Разработка метода получения рекомбинантного соматолиберина и его применение для доставки животным с помощью пробиотических бацилл тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат биологических наук Белякова, Алла Владимировна

• Белякова, Алла Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Белякова, Алла Владимировна

1. Введение

2. Обзор литературы 10 2.1 Соматолиберин и его гомологи в системе пептидных факторов 10 регуляции роста

2.1.1 Эволюция первичной структуры соматолиберина (ОНБШ)

2.1.2 Открытие гипофизарного аденилатциклаза-активирующего 14 полипептида (РАСАР)

2.1.3 Вторичная структура гипофизарного аденилатдиклаза- 16 активирующего полипептида (РАСАР)

2.1.4 Протеолитическая активация гипофизарного аденилатциклаза- 16 активирующего полипептида (РАСАР)

2.1.5 Геномная организация гена РАСАР

2.1.6 Филогенетические аспекты эволюции гипофизарного 22 аденилатциклаза-активирующего полипептида (РАСАР)

2.1.7 Биологическое и фармакологическое действие гипофизарного 24 аденилатциклаза-активирующего полипептида (РАСАР)

2.1.8 Эволюция структуры предшественников ОШШ и РАСАР

2.1.9 Эволюционные аспекты распределения нейронов, 31 продуцирующих ОНЕШ и РАСАР, в головном мозге

2.1.10 ОШ1Н и РАСАР как факторы регуляции секреции 33 соматотропина

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка метода получения рекомбинантного соматолиберина и его применение для доставки животным с помощью пробиотических бацилл»

Актуальность проблемы

Бактериальные препараты на основе рекомбинантных пробиотических штаммов, предназначенные для пероральной доставки пептидных стимуляторов роста в организм сельскохозяйственных животных, могут рассматриваться как эффективные и безопасные средства увеличения привесов. Одним из наиболее перспективных биоактивных пептидов для пероральной доставки является соматолиберин (GHRH). Он обладает высокой устойчивостью к протеолизу и характеризуется низкими по сравнению с соматотропином (СТГ) и инсулиноподобным фактором роста (IGF) действующими концентрациями, что позволяет ожидать проявления его физиологического эффекта при пероральном введении, хотя при этом проникновение пептида через энтеральный барьер в такневую жидкость происходит с незначительной эффективностью. Использование соматолиберина для решения практических задач в области зоотехнии в том числе, за счет синтезирующих его рекомбинантных штаммов, ограничивается фрагментарностью представлений о сигнальной роли этого пептидного гормона в регуляции роста и развитии организма, его фармакокинетике и клеточных мишенях. Есть данные о том, что в естественных условиях эффект соматолиберина дополняется действием его агониста РАСАР (аденилатциклаза-активирующий пептид). В отличие от других позвоночных - птиц, рептилий и рыб, у млекопитающих GHRH и РАСАР кодируются независимыми геномными генами (апоморфное состояние). В плезиоморфном варианте оба пептида транслируются в виде единого белка-предшественника с последующим процессингом, в результате которого в аппарате Гольджи клеток аденогипофиза образуются два отдельных физиологически активных пептида. Во всех опубликованных работах по исследованию биологического действия GHRH и РАСАР эти пептиды были получены путём химического синтеза. В результате задача изучения сочетанного физиологического действия GHRH и РАСАР не была поставлена и не решалась. Изучение естественной сигнальной функции соматолиберина осложняется тем, что его мРНК подвергается альтернативному сплайсингу. У птиц GHRH может являться продуктом одной из трех возможных сплайсоформ.

Таким образом, разработка методов применения соматолиберина в комплексе с РАСАР или отдельно от него, в том числе, в варианте пероральной доставки представляется актуальной задачей. Однако, в литературе полностью отсутствуют данные о фармакокинетике производных соматолиберина в случае его энтерального введения, ни с точки зрения возможности достижения анаболического эффекта, ни с точки зрения нежелательных побочных эффектов.

Практическое использование рекомбинантных штаммов бацилл, накапливающих в цитоплазме соматолиберин, в нестерильных условиях кишечника животных осложняется несовершенством экспрессионных систем поддержания чужеродных генов в этих микроорганизмах. Наиболее популярные автономно реплицирующиеся векторы характеризуются структурной нестабильностью, легко утрачиваются при репликации in vivo, вызывая тем самым неустойчивость уровня синтеза целевого продукта в различных условиях внешней среды. Кроме того, автономные генетические элементы, способные к горизонтальному переносу в клетки эндогенной микрофлоры животных, влючая патогенную, снижает уровень биологической безопасности штаммов in vivo. Наконец, системы контроля секреции, созревания и деградации гетерологичных белков в культурах бацилл изучены недостаточно, что нередко приводит к денатурации и деградации синтезируемых продуктов. Этому способствует высокая собственная протеолитическая активность бацилл. Таким образом, создание генетической конструкции для пероральной доставки соматолиберина с помощью пробиотических штаммов потребовало решения целого ряда вопросов, связанных как с физиологической регуляцией действия соматолиберина, так и с разработкой систем экспрессии генов в клетках бацилл.

Цель.

Целью настоящего исследования явилось доказательство возможности пероральной доставки соматолиберина с помощью живых бактериальных препаратов на основе рекомбинантных штаммов бацилл, несущих оригинальную интегративную генную конструкцию.

Задачи исследования.

В соответствии с этой целью решались следующие задачи:

1. Оптимизировать структуру гена соматолиберина для экспрессии в бактериях. На модели Е. coli разработать систему измерения уровня накопления в бактериальных культурах и анаболического эффекта производных соматолиберина in vivo.

2. Разработать интегративную генетическую систему, позволяющую экспрессировать производные соматолиберина свиньи в клетках пробиотического штамма Bacillus licheniformis В-4161.

3. Получить опытный образец бактерального препарата на основе вегетативных клеток рекомбинантного штамма В. licheniformis В-4161, несущего ген соматолиберина, и провести его биологические испытания на животных моделях мышей и поросят-отъёмышей.

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. Предложена структура гена зрелого соматолиберина свиньи, пригодного для экспрессии в бактериях с образованием биологически активного пептидного гормона;

2. Показана принципиальная возможность пероральной доставки соматолиберина млекопитающим, разработана тест-система для биологического тестирования активности соматолиберина свиньи на мышах-отъёмышах;

3. Разработана новая интегративная система на основе гена WprA, пригодная для высокоэффективной экспрессии гена соматолиберина в бациллах;

4. Показан анаболический эффект соматолиберина, доставляемого в составе пробиотического препарата на основе рекомбинантного штамма Bacillus licheniformis В-4161 , на поросятах отъёмышах при отсутствии у них системных дисфункций.

5. Впервые показана эффективность вегетативных клеток бацилл и Е. coli в качестве контейнера для переноса рекомбинантных пептидов через агрессивную среду желудка и двенадцатиперстной кишки, что позволяет разрабатывать технологии создания бациллярных пробиотиков неспоровой формы.

Научная новизна работы. Впервые получен продуцент соматолиберина свиньи на основе пробиотического штамма В. licheniformis В-4161, сертифицированного для применения в животноводстве. На модели этого продуцента впервые показана высокая эффективность вновь сконструированной интегративной системы клонирования, включающая промотор гена субтилизина клеточной стенки WprA и мини-ген устойчивости к эртиромицину (Е-пептид). На модели мышей и поросят впервые экспериментально показана возможность достижения анаболического эффекта при пероральном введении млекопитающим двух видов (мыши и поросята) бактериального препарата, содержащего зрелую форму производного соматолиберина свиньи -пептидного гормона GHRH без использования РАС АР.

Теоретическая и практическая ценность работы. В настоящее время применение стимуляторов роста на животноводческих предприятиях приобрело массовый характер и является важнейшим фактором снижения себестоимости продукции, обеспечения ее конкурентоспособности в условиях быстрого роста производства. В то же время, получение очищенных ростовых факторов и вакцинных субстанций, пригодных для парентерального применения, требует крупных затрат и длительных сроков на разработку. В результате животноводческим хозяйствам приходится прибегать к массовому применению потенциально опасных для потребителя химических средств стимуляции роста животных: синтетическим стероидным гормонам. Экономически эффективной и безопасной для человека альтернативой этому укоренившемуся на практике подходу является разработка живых продуцентов белковых ростовых факторов на базе полностью безопасных микроорганизмов, в частности, мезофильных бацилл. Результаты работы могут быть непосредственно положены в основу новой технологии производства и применения рекомбинантных пробиотиков, обладающих анаболическим эффектом наряду с естественным защитным и профилактическим действием на патогенную микрофлору кишечника.

2. Обзор литературы

2.1 Соматолиберин и его гомологи в системе пептидных факторов регуляции роста

Соматолиберин (GHRH, рилизинг-гормон соматотропина или рилизинг-фактор соматотропина) является одним из представителей класса рилизинг-гормонов гипоталамуса (Montero et al., 2000).

Рилизинг-гормоны, называемые также рилизинг-факторами или либеринами - класс пептидных гормонов гипоталамуса, общим свойством которых является способность индуцировать выброс в кровь различных тропных гормонов передней доли гипофиза. В свою очередь, к подклассу тропных гормонов (тропинов) относят гормоны передней доли гипофиза, проникающие в кровь и воздействующие на периферические эндокринные железы или непосредственно на определенные ткани и органы (На et al., 2000). Тропными гормонами регулируется активность эндокринных клеток пучковой и клубочковой зон коры надпочечников, фолликулов щитовидной железы и целый ряд других эндокринных тканей. Соматолиберин вызывает усиление секреции тропных гормонов передней доли гипофиза: соматотропина (СТГ) и пролактина (Kim et al., 2002). Как и все рилизинг-гормоны гипоталамуса, соматолиберин по химическому строению является полипептидом. Соматолиберин синтезируется в дугообразном и вентромедиальном ядрах гипоталамуса (Hashimoto et al., 2000). Аксоны нейронов указанных ядер оканчиваются в области срединного возвышения. Секреция GHRH стимулируется серотонином и норадреналином. Синтез соматолиберина усиливается при стрессовых воздействиях, физических нагрузках, а также во сне. Связывание соматолиберина с рецепторами на соматотропных клетках аденогипофиза приводит к усилению секреции СТГ. Биосинтез соматоиберина в организме человека и животных осуществляется, главным образом, в нейросекреторных клетках гипоталамуса (Chi-Wei et al., 2007;). Оттуда через портальную кровеносную систему GHRH попадает в гипофиз, где избирательно стимулирует синтез и секрецию СТГ. Биосинтез соматолиберина осуществляется и в других областях мозга помимо гипоталамуса, а также в поджелудочной железе, кишечнике, плаценте, и в отдельных типах нейроэндокринных опухолей (Yang et al., 2007). Лимбическая система мозга способна регулировать выброс GHRH за счёт работы вентромедиального ядра. Воздействие этой структуры на другие области мозга происходит за счет медиаторов класса катехоламинов. Таким образом, эндорфины стимулируют секрецию СТГ за счет повышения синтеза GHRH. В работе (Hoyle et al., 1998) показано, что блокирование гипоталамических а-рецепторов адреналина нарушает подъём концентрации СТГ в крови пациентов, испытывающих недостаток сахара в крови. Напротив подавление адренергических Р-рецепторов существенно стимулирует секрецию СТГ в ответ на гипогликемию. Показано, что очищенные препараты GHRH, связываясь с рецепторами соматотрофных клеток гипофиза, активируют работу аденилатциклазы, вырабатывающей цАМФ, которая и является конечным внутриклеточным индуктором выброса СТГ в кровь. Одновременно активируется фосфатидилинозитоловая система, вызывающая повышение уровня фосфорилирования вторичных целого ряда мессенджеров. Этот эффект соматолиберина блокируется соматостатином и усиливается глюкокортикоидами.

Завершая описание иерархии факторов роста, необходимо остановиться на самом массовом из них - инсулиноподобном факторе роста IGF-1. Этот пептидный гормон синтезируется большинством тканей различных органов, но основной пул IGF-1 крови формируется за счет активности гепатоцитов. Секреция IGF-1 регулируется, в первую очередь, СТГ поступающим из крови. В свою очередь, повышение уровня IGF-1 в крови по принципу отрицательной обратной связи тормозит продукцию GHRH и стимулирует высвобождение соматостатина. Этот механизм препятствует неконтролируемому повышению уровня СТГ в крови.

Молекула соматолиберина состоит из 37-44 а.о. У человека обнаружены 3 изоформы GHRH, различающиеся длиной полипептидной цепи С-концевого участка. Интересно, что в гипоталамусе доминирует изоформа длиной 44 а.о., а в кровотоке наиболее представлен полипептид длиной 40 а.о. Синтетический GHRH у здоровых людей стимулирует секрецию СТГ, но уровень инсулина, адренокортикотропного гормона (АКТГ), глюкагона и ряда других гормонов в крови при этом не меняется.

Молекулы двух других изоформ, состоящие из 37 и 40 а.о., отличаются длинной изоформы укороченным С-концом. При тестировании на клетках аденогипофиза в культуре все три изоформы обладают одинаковой активностью. Минимальный фрагмент молекулы GHRH, проявляющий характерную биологическую активность, содержит 29 а.о. из N-концевой части нативного соматолиберина. Соматолиберин имеет видовые различия в структуре молекул в виде замен или делеций в определенных позициях. Например, молекула соматолиберина крысы состоит из 43 а.о., ее С-конец не амидирован. Он отличается от соматолиберина человека а.о. в позиции 15 с N-конца. Соматолиберин выделенный из гипоталамуса свиней, состоит из 44 а.о., имеет амидированный С-конец, и, согласно результатам ряда исследований, полностью идентичен соматолиберину человека. В процессе биосинтеза GHRH человека сначала образуется высокомолекулярный белок-предшественник препросоматолиберин, состоящий из 104 а.о., который в ходе дивжения

11 по секреторному пути превращается в просоматолиберин, а затем в соматолиберин. Ген, кодирующий препросоматолиберин, локализован на длинном плече 20 хромосомы (20qll2) и содержит 5 экзонов. Альтернативный сплайсинг приводит к образованию двух молекул мРНК, кодирующих предшественники соматолиберина, состоящие из 107 или 108 а.о., и различающиеся делецией/инсерцией остатка Ser непосредственно на С-конце молекулы зрелого пептида. Протеолитический процессинг предшественников дает три конечных продукта, которые состоят из 37, 40 и 44 а.о. С-концевой карбоксил амидирован только в самом длинном пептиде длиной 44 а.о.

Существует точка зрения, что средства стимуляции эндогенной продукции СТГ представляют собой эффективную и безопасную альтернативу его прямому введению. В связи с этим препараты соматолиберина и его биологически активных фрагментов в настоящее время широко применяют в медицине в качестве специфических стимуляторов секреции СТГ в диагностических и лечебных целях. Введение GHRH используется в клинике для измерения максимального уровня продукции СТГ. При этом GHRH вводят однократно из расчета 1-3,5 мкг субстанции на 1 кг массы тела (50-200 мкг на инъекцию). Подъем сывороточного СТГ наблюдается через 10-20 мин, причём его относительная величина достигает 15-20 раз. Введение GHRH имеет и терапевтическоне применение для лечения больных карликовостью (нанизм), обусловленной дисфункцией гипоталамуса (Arimura & Shioda, 1995).

Таким образом, однократное введение человеку GHRH в дозировке 100 мкг приводит к повышению содержания СТГ в крови на порядок и более. Этот эффект полностью исчезает через 2-3 часа. Есть данные, что такое воздействие способно временно повышать уровень про л актина в сыворотке. В течение нескольких часов вслед за подъёмом уровня СТГ, вызванным введением соматолиберина, происходит его снижение. Аналогичная по амплитуде волнообразная динамика характерна для естественного суточного перепада уровня СТГ в крови, что позволяет предполагать участие соматолиберина в регуляции этого явления. Период полураспада соматолиберина в крови составляет около 7 мин.

Суммируя изложенное, можно сделать вывод что GHRH сожет рассмтариваться в качестве перспективной модели биологически активного пептида для энтерального введения, поскольку он в течение достаточно длительного времени устойчив к протеолизу in vivo. Этот пептид имеет намного более низкие действующие концентрации, чем с СТГ и IGF-1 (Wang et al., 2007) позволяет ожидать заметного эффекта даже в условиях больших потерь активной субстанции за счет протеолиза в кишечнике. В работе (Wang et al., 2007) впервые высказано предположение о целесообразности использования GHRH для

12 повышения продуктивности скота и птицы, в том числе, с использованием энтеральной доставки. I

Несмотря на доступнсть для анализа приведенных выше сведений, уровень фундаментальных знаний об эндокринной функции GHRH остаётся недостаточным для разработки концепции его применения в зоотехнике, в том числе, с использованием рекомбинантных продуцентов. В частности, спорным остаётся тезис о необходимости сочетаного действия GHRH и РАСАР для достижения максимального анаболического эффекта (McRory et al., 1997). Соматолиберин был впервые выделен из гипоталамуса в 1964 году, однако его химическая структура была установлена лишь в 1980-е годы. Для этой цели был использован пептид, выделенный из опухоли мозга больного акромегалией (Frohman et al., 1980). Была показана способность этого пептида индуцировать выброс СТГ. Последовательность GHRH была опубликована в 1982 г (Guillemin et al., 1982). В дальнейшем GHRH удалось выделить из опухоли поджелудочной железы больного акромегалией: он также индуцировал высвобождение СТГ из специфических гранул клеток аденогипофиза в культуре. Эти данные были подтверждены Rivier и соавт. (Rivier et al., 1982; Spiess et al., 1982). Клонирование и экспрессия в бактериях кДНК, кодирующей соматолиберин, была впервые описана в работе (Zhou et al., 1982).

Гипофизарный аденилатциклаза-активирующий полипептид (РАСАР) был впервые выделен из гипоталамуса овец в качестве фактора, стимулирующего накопление цАМФ в культуре клеток передней доли гипофиза крыс. Впоследствии было показано, что РАСАР и его рецепторы встречаются во многих типах нейронов, как центральной нервной системы, так и периферийных органов. РАСАР оказывает плейотропное действие на клетки: участвует в регуляции высвобождения нейротрансмиттеров, стимулирует расширение кровеносных сосудов и бронхов, интенсифицирует моторику кишечника, повышает уровень инсулина в крови, в высокой концентрации вызывает выброс гистамина, модулирует течение иммунного овтета на антигены, стимулирует пролиферацию и дифференцировку некоторых типов клеток (Vaudry et al., 2009). Нейроны гипоталамуса, содержащие РАСАР в наибольшей концентрации, располагаются в области срединного возвышения, при этом аксоны этих клеток оканчиваются в непосредственной близости от капиллярных петель гипоталамо-гипофизарной портальной системы. Кроме того, РАСАР экспрессируется во многих других областях мозга, а также в различных периферических тканях и органах.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Белякова, Алла Владимировна

6. Выводы

1. Созданы генетические конструкции для биосинтеза производных соматолиберина курицы (GHRH и РАСАР) и свиньи (GHRH) в клетках Е. coli. Методом электрофореза белков показана их высокоэффективная экспрессия.

2. С использованием рекомбинантных штаммов Е. coli, экспрессирующих производные соматолиберина, показана возможность достижения анаболического эффекта GHRH свиньи при пероральной доставке мышам-отъёмышам при условии выбора реципиентного штамма, не проявляющего токсигенности.

3. Получен рекомбинантный пробиотический штамм В. licheniformis, несущий интегрированную в геном конструкцию с геном GHRH свиньи. Экспрессия искусственного оперона «ген Е-пептида - ген GHRH» доказана путем обнаружения у рекомбинантного штамма устойчивости к эритромицину.

4. Показан анаболический эффект пробиотического препарата на основе рекомбинантного штамма В. licheniformis ВКПМ B-4161(pWpr-le) в отношении поросят-отъёмышей.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Белякова, Алла Владимировна, 2013 год

1. Белявская В.А., Кашперова Т.А., Бондаренко В.М. и др., Экспериментальная оценка биобезопасности генно-инженерных бактерий на модели штамма Bacillus subtilis, продуцирующего интерферон // Ж. микробиол. 2001. N. 2. С. 16-20.

2. Биосептин (Unguentum Bioseptin). http:// webmvc.com/vet/leki/13/biosept.php

3. Блинов Н.И., Микрометод определения фагоцитарной активности клеток крови // В кн.: Фагоцитоз и иммунитет. 1983.

4. Бондаренко В.М., Белявская В.А. Конструирование генно-инженерных препаратов -пробиотиков и их безопасность. http ://www. gastroportal.ru/php/ content.phpid= 1340&pr=print

5. Боярский JI., Эффективность использования ферментных препаратов в рационах при откорме свиней. Л.Боярский, Н.Юмашкин // Свиноводство. 2006. N. 3. С. 10-12.

6. Грачева М., Гаврилов А.Ф., Соловьева А.И., Смирнов В.В., Сорокулова И.Б., Резник С.Р., Чудновская Н.В., Эффективность нового бактерийного препарата биоспорина при лечении острых кишечных инфекций // Ж. микробиол. 1996. N. 1.С. 75-77.

7. Елфимова И.А., Ясников C.B., Перов А.Н., Интстевит и биокорм «Пионер» для повышения сохранности молодняка // Ветеринария. 2006. N. 7. С. 16-17.

8. Емельяненко П.А., Сезонная динамика гуморальных факторов естественной резистентности сыворотки крови новорожденных телят // Доклады ВАСХНИЛ. 1977. N. 10. С.32-34.

9. Зайченко A.A., Разработка новых методов борьбы с картофельной болезнью хлеба // Научный потенциал студенчества будущему России: Материалы Всероссийской научной студенческой конференции. Ставрополь: СевКавГТУ. 2006. 1 с.

10. Зинченко Е.В., Практические аспекты применения пробиотиков. Зинченко А.Н. Панин В.А. Панин //Ж. Ветеринарный консультант. 2003. N. 3. С. 12-14.

11. Карпуть И.М., Гематологический атлас сельскохозяйственных животных // Мн.: Ураджай. 1986. С. 108-111.

12. Компания БИОТРОФ микробиология для животных, http://www.biotroph.ru

13. Кондрахин И.П. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики:

14. Справочник // Под ред. М.: КолосС. 2004. С. 520.

15. Кондрахин И.П., Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики // Москва «КолосС» 2004. С 503-505.

16. Коршунов В.М., Поташник Л. В., Ефимов Б.А., Коршунова О.В., Смеянов В.В., Gyr К., Frei R., Качественный состав нормальной микрофлоры кишечника у лиц разных возрастных групп // Ж. микробиол. 2001. N. 2. С. 57-62. 1

17. Краткий определитель бактерий Берги // М.: Мир. 1980. С 495.

18. Лекарственный препарат из бактерий рода Bacillus // Заявл. 05.04.01; опубл. 27.04.02, БИПМ, N. 12.

19. Линева А., Физиологические показателинормы животных // Справочник.М.: Аквариум ЛТД, К.: ФГУИППВ, 2003. С 243.

20. Мазанкова Л.Н., Лыкова Е.А., Пробиотики: характеристика препаратов и выбор в педиатрической практике // Дет. инфекции. 2004. N. 1. С. 18-23.

21. Медицинская картотека, http://www.medka.ru.ru

22. Мишульский А. М. Авторское свидетельство 4465884/13 СССР, МПК 1710575 AI, C12N1/20, А61 К 35/74. Штамм бактерий Bacillus sp. компонент лечебно-профилактического препарата против дисбактериозов и аллергий. - Опубл. 07.02.92, Бюл. № 5.

23. Неустроев М.П., Татаринова С.С., Применение пробиотика «Сахабактисубтил» стельным коровам // Зоотехния. 2006. N. 12. С. 21-23.

24. ООО «ИнПроМ». http://www.vetomin.ru

25. Осипова И.Г., Сорокулова И.Б., Васильева Е.А., Буданова Е.В., Доклинические испытания новых споровых пробиотиков // Вестн. РАМН. 2005. N. 12. С. 36—40.

26. Пробиотическая добавка Интестевит.

27. Резник С.Р., Сорокулова И.Б., Вьюницкая В.А., Литвин В.П., Смирнов В.В. Пат. 2035186 Российская Федерация, МПК Cl, А61К 35/66. Профилактический биопрепарат споролакт // Заявл. 09.07.92; опубл. 20.05.95, БИ, N. 14.

28. Смирнов В.В., Резник С.Р., Вьюницкая В.А., Сорокулова И.Б., Самгородская Н.В., Тофан A.B., Современные представления о механизмах лечебнопрофилактического действия пробиотиков из бактерий рода Bacillus II Мнсробюл. ж. 1993. Т. 55. N. 4. С. 92-112.

29. Смирнова О.В., Кузьмина Т.А., Определение бактерицидной активности сыворотки крови методом нефелометрии // ЖМЭИ. 1966. N. 4. С.8-11. *

30. Современные представления о механизмах лечебнопрофилактического действия пробиотиков из бактерий рода Bacillus и препарата Споровит. http ://www. echohimtech.ru/ spets2 .php

31. Спорообразующие пробиотики продукт будущего // УралАгроПресс. 2006. www.uralagro.ru

32. Тараканов, Б.В., Использование пробиотиков в животноводстве // Калуга: ВНИИ ФБ и П с/х животных. 1998. С. 5-6.

33. Тарасова Т.А., Хамадеева Л.Р., Комплексное лечение трихомонадных вагинитов во время беременности с использованием препарата Бактиспорин // Актуал. вопр. акушерства и гинекол. 2001-2002. Т. 1. N. 1.

34. Томмэ М.Ф., Убойные качества сельскохозяйственных животных // М. Россельхозиздат. 1956. С. 186.

35. Alexandre D., Anouar Y., Jegou S., Fournier A., Vaudry H., Molecular cloning mRNA distribution and pharmacological characterization of a VIP/PACAP receptor in the frog Rana ridibunda. // Ann. NY Acad. Sci. 2000. V. 921. P. 300-303.f

36. Anagnostopoulos C., Spizizen J., Requirements for transformation in Bacillus subtilis II J. Bacteriol. 1961. V. 8l.P. 741-746.

37. Andersson A., Granum P.E., Ronner U., The adhesion of Bacillus cereus spores to epithelial cells might be an additional virulence mechanism // Int. J. Food Microbiol. 1998. V. 39. P. 93-99.

38. Angert E.R., Losick R., Propagation by sporulation in the guinea pig symbiont // Metabacterium polyspora. Proc Natl Acad Sci US1 1998.V. 95. P. 10218-10223.

39. Anmuth M., Harding J., Kravitz E., Stedman R.L., Autoinhibition of bacterial endospore germination // Science 1956. V. 124. P. 403-405.

40. Arimura A., Perspectives on pituitary adenylate cyclase activating polypeptide (PACAP) in the neuroendocrine, endocrine, and nervous systems // Jpn. J. Physiol. 1998. V. 48. P. 301-331.

41. Arimura A., Shioda S., Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide (PACAP) and its receptors: neuroendocrine and endocrine interaction // Front Neuroendocrinol. 1995. V. 16. P 53-88.

42. Arimura A., Somogyvari-Vigh A., Miyata A., Mizuno K., Coy D.H., Kitada C., Tissue distribution of PACAP as determined by RIA: highly abundant in the rat brain and testes // Endocrinology. 1991. V. 129. P. 2787-2789.

43. Ash C., Farrow J.A.E., Wallbanks S., Collins M.D., Phylogenetic heterogeneity of the genus Bacillus revealed by comparative analysis of small-subunitribosomal RNA sequence // Lett. Appl. Microbiol. 1991. V. 13. P. 202-206.

44. Baccigalupi L., Huxham A., et al., Characterization of Bacillus species used for oral bacteriotherapy and bacterioprophylaxis of gastrointestinal disorders // Appl Environ Microbiol. 2000. V.66. P. 5241-5247.

45. Barbosa T.M., Serra C.R., La Ragione R.M., et al., Screening for Bacillus isolates in the broiler gastrointestinal tract // Appl Environ Microbiol. 2005. V.71. P. 968-978.

46. Basak A., Toure B.B., Lazure C., Mbikay M., Chretien M., Seidah N.G., Enzymic characterization in vitro of recombinant proprotein convertase PC4 // Biochem. J. 1999. V. 343. P. 29-37.

47. Bassler B.L., Losick R., Bacterially speaking // Cell. 2006. V. 125. P. 237-246.

48. Beattie S.H., Williams, A.G., Detection of toxigenic strains of Bacillus cereus and other Bacillus spp. with an improved cytotoxicity assay // Lett. Appl. Microbiol. 1999. V. 28. P. 221-225.

49. Bertherat J., Bluet-Pajot M.T., Epelbaum J., Neuroendocrine regulation of growth hormone // Eur. J. Endocrinol. 1995. V. 132. P. 12-24.

50. Biology-Online.org http://www.biologv-online.org/dictionary/probiosis.2012

51. Bodner M., Castrillo J.L., Theill L.E., Deerinck T., Ellisman M., Karin M., The pituitary-specific transcription factor GHF-1 is a homeobox-containing protein // Cell. 1988. V. 55. P. 505-518.

52. Borriello S.P., Hammes W.P., Holzapfel W., et al., Safety of probiotics that contain lactobacilli or bifidobacteria// Clin. Infec. Diseases. 2003. V. 36. P. 775-780.

53. Bourgault S., Vaudry D., Botia B., Couvineau A., Laburthe M., Vaudry H., Fournier A., Novel stable PACAP analogs with potent activity towards the PAC1 receptor // Peptides. 2008. V. 29. P. 919-932.

54. Caldini G., Trotta F., Cenci G., Inhibition of 4-nitroquinoline 1-oxide genotoxicity by Bacillus strains // Res. Microbiol. 2002. V. 153. P. 165-171.

55. Campbell R.M., Scanes C.G., Evolution of the growth hormone-releasing factor (GRF) family of peptides // Growth Regul. 1992. V. 2 N 4. P. 175-191.

56. Castrillo J.L., Theill L.E., Karin M., Function of the homeodomain protein GHF1 in pituitary cell proliferation // Science. 1991. V. 253. P. 197-199.

57. Casula G., Bacillus probiotics: Spore germination in the gastrointestinal tract // Appl Environ Microbiol. 2002. V. 68. P. 2344-2352.

58. Cavazzoni B., Adami A., Castrovilli C. Performance of broiler chickens supplemented with Bacillus coagulans as probiotic // Brit. Poult. Sci. 1998. V. 39. P. 526-529.

59. Ceragioli M., Cangiano G., Esin S., et al., Phagocytosis, germination and killing of Bacillus subtilis spores presenting heterologous antigens in human macrophages // Microbiology. 2009. V.155. P. 338-346.

60. Chang E., Welch S., Luna J., Giacalone J., Francke U., Generation of a human chromosome 18-specific YAC clone collection and mapping of 55 unique YACs by FISH and fingerprinting // Genomics. 1993. V. 17. P. 393-402.

61. Chi-Wei L., Chang S.L., Weng C.F., Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP) regulates the expression of PACAP in cultured tilapia astrocytes // Exp. Biol. Med. (Maywood). 2007. V. 232. P. 262-276.

62. Ciabattini A., Parigi R., Isticato R., Oral priming of mice by recombinant spores of Bacillus subtilis // Vaccine. 2004. V. 22. P. 4139-4143.

63. Ciffo F. Determination of the spectrum of antibiotic resistance of the Bacillus subtilis strains of Enterogermina // Chemioterapia. 1984. V. Ill N 1. P. 45-51, 127.

64. Ciprandi G., Scordamaglia A., Venuti D., Caria M., Canonica G.W., In vitro effects of Bacillus subtilis on the immune response // Chemioterapia. 1986. V. 6. P. 404—407.

65. Codex Alimentarius FAO/WHO Food Standards: http://www.codexalimentarius.net.

66. Colwell C.S., Michel S., Itri J., Rodriguez W., Tam J., Lelievre V., Hu Z., Liu X., Waschek J.A., Disrupted circadian rhythms in VIP- and PHI-deficient mice // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 2003. V. 285. P. 939-949.

67. Cravador A., Jacobs P., Van Elsen A., Lacroix C., Colau B., Van Alphen P., Herzog A., Bollen A. Total DNA synthesis and cloning in Escherichia coli of a gene coding for the human growth hormone releasing factor. // Biochimie. 1985. V. 67. P. 829-834.

68. Cummings K.J., Gray S.L., Simmons C.J., Kozak C.A., Sherwood N.M., Mouse pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP): gene, expression and novel splicing // Mol. Cell Endocrinol. 2002. V. 192. P. 133-145.

69. Czerucka D., Rampal P., Experimental effects of Saccharomyces boulardii on diarrheal pathogens // Microb. and Infect. 2002. V. 4. P. 733-739.

70. D'Arienzo R., Maurano F., Mazzarella G., Bacillus subtilis spores reduce susceptibility to Citrobacter rodentium-mediated enteropathy in a mouse model // Res. Microbiol. 2006. V. 157. P. 891-897.

71. Daniel P.B., Habener J.F., Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide gene expression regulated by a testis-specific promoter in germ cells during spermatogenesis // Endocrinology. 2000. V. 141. P. 1218-1227.

72. De Boer A.S., Diderichsen B., On the safety of Bacillus subtilis and B. amyloliquefaciens: a review // Appl. Microbiol, and Biotechnol. 1991. V. 36. P. 1-4.

73. Dolle P., Castrillo J.L., Theill L.E., Deerinck T., Ellisman M., Karin M., Expression of GHF-1 protein in mouse pituitaries correlates both temporally and spatially with the onset of growth hormone gene activity // Cell. 1990. V. 60. P. 809-820.

74. Donohue D.C., Salminen, S. Saferty of probiotic bacteria // Asia Pacif. J. Clin. Nutr. 1996. V. 5. P. 25-28.

75. Due L.H., Hong A.H., Nguyen Q.U., Cutting S.M., Intracellular fate and immunogenicity of B. subtilis spores // Vaccine. 2004. V. 22. P. 1873-1885.

76. Due L.H., Hong H.A., and Cutting S.M., Germination of the spore in the gastrointestinal tract provides a novel route for heterologous antigen delivery // Vaccine. 2003. V. 21. P. 4215—4224.

77. Due L.H., Hong H.A., Atkins H.S., et al., Cutting, immunization against anthrax using Bacillus subtilis spores expressing the anthrax protective antigen // Vaccine. 2007. V.25. P. 346-355.

78. Due L.H., Hong H.A., Fairweather N., et al., Bacterial spores as vaccine vehicles // Infect Immun. 2003. V. 71. P. 2810-2818.

79. Eipper B.A., Staffers D.A., Mains R.E., The biosynthesis of neuropeptides: peptide alpha-amidation // Annu. Rev, Neurosci. 1992. V. 15. P. 57-85.

80. Fakhry S., Sorrentini I., Ricca E., et al., Characterisation of spore forming Bacilli isolated from the human gastrointestinal tract // J. Appl. Microbiol. 2008. V. 105. P. 2178-2186.

81. Feinberg L., Jorgensen J., Haselton A., et al., Arthromitus (Bacillus cereus) symbionts in the cockroach Blaberus giganteus: Dietary influences on bacterial development and population density // Symbiosis. 1999. V. 27. P. 109-123.

82. Flajnik M.F., Kasahara M., Comparative genomics of the MHC: glimpses into the evolution of the adaptive immune system // Immunity. 2001. V. 15. P. 351-362.

83. Frechilla D., Garcia-Osta A., Palacios S., Cenarruzabeitia E., Del Rio J., BDNF mediates the neuroprotective effect of PACAP-38 on rat cortical neurons // Neuroreport. 2001. V. 12. P. 919-923.

84. Fritze D., Taxonomy and systematics of the aerobic endospore forming bacteria: Bacillus and related genera. In: Ricca E., Henriques A.O., and Cutting S.M. (Eds.), Bacterial Spore Formers //Norfolk, UK: Horizon Biosience, pp. 2004. V. 17-34.

85. Frohman L.A., Szabo M., Berelowitz M., Stachura M.E., Partial purification and characterization of a peptide with growth hormone-releasing activity from extrapituitary tumors in patients with acromegaly // J. Clin. Invest. 1980. V. 65 N. 1. P. 43-54.

86. Fujita M., Musch M.W., Nakagawa Y., et al., The Bacillus subtilis quorum-sensing molecule CSF contribute to intestinal homoestasis via OCTN2, a host cell membrane transporter // Cell Host & Microb. 2007. V. 1. P. 299-308.

87. Godic-Torcar K., Matijasi B.B., Partial Characterisation of Bacteriocins Produced by Bacillus cereus Isolates from Milk and Milk Products. Bacteriocins Produced by B. cereus from Milk // Food Technol. and Biotechnol. 2003. V. 41. N. 2. P. 121-129.

88. Godic-Torcar K., Matijasic B.B., Partial Characterisation of Bacteriocins Produced by Bacillus cereus Isolates from Milk and Milk Products // Food Technol. And Biotechnol. 2003. V. 41. N. 2. P. 121-129.

89. Golden J.A., Holoprosencephaly: a defect in brain patterning / J. Neuropathol. Exp. Neurol. 1998. V. 57. P. 991-999.

90. Gracia-Navarro F., Castaño J.P., Malagon M.M., Torronteras R., Subcellular responsiveness of amphibian hormone cells after TSH-releasing hormone stimulation // Gen. Comp. Endocrinol. 1991. V. 84. P. 94-103.

91. Gracia-Navarro F., Lamacz M., Tonon M.C., Vaudry H., Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide stimulates calcium mobilization in amphibian pituitary cells // Endocrinology. 1992. V. 131. P. 1069-1074.

92. Green D.H., Wakeley P.R., Page A., Barnes A., Baccigalupi L., Ricca E., Cutting S.M., Characterization of two Bacillus probiotics // Appl. and Environ. Microbiol. 1999. V. 65. P.4288-4291.

93. Green D.H., Wakeley P.R., Page A., et al., Characterization of two Bacillus probiotics // Appl. and Environ. Microbiol. 1999. V. 65. P. 4288^1291.

94. Guarner F., Malagelada J.R., Gut flora in health and disease // Lancet. 2003. V. 361. P. 512-519.

95. Guillemin R., Brazeau P., Bohlen P., Esch F., Ling N., Wehrenberg W.B. Growth hormone-releasing factor from a human pancreatic tumor that caused acromegaly // Science. 1982. V. 218. P. 585-587.

96. Guinebretiere M.H., Broussolle, V., Nguyen-The, Ch., Enterotoxigenic Profiles of Food-Poisoning and Food Borne Bacillus cereus Strains // J. Clin. Microbiol. 2002. V. 40. N. 8. P. 3053-3056.

97. Guo X., Li D., Lu W., Piao X., Chen X., Screening of Bacillus strains as potential probiotics and subsequent confirmation of the in vivo effectiveness of Bacillus subtilis MAI39 in pigs // Antonie van Leeuwenhoek. 2006. V. 90. N. 2. P. 139-146.

98. Hattori, Z., Misawa, H., Igarashi, I., Sugiya, Y., Effects of lactic acid-forming bacteria on Vibrio comma inoculated into intestinal segments of rabbits //. Bacteriol. 1965. V. 90. P. 541-545.

99. Henriques A.O., Moran C.P., Jr. Structure, assembly, and function of the spore surface layers // Ann. Rev. Microbiol. 2007. V. 61. P. 555-588.

100. Higgins L.M., Frankel G., Douce G., et al., Citrobacter rodentium infection in mice elicits a mucosal Thl cytokine response and lesions similar to those in murine inflammatory bowel disease // Infect. Immun. 1999. V. 67. P. 3031-3039.

101. Himick B.A., Golosinski A.A., Jonsson A.C., Peter R.E., CCK/gastrin-like immunoreactivity in the goldfish pituitary: regulation of pituitary hormone secretion by CCK-like peptides in vitro // Comp. Endocrinol. 1993. V. 92. P. 88-103.

102. Himick B.A., Peter R.E., Bombesin-like immunoreactivity in the forebrain and pituitary and regulation of anterior pituitary hormone release by bombesin in goldfish // Neuroendocrinology. 1995. V. 61. P. 365-376.

103. History of Natto and Its Relatives // Soyfoods Center, Lafayette, California, 2004. www.thesovdaily.com/ SFC/Fsoyfoods 453.asp

104. Hoa T.T., Baccigalupi, L., Huxham. A., et al., Characterization of Bacillus species used for oral bacteriotherapy and bacterioprophylaxis of gastrointestinal disorders // Appl. and Environ. Microbiol. 2000. V. 66. P. 5241-5247.

105. Hoa T.T., Due L.H., Isticato R., Baccigalupi L., Ricca E., Van P.H., Cutting S.M., Fate and dissemination of Bacillus subtilis spores in a murine model // Appl. and Environ. Microbiol. 2001. V. 67. P. 3819-3823.

106. Hoa T.T., Due L.H., Isticato R., et al., Fate and dissemination of Bacillus subtilis spores in a murine model // Appl Environ Microbiol. 2001. V. 67. P. 3819-3823.

107. Hoang T.H., Hong H.A., Clark G.C., et al., Recombinant Bacillus subtilis expressing the Clostridium perfringens alpha toxoid is a candidate orally delivered vaccine against necrotic enteritis // Infec Immun. 2008. V. 76. P. 5257-5265.

108. Hong H.A., Khaneja R., Tam N.M., Bacillus subtilis isolated from the human gastrointestinal tract // Res Microbiol. 2009. V. 160. P. 134-143.

109. Hong, H.A., Due L.H., Cutting S.M. The use of bacterial spore formers as probiotics / FEMS Microbiol. Rev. 2005. V. 29. N. 4. P. 813-835.

110. Hosoi T., Ametani A., Kiuchi K., Kaminogawa S., Changes in fecal microflora induced by intubation of mice with Bacillus subtilis (natto) spores are dependent upon dietary components // Can. J. Microbiol. 1999. V. 45. P. 59-66.

111. Hosoi T., Ametani A., Kiuchi K., Kaminogawa S., Improved growth and viability of lactobacilli in the presence of Bacillus subtilis (natto), catalase, or subtilisin // Can. J. Microbiol. 2000. V. 46. P. 892-897.

112. Hosoi T., Hirose R., Saegusa S., et al., Cytokine responses of human intestinal epithelial-like Caco-2 cells to the nonpathogenic bacterium Bacillus subtilis (natto) // Int J Food Microbiol 2003. V. 2. P. 255-264.

113. Hosoi T., Kiuchi K., Natto A food made by fermenting cooked soybeans with Bacillus subtilis (natto) II Handbook of Fermented Functional Foods, Farnworth E.R. (editor). -Boca Raton, Fla., CRC Press. 2003. P. 227-245.

114. Hosoi, T., Ametani, A., Kiuchi, K., Kaminogawa, S., Changes in fecal microflora induced by intubation of mice with Bacillus subtilis (natto) spores are dependent upon dietary components // Can. J. Microbiol. 1999. V. 45. P. 59-66.125

115. Hu H., Sa Q., Koehler T.M., et al., Inactivation of Bacillus anthracis spores in murine primary macrophages // Cell Microbiol 2006. V. 8. P. 1634-1642.

116. Huang J.M., La Ragione R., Nunez A., Cutting S.M., Immunostimulatory activity of Bacillus spores // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2008. V. 53. P. 195-203.

117. Huang J.M., La Ragione R.M., Cooley W.A., Cytoplasmic delivery of antigens by Bacillus subtilis enhances Thl responses // Vaccine. 2008. V. 26. P. 6043-6052.

118. Hyronimus B., Le Marrec C., Hadj Sassi A., Deschamps A., Acid and bile tolerance of spore-forming lactic acid bacteria // Int., J. Food Microbiol. 2000. V. 61. P. 193-197.

119. Hyronimus B., Le Marrec C., Urdaci M.C., Coagulin, a bacteriocin-like inhibitory substance produced by Bacillus coagulans 14 // J. Appl. Microbiol. 1998. V. 85. P. 42-50.

120. Inooka H., Ohtaki T., Kitahara O., Ikegami T., Endo S., Kitada C., Ogi K., Onda H., Fujino M., Shirakawa M., Conformation of a peptide ligand bound to its G-protein coupled receptor//Nat. Struct. Biol. 2001. V. 8. P. 161-165.

121. Ishibashi N., Yamazaki S., Probiotics and safety // Amer. J. Clin. Nutr. 2001. V. 73. P. 465-470.

122. Isticato R. D., Scotto Di Mase, Mauriello E.M.F., et al., Amino terminal fusion of heterologous proteins to CotC increases display efficiencies in the Bacillus subtilis spore system // BioTechniques. 2007. V.42. P. 151-156.

123. Isticato R., Cangiano G., De Felice M., Ricca E., Display of molecules on the spore surface. In: E. Ricca, A.O. Henriques, and S.M. Cutting (Eds.) // Bacterial Spore Formers. Norfolk, UK: Horizon Biosience. 2004. P. 193-200.

124. Isticato R., Cangiano G., Tran H.T., Surface display of recombinant proteins on Bacillus subtilis spores // J Bacteriol. 2001. V. 183. P. 6294-6301.

125. Isticato R., Esposito G., Zilhao R., Assembly of Multiple CotC forms into the Bacillus subtilis spore coat II J Bacteriol. 2004. V. 186. P. 1129-1135.

126. Jadamus A., Vahjen W., Simon O., Growth behavior of a spore-forming probiotic strain in the gastrointestinal tract of broiler chicken and piglets // Arch. Tierernahr. 2001. V. 54. P. 1-17.

127. Jadamus A., Vahjen W., Simon O., Studies on the mode of action of probiotics: effects of the sporespecific dipicolinic acid on selected intestinal bacteria // J. Agr. Sci. 2005. V. 143. P. 529-535.

128. Jones S.W., Paredes C.J., Tracy B., The transcriptional program underlying the physiology of clostridial sporulation // Genome Biol. 2008. V. 9. P. 114.

129. Kamnasaran D., Genetic analysis of psychiatric disorders associated with human chromosome 18 // Clin. Invest. Med. 2003. V. 26. P. 285-302.

130. Kieffer T.J., Habener J.F., The glucagon-like peptides // Endocr. Rev. 1999. V. 20. P. 876913.

131. Klobutcher L.A., Ragkousi K., Setlow P., The Bacillus subtilis spore coat provides "eat resistance" during phagocytic predation by the protozoan Tetrahymena thermophila II Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2006. V. 103. P. 165-170.127

132. La Ragione R.M., Casula G., Cutting S.M., Woodward M.J., Bacillus subtilis spores competitively exclude Escherichia coli 078:K80 in poultry // Vet. Microbiol. 2001. V. 79. P. 113-142.

133. La Ragione R.M., Woodward M.J., Competitive exclusion by Bacillus subtilis spores of Salmonella enterica serotype Enteritidis and Clostridium perfringens in young chickens // Vet. Microbiol. 2003. V. 94. P. 245-256.

134. Lamperti E.D., Rosen K.M., Villa-Komaroff L., Characterization of the gene and messages for vasoactive intestinal polypeptide (VIP) in rat and mouse // Mol. Brain Res. 1991. V. 9. P. 217-231.

135. Lee K.H., Jun K.D., Kim W.S., Paik H.D., Partial characterization of polyfermenticin SCD, a newly identified bacteriocin of Bacillus polyfermenticus II Lett. Appl. Microbiol. 2001. V. 32. P. 146-151.

136. Lee L.T., Lee V.H., Yuan P.Y., Chow B.K., Identification of repressor element 1 in secretin/PACAP/VIP genes. Ann. / NY Acad. Sci. 2006. V. 1070. P. 388-392.

137. Lee L.T., Siu F.K., Tam J.K., Lau I.T., Wong A.O., Lin M.C., Vaudry H., Chow B.K., Discovery of growth hormone-releasing hormones and receptors in nonmammalian vertebrates // Proc. Natl. Acad. Sci. US. 2007. V. 104. P. 2133-2138.

138. Lee S.Y., Choi J.H., Xu Z., Microbial cell-surface display // Trends Biotechnol. 2003. V. 21. P. 45-52.

139. Li M., Maderdrut J.L., Lertora J.J., Batuman V., Intravenous infusion of pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP) in a patient with multiple myeloma and myeloma kidney: a case study // Peptides. 2007. V. 28. P. 1891-1895.

140. Li M., Mbikay M., Arimura A., Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide precursor is processed solely by prohormone convertase 4 in the gonads // Endocrinology. 2000. V. 141. P. 3723-3730.

141. Li M., Mbikay M., Nakayama K., Miyata A., Arimura A., Prohormone convertase PC4 processes the precursor of PACAP in the testis. Ann. // NY Acad. Sci. 2000. V. 921. P. 333-339.

142. Li M., Nakayama K., Shuto Y., Somogyvari-Vigh A., Arimura A., Testisspecific prohormone convertase PC4 processes the precursor of pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP) // Peptides. 1998. V. 19. P. 259-268.

143. Li M., Shuto Y., Somogyvari-Vigh A., Arimura A., Prohormone convertases 1 and 2 process ProPACAP and generate matured, bioactive PACAP38 and PACAP27 in transfected rat pituitary GH4C1 cells//Neuroendocrinology. 1999. V. 69. P. 217-226.

144. Loo V.G., Poirier L., Miller M.A., et al., A Predominantly Clonal Multi-Institutional Outbreak of Clostridium difficile -Associated Diarrhea with High Morbidity and Mortality //N. Engl. J. Med. 2005. V. 353. N. 23 (8). P. 2442-2449.

145. Margot P., Karamata D., The wprA gene of Bacillus subtilis 168, expressed during exponential growth, encodes a cell-wall-associated protease // Microbiology. 1996. V. 142 (Pt 12). P. 3437-3444.

146. Margulis L., Jorgensen J.Z., Dolan S., et al., The Arthromitus stage of Bacillus cereus: Intestinal symbionts of animals // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1998. V. 95. P. 12361241.

147. Mathers J.K., Smith H., Carter S., Dose-response effects of raw potato starch on small-intestinal escape, large-bowel fermentation and gut transit time in the rat // Br. J. Nutr. 1997. V. 78. P. 1015-1029.

148. Matsuzaki S., Tohyama M., Regulation of pituitary adenylyl cyclaseactivating polypeptide (PACAP, ADCYAP1: adenylyl cyclase-activating polypeptide 1) in the treatment of schizophrenia. Expert Opin // Ther. Targets. 2008. V. 12. P. 1097-1108.

149. Mauriello E.M.F., Cangiano G., Maurano F., Germination-independent induction of cellular immune response by Bacillus subtilis spores displaying the C-fragment of the tetanus toxin // Vaccine. 2007. V. 25. P. 788-793.

150. Mauriello E.M.F., Due L.H., Isticato R., et al., Display of heterologous antigens on the Bacillus subtilis spore coat using CotC as a fusion partner // Vaccine. 2004. V. 22. P. 1177-1187.

151. Mayo K.E., Godfrey P.A., Suhr ST., Kulik D.J., Rahal J.O., Growth hormone-releasing hormone: synthesis and signaling // Recent Prog. Horm. Res. 2004. V. 50. P. 35-73.

152. Mazza P., Zani F., Martelli P., Studies on the antibiotic resistance of Bacillus subtilis strains used in oral bacteriotherapy // Boll. chim. farm. 1992. V. 131. P. 401^108.

153. McFarlin D.R., Lehn D.A., Moran S.M., MacDonald M.J., Epstein M.L., Sequence of a cDNA encoding chicken vasoactive intestinal peptide (VIP) // Gene. 1995. V. 154. P. 211213.

154. McKevitt M.T., Bryant K.M., Shakir S.M., et al., Effects of endogenous D-alanine synthesis and autoinhibition of Bacillus anthracis germination on in vitro and in vivo infections // Infect. Immun. 2007. V. 75. P. 5726-5734.

155. McRory G.E., Parker R.L., Sherwood N.M., Expression and alternative processing of a chicken gene encoding both growth hormone-releasing hormone and pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide // DNA and cell biology. 1997. 16 N. 1. P. 95-102.

156. Melamed P., Eliahu N., Levavi-Sivan B., Ofir M., Farchi-Pisanty 0., Rentier-Delerue F., Smal J., Yaron Z., Naor Z., Hypothalamic and thyroidal regulation of growth hormone in tilapia. Gen. Comp. // Endocrinol. 1995. V. 97. P. 13-30.

157. Meroni P.L., Palmieri R., Barcellini W., de Bartolo G., Zanussi C., Effect of long-term treatment with Bacillus subtilis on the frequency of urinary tract infections in older patients // Chemioterapia. 1983. V. II N. 2. P. 142-144.

158. Mohan J.C., Arora R., Khalilullah M., Preliminary observations on effect of Lactobacillus sporogenes on serum lipid levels in hypercholesterolemic patients // Indian J. Med. Res. 1990. V. 92. P. 431-432.

159. Moir A., How do spores germinate // J. Appl. Microbiol. 2006. V.101. P. 526-530.

160. Muscettola M., Grasso G., Blach-Olszewska Z., Migliaccio P., Borghesi-Nicoletti C., Giarrantana M., Gallo V.C., Effects of Bacillus subtilis spores on interferon production // Pharmacol. Res. 1992. V. 26. P. 176-177.

161. Mutt V., Jorpes J.E., Magnusson S., Structure of porcine secretin. The amino acid sequence // Eur. J. Biochem. 1970. V. 15. P. 513-519.

162. Nguyen T.N., Gourdon M.H., Hansson M., et al., Hydrophobicity engineering to facilitate surface display of heterologous gene products on Staphylococcus xylosus II J. Biotechnol. 1995. V. 42. P. 207-219.

163. Nicholson W.L., Roles of Bacillus endospores in the environment / Cell & Molec Life Sci. 2002. V. 59. P. 410-416.

164. Oggioni M., Ciabattini A., Cuppone A.M., Pozzi G., Bacillus spores for vaccine delivery // Vaccine. 2003. V. 21. P. 96-101.

165. Oggioni M.R., Pozzi G., Balensin P.E., Galieni P., Bigazzi C., Recurrent septicemia in an immunocompromised patient due to probiotic strains of Bacillus subtilis // J. Clin. Microbiol. 1998. V. 36. P. 325-326.

166. Olivereau M., Olivereau J., Vandesande F., Localization of growth hormone-releasing factor-like immunoreactivity in the hypothalamo-hypophysial system of some teleost species // Cell Tissue Res. 1990. V. 259. P. 73-80.

167. Ouhib O., Clavel Th., Schmitt Ph., The Production of Bacillus cereus Enterotoxins Is Influenced by Carbohydrate and Growth Rate // Curr. Microbiol. 2006. V. 53. N. 3. P. 222-226.

168. Paccez J.D., Nguyen H.D., Luiz W.B., et al., Evaluation of different promoter sequences and antigen sorting signals on the immunogenicity of Bacillus subtilis vaccine vehicles // Vaccine. 2007. V. 25. P. 4671-4680.

169. Paredes C.J., Alsaker K.V., and Papoutsakis E.T., A comparative genomic view of clostridial sporulation and physiology //Nat. Rev. Microbiol. 2005. V. 3. P. 969-978.

170. Parker D.B., Coe I.R., Dixon G.H., Sherwood N.M., Two salmon neuropeptides encoded by one brain cDNA are structurally related to members of the glucagons superfamily // Eur. J. Biochem. 1993. V. 215. P. 439-448.

171. Peeters K., Berghman L.R., Vandesande F., Comparative distribution of pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide and vasoactive intestinal polypeptide immunoreactivity in the chicken forebrain // Ann. NY Acad. Sci. 1998. V. 839. P. 417419.

172. Peng C., Huang Y.P., Peter R.E., Neuropeptide Y stimulates growth hormone and gonadotropin release from the goldfish pituitary in vitro // Neuroendocrinology. 1990. V. 52. P. 28-34.

173. Prokesova L., Novakova M., Julak J., Mara M., Effect of Bacillus firmus and other sporulating aerobic microorganisms on in vitro stimulation of human lymphocytes: a comparative study // Folia microbiol. 1994. V. 39. P. 501-504.

174. Przyrembel H., Consideration of possible legislation within existing regulatory frameworks // Amer. J. Clin. Nutr. 2001. V. 73. P. 471-^75.

175. Rajavelu P., Das S.D., A correlation between phagocytosis and apoptosis in THP-1 cells infected with prevalent strains of Mycobacterium tuberculosis II Microbiol. Immunol. 2007. V. 51. P. 201-210.

176. Rakoff-Nahoum S., Medzhitov R., Role of the innate immune system and host-commensal mutualism // Curr. Top Microbiol. Immunol. 2006. V. 308. P. 1-18.

177. Rhee K.J., Sethupathi P., Driks A., et al., Role of commensal bacteria in development of gut-associated lymphoid tissue and preimmune antibody repertoire // J. Immunol. 2004. V. 172. P. 1118-1124.

178. Richard V., Auwera P., Snoeck R., Daneau D., Meunier F., Nosocomial bacteremia caused by Bacillus species // Eur. J. Clin. Microbiol, and Infec. Diseases. 1988. V. 7. P. 783-785.

179. Rivier J., Spiess J., Thorner M., Vale W., Characterization of a growth hormone-releasing factor from a human pancreatic islet tumor // Nature. 1982. V. 300. P. 276-278.

180. Sanders M.E., Morelli L., Bush S., "Lactobacillus sporogenes" is not a Lactobacillus probiotic // ASM News. 2001. V. 67. P. 385-386.

181. Sanders M.E., Morelli L., Tompkins T.A., Sporeformers as Human Probiotics: Bacillus, Sporolactobacillus, and Brevibacillus II Compr. Rev. Food Sci. and Food Safety. 2003. V. 2. P. 101-110.

182. Sarkar P.K., Hasenack B., Nout M.J., Diversity and functionality of Bacillus and related genera isolated from spontaneously fermented soybeans (Indian Kinema) and locust beans (African Soumbala) // Int. J. Food Microbiol. 2002. V. 25. P. 175-186.

183. Satoh M., Uchiyama M., Nakajo S., Shioda S., Arimura A., Matsuda K., Expression of pituitary adenylate cyclase activating polypeptide (PACAP) mRNA in the brain of a teleost, stargazer//Zoological. Science. 1999. V. 16. P. 18.

184. Sayasith K., Brown K.A., Sirois J., Gonadotropin-dependent regulation of bovine pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide in ovarian follicles prior to ovulation / Reproduction. 2007. V. 133. P. 441-453.

185. Schauer D.B., Falkow S., The eae gene of Citrobacter freundii biotype 4280 is necessary for colonization in transmissible murine colonic hyperplasia // Infect. Immun. 1993. V. 61. P. 4654-4661.

186. Scientific Committee on Animal Nutrition on the use of certain enzymes in animal feeding stuffs European Commission Health & Consumer Protection Directorate-General. Adopted 4 June 1998, updated 16 October.

187. Seki H., Shiohara M., Matsumura, T., Miyagawa N., Tanaka M., Komiyama A., et al., Prevention of antibioticassociated diarrhea in children by Clostridium butyricum MIYAIRI // Pediat. Int. 2003. V. 45. P. 86-90.

188. Shida O., Takagi H., Kadowaki K., Komagata K., Proposal for two new genera, Brevibacillus gen. nov. and Aneurinibacillus gen. nov. II Int. J. Syst. Bacteriol. 1996. V. 46. P. 939-946.

189. Sneath P.H.A., Bergey's manual of systematic bacteriology // Baltimore, Md.: William & WilkinsCo. 1986. V. 2. P. 1104.

190. Spiess J., Rivier J., Thorner M., Vale W., Sequence analysis of a growth hormone releasing factor from a human pancreatic islet tumor // Biochemistry. 1982. V. 21 N. 24. P. 6037-6040.239. spores / Chemioterapia. 1983. V. II N. 5. P. 300-306.

191. Strange-Vognsen H.H., Arnbjerg J., Hannibal J., Immunocytochemical demonstration of pituitary adenylate cyclase activating polypeptide (PACAP) in the porcine epiphyseal cartilage canals //Neuropeptides. 1997. V. 31. P. 137-141.

192. Sugawara H., Inoue K., Iwata S., Shimizu T., Yamada K., Mori N., Miyata A., Neural-restrictive silencers in the regulatory mechanism of pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide gene expression // Regul. Pept. 2004. V. 123. P. 9-14.

193. Svoboda M., Gregoire A., Yanaihara C., Yanaihara N., Christophe J., Identification of two pro-VIP forms in a human neuroblastoma cell line // Peptides. 1986. V. 7. P. 7-15.

194. Tenson T, DeBlasio A, Mankin A., A functional peptide encoded in the Escherichia coli 23S rRNA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. V. 93 P. 5641-5646.

195. Urdaci M.C., Bressollier Ph., Pinchuk I., Bacillus clausii Probiotic Strains: Antimicrobial and Immunomodulatory Activities // J. Clin. Gastroenterol. 2004. V. 38. N. 2. P. 86-90.

196. Uyen N.Q., Hong H.A., Cutting S.M., Enhanced immunisation and expression strategies using bacterial spores as heat-stable vaccine delivery vehicles // Vaccine. 2007. V. 25. P. 356-365.

197. Vacca A., Pantaleo G., Ronco M., Dammacco F., Chemoimmunotherapy for multiple myeloma using an intermittent combination drug schedule (Melphalan Prednisone) and alternating courses of Bacillus subtilis.

198. Vaudry D., Gonzalez B.J., Basille M., Pamantung T.F., Fournier A., Vaudry H., PACAP acts as a neurotrophic factor during histogenesis of the rat cerebellar cortex // Ann. NY Acad. Sci. 2000. V. 921. P. 293-299.

199. Vaughan J.M., Rivier J.E., Spiess J., Peng C., Chang J.P., Peter P., Vale W., Isolation and characterization of hypothalamic growth hormone-releasing hormone from common carp Cyprinus carpio //Neuroendocrinology. 1992. V. 56. P. 539-549.

200. Wray V., Kakoschke C., Nokihara K., Naruse S., Solution structure of pituitary adenylate cyclase activating polypeptide by nuclear magnetic resonance spectroscopy // Biochemistry. 1993. V. 32. P. 5832-5841.

201. Wray V., Nokihara K., Naruse S., Ando E., Kakoschke C., Wei M., Synthesis, solution structure and biological action of PACAP-related peptide // Biomed. Pept. Proteins Nucleic Acids. 1995. V. 1. P. 77-82.

202. Wright A., Regulating the safety of probiotics the European approach / Curr. Pharm. http://ec.europa.eu/food/index en.htm 132. von Des. 2005. Vol. 11. P. 17-23.

203. Yamamoto K., Hashimoto H., Hagihara N., Nishino A., Fujita T., Matsuda T., Baba A., Cloning and characterization of the mouse pituitary adenylate cyclaseactivating polypeptide (PACAP) gene. // Gene. 1998. V. 211. P. 63-69.

204. Yang T.T., Tsao C.W., Li J.S., Wu H.T., Hsu C.T., Cheng J.T., Changes of dopamine content and cell proliferation by dexamethsone via pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide in PC12 cell. //Neurosci. Lett. 2007. V. 426. P. 45-48.

205. Youngman P., Perkins J.B., and Losick R., A novel method for the rapid cloning in Escherichia coli of Bacillus subtilis chromosomal DNA adjacent to Tn917 insertion // Mol Gen Genet. 1984. V. 195. P. 424-433.

206. Yu L.H., Cutting S.M., The effect of anti-spore antibody responses on the use of spores for vaccine delivery // Vaccine. 2009. V. 27. P. 4576-4584.

207. Zahner V., Rabinovitch L., Suffys P., Momen H., Genotypic diversity among Brevibacillus laterosporus strains // Appl. and Environ. Microbiol. 1999. V. 65. P. 51825185.

208. Zhou Z., Xia H., Hu X., et al., Oral administration of a Bacillus subtilis sporebased vaccine expressing Clonorchis sinensis tegumental protein 22.3 kDa confers protection against Clonorchis sinensis II Vaccine. 2008. V. 26. P. 1817-1825.

209. Ziggers D., Latest research in probiotics // All About Feed. 2010. V. 1. N. 5. P. 18-20.

210. Zilhao R., Serrano M., Isticato R., et al., Interactions among CotB, CotG, and CotH during assembly of the Bacillus subtilis spore coat. // J. Bacteriol. 2004. V. 186. P. 1110-1119.