Векторная система на основе генома аденовируса птиц CELO для доставки и экспрессии гена тимидинкиназы вируса простого герпеса человека типа 1 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Шашкова, Елена Викторовна

• Шашкова, Елена Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шашкова, Елена Викторовна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Векторные системы на основе геномов аденовирусов.

1.1.1. Строение и экспрессия генома аденовируса человека типа 5.

1.1.2. Векторы на основе геномов аденовирусов человека.

1.1.3. Особенности строения генома аденовируса птиц CELO в сравнении с геномом аденовируса человека типа 5.

1.1.4. Особенности векторных систем на основе генома аденовируса птиц CELO.

1.2. Экспрессия гена тимидинкиназы вируса простого герпеса человека типа 1 в составе геномов аденовирусных векторов.

1.2.1. Функциональная активность HSV-tk.

1.2.2. "Bystander" - эффект системы HSV-tk/GCV.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Материалы.

2.1.1. Вирусы и бактериальные штаммы.

2.1.2. Клеточные линии.

2.1.3. Плазмидные векторы.

2.1.4. Ферменты и другие реактивы.

2.1.5. Лабораторные животные.

2.2. Методы.

2.2.1. Выделение и очистка плазмидной ДНК.

2.2.2. Выделение аналитических количеств плазмидной ДНК.

2.2.3. Гидролиз ДНК специфическими эндодезоксирибонуклеазами.

2.2.4. Лигирование фрагментов ДНК.

2.2.5. Разделение фрагментов ДНК методом электрофореза в агарозном геле.

2.2.6. Препаративное разделение фрагментов ДНК и элюция ДНК из геля.

2.2.7. Трансформация клеток Е. coli.

2.2.8. Идентификация рекомбинантных клонов.

2.2.9. Трансфекция культур клеток методом кальциево-фосфатной преципитации.

2.2.10. Котрансфекция клеток линии LMH для получения рекомбинантных аденовирусов CELO.

2.2.11. Котрансфекция клеток линии 293 для получения рекомбинантных аденовирусов на основе генома Ад5.

2.2.12. Накопление вирусов.

2.2.13. Очистка и концентрирование аденовирусов CELO.

2.2.14. Выделение вирусной ДНК.

2.2.15. Выделение ДНК из клеток, инфицированных аденовирусами.

2.2.16. Титрование вирусов.

2.2.17. Дезоксиолигонуклеотиды и полимеразная цепная реакция.

2.2.18. Количественное определение цитотоксичности в экспериментах in vitro.

2.2.19. Определение функциональной активности CELO-TK in vivo.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1. Конструирование рекомбинантных аденовирусов CELO, экспрессирующих репортерный ген EGFP и терапевтический ген HSV-tk. .56 3.1.1. Конструирование челночного плазмидного вектора, несущего экспрессирующую кассету с геном HSV-tk в фрагменте генома Ад CELO.

3.1.2. Конструирование челночного плазмидного вектора, несущего экспрессирующую кассету с геном EGFP в фрагменте генома Ад CELO.

3.1.3. Изучение экспрессии гена HSV-tk в составе плазмидного вектора pCBEARV/TK при трансфекции культур клеток 293 и LMH.

3.1.4. Получение рекомбинантных Ад CELO, несущих гены HSV-tk и EGFP в сайте делеции фрагмента генома, несущественного для репликации вируса CELO в культуре клеток LMH.

3.2. Исследование функциональной активности рекомбинантного Ад CELO-ТК в экспериментах in vitro.

3.2.1. Исследование цитотоксичности рекомбинантного вируса CELO-TK в культуре клеток А549.

3.2.2. Исследование способности Ад CELO-TK проявлять "bystander" эффект.

3.2.3. Сравнение in vitro функциональной активности CELO-TK/GCV и Ad5-TK/GCV.

3.2.3.1. Конструирование рекомбинантных вирусов АдЗ-EGFP и Ад5-ТК на основе генома Ад5 человека.

3.2.3.2. Сравнение in vitro цитотоксичности системы HSV-tk/GCV при использовании для доставки гена HSV-tk векторов на основе Ад CELO и Ад5.

3.3. Исследование функциональной активности вируса CELO-TK in vivo, в модели опухоли меланомы мышей В16.

3.3.1. In vivo трансдукция векторной системой на основе генома Ад CELO подкожных опухолей меланомы мышей В16.

3.3.2. Влияние внутриопухолевых инъекций рекомбинантного Ад CELO-TK на рост опухолей меланомы В16.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Векторная система на основе генома аденовируса птиц CELO для доставки и экспрессии гена тимидинкиназы вируса простого герпеса человека типа 1»

1. Актуальность проблемы.

Векторные системы на основе геномов аденовирусов (Ад) позволяют эффективно доставлять генетическую информацию в клетки млекопитающих in vitro и in vivo. Наиболее изучены в настоящее время векторы на основе генома Ад человека типа 5 (Ад5), возможность применения которых в ветеринарии, сельском хозяйстве и генной терапии интенсивно исследуется. Показаны положительные результаты опосредованной Ад векторами доставки целевых генов в клетки с целью терапии и профилактики различных заболеваний человека и животных. Накоплены экспериментальные данные о свойствах векторов на основе генома Ад5, влияющих на эффективность их использования. Наиболее значительным препятствием для практического использования данных векторов является высокая иммуногенность таких векторов в организме млекопитающих, что приводит к элиминации векторных частиц и трансдуцированных клеток. Результатом является снижение продолжительности экспрессии доставляемых генов, что оказывает негативное влияние на проявляемый в результате экспрессии гена исследуемый эффект.

В настоящее время изучается возможность создания новых альтернативных вирусных эукариотических векторных систем. Одним из новых векторов для доставки генов в клетки млекопитающих in vivo является Ад птиц CELO (FAV-1). Интерес к данному вирусу как векторной системе объясняется наличием свойств, позволяющих предположить возможность разработки эффективной эукариотической векторной системы на его основе. Поскольку Ад CELO является вирусом птиц, в организме млекопитающих отсутствует предшествующий применению вектора иммунитет к данному вирусу, что предположительно может способствовать увеличению продолжительности экспрессии трансгена в организме млекопитающих в случае его доставки с помощью вектора CELO. Последовательное применение векторов на основе Ад5 и CELO также способно увеличить продолжительность экспрессии доставляемого гена вследствие смены векторной системы. Кроме этого, Ад CELO не способен к репликации в клетках млекопитающих, то есть является по отношению к таким клеткам естественно дефектным. Значительным практическим достоинством векторов CELO является способность к репродукции в куриных эмбрионах. Накопление препаративных количеств векторов в эмбрионах кур эффективнее, технологичнее и экономически выгоднее, чем в культурах клеток, которые используют для получения векторов на основе геномов Ад млекопитающих.

Данные литературы показывают возможность получения рекомбинантных вирусов CELO, экспрессирующих встроенные репортерные гены in vitro и in vivo. Изучение структурно-функциональной организации генома Ад CELO продемонстрировало наличие областей, несущественных для репликации вируса в культуре клеток гепатомы петуха леггорна LMH, представляющие собой потенциальные сайты встраивания трансгенов. Интересной особенностью вируса CELO является наличие двух фиберов различной длины в каждой вершине вириона. Было показано, что удаление длинного фибера не лишает вирус CELO способности к репликации в эмбрионах кур, что предполагает возможность осуществления замены или модификации данного фибера с целью дополнительного улучшения характеристик векторов на основе CELO.

Накопленные данные позволяют сделать заключение о перспективности развития векторной системы на основе Ад птиц CELO. На основе таких векторов возможно получение рекомбинантных вакцин против инфекционных заболеваний человека и животных. Векторы CELO также способны найти широкое применение в генной терапии как альтернативный или дополнительный к Ад5 вектор.

2. Цели и задачи исследования.

Целью данной работы являлось конструирование векторов на основе Ад птиц CELO и Ад5 для доставки и экспрессии in vitro и in vivo терапевтического гена HSV-tk, а также репортерного гена EGFP, исследование экспрессии и функциональной активности продуктов экспрессии в культурах клеток млекопитающих, сравнение эффективности доставки и экспрессии HSV-tk векторами на основе CELO и Ад5, а также изучение функциональной активности полученных рекомбинантных Ад CELO in vivo, на модели опухоли меланомы мышей В16.

Непосредственными задачами данной работы были:

1. Получение рекомбинантных Ад CELO, несущих гены HSV-tk и EGFP в сайте делеции 41731-43684 п.о. генома CELO под контролем промотора HCMV.

2. Исследование функциональной активности рекомбинантного Ад CELO, экспрессирующего ген HSV-tk под контролем промотора HCMV, в культурах опухолевых клеток.

3. Получение рекомбинантных Ад на основе генома Ад5, несущих гены HSV-tk и EGFP в сайте делеции Е1 области генома Ад5 под контролем промотора HCMV.

4. Сравнение in vitro, в культурах клеток опухолей функциональной активности векторов на основе Ад CELO и Ад5, экспрессирующих ген HSV-tk под контролем промотора HCMV.

5. Исследование in vivo, на модели подкожных трансплантатов меланомы мышей В16 функциональной активности рекомбинантного Ад CELO, экспрессирующего ген HSV-tk под контролем промотора HCMV.

3. Научная новизна и практическая значимость.

В результате проведенной работы впервые получены данные о функциональной активности рекомбинантного Ад птиц CELO, экспрессирующего терапевтический ген тимидинкиназы вируса простого герпеса человека типа 1 под контролем промотора HCMV, in vitro, в культурах клеток опухолей человека и мышей. Исследована эффективность системы HSV-tk/GCV в экспериментах in vitro с использованием вектора CELO.

Впервые проведено in vitro, в культуре клеток аденокарциномы легкого человека HI299 сравнение цитотоксического действия векторных систем на основе геномов Ад птиц CELO и Ад человека типа 5, экспрессирующих ген HSV-tk под контролем промотора HCMV.

Впервые показан противоопухолевый эффект рекомбинантного Ад CELO-TK, экспрессирующего ген HSV-tk под контролем промотора HCMV, in vivo, на модели подкожных трансплантатов меланомы мышей В16.

Полученные результаты демонстрируют возможность использования Ад птиц CELO в качестве средства доставки и экспрессии целевых генов в клетках млекопитающих как in vitro, так и in vivo. Это подтверждает целесообразность дальнейшего изучения и развития векторной системы на основе генома CELO с целью применения в ветеринарии и сельском хозяйстве в качестве генно-инженерных вакцин, а также в генной терапии для создания рекомбинантных вирусов CELO, которые в перспективе могут быть использованы в терапии и профилактике различных заболеваний человека, в том числе - онкологических.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Шашкова, Елена Викторовна

ВЫВОДЫ:

1. Получены рекомбинантные Ад CELO, несущие под контролем промотора HCMV гены HSV-tk и EGFP в сайте делеции 41731-43684 п.о. области генома CELO, несущественной для репликации вируса CELO в культуре клеток LMH и куриных эмбрионах.

2. Впервые исследована функциональная активность рекомбинантного Ад CELO-TK, экспрессирующего ген HSV-tk под контролем промотора HCMV в культурах клеток аденокарцином легкого человека А549 и HI299, гепатоклеточной карциномы человека НерЗВ и меланомы мышей В16. Впервые показано наличие "bystander" эффекта системы CELO-TK/GCV в исследованных линиях клеток опухолей.

3. Получены рекомбинантные Ад на основе генома Ад человека типа 5, несущие гены HSV-tk и EGFP в сайте делеции Е1 области генома Ад5 под контролем промотора HCMV.

4. Впервые исследована in vitro функциональная активность рекомбинантного Ад CELO-TK, экспрессирующего ген HSV-tk под контролем промотора HCMV, в сравнении с функциональной активностью векторной системы на основе Ад5. Показано, что при высоких множественностях инфекции эффективность использования вектора CELO сравнима с эффективностью вектора на основе Ад5.

5. Исследована in vivo функциональная активность рекомбинантного Ад птиц CELO, экспрессирующего репортерный ген EGFP под контролем промотора HCMV, на модели меланомы мышей В16.

6. In vivo, на модели сингенных подкожных трансплантатов меланомы мышей В16 впервые исследована функциональная активность рекомбинантного Ад CELO-TK, экспрессирующего ген HSV-tk под контролем промотора HCMV. Показана противоопухолевая активность

Ад вектора CELO-TK, замедление роста опухолей и увеличение периода выживаемости мышей.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шашкова, Елена Викторовна, 2002 год

1. Акопян Т.А., Каверина Е.Н., Народицкий Б.С., Тихоненко Т.И. Анализ нуклеотидной последовательности фрагмента (92-100%) генома аденовируса птиц CELO. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология., 1992, №11-12, стр. 19-23.

2. Грин М. Трансформация и онкогенез, ДНК-содержащие вирусы. // "Вирусология" ред.Филдс, "Мир", 1989.

3. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. // М., "Мир", 1982.

4. Струк. Инфекционные вирусы и канцерогенез. // Киев, "Наукова думка", 1987.

5. Фомина Н.В. Аденовирусная инфекция животных. // М., "Колос", 1995.

6. Хорвиц М.С. Аденовирусы и их репликация. // "Вирусология" ред.Филдс, "Мир", 1989.

7. Akopian Т.А., Kruglyak V.A., Rivkina M.V., Naroditsky B.S., Tikhonenko T.I. Sequence of the avian adenovirus CELO DNA fragment (0-12%). // Nucleic Acid Research., 1990, v.-18: 2825.

8. Akopian T.A., Lazareva S.E., Tikhomirov E.E., Karpov V.A., Naroditsky B.S. Genes for fowl adenovirus CELO penton base and core polypeptides. // Arch. Virol., 1996a, V.-141, pp-357-365.

9. Akopian T.A., Doronin K.K., Karpov V.A., Naroditsky B.S. Sequence of the avian adenovirus FAV 1 (CELO) DNA encoding the hexon-associated protein pVI and hexon. // Arch. Virol., 1996b, V.-141, pp.-1759-1765.

10. Alam J., Cook J.L. Reporter genes: application to the study of mammalian gene transcription. // Anal. Biochem., 1990, v.-188, pp.-245-254.

11. Alavi J.B., Eck S.L. Gene therapy for high grade gliomas. // Expert. Opin. Biol. Ther., 2001, v.-l, pp.-239-252

12. Anderson L.M., Swaminathan S., Zackon I., Tajuddin A.K., Thimmapaya В., Weitzman S.A. Adenovirus-mediated tissue-targeted expression of the HSVtk gene for the treatment of breast cancer. // Gene Ther., 1999, v.-6, pp.-854-64.

13. Barba D., Hardin J., Sadelain M., and Gage F.H. Development of anti-tumor immunity following thymidine kinase-mediated killing of experimentalbrain tumors. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1994, v.-91, pp.-4348-4352.

14. Beltinger C., S. Fulda, T. Kammertoens, W. Uckert and K.M. Debatin Mitochondrial amplification of death signals determines thymidine kinase / ganciclovir-triggered activation of apoptosis. // Cancer Res., 2000, v.-60, pp.-3212-3217.

15. Bennett M.V., Barrio L.C., Bargiello T.A., Spray D.C., Hertzberg E., Saez J.C. Gap junctions: new tools, new answers, new questions. // Neuron., 1991, v.-6, pp.-305-320.

16. Bergelson J.M., Cunningham J.A., Droguett G., Kurt-Jones E.A., Krithivas A., Hong J.S., Horwitz M.S., Crowell R.L., Finberg R.W. Isolation og a common receptor for coxsackie В viruses and adenoviruses 2 and 5. // Science, 1997, v.-286, pp.-1579-1583.

17. Bett A.J., Haddara W., Prevec L., Graham F.L. An efficient and flexible system for construction of adenovirus vectors with insertions or deletions in early regions 1 and 3. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1994, v.-91, pp.-8802-8806.

18. Boucher P.D., Ostruszka L.J., Murphy P.J., Shewach D.S. Hydroxyurea significantly enhances tumor growth delay in vivo with herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir gene therapy. // Gene Ther., 2002, v.-9, pp.-1023-1030.

19. Bouri K., Feero W.G., Myerburg M.M., Wickham T.J., Kovesdi I., Hoffman E.P., Clemens P.R. Polylysine modification of adenoviral fiber protein enhances muscle cell transduction. // Hum. Gene Ther., 1999, v.-Ю, pp.-1633-1640.

20. Bruder J.T., Jie Т., McVey D.L., Kovesdi I. Expression of gpl9K increases the persistence of transgene expression from an adenovirus vector in the mouse lung and liver. // J. Virol., 1997, v.-71, pp.-7623-7628.

21. Cai F., Weber J. Organization of the avian adenovirus genome and the structure of its endopeptidase. // Virology., 1993, V.-196, pp.-358-362.

22. Chen C., Okayama N. High-efficiency transformation of mammalian cells by plasmid DNA. // Mol. Cell. Biol., 1987, v.-7, pp.-2745-2752.

23. Chiocca S., Baker A., Cotten M. Identification of a novel antiapoptotic protein, GAM-1, encoded by the CELO adenovirus.// J. Virol., 1997, v.-71, pp.-3168-3177.

24. Chiocca S., Kurtev V., Colombo R., Boggio R., Sciurpi M.T., Brosch G., Seiser C., Draetta G.F., Cotten M. Histone deacetylase 1 inactivation by an adenovirus early gene product. // Curr. Biol., 2002, v.-12, pp.-594-598.

25. Chiocca S., Kurzbauer R., Schaffner G., Baker A., Mautner V., Cotten M. The complete DNA sequence and genomic organization of the avian adenovirus CELO. //J. Virol., 1996, v.-70(5), pp.-2939-2949.

26. Cormack B.P., Valdivia R.H., Falkow S. FACS-optimized mutants of the green fluorescent protein (GFP). // Gene., 1996, V.-173, pp.-33-8.

27. Cotten M., Wagner E., Zatloukal K., Birnstiel M.L. Chicken adenovirus (CELO virus) particles augment receptor-mediated DNA delivery to mammalian cells and yield exceptional levels of stable transformants. // J. Virol., 1993, v.-67, pp.-3777-3785.

28. Cowen В., Calnek B.W., Menendez N.A., Ball R.F. Avian adenoviruses: effect on egg production, shell quality, and feed consumption. // Avian Dis., 1978, v.-22, pp.-459-470.

29. Cruciani V., Kaalhus O., Mikalsen S.O. Phosphatases involved in modulation of gap junctional intercellular communication and dephosphorylation of connexin43 in hamster fibroblasts: 2B or not 2B? // Exp. Cell Res., 1999, v.-252(2), pp.-449-463.

30. Degreve В., E. De Clercq and J. Balzarini Bystander effect of purine nucleoside analogues in HSV-ltk suicide gene therapy is superior to that of pyrimidine nucleoside analogues.// Gene Therapy, 1999, v.-6, pp.-162-170.

31. DeMatteo R.P., Markmann J.F., Kozarsky K.F., Barker C.F., Raper S.E. Prolongation of adenoviral transgene expression in mouse liver by T lymphocyte subset depletion. // Gene Ther., 1996, v.-3(l), pp.-4-12.

32. Dermietzel R., Spray D.C. Gap junctions in the brain: where, what type, how many and why? // Trends Neurosci., 1993, v.-16, pp.-186-192.

33. Dethlefsen L.A., Prewitt J.M. and Mendelsohn M.L. Analysis of tumor growth curves J. Natl. Cancer Inst., 40: 389-405, 1968.

34. Dhillon A.S., Jack O.K. The oncogenic potential of eleven avian adenovirus strains. // Avian Dis., 1997, v.-41, pp.-247-251.

35. Dilber M.S., Abedi M.R., Christensson В., Bjorkstrand В., Kidder G.M., Naus C.C.G., Gahrton G., and Smith C.I. Gap junction promote the bystander effect of herpes simplex virus thymidine kinase in vivo. // Cancer Res., 1997, v.-57, pp.-1523-1528.

36. Doronin K., Kuppuswamy M., Toth K., Tollefson A.E., Krajcsi P., Krougliak V., Wold W.S. Tissue-specific, tumor-selective, replication-competent adenovirus vector for cancer gene therapy. // J. Virol., 2001, v.-75, pp.-3314-3324.

37. Enari M., Sakahira H., Yokoyama H., Okawa K., Iwamatsu A., Nagata S. A caspase-activated DNase that degrades DNA during apoptosis, and its inhibitor ICAD. //Nature., 1998, v.-391(6662), pp.-43-50.

38. Engelhardt J.F., Ye X., Doranz В., Wilson J.M. Ablation of E2A in recombinant adenoviruses improves transgene persistence and decreases inflammatory response in mouse liver. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1994, v.-91, pp.-6196-6200.

39. Esandi M.C., Van Someren G.D., Vincent A.J.P.E., Van Bekkum D.M., Valerio D., Bout A., and Noteboom J.L. Gene therapy of experimental malignant mesothelioma using adenovirus vectors encoding the HSVtk gene. // Gene Ther., 1997, v.-4, pp.-280-287.

40. Feng M., Jackson W.H. Jr., Goldman C.K., Rancourt C., Wang M., Dusing S.K., Siegal G., Curiel D.T. Stable in vivo gene transduction via a novel adenoviral/retroviral chimeric vector. // Nat. Biotechnol., 1997, v.-15(9), pp.-866-870.

41. Francois A., N. Eterradossi, B. Delmas, V. Payet, P. Langlois. Construction of adenovirus CELO recombinants in cosmids. // J. Virol., 2001, v.-75, pp.-5288-5301.

42. Freeman S.M., Abboud C.N., Whartenby K.A., Packman C.H., Koeplin D.S., Moolten F.L., amd Abraham G.N. The "bystander effect": tumor regression when a fraction of the tumor mass is genetically modified. // Cancer Res., 1993, v.-53, pp.-5274-5283.

43. Freeman S.M., Ramesh R., and Marrogi A.J. Immune system in suicide-gene therapy. // Lancet., 1997, V.-349, рр.-2-З.

44. Gagandeep S., Brew R., Green В., Christmas S.E., Klatzman D., Poston G.J., and Kinsella A.R. Prodrug-activated gene therapy: involvement of an immunological component in the "bystander effect". // Cancer Gene Ther., 1996, v.-3, pp.-83-88.

45. Gall J., Kass-Eisler A., Leinwand L., Falck-Pedersen E. Adenovirus type 5 and 7 capsid chimera: fiber replacement alters receptor tropism without affecting primary immune neutralization epitopes. // J. Virol., 1996, v.-70(4), pp.-2116-2123.

46. Gallucci S., Matzinger P. Danger signals: SOS to the immune system. // Curr. Opin. Immunol., 2001, v.-13, pp.-l 14-119.

47. Ghosh-Ghounhury G., Haj-Ahmad Y., Brikley P., Rudy J., Graham F.L. Human adenovirus cloning vector based on infectious bacterial plasmids. // Gene., 1986, v.-50, pp.-161-171.

48. Glotzer J.B., Saltik M., Chiocca S., Michou A.I., Moseley P., Cotten M. Activation of heat-shock response by an adenovirus is essential for virus replication. //Nature., 2000, V.-407, pp.-207-211.

49. Gorziglia M.I., Lapcevich С., Roy S., Kang Q., Kadan M., Wu V., Pechan P., Kaleko M. Generation of an adenovirus vector lacking El, e2a, E3, and all of E4 except open reading frame 3. // J. Virol., 1999, v.-73, pp.-6048-6055.

50. Graham F.L., and Prevec L. Manipulation of adenovirus vectors. // Methods in Mol. Biol., 1991, v.-7, pp.-109-127.

51. Graham F.L., Smiley J., Russell W.C., Nairn R. Characteristics of a human cell line transformed by DNA from human adenovirus type 5. // J. Gen. Virol., 1977, v.-36(l), pp.-59-74.

52. Graham F.L., Van der Eb A. J. A new technique for the assay of infectivity of human adenovirus 5 DNA. // Virology., 1973, v.-52, pp.-456-467.

53. Green M., Wold W.S.M. Human adenoviruses: growth, purification and transfection assay. // Methods Enzymology., 1980, v.-58, pp.-425-431.

54. Hamel W., Magnelli L., Chiarugi V.P., and Israel M.A. Herpes simplex vims thimidine kinase/ganciclovir-madiated apoptotic death of bystander cells. // Cancer Res., 1996, v.-56, pp.-2697-2702.

55. Hanahan D. Studies of transformation of Escherichia coli with plasmids. // J. Mol. Biol., 1983, V.-166, pp.-557-580.

56. Harari O.A., Wickham T.J., Stocker C.J., Kovesdi I., Segal D.M., Huehns T.Y., Sarraf C., Haskard D.O. Targeting an adenoviral gene vector to cytokine-activated vascular endothelium via E-selectin. // Gene Ther., 1999, v.-6(5), pp.-801-807.

57. Hawkins L.K., Lemoine N.R., Kirn D. Oncolytic biotherapy: a novel therapeutic platform. // Lancet Oncol., 2002, v.-3(l), pp.-17-26.

58. Hay R.T., Freeman A., Leith I., Monaghan A., and Webster A. Molecular interactions during adenovirus DNA replication. // The molecular repertoire of adenoviruses., 1995, pp.-31-48.

59. Hess M., Cuzange A., Ruigrok R.W., Chroboczek J., Jacrot B. The avian adenovirus penton: two fibres and one base. // J. Mol. Biol., 1995, V.-252, pp.-379-385.

60. Hirschi K.K., Xu C.E., Tsukamoto Т., Sager R. Gap junction genes Cx26 and Cx43 individually suppress the cancer phenotype of human mammary cells and restore differentiation potential. // Cell Growth Differ., 1996, v.-7, pp.-861-870.

61. Kass-Eisler A., Falck-Pedersen E., Elfenbein D.H., Alvira M., Buttrick P.M., Leinwand L.A. The impact of developmental stage, route of administration and the immune system on adenovirus-mediated gene transfer. // Gene Ther., 1994, v.-l, pp.-395-402.

62. Keller P.M., Fyfe J.A., Beauchamp M., and Spector T. Enzymatic phosphorylation of acyclic nucleoside analogs and correlations with antiherpetic activities. // Biochem. Pharmacol., 1981, v.-30, pp.-3071-3077.

63. Kelly J.M., P.K. Darcy, J.L. Markby, D.I. Godfrey, K. Takeda, H. Yagita, and M. Smyth. Induction of tumor-specific T cell memory by NK cell-mediated tumor rejection. Nature Immunol 2002; 3: 83-90.

64. Kochanek S., Schiedner G., Volpers C. High-capacity 'gutless' adenoviral vectors. // Curr. Opin. Mol. Ther., 2001, v.-3, pp.-454-463.

65. Krougliak V., Graham F.L. Development of cell lines capable of complementing El, E4, and protein IX defective adenovirus type 5 mutants. // Hum. Gene Ther.,1995, v.-6(12), pp.-1575-1586.

66. Kumar N.M., and Gilula N.B. The gap junction communication channel. Cell.,1996, v.-84,pp.-381-388.

67. Kuriyama N., Kuriyama H., Julin C.M., Lamborn K.R., Israel M.A. Protease pretreatment increases the efficacy of adenovirus-mediated gene therapy for the treatment of an experimental glioblastoma model. // Cancer Res., 2001, v.-61, pp.-1805-1809.

68. Lance P., Encell, Daniel M., Landis, Lawrence A. Loeb. Improving enzymes for cancer gene therapy. // Nature Biotechnology, 1999, v.-17, pp.-143 147.

69. Laver W.G., H.B. Younghusband, and N.G. Wrigley. Purification and properties of chick embryo lethal orphan virus (an avian adenovirus). // Virology., 1971, v.-45, pp.-598-614.

70. Legerski R.J., Robberson D.L. Analysis and optimization of recombinant DNA joining reactions. //J. Mol. Biol., 1985, V.-181, pp.-297-312.

71. Lehrmann H., Cotten M. Characterization of CELO virus proteins that modulate the pRb/E2F pathway. // J. Virol., 1999, v.-73, pp.-6517-6525.

72. Leon R.P., Hedlund Т., Meech S.J., Li S., Schaack J., Hunger S.P., Duke R.C., DeGregori J. Adenoviral-mediated gene transfer in lymphocytes. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1998, v.-95(22), pp.-13159-13164.

73. Leppard K.N. E4 gene function in adenovirus, adenovirus vector and adeno-associated virus infections. // J. Gen. Virology., 1997, v.-78, pp.-2131-2138.

74. Li P., Bellett A.J., Parish C.R. A comparison of the terminal protein and hexon polypeptides of avian and human adenoviruses. // J. Gen. Virol., 1983, v.-64, pp.-1375-1379.

75. Li P., Bellett A.J., Parish C.R. DNA-binding proteins of chick embryo lethal orphan virus: lack of complementation between early proteins of avian and humans adenoviruses. // J. Virol., 1984b, v.-65, pp.-1817-1825.

76. Li P., Bellett A.J., Parish C.R. The structural proteins of chick embryo lethal orphan virus (fowl adenovirus type 1). // J. Gen. Virol., 1984a, v.-65, pp.-1803-1815.

77. Lieber A., Steinwaerder D.S., Carlson C.A., Kay M.A. Integrating adenovirus-adeno-associated virus hybrid vectors devoid of all viral genes. // J. Virol., 1999, v.-73, pp.-9314-9324.

78. Martin J.C., Drovak C.A., Smee D.F., Matthews T.R., and Verheyden J.P. 9-(l,3-Dihydroxy-2-propoxy)-methyl.guanine: a new potent and selective antiherpes agent. // J. Med. Chem., 1983, v.-26,pp.-759-761.

79. Matthews Т., and Boehme R. Antiviral activity and mechanism of action of ganciclovir. // Rev. Infect. Dis., 1988, v.-Ю (Suppl.3), pp.-S490-S494.

80. Medema J.P., Scaffidi C., Kischkel F.C., Shevchenko A.N., Mann M., Krammer P.H., and Peter M.E. FLICE is activated by association with the CD95 death-inducing signaling complex (DISC). // EMBO J., 1997, v.-16, pp.-2794-2804.

81. Melcher A., Todryk S., Hardwick N., Ford M., Jacobson M., and Vile R.G. Tumor immunogenicity is determined by the mechanism of cell death via induction of heat shock protein expression. // Nat. Med., 1998, v.-4, pp.-581-587.

82. Mesnil M., Krutovskikh V., Piccoli C., Elfgang C., Traub O., Willecke K., Yamasaki H. Negative growth control of HeLa cells by connexin gene: connexin species specificity. // Cancer Res., 1995, v.-55, pp.-629-639.

83. Michou A.I., Lehrmann H., Saltik M., Cotten M. Mutational analysis of the avian adenovirus CELO, which provides a basis for gene delivery vectors. // J. Virol., 1999, v.-73(2), pp.-1399-1410.

84. Mittereder N., March K.L., Trapnell B.C. Evaluation of the concentration and bioactivity of adenovirus vectors for gene therapy. // J. Virol., 1996, v.-70, pp.-7498-7509.

85. Mizuguchi H., Hayakawa T. Adenovirus vectors containing chimeric type 5 and type 35 fiber proteins exhibit altered and expanded tropism and increase the size limit of foreign genes. // Gene., 2002, v.-20, pp.-285, pp.-69-77.

86. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. // J. Immune Methods., 1983, v.-65, pp.-55-63.

87. Motoi F., Sunamura M., Ding L., Duda D.G., Yoshida Y., Zhang W., Matsuno S., Hamada H. Effective gene therapy for pancreatic cancer by cytokines mediated by restricted replication-competent adenovirus. // Hum. Gene Ther., 2000, v.-l 1, pp.-223-235.

88. Nagata S. Apoptosis by death factor. // Cell., 1997, v.-88, pp.-355-365.

89. Nasu Y., Kusaka N., Saika Т., Tsushima Т., Kumon H. Suicide gene therapy for urogenital cancer: current outcome and prospects. // Mol. Urol., 2000, v.-4, pp.-67-7

90. Payet V., Arnauld C., Picault J.P., Jestin A., Langlois P. Transcriptional organization of the avian adenovirus CELO. // J. Virol., 1998, v.-2, pp.-9278-9285.

91. Polyak K., Xia Y., Zweier J.L., Kinzler K.W., Vogelstein B. A model for p53-induced apoptosis. // Nature., 1997, v.-389(6648), pp.-300-305.

92. Ramesh R., Munshi A., Abboud C.N., Marrogi A.J., Freeman S.M. Expression of costimulatory molecules: B7 and ICAM upregulation after treatment with a suicide gene. // Cancer Gene Ther., 1996, v.-3, pp.-373-384.

93. Rasmussen U.B., Benchaibi M., Meyer V., Schlesinger Y., Schughart K. Novel human gene transfer vectors: evaluation of wild-type and recombinant animal adenoviruses in human-derived cells. // Hum. Gene Ther., 1999, v.-10, pp.-2587-2599.

94. Rechtin T.M., Black M.E., Mao F., Lewis M.L., Drake R.R. Purification and photoaffinity labeling of herpes simplex virus type-1 thymidine kinase. // J. Biol. Chem., 1995, v.-270(13), pp.-7055-7060.

95. Romano G., Pacilio C., Giordano A. Gene transfer technology in therapy: current applications and future goals. // Stem Cells., 1999, v.-7, pp.-191-202.

96. Russell W.C. Update on adenovirus and its vectors. // J. Gen. Virology., 2000, v.-81, pp.-2573-2604.

97. Sarma P.S., R.J. Huebner, W.T. Lane. Induction of tumors in hamsters with an avian adenovirus. // Science, 1965, v.-149, pp: 1108.

98. Scaffidi C., Fulda S., Li F., Friesen C., Srinivasan A., Tomaselli K.J., Debatin K-M., Krammer P.H., and Peter M.E. Two CD95 signaling pathways. // EMBO J., 1998, v.-17, pp.-1675-1687.

99. Sharp P.A. Adenovirus transcription. In The Adenoviruses. Ed. by H.S. Ginsberg, 1984.

100. Shayakhmetov D.M., Papayannopoulou Т., Stamatoyannopoulos G., Lieber A. Efficient gene transfer into human CD34(+) cells by a retargeted adenovirus vector. // J. Virol., 2000, v.-74, pp.-2567-2583.

101. Shenk T. Adenoviridae: the viruses and their replication. // Fundamental virology., 1996, v.-3, pp.-979-1016.

102. Shinagawa M., T. Ishiyama, R.V. Padmanabhan, K. Fujigana, M. Kamada, G. Sato. Comparative sequence analysis of the inverted terminal repetition in the genomes of animal and avian adenoviruses. // Virology., 1983, V.-125, pp.-491-495.

103. Srivastava P. Interaction of heat shock proteins with peptides and antigen presenting cells: chaperoning of the innate and adaptive immune responses. // Annu. Rev. Immunol., 2002, v.-20, pp.-395-425.

104. Sussenbuch J.S. The structure of the genome. In The Adenoviruses. Ed. by H.S. Ginsberg, 1984.

105. Tan P.K. Defining CAR as a cellular receptor for the avian adenovirus CELO using a genetic analysis of the two viral fibre proteins. // J. Gen. Virology., 2001, v.-82, pp.-1465-1472.

106. Todryk S., Melcher A., Bottley G., Gough M., Vile R. Cell death associated with genetic prodrug activation therapy of colorectal cancer // Cancer. Lett., 2001, V.-174, рр.-25-ЗЗ.

107. Van der Eb A.J., Mulder C., Graham F.L., Houwelling A. Transformation with specifik fragments of adenovirus DNA. I. Isolation of specific fragments with transforming activity of adenovirus 2 and 5 DNA. // Gene., 1977, v.-2, pp.-115-132.

108. Van der Eb. A.J., van Kesteren J.W., van Bruggen E.F.G. Structural properties of adenovirus DNAs. // Biochem. Biophys. Acta., 1969. v.-182, pp.-530-541.

109. Wallace H., MacLaren K., Al-Shawi R., and Bishop J.O. Ganciclovir-induced ablation of non-proliferation thyrocytes expressing herpes simplex virus thimidine kinase occurs by p53-independent apoptosis. // Oncogene., 1996, v.-13, pp.-55-61.

110. Wang Q., Greenburg G., Bunch D., Farson D., Finer M.H. Persistent transgene expression in mouse liver following in vivo gene transfer with a delta El/delta E4 adenovirus vector. // Gene Ther., 1997, v.-4, pp.-393-400.

111. Wickham T.J., Mathias P., Cheresh D.A., Nemerow G.R. Integrins осуРз and avp5 promote adenovirus internalization but not virus attachment. // Cell., 1993, v.-73, pp.-309-319.

112. Wickham T.J., Roelvink P.W., Brough D.E., Kovesdi I. Adenovirus targeted to heparan-containing receptors increases its gene delivery efficiency to multiple cell types. // Nat. Biotechnol., 1996, v.-14, pp.-1570-1573.

113. Wildner O., Morris J.C. Therapy of peritoneal carcinomatosis from colon cancer with oncolytic adenoviruses. // J. Gene Med., 2000, v.-2, pp.-353-360.

114. Wold W.S., K. Doronin, K. Toth, M. Kuppuswamy, D. L. Lichtenstein, A. Tollefson. Immune responses to adenoviruses: viral evasion mechanisms and their implication for the clinic. // Current Opin. Immun., 1999, v.-11, pp.-380-386.

115. Worgall S., Wolff G., Falck-Pedersen E., Crystal R.G. Innate immune mechanisms dominate elimination of adenoviral vectors following in vivo administration. // Hum. Gene Ther., 1997, v.-8, pp.-37-44.

116. Xu Z.Z., Hyatt A., Boyle D.B., Both G.W. Construction of ovine adenovirus recombinants by gene insertion or deletion of related terminal region sequences. // Virology., 1997, V.-230, pp.-62-71.

117. Yang Y., Jooss K.U., Su Q., Ertl H.C., Wilson J.M. Immune responses to viral antigens versus transgene product in the elimination of recombinant adenovirus-infected hepatocytes in vivo. // Gene Ther., 1996, v.-3(2), pp.-137-144.

118. Yee D., McGuire S.E., Brynner N., Kozelsky T.W., Allerd D.C., Chen S., and Woo S.L. Adenovirus-mediated gene transfer of herpes simplex virus thymidine kinase in an ascites model of human breast cancer. // Hum. Gene Ther., 1996, v.-7, pp.-1251-1257.

119. Yeh P., Dedieu J.F., Orsini C., Vigne E., Denefle P., Perricaudet M. Efficient dual transcomplementation of adenovirus El and E4 regions from a 293-derived cell line expressing a minimal E4 functional unit. // J. Virol., 1996, v.-70, pp.-559-565.

120. Zabner J., Chillon M., Grunst Т., Moninger Т.О., Davidson B.L., Gregory R., Armentano D. A chimeric type 2 adenovirus vector with a type 17 fiber enhances gene transfer to human airway epithelia. // J. Virol., 1999, v.-73(10), pp.-8689-8695.