Разработка системы оценки иммунотропной активности бета-лактамных антибиотиков по показателю апоптоза клеток лимфоидного ряда in vitro с использованием метода проточной цитофлуориметрии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.25, кандидат фармацевтических наук Решетников, Станислав Игоревич

• Решетников, Станислав Игоревич
• кандидат фармацевтических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Решетников, Станислав Игоревич

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Клинико-фармакологические аспекты применения бета-лактамных антибиотиков.

1.1.1. Значение бета-лактамных антибиотиков для современной химиотерапии.

1.1.2. Фармакологические характеристики бета-лактамных антибиотиков.

1.1.2.1. Номенклатура класса.

1.1.2.2. Механизм и тип антибактериального действия бета-лактамных антибиотиков. Взаимосвязь структуры и действия.

1.1.2.3. Фармакокинетические характеристики бета-лактамных антибиотиков.

1.2. Значение и механизмы программированной клеточной гибели (апоптоза) в реализации иммунотропных эффектов антибиотиков.

1.2.1. «Иммунодефицитное состояние» и «инфекционный процесс»: причинно-следственная взаимосвязь.

1.2.2. Иммунотропная активность антибиотиков как нежелательное побочное действие.

1.2.2.1. Общие подходы к оценке иммунотропной активности антибиотиков.

1.2.3. Роль программированной клеточной гибели (апоптоза) в реализации иммунных процессов и формировании иммунодефицитных состояний.

1.2.3.1. Определение апоптоза. Сравнительная характеристика апоптоза и некроза.

1.2.3.2. Стадии апоптоза.

1.2.3.3. Генная регуляция апоптоза.

1.2.3.4. Молекулярные механизмы апоптоза.

1.2.3.5. Гуморальная регуляция апоптоза.

1.3. Химические и физико-химические методы количественного анализа

ДНК в изучении программированной клеточной гибели.

1.3.1. Определение количества ДНК в световой микроскопии.

1.3.1.1. Метод Фельгена.

1.3.1.2. Окрашивание метиленовым зеленым.

1.3.1.3. Окрашивание метиленовым синим.

1.3.2. Определение количества ДНК с использованием флуоресцентной фотометрии.

1.3.2.1. Флуоресцентные красители, применяемые в цитофлу ориметрии.

1.3.3. Определение количества ДНК путем электрофореза.

1.3.4. Определение количества ДНК на основе чувствительности к денатурации.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Модели в исследовании.

2.2.1. Модель клеток мононуклеарной фракции крови здоровых доноров.

2.2.2. Модель пре-В-лимфобластов клеточной линии.

2.2.3. Модель лимфоидных клеток крови больных пре-В-лейкозом.

2.3. Методы в исследовании.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Определение и сравнительный анализ количественных показателей и зависимости апоптоза от дозы бета-лактамных антибиотиков на модели мононуклеарных клеток здоровых доноров в норме и условиях индуцированной иммунодепрессии.

3.2. Определение и сравнительный анализ количественных показателей и зависимости апоптоза от дозы бета-лактамных антибиотиков на на модели пре-В-лимфобластов клеточной линии в норме и условиях индуцированной иммунодепрессии.

3.3. Определение и сравнительный анализ количественных показателей и зависимости апоптоза от дозы бета-лактамных антибиотиков на модели лимфоидных клеток крови больных пре-В-лейкозом в норме и условиях индуцированной иммунодепрессии.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка системы оценки иммунотропной активности бета-лактамных антибиотиков по показателю апоптоза клеток лимфоидного ряда in vitro с использованием метода проточной цитофлуориметрии»

Актуальность проблемы.

Инфекционные процессы, развивающиеся на фоне иммунодефицита, встречаются в медицинской практике довольно часто [10, 13, 39, 40, 49]. Известно, что больные с нарушениями иммунного статуса при различных заболеваниях (опухоли, сахарный диабет, муковисцидоз, ожоговая болезнь и т.д.) более восприимчивы к инфекции [49]. Исходя из этого, помимо этиотропной или патогенетической терапии, направленной на лечение основного заболевания, необходимым является назначение многоплановой сопроводительной терапии, к которой относится, в том числе, антибактериальная терапия, применяемая с целью профилактики и лечения инфекционных осложнений [20].

Однако практика показывает, что широкое применение антибактериальных средств приводит к развитию нежелательных побочных явлений, одним из которых является собственное влияние антибиотиков на состояние иммунной системы [24, 25, 44]. Большинство исследователей приходит к выводу о неоднозначности действия антибиотиков различных групп на иммунекомпетентные клетки [144].

Таким образом, изучение влияния антибиотиков на показатели иммунного статуса является особенно актуальным, поскольку эти средства часто назначаются на фоне уже имеющегося иммунодефицита [20, 27, 51, 58]. С другой стороны, применение антибиотиков в тех случаях, когда стимуляция иммуногенеза нежелательно (например, при гемобластозах), требует определения влияния препарата как на клоны нормальных, так и бласттрансформированных клеток иммунной системы. Проведение подобных исследований также целесообразно для обоснованного выбора антибактериального средства с наиболее подходящими иммуномодулирующими свойствами с учетом иммунного статуса, а также принимая во внимание прочие лекарственные назначения в конкретном клиническом случае [21].

Как известно, центральную роль в специфическом адаптивном иммунном ответе играют лимфоциты, активно участвующие в процессе поддержания гомеостаза, поэтому на всем протяжении жизненного цикла имеет место интенсивное обновление клеточного лимфоцитарного пула [39, 40]. В основе обновления лежат два противоположных процесса: деление клеток и их гибель [13]. В нормальных условиях пролиферация и гибель лимфоцитов обычно взаимно уравновешены, вследствие чего сохраняется постоянство клеточного состава. Гибель клеток, в свою очередь, может быть реализовано либо путем некроза, либо апоптоза [32]. Некроз клетки является результатом прямого цитотоксического действия на нее внешних повреждающих факторов, приводящих к острому клеточному повреждению и лизису клетки. Апоптоз, или программированная клеточная гибель, является реализацией заложенных в геноме клеток суицидальных механизмов, активным и строго контролируемым процессом самоуничтожения клетки [16, 30, 31, 32, 46, 80, 87]. Апоптоз играет ключевую роль в нормальном обновлении тканей и по-видимому, несет ответственность за прекращение иммунных реакций, в том числе, опосредуемых лимфоцитами [46]. Различные физические и химические агенты, включая лекарственные вещества различных фармакологических групп, могут индуцировать или, напротив, отменять процесс апоптоза клеток лимфоидного ряда, причем апоптотропное действие может быть реализовано как в отношении зрелого лимфоцита, так и более ранних предшественников [21, 32, 56].

Таким образом, широкое применение антибактериальных средства, а также прогресс в области создания и внедрения новых лекарственных субстанций с подобным действием требует разработки методических систем, позволяющих оценить различные аспекты иммунотропного потенциала антибиотика как на этапе доклинической оценки, так в клинической практике в условиях in vitro.

С учетом вышеизложенного, разработка системы биологической оценки бета-лактамных антибиотиков по показателю апоптоза клеток лимфоидного ряда весьма актуальна в качестве одного из обязательных параметров безопасности JIB.

Разработка подобной системы оценки бета-лактамных антибиотиков соответствуют содержанию проекта федеральной программы по созданию и применению комплекса стандартных биотест-систем для научно-исследовательских целей и контроля качества медицинских препаратов. Программа базируется на основных положениях Закона Российской Федерации «О сертификации продукции и услуг» (№ 5151-1 от 10 июня 1993 года) и направлена на гарантированное обеспечение биологической безопасности населения [37].

Цель и задачи исследования.

Целью настоящей работы явилась разработка системы биологической оценки бета-лактамных антибиотиков по показателю апоптоза клеток лимфоидного ряда человека in vitro в обычных условиях и условиях индуцированной иммунодепрессии.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Выбрать биологические модели, позволяющие изучить и оценить влияние бета-лактамных антибиотиков на апоптоз клеток лимфоидного ряда человека in vitro.

2. Выбрать метод для количественного анализа апоптоза клеток лимфоидного ряда человека in vitro и разработать оптимальные условия количественного анализа с помощью выбранного метода.

3. Определить количественные показатели и дозозависимость апоптоза моделей клеток лимфоидного ряда человека in vitro под влиянием бета-лактамных антибиотиков в норме и условиях индуцированной иммунодепрессии.

4. Провести сравнительный анализ модулирующего влияния исследуемых бета-лактамных антибиотиков на апоптоз моделей клеток лимфоидного ряда в нормальных условиях и условиях индуцированной иммунодепрессии.

5. Разработать алгоритм системы биологической оценки бета-лактамных антибиотиков по показателю апоптоза на моделях клеток лимфоидного ряда человека in vitro с помощью количественного анализа методом проточной цитофлу ориметрии.

Научная новизна проведенных исследований.

1. Впервые предложен алгоритм системы биологической оценки бета-лактамных антибиотиков по показателю «апоптоз» на моделях клеток лимфоидного ряда in vitro методом проточной цитофлуориметрии.

2. Впервые изучено влияние различных концентраций бета-лактамных антибиотиков на апоптоз клеток лимфоидного ряда человека in vitro методом проточной цитофлуориметрии в обычных условиях.

3. Впервые изучено влияние различных концентраций бета-лактамных антибиотиков на апоптоз клеток лимфоидного ряда in vitro методом проточной цитофлуориметрии в условиях дексаметазон-индуцированной иммунодепрессии.

4. Впервые проведен сравнительный анализ апоптотропного действия исследованных бета-лактамных антибиотиков на моделях клеток лимфоидного ряда.

Практическая значимость.

Предложенная система биологической оценки на модели апоптоза клеток лимфоидного ряда человека in vitro методом проточной цитофлуориметрии может служить основой для изучения апоптотропного действия как уже применяемых бета-лактамных антибиотиков, так и новых препаратов данной группы, находящихся на стадии доклинических исследований.

Разработанная система может быть использована для обоснованного выбора бета-лактамного антибиотика с учетом состояния лимфоцитов и их ранних предшественников в конкретном клиническом случае.

С помощью предложенной системы биологической оценки возможно оценить и спрогнозировать апоптоз клеток лимфоидного ряда человека под воздействием бета-лактамных антибиотиков при различном режиме дозирования и с учетом остальных лекарственных назначений.

Разработанная система отличается высокой чувствительностью, точностью, воспроизводимостью результатов.

Связь целей и задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы кафедры фармакологии фармацевтического факультета «Разработка биологической и хронофармакологической оценки положительного и отрицательного влияния J1C, напитков, пищевых добавок на одноклеточные модели и модели экспериментальных животных». Номер госрегистрации 01970007165.

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 111 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 13 рисунками и 20 таблицами. Библиографический указатель включает 152 источника, из них 92 -иностранные.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Решетников, Станислав Игоревич

выводы.

1. Использованные модели апоптоза клеток лимфоидного ряда позволяет количественно оценивать программированную клеточную гибель лимфоцитов периферической крови здоровых доноров, пре-В-лимфобластов клеточной линии и мононуклеарных клеток больных пре-В-лейкозом под воздействием бета-лактамных антибиотиков с использованием метода проточной цитофлуориметрии.

2. Определены количественные показатели апоптоза выбранных клеточных моделей под воздействием четырех стандартных концентрацией Пиперациллина, Цефотаксима, Цефоперазона, Цефепима и Меропенема.

3. Показано, что исследованные бета-лактамные антибиотики дозозависимо подавляют апоптоз лимфоцитов здоровых доноров при культивировании как в обычных условиях, так и в условиях дексаметазон-индуцированной иммунодепрессии. Наиболее показательный антиапоптотический эффект был продемонстрирован при 48- и 72-часовом культивировании с добавлением митогена (ФГА).

4. Установлено, что исследованные бета-лактамные антибиотики дозозависимо подавляют апоптоз пре-В-лимфобластов клеточной линии при культивировании как в обычных условиях, так и в условиях дексаметазон-индуцированной иммунодепрессии. Наиболее показательными явились результаты культивирования в течение 48, 72 и 120 часов. Выявлена закономерность («апоптоз минимальной концентрации»), заключающаяся в способности исследованных антибиотиков в минимальных концентрациях увеличивать показатель апоптоза пре-В-лимфобластов.

5. Доказано, что исследованные бета-лактамные антибиотики дозозависимо подавляют апоптоз лимфоидных клеток крови больных пре-В-лейкозом при культивировании как в обычных условиях, так и в условиях индуцированной иммунодепрессии, наиболее показательно при 48-, 72- и 120-часовом культивировании. Антиапоптотическое действие бета-лактамных антибиотиков на модели лимфоидных клеток крови больных пре-В-лейкозом сопровождается явлением «апоптоза минимальной концентрации».

6. Предложен алгоритм биологической оценки иммунотропной активности бета-лактамных антибиотиков, который может быть использован в доклинических исследованиях указанной фармакотерапевтцчгеской группы в целях определения нежелательного апоптотропного действия как одного из параметров безопасности лекарственного вещества.

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Решетников, Станислав Игоревич, 2002 год

1. Антибактериальная терапия. Практическое руководство / Под ред. Л.С. Страчунского, Ю.Б. Белоусова, С.Н. Козлова - М.: РЦ «Фармединфо». -2000.-190 с.

2. Ашмарин И.П. и др. Быстрые методы статистической обработки экспериментов. Д.: Издательство Ленингр. университета, 1975. - 78 с.

3. Балабаньян В.Ю. Разработка системы скрининга лекарственных веществ антиоксидантного и мембраностабилизирующего действия / автореф. канд. дис. Москва. - 1998 г. - 21 с.

4. Балахонов А.В., Пескова Т.Н. Нормальная гибель клеток в эмбриогенезе позвоночных животных // Успехи современ. биолог. 1982. Т.94, С.433.

5. Белобородов В.Б. Мировой опыт применения имипенем/циластатина и меропенема в клинической практике // Инфекции и антимикробная терапия, 1999; 1(2): 46-50.

6. Богдан А.С. Популяция одноклеточных организмов как модель интегральной оценки воздействия вредных факторов // Тез. Докл. Всесоюзн. Конф. М.: 1989 г.-С. 12-13.

7. Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г. Перекисное окисление липидов мембран и природные антиоксиданты // Успехи химии. 1985 -т.54. - вып.9. - С. 1540 - 1558.

8. Владимирская Е.Б. Ростовые факторы в регуляции кроветворения // Тез. VII Рос. нац. конгресса «Человек и лекарство». М.: 2000. - 744 с.

9. Вольский Н.Н., Козлов В.А., Лозовой В.П. // Бюл. экспер. биол. 1987. - Т. 53,№6.-С. 694-696.

10. Ю.Голосова Т.В. и др. Инфекции и естественный иммунитет. М., 1980.

11. Государственная Фармакопея СССР: Вып. 1. Общие методы анализа/МЗ СССр. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - 336 е., ил.

12. Дейч А. Цитофотометрия нуклеиновых кислот. М.: Медицина. - 1981. -С. 265-284.

13. Долгих В.Т. Основы иммунопатологии. Н.Новгород.: Издательство НГМА, 1998.-208 с.

14. Н.Ершов М.В., Тазулахова Э.Б. // J. Terra Medica 1998 - Vol. 2 - Р.2.

15. Ершов М.В. Система интерферона в норме и при патологиии М. Медицина - 1996 - 240 с.

16. Казначеев К.С. Механизмы развития цитокининдуцированного апоптоза // Гематология и трансфузиология, 1999, Т. 44, № 1, С. 40-43.

17. П.Калинин Ю.Т., Марченко В.И., Денисов JI.A. Особенности доклинического изучения рекомбинантных человеческих альфа и гамма-интерферонов // Биотехнол. 1992. - Т.1. - С. 67-70.

18. Катцунг Бертрам Г. Базисная и клиническая фармакология: в 2-х т. Том 2/ М. СПб.: Бином-Невский Диалект, 1998, С. 236-252.

19. Кетлинский С.А. Перспективы клинического применения рекомбинантных цитокинов // Вестн. Рос. Акад. Мед. наук 1993. № 2, С. 11-18.

20. Клясова Г.А. Рациональная антибактериальная терапия при критической нейтропении // Инфекции и антимикробная терапия. 2000, № 3, С. 16-23.

21. Ковальчук JI.B. и др. Анализ фармакологических средств на модели апоптоза лимфоцитов человека in vitro в норме и при иммунопатологии // Аллергология и иммунология. 2000. - т. 1 - № 1. - С.24-30.

22. Ковальчук JI.B., Чередеев А.Н. Апоптогенные механизмы возникновения иммунодефицитных заболеваний // Журн. микробиол. 1999. - № 5. - С. 4752.

23. Кукес В.Г. Клиническая фармакология: Учебник. 2-е изд., перераб. и доп. -М.: Геотар Медицина, 1999. - 528 с.

24. Лазарев А.И. Фармакологическая коррекция иммуносупрессирующего действия некоторых антибиотиков / автореф. докт. дис. Москва. - 1998. -37 с.

25. Лазарев А.И. Влияние антибиотиков на развитие клеточной и гуморальной форм иммунного ответа при стафилококковой инфекции // Тез. Докл. III

26. Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». М. - 1996. - С 32.

27. Лазарев А.И. и др. Антиоксидантное и иммуномодулирующее действие антибиотиков и обработанных ими эритроцитов при стафилококковой инфекции // Антибиотики и химиотерапия. 1997. - Т. 3. - № 42. - С. 18-21.

28. Лазарев А.И. и др. Иммуномодулирующее действие антибиотиков в норме и при инфицировании стафиллококком // Антибиотики и химиотерапия. -1995. т. 40. - № 11-12. - С.45-49.

29. Леплина О.Ю., Тихонова М.А. и др. Краткосрочная рестимуляция in vitro как модель активационного апоптоза периферических Т-клеток человека // Иммунология, 2000, № 1, С. 30-32.

30. Маянский Н.А., Заславская М.И., Маянский А.Н. Апоптоз экссудативных нейтрофилов человека // Иммунология. 2000. - № 2. - С. 11-13.

31. Маянский А.Н., Маянский Н.А., Заславская М.И. и др. Апоптоз нейтрофилов // Иммунология. 1999. - № 6. - С. 11-19.

32. Новиков B.C., Булавин Д.В., Цыган В.Н. // Программированная клеточная гибель / Под ред. B.C. Новикова. СПб., 1996.

33. Никонова М.Ф. и др. Апоптоз и пролиферация как альтернативные формы ответа Т-лимфоцитов на стимуляцию // Иммунология и аллергология. № 2. - 1999.-С 20-23.

34. Персиянова В.О., Вольский Н.Н. и др. Участие активированных кислородных метаболитов в индуцированном глюкокортикоидами апоптозе тимоцитов лыши // Клеточ. иммун. 1998 г. - С. 44-46.

35. Погорелов В.М., Козинец Г.И. Морфология апоптоза при нормальном и патологическом гемопоэзе // Гематология и трансфузиология. 1995, № 5, С. 17-24.

36. Полетаев А.И. Проточная цитометрия и сортировка в цитологии, молекулярной биологии, биотехнологии и медицине // Мет. рекоменд. М.: Изд.МГУ. - 78 с.

37. Попова Н.Б. Создание тест-системы для выявления иммуномодуляторов на основе НАДФ • Н оксидазы / / автореферат канд. дисс. - Москва. - 2000. -27 с.

38. Розанов Ю.М., Кудрявцев Б.Н. Метод флуорсцентной цитофотометрии для количественного определения ДНК // Цитология. 1967. - т. IX.- № 3. - С. 361-367.

39. Ройт А. и др. Иммунология. Пер. с англ. М.: Мир, 2000. - 592 с.

40. Руководство по иммунофармакологии: Пер. с англ./Под ред. М.М. Дейла. -М.: Медицина, 1998, 332 е.: ил.

41. Рух Ф. Определение содержания ДНК методом микрофлуориметрии. М.: Медицина. - 1978. - С. 229-238.

42. Сакаева Д.Д. Влияние некоторых антибиотиков на иммунологические свойства организма при иммуносупрессиях / автореф. канд. дис. Уфа. -1996.-21 с.

43. Сакаева Д.Д. Влияние антибиотиков на эффективность иммуностимуляторов // Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях. Тез. докл. X научной конференции. - Челябинск. - 1990. - С. 220.

44. Сакаева Д.Д. Иммунотропные свойства некоторых антибиотиков // Тез. докл. Всероссийской студенческой научной конференции. Омск. - 1990. -С. 13.

45. Свифт X. Аналитическая микроскопия биологических объектов. М.: Медицина. - 1982. - С.26-47.

46. Сепиашвили Р.И. и др. Апоптоз в иммунологических процессах // Аллергология и иммунология, 2000. т.1. - № 1. - С. 15-23.

47. Скобин В.Б. Влияние колониестимулирующих факторов на эффективность цитостатических препаратов при остром миелобластном лейкозе: лабораторные и клинические исследования // Гематология и трансфузиология, 1999, Т. 44, № 1, С. 34-37.

48. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России. М.: АстраФармСервис, 2001 г. 1536 с.

49. Справочник -путеводитель практикующего врача. 2000 болезней от А до Я / Под. ред. И.Н. Денисова, Э.Г. Улумбекова М.: Гэотар Медицина, 1998. -1296 с.

50. Страчунский J1.C., Козлов Р.С., Стецюк О.У. и др. Проблема выбора карбапенемовых антибиотиков в конце 90-х гг. Клиническая фармакология и терапия. 1997; 6(4): 59-62.

51. Урмаева М.М., Митюшкина Т.А., Тимаков A.M. Инфекционные осложнения у детей с гемобластозами // Гематология и трансфузиология. 1999. - Т. 44. -№ 1.-С. 38-39.

52. Харкевич Д.А. Фармакология: Учебник. 6-е изд., перераб. и доп. - М.: Геотар Медицина, 1999. - 664 с.

53. Чамплин Р., Гоулд Д. Внутренние болезни / Под ред. Браунвальда М.: Медицина.-С. 683-705.

54. Щигленко Н.А. Регуляция программированной клеточной гибели Т-лимфоцитов человека в норме и при иммунопатологии / автореферат канд. дисс. Москва. - 1999. - 20 с.

55. Ярилин А.А. // Иммунология. 1996. - № 6. - С. 10-23.

56. Abello P. A, Buchman Т. G. Heat shock induced cell death in murine microvascular endotelial cells depends on priming with tumor necrosis factor-alpha or interferon-gamma II Shock. 1994. Vol. 2, N 5. P. 320-323.

57. Adebodun F. Role of intracellular free Ca and Zn in dexamethasone-induced apoptosis and dexamethasone resistence in human leukemic СЕМ cell lines // J. Cell. Physiol. 1995. Vol. 163, N 1. P. 80-86.

58. Adida, C., Crotty, P.L., McGrath, J., Berrebi, D., Diebold, J., arid Altieri, D.C. Developmentally regulated expression of the novel cancer anti-apoptosis gene survivin in human and mouse differentiation. Am.J.Pathol. 152(l):43-49, 1998.

59. Aggarwal S., Drysdale E., Shin H. TNF-mediated cytotoxity involves ADP-ribosylation // J. Immunol. 1988. Vol. 140. P. 4187-4192.

60. Ahmad K., Naz R. K. Antibodies to sperm surface antigen and c-myc protoocogene product inhibit early embryonic development in mice // Biol. Reprod. 1991. Vol. 45. P. 841-850.

61. Akbar A. N., Salmon M., Janossy C. Role of bcl-2 and apoptosis in viral infections // Intern. Arch. Allergy Immunol. 1994. Vol. 105, N 4. P. 359-362.

62. Alderson L. M., Castleberg R. L., Harsh G. R. et al. Human gliomas with wild-type p 53 express bcl-2 II Cancer Res. 1995. Vol. 55, N. 5. P. 999-1001.

63. Allan D. J., Harmon В. V., Roberts S. A. Spermatogonial apoptosis has three morphologically recognizable phases and show no circadian rhythm during normal spermatogenesis in rat // Cell Prolif. 1992. Vol. 25. P. 241-250.

64. Allen R. G., Ballin K. Oxidative influence on development and differentiation: an overview of three radical theory of development // Free Radic. Biol. Med.1989. Vol. 6. P. 631-661.

65. Allsopp Т. E., Wyatt S., Paterson H. V., Davies A. M. The proto-oncogene bcl-2 can selectively rescue neurotrophic factor-dependent neurons from apoptosis // Cell. 1993. Vol. 73. P. 295-307.

66. Almasan A., Gong В., Jiang X. Bcl-2 and mitochondrial function //Biochem. And Cell Biol. 1997. Vol. 75, P. 463.

67. Almasan A., Yin Y., Kelly R. E. et al. Deficiency of retinoblastoma protein leads to inappropriate S-phase entry, activation of E2F-responsive genes, and apoptosis // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1995. Vol. 92, N 12. P. 5436-5440.

68. AlnemryE. S., Fernandes T. F., Haldar S. etal. Involvement of bcl-2 in glucocorticoid induced apoptosis in human pre-B leukemias//Cancer Res. 1992. Vol. 52. P. 491-495.

69. Alnemry E. S., Litwack G. Activation of internucleosomal DNA cleavage in human СЕМ lymphocytes by glucocorticoid and novobiocin // J. Biol. Chem.1990. Vol. 265. P. 17-323.

70. Corrales I. Immunomodulatory effect of cefminox // J.Antimicrob.Chemother. 33 (1994).- P. 372-374.

71. Dive C., Hickman J. A. Drug-target interactions: only the first step in the commitment to a programmed cell death. //Brit. J. Cancer. 1991. Vol. 64. P. 192-196.

72. Driscoll M. Molecular genetics of cell death in the nematode Caenorhabditis elegans // J. Neurobiol. 1992. Vol. 23, N. 9. P. 44-47.

73. Driscoll М., Chalfie M. Developmental and abnormal cell death in C.

74. Elegans // Trends Neurosci. 1992. Vol. 15. P. 15-19.

75. Enari M., Hug H., Nagata S. Involvement of an ICE-like protease in Fas-mediated apoptosis//Nature. 1995. Vol. 375,N. 6526. P. i 8-81.

76. Enokido Y., Hatanaka H. Neuronal cell death and apoptosis // Gan To Kagaku Ryoho. 1994. Vol. 21, N. 5. P. 615-620.

77. Eurfinr E. S., Harmon M. F., Paith J. E., GarveyE. P. Selective inhibition of constituvr nitric oxide synthase by L-N G-nitroarginine// Biochemistry. 1993. Vol. 32. P. 8512-8517.

78. Evan G., Harrington E., Fanidi A., et al. Integrated control of cell proliferation and cell death by the c-myc oncogene // Phil. Trans. Roy. Soc. London B. Biol. Sci. 1994. Vol. 345, N. 1313. P. 269-2751

79. Ingham E. The effects of mynocycline and tetracycline on the mitotic response of human peripheral blood lymphocytes // J. Antimicrob. Chemother. 27 (1991) P. 607-617.

80. Fan S. p 53 gene mutation are associated with decreased sensitivity of human lymphoma cells to DNA damaging agents // Cancer Res. 1 994. Vol. 54, N. 22. P. 5824-5830.

81. Fanidi A., Harrington E. A., Evan G. I. Cooperative interaction between c-myc and bcl-2 proto-oncogenes // Nature. 1992. Vol. 359, N. 6359. P. 554-556.

82. Faruqi T. R., Erzurum S. C., Kaneko F. T. et al. Role of nitric oxide in poly(I-C) induced endothelian cell expression of leukocyte adhesion molecules // Am. J. Physiol. 1997. Vol. 273, N. 5. P. 2490-2497.

83. Fesus L. P., Davies J. A., Piacenvini M. Apoptosis: Molecular mechanisms in programmed cell death // Eur. J. Cell. Biol. 1991. Vol. 56. P. 170-177.

84. FisherD. Apoptosis in cancer therapy: crossing theshold// Cell. 1994. Vol.78, N. 4. P. 539-542.

85. Gismondo M. Effect of ampicillin and sulbactam/ampicillin en the immune system // J. Int. Med. Res. 19 (Suppl.l) (1991) 24A-28A.

86. Kerr J.F. A histochemical study of hipertrophyand iscaemic injury of rat liver with special reference to changes of lysosomes// J.Pathol. Bacteriol. 1965. Vol. 90. P. 419.

87. Kerr J.F.Schrikage necrosis: A distinct mode of cellular dearth// J.Pathol. 1971, Vol. 105 P. 13.

88. Kitajima J., Kawahara K., Nakajima T. et al. Nitric oxide-mediate apoptosis in murine mastocytoma // Biochem. Biophis. Res. Commurs. 1994. Vol. 204, N.l.P. 244-251.

89. Kizaki H., Tadakuma T. Thymocyte apoptosis // Micrcbiol. Immunol. 1993 Vol. 37, N. 12. P.917-925.

90. Klingholtz R., Stratling W. H. Digestion of chromatin to HI-depleted 166 base pair particles by Ca /Mg dependent endonuclease // FEBS Lett. 1981. Vol. 139. P. 105-110.

91. Kolesnick R. N., Haimovitz-Freidman A., Fuks Z. The sphingomyelin signal transduction pathway mediates apoptosis for tumor necrosis factor, Fas and ionizing radiation // Biochem. Cell Biol. 1994. Vol. 72, N. 4. P. 471-474.

92. Konno S. Inhibition of human T-lymphocytes activation by macrolid antibiotic, roxitromycin // Life Sci. 51 (1992). P. 231-236.

93. Korzeniowski O. Effects of antibiotics on the mammalian immune system // Infect. Dis. Clin. North. Am. 3(1989).- P. 469-478.

94. Korsmeyer S. J., Shutter J. R., Vies D. J. et al. Bcl-2/Bax: a rheostat that regulates an antioxidant pathway and cell death repression of lymphocytes death // Immun. Today. 1992. Vol. 13. Semin. Cancer Biol. 1995. Vol.4, N. 6. P. 327-332.

95. Krammer P. H., Dhein J., Walczak H. et al. The role of APO-1 mediated apoptosis in the immune system //Immunol. Rev. 1994. Vol. 142. P. 175191.

96. Lee E. Y., Hu N., Yang Y. F. et al. Dual role of retinoblastoma protein in cell cycle regulation and neuron differentiation// Genes Develop. 1994. Vol. 8, N.17. P. 2008-2021.

97. Lenhoff S., Olofsson T. Effects of immunosuppressive drugs and antibiotics on GM-CSF and G-CSF secretion in vitro by monocytes, T-lymphocytes and endothelial cells // Brit. J. Of Hemat. 1996. - 95. - p. 33-38.

98. Los M., Van deCraen M., Penning L. C. etal. Requirement of anlCE/CED-3 protease for Fas/APO-1 mediated apoptosis// Nature. 1995. Vol.375, N. 6526. P. 81-83.

99. Lous J.M., McFarland V. W.,May P., Mora P. T. The phosphoprotein p53 is downregulated post-transcriptionally during embriogeriesis in vertebrates // Biochem. Biophys. Acta. 1988. Vol. 950. P. 395-402.

100. LoweS. W., Ruley H. E. Stabilization of thep53 tumor supressor is induced by adenovirus El A and accompanies apoptosis // Genes Develop. 1993. Vol. 7, P. 535-545.

101. Mailman P. Immunological effects of cefodizim in patients undergoing antineoplastic chemothepary // Infection 20 Suppl. 1 (1992) S. 67-70.

102. Majino G., Joris I. Apoptosis, oncosis and necrosis. An overview of cell death //Amer. J. Pathol. 1995. Vol. 146, N. 1. P. 3-15.

103. Martin S. J. Programmed cell death and AIDS // Science. 1993. Vol. 262, N. 5138. P. 1355-1357.

104. Martin S. J., 0 Brien G. A., Nishioka W. K. et al. Proteilysis of fodrin during apoptosis I/J. Biol. Chem. 1995. Vol. 270, N. 12. P. 6425-6428.

105. McCall C. A., Cohen J. J. Programmed cell death in terminally differentiating keratinocytes: role of endogenous endonuclease // J. Invest. Dermatol. 1991. Vol. 97. P. 111-114.

106. Milner A.E., Grand R.G., Gregory C.D. Effects of inlerferon-alpha on human В cells: repression of apoptosis and prevention of cell growth are independent response ofBurkitt lymphoma lines //Int. J. Cancer. 1995. Vol. 61, N. 3. P. 348-354.

107. Morita M., Watanabe Y., Akaike T. Protective effect of hepatocyte growth factor on interferon-gamma-induced cytotoxicity in mouse hepatocytes // Hepathology. 1995. Vol. 21, N. 6. P. 1585-1593.

108. Munno I. The effect of ofloxacin on the immune system of elderly patients // J. Antimicrob. Chemother. 25 (1990). P. 455-458.

109. Nathan С. E., Nitric oxide as a secretory product of mammalian cells // FASEB J. 1992. Vol. 6. P. 3051-3064.

110. Nathan С. E., Xie Q. Nitric oxide synthases, roles, tolls and controls // Cell. 1994. Vol. 78. P. 915-918.

111. Neal D. Attenuation of antibody response to acute pyelonephritis by treatment with antibiotics // Antimicrob. Agents Chemother. 35 (1991). P. 2340-2344.

112. Nicoletty I., Migliorati G., Pagliacci M.C. et al. // J. Immunol. Methods -1991 Vol. 139-271-279.

113. Rang H.P., Dale M.M., Ritter J.M. Rharmacology. Fourth Edition / Churchill Livingstone. 1999.-P.648-662.

114. Pallesen G. The association of Epstein-Barr virus withHodgkin disease// Advances in tumor immunol. And allergic disordes. Milan, 1992. P. 101-122.

115. Palombella V. J., Rando O. J., Golberg A. L., Maniatis T. The uboquitin-proteasome pathway is required for processing theNF-kBl precursor protein and the activation of NF-kB // Cell. 1994. Vol. 78, N. 5. P.773-785.

116. Roche Y. Effects of quinolones on interleukin 1 production in vitro by human monocytes // Immunopharmacology 13 (1987). P.99-109.

117. Pulverer G. Effects of cefodizim and cefotaxim on cellular and humoral immune responses // Infection 20 Suppl. 1 (1992). P. 41-44.

118. Pycock J. The effect of various antibiotics on the in vitro morphology and chemotactic responce of equine neutrophils // J.Vet.Pharmacol.Ther. 11 (1998).-P.191-196.

119. Qin, Z.H., Wang, Y., Nakai, M., and Chase, T.N. Nuclear factor-kappa В contributes to excitotoxin-induced apoptosis in rat striatum. Mol.Pharmacol. 53(l):33-42,1998

120. Roques C. Effect of an in vivo immunostimulant treatment on PMN function:interactions with antibiotics in vitro // Int. J. Immunopharmacol. 13(1991). P. 1051-1057.

121. Roy N., Mahadevan M. S. McLean M. et al. The gene for neuronal apoptosis inhibitory protein is partially delected in individuals with spinal muscular atrophy // Cell. 1995. Vol. 80, N. 1. P. 167-178.

122. SatohM., LindahiT. Role of poly(ADP-ribose) formation inDNA repair// Nature. 1993. Vol. 356. P. 356-358.

123. Savill J. Apoptosis and the kidney // J. Amer. Nephrol. 1994. Val. 5, N.l. P. 12-21.

124. Schwartzman R. A., Cidlowski J. A. Glucocorticoid-induced ap ptosis of lymphoid cells // Intern. Arch. Allergy Immunol. 1994. Vol. 105, N. 4. P. 347354.

125. Skoutelis A. In vivo potentiation of polymorphonuclear leucocytes chemotaxis by clindamycin // Infection 21 (1993) P. 321-323.

126. Steinman H. M. The Bcl-2 oncoprotein functions as a pro-oxidant // J. Biol. Chem. 1995. Vol. 270, N. 8. P. 3487-3490.

127. Strasser A. Apoptosis. Death of a T cell // Nature. 1995. Vol. 373, N. 6513. P. 385-386.

128. Su X., Zhou Т., Yang P., Edwards C.K., and Mountz J.D. Reduction of arthritis and pneumonitis in motheaten mice by soluble tumor necrosis factor receptor//Arthritis Rheum. 41(1):139-149, 1998.

129. Van Vlem В., Vanholder R., De Paepe P., Ringoir S. Immunomodulating Effects of Antibiotics: Literature Review // Infection 24 (1996) N 4, P. 275-291.

130. Villa M. Macrolidic antibiotics: effects on primary in vitro antibody responses // Int. J. Immunopharmacol. 10 (1988). P.919-924.

131. Teodoro J. G., Shore G. C., Branton О. E. Adenovirus El A proteins induce apoptosis by both p53-dependent and p53-independent mechanisms // Oncogene. 1995. Vol. 11, N. 3. P. 467-474.

132. Tolosa, E., King, L.B., and Ashwell, J.D. Thymocyte glucocorticoid resistance alters positive selection and inhibits autoimmunity and lymphoproliferative disease in MRL-lpr/lpr mice. Immunity. 8(l):67-76, 1998.

133. Thulasi R., Harbour D. V., Thompson E. B. Supression of c-myc is a critical step in glucocorticoid induced human leukemic cell lysis // J. Biol. Chem. 1993. Vol. 268. P. 18306-18312.

134. VelsD. J., SorensonC. M, Shutter J. R., Korsmeyer S.J. Bcl-2 deficient mice demonstrate fulminant lymphoid apoptosis, polycyclic kidney and hypopigmented hair // Cell. 1993. Vol. 75. P. 229-240.

135. Wyllie A. H. Glucocorticoid induced thymocytes apoptosis is assosiated with endogeneus endonuclease activation// Nature. 1980. Vol. Vol. 284. P. 555-556.i