей среды. М.-Л., 1964, с.35-42,

64. Самыгин Г.А. О причинах гибели клеток растений при отрицательных температурах. Успехи совр.биол., 1974, 77, вып.З, с. 382-398.

65. Самыгин Г.А. Причины вымерзания растений, М.: Наука, 1974192 с.

66. Терентьева Э.И., Киселев А.Е., Федотенков А.Г., Электронно-микроскопическое изучение клеток костного мозга в процессе замораживания. Проблемы гематологии и переливания крови, 1968, № 2, с. 12-16.

67. Топчиева И,А. Применение полиэтиленгликоля в биохимии. Успехи химии, 1980, 19, вып.З, с.494-517.

68. Туманов И.И. Физиологические основы зимостойкости культурных растений, Л.: Сельхозгиз, 1940.

69. Фарант Д. Пересмотр некоторых криобиологических концепций.-Криобиология и криомедицина, 1977, вып.З, с.12-20.

70. Фихте Б.А., Заичкин Э.И., Ратнер E.H. Новые методы физического препарирования биологических объектов для электронно-микроскопического исследования. -М.: Наука, 1973,- 150с.

71. Френкель Я.И. Кинетическая теория жидкостей, Л,: Наука, 1975. - 592 с.

72. Цуцаева A.A. Функциональная полноценность криоконсервиро-ванных клеток гемопоэтической и лимфоидной ткани: Автореф. Дис. . докт.мед.наук. М., 1980. - 51 с.

73. Черницкий Е.А., Воробей A.B. Структура и функции эритроци-тарных мембран. Минск: Наука и техника, 1981. - 216 с.

74. Шаболдин В.П., Червин В.Г., Крашенников А.И., Демишев В.Н. Свойства низкомолекулярных полимеров и их растворов. Успехи химии, 1976, 15, вып.1, с.160-175.

75. Шенфельд Н. Неионогенные моющие средства. М., Химия, 1965, - 488 с.

76. Шраго М.И. О криозащитном действии полимеров окиси этиленана эритроциты человека при глубоком охлаждении к проблеме консервирования крови: Автореф. Дис. . Докт.биол.наук. Л., 1971, 33 с.

77. Шраго М.й. Криопротекторы. В кн.: Криоконсервирование им-мунокомпетентной ткани. К., 1979, с.63-70.

78. Шраго М.И., Булатова Р.Ф. Данные рентгенографического анализа эритроцитов человека, замороженных в растворах полиэти-леноксида. Биофизика, 1967, XII, № I, с.163-165.

79. Шраго М.И., Тимченко В.Г., Бредихина Л.П. и др. Низкотемпературное консервирование эритроцитов с криопротектором поли-этиленоксидом (ПЭО). В кн.: Механизмы криоповреждения и криозащиты биологических структур. К., 1977, с.47-48.

80. Юрченко Т.Н. Гипотермическая и низкотемпературная консервация роговицы и течение восстановительного периода после трансплантации: Автореф. Дис. . докт.мед.наук. Харьков, 1982. - 37 с.

81. Asahina E. Frost injury in living cells.- Nature, 1962, 196. No. 4853, p. 455-456.

82. Asahina E. Freezing and frost resistance in insects.- In: Cryobiology, ed. H.T. Meryman, L.-N.Y., p. 451-486.

83. Asahina E,, Hisada Y., Emura M. Microscopic observation of imiocous intracellular freezing in very rapidly cooled tu-tumor cells.- Contribut. Inst. Low Temp. Sci., Hokkaido Univ, Ser. В., 1968, 15., p. 36-50.

84. Asahina E., Shimada K., Hisada J. A stable state of frozen protoplasm with invisible intracellular ice crystals obtained by rapid cooling.- Exp.Cell Res., 1970, ¿2, No.2, p.349-358.

85. Bachmann L., Schmitt W.W. Improved cryofixation applicable to freeze-etching.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1971, 68, p. 2149-2152.

86. Bank H. Visualization of freezing damage.II.Structural alterations during warming.- Cryobiology, 1973,10,p. 157-159»

87. Bank H. Freezing injury in tissue cultured cells as visualization by freeze-etching.-Exp.Cell Res. ,1974,85., No. 2, p. 267376.

88. Bohon R.L., Conway W. T. DTA studies on the glycerol-water system.- Thermochim. Acta., 1972, 4, p.

89. Branton D. Fracture faces of frozen membranes.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1966, 5£, p. 1048-1056.

90. Branton D. Membrane structure.- Ann. Rev. Plant Ehysiol., 1969, 20, p. 209-238.

91. Bradley D.E. High resolution shadow-costing technique for the electron microscope using the simultaneous evaporation of platinum and carbon.- British J. Applied.Physics, 1959, 10, p. 198-203.

92. Breedis C. The action of extreme cold on leukemic cells of mice.- J. Exp. Med., 1942, £6, p. 221-240.

93. Bullivant S. Evaluation of membrane structure facts and artifacts produced during freeze-fracturing.- J. Microsc., 1977, 111. p. 101-116.

94. Chambers R. The formation of ice in protoplasm.- Proc. Roy. Soc. (London), 1932, 11 OB, p. 336-352.

95. Deamer D.W., Leonard R., Tardieu A., Branton D. Lamellar and hexagonal lipid phases visualized by freeze-etching.-Biochim. Biophys. Acta, 1970, 219. p. 47-60.

96. Diller K.R. Intracellular freezing: effect of extracellular supercooling.- Cryobiology, 1975, 12., Ho. 5, p. 480-485.

97. Diller K.R. Intracellular freezing of glycerolized red ceils.- Cryobiology, 1979, 16, p. 125-131.

98. Diller K.R., Cravalho E.C., Huggins C.F. Intracellular freezing in biomaterials.- Cryobiology, 1972, p. 429-440.

99. Dubochet I., Adrian M., Vogel R. Amorphous solid water obtained by vapour condensation or by liquid cooling: a comparison in the electron microscope.- Cryo-Letters, 1983, N0.4, p. 233-240.

100. Elgaaeter A. A new freeze-etch unit for freeze-etch rotary shadowing, low temperature freeze-fracturing and conventional freeze-etching.-J.Micros.,1978,112,part 1,p.83-94.

101. Elgsaeter A., Branton D. Intermembrane particle aggregation in erythrocyte ghost.I. Effect of protein removal.-J.Cell Biol., 1974, 62, p. 1018-1025.

102. Elgsaeter A., Espevik Т., Kopstad G. Rapid freezing of fre-ze-etch specimes.-Ultrastruct. Res., 1980, 22» No.1, P»93-94.

103. Farrant J., Knight S.C., McGann L.E., O'Brien J. Optimal recovery of lymphocytes and tissue culture cells followingnra-pid cooling.- Nature, 249, p. 452-453.

104. Parrant J., Walter C.A, Heather L., McGann L.E. Use of two-step cooling procedures to examine factors influencing cell survival folloving freezing and thawing.- Cryobiology, 1977, И» Р» 273-286.

105. Pranks F,, Asquith M*H., Echlin P., Skaer H. le B. Polimeric cryoprotections on the preservation of biological ultrastructure.- J.Microsc.,1977,110.pt.3,No.8, p.257-270.

106. Pranks P., its qui th M.H., Hammond C.C., et al. Polimeric cryoprotections on the preservation of biological ultrastructures.- J.Microsc., 110, pt 3, No. 8, p. 223-238.

107. Fujikawa S. Freeze-fracture and etching on membranedamage on humane erythrocytes caused by formation of intracellular ice.- Cryobiology, 1980, 12, p. 351-362.

108. Fujikawa S. The effect of various cooling rates on the membrane ultrastructure of frozen human erythrocytes and its relation to the extent of haemolysis after thawing.- J. Cell Sci., 1981, 42., p. 369-382.

109. Gilula N.B., Eger R.R., Rifkin D.B. Plasma membrane alterations associated with malignant transformation in culture.-Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1975, 12, p. 3594.

110. Grant C.W.M., McConnell H.M. Glycophorin in lipid bilayers.-Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1974, H, p. 4653-4660.

111. Gupta K.C. The mechanism of cryohemolis: by direct observation with the cryomicroscope and the electrone microscope.-Cryobiology, 1975, 12., p. 417-426.

112. Hass G.J., Prescott H.E. Freezing under gas pressure: effect on cells and mechanism.- Cryobiology, 1971, 8, p. 38-41.

113. Hagler H.K., Shulz W.W., Reynolds R.C. A simple electron beam gun for platinum evaporation.- J. Microsc., 1977, 111« 149-155.

114. Heber U.W., Santarius K.A. Loss of adenosine triphosphate synthesis caused by freezing and its relationship to frost hardiness problem.- Plant Physiol., 1964, ¿2, No. 5, p. 712712.

115. Hempling H.G. Permeability of the human leukocyte and leukemic cells to water.- South. Med. J., 1974, 61, p. 951-958.

116. Hereward F.V., Northcote D.H. Fracture planes of the plasmalemma of some higher plants revealed by freeze-etch.- J. Cell Sci., 1973, 11, p. 621-635.

117. Huggins G.E. Prozen blood r principles of practical preservation.- Monogr. Surg. Praot., 1967, 3, p. 133-147.

118. Israelachvili J.N., Marccelja S., Horn R.G. Physical principles of membrane organization.- Quarterly Reviews of Biophysics, 1980, 12, No.2, p. 121-200.

119. Jelenosky G. Relationship between the rate of ice gross in solutions, the molecular weight of the solutes and the osmotic pressure of the solutions.- Biodynamica, 1971, H, No. 231,p. 95-100.

120. Levitt J. The role of S.H. and SS in the resistance of cells to high and low temperatures.- In: The cell and Environmental Temperature, ed. A.S. Troshin, N.Y., 1974, p. 269-274.

121. Lovelock J.E. The mechanism of the protective action of glycerol against haemolysis of freezing and thawing.- Biochim. Biophys. Acta, 1953, H, p. 28-36.

122. Luyet B.J. Anatomy of freezing process in physical systems.-In: Cryobiology, ed. H.T. Meryman, L.-N.Y., 1966, p. 115137.

123. Luyet B.J. Physical changes occurring in frozen solutions during rewarming and melting.- In: The frozen cell, London, 1970, p. 27-43.

124. Luyet В., Ment L.I. Effect of freezing on peripheral leucocytes.- Biodynamica, 1969, 10, p. 241-251.

125. Luyet B.J., Rapatz G.L. Modes of distribution of the ice and of the nonfrozen phase in frozen aqueous solutions.- Biodynamica, 1969, 10, No. 219, p. 293-317.

126. Luzena G.V., Cook W.H. Ice preparations in systems of biological interest. II. Effect of solutes at rapid cooling rate.- Arch. Biochim. et Biophys., 1954, $0, p. 243-251.

127. MacKenzie A.P., Luyet B.J. Electron microscope study of re-crystallization in rapidly frozen gelatin gels.- Biodynamica, 1967, 10, No. 206, p. 95-122.-4 90

128. McDaniel R.V., Mcintosh T.I.,Simon S.A. Nonelectrolyte substitution for water in phosphatidylcholine bilayers.-Bioch.et Biophys.Acta,1983,721,p.97-108.

129. Mazur P. Physical and temporal factors involved in the death of yeast at subzero temperatures.-Biophy8. J. ,1961 ,1,p.247264«

130. Mazur P. Physical and chemical basis of injury in single-celled microorganisms subjected to freezing and thawing.- In;Cryo-biology, ed. H.T. Meryman, 1966, p. 213-215.

131. Mazur P.Cryobiology: the freezing of biological systems.-Sci-ens,1970, 168, p. 939-949.

132. Mazur P. The role of intracellular freezing in the death of cell cooled at superoptimal rates.-Cryobiology,1977,14,p.251-272.

133. Mazur P., Farrant J., Leibo S.P. Survival of hamster tissue culture cells after freezing and thawing. Interactions between protective solutes and cooling and wanning rates.-Cryobiology, 1969, 6, p. 1-9.

134. Mazur P., Miller R.H. Permeability of the human erythrocyte to glycerol in 1 and 2M solutions at 0 or 20°C.-Cryobiology,1976, No. 4, p. 507-522.

135. Mazur P., Schmidt J. Interactions of cooling velocity, temperature and wanning velocity on the survival of frozen and thawed yeast.- Cryobiology, 1968, No. 1, p. 1-17.

136. Meryman H.T. General principles of freezing and freezing injury in cell Materials.- Ann. N.Y. Act»d. Sei., 1960, No. 4, p. 503-509.

137. Meryman H.T. The exeeding of minimum tolerable cell volume in hypertonic suspensions as a cause of freezing injury.-In: The frzen cell, London, 1970, p. 51-63.

138. Meryman H.T., Platt W.T. The distribution and growth of ice crystals in frozen mammalian tissue.- Res. Rep. nav. med. Res. Inst. Maryland, 1955, Ц, p. 1-30.

139. Morris G.J., Farrant J. Interaction of cooling rate and protective additives on the survival of washed human erythrocytes frozen to -196°C.- Cryobiology, 1972, 2.» 173-181.

140. Muller M., Meister N., Moor H. Freezing in a propane jetand its application in freeze-fracturing.- Mikroskopik, 1980, ¿6, No. 5-6, p. 129-140.

141. Nanninga N. Uniqueness and location of the fracture plane in the plasma membrane of Bacillus subtilis.- J. Cell Biol., 1971, 42, p. 564-570.

142. Nath J., Luyet B.J. An electron microscope study of the distribution of ice in frozen blood plasma.- Biodynamica, 1963,1. No. 180, p. 137-146.

143. Nei T. Mechanism of haemolysis of erythrocytes by freezing, with special reference to freezing at near-zero temperatures.-In: Frozen Cell, London, 1970, p. 133-147.

144. Nei T. Growth of ice crystals in frozen specimens.- J. Micros., 1973, 22» p. 227-233.

145. Nezmut M.V., Ward B.J. Effect of fixatives on fracture plane in red blood cells.- J. Microsc., 1974, 102, pt. 1,p. 29-30.

146. Peterson N.O., Chan S.J. The effect of the thermal prephase transition and salt on the coagulation and floeculation ox phosphatidylcholine bmlayer vesicles.- Biochim. et Biophys. Acta, 1978, No. 509, p. 111-128.

147. Pinto da Silva P. Translational mobility of the membrane intercalated particles of human erythrocyte ghosts, pH-de-pendent reversible aggregation.- J. Cell Biol., 1972,p. 777-787.

148. Pinto da Silva P. Interpretation of freeze-fracture and freeze-etch images: morphology and realism.- In: Freeze-fracture: Methods, Artifacts and interpretations, ed. Rash J.E. and Hudson C.E., New York, 1979, p. 31-36.

149. Pinto da Silva P., Branton D. Membrane splitting in freeze-etching.- J. Cell Biol., 1970, p. 598-605.

150. Pinto da Silva P., Douglas S.D., Branton D. Localization of A antigen sites on human erythrocyte ghost.- Nature, 1971, 232, p. 194-196.

151. Pinto da Silva P., Nicolson G.L. Freeze-etch localization of concanavalin A receptors to the membrane intercalated particles of human erythrocyte ghost membranes.- Biochim. Biophis. Acta, 1974, 363, p. 311-319.

152. Platner H., Fisher W.M., Schmitt W.W., Bachmann L. Freeze etching of cells without cryoprotectants.- J. Cell Biol.,1972, £3, p. 116-126.

153. Polge C. Low temperature storage of mammalian spermatozoa.

154. Proc. Roy. Soc. В., 1957, 1Ц, p. 498-508.

155. Pushkar N.S., Itkin Y.A., Bronstein V.L., et al. Oil the problem of dehydration and intracellular crystallization during freezing of cell suspensions.- Cryobiology, 1976, 12., No. 2, p. 147-152.

156. Rapatz G., Luyet B. Microscopic observations on the development of the ice phase in the freezing of blood.- Bi-odynamica, 1960, 8, Ho. 166, p. 195-239.

157. Rapatz G., Luyet B. Electron microscopic study of erythrocytes in rapidly frozen frog's blood.- Biodynamica, 1961, 8, p. 295-315.

158. Rapatz G., Luyet B. Effect of cooling rates on the preservation of erythrocytes in frozen blood containing various protective agents.- Biodynamica, 1965, 2.» P* 333350.

159. Rapatz G., Luyet B. On the instability of frozen glycerol solutions stored at various low temperatures.- Biodynamica, 1967, 10, No. 205, p. 81-93.

160. Rapatz G., Luyet B. Electron microscope study of slowly frozen suspensions of human leukocytes.- Biodynamica, 1971, 11, p. 69-81.

161. Rapatz G., Luyet B. The cryopreservation of blood by the method of two-step freezing.- Biodynamica, 11, 1973,p. 169-179.

162. Rapatz G., Luyet B. The problem of the effect of intracellular ice on hemolysis.- In: Proceedings of XIth International Congress of Refrigeration. Munich, 1963, p. 15671572.

163. Rapatz G., Sallivan J.J., Luyet B. Preservation of erythrocytes in blood containing various cryoprotective agents, frozen at various rates and brought to a given final temperature.-Cryobiology, 1968, Ho. 1, p. 18-25.

164. Rasmussen D.H., McCanlay M.N., MacKenzie A.P. Supercooling and nucleation of ice in single cells.-Cryobiology,1975,12.,No.4, p.328-339.

165. Rey L.P. Thermal analysis of eutectics in freezing solutions.-Ann. New-York Acad. Sci., 1960, 8^, p. 510-534«195» Riggs D.R. The mathematical approach to physiological problems-M.I.T. Press, Cambridge, Mass., 1963.

166. Robards A.W. Ultrastructural methods to looking at frozen ceilis.- Sci. Prog., Oxf., 1974, 61, p. 1-40.

167. Rochlich P. A simple freeze-fracturing and etching apparatus using the cold bloock principle.- Acta Biol. Acad. Sci. Hung., 1980, ¿1, No. 1-3, p. 257-272.

168. Scheiwe M.W., Korber C. Formation and melting of intracellular ice in lymphocytes.-Cryo-Letters,1982,2,p. 265-274.

169. Scheiwe M.W., Korber C. Formation and melting of intracellular ice in granulocytes.-Cryo-Letters,1982,2,p. 275-284.

170. Scheiwe M.W., Korber C. Basis investigations on the freezing of human lumphocytes.-Cryobiology,1983,20,No.3,p.257-273.

171. Sherman J.R. Survival of higher animal cells after the formation and dissolution of intracellular ice.-Anat.Rev.,1962,144,p. 171-190.

172. Shimada K., Asahina E. Visualization of intracellular ice crystals formed in very rapidly frozen cells at -27°C.-Cryobiology, 1975, 12, p. 209-218.

173. Simatos D., Faure M., Bonjour E., Couach M. The physical state of water at low temperatures in plasma with different watercontents as studied by differential thermal analysis and D.S.C.- Cryobiology, 1975, 12, No. 3, p. 202-208.

174. Sleytr U.B., Umrath W. A simple device for obtaining complementary fracture planes at liquid helium temperature in the freeze-etching technique.- J. Micros., 1974, 101, No.2, p. 187-195.

175. Smith A.U., Polge C., Smiles J. Microscopic observation of living cells during freezing and thawing.- J. Roy. Micros., 1951, И, p. 186-195.

176. Souzu H. Studies on the damage to Escherichia coli cell membrane caused by different rates of freeze-thawing.- Bio-phis. and Biochim. Acta, 1980, 603, p. 13-26.

177. Staehelin A., Bertaud W.S. Temperature and contamination dependent freeze-etch images of frozen water and glycerol solutions.- J. Ultrastr. Research, 1971, XL* P* 146-168.

178. Steponkus P.L., Dowgert P.M. Gas bubble formation during intracellular ice formation.- Cryo-Letters, 1981, 2, No.2, p. 42-47.

179. Stowell R.E., Young D.E., Arnolds E.A., Trump B.F. Structural, chemical, physical and functional alterations in the mammalian nucleus following different conditions of freezing storage and thawing.- Fed. Proc., 1965, No. 2,p. 115-141.

180. Tanner J.E. Observation of rapid freezing of salt solutions.-Cryobiology, 1975, 12, p. 353-363.

181. Tappel A.L. Effects of low temperatures and freezing on enzymes and enzyme systems.- In: Cryobiology, ed. by H.T. Meryman, London New-York, 1966, p. 163-177.

182. Tillak T.W., Marchesi V.T. Demonstration of the outer surface of freeze-etched red blood cell membranes.- J. Cell Biol., 1970, p. 649-653.

183. Van Venrooij G.E.P.H., Aertsen A.M.H.J., Hax W.M.A., et al. Preeze-etching: freezing velocity and crystal size at different locations in samples.- Cryobiology, 1975, 12, p. 4661.

184. Walter C.A., Knight S.C., Parrant J. Ultrastractural appearance of freeze-substituted limphocytes frozen by interrupting rapid cooling with a period at-26°C.- Cryobiology, 1975, 12, p. 103-109.

185. Walter C.A., O'Brien J.A., Parrant J., Knight S. The problem of granulocyte preservation: formation of intracellular ice at -10°C or above.- Cryobiology, 1977, Ü, p. 697.