Реконструкция костной ткани с использованием скелета натуральных кораллов Acropora cervicornis у больных с доброкачественными образованиями костей (экспериментально-клиническое исследование) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат медицинских наук Мыслевцев, Игорь Валерьевич

  • Мыслевцев, Игорь Валерьевич
  • кандидат медицинских науккандидат медицинских наук
  • 2011, Москва
  • Специальность ВАК РФ14.01.12
  • Количество страниц 135
Мыслевцев, Игорь Валерьевич. Реконструкция костной ткани с использованием скелета натуральных кораллов Acropora cervicornis у больных с доброкачественными образованиями костей (экспериментально-клиническое исследование): дис. кандидат медицинских наук: 14.01.12 - Онкология. Москва. 2011. 135 с.

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Мыслевцев, Игорь Валерьевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Опухоли костей.

1.2 Требования к биоматериалам для восстановления костной ткани.

1.2.1 Аутотрансплататы.

1.2.2 Аллотрансплататы.

1.2.3 Ксенотрансплантаты.

1.2.4 Имплататы на основе керамики.

1.2.5 Полимеры.

1.2.6 Металлы.

1.3 Опыт использования натуральных кораллов.

1.4 Резюме.

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Общая характеристика работы.

2.2 Доклинические исследования натурального коралла семейства Acroporidae в экспериментах in vitro и in vivo.

2.2.1 Подготовка и стерилизация натуральных кораллов.

2.2.2 Исследования in vitro острой цитотоксичности и матриксных свойств поверхности образцов НК.

2.2.3 Исследование остеоиндуцирующих свойств скелета НК как матрикса для культур ММСК.

2.2.4 Оценка биосовместимости образцов коралла семейства Acroporidae в экспериментах in vivo.

2.2.5 Исследование остеозамещающих потенций образцов коралла семейства Acroporidae на модели дефекта болыпеберцовой кости крысы в экспериментах in vivo.

2.2.6 Исследование остеозамещающих потенций НК на модели критического дефекта бедренной кости барана.

2.3 Клинический этап исследования.

ГЛАВА III. ЭКСПЕИМЕНТАЛЬНЫЕ ДАННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НК.

3.1 Физико-химическая характеристика образцов натуральных кораллов, включенных в исследование.

3.2 Исследование цитотоксичности, адгезивных для клеток свойств, способности поддерживать пролиферацию клеток.

3.2.1 Исследование спонтанной дифференцировки.

3.3. Исследования биосовместимости и остеозамещающих свойств скелета НК семейства Acroporidae in vivo у лабораторных животных.

3.3.1 Изучение биосовместимости скелета НК.

3.3.2 Исследование способности НК в гранулированном виде замещать окончатые дефекты у мелких лабораторных животных.

3.3.3 Исследование способности НК в виде цельного имплантата замещать дефекты больше критического у крупных лабораторных животных.

3.4 Резюме.

ГЛАВА IV. КЛИНИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НК.

4.1 Основная группа.

4.2 Группа сравнения.

4.3 Резюме.

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Онкология», 14.01.12 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Реконструкция костной ткани с использованием скелета натуральных кораллов Acropora cervicornis у больных с доброкачественными образованиями костей (экспериментально-клиническое исследование)»

Доклинические исследования остеопластических свойств натурального коралла семейства Acroporidae были проведены на базе отделения «Прогноза эффективности консервативного лечения» ФГУ «Московский научно исследовательский онкологический институт им. П.А. Герцена» МЗ и CP РФ. Согласно разработанному алгоритму испытания НК, на первом этапе в экспериментах in vitro проводили оценку острой токсичности и матриксных свойств поверхности НК, а также их способности поддерживать пролиферацию ФЧ и пролиферацию/дифференцировку ММСК, а далее - в экспериментах in vivo на мелких и крупных лабораторных животных - исследовали биосовместимость этого материала и его остеозамещающие потенции.

В клиническую часть исследования было включено 20 больных с доброкачественными и опухолеподобными заболеваниями костей, которым в отделении «онкологической ортопедии» ФГУ «МНИОИ им П.А. Герцена МЗ и CP РФ» в 2006-2010гг. были выполнены 20 оперативных вмешательств.

2.2 Доклинические исследования натурального коралла семейства Acroporidae в экспериментах in vitro и in vivo 2.2.1 Подготовка и стерилизация натуральных кораллов

Очистку НК семейства Acroporidae от мелких органических остатков и от коралловой пыли проводили в несколько этапов. На первом этапе ветви скелета НК подвергали грубой механической очистке щеткой с жесткой синтетической щетиной под струей проточной воды, осуществляя на этапах микроскопический контроль. Далее дополнительно производили ультразвуковую очистку НК (ультразвуковая мойка Finn Sonic m 15, t - 60 °C, 20 минут). После высушивания образцы подвергали механическому измельчению до заданного размера частиц (0,2-0,6мм, 0,6-0,8мм, 0,8-1,2мм, 1,2-1,5мм, 1,-3,0мм, >3,0мм) на планетарной шаровой мельнице РМ 200; затем каждую фракцию частиц НК промывали в течение 3-4 часов в холодной проточной воде. На заключительном этапе частицы НК замачивали на 8 часов при комнатной температуре в дистиллированной воде в соотношении НК/Н20 (по объему) 1:10, заменяя дистиллированную воду каждые 2 часа на свежую порцию, затем высушивали их в сухожаровом шкафу при температуре 50-60°С в течение 8 часов и раскладывали по стеклянным флаконам объемом 10 см3.

Далее проводили стерилизацию частиц НК 7-облучением в дозе 20-25 кГр на установке РХМ- у -20. На заключительном этапе осуществляли бактериологический контроль стерильности НК (15% образцов из каждой партии, анализатор бактериологический «BioTrack 4250», SY-LAB GmbH, Австрия; анализатор бактериологический «Bactec 9120», Becton Dickinson, США), в соответствии с требованиями.

2.2.2 Исследования in vitro острой цитотоксичности и матриксных свойств поверхности образцов НК

За сутки перед началом опыта стерильные коралловые частицы размером 0,2-0,6 мм помещали в 24-х луночные культуральные планшеты (Costar, США) и заливали полной ростовой средой (ПРС) следующего состава: среда ДМЕМ (Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова, РАМН, Москва), 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ПанЭко, Москва), глютамин (бООмг/л). Каждый образец НК в платах был представлен в триплетах.

Оценку острой цитотоксичность НК и динамики нарастания на них клеток выполнены на клеточной линии иммортализованных нормальных фибробластов человека (ФЧ, клон №1608), полученной из Медико-Генетического научного центра РАМН, г. Москва. Клеточную линию поддерживали в ПРС на основе среды ДМЕМ (см. выше).

В экспериментах использовали клетки в логарифмической фазе роста (предконфлюэнтный монослой). Для получения суспензии одиночных клеток монослой ФЧ обрабатывали 0,25% раствором трипсина (Sigma,США), затем полученную взвесь клеток тщательно дважды отмывали центрифугированием в большом объеме ПРС, производили их подсчет и оценку жизнеспособности, окрашивая клеточную суспензию 0,04% раствором трипаново синего. Затем в платы с НК (опыт) и без них (контроль) помещали ФЧ (400тыс.кл. на лунку) в объеме 2мл ПРС и инкубировали: для определения острой цитотоксичности в течение 24 часов, для оценки матриксных свойств НК - 3, 7, 10, 14, 17, 21 и 28 суток. Полную замену ПРС осуществляли дважды в неделю на протяжении первых 10-и суток эксперимента, а далее - вплоть до окончания опыта -ежедневно. Все операции с НК и ФЧ осуществляли в стерильных условиях, культивирование - в атмосфере влажного воздуха, содержащего 5% СО2 при 37°С.

Жизнеспособность ФЧ в динамике культивирования с НК оценивали с помощью МТТ метода, который основан на способности дегидрогеназ живых клеток восстанавливать 3-(-4,5-диметилтиазолил-2)-2,5-дифенилтетразолий бромистый (МТТ, Sigma, США) в голубые кристаллы формазана, нерастворимые в воде [119]. Как было показано ранее [37], количество образовавшегося формазана отражает пролиферативную активность (жизнеспособность/количество) различных клеток человека и животных in vitro. Для проведения МТТ-теста в опытах in vitro по окончанию срока культивирования ФЧ на культуральном пластике-полистерене (контроль) и на образцах НК в полистереновых лунках (опыт) из каждой лунки отбирали по 1,5 мл среды и вносили по 125мкл раствора МТТ в концентрации 5мг/мл. Через 3 часа инкубации (5% С02, 37°С) из каждой пробы полностью декантировали ПРС и осуществляли растворение образовавшегося формазана с помощью изопропилового спирта (1 мл на лунку). От осадка, образующегося в результате преципитации белков в изопропаноле, освобождались центрифугированием плат в течение Юмин. при ЗОООоб/мин. Далее из каждой лунки переносили по ЮОмкл супернатант в 96-луночный плоскодонный планшет (Costar, США) и оценивали оптическую плотность раствора формазана на спектрофотометре

МСС-340 (Швеция) при длине волны 540нм. В качестве спектрофотометрических контролей (бланк) использовали пробы с чистой ПРС и пробы, содержащие тестируемые образцы НК в ПРС (без клеток).

Для определения цитотоксичности материалов рассчитывали пул жизнеспособных клеток через 24 часа инкубации с ними по формуле:

ОД* опыт.

Пул жизнеспособных клеток (ПЖК) = - X 100%

ОД контр.

ОД*- оптическая плотность раствора формазана)

При оценке матриксных свойств НК определяли изменение пула ФЧ (А) в каждый конкретный срок по формуле:

ОД+, - ОД,

А = - х 100%,

ОДп.

ОД п+1 - величина оптической плотности в конкретный срок, ОД п - величина оптической плотности в предыдущий срок.

Положительная величина пула свидетельствовала о приросте популяции ФЧ, отрицательная - о гибели части популяции.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием компьютерных программ Statistica и Biostat Exe.

2.2.3 Исследование остеоиндуцирующих свойств скелета НК как матрикса для культур ММСК

Этот раздел работы был выполнен совместно с сотрудниками лаборатории факультета фундаментальной медицины МГУ им М.В. Ломоносова. Для оценки остеогенной дифференцировки ММСК человека была проанализирована транскрипция ряда маркерных генов: Osteoc (остеокальцина), AlcPho (щелочной фосфатазы), ВМР2, Sialopr II (костного сиалопротеина II типа), коллагена I типа и остеопонтина.

Источником ММСК человека служила подкожная жировая ткань (9 образцов, возраст доноров 17-64 года), которую получали во время лапаротомии при проведении оперативных вмешательств. Образцы ЖТ весом 7,0-41,0гр. помещали в стерильную емкость со средой следующего состава: среда ДМЕМ (ПанЭко, Россия), гентамицин (100 мкг/мл) и транспортировали в лабораторию, где они сохранялись при температуре +4°С не более 1 часа до начала процедуры выделения клеток. Для выделения ММСК из ЖТ использовали сочетание механической и ферментативной дезагрегации. Для этого в чашке Петри образцы ЖТ тщательно измельчали ножницами на холоде в фосфатно-солевом буфере с антибиотиками до получения грубой гомогенной взвеси. К измельченной ткани добавляли равный объем 0,025% раствора трипсина (ПанЭко, Россия) и помещали на шейкер (25 мин., температура 37°С). Полученную в результате трипсинизации клеточную взвесь фильтровали через сито (размер пор 70 цт) и отмывали от трипсина центрифугированием в течении 10 минут, при 1000об./мин. Для отмывки использовали ПРС следующего состава: среда ДМЕМ/Р12 (1:1), глутамин (65 мг/мл), 10 мм буфера Hepes (все реактивы фирмы ПанЭко, Россия), 10% эмбриональной телячьей сыворотки (Eurobio, Франция) и гентамицин 50 мкг/мл (Респ. Беларусь). Осадок клеток ресуспендировали в 5 мл ПРС и оставляли при температуре +4°С для последующего объединения с новыми порциями выделенных клеток. Для этого циклы ферментативной дезагрегации повторяли дважды, используя во втором цикле раствор трипсина с коллагеназой, а третьем - 0,075% раствор коллагеназы. Полученные фракции клеток объединяли, повторно отмывали, супернатант декантировали, осадок тщательно ресуспендировали в ПРС и производили подсчет жизнеспособных клеток (0,4% раствор трипанового синего) в камере Горяева. Из одного грамма ЖТ таким способом удавалось выделять от 60 до 270 тысяч клеток с 95% жизнеспособностью. Клеточную суспензию рассеивали по культуральным флаконам при плотности посева 10,0 тыс. ядросодержащих клеток на см поверхности флакона и помещали в С02 инкубатор (37°С, 7,5% СО2). Через двое суток производили удаление неприкрепившихся клеток из флаконов и добавляли свежую порцию ПРС. По достижении культурой состояния предконфлюэнтного монослоя (70-80% культуральной поверхности занято клетками) проводили перепассирования. Для эксперимента использовали культуры ММСК III (7 обр.) и V (2обр.) пассажей.

При индукции остеогенной дифференцировки культуры ММСК III и V пассажей наращивали до состояния монослоя в обычных условиях, а затем культивировали в течении 14 суток в присутствии соответствующих дифференцирующих агентов: 15% Osteogenic Stimulatory Supplements, 3.5mM /?о

Glycerophosphate, 10" M Dexamethasone, 50|ig/mL Ascorbic Acid в MesenCult Basal Medium (все реактивы фирмы StemCell Technologies, Канада).

Далее из клеток, культивированных в дифференцировочных условиях, была выделена РНК и методом ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ ПЦР) было проанализировано содержание транскриптов этих генов.

Выделение РНК осуществляли с использованием коммерческих реагентов «RNeasy Miny Kit (50)», QIAGEN, США. Выделенную РНК обрабатывали ДНКазой для исключения загрязнений геномной ДНК.

Качество РНК оценивали электрофоретически в агарозном геле, количество - спектрофотометрически. Синтез первых цепей кДНК проводили согласно стандартному протоколу фирмы «Fermentas», используя олиго-dT-праймеры. Реакцию проводили в ПЦР - амплификаторе с горячей крышкой. Все манипуляции проводили в перчатках и в ламинарном боксе во избежание контаминации.

Для анализа экспрессии генов проводили ПЦР в реальном времени с интеркалирующим красителем Sybr Green («Синтол», Россия) в амплификаторе «ВЮ- RAD iQ5. Multicolor Real-time PCR detection system». Праймеры к анализируемым генам подбирали в программе DNASTAR (табл. 1).

ПЦР в реальном времени осуществляли в соответствии со стандартным протоколом фирмы «Синтол». Реакцию проводили с использованием градиента температур (подобранной для каждой пары праймеров - табл. 1). Схема реакции включала: первичную денатурацию (95°С, 5 мин), денатурацию (95°С, 20 сек), отжиг праймеров (59-64°С, 20 сек), элонгацию (72°С, 20 сек -40 циклов) и плавление продуктов амплификации. Для дополнительного контроля чистоты реактивов и работы проводили контрольную реакцию, в которой присутствовали все компоненты, кроме матрицы. Для анализа специфичности амплификации по окончании ПЦР-РВ проводили плавление продуктов с постоянным анализом флуоресценции и построение кривых плавления.

Таблица 1.

Праймеры к остеогенным маркерным генам

Рогшагё рптег Яеуегзе рптег Т отж. Ампликон (п.н.)*

С^еос САСТССТСОСССТАТТ всс вССТСООТСТСТТСА СТАССТ 62.2 138

А1сРЬо АТСООАТСООТОТСТ ССАСА ССАССААвССОАЛСТ тете 62.5 108

ВМР2 СОТОТССССОСОТСС ТТСТТАв тсстооооотссотс ТСТвТТТСА 62.5 261

81а1орг II ТООАТОААААСОААС ААСвСА АААСССАССАТТГСО ЛвЛввТ 60.4 200

Со1^еп I АТООАТТССАОТТСО АвТАТССС САТСОАСАОТОАССС ТвТАвв 62.1 246

СЫепх ССТСТОССвОАСТСА АСААС ТАААОвОООСТООАТ ААвСАТ 62.8 112

С^еоропйп СТССАТГСАСТСОАА СвАСТС САСОТСТССОАААСТ ТСТТАвАТ 60.2 230 п.н. - пара нуклеотидов

Анализ проводили методом ПЦР в реальном времени, уровень мРНК анализируемых генов выравнивали по отношению к двум генам неизменного уровня экспрессии (house keeping genes) (GAPDH, jS-actin), (* - p<0,05, n=12 (количество проанализированных образцов X количество измерений)).

Для оценки влияния условия культивирования дифференцированных ММСК на матриксе из коралла был также проведен сравнительный анализ транскрипции маркерных генов.

Статистический анализ данных осуществляли с использованием программы SigmaStat9.0; для сравнения групп использовали U-критерий Манна-Уитни. Различия считали статистически значимыми при уровне значимости р<0,05.

2.2.4 Оценка биосовместимости образцов коралла семейства Acroporidae в экспериментах in vivo

Для исследования биосовместимости образцов НК в экспериментах in vivo использовали модель подкожной трансплантации. Для этого крысам-самкам линии Wistar весом 180-200г под наркозом (кетамин/реланиум в отношении 1:1, внутрибрюшинно по 0,05мл) делали кожный надрез в области грудного отдела позвоночника. Тупым концом скальпеля кожу отсепаровывали от прилегающего слоя подкожной клетчатки и мышц и в образованный «карман» имплантировали предварительно подготовленный образец материала. Вес образцов НК был приблизительно одинаковым для всех животных и составлял ~ 120мг. На область раны накладывали 2 операционных шва, после чего животных оставляли под наблюдением. Далее крыс выводили из эксперимента с помощью летальной дозы эфира для наркоза через 2-, 4-, 8-, 10-ть недель эксперимента (по два животных на каждый срок, всего - 8 животных), образцы материалов извлекали и проводили их визуальную оценку (видеокомплекс на основе стереомикроскопа и цифровой видеокамеры

Olympus, Япония). После фиксации образцов в 10% растворе формалина осуществляли декальцинацию материалов (0,3М раствор ЭДТА, 37°С -30 дней), затем изготавливали из них парафиновые блоки, а далее -гистологические препараты. Препараты окрашивали гематоксилин-эозином, по стандартной методики и анализировали путем световой микроскопии (микроскоп Axioplan, OPTON, Германия).

2.2.5 Исследование остеозамещающих потенций образцов коралла семейства Acroporidae на модели дефекта большеберцовой кости крысы в экспериментах in vivo

Работа выполнена на крысах - самках линии Wistar, массой 180-200г (по 20 животных в каждой серии экспериментов). Операции (краевую резекцию большеберцовой кости) осуществляли под наркозом. Для этого животным проводили предварительную седацию 0,25% раствором дроперидола (0,5мл внутрибрюшинно) и 0,25% раствором кетамина (0,25мл внутримышечно). Далее, в положении животного на спине, по внутренней медиальной поверхности голени, отступая от коленного сустава приблизительно на 8мм, производили кожный разрез протяженностью 2,0 -2,5см. Кожу отсепаровывали, производили мобилизацию мышц голени отведением их в сторону и обнажали болыпеберцовую кость. Для исключения физиологической регенерации костной ткани отсепаровывали и удаляли надкостницу. Затем на границе верхней и средней трети кости посредством фрезы диаметором 2,5 мм формировали «окончатый» дефект следующего размера: длина 6-8мм, ширина 1,5-2мм, глубина 2,5-Змм, то есть с проникновением в костномозговой канал. Область дефекта полностью заполняли пластическим материалом во II группе (20 крыс), в I - контрольной группе (20 крыс) дефект не заполнялся. На заключительном этапе послойно накладывали швы на мышцы (укрывая место дефекта) и кожу голени (рис.1).

2.2.6 Исследование остеозамещающих потенций НК на модели критического дефекта бедренной кости барана

Работа выполнена на половозрелых баранах (8-12 месяцев; 40-60 кг). Перед операцией каждому животному по рентгенограммам производили замер бедренной кости для изготовления из НК индивидуальных имплантатов и подбора пластин для накостного остеосинтеза. Подготовленный коралловый имплантат представлял собой цилиндр с выступами для фиксации в костномозговом канале (рис. 2а): высота цилиндра 2,0 см с радиусом 0,88 см; высота выступов 1,4 см, с радиусом 0,68 см. Далее НК имплантаты очищали по разработанной и описанной выше методике и стерилизовали их у-облучением (доза 25 кГр).

Операцию (сегментарную резекцию бедренной кости) осуществляли под наркозом. В положении животного на боку производили разрез кожи и подкожно-жировой клетчатки в проекции бедренной кости от тазобедренного до коленного сустава. После выделения бедренной кости, при помощи распатора, в средней трети удаляли надкостницу. Далее при помощи пилы Джильи, в средней трети диафиза производили сегментарную резекцию бедренной кости (Зсм). После чего в область дефекта устанавливали имплантат (НК) и фиксировали его при помощи накостного металлостеосинтеза (пластина - ЬСР, БупШеБ, Швейцария) и серкляжной проволоки (рис. 26). Далее рану послойно ушивали. Описанное оперативное вмешательство проведено у трех баранов.

Асгорога), предназначенный для восстановления костной ткани при реконструктивно-пластических операциях, разработанный ФГУ МНИОИ им П.А. Герцена, нетоксичен, стерилен, отвечает требованиям, предъявляемым к медицинским материалам для внутреннего протезирования» [приложение 1].

Для апробации разработанных подходов в практике был подготовлен протокол клинического исследования: «Применение имплантатов на основе скелета натурального коралла вида Асгорога сегасотеБ для реконструкции костей», утвержденный Этическим комитетом и Ученым советом ФГУ "МНИОИ им. П.А. Герцена " Минздравсоцразвития России. Протокол клинического исследования:

ПРИМИНЕНИЕ ИМПЛАНТАТОВ НА ОСНОВЕ СКЕЛЕТА НАТУРАЛЬНОГО КОРАЛЛА вида АСКОРОЯА СЕЮТСОКМЕЗ ДЛЯ РЕКОНСТРУКЦИИ КОСТЕЙ»

Цель исследования:

Исследование возможности использования скелета коралла Асгорога сетсогпеБ для восстановления костной ткани с определением времени до исчезновения клинических проявлений основного заболевания и оценкой эффективности проведенного лечения. Исследуемая популяция:

В исследование будет включено 10 пациентов с поражением костной ткани различной локализации с доброкачественными (энхондрома, остеоид-остеома и т.д.) и кистоподобными процессами (аневризмальная киста, фиброзная дисплазия и т.д.) с подтвержденным гистологическим диагнозом. Критерии включения:

Для включения в исследование пациенты должны удовлетворять следующим критериям: 1. Мужчины и женщины в возрасте от 14 до 60 лет; 2. Гистологически подтвержденный диагноз доброкачественного или кистоподобного процесса (энхондрома, остеоид-остеома, аневризмальная киста, фиброзная дисплазия и т.д.).

Критерии исключения:

Пациенты, которые соответствуют любому из указанных ниже критериев, не могут быть включены в настоящее исследование:

1. Вовлечение в процесс суставных поверхностей;

2. Предполагаемое несоблюдение пациентом процедур протокола;

3. Беременные и кормящие грудью женщины;

4. Наличие в анамнезе какого-либо злокачественного новообразования (кроме адекватно леченных базально-клеточного рака или рака шейки матки in situ);

5. Нестабильное, требующее постоянного мониторинга и корригирующей терапии состояние при заболеваниях сердца, включающее застойную сердечную недостаточность или стенокардию, инфаркт миокарда в течение 1 года до включения в настоящее исследование, неконтролируемая артериальная гипертензия или аритмия;

6. Активный вирусный гепатит, острое или хроническое заболевание печени;

7. Активная гастродуоденальная язва;

8. Сахарный диабет;

9. Острое или хроническое заболевание почек;

10. Сопутствующая активная и/или неконтролируемая инфекция с поражением костной ткани (остеомиелит);

11. Тяжелое системное заболевание. Планируемое оперативное вмешательство:

Оперативное лечение предусматривает проведение резекции сегмента кости с доброкачественным образованием и замещение его кораллом, соответствующим по форме и протяженности дефекту или экскохлеацию (внутрикостную резекцию) с заполнением образовавшейся полости гранулами коралла размером от 1 до 4 мм в диаметре. Оценка эффективности лечения: щ

Будет осуществляться путем выполнения рентгенологического или КТ исследований области имплантации НК. Лабораторные анализы и клинические исследования: 1 .Общий анализ крови - перед началом лечения.

2.Биохимический анализ крови - перед началом лечения (с обязательным определением ЩФ).

3.Клинические и инструментальные исследования (оценка эффективности лечения):

• R-графия первичной опухоли в двух проекциях - перед началом лечения и после операции (не позднее чем через 7-х суток).

• R-графия легких - перед лечением,

• КТ и МРТ первичной опухоли - по показаниям,

• РИД скелета - в начале исследования,

• ЭКГ и Эхо-КГ - перед началом лечения и по показаниям,

• КТ грудной, брюшной полости - по показаниям. Динамическое наблюдение:

Динамическое наблюдение после окончания первичного лечения (оперативное вмешательство) осуществляется с частотой 1 раз в 1 месяц в течение первых 6 месяцев после окончания лечения, затем 1 раз в 6 месяцев в течение 5 лет.

Объем лабораторных и инструментальных обследований - общий, биохимический анализы крови, R-графия скелета. КТ, РИД скелета, R-графия легких, УЗИ брюшной полости - 1 раз в год или по показаниям.

В рамках разработанного и утвержденного протокола НК был использован для реконструкции костных структур у 10 больных с доброкачественными новообразованиями костной ткани (основная группа). В эту группу были включены 9 - женщин, 1 - мужчина; в возрасте от 21 до 54 лет; средний возраст - 35 лет с доброкачественными (энходрома - 5, остеобластокластома - 1, костно-хрящевой экзостоз - 1) и опухолеподобными (костная киста - 3) образованиями костей. У шести пациентов процесс локализовался в области фаланг пальцев; по одному - в крыле подвздошной и бедренной костях; двое больных имели поражение плечевой кости (табл. 2). Согласно протоколу, больным была произведена внутрикостная резекция очага поражения с реконструкцией гранулами НК семейства Асгоропёае, вида Асгорога сегласогпеБ (размер гранул - от 0,1см3 до 0,5см3) - основная группа.

В группе сравнения 10 больным для восстановления костной ткани использовали /3-трикальцийфосфат (объем использованого материала 0,5см3 - 1 см3; /З-ТКФ - СЬгопОБ, БупШез, Швейцария). Эта группа включала 6 - мужчин и 4 - женщины в возрасте от 19 до 62 лет, средний возраст - 37 лет. У девяти из десяти больных оперативное вмешательство осуществлено по поводу доброкачественных образований костей (энходрома - 1, гигантоклеточная опухоль - 2, костно-хрящевой экзостоз - 1, костная киста - 3 и фиброзная дисплазия - 2). У десятого пациента выполнена резекция проксимального отдела бедренной кости с эндопротезированием тазобедренного сустава, по поводу метастаза рака предстательной железы в головку бедренной кости. Для имплантации чашки эндопротеза, выполнена остеопластика дна вертлужной впадины блоками /3-трикальцийфосфата. У пяти пациентов процесс локализовался в бедренной кости и по одному пациенту имели поражение лучевой кости, ключицы, фаланги пальца, пяточной и большеберцовой костей (табл. 2).

Таким образом, в основной и группе сравнения преобладали (-60%) пациенты в возрасте от 19 до 40 лет. То есть, по возрасту эти группы были сопоставимы и представлены преимущественно лицами молодого возраста. Среди патологических процессов в обеих группах преобладали костные кисты и энхондромы (табл. 2).

Таблица 2.

Распределения больных по локализации поражений костной ткани доброкачественными и опухолеподобными процессами в основной группе и группе сравнения Локализация Заболеваний Основная группа -1; Группа сравнения -II. Фаланга Пальца Ключица Лучевая кость Пяточная Кость Больше-берцовая кость Бедренная кость Плечевая кость Подвздошна я кость

Остеобласто-кластома I 1

II 1 1

Энхондрома I 4 1

II 1

Костная киста I 1 1 1

II 1 2

Фиброзная дисплазия I

II 1 1

Костно-хрящевой экзостоз I 1

11 1

Метастаз рака предстательной железы I

11 1

Похожие диссертационные работы по специальности «Онкология», 14.01.12 шифр ВАК

Заключение диссертации по теме «Онкология», Мыслевцев, Игорь Валерьевич

ВЫВОДЫ

1. Исследована морфологическая организация, химический, физический состав, пористость и прочностные свойства скелета натуральных кораллов семейства Acroporidae. Установлено, что все образцы (за исключением вида Montipora digitata) представлены закристаллизованным арагонитом, имеют сквозные мелкие и крупные (диаметром от 0,1 до 1,0 мм) поры с тонкими стенками, обладают развитой поверхностью с зерном в нанодиапазоне и по прочностным свойствам (19,2-29,2 МПа) в 4 - 6 раз превосходят традиционно используемые кальций-фосфатные керамические материалы.

2. Показано, что все испытанные образцы натуральных кораллов не токсичны, обладают выраженными матриксными и адгезивными для клеток свойствами, способствуют распластыванию и активной экспансии клетками поверхности кораллов, включая поровые пространства, способствуя их пролиферации. Натуральные кораллы (в отличие от кальций-фосфатных керамических материалов) как матриксы для мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток in vitro обладают остеоиндуктивными свойствами, вызывая экспрессию в этих клетках генов остеодифференцировки, кодирующих щелочную фосфатазу, остеопонтин, сиалопротеин II и коллаген I типа.

3. В эксперименте, на группе лабораторных животных (8 крыс) установлено, что натуральные кораллы семейства Acroporidae являются биосовместимыми: при динамическом морфологическом исследовании подкожно введенных лабораторным животным имплантатов отмечена их постепенная биорезорбция, образование правильно организованной соединительной ткани с выраженной неоваскуляризацией; признаков воспалительных реакций, некрозов и других проявлений отторжения на всех сроках до 13 недель не выявлено.

4. При репарации окончатого костного дефекта у крыс гранулами натурального коралла установлено, что этот биоматериал ускоряет регенеративные процессы, инициируя органотипическое замещение дефекта путем периостального остеогенеза, в течение 6-9 недель.

5. Рентгенологическая и морфологическая картина реконструкции костной ткани в зоне обширного сегментарного дефекта бедренной кости барана монолитным коралловым имплантатом свидетельствует о том, что скорость биорезорбции этих материалов соответствует скорости неоостеогенеза и натуральные кораллы обладает остеокондуктивными свойствами, что и обеспечивает быстрое органотипическое восстановление костной ткани, в течение 4-6 месяцев.

6. По результатам клинического исследования можно отметить высокую скорость резорбции натуральных кораллов (как вышедших в мягкие ткани, так и в зоне имплантации) сопоставимую со скоростью репарации кости. Так, при динамическом наблюдении (к 18-24 месяцам) у всех пациентов в основной группе определяется практически полная резорбция натуральных кораллов с реконструкцией костной ткани. Положительным моментом этих имплантатов является отсутствие формирования вокруг них соединительнотканной капсулы, которая может отграничивать имплантируемые материалы и снижать их остеопластические свойства.

7. В группе сравнения первые признаки резорбции /З-трикальцийфосфата отмечаются через 8-12 месяцев. Замещение костного дефекта в этой группе идет медленно, в основном за счет разрастания соединительной ткани, что свидетельствует о низких остеоиндуктивных свойствах кальцийфосфатных материалов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Разработанные модели искусственных дефектов костных структур у мелких и крупных лабораторных животных целесообразно использовать для изучения закономерностей посттравматического остеогенеза, влияния на этот процесс различных факторов, в том числе новых методов костной пластики и новых остеопластических материалов.

2. Натуральные кораллы могут быть рекомендованы в качестве остеопластических материалов как в гранулированном виде, так и в виде цельных блоков (в зависимости от места и объема дефекта) для реконструкции костных структур (в том числе несущих осевую нагрузку), т.н. после травматических переломов, остеотомий и резекций при доброкачественных опухолевых поражениях костной ткани.

3. Обязательными условиями костной пластики являются полное заполнение дефекта коралловым имплантатом, плотный контакт с костным ложем, хорошая стабилизация конструкции и достаточная иммобилизация оперированного сегмента.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Мыслевцев, Игорь Валерьевич, 2011 год

1. Алиев, М.Д. Первичные злокачественные опухоли костей / М.Д. Алиев,

2. B.В. Тепляков, А.Н. Махсон, Г.Н. Мачак, Э.Р. Мусаев // Руководство по онкологии / под ред. Чиссова В.И., Дарьяловой C.JL, М.: ООО «Медицинское информативное агенство», 2008. - С. 649.

3. Баринов, С. М. Биокерамика на основе фосфатов кальция: монография /

4. C.М. Баринов, B.C. Комлев М.: Наука, 2005. - 204 с.

5. Баринов, С.М. Керамические и композиционные материалы на основе фосфатов кальция для медицины / С.М. Баринов // Успехи химии 79 (1), 2010. С. 15-32

6. Баринов, С. М. Всероссийское совещание "Биокерамика в медицине" / С. М. Баринов, В.Ю. Бибиков, В.В. Смирнов // Сборник тезисов. 2006. С. 39-41.

7. Барьяш, В.В. Остеосинтез травматических переломов нижней челюсти с помощью пористого титана /экспериментально-клиническое исследование/: Автореф. дис. кандидата мед. наук: 14.00.21 / В.В. Барьяш. Минск, 1994.-23 с.

8. Басченко, Ю.В. Физико-химические свойства нового биокомпозиционного материала для костной пластики "Коллапан" / Ю.В. Басченко // Докл. Пауч.-практ. конф. "Применение "Коллапана" в травматологии и хирургии". Москва. ЦИТО им. H.H. Приорова. 1996.

9. Берченко, Г.Н. Обоснование использования биоактивных материалов -кальций фосфатной керамики и Коллапана для замещения дефектов костной ткани / Г.Н. Берченко // Тезисы 2-го съезда Международного Союза Ассоциаций патологоанатомов. М., 1999. С. 38-39.

10. Берченко, Г.Н. Патоморфологическое обоснование использования материалов на основе гидроксиапатита для замещения дефектов костной 1кани / Г.Н. Берченко, В.Н. Бурдыгин, З.И. Уразгильдеев, Г.А. Кесян,

11. Ю.В. Басченко, В.И. Макунин, О.М. Бушуев // Удлинение конечностей и замещение дефектов костей. Республика Крым, Ялта, 1996. - С. 11-12.

12. ЬБогоутдинова, A.B. Пластика пострезекционных дефектов пористым никелидом титана в лечении опухолей костей: Автореф. дис. кандидата мед. наук: 14.00.14 / A.B. Богоутдинова. Томск, 2005. 19 с.

13. Бушуев, О.М. Использование Коллапана в комплексном лечении хронического остеомиелита: Автореф. дис. кандидата мед. наук: 14.00.22 / О.М. Бушуев. Москва, 1999. 21 с.

14. Васильев, A.B. Применение остеозамещающего материала Биосит СР-Элкор в хирургической стматологии / A.B. Васильев, Н.В. Котова-Лапоминская // Учебно-методическое пособие. ГОУ ДПО СПбМАПО МЗ РФ. Санкт-Петербург. 2004. - 29 с.

15. Волков, A.B. Синтетические биоматериалы на основе полимеров органических кислот в тканевой инженерии / A.B. Волков // Клеточная транспланталогия и тканевая инженерия 2005. - №2. - С. 43-45.

16. Волков, М.В. Болезни костей у детей / М.В. Волков // М. «Медицина», 1985.-512 с.

17. Воронцов, A.B. Индивидуальное эндопротезирование суставов и дефектов костей конечностей при оперативном лечении больных с опухолями скелета / A.B. Воронцов // Вестник хирургии. 1977. — № 4. -С. 64-67.

18. Германов, В.Г. Применение КоллапАна при стабилизирующих операциях на шейном отделе позвоночника: Автореф. дисс. канд. мед. наук: 14.00.22 / В.Г. Германов. М. 1999. 21 с.

19. Гизатуллин, P.A. Средства для оптимизации остеогенеза в стоматологии: область применения, актуальность проблемы и перспективы разработок и внедрения новых препаратов / P.A. Гизатуллин // М. 2007. 115 с.

20. Григорьян, A.C. Остеопластическая эффективность различных форм гидроксиапатитов по данным экспериментальных морфологических исследований / A.C. Григорян, А.И. Волошин, B.C. Агапов // Стоматология. №3. - 2000. - С. 4-9.

21. Дамбаев, Г.Ц. Новые технологи в лечении онкопатологии / Г.Ц. Дамбаев, В.Э. Гюнтер, И.А. Хлусов, В.Е. Хитрихеев, JI.B. Загребин, Е.Г. Соколович, М.М. Соловьев // Бюллетень РАМН, №2 (112), 2004. С. 5469.

22. Деев, Р.В. Анализ рынка клеточных препаратов для коррекции патологии скелетных тканей / Р.В. Деев // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия -2006. Том 2. - № 4. - С. 18-30.

23. Десятниченко, К.С. Тенденции в конструировании тканеинженерных систем для остеопластики / К.С. Десятниченко, С.Г. Курдюмов // Клеточная трансплантология и тканевая инжененрия 2008. - Том 3. — № З.-С. 62-70.

24. Дорожкин, C.B. Биоматериалы: Обзор рынка / C.B. Дорожкин, С. Агатопоулус // Химия и жизнь. 2002. - № 2. - С. 8.

25. Егоренков, В.В. Пограничные и доброкачественные опухоли костей / В.В. Егоренков // Практическая онкология. 2010. - Том 11. - № 1. — С. 37-44.

26. Жеравин, A.A. Реконструкция костных дефектов при комбинированном лечении опухолей костей / A.A. Жеравин, К.В. Селянинов, И.И. Анисеня, A.B. Богоутдинова // Сибирский онкологический журнал. 2006. - № 1. -С. 70.

27. Зацепин, С.Т. Костная патология взрослых / С.Т. Зацепин // Руководство для врачей. Медицина. Москва - 2001. - 449 с.

28. Карпенко, В.Ю. Хирургическое лечение метастатического поражения длинных трубчатых костей как этап комбинированной терапии: дисс. канд. мед. наук: 14.01.12 / В.Ю. Карпенко. Москва. 2005. 145 с.

29. Ковалев, В.И. Аутопластика пострезекционных дефектов костей при современном лечении остеогенной саркомы у детей / В.И. Ковалев, А .Я.

30. Старостина, В.А. Стрыков, Д.В. Ковалев, A.B. Быстров, A.B. Борадачов, М.С. Лосева // Вест. трав, ортопед. Москва. 2001. - №3. - С. 18-24.

31. Корж, A.A. Гомопластика в лечении опухолей костей / A.A. Корж, P.P. Талышинский // «Здоров'я». Киев. - 1973. - 168 с.

32. Крайнов, Е.А. Морфофункциональная характеристика костеобразования при использовании имплантатов с биокерамическими покрытиями: Автореф. дисс. к-та. мед. наук: 14.00.15 / Е.А. Крайнов. Волгоград. 2009. -23 с.

33. Крживицкий, П.И. Клинико-лучевая диагностика сарком костей / П.И. Крживицкий // Практическая Онкология. Т. 11. — № 1. - 2010. - С. 1218.

34. Кройтор, Г.М. Использование фиксаторов из композиционных материалов для остеосинтеза при переломах длинных трубчатых костей (эксперимент): дисс. к-та. мед. наук: 14.00.22 / Г.М. Кройтор. Москва. 1990.-216 с.

35. Кузанов, А.И. Реваскуляризация костной ткани васкуляризированными надкостнично-кортикальными аутотрансплантатами: дисс. к-та: мед. наук: 14.00.27, 14.00.22 / А.И. Кузанов. РНЦХ. Москва. 2005. 117 с.

36. Куриляк, O.A. Микротетразолиевый тест в прогнозировании химиочувствительности карцином яичников человека: дисс. к-та. биол. наук: 14.00.14 / O.A. Куриляк. Москва. 1993.-166 с.

37. Лекишвили, М.В. Основные свойства деминерализованных костных аллоимплантатов, изготавливаемых в тканевом банке ЦИТО / М.В.

38. Лекишвили // Вестник травматологии и ортопедии им. H.H. Приорова. -Москва. 2007. - № 3. - С. 80-86.

39. Марин, И.М. Хирургическое лечение доброкачественных опухолей костей / И.М. Марин // «Штиинца». Кишинев. - 1981. - 192 с.

40. Мигбрейт, И.М. Репаративная регенерация кости под влиянием переменного магнитного поля / И.М. Митбрейт // Ортопедия, травматология и протезирование. 1978. - N 6. - С. 55-64.

41. Панин, A.M. Опыт применения отечественных биокомпозиционных материалов / A.M. Панин // 10-й юбилейный российский национальный конгресс « Человек и лекарство». Сб. «Человек и лекарство». - Москва. -2003.-С. 300.

42. Панин, A.M. Биокомпозиционные остеопластические материалы. Применение и перспективы развития / A.M. Панин // Сб. статей. Стоматология XXI века. Н. Новгород. - 2003- С. 146-148.

43. Панин, A.M. Опыт использования остеопластического материала «Биоматрикс» в качестве разобщающей резорбируемой мембраны / A.M. Панин, С.Ю. Иванов, В.В. Сербулов // Российский Вестник Дентальной Иплантологии. 2003. - № 2. - С. 32-35.

44. Плахотин, M.B. Остеосинтез полимерным штифтом трубчатых костей / М.В. Плахотин, Ю.И. Филлипов, С.И. Белых // Ветеринария. 1978. -№12.-С. 89-92.

45. Плоткин, Г.Л. Бактерицидные и бактериостатические свойства сополимера «Акрилоксид» при эндопротезировании суставов / Г.Л. Плоткин, В.А. Неверов, C.B. Филатов // Вестник хирурги. 1986. - №10. -С. 96-98.

46. Покотило, В.Л. Судьба костного трансплантата, пересаженного в мягкие ткани / В.Л. Покотило, А.З. Коэдоба // Современная хирургия. 1930. -№1. - С. 73-82.

47. Сикилинда, В.Д. Экспериментальное изучение остеорегенерации при пластике пористым нитинолом / В.Д. Сикилинда // Усовершенствование лечения ортопедотравматологических больных. Ростов-на-Дону. - 2001. -С. 9-12.

48. Соловьев, Ю.Н. Опухоли костей: классификация, номенклатура, проблемы диагностики / Ю.Н. Соловьев // Арх. Патол. 2003- №5- С. 3-6.

49. Стахеев, И.А. Исследования биомеханических свойств пересаженной кости / И.А. Стахеев // Биомеханика. Рига. - 1975. - С. 132-135.

50. Стахеев, И.А. Прочность первичного костного сращения с трансплантатами различного вида / И.А. Стахеев // Ортопедия и травматология. 1978. №8. - С. 55-56.

51. Тепляков, В.В. Чрескостный остеосинтез в лечении больных с первичными злокачественными и метастатическими опухолями длинных костей: дисс.док.мед. наук: 14.00.14 / В.В. Тепляков. Москва, 2000. -272с.

52. Трофимов, В.В. Титан, сплавы титана и их применение в стоматологии / В.В. Трофимов, О.В. Федчишин, В.А. Клименова // Сибирский медицинский журнал. 2009. - № 7. - С. 10-12.

53. Фон Верзен, Р. Подготовка деминерализованного костного матрикса к клиническому использованию. / Р. Фон Верзен // Деминерализованный костный трансплантат и его применение. С.-Петербург, 1993. С. 4-11.

54. Фриденштейн, А.Я. Индукция костной ткани и остеогенные клетки предшественники / А.Я. Фриденштейн, К.С. Лалыкина // М.: Медицина. -1973.-223с.

55. Хэм, А. Гистология / А. Хэм, Д. Кормак // М.: Мир. 1983. - Т.З. - Гл.15. -С. 19-136.

56. Чаклин, В.Д. Костная пластика / В.Д. Чаклин // М.: Медицина. 1971. -228с.

57. Шапошников, Ю.Г. Комплексное лечение огнестрельных переломов с использованием препарата "Коллапан" / Ю.Г. Шапошников, Г.А. Кесян, Г.II. Берченко // Актуальные вопросы клинич. медицины. Москва. 1996. - С. 41.

58. Швед, С.И. Кальцийфосфорные материалы в биологических средах / С.И. Швед // Успехи Современной Биологии. 1995. - Т.115. -№1. - С. 58-73.

59. Abramovich Gotlib, L. Biofabricated Marine Hydrozoan: A Bioactive Crystalline Material Promoting Ossification of Mesenchymal Stem Cells / L. Abramovich - Gotlib, S. Geresh, R. Vago // Tissue Engineering. — 2006. — V. 12.- N4.

60. Aliev, M.D. Modern orthopaedical treatment of metastatic lesion of long bones / M. Aliev, V. Teplyakov, L. Sicheva, V. Karpenko // 17th Annual Meeting of the EMSOS, Oslo, Norway. 2004. - p. 46

61. Axhausen, G. Arbeiten aus dem Gebiet der Knochenpathologie und Knochenchirurgie. / G. Axhausen // Kritische Bemerkungen und neue Beitrage zur freien Knochentransplantation. Arch. F. Klin. Chir. 1911. - V.94 - pp. 281-302.

62. Baschirzev, N.J. Beitrage zur freien Knochenüberpflanzung / N.J. Baschirzev, N.N. Petrov // Dtcsh. Z. Chir. 1912. - 113 - pp. 490-531.

63. Boync, P.J. Animal studies of application of rhBMP-2 in maxillofacial reconstruction / P.J. Boyne // Bone 19 (1 Suppl). 1996. - pp. 89-92.

64. Brogan, J.A. Investigation of Combustion Sprayed Hydroxyapatite / J.A. Brogan, KA. Gross, Z. Chen, C.C. Berndt, H. Herman // Polymer Composite Coatings Proc. 7th Ther. Sp. Conf. 1994. - pp. 159-164.

65. Buck, B.E. Human bone and tissue allografts / B.E. Buck, T.I. Malinin // Preparation and safety. Clin Orthop. 1994. - 303 - pp. 8-17.

66. Casciato, D.A. Manual of Clinical Oncology / D.A. Casciato // Fifth Edition. Lippincott Williams & Wilkins. 2004. - pp. 510-527.

67. Chiroff, R.T. Tissue ingrowth of Replamineform implants / R.T. Chiroff, E.W. White, K.N. Weber, D.M. Roy // J Biomed Mater Res. 1975. - 9(4) - pp. 2945.

68. Cirotteau, Y. A physiological approach in stabilization and consolidation of unstable femoral neck fracture in osteoporotic elderly patients: a retrospective review / Y. Cirotteau // Eur. J. Orthop. Surg. Traumatol. 2003. - 13 - pp. 145-155.

69. Cui, L. Repair of cranial bone defects with adipose derived stem cells and coral scaffold in a canine model / L. Cui, B. Liu, G. Liu, W. Zhang, L. Cen, J. Sun, S. Yin, W. Liu, Y. Cao // Biomaterials. 2007. - 28 - pp. 5477-5486.

70. Enneking, W.F. Autogenous cortical bone grafts in the reconstruction of segmental defects / W.F. Enneking, J.L. Eady, H. Burchardt // J Bone Joint Surg. 1980. - 62A - pp.1039-1058.

71. Fechner, R.E. Tumors of the Bones and Joints / R.E. Fechner, S.E. Mills // Bethesda, Maryland. 1993. - pp. 170-177.

72. Frodel, J.L. The use of high-density polyethylene implants in facial deformities / J.L. Frodel, S. Lee // Arch Otolaryngol Head Neck Surg. 1998. - 124(11) -pp. 1219-1223.

73. Gengwei, J. Coating of hydroxy apatite on highly porous A1203 substrate for bone substitutes / J. Gengwei, S. Dongiu // J.Biomed.Mater.Res. (Appl. Biomater). 1998. - v.43. -No.l - pp. 77-81.

74. Gengwei, J. Coating of hydroxyapatite on porous alumina substrate through a thermal decomposition method / J. Gengwei, S. Dongiu // J.Biomed.Mater.Res. (Appl. Biomater). 1998.-v.48.-No.2-pp. 117-120.

75. Gomez -Vega, L.M. Glass-based coatings for titanium implant alloys / L.M. Gomez -Vega, E.T. Saiz // J.Biomed.Mater.Res. 1999. - v.46. - No.4 - pp. 549-559.

76. Gosain, A.K. Biomaterials in the face: Benefits and risks / A.K. Gosain, J.A. Persing // J Craniofac Surg. 1999. - 10(5) - pp. 404-14.

77. Gross, K.A. Thermal processing of hydroxyapatite for coating production / K.A. Gross, C.C. Berndt // J.Biomed.Mater. Res. 1998. - v.39. - No.4 - pp. 580-587.

78. Gross, K.A. Amorphous phase formation in plasma-sprayed hydroxyapatite coating / K.A. Gross, C.C. Berndt, H.A. Herman // J.Biomed.Mater.Res. -1998. v.39. - No.3 - pp. 407-411.

79. Groves, H. Methods and Results of Transplantation of Bone in the Repair of Caused by Injury or Disease / H. Groves / 1917. No.5. - pp. 185-242.

80. Guillemin, G. Comparison of coral resorption and bone apposition with two natural corals of different porosities / G. Guillemin, A. Meunier, P. Dallant, P. Christel, J. Pouliquen, L. Sedel // J.Biomed.Mater.Res. 1989. - 23(7) - pp. 765-79.

81. Gupta, D. Bridging large defects with a xenograft composited with autologous bone marrow / D. Gupta // Int. Orthop. 1982. - 6 (2) - pp. 79-85.

82. Heimann, R.B. Microstructural and in vitro chemical investigations into plasma-sprayed bioceramic coatings / R.B. Heimann, H. Kurzweg, D. Ivey, M.L. Wayman // J.Biomed.Mater.Res. (Appl. Biomater.). 1998. - v.43. -No.4-pp. 441-450.

83. Hench, L.L. Bioceramics / L.L. Hench // J. Amer. Ceram. Soc. 1998. - v. 81. - pp. 1705- 1728.

84. Hench, L.L. Bioactive materials: The potential for tissue regeneration / L.L. Hench// J.Biomat.Mater.Res. 1998. -v.41. - No.4- pp. 511-518.

85. Hitchon, P.W. Comparison of the biomechanics of hydroxyapatite and polymethylmethacrylate vertebroplasty in a cadaveric spinal compression fracture model / P.W. Hitchon, V. Goel // J. Neurosurg. 2001. - v. 5. -No.10.

86. Jic, W. Integrity and thermal decomposition of apatits in coatings influenced by underlying titanium during plasma spraying and post-heat-treatment / W. Jic // J.Biomed.Mater.Res. 1996. - v.30. - No.5 - p.5.

87. Kale, S. Osteopoesis: the early development of bone cells / S. Kale, M.W. Long // Crit.Rev.Eukaryot.Gene.Expr. 2000. - v. 10. - 3-4 - pp. 259-267.

88. Kehr, P. Use of coral in cervical intersomatic grafting / P. Kehr, F. Grafitiaux, K. Gosset, K. Bencheikh // Bull.Inst.Océanogr. 1995. - 14(3) - pp. 123-128.

89. Kenesi, C. Ostéotomie tibiale d'addition interne calée par un coin corail / C. Kenesi, M.C. Voisin, A. Dhem // Chirurgie. 1997. - 122(7) - pp. 379-382.

90. Khaled, A.E. Low Intensity Laser Versus Synthetic Bone Graft To Increase Bone Density After Enucleation Of Large Cystic Lesions Of Jaws / A.E. Khaled // Journal of American Science. 2011. - 7(6) - pp. 1101-1108.

91. Khan, M.T. Allograft bone transplantation: a Sheffield experience / M.T. Khan, I. Stockley, C. Ibbotson // Ann.R.Coll.Surg.Eng. 1998. - 80(2) - pp. 150-153.

92. Khor, K.A. Effect of Powder Feedstock on Thermal Sprayed Hydroxyapatite Coatings / K.A. Khor, P. Cheang // Proc. 7th Nat.Thermal.Spray.Conf. 1994. -pp.147-152.

93. Khor, K.A. Characterization of Plasma Sprayed Hydroxyapatite Powders and Coatings / K.A. Khor, P. Cheang // Proc.Nat.Thermal.Spray.Conf. 1993. -pp. 347-352.

94. Klein, C.P. Calcium phosphate sprayed coatings and their stability: An in vivo study / C.P. Klein // J.Biomed.Mater.Res. 1994. - v.28. - No.8 - pp. 909-917.

95. Knackstedt, M.A. Structure and properties of clinical coralline implants measured via 3D imaging and analysis / M.A. Knackstedt, C.H. Arns // Biomaterials. 2006. - 27 - pp. 2776-2786.

96. Lovell, T.P. Augmentation of spinal fusion with bone morphogenetic protein in dogs / T.P. Lovell, E.G. Dawson, O.S. Nilsson // Clin.Orthop. 1989. -v.243. - pp. 266-274.

97. Lugscheider, E. Production of biocompatible coatings of plasma spraying on a air / E. Lugscheider // Mater.Sci.Eng.A. 1991. - v.139. - No.1-2 - pp.4548.

98. Ma, Q. Vascular osteomuscular autograft préfabrication using coral, type marrow-derived osteoblasts I collagen and recombinant human bone morphogenetic protein-2 / Q. Ma // Br.J.Oral.Maxillofac.Surg. 2000. - 38 -pp. 561-564.

99. Macewen, W. Discussion on development and growth of bone, normal and abnormal / W. Macewen // Brit.Ned.J. 1912. - No.2. - pp. 766-768.

100. Mankin, H.J. Long term results of allograft replacement in the management of bone tumors / H.J. Mankin, M.C. Gebhardt, L.C. Jennings // Clin.Orthop.Relat.Res. - 1996. - v. 324. - pp. 86-97.

101. Marchac, D. Use of coral granules in the craniofacial skeleton / D. Marchac, G. Sandor // J.Craniofac.Surg. 1994. - 5(4) - pp. 213-7.

102. Matthew T. Biomechanical and histological analisis of an HA coatings / T. Matthew // J.Biomed.Mater.Res. 1996. - v.31. - No.4 - pp. 465-480.

103. Mirra, J.M. Bone tumors: clinical, radiologic, and pathologic correlations / J.M. Mirra // Philadelphia: Lea and Febiger. 1989. - pp. 316-341.

104. Mofid, M.M. Biocompatibility of fixation materials in the brain / M.M. Mofid, R.C. Thompson, C.A. Pardo, P.N. Manson, C.A. Vander // Plast.Reconstr.Surg. 1997. - 100(1) - pp. 14-20.

105. Mora, F. Clinical evaluation of natural coral and porous hydroxyapatite implants in periodontal bone lesions: results of a 1-year follow-up / F. Mora, J.P. Ouhayoun//J.Clin.Periodontol. 1995. -22(11) -pp. 877-884.

106. Mossman, T.J. Rapid colorimetric, assay for cellular growth and cytotoxity assays / T.J. Mossman // Immunol.Methods. 1983. - 65 - pp. 55-63.

107. Nandi, S.K. Orthopaedic applications of bone graft & graft substitutes: a review / S.K. Nandi, S. Roy, P. Mukherjee, B. Kundu, D. De, D. Basu // Indian.J.Med.Res. 2010. - 132 - pp. 15-30.

108. Nomikos, G.C. Primary bone tumors of the lower extremities / G.C. Nomikos, M.D. Murphey, M.J. Kransdorf, L.W. Bancroft, J.J. Peterson // Radiol.Clin.North.Am. 2002. - 40 - pp. 971-990.

109. Oilier, L. De la production artificielle des os, an moyen de la transplantation de périoste et des greffes oseuses / L. Oilier // C.r.Soc.Biol. 1858. - 5 - pp. 145-191.

110. Oilier, L. Recherches experimentales sur les greffes osseus / L. Oilier // J.de Physiol.De l'home et des Animeux. 1860. - No. 3 - pp. 88-108.s

111. Ooshiaki, K. Bone-bonding behavior of plasma sprayed coatings of bioglass RAW-glass ceramic, and tricalcium phosphate in titanium alloy / K. Ooshiaki // J.Biomed.Mater. Res. 1996. - v.30 - No.2 - p. 261.

112. Pan, J. Variation of oxide films on titanium induced by osteoblastlike cell culture and the influence of an H202 pretreatment / J. Pan, H. Liao, C. Leygraf, D. Thierry, J. Li // J.Biomed.Mater.Res. 1998. - v.40. - No.2 - pp. 244-256.

113. Phemister, D.B. The fate of transplanted bone and regenarative power of its various constituents / D.B. Phemister // Surg.Gyn. 1914. - 19 - pp. 303-333.

114. Pouliquen, J.C. Le corail substitué à l'apport osseux dans l'arthrodèse vertébrale postérieure chez l'enfant / J.C. Pouliquen, M. Noat, C. Verneret, G. Guillemin, J.L. Pata // Rev.Chir.Orthop. 1989. - 75(6) - pp. 360-369.

115. Raymond, A.K. WHO Classification of Tumours: Pathology and Genetics of Tumours of Soft Tissue and Bone / A.K. Raymond, A.G. Ayala, S. Knuutila, P. Kleihues, L. Sobin, C. Fletcher // Lyon, France: IARC Press. 2002. - pp. 264-270.

116. Riboud, P.V. Compositition and stability of apatites in the system CaO-P205-iron oxide-I-120 at high temperature / P.V. Riboud // Ann.Chim. 1973. -v.8.-pp. 381-390.

117. Ripamonti, U. Advanced Bioactive Biomimetic Matrices Induce Bone Formation by Auto-induction / U. Ripamonti // 11th ICFPAM Conference Symposium 8: Biomaterials Africa. 2011. - p. 8

118. Ripamonti, U. The induction of bone formation by coral-derived calcium carbonate/hydroxyapatite constructs / U. Ripamonti, J. Crooks, L. Khoali, L. Roden // Biomaterials. 2009. - 30 - pp. 1428-1439.

119. Rokkanen, P.U. Bioabsorbable fixation devices in Orthopaedics and Traumatology / P.U. Rokkanen // Ann.Chir.Gynaecol. 1998. - 87(1) - pp. 13-20.

120. Roux, F.X. Madreporic coral: a new bone graft substitute for cranial surgery / F.X. Roux, D. Brasnu, B. Loty, B. George, G. Guillemin // J.Neurosurg. -1988.-69(4)-pp. 510-513.

121. Roux, F.X. Madreporic coral for cranial base reconstruction / F.X. Roux, D. Brasnu, M. Menard, B. Devaux, G. Nohra, B. Loty // Acta Neurochir (Wien). -1995. 133(3-4) - pp. 201-205.

122. Schrooten, J. Adhesion of new bioactive glass coating / J. Schrooten, H. Van Oosterwyck, J. Sloten, J. Vander, J.A. Helsen //J.Biomed.Mater.Res. 1999. -v.44. - No.3 - pp. 243-252.

123. Shaffer, J.W. Fate of Vascularized and Nonvascularized autografts / J.W. Shaffer, G.A. Field, V.M. Goldberg, D.T. Davy // Clin.Orthop. 1985. -v.197. - pp. 32-43.

124. Soost, F. Natural coral calcium carbonate as alternative substitute in bone defects of the skull / F. Soost, B. Reisshauer, A. Herrmann, H.J. Neumann // Mund. Kiefer. Gesichts. Chir. 1998. - 2(2) - pp. 96-100.

125. Souyris, F. Bilan après 4 ans d'experimentation du corail au titre d'implants osseux / F. Souyris, J.P. Chevalier, C. Payrot, C. Pellequer, A. Gary-Bobo, C. Merlier // Ann.Chir.Plast.Esthet. 1984. - 29(3) - pp. 256-260.

126. Unni, K.K. Dahlin's Bone Tumors: General Aspects and Data on 11,087 Cases / K.K. Unni // 5nd ed. Lippincott Raven. Philadelphia. - 1996. - pp. 143-196.

127. Yoshid, K. Thin sol-gel-derived silica coatings on dental pure titanium casting / K. Yoshid, K. Kamad, K. Sato, R. Hatada, K. Baba, M. Atsuta // J.Biomed.Mater.Res. (Appl. Biomater.). 1999. - v.48. -No.6 - pp. 778-785.

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.