Защитные реакции пульмонат (Gastropoda) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.08, кандидат биологических наук Прохорова, Елена Евгеньевна

• Прохорова, Елена Евгеньевна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Прохорова, Елена Евгеньевна

ВВЕДЕНИЕ

Список условных обозначений

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Клеточные защитные реакции пульмонат

I. 1. 1. Гемопоэз

I. 1.2. Численность циркулирующих гемоцитов

I. 1.3. Морфология гемоцитов

I. 1.4. Функциональная активность гемоцитов

I. 1. 5. Механизмы клеточных реакций

1. 2. Гуморальные защитные реакции пульмонат

I. 2. 1. Молекулярные основы гуморальных реакций пульмонат

I. 2. 2. Проявления гуморальных реакций пульмонат

I. 3. Генетические основы резистентности пульмонат

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

II. 1. Объекты исследования

II. 2. Методы исследования

II. 2. 1. Содержание моллюсков 37 II. 2. 2. Определение зараженности 37 II. 2. 3. Методы изучения и гемоцитов 38 II. 2. 4. Методы изучения экспрессии генов факторов защитных реакций

II. 2. 5. Компьютерные программы

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ

III. 1. Клеточный состав гемолимфы

III. 1.1. Гемопоэз 44 III. 1.2. Морфологический и количественный анализ клеток гемолимфы 47 III. 1. 3. Функциональная активность гемоцитов

III. 2. Анализ экспрессии генов, кодирующих факторы защитных реакций у моллюсков, зараженных партенитами трематод 69 III. 2. 1. Поиск нуклеотидпых последовательностей и подбор праймеров, соответствующих факторам защитных реакций

III. 2. 2. Экспрессия генов, кодирующих факторы защитных реакций

III. 2. 3. Анализ нуклеотидных последовательностей кДНК факторов защитных реакций Planorbarius corneus

ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

IV. 1. Анализ клеточных реакций пульмонат

IV. 2. Анализ гуморальных реакций пульмонат

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Защитные реакции пульмонат (Gastropoda)»

Сведения о функционировании системы иммунитета у организмов разных таксонов составляют основу сравнительно-иммунологических построений, раскрывающих пути её становления. Легочные брюхоногие моллюски (Gastropoda, Pulmonata) в этом отношении являются одной из наиболее интенсивно изучаемых моделей среди беспозвоночных. За время своего существования они приобрели широкий круг симбионтов, включающий как комменсалов, так и специфичных паразитов. Особое место среди последних принадлежит трематодам, многие из которых являются возбудителями опасных заболеваний человека и животных.

Первые работы, посвященные изучению проявлений иммунитета у моллюсков, появились в середине XX века. Во многом это обусловлено возросшим интересом исследователей к изучению партеногенетических поколений трематод, паразитирующих в моллюсках (см.: Гинецинская, 1968; Добровольский и др., 1983; Dobrovolskij, Ataev, 2003). Первоначально защитные реакции моллюсков рассматриваются именно как фактор, определяющий или ограничивающий развитие партенит (Files, Cram, 1949; Schreiber, Schubert, 1949).

Трематоды, как правило, демонстрируют узкую специфичность не только по отношению к конкретным видам моллюсков, но и к отдельным «расам» своих хозяев. Это явление и стало предметом первых исследований, посвященных генетическим основам устойчивости моллюсков к заражению трематодами (Newton, 1953, 1954, 1955). Результатом стало выведение линий моллюсков, характеризующихся выраженной резистентностью или чувствительностью к заражению трематодами. Фенотипическим проявлением устойчивости к заражению является формирование клеточной реакции, подавляющей развитие партенит (Richards, 1970).

Таким образом, на протяжении последних десятилетий защитные реакции моллюсков стали предмеюм специальных исследований не только трематодчиков, по и широкого круга паразитологов, а также специалистов в области сравнительной иммунологии (Галактионов, 1995; Adema et al., 2001; Connors, 2003). В тоже время, отечественные работы, посвященные изучению иммунитета легочных моллюсков, появляются только с середины 90-х годов и весьма немногочисленны (см.: Галактионов, 1995; Полевщиков, 1996; Атаев, Полевщиков, 2004 и др.).

Следует отметить, что именно при изучении пульмонат (Biomphalaria, Lymnaea, Helix) впервЕле получены сведения о защитных реакциях моллюсков на трематодную инвазию, бактериальное заражение, пересадку трансплантатов органов (Lie, Heyneman, 1975, 1976; Jourdane, Cheng, 1987). Но в настоящее время, значительная часть исследований защитных реакций моллюсков выполняется на представителях двустворчатых (Cheng, 1996; Lacoste et al., 2002; Bachere et al., 2004). Для работы с бивальвиями были адаптированы многие методы, используемые традиционно для изучения иммунитета позвоночных (иммуногистохимические, молекулярно-генетические и другие).

Большинство исследований, посвященных защитным реакциям пульмонат, затрагивают только отдельные аспекты функционирования их внутренних защитных систем. Например, подробно исследуются проявления клеточных и гуморальных реакций, описываются специфические особенности ответа на заражение разными группами патогенов. При этом во многом остаются невыясненными механизмы регуляции клеточного и гуморального ответов, пути взаимодействия гуморальных и клеточных компонентов. Поэтому, несмотря на большой интерес к данному вопросу, сведения о защитных реакциях легочных моллюсков остаются во многом фрагментарными, а зачастую и противоречивыми.

Кроме того, большинство исследований в этой области выполнено на ограниченном круге моллюсков. Для выяснения механизмов формирования защитных реакций пульмонат, прежде всего, необходим комплексный анализ клеточных и гуморальных компонентов этой системы, а также расширение количества изучаемых моделей.

Следует отметить важную терминологическую особенность, присущую работам в области защитных реакций моллюсков и беспозвоночных в целом. Термины «иммунитет» и «иммунный ответ» сформировались для определения реакций приобретенного иммунитета позвоночных животных. Поэтому, если и применяются по отношению к беспозвоночным, то только с определенными оговорками (см.: Атаев и др., 2005). Соответственно, в зарубежной, а позднее и отечественной литературе сложилась терминология для определения иммунных реакций беспозвоночных. Процессы, направленные на поддержание постоянства внутренней среды организма беспозвоночных обозначают как «защитные реакции» (defense reactions) (Van der Knaap, 1990; Атаев и др., 2006). При этом, имеются ввиду не физико-химические барьеры (например, раковина, слизь) и поведенческие реакции моллюсков (см.: Галактионов, 1995), а клеточные и гуморальные компоненты внутренней среды, обеспечивающие распознавание и элиминацию чужеродных агентов. Этой терминологией мы и будем преимущественно пользоваться в рамках данного исследования.

Целью данной работы явился анализ защитных реакций лёгочных моллюсков. Соответственно были определены следующие задачи исследования:

1) изучить гемопоэз и морфологию гемоцитов моллюсков Planorbarius corneus и Biomphalaria glabrata;

2) охарактеризовать функциональную активность гемоцитов моллюсков Planorbarius corneus;

4) проанализировать экспрессию генов факторов защитных реакций у моллюсков Planorbarius corneus при заражении трематодами;

3) оценить специфичность клеточного и гуморального ответов пульмонат на заражение партенитами трематод;

5) оценить роль клеточных и гуморальных факторов в реализации защитных реакций пульмонат.

Считаю своим приятным долгом выразить глубокую благодарность Г. J1. Атаеву, А. В. Полевщикову, А. А. Добровольскому и Н. В. Цымбаленко за многолетнее внимание к моим исследованиям и помощь в подготовке диссертации. Отдельная благодарность I заведующему кафедрой зоологии РГПУ им. А. И. Герцена М. А. Гвоздеву и всему коллективу кафедры. Также хочу поблагодарить за практические консультации, помощь и поддержку С. В. Барабанову, И. В. Кудрявцева, С. А. Клотченко, Р. Пяткявичюте, Н. А. Михайлову, П. В. Озерского.

СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

Список сокращений, принятых в тексте:

АПО - амёбоцит-продуцирующий орган; ЛПС — липополисахариды; МС -материнская спороциста; кДНК - комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота; ИЛ - интерлейкин; НАДФН - никотинамиадениндинуклеотидфосфат; ОТ-ПЦР -полимеразная цепная реакция, сопряжённая с обратной транскрипцией; ПЦР -полимеразная цепная реакция; ПААГ — полиакриламидный гель; п. н. — пара нуклсотидов; п. з. - после заражения; т. п. н. - тысяча пар нуклеотидов; ФИТЦ - флуоресцеин-5-изотиоционат; FREP - фибриногенподобный белок; СаВР - кальций-связывающий белок; CLECT - С-лектин; Cyst - цистатинподобный белок.

Список условных обозначений к иллюстрациям: а — аорта; апо — амёбоцит-продуцирующий орган; Г -гранулы; ж - желудочек сердца; м - митоз; мп - мантийная полость; пк - перикард; Я -ядро; FREP — фибриногенподобный белок; СаВР — кальций-связывающий белок; CLECT — С-лектин; Cyst - цистатинподобный белок; FLUO — режим флуоресценции; FLUO/PH — режим флуоресценции, совмещенной с фазовым контрастом; РН — режим фазового контраста.

Заключение диссертации по теме «Зоология», Прохорова, Елена Евгеньевна

выводы

1. Клеточные реакции являются преобладающими в реализации защитных реакций легочных моллюсков па чужеродные факторы. Основным проявлением защитных реакций пульмонат является изменение активности гемоцитов. Центральным источником гемопоэза пульмонат служит амёбоцит-продуцирующий орган, расположенный между перикардиальным и мантийным эпителиями. Случаев деления циркулирующих гемоцитов не обнаружено. С использованием цитофлуриметрического анализа подтверждено наличие в гемолимфе пульмонат двух основных типов клеток: гранулоцитов и гиалиноцитов, различающихся морфологически и функционально.

2. Полученные данные о способности гемоцитов к фагоцитозу, формированию активных форм кислорода, участии в экспрессии гуморальных факторов подтверждают их роль как основных эффекторных элементов клеточных и гуморальных защитных реакций пульмонат.

3. Клеточный ответ пульмонат на трематодную инвазию и бактериальное заражение видоспецифичен. Соотношение типов гемоцитов различно у моллюсков Planorbarius corneus, зараженных трематодами родов Cotylurus, Notocotylus, Plagiorchis и семейства Echinostomatidae. Гиалиноциты активнее фагоцитируют бактерии Escherichia coli, а гранулоциты - Staphylococcus aureus.

4. Гуморальный ответ пульмонат па заражение трематодами также видоспецифичен: уровень экспрессии генов фибриногенподобного белка, С-лектина, кальций-связывающего белка и цистатииподобиого белка различны у незараженных молюсков Planorbarius corneus и моллюсков, зараженных трематодами Notocotylus sp., Plagiorchis sp., Cotylurus sp. и Bilharziella polonica.

5. Гемоциты и клетки гепатопанкреаса пульмонат участвуют в продукции гуморальных факторов защитных реакций. Это подтверждают результаты анализа экспрессии генов, кодирующих факторы защитных реакций гастропод: у моллюсков Planorbarius corneus, зараженных трематодами, уровень экспрессии генов С-лектина и кальций-связывающего белка повышается в гемоцитах, а генов фибриногенподобного и цистатинподобного белков - в гепатопанкреасе.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Прохорова, Елена Евгеньевна, 2009 год

1. Аванесян А. А. 2002. Влияние защитных реакций моллюсков на развитие партенит трематод (на примере семейства Echinostomatidae): Автореф. дис. . канд. биол. наук. СПб: СПбГУ, 18 с.

2. Алякринская И. О. 1970. Количественная характеристика гемолимфы и гемоглобина роговой катушки Planorbis corneus (Gastropoda, Pulmonata) // Зоологический журнал, 69 (3): 349-353.

3. Атаев Г. J1. 2000. Развитие партенит трематод: Автореф. дис. .докт. биол. наук. СПб: СПбГУ, 34 с.

4. Атаев Г. Л., Добровольский А. А. 1992. Развитие микогемипопуляций редий Philophtalmus rhionica, природно-заражённых другими видами трематод // Паразитология, 26: 227-233.

5. Атаев Г. Л., Дьячков И. С., Полевщиков А. В. 2006. Сравнительно-иммунологический анализ защитных реакций брюхоногих моллюсков // Известия РГПУ им. Герцена, 39(1): 265-281.

6. Атаев Г. Л., Ерёмина Е. Е., Полевщиков А. В. 2005. Защитные реакции брюхоногих моллюсков: 2. Гуморальные реакции // Паразитология, 39 (1): 3—15.

7. Атаев Г. Л., Полевщиков А. В. 2004. Защитные реакции брюхоногих моллюсков: 1. Клеточные реакции // Паразитология, 38 (4): 342—351.

8. Галактионов В. Г. 1995. Очерки эволюционной иммунологии. М.: Наука, 256 с.

9. Галактионов К. В., Добровольский А. А. 1998. Происхождение и эволюция жизненных циклов трематод. СПб: Наука, 402 с.

10. Гипеципская Т. А. 1968. Трематоды, их жизненные циклы, биология и эволюция. Л.: Наука, 411с.

11. Глик Д. 1950. Методика Гисто- и цитохимии. М.: Изд-во Иностр. Литературы, 516 с.

12. Добровольский А. А., Галактионов К. В., Мухамедов Г. К., Синха Б. К., Тихомирова И. А. 1983. Партеногенетические поколения трематод // Труды Ленинградского общества естествоиспытателей, 82 (4), 108 с.

13. Ерёмина-Е. Е. 2005. Клеточный состав гемолимфы моллюсков Biomphalaria glabrata (Gastropoda, Pulmonata) // Вестник студенческого научного общества РГПУ им. А. И. Герцена. СПб.: РГПУ, 227-229.

14. Ивантер Э. В., Коросов А. В. 1992. Основы биометрии. Петрозаводск: ПГУ, 168 с.

15. Канев И. 1987. Инкапсулиране и инактивиране на спороцисти на Echinostoma revolution (Froelinch, 1802) (Trematoda: Echinostomatidae) на тьканите и хемолимфата на охлюви Lymnaea stagnalis (L.) (Mollusca: Gastropoda) // Хельминтология. София, 24: 26-31.

16. Кульберг А. Я. 1985. Молекулярная иммунология. М.: Высшая школа, 285 с.

17. Купер Э. 1980. Сравнительная иммунология. М.: Мир, 422 с.

18. Лахтин В.М. 1987. Лектины в исследовании белков и углеводов // Итоги науки и техники. Сер. Биотехнология. Т.2. М.: ВИНИТИ, 288 с.

19. Лилли. Р. 1969. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. М.: Мир, 645 с.

20. Луговская С. А., Морозова В. Т., Почтарь М. Е., Долгов В. В. 2002. Лабораторная гематология. М.: ЮНИМЕД-пресс, 120 с.

21. Макгрегор Г., Варли Дж. 1986. Методы работы с хромосомами животных. М.: Мир, 268с.

22. Полевщиков А. В. 1996. Лектины в защитных реакциях беспозвоночных // Журнал общей биологии, 57 (6): 718-739.

23. Прохорова Е. Е. 2007. Клеточный состав гемолимфы моллюсков Planorbarius corneus (Gastropoda, Pulmonata) // Функциональная морфология, экология и жизненные циклы животных. Сб. научи, трудов каф. зоологии РГПУ им. А. И. Герцена. СПб.: ТЕССА, 7: 70-75.

24. Прохорова Е. Е., Атаев Г. Л. 2008. Генетические основы резистентности гастропод // Известия РГПУ им. А.И. Герцена, 10 (64): 86-96.

25. Сорокина 3. А., Зеленская В. С. 1967. Особенности электролитного состава гемолимфы брюхоногих моллюсков// Журнал эволюционной биохимии и физиологии, 3 (1): 25-30.

26. Abdul-Salam J. М., Michelson Е. Н. 1980. Biomphalaria glabrata amocbocytes: assay of factors influencing in vitro phagocytosis // Journal of invertebrate pathology, 36: 52-59.

27. Abrahamson M., Alvarez-Fernandez M., Nathanson С. M. 2003. Cystatins // Biochemical Society symposium, 70: 179-199.

28. Adema С. M., Hertel L. A., Loker E. S. 1999. Evidence from two planorbid snails of a complex and dedicated response to digenean (echinostome) infection // Parasitology, 119: 395404.

29. Adema С. M., Hertel L. A., Miller R. D., Loker E. S. 1997. A family of fibrinogen-related proteins that precipitates parasite-derived molecules is produced by an invertebrate afterinfection // Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 94: 8691-8696.

30. Adema С. M., van Deutekom-Mulder E. C., van der Knaap W. P., Sminia T. 1994. Schistosomicidal activities of Lymnaea stagnalis haemocytes: the role of oxygen radicals // Parasitology, 109 (4): 479-485.

31. Allam В., Ashton-Alcox K. A., Ford S. E. 2001. Haemocyte parameters associated with resistance to brown ring disease in Ruditapes sp. Clams // Developmental and comparative immunology, 25 (5-6): 365—375.

32. Allam В., Ashton-Alcox K. A., Ford S. E. 2002. Flow cytometric comparison of haemocytes from three spccics of bivalve mollusks // Fish & shellfish immunology, 13 (2): 141—158.

33. Ataev G. L., Coustau C. 1999. Cellular response to Echinostoma caproni infection in Biomphalaria glabrata strains selected for susceptibility/ resistance // Developmental and comparative immunology, 23: 187-198.

34. Ataev G. L., Dobrovolskij A. A., Fournier A., Jourddane J. 1997. Migration and development of mother sporocysts of Echinostoma caproni (Digenea: Echinostomatidae) // Journal of Parasitology, 83 (3): 444-453.

35. Azevedo С. M., Borges С. C., Andrade Z. A. 2006. Changes induced in Biomphalaria glabrata (Say, 1818) following trials for artificial stimulation of its internal defense system // Memorias do Instituto Oswaldo Cruz, 101: 199-203.

36. Bachere, E. Y., Gueguen, M., Gonzalez J., de Lorgeril J., Gamier В., Romestand M. 2004. Insights into the anti-microbial defense of marine invertebrates:the penaeid shrimps and the oyster Crassostrea gigas //Immunological reviews, 198: 149-168.

37. Barracco M. A., Medeiros I., Moreira F. M. 1999. Some haemato-immunological parameters in the mussel Pernaperna II Fish & Shellfish Immunology, 9 (5): 387-404.

38. Basch P. F., Lie K. J., Heyneman D. 1969. Antagonist interaction between strigeid and schistosome sporocysts within a snail host // Journal of Parasitology, 55: 753-758.

39. Bayne C. J., Boswell C. A., Loker E. S., Yui M. 1985. A. Plasma components which mediate cellular defaces in the gastropod mollusk Biomphalaria glabrata II Developmental and Comparative Immunology, 9: 523-530.

40. Bayne C. J., Yoshino T. P. 1989. Determinants of compatibility in mollusc-trematode parasitism // American Zoologyst, 29: 399^107.

41. Bayne C.J. 1982. Molluscan immunobiology: isolation of an Aeromonas formicans which escapes the internal defence system of Helix pomatia И Developmental and Comparative Immunology, 6 (4): 675-682.

42. Benson D. A., Karsch-Mizrachi I., Lipman D. J., Ostell J., Wheeler D. L. 2008. GenBank // Nucleic Acids Research, 36: 25-30.

43. Bezerra F. S., Coelho P. M., Chaves M. M., Martins R. L., Nogueira-Machado J. A. 1999. Comparative study on the effect of cyclic nucleotides related to the function of

44. Biomphalaria glabrata hemocytes and human granulocytes // Acta Tropica, 72 (3): 275280.

45. Borges С. M. C., Azevedo С. M., Andrade Z. A. 2006. A contribution to the pathobiology of Biomphalaria glabrata hemocytes // Memorias do Instituto Oswaldo Cruz, 101: 193198.

46. Bouchut A., Roger E., Coustau C., Gourbal В., Mitta G. 2006a. Compatibility in the Biomphalaria glabrata!Echinostoma caproni model: Potential involvement of adhesion genes // International Journal for Parasitology, 36: 175-184.

47. Bouchut A., Sautiere P. E., Coustau C., Mitta G. 2006b. Compatibility in the Biomphalaria glabrata!Echinostoma caproni model: Potential involvement of proteins from hemocytes revealed by a proteomic approach // Acta Tropica, 98: 234—246.

48. Butt D., Raftos D. 2008. Phenoloxidase-associated cellular defence in the Sydney rock oyster, Saccostrea glomerata, provides resistance against QX disease infections // Developmental and Comparative Immunology, 32 (3): 299-306.

49. Byrd E. E., Maples W. P. 1969. Intramolluscan stages of Dasymetra conferta Nicoll, 1911 (Trematoda: Plagiorchiidae) // Journal of Parasitology, 55 (3): 509-526.

50. Chai L-Q., Tian Y-Y., Yang D-T., Wang J-X., Zhao X-F. 2008. Molecular cloning and characterization of a C-type lectin from the cotton bollworm, Helicoverpa armigera // Developmental and Comparative Immunology, 32 (1): 71 -83.

51. Cheng Т. C. 1975. Functional morphology and biochemistry of molluscan phagocytes // Annals of the New York Academy of Sciences, 266: 343 -379.

52. Cheng Т. C. 1984. A classification of molluscan hemocytes based on functional evidence // Comparative Pathobiology, 6: 111-146.

53. Cheng Т. C., Cali A. 1974. An electron microscope study of the tegument of the fate of bacteria phagocytized by granulocytes of Crassostrea virginica II Contemporary topics in immunobiology, 4: 25-35.

54. Cheng Т. C., Galloway P. C. 1970. Transplantation immunity in mollusks: the histoincompatibility of Helisoma duryi normale with allografts and xenografts // Journal of invertebrate pathology, 15 (2): 177-192.

55. Cheng Т. C., Jourdane J. 1987. Transient cellular reaction in Biomphalaria glabrata (Mollusca) to heterotopic isografts // Journal of invertebrate pathology, 49: 273 -278.

56. Cheng Т. С., Rifkin Е. 1970. Cellular reactions in marine mollusks in response to helminth parasitism // Symposium on diseases of fishes and shellfishes, 5: 443^496.

57. Cheng, Т. C. 1996. Hemocytes: forms and functions // The eastern oyster factors in marine bivalves, 18: 178-188.

58. Combes C. 1995. Interactions durables //Ecologie et evolution du parasitisme. Paris- Milan-Barcelone. Masson, 524 p.

59. Connors V. A. 2003. The schistosome-snail interaction: factors involved in host immunodefense activation and parasite killing in susceptible and resistant Biomphalaria glabrata. II Taxonomy, ecology and evolution of mctazoan parasites. Tome I: 203-224.

60. Connors V. A., De Buron I., Jourdane J., Theron A., Agner A., Granath W. O. 1998. Interleukin -1 mediated killing of Schistosoma mansoni primary sporocysts in Biomphalaria glabrata //Journal of Parasitology, 84: 920-926.

61. Connors V.A., Yoshino T. P. 1990. In vitro effect of larval Schistosoma mansoni excretory-secretory products on phagocytosis-stimulated superoxide production in hemocytes from Biomphalaria glabrata II Journal of Parasitology, 76 (6): 895-902.

62. Conte A., Ottaviani E. 1995. Nitric oxide synthase activity in molluscan hemocytes // FEBS letters, 365 (2-3): 120-124.

63. Davids B. J., Wu X. J., Yoshino T. P. 1999. Cloning of a beta-integrin subunit cDNA from an embryonic cell line derived from the freshwater mollusk Biomphalaria glabrata. Gene, 228: 213-223.

64. Davids B. J., Yoshino T. P. 1998. Integrin-like RGD-dependent binding mechanism involved in the spreading response of circulating molluscan phagocytes // Developmental and Comparative Immunology, 22 (1): 39-53.

65. Deininger M. H., Meyrmann R., Schluesener H. J. 2002. The allograft inflammatory factor-1 family of proteins // FEBS letters, 514 (2-3): 115-121.

66. Dikkeboom R., van der Knaap W. P., van den Bovenkamp W., Tijnagel J. M., Bayne C. J. 1988.The production of toxic oxygen metabolites by hemocytes of different snail species // Developmental and Comparative Immunology, 12 (3): 509-520.

67. Dobrovolskij A. A., Ataev G. L. 2003. The nature of reproduction of digenea rediae and sporocysts // Taxonomy, ecology and evolution of metazoan parasites. Tome I: 249-272.

68. Doolittlc R.F. 1992. A detailed consideration of a principal domain of vertebrate fibrinogen and its relatives// Protein science, 1: 1563-1577.

69. Duclermortier P., Lardans V., Serra E., Trottein F., Dissous C. 1999. Biomphalaria glabrata embryonic cells express a protein with a domain homologous to the lectin domain of mammalian selectins // Parasitology research, 85: 481^186.

70. Feng S.Y. 1965. Heart rate and leucocyte circulation in Cassostrea virginica (Gmelin) // The Biological bulletin, 128: 198-210.

71. Files V., Cram E. B. 1949. A study on the comparative susceptibility of snail vectors to strains of Schistosoma mansoni II Parasitology, 41: 264-269.

72. Foley D. A., Cheng Т. C. 1975. A quantitative study of phagocytosis by hemolymph cells of the pelecypods Crassostrea virginica and Mercenaria mercenaria II Journal of Invertebrate Pathology, 25 (2): 189-197.

73. Ford С. E., Hamerton J. L. 1956. A colchicine, hypotonic citrate, squash sequence for mammalian chromosomes // Stain technology. 31 (6): 247-251.

74. Fraser I. P., Ezekowitz R. A. B. 1999. Receptors for microbial products: carbohydrates // Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates: 515-523.

75. Glinski Z., Jarosz J. 1997. Molluscan immune defenses // Archivum immunologiae et therapiae experimentalis, 45 (2-3): 149-155.

76. Gorbushin A. M., Iakovleva N. V. 2006. Haemogram of Littorina littorea II Journal of the Marine Biological Association of the United Kingdom, 86: 1175-1181.

77. Gorbushin A. M., Iakovleva N. V. 2008. The enigma of the haemogram "left-shift" in periwinkles infected with trematodes // Fish & Shellfish Immunology, 24 (6): 745-751.

78. Gourdine J-P., Markiv A., Smith-Ravin J. 2007. The three-dimensional structure of codakine and related marine C-type lectins // Fish & Shellfish Immunology, 23: 831-839.

79. Granath W. O., Spray F. J. 1987. Analysis of the interlacing components between larval Schistosoma mansoni and schistosome-susceptible and resistant Biomphalaria glabrata II Memorias do Instituto Oswaldo Cruz, 82: 229-230.

80. Granath W. O., Yoshino Jr., Yoshino T. P. 1984. Schistosoma mansoni: Passive transfer ofresistance by serum in the vector snail Biomphalaria glabrata // Experimental Parasitology, 58: 188-193.

81. Guillou F., Mitta G., Galiniera R., Coustau C. 2007. Identification and expression of gene transcripts generated during an anti-parasitic response in Biomphalaria glabrata II Developmental and Comparative Immunology, 31: 657-671.

82. Hahn U. K., Bender R. C., Bayne C. J. 2001. Killing of Schistosoma mansoni sporocysts by hemocytes from resistant Biomphalaria glabrata: role of reactive oxygen species // Journal of Parasitology, 87 (2): 292-299.

83. Hall T. A. 1999. BioEdit: a user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT // Nucleic acids symposium series, 41: 95-98.

84. Hartmann S., Lucius R. 2003. Modulation of host immune responses by nematode cystatins // International journal for parasitology, 33(11): 1291-1302.

85. Hernroth B. 2003. The influence of temperature and dose on antibacterial peptide response against lipopolysaccharide in the blue mussel, Mytilus edulis II Fish & Shellfish Immunology, 14 (1): 25-37.

86. Humbert E., Coustau C. 2001. Refractoriness of host haemocytes to parasite immunosuppressive factors as a putative resistance in the Biomphalaria glabrata — Echinostoma caproni system. // Journal of Parasitology, 122: 651-660.

87. Jiang Y., Loker E. S., Zhang S. 2006. M. In vivo and in vitro knockdown of FREP2 geneexpression in the snail Biomphalaria glabrata using RNA interference // Developmentaland Comparative Immunology, 30: 855-866.

88. Jimenez-Vega F., Vargas-Albores F., Soderhall K. 2005. Characterisation of a serine proteinase from Penaeus vannamei haemocytes // Fish & Shellfish Immunology, 18: 101-108.

89. Jourdane J., Cheng Т. C. 1987. The two-phase recognition process of allografts in Brazilian strain of Biomphalaria glabrata II The Journal of Invertebrate Parasitology, 49: 145158.

90. Mahmoud A. H., Rizk M. Z. 2004. Free radical scavengers in susceptible/resistant Biomphalaria alexandrina snails before and after infection // Comparative Biochemistry and Physiology, 138: 523-553.

91. Malham S. K., Runhama N. W., Secombes C. J. 1998. Lysozyme and antiprotease activity in the lesser octopus Eledone cirrhosa (Lam.) (Cephalopoda) // Developmental & Comparative Immunology, 22 (1): 27-37.

92. Matozzo V., Marina M. G., Cimaa F., Ballarina L. 2008. First evidence of cell division in circulating haemocytes from the Manila clam Tapes philippinarum // Cell Biology International, 32 (7): 865-868.

93. Matricon-Gondran M., Letocart M. 1999a. Internal defenses of the snail Biomphalaria glabrata.

94. Characterization of hemocytes and fixed phagocytes // Journal of invertebrate pathology, 74 (3): 224-234.

95. Matricon-Gondran M., Letocart M. 1999b. Internal defenses of the snail Biomphalaria glabrata.1.. Defense cells have different phagocytic responses to various injected foreign material // Journal of invertebrate pathology, 74 (3): 235-247.

96. McGinnis S., Madden T. L. 2004. BLAST: at the core of a powerful and diverse set of sequence analysis tools // Nucleic acids research, 32 (Web Server issue): 20-25.

97. McGreal E. P., Martinez-Pomares L., Gordon S. 2004. Divergent roles for C-type lectins expressed by cells of the innate immune system // Molecular immunology, 41(11): 1109— 1121.

98. Mitta G., Vandenbulcke F., Hubert F., Roch P. 1999. Mussels defensins are synthesized and processed in granulocytes then released into the plasma after bacterial challenge // Journal of Cell Science, 112: 4233^1242.

99. Mitta G., Vandenbulcke F., Noel Т., Romestand В., Beauvillain J. C., Salzet M., Roch P. 2000a. Differential distribution and defence involvement of antimicrobial peptides in mussel // Journal of cell science, 113 (15): 2759-2769.

100. Mitta G., Vandenbulcke F., Roch P. 2000b. Original involvement of antimicrobial peptides in mussel innate immunity// FEBS letters, 486 (3): 185-190.

101. Mouachid A., Mone H. 1990. Interference of Echinoparyphium elegans with the host- parasite system Bulinus truncates — Schistosoma bovis in natural conditions // Annals of Tropical Medicine and Parasitology, 84 (4): 341-348.

102. Newton W. L. 1953. The inheritance of susceptibility to infection with Schistosoma mansoni in Australorbis glabratus II Experimental Parasitology, 2: 242-257.

103. Newton W. L. 1954. Albinism in Australorbis glabratus И Proceedings of the Helminthological Society of Washington, 21: 72-74.

104. Newton W. L. 1955. The establishment of a strain of Australorbis glabratus which combines albinism and high susceptibility to infection with Schistosoma mansoni II Journal of Parasitology, 29: 539-544.

105. Novas A., Barcia R., Ramos-Martinez J. I. 2007. Nitric oxide production by haemocytes from Mytilus galloprovincialis shows seasonal variations // Fish & Shellfish Immunology, 23: 886-891.

106. Ottaviani E., Franchini A. 1988. Ultrastructural study of haemocytes of the freshwater snail Planorbarius corneus (Gastropoda, Pulmonata) 11 Acta Zoolologica, 69 (3): 157—162.

107. Ottaviani E., Franchini A., Cassanelli S., Genedani S. 1995. Cytokines and invertebrate immune responses//Biology of the cell, 85 (1): 87-91.

108. Ottaviani E., Franchini A., Fontanili P. The presence of immunoreactive vertebrate bioactive peptide substances in hemocytes of the freshwater snail Viviparus ater (Gastropoda, Prosobranchia)// Cellular and molecular neurobiology, 12 (5): 455^162.

109. Pan С. Т. 1958. The general histology and topographic microanatomy of Australorbis glabratus II Bulletin of Museum of Comparative Zoology. Harvard collection, 119: 237—299.

110. Parisi M.-G., Lia H., Jouvetc L. B. P., Dyryndac E. A., Parrinellob N., Cammaratab M., Rocha P. Differential involvement of mussel hemocyte sub-populations in the clearance of bacteria // Fish & Shellfish Immunology, 25 (6): 834-840.

111. Pereira C.A.J., Martins-Souza R.L., Coelho P.M.Z., Limaa W.S., Negrao-Correa D. 2006. Effect of Angiostrongylus vasorum infection on Biomphalaria tenagophila susceptibility to Schistosoma mansoni II Acta Tropica, 98: 224-233.

112. Pipe R. K., Farley S. R., Coles J. A. 1997. The separation and characterisation of haemocytes from the mussel Mytilus edulis II Cell and tissue research, 289: 537-545.

113. Pruitt K. D., Tatusova Т., Maglott D. R. 2007. NCBI reference sequences (RefSeq): a curated non-redundant sequence database of genomes, transcripts and proteins // Nucleic acids research, 35 (Database issue): 61-65.

114. Qiu L., Song L., Yu Y., Xu W., Ni D., Zhang Q. 2007. Identification and characterization of a myeloid differentiation factor 88 (MyD88) cDNA from Zhikong scallop Chlamys farreri I I Fish & Shellfish Immunology, 23: 614-623.

115. Richards C. S. 1970. Genetics of a molluscan vector of schistosomiasis // Nature, 227: 806-810.

116. Richards C. S. 1980. Genetic studies on amoebocytic accumulations in Biomphalaria glabrata II Journal of invertebrate pathology, 35: 49-52.

117. Richards C. S. 1984. Influence of snail age on genetic variations in susceptibility of Biomphalaria glabrata for infection with Schistosoma mansoni II Malacologia, 25: 493502.

118. Richards C. S., Shade P. C. 1987. The genetic variation of compatibility in Biomphalaria glabrata and Schistosoma mansoni II Journal of Parasitology, 73: 1146-1151.

119. Rodelaud D., Barthe D. 1981. The development of the amoebocyte-producing ogan in Lymnaea truncatula Muller infected by Fasciola hepatica L. // Zeitschrift fur Parasitenkude, 65: 331-341.

120. Rondelaud D., Barthe D. 1980. Description and characteristics of an ameboeytic reaction in Lymnaea truncatula Miiller infested by Fasciola hepatica L. // Zeitschrift fur Parasitenkunde, 61 (2): 187-196.

121. Sambrook J., Fritsch E. F., Maniatis T. 1989. Molecular cloning: a laboratory manual // New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, Second Edition. Tome 1-3.

122. Santamaria-Kisiel L., Rintala-Dempsey A. C., Shaw G. S. 2006. Calcium-dependent and -independent interactions of the SI 00 protein family // The Biochemical journal, 396 (2): 201-214.

123. Schreiber F. G., Schubert M. 1949. Results on exposure, of the snail Australobis glabratus to varying numbers of miracidia of Schistosoma mansoni II The Journal of Parasitology, 37: 42-^-7

124. Sire C., Rognon A., Theron A. 1998. Failure of Schistosoma mansoni to reinfect Biomphalaria glabrata snails: acquired humoral resistance or intra specific larval antagonism? // Parasitology, 117: 117-122.

125. Sminia T. 1974. Haematopoiesis in the freshwater snail Lymnaea stagnalis studied by electron microscopy and autoradiography// Cell and tissue research, 150: 443-454.

126. Sminia Т., Barendsen L. 1980. A comparative morphological and enzymes histochemical study on blood cells of the freshwater snails Lymnaea stagnalis, Biomphalaria glabrata, and Bulinus truncatus II Journal of morphology, 165: 31-39.

127. Sorensen R. E., Minchella D. J. 2001. Snail-trematode life history interactions: past trends and future directions // Parasitology, 123: 3-18.

128. Souza S. S., Andrade Z. A. 2006. On the origin of the Biomphalaria glabrata hemocytes // Memorias do Institute Oswaldo Cruz, 101: 213-218.

129. Stumpf J. L., Gilbertson D. E. 1978. Hemocytes of Biomphalaria glabrata: Factors affecting variability // Journal of invertebrate pathology, 32: 177-181.

130. Sullivan J. T. 1988. Hematopoiesis in three species of Gastropods following infection with Echinostoma paraensei (Trematoda: Echinostomatidae) // Transactions of the American Microscopical Society, 107 (4): 335-361.

131. Sullivan J. T. 1990. Long-term survival of heterotopic allografts of the amoebocyte-producing organ in Biomphalaria glabrata (Mollusca: Pulmonata) // Transactions of the American Microscopical Society, 109 (1): 52-60.

132. Sullivan J. Т., Ни P. С. 1996. Fate of Shistosoma mansoni in Biomphalaria obstructa II The Journal of Parasitology, 82 (2): 743-747.

133. Sullivan J. Т., Spence J. V. 1999. Factors affecting adoptive transfer of resistance to Schistosoma mansoni in the snail intermediate host, Biomphalaria glabrata. II Journal of Parasitology, 85 (6): 1065-1071.

134. Swarnakar S., Chowdhury P.S., Sarkar M. 1991. N-glycolylneuraminic acid specific lectin from Pila globosa snail // Biochemical and biophysical research communications, 178 (1): 8594.

135. Thompson J. D., Gibson T. J., Plewniak F., Jeanmougin F., Higgins D. G. 1997. The CLUSTALX windows interface: flexible strategies for multiple sequence alignment aided by quality analysis tools // Nucleic acids research, 25 (24): 4876^1882.

136. Tripp M. R. 1961. The fate of foreign materials experimentally introduced into the snail Austalorbis glabratus II Journal of Parasitology, 23: 90-133.

137. Van der Knaap W.P.W., Loker E. S. 1990. Immune mechanisms in trematode snail interactions // Parasitology today, 6 (6): 176-182.

138. Wootton E. C., Pipe R. K. 2003. Structural and functional characterisation of the blood cells of the bivalve mollusk, Scrobicularia plana II Fish & Shellfish Immunology, 15 (3): 249262.

139. Yayne С.J., Boswell С.A., Loker E.S., Yui M.A. 1985. Plasma components which mediate cellular defenses in the gastropod mollusk, Biomphalaria glabrata II Developmental and Comparative Immunology, 9 (3): 523-530.

140. Yssel E., Wolmarans С. T. 1989. Factors influencing the leukocyte concentration of the freshwater snail Bulinus africanus. I I Journal of invertebrate pathology, 53 (2): 269-271.

141. Zelck U. E., Gege В. E., Schmid S. 2007. Specific inhibitors of mitogen-activated protein kinase and PI3-K pathways impair immune responses by hemocytes of trematode intermediate host snails // Developmental and Comparative Immunology, 31:321-331.

142. Zhang S.M., Loker E. S. 2004 Representation of an immune responsive gene family encoding flbrinogen-related proteins in the freshwater mollusk Biomphalaria glabrata, an intermediate host for Schistosoma mansoni II Gene, 341: 255-266.