Активация мембран-связанных транскрипционных факторов SPT23 и MGA2 убиквитин-лигазами Nedd4 и Rsp5 в Saccharomyces cerevisiae тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Щербик, Наталья Валерьевна

• Щербик, Наталья Валерьевна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Щербик, Наталья Валерьевна

Список принятых сокращений.

Введение.

Литературный обзор.

Материалы и методы.

Результаты и их обсуждение.

Выводы.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Щербик, Наталья Валерьевна

выводы

1. Установлено, что нарушение белок-связывающей функции WW1 домена йес/-содержащей убиквитин-лигазы человека Nedd4 индуцирует токсичную активность фермента в клетках пекарских дрожжей.

2. Методом скрининга экспрессионной кДНК библиотеки Saccharomyces cerevisiae была идентифицирована кДНК жизненно важного гена olel (кодирующего десатюразу жирных кислот), ко-экспрессия которой блокирует токсичный эффект, вызванный Nedd4WWl. Показано, что наличие ненасыщенных жирных кислот в ростовой среде позволяет дрожжам, экспрессирующим Nedd4WWl, выживать.

3. Доказано, что убиквитин-лигаза Nedd4 и её дрожжевой гомолог Rsp5, несущие домены с нарушенными белок-связывающими (WW1) и каталитическими функциями, обладают доминантно-негативной активностью в регуляции экспрессии olel гена в дрожжевых клетках. Выявлено, что Nedd4 и Rsp5 с мутациями в WW1 и каталитическом доменах ферментов, ингибируют . Регулируемый Убиквитин/протеосома-зависимый Процессинг (РУП) мембран-связанной формы транскрипционного фактора гена olel — дрожжевого белка SPT23. Установлено, что это приводит к ингибированию формирования транскрипционно-активной формы SPT23 и снижению транскрипции olel гена в клетках пекарских дрожжей.

4. Показано, что первый WW домен убиквитин-лигаз Nedd4 и Rsp5 не вовлечен в связывание с молекулой субстрата — транскрипционным фактором SPT23. Определено, что WW2 и WW3 человеческой лигазы Nedd4 взаимодействуют в дрожжевых клетках, с непроцессированной, мембран-связанной формой SPT23

5. Продемонстрирована схожесть механизма РУП в клетках высших и низших эукариот на примере экспрессии дрожжевого белка SPT23 (использованного в < качестве модельного субстрата убиквитин-лигазы человека Nedd4) в клеточной линии аденокарциномы легких человека. Показана активность протеосомального комплекса в процессе РУП SPT23.

6. Определено, что в условиях отсутствия функциональной убиквитин-лигазы Rsp5 в дрожжевой клетке (при продолжительной экспрессии доминантно-негативных форм лигаз Nedd4 и Rsp5, либо при использовании генетически сконструированного штамма, несущего мутированный rsp5 ген) формируются процессированные, но транскрипционно неактивные формы факторов, регулирующих транскрипцию olel гена: белков SPT23 и MGA2. Таким образом, показано, что убиквитин-лигаза пекарских дрожжей Rsp5, не обязательна для индукции РУП белков SPT23 и MGA2.

7. Показано, что убиквитин-лигаза Rsp5 ответственна за транслокацию процессированных форм SPT23p90 и MGA2p90 от мембраны эндоплазматического ретикулума в клеточное ядро.

8. Показано, что убиквитин-лигаза Rsp5 модифицирует поли-убиквитинированием мембран-связанные формы белков SPT23pl20 и MGA2pl20, входящие в состав димеров SPT23pl20/ SPT23p90 и MGA2pl20/MGA2p90. Это маркирует молекулы белков для деградации протеосомальным комплексом 26S. i

Подобный убиквитин-зависимый протеолиз молекулы р120 нарушает стабильность димеров и приводит к транслокации активной формы р90 в ядро клетки.

9. На основе полученных данных, предложен механизм активации транскрипционных факторов SPT23 и MGA2 убиквитин-л и газами Rsp5 и Nedd4. Дрожжевой фермент Rsp5, а так же его человеческий гомолог Nedd4, ответственны за маркировку поли-убиквитином мембран-связанной формы р120, входящей в состав димера р120/р90, белков SPT23 и MGA2. Подобная модификация убиквитином приводит к деградации белков 26S протеосомой. В результате, процессированная форма SPT23p90 (MGA2p90) оказывается свободной и транскрипционно активной. В работе впервые продемонстрирована регуляторная функция WW1 домена лигаз Rsp5 и Nedd4 в процессе РУП транскрипционных факторов SPT23 и MGA2.

§18. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Модель механизма Nedd4/Rsp5-petyiupyeM020 убиквитинирования. Как уже было отмечено ранее, согласно литературным данным, WW3 домен Rsp5 абсолютно необходим для RspS-зависимой регуляции процессинга SPT23, благодаря предполагаемой функции связывания субстрата [5]. Однако на сегодняшний день, в литературе ещё нет строгих свидетельств того, является ли этот структурный модуль дрожжевой убиквитин-лигазы достаточным в обеспечении регуляторной функции фермента.

Если функция карбокси-расположенных WW доменов, входящих в состав WW кластера Лес/-содержащих убиквитин-лигаз заключается в связывании белков-субстратов, то функция первого домена на сегодняшний день ещё не определена. Согласно литературным данным, именно WW1 домен не вовлечен в связывание ни одного известного субстрата /гесг-содержагцих лигаз.

В этой работе мы показали важную роль, которую играет первый WW домен WW кластера /^/-содержащих убиквитин-лигаз (дрожжевой лигазы Rsp5 и человеческой лигазы Nedd4) в функционировании этого класса ферментов в дрожжевой клетке на примере регуляции процессинга транскрипционного фактора SPT23. Результаты t демонстрируют, что аналогично WW1 домену убиквитин-лигазы человека Nedd4, WW1 домен дрожжевого фермента Rsp5, не обязателен для связывания, однако необходим для убиквитин/протеосома-зависимого процессинга мембран-связанной формы SPT23 в клетках пекарских дрожжей.

Более того, на основе продемонстрированной идентичности наблюдаемых активностей убиквитин-лигаз дрожжей и человека дикой и мутантных форм, мы предполагаем универсальность механизма регуляции убиквитин/протеосомо-зависимого процессинга мембран-связанных субстратов функцией лигаз в клетках высших и низших эукариот.

Как известно на сегодняшний день, модификация SPT23 убиквитином в дрожжевой клетке несет по крайней мере три смысловые нагрузки:

1) убиквитинирование мембран-связанной формы SPT23/pl20 модифицирует этот белок для специфического 26S протеосомо-зависимого процессинга с формированием р90 (РУП) [5];

2) убиквитинирование одной из молекул в составе димера р120/р90 дает сигнал молекулярному шаперону (CDC48ufdi/NPL4) к связыванию и дестабилизации комплекса р120/р90, что приводит к транслокации р90 в клеточное ядро [167];

3) убиквитинирование отработавшего в ядре р90, дает сигнал протеосомальному комплексу к инициации деградации этого белка [22, 185].

Несмотря на то, что /г<?с/-содержащей убиквитин-лигазе Rsp5 отводится важная роль в регуляции экспрессии olel гена, непосредственное участие этого фермента в регуляции механизма РУП, ответственного за формирование транскрипционно-активного(ых) фактора(ов) транскрипции olel, ещё строго не доказано. Если убиквитин-лигаза Rsp5 - единственный фермент, контролирующий экспрессию olel гена, логично предположить существование различных регуляционных механизмов, контролирующих ту или иную активность Rsp5 по отношению к субстрату SPT23. Альтернативно можно предположить существование убиквитин-лигазы. принадлежащей к другому семейству ферментов ЕЗ, контролирующей один из этапов описанного механизма.

На основе полученных данных, мы постулируем, что WW1 домен убиквитин-лигазы Rsp5 (либо её человеческого гомолога Nedd4) выполняет роль регуляционного модуля. Мы предполагаем, что в клетках пекарских дрожжей WW1 домен лигаз Rsp5 и/или Nedd4 способен взаимодействовать с молекулой белка ко-фактора, необходимого для специфического поли-убиквитинирования белка-субстрата SPT23, дающего сигнат 26S протеосоме к осуществлению белкового процессинга (рисунок 21). Более того, мы предполагаем, что WW1 домен hect-содержащих убиквитин лигаз обладает аналогичной регуляторной функцией и в клетках высших эукариот, что, соответственно, подразумевает существование белка ко-фактора млекапитающих, высоко-гомологичного дрожжевому.

Белок ко-фактор может способствовать прикреплению инициирующей молекулы убиквитина на специфический сайт в последовательности SPT23; либо способен контролировать сборку мульти-убиквитиновой цепи специфичным для сигнала к процессингу образом; либо способствует изменению конформации SPT23 так, что протеосомный комплекс гидролизует пептидную связь в составе SPT23 в четко определенном месте, оставляя транскрипционно-активный участок фактора нетронутым.

Рисунок 21.

С2

WW домены 1 2 3 4 п п 0 11 субстрат SPT23 иь,

Рисунок 21. Модель Nedd4/Rsp5-perynHpyeMoro убиквитинирования мембран-связанной формы транскрипционного фактора SPT23

С2 домен - светло-зеленый квадрат; WW домены - желтые квадраты; hect домен - серый прямоугольник, содержит участок связавания (розовый прямоугольник) убиквитин-конъюгирующего фермента Е2 (зеленый круг), несущего активированную молекулу убиквитина (Ub). Каталитически активный цистеин Cys (черная полоска) образует ковалентную связь с молекулой убиквитина и переносит её с Е2 на белок-субстрат.

Карбокси-локализованные WW домены (WW2 и WW3 домены убиквитин-лигазы Nedd4 и WW3 домен убиквитин-лигазы Rsp5) взаимодействуют с белком-субстратом - мембран-связанной формы транскрипционного фактора SPT23 (зеленый прямоугольник). Первый WW домен Nedd4-подобных убиквитин-лигаз регулирует процесс переноса убиквитина на белок-субстрат при связывании молекулы белка ко-фактора (фиолетовый овал).

Дальнейшие детальные исследования картины убиквитинирования SPT23 в дрожжевых клетках при участии доминантно-негативной и дикой форм hect-содержащих убиквитин-лигаз поможет определить механизм регуляции процессинга мембран-связанных факторов транскрипции. С другой стороны, поиск и идентификация самого белка ко-фактора скринингом кДНК библиотеки Saccharomyces cerevisiae предоставит много интересной информации.

Модель, демонстрирующая роль убиквитин-лигазы RspS в процессе активации мембран-связанных транскрипционных факторов SPT23 и MGA2. Рисунок 22. р120/р120 р120/р90

CDC48UFD1/NPU

26S протеосома

-иь

Rsp5 (!)

26S протеосома

Ub ~ Ub -Ub ~ Ub -Ub -Ub '

Деградация pl20

Активация TpilHCXp Ш1Ш10ШК) й Актiianocmu p90

ЯДРО

ЭР

При изучении механизма активации транскрипции жизненно важного гена olel генетически-комплементарными транскрипционными факторами дрожжей SPT23 и MGA2, была продемонстрирована функциональная роль убиквитин-лигазы Rsp5 в регуляции этого процесса. Впервые показано, что Rsp5 не обязательна для инициации процессинга SPT23 и MGA2, что предполагает существование альтернативного фермента, маркирующего SPT23 и MGA2 убиквитином для частичной протеосомальной деградации. Однако, полученные данные демонстрируют, что убиквитин-лигаза Rsp5 абсолютно необходима для активации транскрипционной функции SPT23 и MGA2. Было показано, что Rsp5 инициирует поли-убиквитинирование мембран-связанных SPT23pl20 (MGA2pl20), входящих в состав ЭР-локализованного димера SPT23pl20/p90 (MGA2pl20/p90). Такая модификация дает сигнал сегрегазе Cdc48ufdl/NpI4 к связыванию модифицированной убиквитином молукулы SPT23pl20 (MGA2pl20), диссоциации её из димера и презентации протеосоме для деградации. В результате, процессированная форма SPT23p90 (MGA2p90) оказывается свободной, транслоцируется в ядро клетки и активирует транскрипцию olel гена (рис.22).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Щербик, Наталья Валерьевна, 2003 год

1. Craig K., Tyers M. The F-box: a new motif for ubiquitin dependent proteolysis in cell cycle regulation and signal transduction. // Prog.Biophys.Mol.Biol. 1999. V.72. № 3. P.299-328.

2. Wilkinson K. Ubiquitin-dependent signaling: the role of ubiquitination in the response of cells to their enviroment. // J. Nutr. 1999. V.129. №11. P.1933-1936.

3. Hoppe Т., Matuschewski K., Rape M., Schlenker S., Ulrich H., Jentsch S. Activation of a membrane-bound transcription factor by regulated ubiquitin/proteasome-dependent processing. // Cell. 2000. V.102. № 5. P.577-586.

4. Karin M., Ben-Neriah Y. Phosphorilation meets ubiquitination: the control of NFkB activity. // Annu.Rev.Immunol. 2000. V.18. P.621-663.i

5. Finley D. Signal transduction. An alternative to destruction. //Nature. 2001. V.412. № 6844. P.283-286.

6. Magnani M., Crinelli R., Bianchi M., Antonelli A. The ubiquitin-dependent ptoteolytic system and other potential targets for the modulation of nuclear factor-kB (NF-kB). // Curr. Drug Targ.1.2000. V.l. № 4. P.387-399.

7. Ghosh S., May M., Kopp E. NF-kappa В and Rel proteins: evolutionarily conserved mediators of immune responses. // Annu. Rev. Immunol. 1998. V.l6. P.225-260.

8. Rock K., Goldberg A. Degradation of cell proteins and the generation of MHC class I-presented peptides. // Annu. Rev. Immunol. 1999. V.l7. P.739-779.

9. Waterman H., Levkowitz G., Alroy I., Yarden Y. The RING finger of c-Cbl mediates desensitization of the epidermal growth factor receptor. // J.Biol.Chem. 1999. V.274. № 32. P.22151-22154.

10. Joazeiro C., Wing S., Huang H., Leverson J., Hunter Т., Liu Y. The tyrosine kinase negative " regulator c-Cbl as a RING-type, E2-dependent ubiquitin-protein ligase. // Science. 1999. V.286. № 5438. P.309-312.

11. Lam Y., Pickart C., Alban A., Landon M., Jamieson C., Ramage R., Mayer R., Layfield R. Inhibition if the ubiquitin-proteasome system in Alzheimer's disease. // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 2000. V.97. № 18. P.9902-9906.

12. Kishino Т., Lalande M., Wagstaff J. UBE3A/E6-AP mutations cause Angelman syndrome. // Nat. Genet. 1997. V.15. № 1. P.70-73.

13. Matsuura Т., Sutcliffe J., Fang P., Galjaard R., Jiang Y., Benton C., Rommens J., Beaudet A. De novo truncating mutations in E6-AP ubiquitin-protein ligase gene (UBE3A) in Angelman syndrome. //NatGenet 1997. V.15. № 1. P.74-77.

14. Hicke L. Ubiquitin-dependent internalization and down-regulation of plasma membrane proteins. //Trends Cell Biol. 1999. V.9. № 14. P. 107-112.

15. Pickart C. Targeting of substrates to the 26S proteasome. // FASEB J. 1997. V.l 1. № 13. P.1055-1066.

16. Hochstrasser M. Ubiquitin-dependent protein degradation. // Annu.Rev.Genet. 1996. V.30. P.405-439.

17. Hershko A., Ciechanover A. The ubiquitin system. // Annu. Rev. Biochem. 1998. V.67. P.425-479.

18. Pickart C. Mechanisms underlying ubiquitination. // Annu. Rev. Biochem. 2001. V.70. № 70. ' P.503-533.

19. Pickart C. Ubiquitin enters the new millennium. // Mollecular Cell. 2001. V.8. № 3. P.499-504.

20. Laney J., Hochstrasser M. Substrate targeting in the ubiquitin system. // Cell. 1999. V.97. № 4. P .427-430.

21. Pickart C. Ubiquitin in chains. // Trends Biochem. Sci. 2000. V.25. № 11. P.544-548.

22. Spence J., Gali R., Dittmar G., Sherman F., Karin M., Finley D. Cell cycle-regulatedmodification of the ribosome by a variant multiubiquitin chain. // Cell. 2000. V.l 02. № I. P.67-76.

23. Hofmann R., Pickart C. Noncanonical MMS2-encoded ubiquitin-conjugating enzyme functions in assembly of novel polyubiquitin chains for DNA repair. // Cell. 1999. V.96. № 5. P.645-653.

24. Hawley-Nelson P., Vousden K., Hubbert N., Lowy D., Schiller J. HPV E6 and E7 proteins cooperate to immortalize human foreskin keratinocytes. // EMBO J. 1989. V.8. № 12. P.3905-3910.

25. Munger K., Phelps W., Bubb V., Howley P., Schlegel R. The E6 and E7 genes of the human papillomavirus type 16 together are necessary and sufficient for transformation of primary human keratinocytes. //J.Virol. 1989. V.63. № Ю. P.4417-4421.

26. Munger K., Werness В., Dyson N., Phelps W., Harlow E., Howley P. Complex formation of human papillomavirus E7 proteins with the retinoblastoma tumor suppressor gene product. // EMBO J. 1989. V.8. № 13. P.4099-4105.

27. Schefifner M., Werness В., Huibregtse J., Levine A., Howley P. The E6 oncoprotein encoded by human papillomavirus types 16 and 18 promotes the degradation of p53. // Cell. 1990. V.63. № 6. P.l 129-1136.

28. Scheffner M.? Munger K., Byrne J., Howley P. The state of the p53 and retinoblastoma genes in human cervical carcinoma cell lines. // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1991. V.88. № 13. P.5523-5527.

29. Crook Т., Wrede D., Vousden K. p53 point mutation in HPV negative human cervical carcinoma cell lines. // Oncogene. 1991. V.6. № 5. P.873-875.

30. Levine A., Momand J., Finlay C. The p53 tomour suppressor gene. //Nature. 1991. V.351. № 6326. P.453-456.

31. Huibregtse J., Scheffner M., Howley P. A cellular protein mediates association of p53 with the E 6 oncoprotein of human papillomavirus types 16 or 18. // EMBO J. 1991. V.10. № 13. P.4129-4135.

32. Scheffner M., Huibregtse J., Vierstra R., Howley P. The HPV-16 E6 and E6-AP complexfunctions as a ubiquitin-protein ligase in the ubiquitination of p53. // Cell. 1993. V.75. № 3. P.495-505.

33. Huibregtse J., Scheffner M., Howley P. Cloning and expression of the cDNA for E6-AP, a protein that mediates the interaction of the human papillomavirus E6 oncoprotein with p53. // Mol. Cell Biol. 1993. У.13. № 2. P.775-784.

34. Huibregtse J., Scheffner M., Howley P. Localization of the E6-AP regions that direct human papillomavirus E6 binding, association with p53, and ubiquitination of associated proteins. // Mol. Cell Biol. 1993. V.13. № 8. P.4918-4927.

35. Talis A., Huibregtse J., Howley P. The role of E6AP in the regulation of p53 protein levels in

36. Human Papillomavirus (HPV)-positive and HPV-negative cells. // J. Biol. Chem. 1998. V.273. № 11. P.6439-6445.

37. Nawaz Z., Lonard D., Smith C., Lev-Lehman E., Tsai S., Tsai M., O'Malley B. The Angelman syndrome-associated protein, E6-AP, is a coactivator for the nuclear hormone receptor superfamily. // Mol. Cell Biol. 1999. V.19. № 2. P. 1182-1189.

38. Huang L., Kinnucan E., Wang G., Beaudenon S., Howley P., Huibregtse J., Pavletich N. Structure if an E6AP-UbcH7 complex: insights into ubiquitination by the E2-E3 enzyme cascade. // Science. 1999. V.286. № 5443. P. 1321-1326.

39. Oda H., Kumar S., Howley P. Regulation of the Src family tyrosine kinase Blk through E6AP-mediated ubiquitination. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. V.96. № 17. P.9557-9562.

40. Harris K., Shoji I., Cooper E., Kumar S., Oda H., Howley P. Ubiquitin-mediated degradation of4active Src tyrosine kinase. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. V.96. № 24. P.13738-13743.

41. Kumar S., Talis A., Howley P. Identification of HHR23A as a substrate for E6-associatedprotein-mediated ubiquitination. // J.Biol.Chem. 1999. V.274. № 26. P.18785-18792.

42. Kuhne C., Banks L. E3-ubiquitin ligase/E6-AP links multicopy maintenance protein 7 to the ubiquitination pathway by a novel motif, the L2G box. //J.Biol.Chem. 1998. V.273. № 51. P.34302-34309.

43. Scheffiier M., Nuber U., Huibregtse J. Protein ubiquitination involving an E1-E2-E3 enzyme ubiquitin thioester cascade.// Nature. 1995. V.373. № 6509. P.81-83.

44. Wang G., Yang J., Huibregtse J. Functional domains of Rsp5 ubiquitin-protein Iigase. // Mol. Cell Biol. 1999. V.19. № 1. P.342-352.

45. Huibregtse J., Scheffner M., Beaudenon S., Howley P. A family of proteins structurally and functionally related to the ubiquitin-protein ligase. II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. V.92. № 7. P.2563-2567.

46. Nuber U., Schwarz S., Kaiser P., Schneider R., Scheffner M. Cloning of human ubiquitin-conjugating enzyme UbcH6 and UbcH7 (E2-F1) and characterization of their interaction with E6-AP and Rsp5. // J. Biol. Chem. 1996. Y.271. № 5. P.2795-2800.

47. Kumar S., Kao W., Howley P. Physical interaction between specific E2 and Hect E3 enzymes determines functional cooperativity. // J. Biol. Chem. 1997. V.272. №21. P.13548-1554.

48. Rape M., Jentsch S. Taking a bite: proteasomal protein processing. // Nature Cell. Biol. 2002. V.4. № 5. P.E113-EI16.

49. Kumar S., Tomooka Y., Noda M. Identification of a set of genes with developmentally down- , regulated expression in mouse brain. // Biochem.Biophys.Res.Commun. 1992. V.185. № 3. P. 11551161.

50. Kumar S., Harvey K., Kinoshita M., Copeland N. Noda M., Jenkins N. cDNA cloning, expression analysis, and mapping of the mouse Nedd4 gene. // Genomics. 1997. V.40. № 3. P.435-443.

51. Staub O., Dho S., Henry P., Correa J., Ishikawa T. WW domains of Nedd4 bind to the proline-rich PY motifs in the epithelial Na+ channel deleted in Liddle's syndrome. // EMBO J. 1996. V.15. № 10. P.2371-2380.

52. Harvey K., Kumar S. Nedd4-like proteins: an emerging family of ubiquitin-protein ligases implicated in diverse cellular functions. // Trends Cell Biol. 1999. V.9. № 5. P. 166-169.

53. Rotin D., Staub O., Haguenauer-Tsapis R. Ubiquitination and endocvtosis of plasma membrane proteins: Role of Nedd4/Rsp5 family of ubiquitin-protein ligases. // J. Membr. Biol. 2000. V.176. № 1. P. 1-17.

54. Artavanis-Tsakonas S., Rand M., Lake R. Notch signaling: cell fate control and signal integration in development. // Science. 1999. V.284. № 5415. P.770-776.

55. Qiu L., Joazeiro C., Fang N., Wang H-Y., Elly C., Altaian Y„ Fang D., Hunter Т., Liu Y-C. Recognition and ubiquitination of Notch by Itch, a Hect-type E3 ubiquitin-ligase. // J.Biol.Chem. 2000. V.275. № 46. P.35734-35737.

56. Zhu H., Kavsak P., Abdollah S., Wrana J., Thomsen G. A SMAD ubiquitin ligase targets the BMP pathway and affects embryonic pattern formation. //Nature. 1999. V.400. № 6745. P.687-693.

57. Kavsak P., Rasmussen R., Causing C., Bonni S., Zhu H., Thomsen G., Wrana J. Smad7 binds to Smurf2 to form an E3 ubiquitin ligase that targets the TGFp receptor for degradation. // MoI.Cell. 2000. V.6. № 6. P.1365-1375.

58. Ikeda M., Ikeda A., Longan L., Longnecker R. The Epstein-Barr virus membrane protein 2A PY motif recruits WW domain-containing ubiquitin-protein ligases. // Virology. V.268. № I. P. 178-191.

59. Nishizuka Y. The molecular heterogeneity of protein kinase С and its implication for cellular regulation. //Nature. 1988. V.334. № 6184. P.661-665.

60. Clark J., Lin L., Kriz R., Ramesha C., Sultzman L., Lin A., MilonaN., Knopf J. A novel arachidonic acid-selective cytosolic PLA2 contains a Ca2+-dependent translocation domain with homology to PKC and GAP.//Cell. 1991. V.65.№ 6. P. 1043-1051.

61. Trahey M., Wong G., Halenbeck R., Rubinfeld В., Martin G., Ladner M., Long C., Crosier W., Watt K., Koths K., McCormick F. Molecular cloning of two types of GAP complementary DNAm from human placenta. // Science. 1988. V.242. № 4886. P. 1697-1700.

62. Rhee S., Suh P., Ryu S., Lee S. Studies of inositol phospholipid-specific phospholipase C. // Science. 1989. V.244. № 4904. P.546-550.

63. Sutton R., Davletov В., Berghuis A., Sudhof Т., Sprang S. Structure of the first C2 domain of synaptotagmin I: a novel Ca27phosphoIipid-binding fold. // Cell. 1995. V.80. № 6. P.929-938.

64. Essen L., Perisic O., Cheung R., Katan M., Williams R. Crystal structure of a mammalian phosphoinositide-specific phospholipase С delta. // Nature. 1996. V.380. № 6575. P.595-602.

65. Grobler J., Essen L., Williams R., Hurley J. C2 domain conformational changes in phospholipase C-delta 1. // Nat Struct. Biol. 1996. V.3. № 9. P.788-795.

66. Perisic O., Fong S., Lynch D., Bycroft M., Williams R. Crystal structure of a calciumphospholipid binding domain from cytosolic phospholipase A2. // J.Biol.Chem. 1998. V.273. № 3. P.1596-1604.

67. Essen L., Perisic O., Lynch D., Katan M., Williams R. A ternary metal binding site in the C2 domain of phosphoinositide-specific phospholipase C-delta 1. // Biochemistry. 1997. V.36. № 10. P.2753-2762.

68. Ubach J., Zhang X., Shao X., Sudhof Т., Rizo J. Ca2+ binding to synaptotagmin: how many Ca2+ ions bind to the tip of a C2-domain? // EMBO J. 1998. V.17. № 14. P.3921-3930.

69. Rizo J., Siidhof T. C2-domain, structure and function of a universal Ca2+-binding domain. // J.Biol.Chem. 1998. V.273. № 26. P.15879-15882.

70. Plant P., Lafont F., Lecat S., Verkade P., Simons K., Rotin D. Apical membrane targeting of Nedd4 is mediated by an association of its C2 domain with annexin XIHb. // J. Cell Biol. 2000. V.149. № 7. P.1473-1483.

71. Plant P., Yeger H., Staub O., Howard P., Rotin D. The C2 domain of the ubiquitin protein ligase Nedd4 mediates Ca2+-dependent plasma membrane localization. // J. Biol. Chem. 1997. V.272. № 51. P.32329-32336.

72. Simons K., Ikonen E. Functional rafts in cell membranes. // Nature. 1997. V.387. № 6633. P.569-572.

73. Brown D., London E. Functions of lipid rafts in biological membranes. // Annu.Rev.Cell Dev. Biol. 1998. V.14. P.l 11-136.

74. Snyder P., Olson D., McDonald F., Bucher D. Multiple WW domains, but not the C2 domain, are required for inhibition of the epithelial Na+ channel by human Nedd4. // J.Biol.Chem. 2001. V.276. № 30. P.28321-28326.

75. Harvey K., Harvey N., Michael J., Parasivam G., Waterhouse N., Alnemri E., Watter D., Kumar

76. S. Caspase-mediated cleavage of the ubiquitin-ligase Nedd4 during apoptosis. // J. Biol. Chem.1998. V.273. № 22. P.13524-13530.

77. Morrione A., Plant P., Valentinis В., Staub O., Kumar S., Rotin D., Baserga R. mGrblO interacts withNedd4. //J. Biol. Chem. 1999. V.274. № 34. P.24094-24099.

78. Peruzzi F., Prisco M., Morrione A., Valentinis В., Bascrga R. Anti-apoptotic signaling of the insulin-like growth factor-I receptor through mitochondrial translocation of c-Raf and Nedd4. // J.Biol.Chem. 2001. V.276. № 28. P.25990-25996.

79. Bork P., Subol M. The WW domain: a signalling site in distrophin? // Trends Biochem. Sci. 1994. V.l9. № 12. P.531-533.

80. Hofmann K., Bucher P. The rsp5-domain is shared by proteins of diverse functions. // FEBS Lett. 1995. V.358. № 2. P.153-157.

81. Andre В., Springael J. WWP, a new amino acid motif present in single or multiple copies in various proteins including dystrophin and the SH3-binding Yes-associated protein YAP65. // Biochem.Biophys.Res.Commun. 1994. V.205. № 2. P.1201-1205.

82. Macias M., Hyvonen M., Baraldi E., Schultz J., Subol M., Saraste M., Oschkinat H. Structure of the WW domain of a kinase-associated protein complexed with a proline-rich peptide. // Nature. 1996. V.382. № 6592. P.646-649.

83. Kanelis V., Farrow N., Kay L., Rotin D., Forman-Kay J. NMR studies of tandem WW domains of Nedd4 in coplex with a PY motif-containing region of the epithelial sodium channel. // Biochem. Cell Biol. 1998. V.76. № 2. P.341-350.

84. Macias M. Gervais V., Civera C., Oschkinat H. Structural analysis of WW domains and design of a WW prototype. // Nature Struct. Biol. 2000. V.7. №5. P.375-379

85. Staub O., Rotin D. WW domains. // Structure. 1996. V.4. № 5. P.495-499.

86. Ranganathan R:, Lu P., Hunter Т., Noel J. Structiral and functional analysis of the mitotic rotamase Pinl suggests substrate recognition is phosphorylation dependent. // Cell. 1997. V.89. № 6. P.875-886.

87. Cahir McFarland E. and Thomas M.// J. Biol. Chem. 1995. V. 270. P. 103-107.

88. Sudol M. Structure and function of the WW domain. // Prog. Biophvs. Molec. Biol. 1996. V.65. №'/2. P. 113-132.

89. Chen H., Sudol M. The WW domain of Yes-associated protein binds a proline-rich ligand that differs from the consensus established for Src homalogy 3-binding modules. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1995. V.92. № 17. P.7819-7823.

90. Farr Т., Coddrington-Lawson S., Snyder P., McDonald F. Human Nedd4 interacts with the human epithelial Na+ channel: WW3 but not WWI binds to Na+ channel subunits. // Biochem. J. 2000. V.345. № 3. P.503-509.

91. Kumar S., Tomooka Y., Noda M. Identification of a set of genes with developmentally down-regulated expression in the mouse brain. // Biochem.Biophys.Res.Commun. 1992. V.185. № 3. P.1155-1161.

92. Asher C., Chigaev A., Garty H. Characterization of interactions between Nedd4 and betta and gamma ENaC using surface plasmon resonance. // Biochem.Biophys.Res.Commun. 2001. V.286. № 5.P.1228-1231.

93. Kanelis V., Rotin D., Forman-Kay J. Solution structure of a Nedd4 WW domain-ENaC peptide complex. //Nat. Struct. Biol. 2001. V.8.№5. P.407-412.

94. Sudol M., Hunter T. NeW Wrinkles for an old domain. // Cell. 2000. V.103. P.l 001-1004.

95. Lu P., Zhou X., Shen M:, Lu K. Function of WW domains as phosphoserine- or phosphothreonine-binding modules. // Science. 1999. V.283. № 5406. P.l325-1328.

96. Lu P., Zhou X. Liou Y.? Noel J., Lu K. Critical role of WW domain phosphorylation in regulating phosphoserine binding activity and Pinl function. // J. Biol.Chem. 2002. V.277. № 4. P.23 81-2384.

97. Sudol M., Chen H., Bougeret C., Einbond A., Bork P. Characterization of a novel protein-binding module-the WW domain. //FEBS Lett. 1995. V.369. № 1. P.67-71.

98. ShcherbikN., Kumar S., Haines D. Substrate proteolysis is inhibited by dominant-negative Nedd4 and Rsp5 mutants harboring alterations in WW domain 1. // J. Cell Sci. 2002. V.l 15. № 5. P. 1041-1048.

99. Jolliffe С., Harvey К., Haines В., Parasivam G., Kumar S. Identification of multiple proteins expressed in murine embryos as binding partners for the WW domains of the ubiquitin-protein Iigase Nedd4. // Biochem. J. 2000. V.351. № 3. P.557-565.

100. Staub O., Gautschi I., Ishikawa Т., Breitschopf К., Ciechanover A. Regulation of stability and function of the epithelial Na+ channel (ENaC) by ubiquitination. // EMBO J. 1997. V.16. № 21. P.6325-6336.

101. Abriel H., Loffing J., Rebhun J., Pratt J., Schild L., Horisberger J., Rotin D„ Staub O. Defective regulation of the Na+ channel by Nedd4 in Liddle's syndrome. // J. Clin. Invest. 1999. V.103. № 5. P.667-673.

102. Dinudom A., Harvey K., Komwatana P., Young J., Kumar S., Cook D. Nedd4 mediates control of an epithelial Na+ channel in salivary duct cells by cytosolic Na+. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.1998. V.95. № 12. P.7169-7173.

103. Goulet C., Yolk K., Adams C., Prince L., Stokes J., Snyder P. Inhibition of the epithelial Na+ channel by interaction with PY motif deleted in Liddle's syndrome. // J.Biol. Chem. 1998. V.273. № 45. P.30012-30017.

104. Snyder P. Liddle's syndrome mutations disrupt с AMP-mediated translocation of the epithelial Na+ channel to the cell surface. // J. Clin. Invest. 2000. V.105. № 1. P 45-53.

105. Kellenberger S., Gautschi I., Rossier В., Schild L. Mutations causing Liddle syndrome reduce sodium-dependent downregulation of the epithelial sodium channel in the Xenopus oocytes expression system. // J. Clin. Invest. 1998. V.101. № 12. P.2741-2750.

106. Hubner M., Schreiber R., Boucherot A., Sanchez-Perez A., Poronnik P., Cook D., Kunzelmann K. Feedback inhibition of epithelial Na+ channels in Xenopus oocytes does not require G(0) or G(i2) proteins. // FEBS Lett. 1999. V.459. № 3. P.443-447.

107. Awayda M. Regulation of the epithelial Na+ channel by intracellular Na(+). // Am. J. Physiol.1999. V.277. № 2-1. P.C216-C224.

108. Abriel H., Horisberger J. Feedback inhibition of rat amiloride-sensitive epithelial sodiumchannels expressed in Xenopus laevis oocytes. // J. Physiol. 1999. V.516. № 1. P.31-43.

109. Murillas R., Simms K., Hatakeyama S., Weissman A., Kuehn M. Identification of developmentally expressed proteins that functionally interact with Nedd4 ubiquitin Iigase. // J. Biol. Chem. 2002. V.277. № 4. P.2897-2907.

110. Hamilton M., Tcherepanova I., Huibregtse J., McDonnell D. Nuclear import/export of hRPFl/Nedd4 regulates the ubiquitin-dependent degradation of its nuclear substrates. // J. Biol. Chem. 2001. V.276. № 28. P.26324-26331.

111. Pham N., Cheglakov I., Koch C., deHoog C., Moran M., Rotin D. The guanine nucleotide exchange factor CNrasGEF activates ras in response to cAMP and cGMP. // Curr.Biol. 2000. V.10. № 15. P.555-558.

112. Harvey K., Shearwin-Whyatt L., Fotia A., Parton R., Kumar S. N4WBP5, a potential target for ubiquitination by the Nedd4 family of proteins, is a novel Golgi-associated protein. // J.Biol.Chem. 2002. V.277. № 11. P. 9307-9317.

113. Bar-Sagi D., Hall A. Ras and Rho GTPases: family reunion. // Cell. 2000. V.103. № 2. P.227-238.

114. Ayllon V„ Rebollo A. Ras-induced cellular events. // MoI.Membr.Biol. 2000. V.17. № 2. P.65-73.

115. Pham N., Rotin D. Nedd4 regulates ubiquitination and stability of the guanine-nucleotide exchange factor CNrasGEF. // J.Biol.Chem. 2001. V.276. № 50. P.46995-47003.

116. Hummler E., Horisberger J. Genetic disorders of membrane transport. The epithelial sodium channel and its implication in human diseases. // Am.J. Physiol. 1999. V.276. № 3-1. P.G567-G571.

117. Matalon S., O'Brodovich H. Sodium channels in alveolar epithelial cells: molecular characterization, biophysical properties, and physiological significance. // Annu.Rev.Phvsiol. 1999. V.61. P.627-661.

118. Shi H., Asher C., Chigaev A., Yung Y., Reuveny E. Seger R., Garty H. Interaction of beta and gamma ENaC with Nedd4 can be facilitated by an ERK-mediated phosphorylation. // J.Biol.Chem. 2002. V.277. № 16. P.l3539-13547.

119. Malik В., Schlanger L., Al-Khalili О., Bao H., Yue G., Price S., Mitch W., Eaton D. Enac degradation in A6 cells by the ubiquitin-proteosome proteolytic pathway. // J.Biol.Chem. 2001. V.276. № 16. P. 12903-12910.

120. Springael J., Andre B. Nitrogen-regulated ubiquitination of the Gapl permease of Saccharomyces cerevisiae. // Mol.Cell Biol. 1998. V.9. № 6. P.1253-1263.

121. Springael J., Galan J., Haguenauer-Tsapis R., Andre B. NH4+ -induced down-regulation of the Saccharomyces cerevisiae Gaplp permease involves its ubiquitination with lysine-63-linked chains. // J.Cell Sci. 1999. V.l 12. № pt9. P.1375-1383.

122. Grenson M. Molecular Aspects of Transport Proteins. // D. Pont: Elsevier Science Publishers. ш 1992. P.219-245.

123. Beck Т., Schmidt A., Hall M. Starvation induces vacuolar targeting and degradation of the tryptophan permease in yeast. //J.Cell Biol. 1999. V.146. № 6. P.1227-1238.

124. Lucero P., Lagunas R. Catabolite inactivation of the yeast maltose transporter requires ubiquitin-ligase npil/rsp5 andubiquitin-hydrolase npi2/doa4. // FEMS MicrobioI.Lett. 1997. V.I47. № 2. P.273-277.

125. Riballo E., Herweijer M., Wolf D., Lagunas R. Catabolite inactivation of the yeast maltose transporter occurs in the vacuole after internalization by endocytosis. // J.BacterioI. 1995. V.l77. № 19. P.5622-5627.

126. Medintz I., Jiang H., Han E., Cui W., Michels C. The role of ubiquitin conjugation in glucose-induced proteolysis of Saccharomyces maltose permease. // J.BacterioI. 1996. V.l 78. №51. P.2245-2254.

127. Medintz I., Jiang H., Michels C. The role of ubiquitin cojugation in glucose-induced proteolysis of Saccharomyces cerevisiae maltose permease. // J.Biol.Chem. 1998. V.273. № 51. P.34454-34462.

128. Galan J., Haguenauer-Tsapis R. Ubiquitin Lys63 is involved in ubiquitination of a yeast plasma membrane protein. // EMBO J. 1997. V.16. № 19. P.5847-5854.

129. Galan J., Moreau V., Andre В., Volland C., Haguenauer-Tsapis R. Ubiquitination mediated by the Npilp/Rsp5p ubiquitin-protein ligase is required for endocytosis of the yeast uracil permease. // J.Biol.Chem. 1996. V.271.№ 18. P. 10946-10952.

130. Volland С., Urban-Grimal D., Geraud G., Haguenauer-Tsapis R. Endocytosis and degradation of the yeast yracil permease under adverse conditions. //J.Biol.Chem. 1994. V.269. № 13. P.9833-9841.

131. Lai K., Bolognese C., Swift S., McGraw P. Regulation of inositol transport in Saccharomyces cerevisiae involves inositol-induced changes in permease stability and endocytic degradation in the vacuole. // J.Biol.Chem. 1995. V.270. № 6. P.2525-2534.

132. Matejckova-Forejtova A., Kinclova O., Sychrova H. Degradation of Candida albicans Canl permease expressed in Saccharomyces cerevisiae. IIFEMS Microbiol.Lett. 1999. V.l76. № 1. P.257- 262.

133. Hicke L., Riezman H. Ubiquitination of a yeast plasma membrane receptor signals its ligand-stimulated endocytosis. // Cell. 1996. V.84. № 2. P.277-287.

134. Terrell J., Shih S., Dunn R., Hicke L. A function for monoubiquitination in the internalization of a G protein-coupled receptor. // Mol. Cell. 1998. V.l. № 2. P. 193-202.

135. Davis N., Horecka J., Sprague J. Cis- and trans-acting functions required for endocytosis of the yeast pheromone receptors.//J.Cell Biol. 1993. V.l22. № 1. P.53-65.

136. Roth A., Davis N. Ubiquitination of the PEST-like endocytosis signal of the yeast a-factor receptor. // J.Biol.Chem. 2000. V.275. №11. P.8143-8153.

137. Roth A., Davis N. Ubiquitination of the yeast a-factor receptor. // J.Cell Biol. 1996. V.l 34. № 3. P.661-674.

138. Egner R., Kuchler K. The yeast multidrug transporter Pdr5 of the plasma membrane is ubiquitinated prior to endocytosis and degradation in the vacuole. // FEBS Lett. 1996. V.378. № 2. P.177-181.

139. Egner R., Mahe Y., Pandjaitan R., Kuchler K. Endocytosis and vacuolar degradation of the plasma membrane-localized Pdr5 ATP-binding cassette multidrug transporter in Saccharomyces cerevisiae. II MoI.Cell Biol. 1995. V.15. №11. P.5879-5887.

140. Horak J., Wolf D. Catabolite inactivation of the galactose transporter in the yeast Saccharomyces cerevisiae: ubiquitination, endocytosis, and degradation in the vacuole. // J. Bacterid. 1997. V.179. № 5. P.1541-1549.

141. Gitan R., Eide D. Zinc-regulated ubiquitin conjugation signals endocytosis of the yeast ZRT1 zinc transporter. // Biochem J. 2000. V.346. № 2. P.329-336.

142. Gitan R., Luo H., Rodgers J., Broderius M., Eide D. Zinc-induced inactivation of the yeast ZRT1 zinc transporter occurs through endocytosis and vacuolar degradation. // J.Biol.Chem. 1998. V.273. № 44. P.28617-28624.

143. Kolling R., Hollenberg C. The ABC-transporter Ste6 accumulates in the plasma membrane in a ubiquitinated form in endocytosis mutants. // EMBO J. 1994. V. 13. № 14. P.3261-3271.

144. Schandel K., Jenness D. Direct evidence for ligand-induced internalization of the yeast alpha-factor pheromone receptor. // Mol.Cell Biol. 1994. V.14. №11. P.7245-7255.

145. Horak J. Yeast nutrient transporters. // Biochem. Biophys. Acta. 1997. V.1331. № 1. P.41-79.

146. Huibregtse J., Yang J., Beaudenon S. The large subunut of RNA polymerase II is a substrate of Rsp5 ubiquitin-protein ligase. // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1997. V.94. № 8. P.3656-3661.

147. Perry W., Hustad C., Swing D., O'Sullivan Т., Jenkins N., Copeland N. The itchy locus encodes a novel ubiquitin protein ligase that is disrupted in a 18H mice. // Nat.Genet. 1998. V.l8. № 2. P.143-146.

148. Rape M., Hoppe Т., Gorr I., Kalocay M., Richly H., Jentsch S. Mobilization of processed, membrane-tethered SPT23 transcription factor by CDC48(UFD1/NPL4), a ubiquitin-selective chaperone. // Cell. 2001. V.107. № 5. P.667-677.

149. Zhang S., Skalsky Y., Garfinkel D. MGA2 and SPT23 is required for transcription of delta 9 fatty acid desaturese gene, OLE1, and nuclear membrane integrity in Saccharomyces cerevisiae. II Genetics. 1999. V.l51. № 2. P.473-483.

150. Stukey J., McDonough V., Martin C. Isolation and characterization of OLE 1, a gene affecting fatty acid desaturation from Saccharomyces cerevisiae. II J.Biol.Chem. 1989. V.264. № 28. P. 1653716544.

151. Hitchcock A., Krebber H., Frietze S., Lin A., Latterich M., Silver P. The conserved Npl4 protein complex mediates proteasome-dependent membrane-bound transcription factor activation. // Mol. Cell Biol. 2001. V.12. № 10. P.3226-3241.

152. Tansey W. Transcriptional regulation: RUPture in the ER. // Nature Cell Biol. 2000. V.2I № 10. P.E175-E177.

153. Alberts В., Bray D., Lewis J., Raff M., Roberts K. and Watson J.// Molecular Biology of the ^ Cell, second edition. 1989. Garland Publishing, New York-London.

154. Kasanov J., Pirozzi G., Uveges A., Kay B. Characterizing class 1 WW domains defines key specificity determinants and generates mutant domains with novel specificities. // Chem Biol. 2001. V.8. № 3. P.231-241.

155. Stukey J., McDonough V., Martin C. The OLE1 gene of Saccharomyces cerevisiae encodes the delta 9 fatty acid desaturase and can be functionally replaced by the rat stearoyl-CoA desaturase gene. //J.Biol.Chem. 1990. V.265.№ 33. P.20144-20149.

156. Pan Y., Haines D. Identification of a tumor-derived p53 mutant with novel transactivating selectivity. // Oncogene. 2000. V.19. № 27. P.3095-3100.r

157. Macias M., Gervais V., Civera C., Oschkinat H. Structural analysis of WW domains and design of WW prototype. //Nat. Struct.Biol. 2000. V.7. № 5. P.375-379.

158. McDonough V., Stukey J., Martin C. Specificity of unsaturated fatty acid-regulated expression of the Saccharomyces cerevisiae OLE1 gene. // J.Biol.Chem. 1992. V.267. № 9. P.5931-5936.

159. Клонирование ДНК. Методы. Под ред. Д. Гловера// Москва, изд. «Мир». 1989.

160. Black P., Faergeman N., DiRusso С. Long-chain acyl-CoA-dependent regulation of gene expression in bacteria, yeast and mammals. // J. Nutr. 2000. V. 130. № 2S. P. 305S-309S.

161. Zhang S., Burkett Т., Yamashita I., Garfinkel D. Genetic redundancy between SPT23 and MGA2: regulators of Ту-induced mutations and Tyl transcription in Saccharomyces cerevisiae. // Mol. Cell Biol. 1997. V.17. № 8. P.4718-4729.

162. Conaway R., Brower C., Conaway J.W. Emerging roles of ubiquitin in transcription regulation.// Science. 2002. V.296. № 5571. P.l254-1258.

163. Kaiser P., Flick K., Wittenberg C., Reed S. Regulation of transcription by ubiquitination without proteolysis: Cdc34/SCF(Met30)-mediated inactivation of the transcription factor Met4. // Cell. 2000. V.102. № 3. P.303-314.

164. Brizzio V., Khalfan W., Huddler D., Beh C., Andersen S., Latterich M., Rose M. Genetic interaction between KAR7/SEC71, KAR8/JEM1, KAR5 and KAR2 during nuclear fusion in Saccharomyces cerevisiae. //Mol. Biol. Cell. 1999. V. 10. P. 609-626.

165. DeHoratius S., Silver P. Nuclear transport defects and nuclear enxelope alterations are associated with mutation of the Saccharomyces cerevisiae NPL4 gene. // Mol.Biol.Cell. 1996. V.7. № 11/P. 1835-1855.

166. Braun S., Matuschewski K., Rape M., Thorns S., Jentsch S. Role of the ubiquitin-selective CDC48(UFD 1/NPL4) chaperone (segregase) in ERAD of OLE 1 and other substrates. // EMBO J. 2002. V.21.№ 4. P.615-621.

167. Bays N., Hampton R. Cdc48-Ufdl-Npl4: Stuck in the middle with Ub. // Current Biology. 2002. V.12.*№ 10. P.R366-R371.

168. Fujimuro M„ Tanaka K., Yokosawa H., Toh-e A. Sonlp is a component of the 26S proteasome of the Saccharomyces cerevisiae. 11FEBS Lett. 1998. V.423. № 2. P.l 49-154.

169. Mannhaupt G., Schriall R., Karpov V., Vetter I., Feldmann H. Rpn4p acts as a transcription factor by binding to PACE, a nonamer box found upstream of 26S proteasomal and other genes in yeast. // FEBS Lett. 1999. V.450. № 1-2. P.27-34.

170. Xie Y., Varshavsky A. RPN4 is a ligand, substrate, and transcriptional regulator of the 26S proteasome: A negative feedback circuit. // Proc.Natl.Acad.Sci USA. 2001. V.98. № 6. P.3056-3061

171. Fleming J., Lightcap E., Sadis S., Thoroddsen V., Bulawa C., Blackman R. Complementary whole-genome technologies reveal the cellular response to proteasome inhibition by PS-341. // Proc.Natl.Acad.Sci USA. 2002. V.99. № 3. P.1461-1466.

172. Baldwin A.S., Jr.// Annu.Rev.Immunol. 1996. V. 14. P. 649-683.

173. Fan C, Maniatis T. Generation of p50 subunit of NF-kappa В by processing of pi 05 through an ATP-dependent pathway.//Nature. 1991. V. 354. P. 395-398.

174. Wang C., Deng L., Hong M., Akkaraju G., Inoue J., Chen Z. TAK1 is a ubiquitin-dependent kinase of MKK and IKK. //Nature. 2001. У.412. № 6844. P.346-351.

175. Chellappa R., Kandasamy P., Oh C., Jiang Y., Vemula M., Martin C. The membrane proteins, Spt23p and Mga2p, play distinct roles in the activation of Saccharomyces cerevisiae OLE1 gene expression. //J. Biol. Chem. 2001. V.276. № 47. P.43548-43556.

176. Schmitt M.E., Brown T.A., Trumpower B.L. A rapid and simple method for preparation of RNA from Saccharomyces cerevisiae. 1999 Nucleic Acid Research, 18, 3091-3092