Анализ роли белков теплового шока 70 кДа в популяции Т-лимфоцитов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат медицинских наук Тарасенко, Татьяна Николаевна

• Тарасенко, Татьяна Николаевна
• кандидат медицинских наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Тарасенко, Татьяна Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. АПОПТОЗ КЛЕТОК ИММУИНОЙ СИСТЕМЫ.

Изменения, происходящие на мембранах клеток во время апоптоза.

Реализация программы апоптоза.

ГЛАВА 2. БЕЛКИ ТЕПЛОВОГО ШОКА.

Открытие БТШ.

Классификация БТШ.

Шаперонные функции БТШ.

Протективные функции БТШ.

ГЛАВА 3. БТШ И ИММУННЫЙ ОТВЕТ.

Антигенность БТШ, представленных на поверхности микроорганизмов.

Аутоиммунные патологии и БТШ. БТШ как маркеры клеток, подлежащих элиминации.

Экспрессия БТШ при опухолевых заболеваниях.

Иммуностимулирующие свойства БТШ. Использование БТШ для создания вакцин.

Вакцинация белками теплового шока патогенов.

Вовлеченность БТШ в процесс представления антигена.

БТШ вовлечены в презентацию антигенов на молекулах ГКГ I класса.

БТШ вовлечены в презентацию антигенов на молекулах ГКГ II класса.

Участие БТШ в кросс-презентации экзогенных антигенов антигенпредставляющими клетками.

Презентация собственных БТШ молекулами ГКГ.

БТШ обладают свойствами цитокинов.

ГЛАВА 4 ВНЕКЛЕТОЧНЫЙ ПУЛ БТШ. ВОЗМОЖНЫЕ ПРОДУЦЕНТЫ ВНЕКЛЕТОЧНЫХ БТШ И ПРЕДПОЛАГАЕМЫЕ ФУНКЦИИ ЭТИХ ПРОТЕИНОВ.

БТШ обнаруживаются в межклеточном пространстве.

Возможный источник внеклеточного пула БТШ: пассивный выход из разрушенных клеток, или активный экзоцитоз?.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 5. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

ГЛАВА 6. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Экспрессия БТШ тимоцитами мыши.

Экспрессия БТШ70 на последовательных этапах апоптоза тимоцитов, взаимосвязь изменения уровня экспрессии поверхностных БТШ70 с трансмембранным потенциалом митохондрий, активностью каспазы-3 и перестройкой плазматической мембраны.

Экзоцитоз БТШ70 в культуре КонА-активированных Т-лимфоцитов мыши.

Взаимодействие экзогенных БТШ70 с тимоцитами.

Транспорт цитоплазматических БТШ70 на клеточную поверхность под действием альдегидов.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Анализ роли белков теплового шока 70 кДа в популяции Т-лимфоцитов»

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Белки теплового шока (БТШ) являются внутриклеточными протеинами, обладающими обслуживающими и протективными функциями по отношению к другим протеинам, функционирующим в клетках. Однако в ряде случаев, БТШ локализуются на клеточной поверхности и присутствуют в межклеточном пространстве. В последние годы было установлено, что внеклеточные формы БТШ обладают уникальными иммуномодулирующими свойствами. Использование препаратов БТШ в экспериментальных моделях позволяет направленно и эффективно усиливать иммунный ответ на опухолевые антигены и различные патогены, или наоборот, подавлять нежелательные аутоиммунные реакции. Существуют также данные о выраженных иммунных реакциях на БТШ, представленных на поверхности инфицированных и опухолевых клеток. Очевидно, что для успешного практического использования таких уникальных свойств БТШ необходимы исследования механизмов их взаимодействия с иммунной системой. В настоящее время охарактеризовано взаимодействие БТШ лишь с одной из популяций иммунокомпетентных клеток - антигенпредставляющими клетками, и практически не изучена роль БТШ в функционировании лимфоидных клеток. Наряду с этим, до сих пор неизвестны причины и механизмы иммунологически значимой поверхностной локализации БТШ и остается спорным вопрос о происхождении внеклеточного пула БТШ, способного проявлять выраженные иммуномодулирующие свойства. Недостаток сведений о роли БТШ в функционировании иммунной системы сдерживает разработку подходов к иммунотерапевтическому и диагностическому применению БТШ.

Один из возможных механизмов иммуномодулирующего эффекта БТШ может быть связан с регуляцией процесса программированной гибели лимфоцитов, сопутствующего нормальному функционированию иммунной системы. БТШ обладают как анти-, так и проапоптотическими функциями. Действительно, хорошо известно, что многие БТШ являются протективными молекулами и способны предотвращать апоптоз. В то же время, у ряда клеточных линий с высоким уровнем экспрессии БТШ продемонстрирована повышенная чувствительность к индукторам апоптоза. Имеются также сведения о вовлеченности БТШ в процесс реализации программированной клеточной гибели. Одним из проявлений такого участия БТШ в реализации программы апоптоза является транслокация этих внутриклеточных молекул на поверхность погибающих лимфоидных клеток. Наряду с феноменом необычной локализации БТШ на клеточной поверхности, обнаружено, что клетки способны секретировать БТШ в межклеточное пространство и что внеклеточный пул БТШ поглощается живыми клетками без изменения функциональной активности эндоцитированных протеинов. Эти результаты указывают не только на вероятный эндогенный источник внеклеточного пула БТШ, но и на возможный механизм их иммуномодулирующего действия. Очевидно, что для указанной иммунологически значимой, но малоизученной проблематики иммуномодулирующих функций эндогенных БТШ работа, посвященная анализу роли БТШ в популяциях Т-лимфоцитов, является актуальным исследованием.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью работы является исследование роли БТШ в процессе апоптоза тимоцитов, анализ процесса транслокации этих протеинов на клеточную поверхность и их секреции в межклеточное пространство в популяциях Т-лимфоцитов. Наибольшее внимание будет уделено анализу участия в исследуемых процессах основного представителя суперсемейства белков теплового шока - БТШ70. Отдельная часть работы посвящена изучению взаимодействия экзогенных БТШ70 с Т-лимфоцитами.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Характеристика уровня экспрессии БТШ70 у покоящихся и активированных тимоцитов.

2. Анализ изменения экспрессии БТШ70 у тимоцитов в процессе их программированной гибели.

3. Исследование процесса транслокации БТШ на поверхность погибающих тимоцитов.

4. Поиск экзогенных факторов, индуцирующих транс локацию БТШ на клеточную поверхность.

5. Анализ экзоцитоза БТШ70 активированными Т-лимфоцитами.

6. Анализ взаимодействия экзогенных БТШ70 с тимоцитами.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Проблема взаимодействия БТШ с иммунной системой привлекла интерес исследователей сравнительно недавно и в настоящее время достаточно полно охарактеризована лишь роль эндогенных и экзогенных БТШ в функционировании антигенпредставляющих клеток. Роль БТШ в функционировании популяций лимфоидных клеток практически не исследована. Поэтому все основные результаты данного исследования обладают высокой степенью научной новизны. В частности, впервые было продемонстрировано изменение уровня экспрессии БТШ70 в популяциях тимоцитов в процессе их программированной гибели. В этой же серии экспериментов была установлена взаимосвязь вариаций экспрессии БТШ70 с изменениями трансмембранного потенциала митохондрий и активностью каспазы-3. Охарактеризован процесс транслокации цитоплазматических БТШ70 на клеточную поверхность. Описано влияние глюкокортикоидов и ингибиторов аппарат Гольджи зависимой секреции протеинов на экспрессию БТШ70 и их транспорт на поверхность погибающих тимоцитов. Анализ последовательных этапов апоптоза по данным цитофлуориметрических измерений проводился с помощью нового оригинального методического подхода. Новым методическим подходом для изучения причин и механизмов поверхностной локализации БТШ может служить также обнаруженный в работе феномен усиленного транспорта этих протеинов на клеточную поверхность под действием различных альдегидов. Наряду с перечисленными данными, характеризующими внутриклеточный и поверхностный пулы БТШ, впервые были получены свидетельства об экзоцитозе БТШ70 в культуре активированных Т-лимфоцитов. Впервые продемонстрировано также взаимодействие внеклеточных экзогенных БТШ70 с тимоцитами, заключающееся в адсорбции этих протеинов на клеточной поверхности и в последующем эндоцитозе адсорбированных молекул живыми клетками.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Белки теплового шока обладают уникальными иммуностимулирующими и адъювантными свойствами, которые позволяют создавать на основе БТШ эффективные противоопухолевые и противоинфекционные вакцины. В настоящее время проводятся клинические испытания некоторых разновидностей таких вакцин. В то же время, иммунизация экспериментальных животных препаратами БТШ позволяет предотвратить патологические аутоиммунные реакции. Известно также, что появление в сыворотке крови БТШ и антител к ним является характерным диагностическим признаком определенных этапов развития ряда патологий.

Все это свидетельствует о значительных потенциальных возможностях применения БТШ в клинической практике. Очевидно, что для реализации таких возможностей необходимо изучение процессов взаимодействия БТШ с иммунной системой. Исходя из этого, данная работа, посвященная исследованию роли БТШ в функционировании лимфоидных клеток, обладает существенной практической значимостью. Значительный интерес для возможного практического применения имеют полученные в работе данные о секреции БТШ лимфоцитами. Они проливают свет на источник внеклеточного пула БТШ, обладающего выраженным влиянием на развитие иммунных реакций. Можно предположить, что направленный контроль экзоцитоза БТШ лимфоидными клетками может служить основой для разработки нового подхода к проблеме иммунорегуляции. В то же время для практического применения представляет интерес обнаруженный в работе феномен направленной индукции альдегидами выхода цитоплазматических БТШ на клеточную поверхность. Данное явление может быть полезным для диагностического анализа содержания БТШ в лимфоцитах периферической крови.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Материалы диссертации представлены на международной иммунологической щколе «Escape from Immune Surveillance of Tumours and Microorganisms: Emerging Mechanisms and Shared Strategies» (Неаполь, Италия, 2000), на четвертой научной конференции с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге" (Санкт-Петербург,2000), на пятой международной иммунологической летней школе им. Дж. Хэмфри (Пущино, 2000), на международной летней школе «Molecular Mechanisms of Development and Disease» Спецес, Греция, 4-14 сентября 2000г., на шестой международной иммунологической летней школе им. Дж. Хэмфри (Пущино, 2002).

ПУБЛИКАЦИИ По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ Диссертация состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы (глава 1, 2, 3 и 4), материалов и методов (глава 5), результатов исследований и обсуждения (глава 6), выводов и списка литературы. Работа изложена на 111 страницах машинописного текста, содержит 23 рисунка, 3 таблицы. Список литературы включает 131 источник, из которых 129 иностранных.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Тарасенко, Татьяна Николаевна

Выводы

1. Покоящиеся тимоциты мыши характеризуются выраженной экспрессией внутриклеточных БТШ70. Уровень этой экспрессии различается у разных линий мышей. Содержание внутриклеточных БТШ70 у тимоцитов увеличивается под действием их митоген-индуцированной активации.

2. Тимоциты, погибшие по программе апоптоза, характеризуются присутствием на клеточной поверхности БТШ70. Поверхностный пул БТШ70 у апоптозных клеток составляет около 5% от общего содержания этих протеинов в клетке.

3. Адреналин существенно стимулирует экспрессию тимоцитами БТШ70, вызывает транслокацию этих протеинов на клеточную поверхность, а также индуцирует апоптоз тимоцитов. Дексаметазон обладает ингибирующим действием на синтез БТШ70 в тимоцитах.

4. Начало процесса транслокации БТШ70 на поверхность погибающих тимоцитов совпадает с этапом гиперполяризации трансмембранного потенциала митохондрий и происходит синхронно с ростом активности каспазы-3 и процессом перестройки плазматической мембраны. Рост внутриклеточного содержания БТШ70 продолжается на необратимой стадии клеточной гибели (после деполяризации митохондрий), что указывает на вовлеченность этих протеинов в реализацию программы апоптоза.

5. КонА-активированные Т-лимфоциты мыши продуцируют растворимую форму БТШ70 в окружающую среду.

6. Экзогенные БТШ интернализуются тимоцитами и увеличивают их резистентность к спонтанному и дексаметазон- и параформальдегид-индуцированному апоптозу.

Воздействие на клетки альдегидами (формальдегидом, параформальдегидом, глутаральдегидом и ацетальдегидом) приводит к транспорту БТШ70 на клеточную поверхность.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Тарасенко, Татьяна Николаевна, 2003 год

1. Хаитов P.M., Лесков В.П. (2001) Иммунитет и стресс. Росс.Физиол. журнал гш.Сеченова. ,87(8) 1060-72.

2. Ярилин А.А. (1996) Апоптоз и его место в иммунных процессах. Иммунология 2,10.

3. Anderson К., and Cresswell P. (1994) A role of calnexin (IP90) in the assembly of class IIMHC molecules. EMBOJ. 13: 675-682.

4. Anderton S.M, van der Zee R, Noordzij A, van Aden W. (1994) Differential mycobacterial 65-kDa heat shock protein T cell epitope recognition after adjuvant arthritis-inducing or protective immunization protocols J. Immunol. 152: 3656

5. Arata S, Hamaguchi S, Nose K. (1995) Effects of the overexpression of the small heat shock protein, HSP27, on the sensitivity of human fibroblast cells exposed to oxidative stress. J Cell. Physiol. 163,458.

6. Arnold D., Wahl C., Faath S., Rammensee H., Shild H. (1997) Influences of transporter associated with antigen processing (TAP) on the repertoire of peptides associated with the endoplasmic reticulum-resident stress protein gp96. J Exp Med 186: 461-466.

7. Arnold-Schild D., Hanau D., Spehner D., Schmid C., Rammensee H-G., de la Salle H., Schild H. (1999) Receptor-mediated Endocytosis of Heat-Shock Proteins by Professional Antigen-Presenting Cells. J, Immunol. 162: 3757-3760.

8. Baki K.,Hutter E.,Gonchoroff N.J., Perl A. (1999) Elevation of

9. Mitochondrial Transmembrane potential and Reactive Oxygen Intermediate levels are early events and occur independently from activation of caspases and Fas signaling. J. Immunol., 162, 1466.

10. Banki K, Hutter E, Gonchoroff NJ, Perl A (1999) Elevation of mitochondrial transmembrane potential and reactive oxygen intermediate levels are early events and occur independently from activation of caspases in Fas signaling. J Immunol 162, 1466.

11. Basu S., Binger R., Ramalingam Т., Srivastava P. (2001) CD91 is a common receptor for heat shock protein gp96, hsp90, hsp70, and calreticulin. Immunity 14: 303-313.

12. Basu S., Srivastava P.K. (2000) Heat shock proteins: the fountainhead of innate and adaptive immune responses. Cell Stress & Chaperones 2000. 5, 443-451.

13. BeckS., De Maio A. (1994) Stabilization of protein synthesis in termotolerant cells during heat shock. Association of heat shock protein-72 with ribosomal subunits of polysomes. J.Biol. Chem. 269: 21803-21811.

14. Beere H. (2001) Stressed to death: regulation of apoptotic signaling pathways by heat shock proteins. Science's stke, 2001,93.

15. Beere H., Wolf В., Cain K., Mosser D., Mahboubi A., Kuwana Т., Tailor P., Morimoto R., Cohen G., Green D. (2000) Heat shock protein 70 inhibits apoptosis by preventing recruitment of procaspase-9 to Apaf-1 apoptosome. Nat.Cell.Biol. 2, 469-475

16. Beere HM, Hickman JA, Morimoto RI, Parmar R, Newbould R, Waters CM. (1993) Changes in hsc70 and c-myc in HL-60 cells engaging differentiation or apoptosis. Mol.Cell.Diff. 1, 323.

17. Bharadwaj S., Ali A., Ovsenek N.(1999) Multiple components of the HSP90 chaperone complex function in regulation of heat shock factor 1 in vivo. Mol Cell Biol. 19:8033-8041.

18. Binger R., Blanchere N., Srivastava P (2001) Heat-shock protein-chaperoned peptides but not free peptides introduced into the cytosol are presented efficiently by major histocompatibility complex I molecules. J. Biol. Chem. 276:20, 17163-17171.

19. Binger R.,Han D.,Srivastava P. (2000) CD91: a receptor for heat shock protein gp96. Nat. Immunol. 1: 151-155.

20. Bonnerot C., Marks M., Cosson P., Robertson E., Bikof E., Germain R., Bonifacino J. (1994) Association with Bip and agregation of class IIMHC molecules synthesized in the absence of invariant chain. EMBO J. 13: 934944.

21. Bruey J., Ducasse C., Bonniaud P., Ravagnan L., Susin S., Diaz-Latoud C., Gurbuxani S., Arrigo A., Kroemer G., Solary E., Garrido C. (2000) Hsp27 negatively regulates cell death by interacting with cytochrome c. Nat. Cell. Biol. 2, 645-652.

22. Bucher J. (1999) HSP90 and Co.-a holding for folding. TIBS, 24,136-141.

23. Burnette W.N. (1981) Western blotting: electrophoretic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodinated protein A. Anal.Biochem. 12, 195-203.

24. Chen D., Androlewicz M. (2001) Heat shock protein 70 moderately enhances peptide binding and transport by the transporter associated withantigen processing. Immunol Lett. 75: 143-148.

25. Craig EA, Weissman JS, Horwich AL (1994) Heat shock proteins and molecular chaperones: mediators of protein conformation and turnover in the cell. Cell 78, 365.

26. Creagh E., Cotter T. (1999) Selective protection by Hsp 70 against cytotoxic drug- but not Fas-induced T-cell apoptosis. Immunology 97, 3644.

27. Demand J et al. (1998) The carboxy-terminal domain of Hsc70 provides binding sites for a distinct set of chaperone cofactors. Mol.Cell.Biol. 18, 2023-2028.

28. Dukan S., Farewell A., Ballesteros M., Taddei F., Radman M., Nystrom T. (2000) Protein oxidation in response to increased transcriptional or translational errors. PNAS 97: 5746-5749.

29. Ellis J. (1987) Proteins as molecular chaperones. Nature, 328: 378-379.

30. Erkeller-Yeksel F, Isenberg D, Dhillon V, Latchman D, Lydyard P (1992) Surface expression of heat shock protein 90 by blood mononuclear cells from patients with systemic lupus erythematosus. J.Autoimmun. 5,803-14.

31. Erkeller-Yueksel F., Isenberg D., Dhillon V., Latchman D., Lydyard P.1992) Surface expression of heat-shock protein 90 by blood mononuclear cells from patients with systemic lupus erythematosus. J.Autoimmun. 5: 803-814.

32. Ernani F., Teale J. (1993) Release of stress proteins from Mesocestoides corti is a brefeldin-A inhibitable process: evidence for active export of stress proteins. Infect Immunol. 61: 2596-601.

33. Fadok V. A., Yoelker D. R., Capbell P. A. Cohen J. J., Bratton D. L., Henson P. M. (1992) xposure of phosphatidylserine on the surface of apoptotic lymphocytes triggers specific recognition and removal by macrophages J. Immunol, 148, 2207.

34. Feder M.E., Hofmann G.E. (1999) Heat-shock proteins, molecular chaperones, and the stress response: evolutionary and ecological physiology. Annu. Rev. Physiol., 61, 243-282.

35. Ferranini M.,Heltai S., Zocchi M.R. and Rugarli C. (1992) Unusial expression and localization of heat shock proteins. Int.J.Cancer, 51,613.

36. Ferrarini M, Heltai S, Zocchi MR, Rugarli С (1992) Unusual expression and localization of heat-shock proteins in human tumor cells. Int J. Cancer 51, 613.

37. Ferrero R., Thiberge J-M., Kansau I., Wuscher N., Huerre M., Labigne A. (1995) The groES homolog of Helicobacter pylori confers protective immunity against mucosal infection in mice. PNAS 92: 6499-6503.

38. Finkel Т., Holbrook N. (2000) Oxidants, oxidative stress and the biology of ageing. Nature 408: 239-247.

39. Freedman M., Buu N., Ruijs Т., Williams K., Antel J. (1992) Differential expression of heat shock proteins by human glial cells. J. Neuroimmunol. 41, 231-238.

40. Fujihara S., Nadler S. (1999) Intranuclear targeted delivery of functional NF-kB by 70kDa heat shock protein. EMBO J., 18, 2,411-419.

41. Gabai V, Meriin A, Mosser D, Caron A, Rits S, Shifrin V, Sherman M (1997) HSP 70 prevents activation of stress kinases . A novel pathway of cellular thermotolerance. J. Biol.Chem.,.272: 29, 18033-18037

42. Garrido C., Gurbuxani S., Ravagnan L., Kroemer G. (2001) Breakthroughs and views Heat shock proteins. Endogenous Modulators of apoptotic cell death. Bioch &Biophis. Research Commun. 286, 433-442.

43. Gordon S., Hoffman R., Simmons R. (1997) Induction of Heat Shock Protein 70 protects Thymocytes Against Radiation-Induced Apoptosis. Arch Surg 132: 1277-1282.

44. Guppy M, Greiner E, Brand K. (1993) The role of the Crabtree effect and an endogenous fuel in the energy metabolism of resting and proliferating thymocytes. Eur JBiochem Feb 15;212(l):95-9

45. Hightower L., Guidon P. (1989) Selective release from cultured mammalian cells of heat -shock(stress) proteins that resemble glia-axon transfer proteins. J Cell Physiol 138(2): 257-66.

46. Hiromatsu K., Yoshikai Y., Matsuzaki G., Ohga S., Muramatori K., Matsumoto K., Bluestone J., Nomoto K. (1992) A protective role of y8 T cells in primary infection with Listeria monocytogenes in mice.1. J.Exp.Med. 175: 49-56.

47. Hoeger P., Tepper M., Faith A., Higgins J., Lamb J., Geha R. (1994) Immunosupressant deoxyspergualin inhibits antigen processing in monocytes. J Immunol. 153: 3908-3916.

48. Houenou L., Li L., Kent C., Tytel M. (1996) Exogenous heat shock cognate protein Hsc70 prevents axocomy-induced death of spinal sensory neurons. Cell Stress Chap. 1, 161-166.

49. Hurst N.P. (1990) Stress (heat shock ) proteins and rheumatic disease. New advance or just another band wagon? Rheumatol Int (1990) 271-279.

50. Imani F., Soloski M.(1991) Heat shock proteins can regulate expression of the Tla region-encoded class lb molecule Qa-1. PNAS. USA. 88:1047510479.

51. Jaatela M (1999) Heat shock proteins as cellular lifeguards. Ann Med 32:261-271.

52. Jaattela M., Wissing D., Kokholm K., Kallunki Т., Egeblad M. (1998) Hsp70 exerts its anti-apoptotic function downstream of caspase-3-like proteases. EMBOJ. 17:21, 6124-6134.

53. Jin Т., Gu Y., Zanusso G., Sy M., Kumar A., Cohen M.,Gambetti P., Singh N. (2000) The chaperone protein BiP binds to a mutant prion protein and mediates its degradation by the proteasome. J Biol Chem 275: 3869938704.

54. Jolly C., Morimoto R. (2000) Role of heat shock response and molecular chaperones in oncogenesis and cell death. J Natl Cancer Inst 92:15641572.

55. Kaufmann S (1990) Heat shock proteins and the immune response. Immunol Today 11:129-136.

56. Kaufmann S., Vath U., Thole J., van Embden J., Emmrich F (1987) Enumeration of "T-cells reactive with Mycobacterium tuberculosisorganisms and specific for recombinant mycobacterial 64-kDa protein. Eur J Immunol 17: 351-357.

57. Kerr J.F., Wyllie A.H., Curric A.R. (1972) Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics. Br. J. Cancer, 26, 239.

58. Keyse S., Tyrell R. (1989) Heme oxygenase is the major 32-kDa stress protein induced in human skin fibroblasts by UVA radiation, hydrogen peroxide and sodium arsenite PNAS 86: 99-103.

59. Kim D., Li G. (1999) Proteasome inhibitors lactacystin and MG132 inhibit the dephosphorylation of HSF1 after heat shock and suppress thermal induction of heat shock gene expression. Biochem Biophys Res Commun. 264:352-358.

60. Kol A, Lichtman A.H., Finberg R.W., Libby P., Kurt-Jones E.A. 2000, Gutting Edge: Heat Shock Protein (HSP) 60 Activates the Innate Immune Response: CD 14 Is an Essential Receptor fcr HSP60 Activation of Mononuclear Cells. J. Immunol. 164: 13-17.

61. Lactose A., De Cian M.C., Cueff A., Poulet S.A. (2001) Noradrenaline and alpha-adrenergic signaling induce the hsp70 gene promoter in mollusc immune cells. J. CellSci., 114, 3557-3564.

62. Lactose A., De Cian M.C., Cueff A., Poulet S.A. (2001) Noradrenaline and alpha-adrenergic signaling induce the hsp70 gene promoter in mollusc immune cells. J. Cell Sci., 114, 3557-3564.

63. Lammert E., Arnold D., Nijenhuis M., Momburg F., Hammerling G., Brunner J., Stefanovic S., Rammensee H., Schild H. (1997) The endoplasmic reticulum-resident stress protein gp96 binds peptides translocated by TAP. Eur. J.Immunol. 27: 923-927.

64. Lavoie J., Lambert H., Hickey E., Weber L., Landry J. (1995) Modulation of cellular thermoresistance and actin filament stability accompaniesphosphorylation-induced changes in the oligomeric structure of heat shock protein 27. Mol.CelBiol. 15, 505-516.

65. Li.Z., Menoret A., Srivastava P. (2002) Roles of heat shock proteines in antigen presentation and cross-presentation. Cur.Opin in immunol. 14: 4551.

66. Mathew A., Mathur S., Morimoto R. (1998) Heat shock response and protein degradation: regulation of HSF2 by the ubiquitin-proteasome pathway. Moll Cell. Biol. 18:5091-5098.

67. McLennan N., Masters M. (1998) GroE is vital for cell-wall synthesis. Nature 392: 139.

68. Mehlen P, Schulze-Osthoff K, Arrido AP (1996) Small stress proteins as novel regulators of apoptosis. J. Biol.Chem. 271,16510.

69. Melnick J., Argon Y. (1995) Molecular chaperones and the biosynthesis of antigen receptors. Immunol Today 16: 243-250.

70. Mizzen L (1998) Immune responses to stress proteins: Applications to infectious disease and cancer. Biotherapy 10:173-189.

71. Morimoto R (1998) Regulation of the heat shock transcriptional response: cross talk between a family of heat shock factors, molecular chaperones, and negative regulators. Genes Dev 12: 3788-3796.

72. Multhoff G., Botzler C., Issels R. (1998) The role of heat shock proteins in the stimulation of an immune response. Biol Chem., 379, 295-300.

73. Multhoff G., Botzler C., Jennen L., Schmidt J., Ellwart J., Issels R. (1997) Heat shock protein 72 on tumor cells: a recognition structure for natural killer cells. J. Immunol 158: 4341-4350.

74. Multhoff G., Hightower L. (1996) Cell surface expression of heat shock proteins and immune response. Cell stress & chaperon 1(3) 167-176.

75. Munk M., Schoel В., Modrow S., Karr R., Youhg R., Kaufmann S. (1989) T lymphocytes from healthy individuals with specificity to self epitopes shared by the mycobacterial and human 65-kilodalton heat shock protein. J Immunol 143: 2844-2849.

76. Noll A., Roggenkamp A., Heeseman J., Autenreith I. (1994) Protective role for heat shock protein-reactive a(3Tcells in murine yersiniosis. Infect Immun 62:2784-2791.

77. Ohtsuka K., Suzuki T.(2000) Roles of molecular chaperones in the nervous system. Brain Res Bull 53: 141-146.

78. Ortmann В., Androlewicz M., Cresswell P. (1994) MHC class I/p2 microglobulin complexes associate with the TAP transporter before peptide binding. Nature 368: 864-867.

79. Poccia F., Piselli P., Vendetti S., Bach S., Amendola A., Placido R., Colizzi V. (1996) Heat-shock protein expression on membrane of T cells undergoing apoptosis Immunology 88: 6-12

80. Pockley A.G., Shepherd J., Corton J.M. (1998) Detection of heat shockprotein 70 (HSP70) and anti-HSP70 antibodies in the serum of normal individuals. Immunol Inevst, 27, 367-377.

81. Ponomarev E.D., Tarasenko T.N., Sapozhnikov A.M. (2000) Splenic murine cytotoxic cells recognize surface HSP70 on culture-adapted EL-4 lymphoma cells. Immunol Lett., 74, 133-139.

82. Rallu M. Loones M., Lallemand Y., Morimoto R., Morange M., Mezger V. (1997) Function and regulation of heat shock factor 2 during mouse embryogenesis. PNAS94: 2392-2397.

83. Ritossa F.(1962) A new puffing pattern indused by heat shock and DNA in Drosophila Experientia 18: 571-573.

84. Roman E., Moreno C. (1997) Delayed-type hypersensitivity elicited by synthetic peptides complexed with Mycobacterium tuberculosis hsp 70. Immunology 90:52-56.

85. Saleh A., Srinivasula S., Balkir L., Robbins P., Alnemri.E. (2000) Negative regulation of Apaf-1 apoptosome by Hsp70. Nat. Cell Biol 2, 476-483.

86. Samali A, Cotter TG (1996) Heat shock proteins increase resistance to apoptosis. Exp. Cell Res. 223, 163.

87. Santoro M.(2000) Heat shock factors and the control of the stress response. Biochem. Pharmacol 59: 55-63.

88. Sapozhnikov A.M., Ponomarev E.D., Tarasenko T.N., Telford W.G. (1999) Spontaneous apoptosis and expression of cell surface heat-shock proteins in cultured EL-4 lymphoma cells. Cell Prolif., 32, 363-378.

89. Sato S., Fujita N., Tsuruo T. (2000) Modulation of Akt kinase activity by binding to Hsp90. PNAS 97:10832-10837.

90. Schild H., Arnold-Schild D., Lammert E. and Rammensee H-G. Stress proteins and immunity mediated by cytotoxic T lymphocytes 1999, Curr Opin Immunol, 11:109-113

91. Schirmbeck R., and Reimann J. (1994) Peptide transporter-independent stress protein-mediated endosomal processing of endogenous protein antigens for major histocompatibility complex class I presentation. Eur J. Immunol 24: 1478-1486.

92. Schlesinger M. (1990) Heat shock proteins. J.Biol Chem. 265:1211112114.

93. Shi Y., Mosser D., Morimoto R. (1998) Molecular chaperones as HSF1-specific transcriptional repressors. Genes Dev. 12: 654-666.

94. Shinnick T. (1991) Heat shock proteins as antigens of bacterial and parasitic pathogens. Curr.Top.Microbiol.Immunol. 167: 145-160.

95. Silva C., Silva R., Pietro R., Lowrie D. (1996) Characterization of T cells that confer a high degree of protective immunity against tuberculosis in mice after vaccination with tumor cells expressing mycobacterial hsp65. Infect.Immun. 64: 2400-2407.

96. Srivastava P. (1994) Heat shock proteins in immune response to cancer: the Fourth Paradigm. Experientia 50, 1054-1060.

97. Srivastava P.(2000) Roles of heat-shock proteins in innate and adaptive immunity. Nature Reviews 2, 185-194.

98. Steinhoff U., Zugel U., Hengel H., Rosch R., Munk M., Kaufmann S.H.1994) Prevention of autoimmune lysis by T cells with specificity for a heat shock protein by anti-sense oligonucleotide treatment. Proc. Natl. Acad. Set USA 91: 5085-5088.

99. Suto R., Srivastava P. (1995) A mechanism of a specific immunogenicity of heat shock protein-chaperoned peptides. Science 269: 1585-1588.

100. Suzue K., Young R. (1996) Adjuvant-free hsp70 fusion protein system elicits humoral and cellular immune responses to HIV-1 p24. J. Immunol 156: 873-879.

101. Swat W., Ignatowicz L., von Boehmer H., Kisielow P. (1991) Clonal deletion of immature CD4+8+ thymocytes in suspension culture by extrathymic antigen-presenting cells. Nature, May 9, 351 (6322), 150-3.

102. Terlecky S.(1994) Hsp 70s and lysosomal proteolysis. Experientia 50: 1021-1025.

103. Van Noort J., Van Sechel A., Bajramovic J., Ouagmiri M., Polman C., Lassmann H., Ravid R. (1995) The small heat shock protein alpha rystallin as a candidate autoantigen in multiple sclerosis. Nature 375: 798801.

104. Vanbuskirk A., Crump В., Margoliash E., Pierce S. (1989) A peptide binding protein having a role in antigen presentation is a member of the hsp70 heat shock family. J.Exp.Med. 170:p 1799-1809.

105. Verbeke P., Fonager J., Clark В., Rattan S. (2001) Heat shock response and aging: mechanisms and applications. Review Cell Biol Internal 25:9, 845-857.

106. Vigh L., Maresca B. and Harwood J.L. (1998) Does the membrane's physical state ontrol the expression of heat shock and other genes? TIBS, 23, 369-374.

107. Wadekar S.A., Li D., Periyasamy S., Sanchez E.R. (2001) Inhibition of heat shock transcription factor by GR. Mol Endocrinol, 15, 1396-1410.

108. Wand-Wurttenberger A., Schoel В., Ivanyi J., Kaufmann S. (1991) Surface expression by mononuclear phagocytes of an epitope shared with mycobacterial heat shock protein 60. Eur. J. Immunol 21, 1089-1092.

109. Welch W.J. (1992) Mammalian stress response: cell physiology, structure/ function of stress proteins, and implications for medicine and disease. Physiol Rev., 72(4), 1063-1081.

110. Wells A., Rai S., Salvato M., Band H., Malkovsky M. (1998) Hsp72-mediated augmentation of MHC class I surface expression and endogenous antigen presentation. Int Immunol 10: 609-617.

111. White F. (1980) The synthesis and possible transport of specific proteins by cells associated with brain capillaries. J. Neurochem. 35: 88-94.

112. Wu Y., Lee L„ Rollins D., Ching W. (1994) Heat shock- and alkaline pH-induced proteins of Campylobacter jejuni: characterization and immunological properties. Infect Immun. 62: 4256-60.

113. Xanthoudakis S., Nicholson D. (2000) Heat-shock proteins as death determinants. Nat. Cell.Biol. 2, El63-165.

114. Xu Q., Wick G. (1993) Surface expression of heat shock protein 60 on endotelial cells.

115. Zugel U., Kaufmann S.H. (1999) Role of Heat Shock Proteins in protection from and Pathogenesis of infectious diseases Clin.Microb.Rew. Jan, 19-39.