Разработка оптимальных методов криоконсервирования кроветворных клеток пуповинной крови человека для трансплантаций тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат медицинских наук Гришина, Виктория Валерьевна

• Гришина, Виктория Валерьевна
• кандидат медицинских наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Гришина, Виктория Валерьевна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1 Источники стволовых клеток, используемых для трансплантации.

1.2 История трансплантаций ПК.

1.3 Преимущества и недостатки ПК.

1.4 Сбор пуповинной крови.

1.4.1. Обследование беременной.

1.4.2. Методы забора ПК.

1.5. Краткосрочное хранение ПК.

1.6. Предварительное обследование ПК.

1.7. Оценка потенциала стволовых клеток. Сравнительная характеристика с КМ и ПСК.

1.7.1. Клеточность.

1.7.2. CD34+.

1.73. КОЕ-ГМ.

1.8. Выделение стволовых клеток из ПК.

1.9. Криоконсервирование гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови.

1.9.1. Криопротекторы.

1.9.2. Замораживание.

1.9.3. Долгосрочное хранение.

1.9.4. Размораживание.

1.10. Архивирование биоматериала.

Глава П. Объекты, материалы и методы.

2.1. Объект и материалы исследования.

2.2. Методика сбора пуповинной крови.

2.3. Методика фракционирования пуповинной крови.

2.4. Методика криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови.

2.5. Лабораторные методы исследования.

2.5.1. Определение содержания форменных элементов.

2.5.2. Подсчет лейкоцитарной формулы.

2.5.3. Определение клеток с имунофенотипом CD34+.

2.5.4. Определение гранулоцитарно-моноцитарных клеток-предшественниц.

2.5.5. Определение жизнеспособности клеток.

2.5.6. Определение бактериального загрязнения крови.

23.7. Выявление ДНК возбудителей Neisseria gonorrhoeae, Toxplasma gondii и цитомегаловируса.

2.5.8. Определение наличия антител к ВИЧ-1/2,, HbsAg, антител к вирусу гепатита С.

2.5.9. Определение наличия антител к бледной трепонеме (серодиагностика сифилиса).

2.5.10. Компьютерная морфометрия форменных элементов ПК.

2.6. Измерение температуры биоматериала и крнобокса.

2.7. Методика создания компьютерной базы данных для архивирования пуповинной крови, находящейся на длительном хранении.

2.8. Методы статистической обработки результатов.

Глава III. Результаты исследования и их обсуждение.

3.1. Сбор пуповинной крови.

3.2. Краткосрочное хранение пуповинной крови.

3.3. Выделение клеточной фракции.

3.4. Криоконсервнрование пуповинной крови.

3.5. Динамика показателей ПК в процессе её сбора, сепарации и криоконсервации.

3.6. Архивирование пуновинной крови.

Глава IV. Заключение.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка оптимальных методов криоконсервирования кроветворных клеток пуповинной крови человека для трансплантаций»

Актуальность работы.

В последние годы для лечения злокачественных новообразований (как солидных, так и гематологических) и ряда неопухолевых заболеваний (наследственные болезни, болезни обмена, системные заболевания соединительной ткани) стали достаточно широко использоваться сверхинтенсивные курсы химиотерапии (высокодозная химиотерапия) с последующим восстановлением кроветворения трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток.

Гемопоэтические клетки для трансплантации могут быть получены у однояйцового HLA-идентичного близнеца (сингенная трансплантация), родственного или неродственного донора, совместимого по основным антигенам HLA (аллогенная трансплантация) или у самого больного (аутологичная трансплантация). До недавнего времени во всех вышеперечисленных случаях гемопоэтические клетки получали из костного мозга и/или периферической крови [14], однако данные методики не лишены существенных недостатков. В связи с риском развития смертельно опасной реакции «трансплантат против хозяина при проведении аллогенной трансплантации необходимо наличие HLA-совместимого донора. В этом отношении идеальными донорами гемопоэтических стволовых клеток являются HLA-идентичные доноры-близнецы. Однако такая возможность имеется лишь у единичных больных и в данном случае отсутствует реакция «трансплантат против опухоли». Совместимого по основным локусам HLA-системы родственного донора имеют лишь 30-40% больных, а шанс на подбор неродственного донора еще более ограничен. Использование аутологичных стволовых клеток, полученных в период уже существующей болезни, несет в себе потенциальную опасность - возможную контаминацию опухолевыми клетками при ретрансфузии. Кроме того, получение гемопоэтических клеток из костного мозга и из периферической крови требует проведения инвазивных манипуляции и введение лекарственных веществ, представляющих потенциальную опасность для жизни и здоровья донора.

Альтернативным источником репопулирующих гемопоэтических клеток пригодным для трансплантации является пуповинная кровь. Использование пуповинной крови имеет целый ряд преимуществ перед другими источниками кроветворных клеток:

1 .Отсутствует риск для здоровья матери и ребенка (донора).

2. Увеличивается возможность использования не полностью совместимых по HLA-системе (от 1 до 3 антигенов) трансплантатов[40,47].

3.Увеличивается вероятность нахождения редких HLA-типов трансплантатов.

4. Значительно снижается риск передачи некоторых латентных инфекций, передаваемых трансмиссивным путем [71].

5. Появляется относительно недорогая форма биологического страхования жизни в связи с возможностью использования клеток пуповинной крови в качестве аутологичного трансплантата.

В тоже время по принятым стандартам для адекватного восстановления гемопоэза требуется определенное количество гемопоэтических клеток на килограмм веса реципиента. В связи с этим принципиальным недостатком пуповинной крови можно считать малое абсолютное количество гемопоэтических клеток и невозможность повторного получения их от того же донора. По данным литературы из 2100 заготовленных образцов пуповинной крови для реципиентов с массой тела 50-70 кг. потенциальными трансплантатами могли считаться лишь 25%, для реципиентов с массой тела до 35 кг. - 67% и лишь для больных с массой тела ниже 10кг. —100% [49].

В связи с выше сказанным основной задачей при заготовке пуповинной крови является обеспечение наименьшей потери стволовых клеток. В настоящее время в мире существует несколько методик получения, фракционирования и криоконсервирования пуповинной крови. Актуальностью данного исследования является поиск методов фракционирования, концентрации и состава криопротектора, а так же режима замораживания, способных обеспечить наименьшие потери клеточной массы и её функциональной активности.

Цель исследования.

Разработать единый технологический процесс, включающий в себя сбор, фракционирование, тестирование, криоконсервирование и архивирование пуповинной крови, подлежащей длительному хранению при ультранизких температурах, способный обеспечить минимальные потери клеточной массы, используя опыт криоконсервации костного мозга и периферических стволовых клеток в банке криоконсервированных биоматериалов ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН.

Задачи исследования.

1. Изучить закрытый способ сбора пуповинной крови.

2. Модифицировать методику закрытого способа сбора пуповинной крови в соответствии с условиями и средствами отечественного здравоохранения.

3. Разработать оптимальную методику фракционирования пуповинной крови.

4. Определить сроки и условия хранения ПК до момента ее обработки.

5. Подобрать оптимальный состав и концентрацию криопротектора.

6. Провести оценку потерь стволовых клеток на этапах фракционирования и криоконсервирования ПК.

7. Разработать оптимальную методику замораживания.

8. Создать компьютерную базу данных для исключения ошибок при архивировании хранящегося биоматериала.

Научная новизна.

Модифицирован закрытый способ сбора пуповинной крови в соответствии с условиями и средствами отечественного здравоохранения. Впервые применены: метод фракционирования ПК в полиглюкине, использование низких концентраций диметилсульфоксида в качестве криопротектора в сочетании с полиглюкином, оригинальная методика замораживания, а также произведена тщательная оценка количественного и качественного состава пуповинной крови на всех этапах обработки биоматериала. Впервые создана компьютерная база данных для архивирования пуповинной крови.

Практическая значимость работы.

Разработан легко осуществимый и эффективный единый технологический процесс заготовки пуповинной крови, подлежащей длительному хранению при ультранизких температурах, не требующий дорогостоящего оборудования и особой подготовки медицинского персонала. Модифицирована методика закрытого способа забора пуповинной крови. Разработаны методы сепарации и криоконсервирования пуповинной крови с использованием общедоступных реактивов и оборудования, обладающих высокой эффективностью и небольшой себестоимостью.

Проведенные исследования позволили оценить необходимость использования различных лабораторных исследований на всех этапах криоконсервания пуповинной крови. Все это в комплексе с компьютерной базой данных позволило создать банк пуповинной крови (300 образцов). Получено решение о выдаче патента на изобретение «Способ криоконсервирования пуповинной крови» (заявка № 2004116209).

Заключение диссертации по теме «Онкология», Гришина, Виктория Валерьевна

Выводы.

Показано, что разработанный нами единый технологический процесс сбора, тестирования, фракционирования и замораживания пуповинной крови в совокупности с разработанным алгоритмом действий медицинского персонала на всех этапах эффективен, надежен, прост в исполнении' и может широко использоваться в клинической практике отечественного здравоохранения (на основе данных методик создан действующий банк пуповинной крови).

V Показано, что для сбора ПК можно использовать стандартные строенные контейнеры для забора донорской крови(500/300/300) с антикоагулянтом фирмы «Baxter», из которых антикоагулянт не удаляется, а используется полностью. Контейнеры фирмы «Baxter» более надежны в применении.

S Выявлена и доказана прямая зависимость между числом ЯСК и объемом собранной ПК. Тем не менее при решении вопроса о возможности дальнейшего хранения малых объемов ПК следует ориентироваться не на объем, а на абсолютное количество ядросодержащих клеток в эксфузате.

S Впервые установлена обратная корреляция эффективности фракционирования от времени хранения пуповинной крови с момента забора до момента начала ее обработки. Для более успешного выделения ядросодержащих клеток из ПК время хранения биоматериала должно быть минимально и не превышать 24 часов.

S Впервые был применен полиглюкин для фракционирования пуповинной крови. Доказана его высокая эффективность, как седиментирующего вещества (процент выделенных - ЯСК 86,2±7,34%, процент удаленных эритроцитов - 95,95±3,68%). Установлено, что для выделения ядросодержащих клеток с минимальными потерями и более полного осаждения эритроцитов целесообразно использовать полиглюкин при добавлении к ПК в соотношении 1:1.

S Показано, что использование осадка, полученного после фракционирования пуповинной крови и обедненного лейкоцитарной фракцией, в качестве образцов для различных анализов значительно уменьшает потери ядросодержащих клеток.

•S Доказано, что применение 5% концентрации ДМСО в сочетании с полиглюкином обеспечивает полноценность криопротекции без потерь функциональной активности гемопоэтических клеток. Доказано, что замораживание ПК в криобоксе в парах жидкого азота эффективно (потерь ЯСК не было, % жизнеспособных лейкоцитов после размораживания 92,81±3,20%), надежно (исключает человеческий фактор, отказ электроники, перебои в электроснабжении) и не требует дорогостоящей аппаратуры.

S Показано, что впервые созданная и протестированная нами компьютерная база данных для хранения информации о большом количестве образцов пуповинной крови (20000), позволяет исключить ошибки, ускорить поиск нужной информации и облегчить труд персонала.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Гришина, Виктория Валерьевна, 2006 год

1. Абдулкадыров К.М. Заготовка, хранение и лабораторное тестирование пуповинной крови // Абдулкадыров К.М. Гематология. Новейший справочник.-М.: «Эксмо», 2004. С. 890-901.

2. Абдулкадыров К.М., Романенко Н.А., Старков Н.Н. Получение и клиническое применение периферических гемопоэтических стволовых клеток из пуповинной крови // Вопросы онкологии. 2000,- 46(№5).- С. 513-20.

3. Алексеев И.В., Волынец М.Д., Владимирская Е.Б. и др. // Гематология и трансфузиология. 1996.- Т.41, №2.- С.16-18.

4. Владимирская Е.Б., Замораева Н.В., Волынин М.В. Пуповинная кровь -альтернативный источник стволовых клеток для трансплантации // Педиатрия. -1997.- №4.-С.9-12.

5. Инструкция по контролю стерильности консервированной крови, ее компонентов, препаратов консервированного костного мозга, кровезаменителей и консервирующих растворов // Минздрав СССР. -Москва, 1985.-5с.

6. ЛангН.Р. Стимуляция лимфоцитов. М.:Медицина, 1976.-288 с.

7. Новохатский А.С., Хлябич Г.Н. Теория и практика лабораторной диагностики синдрома приобретенного иммунодефицита. Москва, 1992. - С.35-45.

8. О совершенствовании серологической диагностики сифилиса // Приказ Минздрава РФ№87 от 26.01.01. 11-Зс.

9. Об унификации микробиологических (бактериологических) методовисследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений // Приказ Минздрава СССР №535 от 22.04.85. С.5-10.

10. Петри А., Сэбин К. Наглядная* статистика в медицине. Москва: Издательский дом ГЭОТАР-МЕД, 2003,- С.16-83.

11. Румянцев А.Г., Аграненко В.А. Гемотрансфузионная терапия в педиатрии и неонатологии. Москва: МАКС Пресс, 2002. - С.316-3391

12. Трапезников Н.Н., Аксель Е.М. Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ. Москва, 2001.

13. Федотенков А.Г., Шишкина И.Д. Данилова Л.Д. и др. Ограждающие растворы для криоконсервирования костного мозга, // Гематология и трансфузиология. 1992. -№7-8.- С.12-15.

14. Чуйков В.А. Механизм криозащитной эффективности и фармакологические свойства диметилсульфоксида // Криобиология. -1989.- №1.- с. 3-10.

15. Юрасов С.В:, Владимирская Е.Б., Румянцев А.Г. и др. Выделение гемопоэтических стволовых клеток из пуповинной крови человека для трансплантации // Гематология и трансфузиология. 1997.- Т.42, №2.-С.10-15.

16. Anderson K.C. et All. Variation in blood component irradiation practice: implication for prevention of transfusion-associated graft-versus-host disease // Blood. 1991. - 77. - p. 2090-2102.

17. Abdel-Mageed A., Rosalio M.L.U., Hutcheson C.E. Effect of temperature variation on cell number, viability and clonogenic potential 1// Blood. 1997.-Vol.90, N.10.- P.321b (4194).

18. Adrian P. Gee. Bone marrow processing and purging: a practical guide. 1991. -p. 332-337.

19. Ballen K., Greiner D., Shulz L. et al. // Blood.- 1997.- Vol.90, №10. P.- 311b (4151).

20. Barcer JuletN., Wagner John E. Umbilical cord blood transplantation: current of he art. // Current Option in Oncology.- 2002,14,- p.160-164.

21. Bertolini F., Battaglia M. et al. Placental blood collection: Effects on Newborns //Blood.- 1995.- 85.- p. 3361-2.

22. Bonno M., Azuma E., Nakano T et al.// Bone Marrow Transplant.- 1997.-Vol.19, N.I.- P.83-85.

23. Broxmeyer H.E., Gordon G.W., Hangoc G. et al. Human umbilical cord blood as a potential source of transplantable hematopoietic stem/ progenitor cells// Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1989.- Vol.86.- P.3828 -3832.

24. Broxmeyer H.E., Kurtzberg J., Gluckman E. et al.// Blood Cells.- 1991.- Vol. 17.- P. 313-329.

25. Broxmeyer H.E., Srour E.F., High-efficiency recovery of functional hematopoietic progenitor and stem cells from human cord blood cryopreserved for 15 years // PNAS 2002 - v.100 (2). - p.645-650.

26. Broxmeyer, H.E., Douglas, G.W., Hangonc., Cooper, S., Bard, J., English, D., Amy, M., Thomas, L. & Boyse, E.A. Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1989.- 86.-p. 3828-32.

27. Cairo M.S., Wagner J.E.// Blood.-1997.-Vol.90,N12.-P.4665-4678.

28. Colony Assays of Hematopoietic Cells Using Methyllcellulose Media. An Introductory Technical Manual.// The Terry Fox Laboratory Media Preparation Servise. -Vancouver, 1992,- p.11-24.

29. Cullough J., Clay M.E., Fautsch S., Norreen H. et al. Proposed policies and procedures for the establishment of a cord blood bank // Blood cells. 1994. -Vol.20, N2.-P.609-626.

30. Davis J.M, S.D. Rowley, H.G. Braine, S. Piantadosi, G.W. Santos, Clinical toxicity of cryopreserved bone marrow graft infusion // Blood. -1990. 75. -P. 781-786.

31. De La Selle, Y., Gluckman, E., Bruley-Rosset M. Graft versus host disease and graft versus leukemia effect in mice grafted with newborn blood // Blood. -1998.-92. P. 3968-75.

32. Denning-Kendall P, Donaldson C, Nicol A et al. Optimal processing of human umbilical cord blood for clinical banking // Exp. Hematol.- 1996.- Vol.24, N.12.- P. 1394-1401.

33. Donaldson С., Armitage W.J., Denning-Kendall P.A. Optimal Cryopreservation of human umbilical cord blood/ / Bone Marrow Transplant.-1996.- Vol.18, N.4.- P.725-731.

34. Donna A Wall. The Case For Umbilical Cord Blood as the Unrelated Donor Hematopoietuc Stem Cell Source of Choice // Blood therapies in medicine. -2001.-Vol. 1, N 3. -P. 81-83.

35. Falkenburg J.H.F., Lim F.T.H. Использование пуповинной крови вместо костного мозга для аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток // РМЖ. 1996. - 3, № 4. - С. 24-31.

36. Forte K.J.//J. Pediatr Oncol.Nurs.-1997.-Vol. 14, N4 Р.213-214.

37. Garderet, L., Dulphy,N., Douay, С. et al. The umbilical cord blood and T cell repertoire: characteristics of a polyclonal and naive but completely formed repertoire // Blood. 1998. - 91. - P. 340-6.

38. Glave P.B., Beatty P., Ash R. et. al. // Blood.-1990.-Vol.75.-P.1728

39. Glucklnan E., Rocha V., Boyer-Chammard A. et al. Outcome of cord-blood transplantation fronl related and unrelated donors // N Engl J Med. 1997. -337.-P. 373-81.

40. Gluckman E. Current status of umbilical cord blood hematopoietic stem cell transplantattion. // Exp. Hematol. 2000. - 28. - P. 1197-205.

41. Gluckman E. and Rocha V. Umbilical cord blood transplantation // Clinical Bone Marrow and Blood Stem Cell Transplantation. 2004. - P. 1057-1073.

42. Gluckman E., Broxmeyer H.E. et al. Hematopoietic reconstitution in a patient with Fanconis anemia by means of umbilical-cord blood from HLA-identical sibling 11N Engl J Med. 1989. - 321. - P. 1174-78.

43. Gluckman E., Broxmeyer H.E. Hematopoietic Stem-Cell transplants using umbilical-cord blood//N. Engl. J. Med. -2001. V.344, 24. -P. 1860-61.

44. Gluckman E., Rocha V., Chastang C. Cord blood banking and transplant in Europ. Eurocord // Vox Sang.- 1998.- Vol. 74.- Suppl. 2.- P. 95-101.

45. Gonzalez Вагса E., Querol S., Granena A. // Bone Marrow Transplant.- 1997.-Vol.20, N4.- P.333-336.

46. Harris, D. T. Experience in autologous and allogeneic cord blood banking // J Hematother. 1996. - Vol. 5, N 2. - P. 123-128.12.

47. Herald S., Koehler A., Mueller A. et al. The placental blood program of jena cord blood bank // Blood. 1997.- Vol.90, N10.- P.326b.

48. Hertenstein B, Stefanic M, Schmeiser T et al. Cardiac toxicity of bone marrow transplantation: predictive value of cardiologic evaluation before transplant // J Clin. Oncol. 1994. - 12. - P. 998- 1004.

49. Hubl W., Iturraspe J., Hutcheson C.E. et al. Effect of storage on stem cell concentration and viability in cord blood// Blood. 1997. - Vol.90, N10,-P.326b.

50. Isomura H., Yamada M., Yoshida M. et al.// J. Med. Virol. 1997,- Vol.52, N4.- P.406-412.

51. Issaragrisil S., Visuthisakchai S., Tangnaitrisorana Y. et al.// Stem Cells.-1995.- Vol.13, N3.- P.71-75.

52. Jeffrey Szer. Cryopreservation and functional assment of harvested bone marrow and blood stem cells // Clinical Bone Marrow and Blood Stem Cell Transplantation. -2004. P. 450-456.

53. Jiirgen Zingsem, Erwin Strasser, Volker Weisbach, Robert Zimmermann, Jiirgen Ringwald, Tamme Goecke, Matthias Wilhelm Beckmann, and

54. Reinhold Eckstein. Cord blood processing with an automated and functionally closed system/ / Transfusion. 2003.- Vol. 43, No6.

55. Katzenstein H.M., Morgan E.R., Olsewski M et al. // Bone Marrow Transplant. 1997,- Vol.19, N8.- P.765-769

56. Kernan, N. A., Bartsch, G., Ash, R. C., et al. Analysis of 462 transplantations from unrelated donors facilitated by the National Marrow Donor Program. // N Engl. J Med. 1993 - 1328, 9. -P. 593-602.

57. Keung YK, Lau S, Elkayam U et al. Cardiac arrhythmia after infusion of ciyopreserved stem cells. Bone Marrow Transplant 1994; 14: 363-367.

58. Kogler G, Somville T, Gobel U, et al. Haematopoietic transplant potential of related cord blood: the first six yars of the EURICORD/NETCORD Bank Germany // Klin. Padiatr. 1999. - 211. -P. 224-32.

59. Kulski J.K., Khinsoe C., Piyce Т., Christiansen K. Use of a multiplex PCR to detect and identify Mycobacterium avium and M. intracellulare in blood culture fluids of AIDS patients // Journal of Clinical Microbiology. 1995. — 33.-P. 668-674.

60. Kulski J .К., Pryce T. Preparation of Mycobacterial DNA from Blood Culture Fluids by Simple Alkali Wash and Heat Lysis Method or PCR Detection // Journal of Clinical Microbiology. 1996. - Vol. 34, No.8. - p. 1985-1991.

61. Kurtzberg J, Laughlin M, Graham ML, et al. Placental blood as al source of hematopoietic stem cells for transplantation into unrelated recipients // N Engl. J Med. 1996. -335. - P. 157-66.

62. Kurtzberg Joanne. Umbilical Cord Blood Banking and Transplation // Christopher D. Hillyer et al. Blood Banking and Transfusion Medicine, 2003. -P. 593-8.

63. Laughlin Mary J. et al. Hematopoietic engraftment and survival recipients of umbilical cord blood from unrelated donors // N Engl J Med. 2001. -344,№24. - P. 1815-22.

64. Laughlin MJ. Umbilical Cord Blood for allogeneic transplantation in children and adults // Bone Marrow Transplantation. 2001. - 27. - P. 1-6.

65. Leung W, Ramirez M, Novelli EM, et al. In vivo engraftment potential, of clinical hematopoietic grafts // J Investig Med. 1998. - 46. - P. 303-311.

66. Madrigal, J.A., Cohen, S.B.A., Gluckman, E., Charron, D.J. Does cord blood transplantation result in lower graft versus host disease? It takes more than two to tango // Human Immunology. 1997. - 56. - P. 1-5.

67. Makino et al. A Simplified method for cryopreservation of peripheral blood stem cell at -80°C without rate-controlled freezing // Bone Marrow Transplantation. 1991. -8. - P. 239-44:

68. Mayani H, Lansdorp PM. Biology of human umbilical cord blood-derived hematopoietic stem/progenitor cells // Stem Cells. 1998. - 16. - P. 153-165.

69. Meiyman, H.T. and Hornblower, M. A method for freezing and washing red blood cells usinga highglycerol concentration // Transfusion. 1972. -12. - P. 145.

70. Morimoto Т., Shikada M., Yabe H. et al. // Rinsho Ketsueki.- 1997.- Vol.38, N7,- P.610-615.

71. Nagarajan R., Neglia J., Ramsay N. et al. Successful treatment of refractory Langerhans cell histiocytosis with unrelated cord blood transplantation // J Pediatr. Hematol. Oncol. -2001. 23. - P. 629-32.

72. Naiton H., Mimaya J., Horikoshi Y. et al. // Biol. Pharm. Bull.- 1998,- Vol. 21,N. 12.-P. 1371-1375.

73. Noort, W.A. & Falkenburg, I.H.F. Hematopoietic content of cord blood. In Cord Blood Characteristics. Role in Stem Cell Transplantatio // ed. S.B.A. Cohen, E. Gluckman, A. Madrigal, & P. Rubinstein, 2000. p. 13-37.

74. Perlov By Jordan H., MD. Cord blood banking: an ob's perspective // Contemporary Ob/gyn. -November 2002. p. 31-43.

75. Pettengell R., Luft Т., Henschler R. et al.// Blood. 1994.- Vol.84.- P.3652-3659.

76. Querol S., Gabarro M., Amat L. et al.// Bone Marrow Transplant. 1998.-Vol. 22.- Suppl. l.-P. 3-5.

77. Richter E., Eichler H., Raske D. et al. 5% Me2SO is sufficient to preserve stem cells derived from cord blood// Bone Marrow Transplant.- 1998.- Vol. 22.- Suppl. l.-P. S16.

78. Rocha V., Cornish J., Sievers E. L. Et al. Comparison of outcomes of unrelated bone marrow and umbilical cord blood transplants in children with acute leukemia. // Blood. 2001. — 97. - P. 2962-71.

79. Rubinstein, P., Carrier, C., Scaradavou, A. et al. Outcomes among 562 recipients of placental-blood transplants from unrelated donors // N Engl J Med. 1998. - 339,22. - P. 1565-1577.

80. Rubinstein, P., Dobrila, L., Rosenfield, R. E. et al. Processing and ciyopreservation of placental/umbilical cord blood for unrelated bone marrow reconstitution // Proc. Nate Acad. Sci. USA. 1995. - 92, 22. - P.10119-10122.

81. Rubinstein, P., Rosenfield, R. E., Adamson, J. W., and Stevens, С. E. Stored placental blood for unrelated bone marrow reconstitution. // Blood. -1993. — 81, 7.-P. 1679-1690.

82. Scott R., Burger. Umbilical Cord Blood Stem Cells. // Handbook of Transfusion Medicine Academic Press, 2001. P. 171-178.

83. Shlebak A.A., Marley S.B., Roberts I.A. et al. Optimal timing for processing and cryopreservation of umbilical cord haematopoietic stem cells for clinical transplantation //Bone Marrow Transplant.- 1999.- Vol. 23, N. 2.- P. 131-136.

84. Stevens K.//J. Perinat. Neonatal. Nurs.- 1997.- Vol.11, N3.-P.ll-29.

85. Stiff PJ., Koester A.R., Weidner M.K. et al. Autologous bone marrow transplantation using unfractionated cells cryopreserved in dymethylsulfoxide and hydroxyethyl starch without controlled-rate freezing // Blood.- 1987.-Vol.70, N 4.- p.974-978.

86. Tichelli A., Surbek D., Huxol H. et al. // Schweiz Med Wochenschr.- 1998.-Vol. 128, N. 42.-P. 1598-1601.

87. Toren A., Einat M., Fabian I., Nagler A. // Am. J. Hematol.- 1997.- V.56, N 3.-P.161- 167.

88. Turner M.L., McClelland D.B., Franklin I.M. Heamopoietic progenitor cell harvesting processing and storage: Global regulation to en sure the quality of products for patients //Br.J. Haemotol. 1997. - 99. - P.715-718.

89. Wagner J.E.// Cancer Treat. Res.- 1997. Vol.77.- P.187-216.

90. Wall DA, HN Winn, JM Noffsinger et al. Feasibility of an obstetrician-based cord blood collection network for unrelated donor umbilical cord blood banking // Maternal-Fetal Medicine. 1997. - 6. P. 320-3.

91. Warwick R.M., Barbara J.A. // Bone Marrow Transplant. 1998.- Vol. 21.-Suppl.3.- P. S40-42.

92. Wynter EA, Emmerson AJB, Testa NG: Properties of peripheral blood and cord blood stem Cells // Baillieres Clin Haematol. 1999. - 1,2. - P.l-17.

93. Zix-Kieffer I., Langer В., Euer D. // Bone Marrow Transplant.- 1996-Vol.18, N 1.- P.217- 220.

94. Padley D., Koorrtz F., Trigg ME., Gingrich R., Strauss R.G. Bacterial contamination rates following processing of bone marrow and peripheral blood progenitor cell preparations. // Transfusion. 1996. - 36( 1). - P. 53-6.