Активаторы плазминогена урокиназного и тканевого (u-PA и t-PA) типов и их ингибитор (PAI-1) при опухолях костей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат биологических наук Юсифов Ариф Исмаил оглы

• Юсифов Ариф Исмаил оглы
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Юсифов Ариф Исмаил оглы

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Взаимодействие метастазирующих клеток с внеклеточным матриксом.

1.1.1 Адгезия.

1.1.2 Протеолиз.

1.2 Опухолевые протеазы.

1.2.1 Металлопротеазы

1.2.2 Цистеиновые протеазы.

1.2.3 Сериновые протеазы

1.3 Активаторы и ингибиторы активаторов плазминогена

1.3.1 Профермент.

1.3.2 Рецептор u-РА.

1.3.3 Ингибиторы РА.

1.3.4 Регуляция активности связанного с поверхностью клеток и свободного u-РА.

1.4 Клиническое значение сериновых протеаз.

1.4.1 Активатор плазминогена урокиназного типа (u-РА).

1.4.2 Активатор плазминогена тканевого типа (t-PA).

1.4.3 Ингибитор РА типа 1 (PAI-1).

1.4.4 Ингибитор РА типа 2 (РА1-2).

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Характеристика больных.

2.2 Получение и обработка тканей.

2.3 Иммуноферментное определение (ELISA) содержания и-РА, t-PA и PAI-1 в цитозолях опухолей.

2.4 Определения концентрации белка в цитозолях опухолей по методу Лоури.

2.5 Статистический обработка данных.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ

ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Сравнительный анализ экспрессии t-PA, u-PA, и PAI-1 в цитозольной фракции первичных опухолей и опухолеподобных образований костей.

3.2 Уровни экспрессии t-PA, u-PA, и PAI-1 в цитозольной фракции остеосарком.

3.2.1 Влияние неоадъювантной предоперационной химиотерапии на показатели уровня протеаз.

3.2.2 Экспрессия t-PA, u-PA и PAI-1 в различных гистологических вариантах остеосаркомы.

3.2.3 Экспрессия t-PA, u-PA и PAI-1 в зависимости от пола и возраста больных остеосаркомой.

3.2.4 Экспрессия t-PA, u-PA и PAI-1 в зависимости от рецидивирования опухолей остеосаркомы.

3.2.5 Экспрессия t-PA, u-PA и PAI-1 в зависимости от метастатического потенциала опухолей.

3.2.6 Экспрессия t-PA, u-PA и PAI-1 в зависимости от сроков метастазирования опухолей.

3.2.7 Корреляция между уровнями u-PA, t-PA, PAI-1 и размером опухолей остеосарком.

3.3 Уровни экспрессии t-PA, u-PA и PAI-1 в цитозольной фракции хондросарком.

3.3.1 Экспрессия t-PA, u-PA и PAI-1 в зависимости от пола и возраста больных хондросаркомой.

3.3.2 Экспрессия t-PA, u-PA и PAI-1 в зависимости от гистологического строения хондросарком.

3.3.3 Зависимость показателей t-PA, u-PA и PAI-1 от частоты рецидивирования хондросарком.

3.3.4 Корреляция между уровнями t-PA, u-PA и PAI-1 и размером хондросарком.

3.4 Уровни экспрессии t-PA, u-PA и PAI-1 в остальных группах опухолей.

3.4.1 Содержание t-PA, u-PA и PAI-1 в цитозольной фракции гигантоклеточных опухолей.

3.4.2 Содержание t-PA, u-PA и PAI-1 в цитозольной фракции опухолей Юинга.

3.4.3 Содержание t-PA, u-PA и PAI-1 в цитозолях других гистологических вариантов опухолей костей (злокачественной фиброзной гистиоцитомы, паростальной саркомы, фибросаркомы, доброкачественных и опухолеподобных поражений костей).

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Активаторы плазминогена урокиназного и тканевого (u-PA и t-PA) типов и их ингибитор (PAI-1) при опухолях костей»

Изучение механизмов канцерогенеза и метастазирования раковых клеток за последнее десятилетие привело к открытию ряда биологически активных веществ, которые играют важную роль в этих процессах. Как известно, для возникновения метастазов необходимо, чтобы опухолевые клетки могли выйти из первичного места расположения и проникнуть в сосуды. Для этого опухоль продуцирует ферменты, растворяющие строму и базальные мембраны. Было показано, что в этот процесс вовлечен сложный каскад протеолитических ферментов, наиболее известными из которых являются активаторы плазминогена урокиназного и тканевого типов и некоторые матриксные металлопротеазы такие, как коллагеназа и стромелизины.

Активатор плазминогена урокиназного типа (u-РА), являющийся сериновой протеазой, может играть ключевую роль в инвазии и метастазировании клеток, так как он превращает плазминоген в плазмин. Плазмин способен непосредственно разрушать некоторые белки внеклеточного матрикса, а также активировать другие металлопротеазы (van Roozenaal и соавт., 1996).

Исследования, проведенные при раке молочной железы, показали, что эти опухоли содержат также ингибиторы активатора плазминогена - PAI-1 и PAI-2. Однако, хотя PAI-1 способен блокировать действие активатора плазминогена иРА, наличие его было ассоциировано с увеличением количества рецидивов. С другой стороны, уровень PAI-1 отрицательно коррелирован с наличием в опухоли рецепторов эстрогенов, прогестерона и эстроген регулируемым pS2 белком, которые, как известно, связаны с благоприятным прогнозом.

Наоборот, обнаружение PAI-2 в опухолях больных было связано с лучшими показателями выживаемости.

Таким образом, уровень ингибиторов плазминогена урокиназного типа в ткани оказался важным показателем в оценке метастатических возможностей рака (John A. Foekens, 1994).

Jan Grondahl-Hansen и соавт. (1995) изучая прогностическую значимость рецептора активатора плазминогена урокиназного типа (uPAR) в опухолях молочной железы пришли к выводу, что высокие уровни этого белка в опухоли связаны с худшими результатами лечения этих пациентов.

Большинство вышеуказанных исследований проведены при раке молочной железы, однако, есть данные об экспрессии u-PA стромальными клетками рака толстой кишки, а также синтезе некоторых металлопротеаз клетками рака кожи и другими новообразованиями человека.

Цель настоящего исследования: - изучение экспрессии активаторов плазминогена урокиназного (u-PA) и тканевого (t-PA) типов, а также ингибитора активатора плазминогена урокиназного типа 1 (PAI-1) в опухолях костей и оценка их взаимосвязи с основными клинико-морфологическими особенностями заболевания, и их роли в клиническом течении, терапии и прогнозе болезни. Достижение указанной цели требует решения следующих задач:

1. Иммуноферментным методом определить содержание активаторов плазминогена урокиназного и тканевого (u-PA, t-PA) типов, а также ингибитора активатора плазминогена урокиназного типа 1 (PAI-1) в цитозольной фракции различных морфологических вариантов опухолей и опухолеподобных поражений костей: при остеогенной и хондросаркоме, саркоме Юинга, злокачественной фиброзной гистиоцитоме, гигантоклеточной опухоли, фибросаркоме, костно-хрящевых экзостозах и других доброкачественных поражениях.

2. Оценить значение активаторов плазминогена и их ингибиторов, в клиническом течении и прогнозе заболевания.

3. Оценить влияние предоперационного химиотерапевтического лечения на содержание t-PA, u-PA и PAI-1 в опухолях костей.

4. Оценить взаимосвязь содержания t-PA, u-PA и PAI-1 в опухолях костей с основными клинико-морфологическими факторами прогноза (нозологической формой, гистологическим вариантом, размером опухоли, возрастом, наличием метастазов и процентов местных рецидивов).

5. Выявить возможные варианты опухолей, отличающиеся по содержанию активаторов плазминогена урокиназного и тканевого (u-PA и t-PA) типов, а также ингибитора активатора плазминогена урокиназного типа 1 (PAI-1) в цитозольной фракции и их роль в прогнозе заболевания.

Научная новизна

Впервые в отечественной литературе проведено определение содержания активаторов плазминогена урокиназного и тканевого типов (u-PA и t-PA) и ингибитора активатора плазминогена урокиназного типа 1 (PAI-1) в цитозольной фракции опухолей и опухолеподобных поражений костей.

На основании лабораторных и клинических исследований выяснена связь между экспрессией активаторов плазминогена урокиназного типа (u-PA и t-PA) и ингибитора активаторов плазминогена типа 1 (PAI-1) в цитозольной фракции опухолей костей и основными клинико-морфологическими характеристиками заболевания. Исследована корреляционная связь между клиническими и морфологическими факторами прогноза опухолей костей.

Впервые показано, что опухолеподобные заболевания костей содержат значительно меньшие количества u-РА, чем злокачественные новообразования.

Впервые продемонстрировано повышенное содержание активатора плазминогена (u-РА) при метастазирующих опухолях остеосаркомы по сравнению с неметастазирующими, а также повышенное содержание PAI-1 при ранних сроках метастазирования опухолей.

Впервые показана корреляционная взаимосвязь между уровнем PAI-1 и размером опухолей костей, а именно, остеосаркомы, хондросаркомы и гигантоклеточной опухоли.

Практическое значение исследования Работа представляет не только теоретический интерес для анализа роли активаторов плазминогена урокиназного и тканевого типа (u-РА и t-PA) и ингибитора активаторов плазминогена типа PAI-1, их связь со степенью злокачественности и дифференцировки клеток, способности к метастазированию, но и выяснения прогностического значения исследованных показателей. Анализ результатов, возможно, позволит обосновать и представить новые критерии клинического течения, а также прогноза заболевания, и, учитывая абсолютные значения вышеназванных показателей, позволит дифференцированно подходить к выбору адьювантных методов лечения у конкретного больного.

Подобные исследования могут быть основой для создания новых групп препаратов - лекарств, влияющих на экспрессию ингибиторов и активаторов плазминогена, синтетических ингибиторов и антител против плазминогена (плазмина), и других литических ферментов выделяемых опухолью - препаратов которые будут влиять на распространение опухоли, а именно на процессы ее инвазии и метастазирования.

Публикации исследования: Материалы диссертации опубликованы в 4 научных работах.

Апробация диссертации: Материалы диссертации доложены на VII и VIII Национальных Конгрессах "Человек и лекарство" (Москва, 2000, 2001гг.) и на II конференции молодых ученых России с международным участием "Фундаментальные науки и прогресс медицины" (Москва, 2001г.).

Диссертация апробирована 6 марта 2001 года на совместной научной конференции лаборатории клинической биохимии, хирургического отделения общей онкологии, хирургического отделения опухолей молочных желез, отделения изучения новых противоопухолевых лекарств (с однодневным стационаром химиотерапии) НИИ клинической онкологии РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН, кафедры онкологии ММА им. И.М.Сеченова.

Структура и объем работы. Диссертация включает введение, обзор данных литературы, главу "Материалы и методы", собственные данные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, список литературы (140 наименований). Работа изложена на 108 страницах машинописного текста, содержит 15 таблиц и 8 рисунков.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Юсифов Ариф Исмаил оглы

ВЫВОДЫ

1. В опухолях костей иммуноферментым методом обнаружен активатор плазминогена тканевого типа (t-PA) в количестве 0-28,6 нг/мг белка, среди них в остеосаркоме (0,28, 0,78±1,38), в хондросаркоме (0,46, 2,43±5,34), в гигантоклеточной опухоли (0,33, 0,79±1,36), в опухоли Юинга (0,9, 1,17+0,84), в костно-хрящевых экзостозах (4,9, 11,87+13,35); активатор плазминогена урокиназного типа (u-PA) - 0-3,05 нг/мг, среди них в остеосаркоме (0,41,0,50±0,59), в хондросаркоме (0,19, 0,42±0,51), в гигантоклеточной опухоли (0,71, 0,68±0,42), в опухоли Юинга (0,08, 0,37+0,68), в костно-хрящевых экзостозах (0,01, 0,02+0,04) и ингибитор активаторов плазминогена 1-го типа (PAI-1) в количестве 0-39,05 нг/мг среди них в остеосаркоме (2,08,2,49+1,98), в хондросаркоме (4,6, 9,58±10,05), в гигантоклеточной опухоли (3,50, 4,45+3,83), в опухоли Юинга (1,27, 5,05±8,94,), в костно-хрящевых экзостозах (2,66, 4,60±6,63). (В общей группе больных наблюдалась слабая, но достоверная корреляция между уровнями u-PA и PAI-1 (г=0,29; р<0,01).

2. При сравнений различий в группах достоверные различия для u-PA были обнаружены между ГКО и хондросаркомы, КХЭ и ГКО, ГКО и остеосарком, опухолей Юинга и костно-хрящевых экзостозов, и остеосаркомой и КХЭ; для PAI-1 наибольшие различия обнаружены между хондросаркомой и остеосаркомой, ГКО и хондросаркомой экспрессия t-PA наиболее достоверно отличалась у костно-хрящевых экзостозах и ГКО и остеосарком.

3. Неоадьювантная предоперационная химиотерапия при остеосаркоме не влияет достоверно на уровни экспрессии t-PA, u-PA и PAI-1.

4. Количество u-PA в тканях доброкачественных новообразований (КХЭ) достоверно ниже, чем в злокачественных опухолях костей. Количество t-PA, наоборот выше в КХЭ по сравнению с другими опухолями. По отношению к уровням PAI-1 подобных наблюдений не обнаружено.

5. Экспрессия u-PA в опухолях больных с метастазами остеосаркомы в 2 раза превышала его количество у безметастатических больных (р<0,05), экспрессия других протеаз в зависимости от метастазирования достоверно не отличалась. Количество PAI-1 у больных остеосаркомой в несколько раз выше при сроках метастазирования до 12 мес. (р<0,05). В тканях больных опухолью Юинга все три протеазы были выше у больных с метастазами.

6. Между содержанием u-PA, t-PA и PAI-1, а также возрастом и полом больных не обнаружено четкой взаимосвязи

7. Установлена корреляция между размером опухоли и количеством протеаз (PAI-1) для остеосаркомы, хондросаркомы и гигантоклеточной опухоли.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

До сих пор не удалось добиться принципиального улучшения действенности существующих методов или найти новые пути, способные обеспечить получение удовлетворительного терапевтического эффекта. Подобная ситуация является следствием целого ряда обстоятельств, из которых наиболее важными представляются следующие.

Во-первых, чрезвычайно высокий инвазивный и метастатический потенциал костных клеток. Во-вторых, неприемлемость традиционных принципов абластики из-за некоторых, пока трудно преодолимых моментов технического характера. В-третьих, относительно ограниченные возможности современных консервативных методов лечения костных опухолей в силу, с одной стороны, определенных особенностей васкуляризации костной ткани, и, с другой стороны, отсутствием способов достаточно эффективного воздействия на малигнизированные клетки костного гистогенеза (Аббасов Ф.А., 2000).

Одним из наиболее важных свойств опухоли является способность выделять протеолитические ферменты, которые играют важную роль в инвазии опухолевых клеток в окружающие ткани и сосуды (Kim W.Yu. et al., 1998). По-видимому, центральную роль в этих процессах играют ферменты регуляции активности плазминогена: активаторы плазминогена урокиназного (u-PA) и тканевый активатор плазминогена (t-PA), а также их ингибиторы: PAI-1 и PAI-2. По представленным в литературе данным u-PA имеет важное значение в процессах деградации межклеточного вещества соединительной ткани как в нормальном организме, так и в опухоли, в то время как t-PA участвует в тромбо-и фибринолизе (Pollanen J. et al., 1987; Roozendaal С. et al., 1996).

Предполагается, что u-PA играет центральную роль в регуляции межклеточного протеолиза в различных физиологических и патологических процессах, включающих деструкцию ткани и миграцию клеток, таких как инволюцию органов, воспалительные реакции, инвазивный рост трофобласта и опухолевых клеток (Pollanen J. et al., 1987). В последнее время приводятся также доказательства важной роли u-PA в процессах ангиогенеза в опухолях. Активность u-PA непосредственно регулируется PAI-1 и PAI-2, относящихся к классу серпинов. Некоторые исследователи предполагают защитную роль PAI-1 для ткани опухоли в процессе деградации (Руке С. et al., 1991.). Другая группа исследователей выдвинула гипотезу о том, что уровень PAI-1 в ткани может быть биохимическим показателем степени неоваскуляризации, так как PAI-1 может иметь важную роль в ангиогенезе (Montescano R. et al., 1990).

Активатор плазминогена тканевого типа - t-PA также принимает участие в активации плазминогена в опухолях, что подтверждают высокие уровни его, обнаруженные в тканях опухолей молочной железы (De Witte J. et al., 1999).

Таким образом, результаты клинических исследований при многих типах опухолей свидетельствуют о важной роли ферментов системы плазминогена в процессах инвазии и метастазирования. По данным многих исследователей эти вещества также перспективны с клинической точки зрения. При этом наиболее значимыми показателями с точки зрения прогноза заболевания и оценки злокачественного потенциала опухоли, скорее всего, являются u-PA и PAI-1. С другой стороны, исследуется значение t-PA, PAI-2, uPAR и, кроме того, соотношения PAI-1/u-PA и PAI-2/u-PA в клиническом течении и исходе заболевания.

Основу нашего клинического материала составили 83 больных различными злокачественными, доброкачественными и опухолеподобными заболеваниями костей, находившихся на обследовании и лечении в Российском онкологическом научном центре им. Н.Н.Блохина РАМН в период с 1990 по 2000 гг.

Данные, полученные после обработки клинического материала, в основном, отражают уже ранее установленные тенденции. Согласно этим данным процент больных в возрасте от 16 до 20 лет, т.е. во второй декаде жизни, оказался достоверно выше по сравнению с другими возрастными группами. Этот факт хорошо согласуется с многочисленными данными литературы. Вместе с тем, в настоящем наблюдении эта тенденция особенно ярко была выражена в группе больных остеосаркомой, опухолью Юинга и доброкачественными новообразованиями. При других нозоологических формах костных сарком аналогичная тенденция особенно не проявлялась, что также подтверждается литературными данными. Например, при хондросаркоме и ГКО преобладали больные в возрасте от 21 до 30 лет.

Проведенное нами количественное определение концентрации некоторых компонентов системы активации плазминогена в цитозолях опухолей иммуноферментным методом позволило нам ответить на поставленные вопросы и подтвердить ряд закономерностей, существование которых можно было предположить на основании данных экспериментальных исследований и анализа последних публикаций.

Сравнительный анализ межгрупповых различий для активаторов плазминогена и PAI-1 выявил очень сложную картину. Уровни экспрессии t-PA, u-PA и PAI-1 в общих группах достоверно отличались, однако, межгрупповые различия были достоверны не всегда. Несмотря на это, было убедительно показано, что экспрессия u-РА в доброкачественных новообразованиях, а именно, в костно-хрящевых экзостозах была значительно ниже, чем в других группах опухолей. Это наблюдение согласуется с предполагаемой ролью этого вещества в развитии злокачественного процесса. Как известно, u-РА является ключевым звеном в превращении плазминогена в плазмин, и таким образом, запуская разрушение межклеточных компонентов и проникновение опухолевых клеток в окружающие ткани.

Сложнее выглядит ситуация с активатором плазминогена тканевого типа -t-PA и ингибитором PAI-1. При сопоставлении медиан и средних значений t-PA и u-РА в различных группах наблюдается, на первый взгляд, обратная зависимость: минимальному количеству u-РА КХЭ соответствуют максимальные количества t-PA. И наоборот, максимальные количества u-РА, отмеченные в тканях остеосарком и ГКО соответствовали минимальные количества t-PA в этих группах. Что касается PAI-1, то наибольшие количества его обнаруживались в хондросаркомах и опухолях Юинга, наименьшие - в остеосаркомах.

Таким образом, учитывая картину межгрупповых отличий и различную природу нозологических форм заболеваний, дальнейший анализ решено было провести раздельно в каждой группе.

В этой связи представляло интерес проследить зависимость содержания иРА, t-PA и PAI-1 в опухолях костей от клинических параметров заболевания, таких как размер и гистологический тип опухоли, наличия отдаленных метастазов и рецидива заболевания, а также от клинических параметров больных, таких как пол и возраст.

Как известно, в настоящее время в лечении остеосаркомы широко приметается неоадьювантная терапия. Применение сочетания наиболее активных противоопухолевых препаратов ведет к частичной или полной регрессии опухоли у многих больных. При эффективности химиотерапевтического лечения большая часть опухолевых клеток гибнет. Некроз опухолевых клеток приводит к необратимым биохимическим сдвигам, что может повлиять на результат исследования. Поскольку половина больных остеосаркомой получали неоадьювантную химиотерапию, необходимо было оценить ее влияние на показатели уровня протеаз и при обнаружении различий в группах "леченых" и "нелеченых" больных, дальнейший анализ провести раздельно. Проведенное исследование показало, что хотя уровни экспрессии протеаз часто и выше были у "нелеченных" больных, различия эти статистически незначимы, и поэтому в дальнейшем, при проведении других исследований, предоперационная химиотерапия больных не учитывалась.

В группе остеосарком проводили исследование количеств t-PA, u-PA и PAI-1 в зависимости от пола и возраста больных. В преобладающей группе мужчин были обнаружены немногим более высокие значения активаторов и ингибитора активаторов Pig (медианы были выше для всех трех показателей, средние только для t-PA и u-PA). Достоверных различий между этими группами не было выявлено. Для выяснения зависимости экспрессии протеаз от возраста группа больных остеосаркомой была разделена на две группы с "точкой среза" 18 лет.

По данным некоторых исследователей количество протеолитических ферментов системы плазминогена, а именно u-PA и PAI-1, влияет на 5-летнюю безрецидивную и общую выживаемость. При этом согласно данным регрессионного анализа по мере превышения количества u-PA некоторого значения, т.н. "точки среза", происходит резкое повышение процента рецидивов. У 6 больных остеосаркомой в среднем за 1,5 лет наблюдался местный рецидив заболевания, но сравнительный анализ экспрессии протеаз в группах с и без рецидива не выявил достоверных различий.

Остеосаркома известна как опухоль, образующая ранние гематогенные метастазы, частота которых составляет более 75%. Чаще всего диссеминация происходит в легкие, множественное поражение которых и является причиной смерти. Из исследованных нами 20 больных остеосаркомой метастазы наблюдались у 10. Сравнительный анализ u-PA, t-PA и PAI-1 в цитозолях больных с метастазами и безметастатических больных показал двукратное превышение u-PA у диссеминированных по сравнению с больными с локализованной опухолью.

Так как остеосаркомы метастазировали в разные сроки, представляло интерес выяснить зависимость экспрессии протеаз от сроков метастазирования. Из результатов этого исследования следует, что уровень PAI-1 в опухолях с ранним метастазированием достоверно в несколько раз выше по сравнению с группой остеосарком с более длительными сроками метастазирования.

Другим интересным наблюдением была достоверная и высокая корреляция между уровнем PAI-1 и объемом остеосаркомы. Для этого на основании патоморфологических данных вычислялся объем опухоли и критерий ранговой корреляции Спирмена (г>0,65). На корреляцию между размером опухоли и экспрессией тканевых протеаз указывали и другие исследователи (Foekens J. et al., 1995). Но в этих работах при оценке размера опухоли использовали данные TNM классификации, а не истинный размер (объем) опухолей. В отличие от опухолей молочной железы для опухолей костей, в частности для остеосаркомы и хондросаркомы, можно с большей степени точности измерить размер (объем) опухоли, а значит и степень корреляции. Учитывая тот факт, что изучению протеаз системы плазминогена в мировой литературе посвящены единичные работы, корреляция между уровнем PAI-1 и размером опухоли костей вероятней всего обнаружена нами впервые.

Хондросаркома является второй по частоте встречаемости среди злокачественных опухолей костей, и ее изучение представляет не меньший интерес, чем исследование других опухолей.

Изучение возрастной зависимости экспрессии тканевых протеаз в ХС не дало положительных результатов. В двух группах больных с возрастной границей до и более 27 лет наблюдалась незначительная и недостоверная разница. Группа хондросарком состояла из 20 больных с равным количеством мужчин и женщин. И хотя уровень экспрессии PAI-1 в группе женщин более чем в 2 раза превышал аналогичный уровень у мужчин, эта разница оказалась статистически незначимой.

Известна склонность ХС в 33-36% случаев к рецидивированию. Обнаружены факторы, влияющие на частоту возникновения рецидивов. Среди них пол, возраст, локализация и объем опухоли, тип проведенной операции. С учетом вышеуказанных факторов представляло интерес исследовать взаимосвязь частоты рецидивирования и количества t-PA, u-PA и PAI-1 в опухоли. Для этого был проведен сравнительный анализ количеств активаторов Pig и их ингибитора в группе больных с рецидивами (5 пациентов) с группой больных, у которых на данный момент рецидивы не были обнаружены. При этом медиана экспрессии t-РА в группе с рецидивами была в три раза выше, чем в безрецидивной группе. Медианы u-PA и PAI-1 были немного выше в безрецидивной группе, хотя среднее значение u-PA в группе с рецидивами превышало таковое в безрецидивной. Все различия между группами статистически незначимы.

Возможная общность функций ферментов системы плазминогена при опухолях костей подтверждается также тем фактом что, корреляционная взаимосвязь между количеством PAI-1 и размером опухоли наблюдается и в случае хондросаркомы. Более того, если при остеосаркоме только PAI-1 коррелирует с размером опухоли, в случае хондросаркомы аналогичная корреляция наблюдается и для t-PA. Хотя для хондросаркомы больший коэффициент корреляции и достоверный результат наблюдается, если использовать линейный параметр размера опухоли и логарифм PAI-1.

Исследование больных ГКО было ограниченным, вследствие небольшого числа рецидивов и отсутствия метастазов за время изучения. Корреляция между размером опухоли и количеством PAI-1 в ней была меньше, чем в случае остеосаркомы и хондросаркомы, но изучение аналогичной корреляции в объединенной группе ГКО и ХС показало, что одновременно с некоторым снижением коэффициента корреляции по сравнению только с группой хондросарком, следует повышение статистической достоверности.

В настоящее исследование были включены 5 больных опухолью Юинга. У трех из них наблюдались метастазы, у одного рецидив заболевания. Несмотря на малое количество наблюдений в данной группе, средние значения всех трех, исследованных нами протеаз, в цитозолях больных с метастазами оказались в несколько раз выше соответствующих показателей у больных без метастазов, что, возможно, подтверждает неблагоприятный прогноз у пациентов с повышенной экспрессией тканевых протеаз.

В качестве группы контроля для сравнения со злокачественными новообразованиями были использованы 7 случаев костно-хрящевых экзостозов. Согласно полученным результатам, КХЭ продуцировали в несколько раз больше t-PA , чем злокачественные опухоли. С другой стороны, КХЭ отличались сильно заниженным количеством экспрессии u-PA. Низкий уровень экспрессии u-PA в этой группе новообразований находится в согласии с той концепцией, что u-PA является ключевым ферментом, регулирующим протеолиз в ткани, и, таким образом, способствуя инвазии и деструкцирующему росту характерному для злокачественных опухолей.

В заключении следует отметить, что результаты изучения системы регуляции плазминогена при разных морфологических вариантах новообразований костей подтверждают связь экспрессии активаторов плазминогена t-PA и u-PA и их ингибитора PAI-1 со степенью злокачественности опухоли, предполагая активное участие исследованных протеаз в биологии опухоль-трансформированных тканей. Последующее наблюдение за обследованными группами больных и изучение их выживаемости, с учетом выявленных рецидивов и метастазов, позволит

90 проверить и обосновать представленные гипотезы. Дальнейшие исследования должны быть направлены на разработку патогенетических методов лечения вышеуказанных заболеваний костей, направленных на нормализацию процессов регуляции активности плазминогена, на изучение их роли в прогнозе заболевания, а также использование этих показателей как факторов повышенного риска малигнизации костной и хрящевой тканей при некоторых опухолеподобных процессах и доброкачественных новообразованиях костей.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Юсифов Ариф Исмаил оглы, 2001 год

1. Аббасов Ф.А. Метастазы злокачественных опухолей костей. Дисс. .докт.мед.наук - РОНЦ РАМН. Москва - 2000.

2. Герштейн Е.С., Н.Е.Кушлинский. Система активации плазминогена в оценке прогноза и гормоно-чувствительности рака молочной железы. Вестник РОНЦ.-2 : 52-59, 1999

3. Кушлинский Н.Е., Соловьев Ю.В., Амирасланов А.Т. Половые стероидные гормоны и остеогенная саркома. Чувствительность остеогенной саркомы к андрогенам и эстрогенам. Вестник РОНЦ РАМН.-2 : 31-37, 1993.

4. Переводчикова Н.И. Химиотерапия опухолевых заболеваний. М.-2000.

5. Ровенский Ю.А. Молекулярные механизмы онкогенеза, инвазии и метастазирования.-1999.

6. Трапезников Н.Н, Алиев М.Д., Синюков П.А., Щербаков С.Д., Соколовский В.А., Тепляков В.В., Мачак Г.Н. Прогресс и перспективы развития методов лечения злокачественных опухолей костей. Вестник РОНЦ.-1:7-13; 1998.

7. Трапезников Н.Н., Л.А.Еремина, А.Т.Амирасланов, П.А.Синюков. Опухоли костей. М, Медицина.-1986.

8. Трапезников Н.Н., Соловьев Ю.Н., Еремина Л.А., Амирасланов А.Т., Феденко А.Н., Синюков П.А., Григорова Т.М., Токарева З.И., Ковалевский Е.Е., Готько Е.С. Прогресс в лечении остеогенной саркомы. Вестник ОНЦ РАМН России.- №1, С:3-9; 1993.

9. Фельдман М., Эйзенбах Л. Причины метастазирования клеток. В мире науки (Scientific American), 1:24-32, 1989.

10. Харатишвили Т.К. Хондросаркома кости (клиника, диагностика, лечение, прогноз). Дисс. .докт.мед.наук.-РОНЦ РАМН, Москва.-2000.

11. Abaza Mohamed-Salah I., Narayan R.K. Anti-Urokinase-Type Plasminogen Activator Monoclonal Antibodies Inhibit the Proliferation of Human Breast Cancer Cell Lines in vitro. Tumor Biology.- 19:4:229-237,1998.

12. Abidi S.M, Howard E.W., Dmytryk J.J., Pento J.T. The influence of antiestrogens on the release of plasminogen activator (u-PA) by MDA-MB-231 and MCF-7 breast cancer cells. Clin Exp Metastasis Apr; 16(3):235-41, 1998.

13. Allan E.H., Martin T.J. Prostaglandin E2 regulates production of plasminogen activator isoenzymes, urokinase receptor, and plasminogen activator inhibitor-1 in primary cultures of rat calvarial osteoblasts. J.Cell Physiol. Dec; 165(3): 521-9, 1995.

14. Allgayer H., Babic R, Bianca C.M. Prognostic Relevance of MMP-2 (72-kD Collagenase IV) in Gastric Cancer. Oncology 55:2:152-160, 1998.

15. Andreasen P.A., Nielsen L.S., Kristensen P., J.Grondahl-Hansen, L.Skriver, and K. Dano. Plasminohen activator inhibitor from human fibrosarcoma cells binds urokinase-type plasminogen activator, but not it's proenzyme. J.Biol.Chem. 261: 7644-7651, 1986.

16. Antalis T.M., Reeder J.A. Butyrate regulates gene expression of the plasminogen activating system in colon cancer cells. Int. J. Cancer Sep 4; 62(5):619-26, 1995

17. Baker M.S., Bleakley P., Woodrow G.C., Doe W.F. Inhibition of cancer cell urokinase plasminogen activator by its specific inhibitor PAI-2 and subsequent effects on extracellular matrix degradation. Cancer Res. Aug 1; 50(15):4676-84, 1990.

18. Bashar H., Urano Т., Fukuta K., Hata M., Suzuki K., Kawabe K., Takada Y., Takada A. Plasminogen activators and plasminogen activator inhibitor 1 in urinary tract cancer. Urol. Int. 52(l):4-8, 1994.

19. Basset P., Bellocq J.P., Wolf C. et al. A novel matalloproteinase gene specifically expressed in stromal cells of breast carcinomas. Nature 348, 699-704, 1990.

20. Bogie L.V., Ohira R.H., Yamamoto S., Okazaki K.J., Millar K., Bryant-Greenwood G.D. Tissue plasminogen activator and its receptor in the human amnion, chorion, and decidua at preterm and term. Biol. Reprod. Apr;60(4): 100612, 1999.

21. Bouchet C., Spyratos F., Martin P., et al. Prognostic value of urokinase type 1 plasminogen activator (u-PA) and inhibitors PAI-1 and PAI-2 in breast cancer. Br. J. Cancer, 69:398-405; 1994.

22. Cajot J.F., Sordat В., Druithof E.K.O., Bahman F. Human primary colon carcinomas xenografted into nude mice. Characterization of plasminogen activators expressed by primari tumor and thier xenografts. J. Natl. Cancer Inst., 77:703; 1986.

23. Castellote J.C., Grau E., Linde M.A., Pujol-Moix N., Rutllant M.L. Detection of both type 1 and type 2 plasminogen activator inhibitors in human monocytes. Thromb. Haemost., Feb 19;63(1):67-71; 1990.

24. Chapman H.A, Vavrin Z., Hibbs J.B. Macrophage fibrinolytic activity: identification of two pathways of plasmin formation by intact cells and of a plasminogen activator inhibitor. Cell 28: 653-662. 1982.

25. Chen Zu-Lin and Sidney Strickland. Neuronal Death in the Hippocampus Is Promoted by Plasmin-Catalyzed Degradation of Laminin. Cell 91:917-925, 1997.

26. Collard J.G., Shilven, Roos E. Invasive and metastatic potencial induced by ras-transfection into mouse BW5147 T-lymphoma cells. Cancer Res. 47: 754, 1987.

27. Colvard D.S., Eriksen E.F., Keeting P.E, et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA Biochemistry. V-86:854-857; 1989.

28. Creighton-Kempsford L.J., Pring J.B., Gaffney P.J. A comparison of the plasminogen activator activity units of urinary-type plasminogen activator (u-PA) and tissue-type plasminogen activator (t-PA). Blood Coagul Fibrinolysis Aug;3(4):481-3, 1992.

29. Dear A.E. and Medcalf R.L. The Urokinase-type-Plasminogen-activator receptor (CD87) is a pleiotropic molecule. Eur. J. Biochem 252: 185-193, 1998.

30. Dear A.E. Medcalf R.L. The Urokinase-type-Plasminogen-activator receptor (CD87) is a pleiotropic molecule. Eur. J. Biochem. 252: 185-193, 1998.

31. Delany A.M., Dong Y., Canalis E. Mechanisms of glucocorticoid action in bone cells. Cell Biochem. 56,3:295-302; 1994.

32. Duffy M.J., O'Grady P., Devaney D., O'Siorain L., Fennely J. L., and Lijnen H., J. Urokinase plasminogen activator, a marker for aggressive breast carcinomas: preliminary report. Cancer 62: 531-533, 1988.

33. Duffy M. J., Duggan C., Mulcahy H. E., McDermott W. and Niall J. O'Higgins. Urokinase Plasminogen activator: a prognostic marker in breast cancer including patients with axillary node-negative disease. Clin. Chem 44: 1177-1183, 1998.

34. Duffy M.J, Brouillet J.P, Reilly D., et al. Cathepsin D concentration in breast cancer cytosols: correlation with biochemical, histological, and clinical findings. Clin. Chem. 37: 101-104, 1991.

35. Duffy M.J., Reilly D., O'Sullivan C„ O'Higgins N., Fennely J. L., and Andreasen P. Urokinase-plasminogen activator, a new and independent prognostic marker in breast cancer. Cancer Res. 50:6827-6829, 1990.

36. Duggan C., Kennedy S., Kramer M.D., Barnes C., Elvin P., McDermott E., O'Higgins N., Duffy M.J. Plasminogen activator inhibitor type 2 in breast cancer. Br. J. Cancer; 76(5):622-7, 1997.

37. Eaton D.L., Scott R.W., Baker J.B. Purification of human fibroblast urokinase proenzime and analysis of its regulation by proteases and protease nexin. J. Biol. Chem. 259:6241-6247, 1984.

38. Erickson L.A., Hekman C.M., Lokutoff D.J. The primary plasminogen activator inhibitors in endothelial cells, platelets, serum and plasma are immunologically related. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82:8710-8714, 1985.

39. Eriksen E.F., Colvard D.S., Berg N.G. Evidence of estrogen receptors in normal human osteoblast-like cells. Science 241:84-86; 1988.

40. Fidler I.J., Hart I.R. Biologic diversity in metastatic neoplasms: origins and implications. Science 217 :998, 1982.

41. Foekens J.A., Buesseker F., Peters H. A., Krainick U., van Putten W.L.J., Look M.P., Klijn J.G.M. Plasminogen activator inhibitor-2: prognostic relevance in 1012 patients with primary breast cancer. Cancer Res. 55: 1423-1427, 1995.

42. Foekens J.A., Shmitt M., van Putten W.L.J., Peters H.A., Janicke F., Jan M. G., Klijn. Plasminogen activator inhibitor-1 and breast cancer metastasis. J. Clin. Oncol., 12:1648-1658, 1994.

43. Foekens J.A., Shmitt M., Wim L.J. Van Putten, Peters H.A. Bontenbal M., Janicke F., Klijn J.G.M. Prognostic value of urokinase-type plasminogen activator in 671 primary breast cancer patiens. Cancer Res. 52: 6101-6105, 1992.

44. Fource D., Bouchet С., Hecene K., at al. Relationship between cathepsin D, urokinase, and plasminogen activator inhibitors in malignant vs beenign breast tumors. Br. J. Cancer 64: 926-32, 1991.

45. Fukumoto S., Allan E.H., Martin T.J. Regulation of plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) expression by 1,25-dihydroxyvitamin D-3 in normal and malignant rat osteoblasts. Biochim. Biophys. Acta Nov 11;1201(2):223-8, 1994.

46. Fukumoto S., Allan E.H., Yee J.A., Gelehrter T.D., Martin T.J. Plasminogen activator regulation in osteoblasts: parathyroid hormone inhibition of type-1 plasminogen activator inhibitor and its mRNA. J. Cell Physiol. Aug;152(2):346-55, 1992.

47. Goustin A.F., Leof E.B., Shiplay G.D., Moses H.L. Growth facors and cancer. Cancer Res.-46:1015-1046; 1986.

48. Graham C.H., Forsdike J., Fitzgerald C.J., Macdonald-Goodfellow S. Hypoxia-mediated stimulation of carcinoma cell invasiveness via upregulation of urokinase receptor expression. Int. J. Cancer Feb 9;80(4):617-23, 1999.

49. Hackel C., Czerniak В., Ayala A.G., Radig K., Roessner A. Expression of plasminogen activators and plasminogen activator inhibitor 1 in dedifferentiated chondrosarcoma. Cancer Jan l;79(l):53-8, 1997.

50. Haeckel C., Krueger S., Roessner A. Antisense Inhibition von Urokinase in einer humanen Osteosarkomzellinie. Verh-Dtsch-Ges-Pathol. 82: 170-7; 1998

51. Hewin D.F., Savage P.B., Alderson D., Vipond M.N. Plasminogen activators in oesophageal carcinoma. Br. J. Surg. Aug;83(8): 1152-5, 1996.

52. Hill S.A, Wilson S., Chambers A.F. Clomal heterogeniety experimental metastatic ability, and p21 expression in H-ras transfored NIH-3T3 cells. J. Natl. Cancer Inst. 80:484, 1988.

53. Hiraoka N., Allen E., Apel J., Margaret R. Gyetko, and Stephen J. Weiss. Matrix Metalloproteinases Regulate Neovascularization by Acting as Pericellular Fibrinolysins. Cell 95: 365-377, 1998.

54. Holland J.F., Bast R.C., Morton D.L. et al. Cancer Medicine 1998.

55. Hoyer-Hansen G., M.Ploug, N.Behrendt, E.Ronne, and K.Dano. Cell-surface acceleration of Urokinase-catalyzed receptor cleavage. Eur. J. Biochem 243: 21-26, 1997.

56. Huvos A.G., Heiweil M., Bretsky S.S. The pathology of malignant fibrous histiocytoma of bone: a study of 130 patient. Am. J. Surg. Pathol., 9:853-71; 1985.

57. Hynes R.O. Integrins. A family of cell surface receptors.Cell 48:509, 1987.

58. Janicke F., Shmitt M., Hafter R., Hollreider A., Babic R., Ulm K., Gossner W., and Graeff H. Urokinase-type plasminogen activator (u-РА) antigen is a predictor of early relaps in breast cancer. Fibrinolysis 5:69-78, 1990.

59. Janicke F., Shmitt M., Pache L., et al. Urokinase (u-PA) and its type 1 inhibitor are strong and independent prognostic factors in node negative breast cancer. Breast Cancer Res. Treat 24, 195-208, 1993.

60. Kasai S., Arimura H., Nishida M., and Suyama T. Proteolytic cleavage of single chain pro-Urokinase induces conformational chage which follows activation of the zimogen and reduction of it's high affinity for fibrin. J.Biol.Chem. 260:1230712381,1985.

61. Kim, W.Yu, K.Kovalski, and L.Ossowski. Requirement for Specific Proteases in Cancer Cell Intravasation as Revealed by a Novel Semiquantitative PCR-Based Assay. Cell 94: 353-362, 1998.

62. Koretz K, Moller P., Schwartz-Albiez R. Plasminogen activators and plasminogen activator inhibitors in human colorectal carcinoma tissues are not expressed by the tumour cells. Eur. J. Cancer 29A(8):1184-9, 1993.

63. Koscielny S., Tubiana M., Valleron A-J. A simulation model of the natural history of human breast cancer. Br. J. Cancer 52: 515,1985.

64. Lambrecht V., Boilly В., Le Bourhis X. Regulation of cell proliferation and urokinase plasminogen activation of human breast epithelial cells by carrageenans. Int. J. Oncol Jun; 12(6): 1397-401, 1998.

65. Lijnen H.R., F.De.Cock, and D.Collen. Characterization of the binding of Urokinase-type Plasminogen activator (u-PA) to Plasminogen, to Plasminogen-activator inhibitor-1 and to the u-PA receptor. Eur. J.Biochem 224: 567-574, 1994.

66. Liotta L.A. Tumor invasion and metastases role of extracellular matrix. Cancer Res. 46:1, 1986.

67. Liotta L.A. Tumor invasion and metastasis role of the basement membrane. Am. J. of Pathol. 117:339,1984.

68. Liotta L.A., Steeg P.S., Stetler-Stevenson W.G. Cancer metastasis and angiogenesis; an inbalance of positive and negative regulation. Cell 64; 327-336: 1991.

69. Liotta L.A., Tryggvason K., Garbisa S., Hart I., Foltz C.M., Shfie S. Metastatic potential correlates with enzymatic degradation of basement membrane collagen. Nature 284: 67, 1990.

70. Malinoff H.L., Wicha M.S. Isolation of the surface receptor protein for laminin from murine fibrosarcoma cells. J. Cell Biol. 96: 1475, 1983.

71. McCarthy J.B., Skubitz A.P.N., Palm S.L. , Furcht L.T. Metastasis inhibition of different tumor cells by purified laminin fragments and a heparin binding fragments of fibronectin. J. Natl. Cancer Inst. 80: 108, 1988.

72. McDonnel S., Matrisian L.M. Stromelysin in tumor progression and metastases. Cancer Metastasis Rev. 9:305-19, 1990.

73. Mignatti P., Robins E., Rifkin D. Tumor invasion through the human amniotic membrane: requirement for a proteinase cascade. Cell 47: 487, 1986.

74. Mohan S., Baylink D.J. Bone growth factors. Clin. Ortoped. and Related Res. 263:30-43; 1991.

75. Monteagudo C., Merino M., San Juan, Liotta L.A., Stetler-Stivenson W. Immunohistologic distribution of type IV collagenase in normal, binign and malignant breast tissue. Am. J. Pathol. 136: 585, 1990.

76. Montescano R., Pepper M.S., Mohlesteinlein U., et al. Increased proteolitic activity is responsible for the aberrant morphogenetic behavior of endothelial cells expressing the middle T-oncogene. Cell 62: 435-445, 1990.

77. Muller D., Wolf C., Abecassis J., et al. Increased stromelysine 3 gene expression is associated with increased local invasiveness in head and necks quamous cell carcinomas. Cancer Res. 53:165-9, 1993.

78. Nakajima M., Welch D., Belloni P.M., Nicolson G.L. Degradation of basement membrane type IV collagen and lung subendotelial matrix by rat mammary adenocarcinoma cell clones of differing metastatic potentials. Cancer Res. 47: 4869, 1987.

79. Nielsen B.S., Timshel S., et al. 92 kDa type IV collagenase (MMP-9) is located in neutrophiles and macrophages but not in cancer cells in colon carcinomas. Int. J. Cancer, 65:57-62, 1996.

80. Pollanen J., Sakseba O., Salonen E.M., et al. Distinct localisation or urokinase-type plasminogen activator and its type 1 inhibitor under cultured human fibroblasts and sarcoma cells. J. Cell. Biol. 104:1085-1097; 1987.

81. Praus M., Wauterickx К., Collen D., Gerard R.D. Reduction of tumor cell migration and metastasis by adenoviral gene transfer of plasminogen activator inhibitors. Gene Ther. Fb;6(2):227-36, 1999.

82. Руке С., Kristensen P., Ralfkiaer E., Erikse J., Dano K. The plasminogen activation system in human colon cancer: messenger RNA for the inhibitor PAI-1 is located in endothelial cells in the tumor stroma. Cancer Res. 51:4067-4071, 1991.

83. Rajput В., Degen S.F., Reich I., E.K. Waller, J. Axelrod, R.L. Eppy, T.B. Shows. Chromosomal localisation of human tissue plasminogen activator and urokinase genes. Science 230:672-674,1985.

84. Rao C.N., Margulies I.M.K., Tralka S., Terranova V.P., Madri J.A., Liotta L.A. Isolation of a subunit of laminin and its role in molecular structure and tumor cell attachment. J. Biol. Chem. 257: 9740, 1982.

85. Ray P., Bhatti R., Gadarowski J., Nancy Bell, Shahida Nasruddin. Inhibitory Effect of Amiloride on the Urokinase Plasminogen Activators in Prostatic Cancer. Tumor Biology 19:1:60-64, 1998.

86. Recklies A.D., Poole A.R., Mort J.S., A cystein proteinase secreted from human breast tumor is immunologically related to catepsin B. Biochem. J. 207: 633, 1982.

87. Reilly D., Christensen L., Duch M., et al. Type 1 plasminogen activator inhibitors in human breast carcinomas. Int. J. Cancer 50:208-214, 1992.

88. Riccio A., Grimaldi G., Verde P., G.Sebastio, S.Boast, F.Blasi. The human urokinase gene and its promoter. Nucleic Acids. Res. 13:2759-2771, 1986.

89. Rochefort H., Capony F., Garcia M., Cavailles V., Freiss G., Chambon M., Morisset M., Vignon F. Estrogen induced lysosomal proteases secreted by breast cancer cells: a role in carcinogenesis? J. Cell Biochem. 35:17, 1987.

90. Romer J., Руке С., Lund L.R., Eriksen J., Kristensen P., Ronne E., Hoyer-Hansen G., Dano K., Brunner N. Expression of u-PA and its receptor by both neoplastic and stromal cells during xenograft invasion. Int. J. Cancer May 15;57(4):553-60, 1994.

91. Schlechte W., MuranoG., Boyd D. Examination the role of the urokinase receptor in human colon cancer mediated laminin degradation. Cancer Res. 49:6064-6069, 1989.

92. Shuman M.A., Cohen R.L. Int. J. Cancer Feb 8;60(4):501-6, 1995.

93. Siren V., Myohanen H., Antti V, Ilkka Immonen. Transforming Growth Factor Beta Induces Urokinase Receptor Expression in Cultured Retinal Pigment Epithelial Cells. Ophthalmic Research 31:3:184-191, 1999.

94. Sloane B.F., Rozhin J, Johnson K.Taylor H., Crissman J.D., Honn K.V. Cathepsin B: assosiation with plasma membrane in metastatic tumors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 2483, 1986.

95. Sonohara S., Mira-y-Lopez R., Brentani M.M. Laminin and estradiol regulation of the plasminogen-activator system in MCF-7 breast-carcinoma cells. Int. J. Cancer Mar. 30;76(l):77-85, 1998.

96. Spyratos F., Broillet J.P. Cathepsin D is an independent factor for the matastases in breast cancer. Lancet ii, 8672, 1115-1121, 1989.

97. Stephens R.W., Nielsen H.J., Christensen I.J., Thorlacius-Ussing O., Sorensen S., Dano K., Brunner N. Plasma urokinase receptor levels in patients with colorectal cancer: relationship to prognosis. J. Natl. Cancer Inst. May 19;91(10):869-74, 1999.

98. Stoppelli M.P., Tacchetti C., Cubellis M.V.,A. Corti, V. J. Hearing, G. Cassani, E. Apella, and F. Blasi. Autocrine saturation of prourokinase receptors on human A431 cells. Cell 45:675-684, 1986.

99. Takeichi M. A molecular family inportant in selective cell-cell adhesion. Ann. Rev. Biochem. 59: 237, 1990.

100. Takeuchi Y., Nakao A., Harada A., Nonami Т., Fukatsu Т., Takagi H. Expression of plasminogen activators and their inhibitors in human pancreatic carcinoma: immunohistochemical study. Am. J. Gastroenterol Nov;88(ll): 1928-33, 1993.

101. Tanaka Y., Ijiri R., Kato K., Nishi Т., Nishihira H., Aida N. Intrapumonary lymph nodes in children versus lung metastases. Med. Pediatr. Oncol., Dec., 33(6): 580-2, 1999.

102. Tandon A.K, Clark G.M., Chamness G.C., Chirgwin L, McGuire W.L. Cathepsin D and prognosis in breast cancer. N. Engl. J. Med. 322: 297, 1990.

103. Terranova V.P., Liotta L.A., Russo R.G., Martin G.R. Role of laminin in the attachment and metastasis of murine tumor cells. Cancer Res. 42; 2265, 1982.

104. Thorgerisson U.P., Liotta L.A., Kalabic Т., Marguiles I.MK. Thomas K., Rias-Candelore M. Effect of natural protease inhibitiors and a chemoattractant on tumor cell invasion in vitro. J. Natl. Cancer Inst. 69: 1049, 1982.

105. Thorpe S., Rochefort H., Garcia M., et al. Association between high concentration of Mr 52,000 cathepsin and poor prognosis in primary human breast cancer. Cancer Res. 49:6008-14, 1989.

106. Tran-Thang С., Kruithof E., Lahm H., Schuster W.A., Tada M., Sordat B. Modulation of the plasminogen activation system by inflammatory cytokines in human colon carcinoma cells. Br. J. Cancer Sep;74(6):846-52, 1996.

107. Wang J., A.Mazar, N.Quan, A.Schneider, and J.Henkin. Plasminogen activation by pro-Urokinase in complex with its receptor dependence on a tripeptide Spectrozyme plasmin). Eur. J. Biochem. 247: 256-261, 1997.

108. Wilhelm S.M., Collier I.E., Marmer B.L., et al. SV-40 trasformed human lung fibroblasts secrete a 92-kd type IV collagenase which id identical to that secreted by normal human macrophages. J. Biol. Chem. 264:17213, 1989.

109. Wilman В., Chmielevska J., Ramby M., Inactivation of tissue plasminogen activator in plasma. Demostration of a complex with a new rapid inhibitor. J. Cell. Biochem. 259:3644-3647, 1984.

110. Wim L.J. Van Putten, Jan G.M. Klijn et al. Multiparameter analisis of prognostic factors in breast cancer. Breast Cancer. Advances in Biology and therapeuticts. 1996.

111. Wolf C., Rouyer N., Lutz Y. Et al. Stromelysine 3 belongs to a subgroupe of proteinases expressed in breast carcinoma fibroblasic cells and possibly implicated in tumor progression. Proc. Natl. Acad. Sci., 90: 1843-1847, 1993107

112. Yasuda Т., Sakata Y., Kitamura K., Morita M., Ishida T. Localization of plasminogen activators and their inhibitor in squamous cell carcinomas of the head and neck. Head Neck Oct;19(7):611-6,1997.