Молекулярно-генетические подходы к получению ферментных препаратов карбогидраз с улучшенными гидролитическими свойствами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат химических наук Волков, Павел Валерьевич

  • Волков, Павел Валерьевич
  • кандидат химических науккандидат химических наук
  • 2012, Москва
  • Специальность ВАК РФ03.01.04
  • Количество страниц 130
Волков, Павел Валерьевич. Молекулярно-генетические подходы к получению ферментных препаратов карбогидраз с улучшенными гидролитическими свойствами: дис. кандидат химических наук: 03.01.04 - Биохимия. Москва. 2012. 130 с.

Оглавление диссертации кандидат химических наук Волков, Павел Валерьевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Состав и строение растительной клеточной стенки

1.1. Основные компоненты растительной клеточной стенки

1.2. Целлюлоза

1.3. Нецеллюлозные /? - глюканы

1.4. Гемицеллюлозы и пектины

1.5. Пектины

Глава 2. Инулин - строение и свойства

Глава 3. Свойства и структура целлюлаз и инулиназ

3.1. Общие представления о целлюлолитических ферментах и их классификации 20 3.2.Особенности строения и биохимические параметры целлюлолитических ферментов

3.3. Свойства инулиназ из различных микроорганизмов

Глава 4. Механизм ферментативной деградации целлюлозы и инулина

4.1. Механизм действия целлюлазного комплекса

4.2. Синергизм действия целлюлолитических ферментов на субстрат 29 4.3 Механизм гидролиза инулосодержащего сырья

Глава 5. Применение целлюлаз и инулиназ в биотехнологии

Глава 6. Возможности использования штамма Р. сапеасет для получения ферментных препаратов

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 7. Материалы и методы экспериментов

7.1. Ферментные препараты

7.2. Субстраты

7.3. Прочие реактивы

Глава 8. Получение ферментных препаратов целлюлаз на основе рекомбинантных штаммов P.canescens

7.4. Хроматографические сорбенты

7.5. Проведение полимеразной цепной реакции и получение генетических конструкций

7.6. Получение протопластов и проведение трансформации штамма-реципиента

P.canescens

7.7. Культивирование трансформантов P.canescens в 3-л ферментёрах

7.8. Определение концентрации белка

7.9. Определение биохимических характеристик ферментов

7.10. Методы определения активности ферментов

7.11. Масс-спектрометрический анализ трипсиновых гидролизатов белков

7.12. Определение температурного и pH-оптимума действия ферментов

7.13. Изучение термостабильности ферментов

7.14. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) продуктов гидролиза целлюлозо- и инулосодержащего сырья

7.15. Хроматографическое фракционирование ферментных препаратов Р. canescens

7.16. Гидролиз целлюлозосодержащих субстратов

7.17. Гидролиз инулосодержащих субстратов

7.18. Определение кинетических параметров действия ферментов (Km, Kcat)

7.19. Изучение влияния эффекторов на активность ферментов

7.20. Анализ молекулярно-массового распределения (ММР) продуктов гидролиза инулина

7.21. Окрашивание агаризованной среды с КМЦ конго-красным 46 РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

8.1. Выделение генов и создание экспрессионных конструкций

8.2. Первичный скрининг полученных трансформантов

Глава 9. Свойства новых ферментных препаратов, полученных на основе рекомбинантных штаммов Р.сапе5сет

9.1. Анализ ферментных препаратов с помощью методов электрофореза и изоэлектрофокусирования

9.2. Субстратная специфичность исследуемых ферментных препаратов

9.3. рН- и температурные оптимумы активности ферментных препаратов, стабильность использованных ферментных препаратов.

Глава 10. Ферментативный гидролиз микрокристаллической целлюлозы и измельчённой осиновой древесины ферментными препаратами Р.сапеясет

10.1 Результаты гидролиза МКЦ ФП ЦБГ1, ЦБГП и ЭГИ 1

10.2 Результаты гидролиза микрокристаллической целлюлозы смесью ФП ЦБГ1 и ЭГП-6.

10.3 Результаты гидролиза микрокристаллической целлюлозы смесью ФП ЦБГП и ЭГН-6.

10.4 Результаты гидролиза осиновой древесины ФП ЦБГ1, ЦБГП и ЭГП 1

10.5 Результаты гидролиза измельчённой осиновой древесины смесью препаратов ЦБГ1 и ЭГП

10.6 Результаты гидролиза измельчённой осиновой древесины смесью препаратов ЦБГ1 и ЭГП

10.7 Сравнение гидролитической способности рекомбинантных ФП с коммерческими

10.8 Состав рекомбинантных ферментных препаратов целлюлаз

Глава 11. Получение ферментных препаратов инулиназ на основе рекомбинантных штаммов Р.сапезсет

11.1. Выделение генов и создание экспрессионных конструкций

11.2. Трансформации пггамма-реципиентаР. сапеэсет ШЗ-11

11.3. Анализ ФП с помощью методов электрофореза и изоэлектрофокусирования

11.4. Активность ферментных препаратов инулиназ по отношению к различным субстратам

11.5. Ферментативный гидролиз чистого инулина и клубней топинамбура ФП, полученными на основе Р.сапевсет

Глава 12. Выделение и свойства рекомбинантных инулиназ

12.1. Хроматографический анализ ферментных препаратов инулиназных штаммов Pénicillium canescens

12.2. Фракционирование препарата экзоинулиназы (ЭКЗИН).

12.3. Фракционирование препарата эндоинулиназы (ЭНДИН).

12.4. Субстратная специфичность инулиназ

12.5. Механизм действия инулиназ по отношению к инулинам из разных ^ источников

12.6. Кинетические параметры инулиназ

12.7. рН и температурные зависимости активности инулиназ

12.8. Стабильность инулиназ

12.9. Влияние катионов металлов и анионов кислот на активность инулиназ 102 ВЫВОДЫ 104 СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 106 ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Ферменты

ЦБГ целлобиогидролаза

ЭГ эндоглюканаза

БГЛ (5-1,4-глюкозидаза

АБФ арабинофуранозидаза

Ксил ксиланаза

Р-Гал Р-галактозидаза

Прочие сокращения

ММ^О 1 -метил-3 -нитро-1 -нитрозогуанин

МАЫ)1-ТОР МБ Матрично-активированная лазерная десорбция/ионизация времяпролетная масс-спектрометрия а.к. аминокислота

ВС восстанавливающие сахара

ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография

ДДС-ЭФ электрофорез в денатурирующих условиях

ЮК культуральная жидкость

ИЭФ изоэлектрофокусирование

КМЦ Иа-соль карбоксиметилцеллюлозы

МКЦ микрокристаллическая целлюлоза

ПААГ полиакриламидный гель иНФГлю и-нитрофенил-Р-О-глюкопиранозид иНФГал я-нитрофенил-Р-О-галактопиранозид иНФАра и-нитрофенил-а-Ь-арабинофуранозид

СП степень полимеризации

УФ, ЦУ ультрафиолетовое излучение

ФП ферментный препарат

ЦСМ целлюлозосодержащие материалы

Фр фруктоза

Гл глюкоза

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Биохимия», 03.01.04 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетические подходы к получению ферментных препаратов карбогидраз с улучшенными гидролитическими свойствами»

В последнее десятилетие особое внимание уделяется созданию рекомбинантных штаммов продуцентов целевых ферментов. Особое положение среди таких микроорганизмов занимают мицелиальные плесневые грибы рода Pénicillium, Trichoderma и Aspergillus, используемые в настоящее время в качестве объектов современных генно-инженерных подходов с целью создания штаммов супер-продуцентов ферментов, имеющих биотехнологическое значение. Актуальным направлением в биотехнологии в настоящее время является рациональный дизайн ферментных препаратов путём комбинации подходов генной инженерии и микробиологии.

В последние несколько лет в ИНБИ ведутся работы со штаммом Pénicillium canescens -продуцентом ß-галактозидазы и ксиланазы. Штамм обладает рядом преимуществ в сравнении с другими грибными микромицетами - обладает более высокой скоростью роста культуры и биосинтеза внеклеточных ферментов, растет на простой и недорогой по составу ферментационной среде со свекловичным жомом, процесс ферментации легко масштабируется, получен штамм-реципиент с ауксотрофным признаком селекции, отработана система трансформации штамма экзогенной ДНК и получены 3 системы экспрессии на основе гомологичных регуляторных элементов генов abfA, xylA и bgaS. Более того, Р. canescens показал себя весьма эффективным штаммом - продуцентом при получении ферментных препаратов арабинофуранозидазы, а-галактозидазы, ферулоил-эстеразы и ряда других ферментов, что подтверждено соответствующими патентами. Все это позволяет использовать штамм Pénicillium canescens как лабораторную модель для получения ферментных препаратов с заданными свойствами для высокоэффективного гидролиза пищевого и непищевого растительного сырья.

Таким образом, увеличение эффективности гидролиза целлюлозо- и инулосодержащего сырья с использованием новых ферментных препаратов, обладающих высокими значениями целлюлазных и инулиназных активностей, полученных на основе рекомбинантного штамма P. canescens является весьма актуальной целью.

Научная новизна работы. Новизна работы состоит в получении новых эффективных ферментных препаратов с улучшенными гидролитическими свойствами на основе лабораторного грибного штамма P.canescens с использованием современных ДНК технологий.

Практическая значимость. Показано, что ферментные комплексы целлюлаз и инулиназ обладают увеличенной гидролитической способностью. Применение полученных в 7 результате выполнения работы индивидуальных ферментных препаратов, а также их смесей, при гидролизе различных видов целлолососодержащего (измельчённая микрокристаллическая целлюлоза и осиновая древесина) и инулосодержащего (инулин топинамбура и измельчённые клубни топинамбура) сырья позволяет достичь высокой степени его конверсии, что может быть использовано в ряде технологических процессов пищевой и биотехнологической промышленности.

В соответствии с этой целью были сформулированы следующие задачи:

• Получить плазмидные конструкции, несущие гены целлюлаз (целлобиогидролазы I и II (cbhl и cbh2)), эндоглюканазы II (egl2) P. verruculosum, а также /9-глюкозидазы (bgll) A.niger) на основе экспрессионного вектора, содержащего промотор гена ксиланазы A (xylA) P. canescens;

• Получить плазмидные конструкции, несущие гены инулиназ (экзоинулиназы (inul)) Aspergillus awamori, эндоинулиназы (inuA) A.niger, а также ß-фруктофуранозидазы (fopA) A.oryzae на основе векторов, содержащих промоторы гена xylA (кодирующего ксиланазу А Penicillium canescens), гена bgal (кодирующего ß-галактозидазу Р.canescens) и гена ab/B (кодирующего арабинофранозидазу А Р. canescens);

• Провести трансформацию полученными плазмидами штамма-реципиента Р. canescens (niaD'J и осуществить скрининг трансформантов. Получить новые ферментные препараты целлюлаз и инулиназ и исследовать их свойства;

• Выделить в гомогенном виде и изучить свойства экзоинулиназы и эндоинулиназы, сравнить со свойствами соответствующих ферментов из природных штаммов;

• Исследовать гидролитические свойства ферментных препаратов по отношению к целлюлозосодержащему и инулосодержащему сырью, а также определить оптимальное соотношение в них ключевых ферментов;

• Определить компонентный состав ферментных комплексов, обладающих наиболее высокой эффективностью гидролиза растительного сырья.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Похожие диссертационные работы по специальности «Биохимия», 03.01.04 шифр ВАК

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Волков, Павел Валерьевич

ВЫВОДЫ:

1. Получены плазмиды с гетерологичными генами inul и inuA, кодирующими экзоинулиназу A.awamori и эндоинулиназу A.niger, геном fopA, кодирующим /?-фруктофуранозидазу A.oryzae, cbhl, cbhll и eglll, кодирующими целлобиогидролазу I, целлобиогидролазу II и эндоглюканазу II P.verruculosum, а также bgll, кодирующим /?-глюкозидазу A.niger, обеспечивающие высокий уровень экспрессии целевых белков в культуральной жидкости рекомбинантных штаммов-продуцентов гриба Pénicillium canescens.

2. Используя молекулярно-генетические подходы были созданы штаммы гриба P.canescens, обладающие способностью к продукции гетерологичных экзоинулиназы A.awamori, эндоинулиназы A.niger, /?-фруктофуранозидазы A.oryzae, а также целлобиогидролазы I, целлобиогидролазы II, эндоглюканазы II P.verruculosum и /?-глюкозидазы A.niger. На основе наиболее активных отобранных штаммов-продуцентов целевых ферментов получены рекомбинантные ферментные препараты и изучены их биохимические свойства.

3. Получение наиболее эффективного гидролитического комплекса было достигнуто путём смешения ферментных препаратов. Показано, что оптимальным соотношением ферментных препаратов экзо- и эндоинулиназ для эффективного гидролиза инулина и клубней топинамбура является 0,5 мг ЭКЗИН + 0,5 мг ФП ЭНДИН на 1 г сухого вещества субстрата.

4. Изучен компонентный состав и содержание целевых ферментов в ферментных препаратах инулиназ, полученных с помощью новых рекомбинантных штаммов-продуцентов и установлено, что содержание экзоинулиназы составляет 51%, а содержание эндоинулиназы - 15% от общего пула секреторного белка.

5. Выделены рекомбинантные гомогенные экзоинулиназа A.awamori и эндоинулиназа A.niger и показано, что по своим свойствам - субстратной специфичности, кинетическим параметрам, pi, зависимости активности от рН- и термостабильности -рекомбинантные ферменты не отличаются от аналогичных ферментов природных штаммов.

6. Исследованы гидролитические свойства целлюлазных ферментных препаратов и показано, что состав смеси ФП ЦБП (или ЦБГН) и ЭГП в соотношении 8 мг (ЦБГ1 или ЦБГП) + 2 мг (ЭГН) на 1 г сухого субстрата является наиболее оптимальным для достижения максимальной глубины гидролиза целлюлозосодержащих субстратов микрокристаллической целлюлозы (30% конверсии до восстанавливающих Сахаров) и измельченной осиновой древесины (62% конверсии до восстанавливающих Сахаров). 7. Изучен компонентный состав и содержание целевых ферментов в ферментных препаратах целлюлаз, полученных с помощью новых рекомбинантных штаммов-продуцентов и установлено, что содержание целлобиогидролазы I составляет 27%, целлобиогидролазы II - 20%, эндоглюканазы II - 42%, а /?-глюкозидазы - 20% от общего пула секреторного белка.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Волков, Павел Валерьевич, 2012 год

1. Fry S.С. The growing plant cell wall: chemical and metabolic analysis. L.: Logman, 1988.333 р.

2. Горшкова T.A. Растительная клеточная стенка как динамическая система, Москва: Наука, 2007. -429 с.

3. Collmer A., Keen N.T. The role of pectic enzymes in plant pathogenesis. Ann. Rev. Phytopathol., 1986, v. 24, p. 383-409.

4. Zhao H., Kwak J.H., Zhang Z.C., Brown H.M., Arey B.W., Holladay J.E. Studying cellulose fiber structure by SEM, XRD, NMR and acid hydrolysis. Carbohydrate Polymers, 2007, v. 68, p. 235-241.

5. Hopkins W.G. Introduction to Plant Physiology, 2nd edition. John Wiley & Sons, Inc., New York, 1999, 512 p.

6. Clarke A.J. Biodégradation of cellulose. Enzymology and biotechnology. Lancaster: Technomic Publishing Company Inc., 1997, 272 p.

7. Cullen, D., and P.J. Kersten. Enzymology and Molecular Biology of Lignin Degradation, In: R. B. a. G. A. M. (Eds.) The Mycota III, Biochemistry and Molecular Biology, 2nd ed. Springer-Verlag, Berlin-Heidelberg, 2004, p. 249-273.

8. Schreiber L., Franke R., Hartmann K.-D. Et al. The chemical composition of suberin in apoplastic barriers affects radial hydraulic conductivity differently in the roots of rice and corn. J.Exp.Bot. 2005. v.56, T.415, p. 1427-1436.

9. Синицын А.П., Гусаков A.B., Черноглазов В.M. Биоконверсия лигноцеллюлозных материалов. М., МГУ, 1995,224 с.

10. Роговин З.А. Химия целлюлозы. М., Химия, 1972, 519 с.

11. Байклз И., Сегал Л. Целлюлоза и ее производные. М: Мир, 1974, в 2-х томах, т.1 , 500 е., т. 2,510 с.

12. Hon DNS (1994) Cellulose: a random walk along its historical path., 1994, Cellulose 1: 1-25.

13. Алёшина Л.И., Глазкова C.B., Луговская Л.А., Подойникова М.В., Фофанов А.Д., Силина Е.В. Современные представления о строении целлюлоз (обзор). Химия растительного сырья, 2001, №1, с.5-36.

14. Prabuddha Bansal, Mélanie Hall, Matthew J Realff, Jay H Lee, Andreas S Bommarius Modeling cellulase kinetics on lignocellulosic substrates. Biotechnology Advances, 2009, v. 27, i. 6, p.833-848.

15. Uhlig H. Industrial enzymes and their applications. John Willey & Sons, Inc., New York, 1998, 454 p.

16. Read S.M., Currie G., Bacic A. Analysis of the structural heterogeneity of laminarin by electrospray-ionisation-mass spectrometry. Carbohydr. Res., 1996, v.281, p. 187-201.

17. Izydorczyk M.S., Macri L.J., MacGregor A.W. Structure and physicochemical properties of barley non-starch polysaccharides. I. Water-extractable B-glucans and arabinoxylans. Carbohydr. Polym., 1998, v.35, p. 249-258.

18. Stone B.A, Clarke A.E. Chemistry and biology of 1,3-P-gIucans. La Trobe University Press, Bundoora, Australia, 1992, 426 p.

19. Albersheim P., Jones T.N. Biochemistry of the cell wall in relation to infective processes. Ann. Rev. Phytopathol., 1969, v.7, p. 171-194.

20. Coughlan M.P., Hazlewood G.P. Hemicellulose and hemicellulases. Portland Press Research Monograph., London-Chapel Hill, 1993, 152 p.

21. Collins Т., Gerday Ch., Feller G. Xylanases, xylanase families and extermophilic xylanases. FEMS Microbiol. Rew, 2005, v. 29. p. 3-29.

22. Гудвин Т., Мерсер Э. Введение в биохимию растений. Москва. Мир. 1986. 387 с.

23. Mueller-Harvey I., Hartley R.D., Harris P.J., Curzon E.H. Linkage of p-kumaroyl and feruloyl groups to cell wall polysaccharides of barley straw. Carbohydr. Res., 1986, v.l48,p. 71-85.

24. Hayashi T. Xyloglucans in the primary cell walls. Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol., 1989, v.40, p. 139-168.

25. Stephen A.M. Food polysaccharides and their applications. Marcel Dekker, Inc., New York, 1995, 654 p.

26. Koiman P. Amyloids of plant seeds. Nature, 1957, v. 179, p. 107-109.

27. Gidley M.J., Lillford P.J., Rowlands D.W., Lang P., Dentini M., Crescenzi V., Edwards M., Fanutti C., Reid J.S.G. Structure and solution properties of tamarind-seed polysacsharide. Carbohydr. Res., 1991, v.214, p. 299-307.

28. Hayashi T. Xyloglucans in the primary cell walls. Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol., 1989, v.40, p. 139-168.

29. Stephen A.M. (ed.) Food polysaccharides and their applications. Marcel Dekker, Inc., New York, 1995,654 р.

30. Charrier, M., and C. Rouland. Mannan-degrading enzymes purified from the crop of the brown garden snail Helix aspersa Mbller (Gastropoda pulmonata). J. Exp. Zool., 2001, v.290: 125-135.

31. McNeil M., Darvill A.G., Fry S.C., Albersheim P. Structure and function of the primary cell walls of plants. Annu. Rev. Biochem., 1984, v.53, 625 p.

32. Rombouts F.M., Thibault J.F. Feruloylated pectic substances from sugar beet pulp. Carbohydr. Res., 1986, v.l54,p. 177-187.

33. Ros, J.M., Schols, H.A. and Voragen, A.G.J. Extraction, characerisation, and enzymatic degradation of lemon peel pectins. Carbhydr. Res., 1996, v.282, p.271-284.

34. Pandey, a, Soccol, C. R., Selvakumar, P., Soccol, V. T., Krieger, N., & Fontana, J. D. Recent developments in microbial inulinases. Its production, properties, and industrial applications. Applied biochemistry and biotechnology, 1999, v.8J, p.35-52.

35. Чечёткин Д.В. Исследование фруктозано-пектиназного комплекса топинамбура и изменений в нём при получении осветлённого сусла // Дисс. на соискание учёной степени канд.тех.наук, Москва, МГУПП, 2006 г, 127с.

36. Холявка М.Г. Исследование структурно-функциональных свойств гомогенных и гетерогенных биокатализаторов на основе инулиназы // Дисс. на соискание учёной степени канд.биол.наук, Воронеж, ВГУ, 2010 г.,178 с.

37. Kaur, N. and A.K. Gupta. Applications of inulin and oligofructose in health and nutrition. J. Biosci., 2002, v. 27(7), p.703-714.

38. Li, S.Z., Chan-Halbrendt, C. Ethanol production in (the) People's Republic of China: potential and technologies. Appl. Energy, 2009, v.86, p. 162-169.

39. Cieslik, E., A. Kopeel and W. Praznik. Healthy properties of Jerusalem artichoke flour (Helianthus tuberosus L.). Electronic J. of Polish Agricultural Universities, Food Sci. Technol., 2005, v. 8(2).

40. Ethanol production in (the) People's Republic of China: potential and technologies. Appl. Energy, 2009, v.86, p. 162-169.

41. Топинамбур многофункциональная биотехнологическая культура XXI века: Материалы Международной научно-практической конференции. Москва: Изд-во СГУ, 2011, 110 с.

42. Baumgartner, S., Dax, T.G., Praznik, W., Fa, H. Characterisation of the highmolecular weight fractan isolated from garlic (Allium sativum L.). Carbohydr. Res., 2009, v. 328, p.177-183.

43. Leroy, G., Grongnet, J.F., Mabeau, S., Le Corre, D., Baty-Julien, С. Changes in inulin and soluble sugar concentration in artichokes (Cynara scolymus L.) during storage. J. Sci. Food Agric., 2010, v. 90, p. 1203-1209.

44. Van Loo J, Coussement P, De Leenheer L, Hoebregs H and Smits G. On the presence of inulin and oligofructose as natural ingredients in western diet; CRC Crit. Rev. Food Sci. Nutr., 1995, v. 35, p. 525-552.

45. Синицын А.П., Митькевич O.B. Различия в кинетических свойствах прочно и слабо адсорбирующихся на целлюлозе целлюлолитических ферментов. Биотехнология, 1987, т. 3(2), с. 227-233.

46. Lynd LR,Weimer PJ, van ZylWHet al. Microbial Cellulase utilization. Fundam Biotechnol, 2002, v. 66, p.506-577.

47. Clarke A.J. Biodégradation of cellulose. Enzymology and biotechnology, Technomic Publishing Company Inc., Lancaster, 1997, 272 p.

48. Наумов Д.Г. Иерархическая классификация гликозил-гидролаз. Биохимия, 2011, Т.76, в. 6, с.764-780.

49. Henrissat В., Bairoch A. New families in the classification of glycosyl hydrolases based on amino acid sequence similarities. Biochem. J., 1993, v.293, p. 781-788.

50. Henrissat В., Teeri T., Warren R.A.J. A scheme for designating enzymes that hydrolase the polysaccharides in the cell walls of plants. FEBS Lett., 1998, v. 425, p. 352-354.

51. Shoemaker S., Schweickart V., Lander M., Gelfand D., Kwok S., Myambo K., Innis M. Molecular cloning of exo-cellobiohydrolase I derived from Trichoderma reesei strain L27. Biotechnology, 1983, v. 1, p. 691-695.

52. Шульга Т.Н. Свойства целлобиогидролаз из грибов Chrysosporium lucknowense и Trichoderma reesei. Диссертация на соискание ученой степени канд. хим. наук. М., МГУ, 2008, 125 с.

53. Марков А.В. Свойства ферментных комплексов, продуцируемых мутантными штаммами Trichoderma reesei II Дисс. на соискание учёной степени канд.хим.наук, Москва, МГУ, 2003, 201 с.

54. Shulien М. Enzymatic properties of cellulases from Humicola insolens. J. of Biotech., 1997, v. 57, p. 71-81.

55. Ubhayasekera W., Munoz I.G., Vasella A., Stahlberg J., Mowbray S.L. Structures of Phanerochaete chrysosporium Cel7D in complex with product and inhibitors. FEBS J., 2005, v. 272 (8), p. 1952-1964.

56. Limam F., Chaabouni S.E., Ghrir R., Marzouki N. Two cellobiohydrolases of Penicillium occitanis mutant Pol 6: Purification and properties. Enzyme and Microbial Technology, 1995, v. 17(4), p. 340-346.

57. Tuohy M.G., Walsh D. J., Murray P.G., Claeyssens M., Cue M. M., Savage A.V., Coughlan M.P. Kinetic parameters and mode of action of the cellobiohydrolases produced by Talaromyces emersonii. Biochim. at Biophis. Acta, 2002, v. 1596, p. 366380.

58. Takao, S., Kamagata, Y., & Sasaki, H. Cellulase production by Penicillium purpurogenum. Journal of Fermentation Technology, 1995, v.63, p. 127-134.

59. Lee, K.-mi, Joo, A.-reum, Jeya, M., Lee, K.-min, Moon, H.-jung, & Lee, J.-kul. Production and Characterization of Cellobiohydrolase from a Novel Strain of Penicillium purpurogenum KJS506, Appl Biochem Biotechnol, 2011, v. 163 (1), p.25-39.

60. Schulein M. Enzymatic properties of cellulases from Humicola insolens. J. Biotechnol., 1997, v. 57, p. 71-81.

61. Tuohy M.G., Walsh D.J., Murray P.G., Claeyssens M., Cuffe M.M., Savage A.V., Coughlan M.P. Kinetic parameters and mode of action of the cellobiohydrolases produced by Talaromyces emersonii. Biochim. Biophys. Acta, 2002, v. 1596, p. 366-380.

62. McCarthy J.K., Uzelac A., Davis D.F., Eveleigh D.E. Improved catalytic efficiency and active site modification of 1,4-p-D-glucan glucohydrolase A from Thermotoga neapolitana by directed evolution. J. Biol. Chem., 2004, v.279, p. 11495-11502.

63. Xu В., Janson J.-C., Sellos D. Cloning and sequencing of a molluscan endo-/?-1,4-glucanase gene from the blue mussel Mytilus edulis. Eur. J. Biochem., 2001, 268, p. 3718-3727

64. Markov A.V, Gusakov A.V., Dzedzyulya E. I., Ustinov В. В., Antonov A. A., Okunev, O. N. Properties of Hemicellulases of the Enzyme Complex from Trichoderma longibrachiatum, Biochemistry, 2006, v.42(6), p.654-664.

65. Морозова В.В. Свойства целлюлолитических ферментов Penicillium verruculosum и их применение для осахаривания лигноцеллюлозного сырья. Дисс. на соискание учёной степени канд.хим.наук, Москва, МГУ, 2009, 159 с.

66. Chaabouni SE, Mechichi Т, Limam F, Marzouki N. Purification and characterization of two low molecular weight endoglucanases produced by Penicillium occitanis mutant pol 6. Appl Biochem Biotechnol, 2005, v. 125(2), p.99-112.

67. Jeya M, Joo AR, Lee KM, Sim WI, Oh DK, Kim YS, Kim IW, Lee JK. Characterization of endo-beta-l,4-glucanase from a novel strain of Pénicillium pinophilum KMJ601 Appl Microbiol Biotechnol, 2010, v.85(4), p.1005-1014.

68. Christakopoulos P, Kekos D,Macris BJ, ClaeyssensM, BhatMK. Purification and mode of action of a low molecular mass endo-1,4-P-D-glucanase from Fusarium oxysporum. J Biotechnol, 1995, v. 39, p.85-93.

69. Bhat MK, Bhat S. Cellulose degrading enzymes and their potential industrial applications. Biotechnol Adv, 1997, v.15, p.583-620.

70. Jung S., Kim S., Bae H., Lim HS., Bae HJ. Expression of thermostable bacterial beta-glucosidase (BglB) in transgenic tobacco plants Bioresour Technol, 2010, v. 101 (18), p.7155-7161.

71. Eberhant В., Davtid F.Cross, Lewis R. Chase. 1,3- Glucodidase system of Neurospora crassa, Journal of bacteriology, 1964, v.87(4), p.761-770.

72. Jeya M, Joo AR, Lee KM, Tiwari MK, Lee KM, Kim SH, Lee JK. Characterization of beta-glucosidase from a strain of Pénicillium purpurogenum KJS506 Appl Microbiol Biotechnol, 2010, v.86(5), p.1473-84.

73. Короткова О.Г. Получение целлюлазных комплексов с увеличенной осахаривающей способностью на основе рекомбинантных штаммов Pénicillium verruculosum. Дисс. на соискание учёной степени канд.хим.наук, Москва, МГУ, 2011,155 с.

74. Zorov, I. N., Gusakov, A. V., Baraznenok, V. A., & Bekkarevich, A. O. Isolation and Properties of Cellobiase from Penicillium verruculosum. Applied Biochem and Microbiol, 2001, v.37(6), p.587-592.

75. Короткова О.Г., Семёнова M.B., Морозова B.B., Зоров И.Н., Соколова JI.M., Бубнова Т.М., Окунев О.Н., Синицын А.П. Выделение и свойства грибных (3-глюкозидаз, Биохимия, 2009, Т.74, вып. 5, 699-709.

76. Wetenschappen, F., Gent, U., Bhat, M. К., Gate, Е., & Road, W. Purification and characterisation of an extracellular /?-glucosidase with transglycosylation and exo-glucosidase activities from Fusarium oxysporum, EJ Biochem, 1994, v. 385, p.379-385.

77. Riou C, Salmon JM, Vallier MJ, Gunata Z & Barre P. Purification, characterization, and substrate specificity of a novel highly glucose-tolerant beta-glucosidase from Aspergillus oryzae Appl Environ Microbiol, 1998, v. 64, p. 3607-3614.

78. Elshafei, A. M., Hassan, M. M., Morsi, N. M., & Elghonamy, D. H. Purification and some kinetic properties of (3 glucosidase from Aspergillus terreus NRRL 265. Journal of Biotechnology, 2011, v. 10 (84), p. 19556-19569.

79. Singh RS, Bhermi HK. Production of extracellular exoinulinase from Kluyveromyces marxianus YS-1 using root tubers of Asparagus officinalis. Biores Technol, 2008, v.99, p.7418-7423.

80. Gong F, Chi ZM, Sheng J, Li J, Wang XH. Purification and characterization of extracellular inulinase from a marine yeast Pichia guilliermondii and Inulin hydrolysis by the purified inulinase, Biotechnol Bioproc Eng , 2008, v. 13, p.533-539.

81. Rouwenhorst RJ, Hensing M, Verbakel J, Scheffers WA, Van Dijken JP. Structure and properties of the extracellular inulinase of Kluyveromyces marxianus CBS 6556. Appl Environ Microbiol, 1999, v.l 1, p.3337-3345.

82. Kwon YM, Kim HY, Choi YJ. Cloning and characterization of Pseudomonas mucidolens exoinulinase. J Microbiol Biotechnol, 20000, v. 10(2), p.238-243.

83. Skowronek, M., & Fiedurek, J. Purification and Properties of Extracellular Endoinulinase from Aspergillus niger 20 OSM, 2006, v.44(l), p.53-58.

84. Chi, Zhenming, Chi, Zhe, Zhang, T., Liu, G., & Yue, L. Inulinase-expressing microorganisms and applications of inulinases. Applied microbiology and biotechnology, 2009, v.82(2), p.211-20.

85. Kang SI, Chang YJ, Oh SJ, Kim SI. Purification and properties of an endo-inulinase from an Arthrobacter sp. Biotechnol Lett, 1998, v. 20, p.983-986.

86. Sheng J, Chi ZM, Gong F, Li J. Purification and characterization of extracellular inulinase from a marine yeast Cryptococcus aureus G7a and inulin hydrolysis by the purified inulinase. Appl Biochem Biotechnol, 20085, v.144, p.l 11-121.

87. Zhang L, Zhao C, Wang J, Ohta Y, Wang Y. Inhibition of glucose on an exoinulinase from Kluyveromyces marxianus expressed in Pichia pastoris. Proc Biochem, 2005, v. 40, p.1541-1545.

88. Gong, F., Sheng, J., Chi, Z., & Li, J. Inulinase production by a marine yeast Pichia guilliermondii and inulin hydrolysis by the crude inulinase. Journal Of Industrial Microbiology, 2007, v.34 (3), p. 179-185.

89. Kwon YM, Kim HY, Choi YJ. Cloning and characterization of Pseudomonas mucidolens exoinulinase. J Microbiol Biotechnol, 2000, v. 10(2), p.238-243.

90. Kwon HJ, Jeon SJ, You DJ, Kim KH, Jeong YK, Kim YH, Kim YM, Kim BW. Cloning and characterization of an exoinulinase from Bacillus polymyxa. Biotechnol Lett, 2003, v. 25 (2), p. 155-159.

91. Nakamura T, Shitara A, Matsuda S, Matsuo T, Suiko M, Ohta K. Production, purification and properties of an endoinulinase of Penicillium sp. TN-88 that liberates inulotriose. J Fermen Bioeng, 1997, v.84, p.313-318.

92. Kim DH, Choi YJ, Song SK, Yun JW. Production of inulooligosaccharides using endoinulinase from a Pseudomonas sp. Biotechnol Lett, 1997, v. 19, p.369-371.

93. Reese E.T., Siu R.G.H., Levinson H.S. The biological degradation of soluble cellulose derivatives and its relationship to the mechanism of cellulose hydrolysis. J. Bacteriol., 1950, v.59, p. 485-497.

94. Wood T.M., McCrae S.I. Purification and some properties of a 1,4-P-D-glucan glucohydrolase associated with the cellulase from the fungus Penicillium funiculosum. Carbohydr. Res., 1982, v.110, p. 291-303.

95. Wood T.M., McCrae S.I. Synergism between enzymes involved in the solubilization of native cellulose. Adv. Chem. Ser., 1979,181, p. 181-209.

96. Ryu D.D.Y., Kim C., Mandels M. Competition and sorption of cellulase components and its significance in a synergistic mechanism. Biotechnol. Bioeng., 1984, v.26, p. 488-496.

97. Henrissat В., Driguez H., Viet C., Schulein M. Synergism of cellulase from Trichoderma reesei in degradation of cellulose. Bio. Technology, 1985, v.3, p. 722-726.

98. Fujii M., Shimizu M. Synergism of endoenzyme and exoenzyme on hydrolysis of soluble cellulose derivatives. Biotechnol. Bioeng., 1986, v.28, p. 878-882.

99. Синицын А.П., Митькевич O.B., Калюжный C.B., Клесов А.А. Изучение синергизма в действии ферментов целлюлазного комплекса. Биотехнология, 1987, вып.З, с. 39-46.

100. Рабинович M.JL, Клесов А.А., Черноглазов В.М., Вьет В.Н., Березин И.В. Эффективность адсорбции целлюлолитических ферментов фактор, определяющий реакционную способность нерастворимой (кристаллической) целлюлозы. Докл. АН СССР, 1981, 260, с. 1481-1486

101. Клесов А.А., Черноглазов В.М., Рабинович M.JL, Синицын А.П. Роль адсорбционной способности эндоглюканазы в деградации кристаллической и аморфной целлюлозы. Биоорг. химия, 1982, 8, с. 643-651.

102. Синицын А.П., Наджеми Б., Митькевич О.В., Клесов А.А. Взаимное усиление гидролитического действия прочно и слабо адсорбирующихся целлюлазных препаратов. Прикл. биохим. микробиол., 1986, 22, с. 333-336

103. Klyosov А.А. Trends in biochemistry and enzymology of cellulose degradation. Biochem., 1990, v.129, p. 10577-10585.

104. Гусаков A.B. Биокатализаторы на основе грибных целлюлаз: фундаментальные и прикладные аспекты. Диссертация на соискание ученой степени д-ра. хим. наук, М., МГУ, 2005, 385 с.

105. Синицын А.П., Митькевич О.В. Различия в кинетических свойствах прочно и слабо адсорбирующихся на целлюлозе целлюлолитических ферментов. Биотехнология, 1987, 3, с. 227-233.

106. Din N., Gilkes N.R., Tekant В., Miller R.C., Warren R.A.J., Kilburn D.K. Non-hydrolytic disruption of cellulose fibers by the binding domain of a bacterial cellulase. Bio Technology, 1991, v.9, p. 1096-1099.

107. Xiao Z., Gao P., Qu Y., Wang T. Cellulose-binding domain of endoglucanase III from Trichoderma reesei disrupting the structure of cellulose. Biotechnol. Lett., 2001, v.23, p. 711-715.

108. Рабинович M.JI., Мельник М.С., Болобова А.В. Целлюлазы микроорганизмов. Прикл. биохим. микробиол., 2002, 38, с. 355-373.

109. Malherbe, S., & Cloete, T. E. Lignocellulose biodégradation: Fundamentals and applications. Re/Views in Environmental Science & Bio/Technology, 2002, v.l (2), p.105-114.

110. Рабинович M.JI., Мельник M.C., Болобова А.В. Целлюлазы микроорганизмов. Прикл. биохим. микробиол., 2002, 38, с. 355-373.

111. Volynets В., Dahman Y. Assessment of pretreatments and enzymatic hydrolysis of wheat straw as a sugar source for bioprocess industry. International journal of energy and environment, 2011, v. 2 (3), p.427-446.

112. Nidetzky, В., W. Steiner, M. Hayn, and M. Claeyssens. Cellulose hydrolysis by the cellulases from Trichoderma reesei: a new model for synergistic interaction. Biochem J 1994, v.3, p.705-710.

113. E. Ricca, V. Calabrr, S. Curcio, G. Lorio, The state of the art in the production of fructose from inulin enzymatic hydrolysis, Crit. Rev. Biotechnol, 2007, v. 27(3), p.129-145.

114. E.J. Vandamme, D.G. Derycke, Microbial inulinases: Fermentation process, properties and applications, Adv. Appl.Microbiol, 1983, v. 29, p. 139-176.

115. Sanchez, O.J., Cardona, C.A. Trends in biotechnological production of fuel ethanol from different feedstocks. Bioresour. Technol., 2008, v. 99, p.5270-5295.

116. Li, S.Z., Chan-Halbrendt, C.Ethanol production in (the) People's Republic of China: potential and technologies. Appl. Energy, 2009, v. 86, p.162-169.

117. Nevoigt, E. Progress in metabolic engineering of Saccharomyces cerevisiae. Microbiol. Mol. Biol. Rev., 2008, v. 72, p.379-412.

118. Szabbelan K., Nowak J. Acidc and enzymatic hydrolysis of Jerusalem artichoke (Helianthus tuberosusL.) tubers for further ethanol production, EJPAU, 2006, v.9(4), №38.

119. Cabezas, M.J.C., Bravo, R.S., Shene, C. Inulin and sugar contents in Helianthus tuberosus and Cichorium intybus tubers: effect of postharvest storage temperature. J. Food Sci., 2002, v. 67, p.2860-3865.

120. Чулкин A.M. CREA зависимая углеродная катаболитная репрессия в Penicillium canescens II Дисс. на соискание учёной степени канд.биол.наук, Москва, ФГУП «ГосНИИГенетика», 2012, 120 с.

121. Патент РФ N 2126049, Бюллетень изобретений РФ N 4, от 10.02.1999 г.

122. Николаев И.В.Беккер О.Б., Серебряный В.А., Чулкин A.M., Винецкий Ю.П. Суперпродукция секретируемой бета-галактозидазы мицелиальным грибом Penicillium canescens-. структура гена и конструкция мультикопийного штамма. Биотехнология, 1999, №3, с.3-13.

123. Синицына О.А. Свойства рекомбинантных эндоглюканазы и ксиланазы пенициллов // Дисс. на соискание учёной степени канд.хим.наук, Москва, МГУ, 2002, 187 с.

124. Патент РФ N 2238974, Бюллетень изобретений РФ N 27, от 11.2004 г.

125. Серебряный В.А. Ксиланаза Penicillium canescens: выделение гена, изучение его регуляции и создание штамма-продуцента // Дисс. на соискание учёной степени канд.биол.наук, Москва, ФГУП «ГНИИГИСПМ», 2006, 117 с.

126. Патент РФ N 2288267, Бюллетень изобретений РФ N 27, от 11.2006 г.

127. Aslanidis С. and de Jong J.P. Nucl. Acids Research,. 1990, v. 18, p.6069-6075.

128. Sambrook J., Russell D. 3d ed Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001

129. Aleksenko A.Y., Makarova N.A., Nikolaev I.V., Clutterbuck A.J. Curr.Genet. 1995, v. 28, p. 474-478

130. Nelson N. A photometric adaptation of the Somogyi method for the determination of sugars. J. Biol. Chem., 1944, v. 153, p. 375-379

131. Somogyi M. A new reagent for the determination of sugars. J. Biol. Chem., 1952, v. 195, p. 19-23

132. Doner L.W., Irwin P.L. Assay of reducing end groups in oligosaccharide homologues with 2,2'-bicinchoninate. Anal. Biochem., 1992, v. 202, p. 50-53

133. Гусаков A.B., Семенова M.B., Синицын А.П. Масс-спектрометрия в исследовании продуцируемых микроскопическими грибами внеклеточных ферментов. Масс-спектрометрия, т. 7, № 1, стр. 5-20

134. Березин И.В., Клёсов А.А. Практический курс химической и ферментативной кинетики, Москва, изд-во МГУ, 1976, 320 с.

135. Gidley M.J., Lillford, P.J., Rowlands, D.W., Lang, P., Dentini, M„ Crescenzi, V., Edwards, M., Fanutti, C., and Reid, J.S.G. Carbohydr. Res., 1991, v. 214, p.299-304.

136. York, W.S., van Halbeek, H., Darvill, A.G., and Albershaim, P. Carbohydr. Res., 1990, v.200, p.9-13.

137. Выход вс (А) и „ (Б) ПРИ гидролизе МКЦ. Условия: 50°С, рН 5 рисунок 1. Выход ВС (А) на 1 г су6стрта 11ерсмешиванио 250100 г/л (сухой вес)ДЕ.= 2-10 мг ФП-ЭГ1Поб./мин., время реакции 48 час. 119

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.