Аутоантитела к РНК в сыворотке крови опухоленосителей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Зайнуллина, Альфия Салиховна

• Зайнуллина, Альфия Салиховна
• кандидат биологических наук
• 1998

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Зайнуллина, Альфия Салиховна

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

ВВЕДЕНИЕ_

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ_10

1.1 Аутоантитела к нуклеиновым кислотам в норме и при развитии опухоли__10

1.1.1 Аутоантитела и их свойства_10

1.1.2 Клетки продуценты аутоантител_15

1.1.3 Функции аутоантител_

1.1.4 Механизм возникновения аутоантител_

1.1.5 Аутоантитела к РНК_

1.1.6 Аутоантитела в сыворотке крови у здоровых людей_

1.1.7 Аутоантитела в сыворотке крови при развитии опухоли_

1.2 Внеклеточные нуклеиновые кислоты__

1.2.1 Мембраноассоциированные РНК_

1.2.2 Рибонуклеиновые кислоты в сыворотке крови в норме и при развитии опухоли______

1.3 Заключение по обзору литературы_

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ_

2.1. Объекты исследований____

2.1.1 Экспериментальные животные___

2.1.2 Онкологические больные и здоровые доноры_

2.2 Выделение ДНК из тимуса теленка_

2.3 Выделение и очистка РНК из бесклеточной асцитной жидкости опухоли Эрлиха_

2.3.1 Получение бесклеточной асцитной жидкости и удаление опухолевых клеток из культуральной жидкости_

2.3.2 Выделение РНК из асцитной жидкости_

2.4 Определение количества РНК флуоресцентным методом в сыворотке крови____59

2.5 Гетеротрансплантация асцитной опухоли Эрлиха мышей крысам_________60

2.6 Определение жизнеспособности опухолевых клеток_60

2.7.Исследование секреции РНК при инкубации опухолевых клеток in vitro_62

2.8. Определение содержания аутоантител к РНК в сыворотке крови_____62

2.9 Статистическая обработка результатов_64

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ_66

3.1. Исследование секреции РНК опухолевыми клетками в культуральную среду_66

3.1.1 Контроль за жизнеспособностью опухолевых клеток при инкубации in vitro_66

3.1.2 Адаптация клеток опухоли Эрлиха к росту in vitro_70

3.1.3 Быстрое удаление опухолевых клеток из культуральной среды

щадящим способом_70

3.1.4. Динамика выхода РНК из клеток асцитной опухоли Эрлиха в культуральную среду______

3.2.Ауторегуляция секреции РНК клетками опухоли Эрлиха_76

3.3 РНК плазмы крови в норме и у опухоленосителей_78

3.3.1. Изменение содержания РНК в плазме крови

экспериментальных животных при развитии опухоли_

3.3.2 Содержание РНК в сыворотке крови онкологических больных

___79

3.4. Определение содержания аутоантител к РНК в сыворотке

крови_82

3.4.1. Разработка оптимальных условий для иммуноферментного анализа антител к РНК

3.4.1.1 Оптимизация условий сорбции РНК на планшетах_84

3.4.1.2. Влияние рН и состава буфера на сорбцию РНК_86

3.4.1.3. Влияние концентрации РНК на сорбцию ее на планшет_89

3.4.1.4. Подбор оптимального разведения тестируемой сыворотки

3.4.2. Исследование полиспецифичности аутоантител к РНК по перекрестным реакциям с РНК и ДНК антигенами_92

3.4.3. Обнаружение антител к РНК в сыворотке крови здоровых людей_____

3.4.4. Аутоантитела к РНК в сыворотке крови у онкологических больных_97

3.4.5. Аутоантитела к РНК в сыворотке крови при роже_104

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ_107

ВЫВОДЫ_128

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Аутоантитела к РНК в сыворотке крови опухоленосителей»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Проблема взаимосвязи опухолевого процесса и аутоиммунного состояния организма в последние годы привлекает все больше внимания исследователей. В литературе имеются сведения о высокой частоте возникновения злокачественных опухолей у больных с аутоиммунными патологиями (Ivorra et al., 1991; Flippo et al., 1993; Falcini et al., 1993). С другой стороны имеются данные о появлении признаков аутоиммунного состояния у пациентов, страдающих различными онкологическими заболеваниями (Peller, Kaufman, 1991; Dropcho, King, 1994). Аутоиммунное состояние у онкологических больных может быть вызвано деструктивными процессами, происходящими в организме опухоленосителей (Меклер, 1978; Wortman et al., 1975) или выделением опухолевыми клетками биологически активных соединений.

Давно уже известно, что опухолевые клетки в интактном состоянии выделяют в окружающую среду множество различных биологически активных веществ, в том числе и РНК (Винтер, 1968; Stroun et al., 1972).

Внеклеточная РНК обнаруживается в сыворотке крови опухоленосителей (Funaki et al., 1998; Occonnell et al., 1998), причем уровень ее содержания, как правило, превышает норму (Funaki et al., 1998; Блинов и др., 1981).

Нами было сделано предположение, что процесс синтеза аутоантител к РНК при опухолевом процессе может быть индуцирован внеклеточной РНК, активно секретируемой опухолевыми клетками.

Целью настоящей работы явилось исследование содержания РНК и аутоантител к РНК в сыворотке крови экспериментальных животных и онкологических больных.

Были поставлены следующие задачи:

1) Исследование динамики секреции РНК из опухолевых клеток.

2) Анализ содержания РНК в сыворотке крови у экспериментальных животных в норме и при развитии опухоли.

3) Исследование содержания РНК в сыворотке крови у здоровых людей и у онкологических больных.

4) Разработка тест-системы на основе иммуноферментного анализа для определения аутоантител к РНК.

5) Определение содержания аутоантител к РНК в сыворотке крови здоровых лиц и онкологических больных.

Научная новизна. Проведен сравнительный анализ содержания аутоантител к РНК в сыворотке крови здоровых людей и при различных аутоиммунных, онкологических и инфекционных заболеваниях.

На основе анализа содержания аутоантител к РНК в сыворотке крови здоровых людей дана характеристика порогового уровня содержания аутоантител к РНК у здоровых лиц разных возрастных групп.

Обнаружено, что в сыворотке крови у пациентов со злокачественными опухолями уровень содержания РНК (у 71% больных) и аутоантител к РНК (у 85% больных) выше по сравнению с ее содержанием в сыворотке крови здоровых лиц.

Выявлена корреляция между изменением уровня содержания РНК в сыворотке крови и стадиями развития опухоли Эрлиха у экспериментальных крыс.

Получены данные указывающие на возможность участия РНК, выделяемой опухолевыми клетками, в возникновении аутоиммунных симптомов у онкологических больных.

Практическая значимость. В результате проведенных нами исследований была разработана тест-система на основе иммуноферментного анализа (ИФА) для определения содержания аутоантител к РНК в сыворотке крови человека. Разработанная тест-система была апробирована при массовом обследовании больных в лечебно-профилактических учереждениях г. Казани: городской инфекционной больнице №1, терапевтическом отделении Медицинской академии, детской городской клинической больнице №1, Республиканском онкологическом центре МЗ РТ.

При помощи данной тест-системы нами были установлены пороговые значения уровня содержания аутоантител к РНК в сыворотке крови здоровых людей различных возрастных групп.

Полученные данные о повышении уровня содержания аутоантител к РНК в сыворотке крови у онкологических больных являются предпосылкой для применения тест-системы по выявлению лиц с повышенной вероятностью развития опухоли.

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Аутоантитела к РНК в сыворотке крови в норме и при

развитии опухоли

1.1.1. Аутоантитела к нуклеиновым кислотам и их свойства

Одним из основных свойств аутоантител к нуклеиновым кислотам является их полиспецифичнрсть и гетерогенность по степени сродства к своему антигену, то есть по аффинности. Как известно, аффинность любых антител зависит от того, насколько хорошо антигенная детерминанта стереохимически точно соответствует отдельному антигенсвязывающему участку антитела (Албертс и др., 1987; Кетти, 1991; Пол, 1989). Гетерогенная популяция антител полиспецифической сыворотки всегда содержит различные субпопуляции антител, обладающих различной аффинностью по отношению к определенной антигенной детерминанте. Поэтому в этом случае для оценки сродства антител к антигену используют термин - авидность, которая отражает суммарную усредненную характеристику связывания антитела с антигеном. Аутоантитела к ДНК, содержащиеся в сыворотке крови, при аутоиммунных заболеваниях широко варьируют по степени сродства к своему антигену (Цебецауер и др., 1987; Мс^епг ег а1.,1989; Бшеепк й а1., 1988), в отношении их также справедливо применение термина авидность.

Бтеепк с сотрудниками исследовали авидность аутоантител к ДНК по диссоциации их комплексов с ДНК при различных условиях. Используя широкий спектр градиентов концентраций солей, авторы выявили две фракции иммуноглобулинов, входящих в состав иммунных комплексов ДНК с антителами к ДНК,

названными ими как высокоавидные и низкоавидные антитела к ДНК. Иммунные комплексы с низкоавидными антителами к ДНК разрушались при увеличении концентрации солей до 50%, в то время как высокоавидные антитела к ДНК оставались связанными с ДНК, но они были чувствительны к повышению температуры. На основании этих экспериментальных данных ученые пришли к заключению, что взаимодействие между ДНК и низкоавидными антителами обусловлено чисто электростатическими связями. Авторы считают, что при образовании устойчивых комплексов ДНК с высокоавидными антителами к ДНК во взаимодействие вовлекаются вторичные водородные связи (8шеепк е! а1.Д988).

Впоследствии этот подход был использован ЫоБзегй с сотрудниками для дифференциации низко и высокоавидных аутоантител в сыворотке крови (КГозБегй а1.,1989). Авторы в работе применяли различные иммунологические методы, такие как метод Фарра, ПЭГ-преципитация и иммунофлуоресцентный анализ. Было обнаружено, что иммунофлуоресцентным методом выявляются как высокоавидные, так и низкоавидные антитела к ДНК, причем выявление составляет 100%. При использовании метода Фарра, который заключается в радиоиммунном анализе осажденных 50% сульфатом аммония иммунных комплексов, происходит диссоциация части комплексов ДНК с антителами. В этом случае комплексы ДНК с низкоавидными антителами разрушаются, и обнаруживается 72% комплексов, состоящих, в основном, только из высокоавидных антител. ПЭГ-осаждением было выявлено 24% положительных сывороток, и это были комплексы ДНК с низкоавидными антителами.

Очевидно, что высокоавидные и низкоавидные антитела к ДНК отличаются друг от друга по биохимическим свойствам.

Так, Цебецауэр с сотрудниками высказывают мнение, что высокоавидные аутоантитела к ДНК принимают участие в

образовании локальных структур иммунных комплексов в почках, а низкоавидные аутоантитела к ДНК образуют преимущественно макромолекулярные комплексы (Цебецауер и др., 1987).

Другим важным свойством, присущим аутоантителам, является полиспецифичность, то есть способность к перекрестным реакциям.

Специфичность антител определяется по способности отличать антиген, против которого они были получены от любого другого антигена. Однако, некоторые детерминанты антител могут быть общими для нескольких молекул различных антигенов, особенно для сходных молекул родственных видов животных. В этом случае некоторые из антител, образовавшихся на стимуляцию данным антигеном, могут связываться и с другими антигенами.

Аутоантитела к нуклеиновым кислотам обладают выраженной полиспецифичностью. Так, аутоантитела, связывающие ДНК, могут перекрестно реагировать как с нативной, так и с денатурированной ДНК (Vaishnov, Antony, 1989).

Koffler с соавторами, исследуя сыворотку крови больных аутоиммунными заболеваниями и иммунизированных кроликов методом гемагглютинации и преципитации, установили, что одноцепочечная ДНК содержит детерминанты для многих антител, реагирующих с двуцепочечными ДНК. Тем не менее авторы отмечают, что эти аутоантитела специфически узнают конформацию молекулы ДНК. Так. при использовании в качестве антигена синтетических полидезоксирибонуклеотидов, они не взаимодействовали с аутоантителами к одноцепочечной ДНК. Авторы высказывают мнение, что требуется уникальная конформация, или нуклеотидная последовательность, для того, чтобы произошла реакция с антителами к ДНК (Koffler et al., 1971).

Аутоантитела к РНК также обладают сходной полиспецифичностью в отношении вторичной структуры антигена

(Koffler etal., 1971). Авторы показали, что антитела к двуцепочечной РНК могут связываться с одноцепочечным полирибонуклеотидом, таким как поли А. В то же время эти антитела не вступают в реакцию с рибосомальной и транспортной РНК.

Особый интерес представляет проблема перекрестного реагирования аутоантител к РНК с ДНК.

Shur и Monroe в сыворотке больных системной красной волчанкой, используя методы иммунопреципитации и иммунофлуоресценции, обнаружили антитела к РНК, перекрестно реагирующих с денатурированной ДНК (Shur, Monroe, 1969).

Сходным образом антитела к ДНК могут связываться с РНК, преимущественно с двуцепочечной молекулой. Koffler с коллегами методом гемагглютинации изучали способность антител к нативной и денатурированной ДНК вступать в перекрестные реакции с другими антигенами. Учеными было обнаружено, что антитела к нативной ДНК взаимодействуют как с нативной, так и с денатурированной ДНК, а также с двуцепочечной РНК, в то время как антитела к одноцепочечной ДНК связывались, в основном, только с одноименным антигеном (Koffler et al., 1969).

Антитела к нуклеиновым кислотам могут перекрестно реагировать не только с близкородственными антигенами, но также с различными белками, входящими в состав комплексов нуклеиновых кислот и белков (Hassfeld et al., 1995; Reichlin et al., 1995; Chang et al., 1998), с кардиолипином (Koire et al., 1982), гликопротеинами (Faber et al., 1984). С другой стороны и антитела, индуцированные перечисленными антигенами, легко образуют иммунные комплексы с нуклеиновыми кислотами.

Так, ДНК может перекрестно реагировать с антителами к дерматансульфату (Ohnishi et al., 1989), фосфатидилинозитолфосфату и холестеролу (Stollar et al., 1989). Такая способность к

перекрестному взаимодействию между различными антителами и нуклеиновыми кислотами, возможно, происходит за счет похожего строения фосфатных или углеводных групп (в случае перекреста с фосфолипидами и гликопротеидами). Перекрестные реакции антител к нуклеиновым кислотам с антигенами различного происхождения могут иметь место вследствие низкой авидности аутоантител.

Существует и другая точка зрения. Кажущиеся перекрестные реакции между антителами к ДНК и РНК, а также между аутоантителами к РНК и ДНК могут быть связаны с гетерогенностью популяций антител в исследуемых сыворотках.

ЕПа1 и БсЬесЬгег, анализируя сыворотку ^М^КВ мышей ингибированием Н3-тРНК и С14-ДНК обнаружили, что все сыворотки, связывающие ДНК, также являются позитивными и к тРНК. Ими было доказано, что антитела, связывающие тРНК и ДНК, представлены разными популяциями антител, так как ингибирующее действие двух популяций различных нуклеиновых кислот были неодинаковыми (ЕИа^ ЗсЬесМег, 1976).

Ное1 с коллегами методом радиоиммунного анализа изучали корреляцию активности болезни системной красной волчанки с уровнем содержания антител к РНК и ДНК. Было обнаружено, что уровень антител к РНК и к ДНК параллельно возрастает с развитием болезни. Возможность выявления антител к РНК, в результате перекрестной реакции антител к ДНК с РНК, авторы исключили, так как, во-первых, антитела к ДНК не ингибировали реакцию антител с РНК. Во-вторых, добавление немеченой РНК не влияло на активность связывания антител с ДНК. Авторы, таким образом, пришли к заключению, что антитела принадлежат к разным популяциям (Ное1е1а1., 1991, 1993).

Недавно было обнаружено еще одно свойство аутоантител. Это - их каталитическая активность. Такие аутоантитела получили название абзимы (от английских слов "antibody" и "enzyme"). Они обладают гидролизующей активностью в отношении ДНК, РНК, пептидов (Gabibov et al., 1994; Guialis et al., 1994; Sun et al., 1995). Известные на сегодняшний день абзимы были выделены из сыворотки крови пациентов с аутоиммунными и лимфопролиферативными заболеваниями, а также из сыворотки крови здоровых людей (Гололобов и др., 1993; Козырь и др., 1996; Китон и др., 1995).

Проведенный Гололобовым с сотрудниками иммуноферментный анализ показал, что каталитические антитела принадлежат к классу иммуноглобулинов G. Авторами было проведено сравнительное изучение кинетики гидролиза плазмидной ДНК каталитическими антителами и панкреатической ДНКазой I. Результаты анализа подтвердили сходность механизмов разрыва ДНК ферментом ДНКазой I и антителами (Гололобов и др., 1993).

Аутоантитела сыворотки крови больных СКВ обладают не только ДНК-, но так же РНК-гидролизующей активностью. Бунеева с сотрудниками методом гель-электрофореза показали, что каталитические антитела гидролизуют как дезокси-, так и рибоаденилат, причем последний с большей эффективностью (Бунеева и др., 1994).

1.1.2. Клетки - продуценты аутоантител.

Многочисленные исследования, в которых было показано, что аутоантитела самой разной специфичности постоянно выявляются в сыворотке крови здоровых лиц, привели к поиску продуцентов аутоантител. Вскоре была выявлена новая, особая субпопуляция В-

лимфоцитов ответственная за продукцию аутоантител. Эта субпопуляция отличается от всей остальной популяции В-клеток наличием на ней специфического маркера Т-лимфоцитов. Этот маркер у мышей получил название Ьу-1, а у человека СД5 (Сидорова, 1993). Позже было обнаружено, что фенотип Ьу-1+-В-клеток сходен с фенотипом относительно незрелых В-лимфоцитов. Кроме маркера Ьу-1, представленного на поверхности Ьу-1+-В-клеток, других маркеров Т-лимфоцитов эти клетки не несут. Для них типично наличие поверхностных антигенов, характерных для всех В-клеток - иммуноглобулинов классов М и в, а также маркеров главного комплекса гистосовместимости.

Несмотря на выраженное сходство с В-лимфоцитами, субпопуляция Ьу-1+-В-клеток по ряду признаков отличается от остальных В-клеток. Отличительной особенностью Ьу-1+-субпопуляции является ее относительная автономность. Ьу-1+-клетки не регулируются факторами, образующимися при иммунизации человека и животных и, по-видимому, не подвергаются и отрицательной селекции, то есть не выбраковываются при становлении иммунной системы (Сидорова, 1993).

Клетки Ьу-1+-В рано появляются в онтогенезе и способны к спонтанной секреции ^М, значительную часть которых составляют аутоантитела. У мышей эти клетки появляются уже через 8 часов после рождения, достигая взрослого уровня спустя 2 - 3 недели и составляют примерно 50 % всех клеток селезенки. С возрастом происходит их перераспределение и снижение общего количества.

У человека аналогичная субпопуляция В-клеток (СД5+-В-клетки) была обнаружена в селезенке 18-22 - недельного плода, где они составляют 40 - 60 % всех В-клеток. Как и Ьу1+-В-клетки мышей, они несли поверхностные маркеры главного комплекса

гистосовместимости, а также поверхностные IgM и IgG. С возрастом количество СД5+-В-клеток снижается. У взрослых людей они составляют 10-20 % всех B-клеток (Сидорова, 1993).

Исследования последних лет свидетельствуют о существовании, по крайней мере, двух субпопуляций В-клеток, вырабатывающих аутоантитела, названные СД5+ и СД5-В-клетками.

Suzuki с соавторами (Suzuki et al., 1990) при изучении В-клеток, выделенных из периферической крови больных системной красной волчанкой, обнаружили две субпопуляции В-клеток, ответственных за синтез аутоантител к ДНК. Результаты анализов показали, что уровень секреции антител к ДНК СД5-В-клетками тесно коррелирует с уровнем выработки поликлональных иммуноглобулинов теми же самыми субпопуляциями. Напротив, выработка антител к ДНК СД5+-В-клетками не зависит от секреции поликлональных иммуноглобулинов другими субпопуляциями. Авторы объясняют эти результаты предположением, что при развитии системной красной волчанки существуют две субпопуляции В-клеток, вырабатывающие антитела к ДНК с различными механизмами индукции: один (СД5+) независимо секретирует антитела к ДНК, другой (СД5-) вырабатывает антитела к ДНК вследствие поликлональной B-клеточной активации.

Повышение количества СД5+-В-клеток обнаруживается при различных органонеспецифических аутоиммунных заболеваниях, таких как ревматоидный артрит, СКВ, синдром Шегрена и других (Youinon et al., 1993).

Некоторые B-клеточные опухоли также несут СД5+ и Ly-1 маркеры (Lanier et al., 1981; Youinon et al., 1993). При неходжекинской лимфоме у более половины пациентов на малых лимфоцитах обнаруживаются СД5-антигены. СД5+-В-клепси - потенциальные

продуценты аутоантител встречаются у 95% больных хроническим лимфолейкозом. Существует взаимосвязь между В-лимфопролиферативньЕМи заболеваниями и аутоиммунными нарушениями. Так, у больных хроническим лимфолейкозом в одном из трех случаев наблюдается аутоиммунная гемолитическая анемия, у 2% больных - иммунная тромбоцитопения. В свою очередь, при аутоиммунных заболеваниях встречается злокачественное трансформирование В-клеток. Например, при синдроме Шегрена у 5 - 10% больных развивается лимфома (Youinon et al., 1993).

1.1.3.Функции аутоантител

В норме иммунная система взрослого организма толерантна к собственным антигенам, с которыми она имела контакт в период эмбриогенеза. Присутствие в сыворотке крови здоровых людей в небольшом количестве аутоантител свидетельствует о том, что естественная толерантность не является абсолютной. Постоянное их обнаружение в сыворотке крови здоровых людей косвенно указывает на то, что аутоантитела в норме, по-видимому, выполняют определенные функции.

Grabar выдвинул идею о том, что способность организма образовывать аутоантитела является нормальной физиологической функцией (Grabar, 1976). По его мнению, аутоантитела участвуют в связывании и удалении токсичных продуктов метаболизма и деструкции клеток, то есть аутоантитела функционируют как система очистки организма от продуктов распада.

Предполагается, что такая защитная физиологическая функция аутоиммунитета действует при старении (Бутенко, 1993), интенсивных физических нагрузках, связанных с усилением метаболических процессов (Шубик, Левин, 1985).

По мнению Клемпарской и Шальновой (Клемпарская, Шальнова, 1978) аутоантитела обладают двояким действием. В

норме в крови всегда имеется определенное количество аутоантител, не обладающих цитоксическим действием и выполняющих защитную роль. Они связывают продукты повреждения тканей при травмах и обеспечивают их удаление из организма. Если в организме образуется большое количество цитоксических аутоантител с повышенным сродством к определенным тканям, а также возникают активные сенсибилизированные лимфоциты, то наступает нарушение обмена, лизис клеток, содержащих соответствующий антиген, и на месте повреждения возникает воспалительная инфильтрация. Таким образом, биологическое действие аутоантител может быть и полезным и вредным, что зависит от их количества, прочности связывания с клетками и времени появления по отношению к моменту повреждения.

В работе Ackermann-Schopf с сотрудниками приведены результаты исследования аутоантител к клеткам различных слоев кожи человека. Обычно нормальные аутоантитела сыворотки крови не достигают клеток эпидермиса кожи. В том случае, когда под влиянием каких-либо причин, например, ожога, изменяется проницаемость кожи, то происходит контакт аутоантител с клетками и повреждение клеток. При аутоиммунизации антигенами кожи после ее травмы (ожога) возникают цитотоксические аутоантитела к базальному слою эпидермиса, которые отсутствуют у здоровых людей. Методом непрямой иммунофлуоресценции было показано "заселение"' наружного слоя эпидермиса естественными аутоантителами сыворотки крови здоровых людей и обнаружено их цитотоксическое действие на аутологичные и аллогенные клетки наружного слоя эпидермиса. На основании этих данных авторы пришли к выводу, что аутоантитела к наружному слою кожного эпидермиса являются естественными и обнаруживаются у здоровых людей. Аутоантитела к базальному слою возникают только после

нанесения травмы (ожога) и участвуют в отторжении аутотрансплантанта (Ackermann-Schopf et. al., 1974).

Полетаев в своей работе высказывает мнение, что аутоантитела являются модуляторами главных функционально-гомеостатических событий на молекулярном уровне, влияя на активность всех органов и тканей, а также на состояние макроорганизма в целом. Автор считает, что у высших животных и человека синтез аутоантител ко всем собственным аутоантигенам происходит в течение всей жизни и является важным физиологическим процессом, а между нормой и патологией имеются только количественные различия. Изменение содержания или аффинности аутоантител к некоторым аутоантигенам относительно уровня нормы может привести к патологическим изменениям в организме (Poletaev, 1993).

Предполагается, что аутоантитела выполняют функцию "первой линии" защиты организма от патогенов (Ибрагимов, 1989). К этому предположению привели две следующие группы фактов: во-первых, раннее появление и широкое представительство продуцентов аутоантител - Ly-1-В-клеток у мышей и СД5+-В-клеток у человека в онтогенезе (Сидорова, 1993) (о чем упоминается в разделе 1.1.2.), во-вторых, постоянная спонтанная секреция аутоантител самой разной специфичности при инфекционной нагрузке на организм.

Первичный ответ организма на чужеродный антиген, скорее всего, заключается в выработке в небольшом титре аутоантител. Об этом свидетельствуют данные о повышении выработки аутоантител, в том числе и аутоантител к нуклеиновым кислотам в сыворотке крови при развитии ряда заболеваний не аутоиммунной природы. Так, Ястребова и Ванеева (Ястребова, Ванеева. 1989) при исследовании методом ИФА сыворотки крови пациентов с

остеомиелитом и бактериальным эндокардитом обнаружили увеличение выработки аутоантител к ДНК по сравнению с их содержанием в сыворотке крови у здоровых людей.

При многих аутоиммунных заболеваниях в сыворотке крови выявлен широкий спектр аутоантител к компонентам трансляционного аппарата, например, к транспортной и рибосомальной РНК и их комплексам с рибосомальными белками (Bunn et al., 1986; Uchiumi et al, 1994).

Эти данные указывают на возможное участие антинуклеарных антител в регуляции процессов трансляции в иммунокомпетентных клетках.

Uchiuni с сотрудниками (Uchiumi et al, 1991, 1995, 1997) обнаружили в сыворотке крови больных системной красной волчанкой антитела к рибосомальным белкам и антитела к домену 28S РНК, который ответственен за активность фермента ГТФ-азы. Было обнаружено, что эти антитела ингибировали связывание фактора элонгации и активность ГТФ-азы.

Tsusaka с соавторами (Tsusaka et al, 1996) исследовали антитела к ДНК из сыворотки крови больных системной красной волчанкой. Эти антитела перекрестно реагировали с 18S рибосомальной РНК и ингибировали in vitro трансляцию глобиновой матричной РНК на 36 50%. При обработке лизата ретикулоцитов ДНК-азой ингибирование трансляции возрастало до 67 - 79%. Таким образом, патологический механизм, вызванный антителами к нуклеиновым кислотам, может регулировать процессы трансляции и синтеза белков.

В работе Koren с соавторами показано, каким образом, происходит проникновение антител внутрь клетки и дальнейшее их участие в регуляции клеточных процессов (Koren et al, 1995). Они исследовали мышиные моноклональные и человеческие аффинно-

очищенные антитела к дц ДНК по их способности повреждать культуру клеток свиньи. Из двух типов мышиных антител, один тип первоначально связывался с клеточной поверхностью, а затем антитела этого типа поэтапно проникали внутрь клеток, и локализовались в цитоплазме и ядре. В то время как антитела второго типа связывались с поверхностью клеток, не проникая внутрь. Аффинно-очищенные антитела к дцДНК из сыворотки крови больных СКВ обладали теми же свойствами, что и мышиные антитела. Результаты этих исследований наводят на мысль, что и нефритогенные мышиные аутоантитела к дцДНК, и субпопуляции человеческих антител к дцДНК могут оказывать повреждающее влияние на клетки культуры почки с участием двух различных патогенетических механизмов. Связывание антител с клеточной поверхностью приводит к повреждению и нарушению функций клеточной мембраны, а проникновение антител в живые клетки влечет за собой дисфункции клеточного цикла.

Наличие у аутоантител перекрестнореагирующих и взаимнокомлементарных идиотипов позволяет аутоантителам взаимодействовать с большим количеством молекул внутри того же набора иммуноглобулинов. Из этого следует, что аутоантитела, по-видимому, играют существенную роль в становлении идиотипического репертуара, регулируя концентрацию идиотипов (ЬипёЫБ! а1., 1989).

Каков механизм регуляторного действия аутоантител на уровень иммунного ответа организма на вводимые антигены?

Вопрос этот до конца не изучен. Но существует мнение, что аутоантитела, взаимодействуя с локализованными на мембране структурами, запускают процесс дифференцировки и пролиферации лимфоцитов, тем самым, повышая уровень ответа (Я^сИНп е1 а1., 1995).

В настоящее время считается общепризнанным, что иммунный ответ на "свои" антигены регулируется по типу идиотип-антиидиотипического взаимодействия (Jerne, 1974).

Антидиотипические антитела с разной степенью частоты обнаруживаются как у людей, так и у животных (Гороховец и др, 1989; Китон и др., 1995; Косицкая и др., 1990).

Существует предположение, что часть антиидиотипических антител представляют собой как бы внутренний образ экзогенного антигена, который связывается с теми же участками антитела, что и чужеродный антиген (Porzelly, 1993; Fields et al, 1995).

Основным моментом, определяющим роль

антиидиотипических антител в организме, является их способность вступать в реакцию с соответствующими структурами антител. Поскольку идиотипсодержащие антитела и антиидиотипические антитела являются иммуноглобулинами, то возникает вопрос, какая же из этих молекул при взаимодействии играет роль антигена, и какая -антитела. Как известно, антиген в составе образующегося иммунного комплекса антиген-антитело не подвергается существенным изменениям, и антиген освобождается в неизменном виде при избирательной инактивации антигенсвязывающего центра молекулы антитела.

В то же время молекула антитела после соединения с антигеном подвергается структурным изменениям. Эти изменения приводят к активации Fab-фрагмента и повышению способности молекулы присоединяться к соответствующим рецепторам клетки и комплементу. Молекула антитела, связанная с антигеном, не чувствительна к редуцирующим агентам, и по активации (или инактивации) под воздействием таких веществ одного из компонентов иммунного комплекса можно определить, какая из них играет роль антигена, а какая - антитела. В работе Сафронова и

Косицкой представлены результаты такого эксперимента. В опытах на сенсибилизированных животных антиидиотипические антитела, как и антиген, вызывали местные кожные реакции. После обработки комплекса идиотип - антиидиотип редуцирующим агентом, разрушающим антитела, оставшийся субстрат вызывал те же самые реакции, как и исходные антиидиотипические антитела. Результаты этих исследований доказывают, что в комплексе идиотип -антиидиотип идиотипом является антитело, а антиидиотип играет роль антигена (Сафронов, Косицкая, 1990). И, поскольку, антиидиотипические антитела представляют собой внутренний образ чужеродного антигена, они, по-видимому, стимулируют связывающую способность аутоантител (ЗЬоег^еМ, 1995).

1.1.4. Механизм возникновения аутоантител

Относительно возникновения аутоантител в ответ на внедрение чужеродных антигенов имеется несколько предположений. Возможно, аутоантитела возникают вследствие поликлональной активации В-лимфоцитов под влиянием микробных и вирусных антигенов. Появление аутоантител может быть обусловлено наличием перекрестно реагирующих детерминант у чужеродных и собственных антигенов (Ибрагимов, 1989; Рыкова и др., 1990).

Возможной причиной появления аутоантител может быть сходство некоторых антигенных детерминант микроорганизма с молекулами макроорганизма (Ваиш а1., 1996). В пользу этого механизма развития аутоиммунной патологии можно привести следующие примеры.

При гепатите В (Ьепкеу е1 а1., 1985), роже (Рыжикова и др., 1986), в начале первичного острого ревматизма (Ьес1Ьепег а!., 1980)

довольно часто обнаруживаются аутоантитела, реагирующие с эпителиальными клетками тимуса и базального слоя кожи.

Возникновение ревматоидного артрита может быть обусловлено проникновением в организм стрептококковой инфекции (РоггеШ, 1993). В такой ситуации в организме развивается нормальный иммунный ответ на антигены стрептококка. Эти антитела способны реагировать не только с чужеродными антигеном, но и с антигенами суставов. Таким образом, сходство или идентичность антигенов макроорганизма и микроорганизма может привести не только к иммунному ответу на заражение, но и к аутоиммунному ответу на собственные антигены, что приводит к развитию аутоиммунных заболеваний. Возникновение аутоиммунитета в этом случае можно рассматривать как результат молекулярной мимикрии (УошатоШ, 1994).

Возникновение аутоантител, помимо инфекций может быть вызвано и многими другими причинами. Одной из таких причин является повреждение тканей, вследствие чего освобождаются скрытые антигены или детерминанты, которые организм воспринимает как "чужие" (Лямперт, 1988;К1гк1а5-М1^1 ег а1., 1993).

Так, при повреждении стенок семявыводящего канальца организм начинает вырабатывать в большом количестве аутоантитела к клеткам Сертоли, которые участвуют в сперматогенезе. С выработкой антител к клеткам Сертоли происходит нарушение образования спермы. ШуоэЫ с коллегами методом ИФА обнаружили аутоантитела к клеткам Сертоли класса ^М в 42 из 365 исследованных нормальных сывороток человека обоего пола. Авторами было замечено, что такие аутоантитела индуцируют нарушение сперматогенеза даже у здоровых лиц при повреждении стенок семявыводящего канальца, так как в этом

случае происходит контакт аутоантител с клетками Сертоли (Hiyoshi et al., 1991).

Часто аутоантитела образуются к собственным компонентам тканей, измененным в результате воздействия лекарственных веществ (Буковская и др., 1993; Castro-Mussot et al., 1991), а также неблагоприятных факторов, таких как: холод, ожог, ультрафиолетовое и ионизирующее облучение (Ackrmann-Schopf et al., 1974; Stollar, 1989; Чернушенко и др., 1985). Поврежденная ткань приобретает антигенные свойства и стимулирует выработку аутоантител, которые вызывают дальнейшую деструкцию ткани, и, таким образом, процесс становится самоподдерживающимся.

1.1.5. Аутоантитела к РНК

Одним из характерных свойств антител к РНК является их способность перекрестно реагировать с ДНК, белками и другими антигенами. На полиспецифичность аутоантител к РНК указывают многие исследователи, и эти сведения представлены нами в разделе 1.1.1. Наряду с полиспецифичными антителами существуют антитела к РНК, обладающие строгой специфичностью к антигену (таблица 1), в том числе к определенным последовательностям нуклеотидов (Chu et al., 1991; Uchiumi et al., 1991). Такие антитела, как правило, образуются при иммунизации животных синтетической (Конов, Подгородниченко, 1988) и вирусной РНК (Spenser-Green et al., 1986).

Конов и Подгородниченко обнаружили, что у кроликов образуются специфические антитела к РНК, при иммунизации животных модифицированной РНК, причем наибольшей специфичностью обладали антитела к двуцепочечным РНК и модифицированной поли-А (Конов, Подгородниченко. 1988).

Spenser-Green с сотрудниками заметили, что при иммунизации мышей вирусной двуцепочечной РНК вакциной образуются только антитела, специфичные к двуцепочечной PHK(Spenser-Green et al, 1986).

Специфичные антитела к РНК появляются не только при иммунизации. Так, например, были описаны антитела строго специфические к различным типам РНК - транспортной, рибосомальной, вирусной в сыворотках крови больных аутоиммунными заболеваниями и у животных с аутоиммунными синдромами (Friedman et al, 1996; Matsumura et al, 1996). Такие антитела к РНК могут узнавать общую конформацию молекулы РНК. Matsumura с сотрудниками методом радиоиммунного анализа обнаружили антитела к транспортной РНК, распознающие общую третичную конформацию молекулы РНК. Авторы, используя методы делеционного мутагенеза последовательностей тРНК, показали, что для связывания с антителами необходимо присутствие обеих петель молекулы тРНК - D и Т-\|i-C (Matsumura et al., 1996).

В работе Bunn и Mathews показана способность антител к РНК узнавать различия в отдельных участках структуры РНК. Авторы исследовали иммунные комплексы антител с аланиловой тРНК. Они обнаружили, что такие антитела способны различать два семейства аланиловых тРНК, которые содержат одинаковый участок антикодоновой петли, но различаются в участке антикодоновой ножки и в других частях молекулы. Исследователи, используя методы РНКазной обработки и экспериментов со связыванием различных олигонуклеотидов, локализовали антигенные детерминанты на молекулы тРНК. Для связывания с антителом было необходимо 7-9 нуклеотидных пар, составляющих антикодоновую петлю плюс 1-2 добавочных основания на их 3' концах (Bunn, Mathews, 1986; 1986(a)).

В работе Uchiumi с сотрудниками также было показано, что антитела к РНК могут узнавать различия в нуклеотидных последовательностях (Uchiumi et al., 1994, 1995). Они исследовали антитела к ГТФ-аза-активному центру 28S рибосомальной РНК. Ученые установили, что защищенные от действия РНКазы фрагменты составляют около 68 нуклеотидов. Применяя методы сайт-специфического и делеционного мутагенеза, было установлено, что измененные последовательности РНК обладали сниженной способностью связывать антитела. Таким образом, было доказано, что способность к связыванию с антителами данного участка РНК зависит от его последовательности и конформации (Uchiumi et al. 1991, 1997).

За последние несколько лет были изучены и идентифицированы реактивные домены некоторых низкомолекуряных ядерных РНК, уточнены их местоположения.

Deutscher и Кеепе, секвенируя РНК, обнаружили, что участок из 40 нуклеотидов, представляющий петлевой домен, находится на шпильке II (Ui) РНК и является иммунореактивным доменом. Эти антитела к (Ui)PHK распознавали, в основном, конформацию эпитопа (Deutscher, Кеепе, 1988).

Van Venroy с коллегами (Van Venroy et al., 1990) обнаружили, что второй главный участок эпитопа локализован на петлевом домене (шпильке IV) (Ui) РНК. В дальнейших работах было замечено, что, в случае взаимодействия антител со шпилькой IV (Ui)PHK, конформация молекул РНК является необходимым условием для связывания с антителами (Hoet, Kaster et al., 1993).

В литературе имеются сведения о случаях сосуществования пар антител к разным антигенам. Например, при системной красной волчанке обнаруживаются антитела к ГТФаза-активному центру 28S рибосомальной РНК и к рибосомальным фосфопротеидам (Р-

белкам) (Uchiumi et al. 1991; Chu et al, 1991; Sato et al, 1994), при синдроме системной красной волчанки антитела к (Ui)PHK присутствуют одновременно с антителами к (и)РНП (Deutscher, Keene, 1988), антитела к тРНК встречаются совместно с антителами к аланил - тРНК синтетазе (Bunn et al, 1986; Rould et al, 1992).

В работе Uchiumi с соавторами (Uchiumi et al. 1991, 1994) описаны обнаруживаемые одновременно антитела к ГТФаза-активному центру 28S рибосомальной РНК и к Р-белкам. Антитела к 288-антигенной-рРНК также как и антитела к Р-белкам ингибировали активность ГТФазы и связывание фактора элонгации. Поскольку Р-белки, вероятно, напрямую не связываются с рРНК, то для объяснения присутствия антител к 288-антигенной-рРНК в сыворотке крови СКВ больных, содержащих антитела к Р-белкам, механизм идиотип-антиидиотип не подходит. Скорее всего, иммунный ответ, направленный на ГТФазный домен, расположенный на 60S субъединице, является антиген направленным ответом. При дальнейших исследованиях было обнаружено, что колебание уровня антител к Р-белкам и к 28S-антигенной-РНК у одного больного было параллельным, в то время как у другого больного анти-288-антигенный-рРНК ответ предшествовал Р-белковому ответу (Chu et al, 1991). Так, специфичность аутоантител к нуклеотидным последовательностям позволила авторам судить о наличии сходства доменов в Р-белках и нуклеотидах в 28SPHK (Chu et al, 1991; Uchiumi et al. 1991, 1994).

Для объяснения возникновения антител к (Ui)PHK был также предложен механизм идиотип-антиидиотипического взаимодействия (Deutscher, Keene, 1988). Согласно этой гипотезе антитела к шпильке II возникают как результат антиидиотипического ответа на (Ui)PHn специфичного А-белка, который связывает участок длиной 7 нуклеотидных пар на петле шпильки II (Scherly et al, 1990; Tsai et al.

1991). Такой механизм не объясняет образование аутоантител к шпильке IV, так как еще не обнаружено связывание белка со шпилькой IV (Ui)PHK (Van Venrooij et al., 1990). Более того, имеются работы, подтверждающие, что связывающий участок антител со шпилькой II на (Ui)PHK отличается от связывающего участка на Ui - А-белка (Hoet et al., 1992, 1993).

Вышеперечисленные данные различных авторов свидетельствуют о присутствии в сыворотке крови при аутоиммунных заболеваниях у людей и экспериментальных животных различных антител к РНК, которые связываются с нуклеотидами, оцРНК. дцРНК и вирусной РНК (Koffler et al., 1969; Shur, Monroe, 1969; Talal et al., 1971). Считается, что образование антител к дцРНК может быть связано с поликлональной активацией B-клеток; с перекрестной реакцией с чужеродными РНК (например, вирусной), ведущей к молекулярной мимикрии; с идиотип -антиидиотипическим ответом или прямым распознаванием РНК-комплекса.

Действительная причина образования этих антител остается пока невыясненной. На первый взгляд механизм идиотип -антиидиотипического взаимодействия кажется подходящим для всех трех систем (аланиловой тРНК, 288-рибосомальной-РНК, (Ui)PHK). В каждом случае специфические антитела к РНК сопровождаются присутствием антител активно направленных к белковому компоненту сложного нуклеопротеидного комплекса, связывающегося с белком в тесной близости с РНК последовательностями. Другие результаты не согласуются с этой идеей. Так, Bunn с соавторами, применяя конкурентный анализ, выяснили, что использование избытка аланиловой тРНК не ингибировало связывание антител системы Р-12 (антител к тРНК и аланил-тРНК-синтетазе) с синтетазой (Bunn et al., 1986).

Таблица 1.

Содержание антител к РНК в сыворотке крови больных

с аутоиммунными заболеваниями (Hoet, Venrooij, 1992)

источник антигена РНК заболевания тип РНК

-специфичность

АТ

Поли И - поли Ц дц РНК СКВ (18 -60%) синтетическа

Поли Г - поли Г дц РНК СКВ я

Поли А - поли У дц РНК (63%)СЭСГ(20%) РНК

dT, гА ДНК: РНК СКВ (44-53%)

Поли (АДФ- гибрид СКВ

рибоза) ПолиАДФ СКВ (51-73%)

Поли А рибоза СКВ(91%),РА(87%)

У Поли А (оц адаадащж)

Поли У РНК) ССД(10СР/о),СКВ(1?/о)

Урацил

ПолиУ(оц

РЖ)

Вирусная РНК дц РНК СКВ (27%) чужеродны

MS2 РНК оц РНК СКВ (77%) е РНК

Дрожжевая РНК оц и дц РНК СКВ (9%)

РибооомьжпегакЬМл рРНП и рРНК СКВ(Ж),РА(ЗСР/о) рРНК

рРНК Е. coli рРНК СКВ

РНК клеток Не рРНК СКВ

La 28рРНК из ГТФ- СКВ

рРН К ив клеток № La центра

РНК из клеток Не и, РНК шпильки анти (и,) РНП (U) РНК

La П поз. больные

РНК из клеток Не ЦРНКдюильки анти (и,) РНП

La ЩУ позит. больные,

РНК из клеток Не 2,2,7 триметил СКВ (4%),ССД

La гуанозин кап

(и) РНК

тРНК Е. coli тРНК СКВ тРНК

РНК из клеток Не тРНК СКВ

La тРНК- иниц. мет. Миозиты

РНК из клеток Не тРНК™ из Миозиты

La антикодоновой

РНК из клеток Не петли

La

Относительно антител к 28S рРНК было высказано предположение, что Р-белки напрямую не связываются с 28SpPHK (Chu et al, 1991). В случае с антителами к (Ui)PHK, как известно, один из главных эпитопов (Ui)PHK - шпилька-IV, не связан с белком (Hoet et al, 1993), также как главная антительная детерминанта на шпильке-П (Ui)PHK различается от связывающих участков Ui - А белков (Hoet et al, 1993; Scherly et al, 1990; Tsai et al, 1991).Многие из этих результатов отвергают механизм образования аутоантител к РНК по типу идиотип-антиидиотипического взаимодействия. Хотя, в случае с антителами к аланиловой тРНК данный механизм не может быть исключен.

1.1.6. Аутоантитела в сыворотке крови у здоровых людей

Наличие аутоантител в сыворотке крови у здоровых людей совсем недавно рассматривали в качестве "фона" при диагностике различных аутоиммунных заболеваний. В последнее время к таким аутоантителам проявляется большой интерес.

Известно, что в здоровом организме всегда присутствуют в низком титре аутоантитела к различным собственным антигенам. Уровень их содержания колеблется в широких пределах и зависит от физиологических состояний организма (возраста, стресса, беременности, физических перегрузок) и от факторов среды.

Так, в работе Добродеевой и Суслоновой показано, что уровень содержания аутоантител к нуклеиновым кислотам в сыворотке крови здоровых людей зависит от сезона года и климатических условий. Влияние факторов среды на содержание аутоантител наиболее резко выявляется зимой и в летний период. В зависимости от характера и типа аутоантител, частота их

обнаружения и среднее содержание в сыворотке в 3 - 5 раз выше в

зимнее время, чем в летние месяцы (Добродеева, Суслонова, 1990). Однако повышение уровня содержания аутоантител к нуклеиновым кислотам в сыворотке крови не является специфическим для высоких широт и может наблюдаться при солнечно-тепловых перегревах (Арутюнов, 1985).

Уровень аутоантител к нуклеиновым кислотам может повышаться при интенсивных физических нагрузках во время тренировочных занятий и соревнований, так как интенсификация обменных процессов приводит к образованию большого количества аутоантител (Арутюнов, 1985). Умеренные нагрузки, по-видимому, способствуют нормализации физиологической системы аутоиммунитета, в то время как большие нагрузки, характерные для современного спорта, вызывают интенсификацию образования аутоантител. Численность существующих в организме клонов лимфоцитов, способных к синтезу аутоантител, по-видимому, поддерживается на минимальном уровне за счет активного функционирования Т-супрессоров. При интенсивных физических нагрузках у части спортсменов содержание Т-супрессоров в крови снижается, нарушается их нормальное взаимодействие с Т-хелперами, что и приводит к гиперпродукции аутоантител (Шубик, Левин, 1985).

Уровень содержания аутоантител в сыворотке крови в норме варьирует в широких пределах в различные периоды онтогенеза.

Повышение уровня нормальных аутоантител у людей по мере их старения наблюдали многие авторы, одновременно ими отмечено и снижение иммунологической реактивности по отношению к чужеродным антигенам (Hooper et al, 1972; Kasjanova et al, 1984). В пожилом возрасте количество органоспецифических аутоантител у людей снижается, особенно у женщин. По мнению Клемпарской Н.Н. и Шальновой Г.А. постепенное формирование аутоиммунных реакций у стареющих людей и экспериментальных животных

является одной из основных причин угнетения способности к активному иммуногенезу (Клемпарская, Шальнова, 1978).

Hooper с сотрудниками исследовали содержание различных аутоантител в сыворотке крови 3492 человек сельского населения в возрасте 21-94 лет. Методом непрямой флуоресценции они выявили аутоантитела к ядрам лейкоцитов, клеткам слизистой кишечника и щитовидной железы. Авторами было замечено, что с возрастом частота случаев выявления положительных реакций увеличивается, но после 75 лет этот показатель снижается (Hooper et al, 1972).

Kasjanova с коллегами исследовали содержание аутоантител методом ИФА в сыворотке крови 104 детей (10-11 лет), 99 молодых (19-22 лет), 64 пожилых (56-66 лет) людей без симптомов заболевания. Результаты их исследований показали, что в пожилом возрасте наблюдается увеличение содержания антител к различным собственным компонентам, в том числе и к ДНК. Эти результаты они объяснили дегенеративными процессами, идущими при старении. В сыворотке крови у 10-12 летних детей были обнаружены антитела к оцДНК. количество которых в два раза выше, чем у юношей. Такое повышение уровня аутоантител в детском возрасте авторам не удалось объяснить (Kasjanova et al, 1984).

Повышение уровня аутоантител к собственным антителам у детей грудного и раннего возраста отмечается многими авторами (Таранова и др, 1993; Трунова и др., 1989). Таранова с сотрудниками (Таранова и др, 1993) исследовали сыворотку крови 180 детей в возрасте от 4 дней до 3 лет, 14 здоровых женщин от 22 до 36 лет и 14 родильниц без симптомов патологии. Методом ИФА авторы анализировали наличие аутоантител к галактоцереброзидам мозга, которые являются антигенными маркерами для нервной ткани. У всех женщин в послеродовом периоде и у их новорожденных детей обнаруживаются такие аутоантитела в

высоких титрах. Уровень аутоантител снижается уже в первые 3 месяца и к 6 месяцам приближается к границе нормы взрослых людей. Биологический смысл этих явлений не до конца ясен.

Также весьма противоречивы имеющиеся в литературе сведения о роли аутоантител в сыворотке крови здоровых людей.

Б'ууаак и 8теепк непрямым иммунофлуоресцентным методом исследовали 441 практически здоровых людей. У 137 человек был выявлен повышенный уровень аутоантител к ДНК. В течение последующих 8 лет у 69% людей этой группы с повышенным уровнем содержания ДНК развивались аутоиммунные заболевания. В данном случае повышенный уровень аутоантител к ДНК в большинстве случаев оказался предвестником аутоиммунных патологий (Зу^аак, Зшеепк, 1985).

К1тЬег1у с коллегами исследовали сыворотку крови 40 здоровых людей на наличие волчаночных аутоантител методом ИФА. Авторы пришли к выводу, что обнаружение анти- Яо/БЭЛ и анти-Ьа/ЗБВ антител среди здоровых доноров может указывать на предрасположение к аутоиммунному заболеванию у этих людей (ЮтЬег1у & а1.,1987).

УасИп с сотрудниками обследовали 506 здоровых женщин детородного возраста методом ИФА и у 60 женщин был обнаружен повышенный уровень аутоантител к нуклеиновым кислотам и ко всем другим исследованным ядерным антигенам, при отсутствии у них каких-либо признаков аутоиммунных заболеваний. При обследовании этих женщин в течении последующих 5 лет у них не было обнаружено аутоиммунных расстройств. На основании этих данных авторы пришли к выводу, что высокий уровень аутоантител к нуклеиновым кислотам у здоровых лиц не является прогностическим признаком для выявления в дальнейшем аутоиммунных заболеваний (УасИп е1 а1., 1989).

1.1.7. Аутоантитела к нуклеиновым кислотам при опухолевом

процессе

У больных со злокачественными опухолями часто появляются признаки, характерные для аутоиммунного состояния: дисбаланс иммунорегуляторных клеток - Т-хелперов и Т-супрессоров (Peller et al, 1991), присутствие в сыворотке крови аутоантител к различным тканевым антигенам (Чернушенко, Середа, 1985; Zouali, Stollar; 1986; Dropcho, King, 1994).

В литературе приводятся факты развития злокачественных опухолей у больных с аутоиммунными заболеваниями. Так, в работе Чернушенко и Середы приводятся клиническое описание случая заболевания раком желудка 48-летней больной СКВ (Чернушенко, Середа, 1985). Есть сообщения о развитии нелимфоцитарного острого лейкоза, после лечения СКВ (Vasques et al, 1992), лимфогрануломатоза после развития склеродермии (Corner, Harvey,

1992), лимфобластного лейкоза после дерматомиозита (Falcini et al,

1993). При синдроме Шегрена увеличивается риск возникновения ходжкинкской лимфомы (Batailli et al, 1989; Ivorra et al, 1991), миеломной болезни (Flippo et al, 1993). После лечения ревматоидного артрита развивается злокачественная лимфома (Taillan et al, 1993) и хронический миелолейкоз (Job-Deslandre, 1985).

Об обнаружении антинуклеарных аутоантител в сыворотке крови у пациентов со злокачественными заболеваниями сообщил Burncham (Burncham, 1972). В результате исследования сыворотки крови 202 доноров и 342 пациентов с опухолями различной локализации обнаружено, что антитела к ядерным компонентам присутствуют в сыворотке крови как у здоровых лиц, так и у онкологических больных. Однако, встречаемость положительного

теста на антинуклеарные антитела в группе пациентов со злокачественными заболеваниями в 19 раз выше по сравнению с контрольной группой.

7еготзк1 с сотрудниками исследовали сыворотку крови у 100 пациентов с гистологически подтвержденным диагнозом злокачественных опухолей и нашли антитела к ядерным компонентам у 13% пациентов. Для сравнения приводятся данные определения антинуклеарных антител в 500 пробах сывороток крови пациентов, подозреваемых на наличие аутоиммунных заболеваний соединительных тканей. В этой группе положительные реакции составляли 26%. Авторы считают,что пациенты, у которых обнаруживаются антинуклеарные антитела при отсутствии у них признаков коллагенозов, должны быть обязательно обследованы на выявление опухолевого заболевания (7еготзк1 & а1., 1972).

Еще более убедительные данные о взаимосвязи присутствия в сыворотке крови антинуклеарных антител с опухолевыми заболеваниями представлены в работе РегоГБку. Из 234 пациентов с анемией, имеющих положительный тест на антинуклеарные антитела, у 74% диагностированы злокачественные заболевания крови и лишь у 15% выявлены истинно аутоиммунные заболевания (Реп^ку, 1985).

Антинуклеарные антитела были обнаружены в сыворотке крови больных раком молочной железы (\Vasserman е1 а1., 1975). Однако, имеющиеся в литературе сведения носят несколько противоречивый характер, т.к. имеются и сообщения о том, что встречаемость аутоантител у таких пациентов ниже, чем у пациентов с неопухолевыми заболеваниями (ТаппепЬе^ е1 а1., 1973).

Замечено четкое различие во встречаемости антител к ядерным антигенам у пациентов с первичными опухолями и у больных с метастазами в лимфоузлах (ТигпЬиИ е1 а1., 1978). У 25% таких пациентов выявляется положительный ответ на тест определения

антинуклеарных антител, в то время как в сыворотке крови с отрицательными результатами биопсии лимфоузлов антитела к нуклеиновым кислотам не обнаруживаются. Выявленная авторами зависимость присутствия антинуклеарных антител от стадии заболевания делает понятными приведенную выше разноречивость данных об обнаружении антинуклеарных антител в сыворотке крови у опухоленосителей. По-видимому, присутствие антинуклеарных антител является феноменом, зависящим от стадии развития опухоли.

Высказывается мнение, что наличие антинуклеарных антител можно рассматривать как прогностический признак развития опухоли (\Vasserman е1 а1., 1975).

Есть и другая точка зрения. Многие авторы считают, что при опухолевом процессе уровень содержания аутоантител не превышает норму (МШга ег а1., 1976; ТаппепЬе^ а1., 1973), а повышение аутоантител в сыворотке крови, скорее всего, связано с возрастными изменениями (8ш155а е! а1., 1990). Поскольку рак чаще возникает в пожилом возрасте, можно предположить, что связь между аутоиммунными процессами и неоплазией является отражением изменений, происходящих в стареющем организме.

Swissa с соавторами исследовали методом ИФА 164 сыворотки крови больных опухолями груди, толстой кишки, легких и других онкозаболеваний различного возраста. Авторы замечают, что не смотря на многие иммунологические аберрации, обычно появляющиеся у пациентов со злокачественными опухолями, образование аутоантител к ядерным элементам, как показано в этом исследовании, не увеличено, в частности, у солидных форм опухоли груди и толстой кишки (ЭуЛ^ й а!., 1990).

ТигпЬиП с коллегами изучая аутоантитела у больных с ранним раком груди методом непрямой иммунофлуоресценции, не

обнаружили влияния возрастных изменений на содержание аутоантител в сыворотке крови онкобольных. А данные других авторов (ТаппепЬе^ & а1, 1973; МШга ег а1, 1976) они объяснили исследованием больных на ранних стадиях развития заболевания (ТигпЬиПег а1, 1971).

Что касается причинно-следственных отношений в взаимосвязи аутоиммунного состояния и злокачественного роста, на сегодняшний день существует две гипотезы.

По одной из них (Чередеев.1987;Гогичаидзе,1992) аутоиммунные реакции посредством неизвестного механизма способствуют возникновению злокачественной клетки. По гипотезе Гогичадзе, образование опухолевых клеток связано с нормальным физиологическим свойством делящихся иммунокомпетентных клеток образовывать гибриды с нормальными соматическими клетками при взаимодействии с ними. Такие гибридные клетки при снятии внешнего антигенного раздражения элиминируются из организма. При постоянном аутоантигенном раздражении такие гибриды аутоагрессивных клеток с нормальными клетками дают начало опухолевым клеткам с неограниченной способностью к пролиферации.

Вторая гипотеза (Меклер, 1969, 1978) предусматривает другую

1

причинно-следственную связь между аутоиммунным заболеванием и опухолевым процессом. Придавая важное значение межклеточным взаимодействиям, Меклер считает, что ДНК и РНК, имеющиеся в межклеточном пространстве и в сыворотке крови могут взаимодействовать с иммунокомпетентными клетками и индуцировать образование аутоантител к нуклеиновым кислотам. Автор считает, что РНК и ДНК, освобождающиеся из клеток при их гибели через кровоток могут проникать в другие клетки и, встраиваясь в геном клеток, индуцировать в них синтез не

свойственных данным клеткам веществ. Это приводит к изменению антигенного состава на клеточной поверхности и вместо антигенов, свойственных данной ткани, появляются другие антигены. Включение иммунологических механизмов для элиминации таких аутоантител, появляющихся не ко времени и не к месту, может привести к активации клонов аутореактивных клеток.

В пользу данного предположения автор приводит факты обнаружения нуклеиновых кислот во внеклеточном матриксе и в плазме крови, происхождение которых он связывает с гибелью и лизисом клеток (Меклер, 1969, 1978).

Более глубокие исследования таких внеклеточных иммунных комплексов показали, что они не являются просто частью суммарной клеточной РНК и ДНК. Так, Hermann с сотрудниками (Hermann et al., 1989) обнаружили, что ДНК, находящаяся в сыворотке крови больных СКВ имеет молекулярную массу 20 kb, а суммарная клеточная ДНК, как известно, имеет молекулярную массу намного превышающую это значение. В сыворотке крови больных СКВ была обнаружена РНК с молекулярной массой 60 Ь, что также отличается от молекулярной массы суммарной клеточной РНК. Что касается нуклеотидного состава, то содержание Г-Ц пар в ней достигает 6,1%. в то время как в клеточной ДНК оно равно 1,3%. Это свидетельствует о том, что ДНК и РНК, идентифицированные в сыворотке крови больных СКВ, не соответствуют суммарной клеточной РНК и ДНК.

Исследование включения Н3-тимидина в ДНК, выделенную из лимфоцитов периферической крови человека, показало, что через 4 часа после введения изотопной метки в культуральную жидкость, удельная радиоактивность внеклеточной ДНК в 4 раза превышала удельную радиоактивность суммарной клеточной ДНК. Это означает, что внеклеточная ДНК представлена быстро синтезируемыми фракциями клеточной ДНК.

41 Vi'jV"" '' %

Приведенные выше примеры свидетельствуют о том, что в роли индукторов аутоиммунного состояния у опухоленосителей могут выступать как нуклеиновые кислоты, освобождающиеся при гибели клеток, так и нуклеиновые кислоты, выделяемые интактными клетками опухоли.

1.2.Внеклеточные рибонуклеиновые кислоты

Феномен выделения нуклеиновых кислот во внеклеточную среду впервые был выявлен еще в 40-х годах при изучении гистологических срезов (Brashet, 1940). Brashet обратил внимание на перенос РНК в межклеточный матрикс при развитии и дифференцировке тканей зародыша амфибий. Позже внеклеточная РНК была выделена биохимическими методами из межклеточного матрикса эмбрионов амфибий (Curtis, 1958). Slavkin с сотрудниками (Slavkin et al, 1975) обнаружили внеклеточную низкомолекулярную РНК в межклеточном матриксе, изолированном из органотипической культуры зачатков зубов эмбрионов крыс. Авторами было сделано важное наблюдение: дифференциация эмбриональной ткани в дентин и эмаль зубов происходила только при взаимодействии двух типов клеток - эпителиальных и мезенхимальных. Учеными были обнаружены четыре вида метилированных низкомолекулярных РНК в межклеточном пространстве между эпителиальными и мезенхимальными клетками. При отдельном культивировании этих двух типов эмбриональных клеток, то есть при отсутствии их взаимодействия, РНК в межклеточном пространстве не обнаруживалась. Эти данные позволили выдвинуть гипотезу об активном влиянии компонентов внеклеточного матрикса на экспрессию генов и указывали на

возможность участия в этом процессе низкомолекулярной РНК (Slavkin et аЦ 1975).

Способность выделять нуклеиновые кислоты в среду является свойством, присущим самым разным представителям широкого таксономического ряда - от бактерий до эукариот. Это явление описано у бактерий (Anker, Stroun, 1972), простейших, низших грибов и у нормальных клеток высших эукариот (Khanjian, Turian, 1976; Stroun et al., 1987).

Впервые выход нуклеопротеидного материала в среду при инкубации опухолевых клеток in vitro был описан Gillo и Wirtheimer в 1966 году. При инкубации клеток асцитной опухоли Эрлиха в изотонической солевой среде авторы обнаружили материал, имеющий максимум поглощения при 260 нм (Gillo, Wirtheimer, 1966). Изучение динамики его накопления в среде показало, что увеличение оптической плотности при 260 нм стабилизируется по достижении определенного уровня. При многократном промывании опухолевые клетки теряли вирулентность и их прививаемость резко снижалась. Авторы высказывают предположение, что нуклеиновые кислоты из клеток асцитной опухоли Эрлиха "просачиваются" в результате диффузии.

Однако, ранее многие исследователи относились скептически к работам по обнаружению внеклеточных нуклеиновых кислот в среде и связывали это явление с гибелью клеток. Такому предположению способствовало и то, что не во всех исследованиях приводились доказательства выхода РНК именно из живых клеток.

Так, Bather с сотрудниками выход РНК из опухолевых клеток Эрлиха в среду связывают с гибелью части клеток, поскольку в среде, наряду с РНК обнаруживается значительное количество белков и ДНК (Bather et al., 1964).

Позже появились работы, в которых экспериментально было доказано, что секреция РНК происходит из живых клеток, как опухолевых, так и из нормальных клеток (Винтер, 1968; Eng, Morgan, 1969).

В работе Винтера (Винтер, 1968) особое внимание было уделено зависимости накопления нуклеиновых кислот в среде от степени повреждения клеток под воздействием УФ облучения. При инкубации клеток асцитной опухоли Эрлиха in vitro в питательной среде в течение 4-х часов наблюдалось накопление РНК в среде, когда основная масса клеток не проявляла каких-либо признаков повреждения. По мере перехода клеток в состояние паронекроза и увеличения числа мертвых клеток количество РНК в среде резко уменьшалось. Дальнейшая интенсивная гибель и распад клеток через 20 часов инкубации вновь вызвали прирост РНК в среде. В результате исследования выхода РНК из клеток при повреждении их ультрафиолетовым облучением установлено, что накопление РНК в среде наиболее интенсивно происходило в первые часы, когда основная масса клеток еще сохраняла жизнеспособность. Увеличение времени облучения вызывало более быструю гибель клеток, и тогда в среде появлялась ДНК. Автор считает, что выход РНК в первые часы инкубации, когда большинство клеток не проявляет признаков повреждения, происходит из интактных клеток.

Eng и Morgan также считают, что выход нуклеиновых кислот из опухолевых клеток не связан с их лизисом. Они изучали выход нуклеиновых кислот из клеток асцитной опухоли Эрлиха, асцитных клеток 6НЗНЕД и нормальных клеток селезенки мышей (Eng, Morgan, 1969). Было показано, что при инкубации опухолевых клеток и клеток селезенки в изотоническом растворе инозитола в среде обнаруживается значительное количество нуклеиновых кислот. Авторы считают, что выход нуклеиновых кислот из

опухолевых клеток не связан с их лизисом, так как при этом не происходит потери жизнеспособности клеток, к тому же содержание РНК в среде в 4 раза превышает количество ДНК. Известно, что соотношение РНК и ДНК в клетках асцитной опухоли Эрлиха близко к единице и в случае их гибели нуклеиновые кислоты появились бы в среде в этих соотношениях.

Stroun с сотрудниками в своей работе (Stimm et al, 1972) показали, что освобождение РНК из клеток связано с активным механизмом секреции и не является пассивной диффузией или результатом гибели клеток. При инкубации предсердия лягушки в растворе Рингера, авторами были обнаружены в культуральной среде нуклеиновые кислоты, количество которых достигало максимального уровня за одну минуту. Этого времени явно не достаточно для освобождения РНК из погибших клеток. При переносе культуры в свежую среду количество нуклеиновых кислот в новой среде восстанавливается до предыдущего уровня.

В своей следующей работе Stroun с коллегами сообщают об обнаружении нуклеопротеидного комплекса в культуральной среде лимфоцитов человека. После ультрацентрифугирования культуральной среды из надосадочной жидкости методом фенольной экстракции был выделен полирибонуклеотидный материал с характерными для РНК свойствами. Авторы пришли к выводу, что внеклеточная РНК, обнаруженная в среде лимфоцитов не является результатом гибели клеток, так как ее количество не увеличивается при отмирании клеток. При смене среды в каждой свежей среде количество РНК достигает определенного уровня, это является свидетельством того, что количество внеклеточной РНК регулируется гомеостатическим механизмом (Stroun et al, 1987).

1.2.1. Мембраноассоциированные РНК.

Впервые сообщения о присутствии РНК в составе наружной клеточной мембраны опухолевых клеток появились в 70-х годах(Weiss et al., 1970; Ray et al., 1978; Terasaki, Miyamoto, 1979).

Так, Weiss с сотрудниками (Weiss et al., 1970) исследовали нуклеиновые кислоты наружной мембраны опухолевых клеток, и пришли к заключению, что РНК является структурным компонентом этих мембран. Учеными было замечено, что наличие РНКазо - чувствительного материала зависит от физиологического состояния клеток: РНК обнаруживается у здоровой культуры и отсутствует у выживающей.

Японские ученые исследовали электрофоретическую подвижность клеток опухоли Эрлиха и саркомы 180 (Terasaki and Miyamoto, 1979). Было замечено, что обработка клеток РНКазой изменяла их электрофоретическую подвижность и приводила к появлению в среде инкубации олигонуклеотидов. На основании этих данных авторы сделали предположение, что в состав мембран жизнеспособных опухолевых клеток входит РНК. В дальнейшем авторы приводят экспериментальные данные, которые являются прямым доказательством этого предположения. Методом иммунофлуоресценции с применением антител к РНК исследователи выявили на поверхности клеток опухоли Эрлиха сайты, реагирующие с антителами к РНК. Предварительная обработка опухолевых клеток РНКазой приводила к значительному снижению их способности связывать антитела к РНК.

Позже появились сведения о том, что с поверхности опухолевых клеток действительно слущиваются везикулы,

содержащие различные фосфолипиды, протеогликаны и другие соединения (Рыкова и др., 1990; Lerner et al, 1983; Taylor, Black, 1985).

Rosi с соавторами (Rosi et al, 1988) сообщают, что с клеток аденокарциномы человека спонтанно выделяются нерастворимые частицы, состоящие из мРНК и фосфолипидов. Экспериментальные данные свидетельствуют о том, что везикулы не являются результатом гибели клеток, так как они уже присутствовали на мембране до того, как произошел лизис клеток, и они обнаруживаются в культуральной среде уже через 15 минут с начала инкубации клеток. Цито плазматическое происхождение РНК-липидного комплекса исключается, поскольку эти структуры обнаружены как на поверхности интактных клеток, так и во фракциях изолированных клеточных мембран.

Хотя биологическая роль мембранных везикул, содержащих РНК, до конца еще не выяснена, механизм освобождения этих структур из опухолевых клеток напоминает слущивание вирусных частиц с клеток хозяина (Rosi et al, 1988).

1.2.2. Рибонуклеиновые кислоты в сыворотке крови в норме и при развитии опухоли

Первые сообщения о присутствии РНК в сыворотке крови у людей появились в 40-х годах (Mandel, Metais, 1948). В последующие годы в литературе периодически возникали сообщения об обнаружении РНК в сыворотке крови у здоровых лиц и при различных заболеваниях.

С разработкой более совершенных методов были получены результаты, свидетельствующие о том, что в норме небольшое количество РНК всегда присутствует в сыворотке крови и уровень ее содержания изменяется при различных заболеваниях (Odonnell et

al., 1998), в том числе при развитии опухоли (Funaki et al., 1998; Occonnell et al., 1998).

Kamm и Smith в плазме крови у 286 здоровых людей флуоресцентным методом с применением ингибирования РНКаз определяли содержание РНК, содержание которой составило более 100 мкг/мл. Результаты, приводимые в других источниках, авторы рассматривают как сильно заниженные по причине ферментативной деградации РНК в ходе анализа. При анализе фракционного состава плазмы крови были обнаружены 3 группы фракций РНК размерами от 6 до 27S. Авторы отмечают идентичность фракционного состава РНК плазмы крови у большинства обследованных ими людей (Kamm, Smith, 1972).

По методике разработанной Kamm и Smith, Абдрахманов и Кайнова определяли содержание ДНК и РНК в сыворотке крови 45 больных ревматоидным артритом. Результаты проведенных анализов показали, что содержание ДНК в плазме крови у этих больных в 1,9 раз превышает норму, а содержание РНК достоверно снижено по сравнению с нормой (Абдрахманов, Кайнова, 1979).

В ряде работ, посвященных исследованию РНК сыворотки крови, отмечается увеличение ее содержания в плазме крови при развитии опухоли. Так, Шваюн методом Шмидта-Тангаузера исследовал содержание РНК и ДНК в плазме крови коров. Было установлено, что при лимфолейкозе у коров количество РНК в плазме крови увеличивается в 2 раза по сравнению с контролем (Шваюн, 1976).

Блиновым с сотрудниками было замечено увеличение содержания РНК в плазме крови у людей больных лимфолейкозом. Авторы установили, что содержание РНК в плазме крови здоровых людей составляет 120±4,1 мкг/мл, тогда как у больных хроническим лимфолейкозом среднее содержание РНК достигает до 142±5,1

мкг/мл. Повышение содержания РНК при лимфолейкозе можно было бы объяснить повышенным содержанием лимфоцитов в плазме крови у таких больных. Однако, при исследовании нуклеотидного состава РНК, было замечено, что РНК, содержащаяся в плазме крови отличается от РНК лимфоцитов, так как она преимущественно состоит из уридилового и гуанилового оснований и содержит лишь следовые количества цитозина и аденина. Авторы отмечают устойчивость РНК плазмы крови к панкреатической РНКазе и предполагают, что эта ее особенность, по-видимому, связана со своеобразием структуры РНК плазмы крови (Блинов и др., 1981).

В сыворотке крови онкологических больных обнаружен РНК-содержащий липопротеидный комплекс (Месгогек е1 а1, 1987). РНК, связанная с комплексом, устойчива к РНКазе сыворотки крови в физиологических условиях. Выделенная из комплекса РНК при электрофорезе в ПААГ дает одну полосу в районе 27Б и становится чувствительной к РНКазе. Авторы исследовали сыворотку крови 94 онкологических больных с разными типами злокачественных опухолей и у 74 пациентов с другими заболеваниями. РНК-содержащий липопротеидный комплекс выявлялся только в сыворотке крови онкологических больных. Основываясь на этих данных, \Vieczorek с соавторами предположили возможность использования присутствия РНК в сыворотке крови в качестве диагностического признака, причем им удалось показать зависимость содержания уровня РНК в плазме крови от стадии развития опухоли.

Моипйэгс! с сотрудниками разработали экспресс метод определения РНК содержащего липопротеидного комплекса в сыворотке крови с использованием магнитно-резонансной спектроскопии, позволяющую быстро и эффективно анализировать сыворотку крови. Авторы установили, что РНК-содержащий

липопротеидный комплекс выявляется только в сыворотке крови онкологических больных и отсутствует у здоровых людей и у пациентов с заболеваниями неопухолевой природы (МоипГогс! е1 а1., 1987). Тем самым они подтвердили данные, полученные \№1есгогек с коллегами о возможном использовании данного теста в диагностике злокачественных опухолей, а также в прогностических целях для выявления групп риска (\Vieczorek е1 а1., 1987).

Базанова и Сейц при исследовании сывороток крови 170 онкологических больных, 58 доноров и у 36 пациентов с другими заболеваниями, пришли к выводу, что присутствие РНК-содержащего липопротеидного комплекса в сыворотке крови не может быть использован в диагностических целях при выявлении злокачественных опухолей. В отличие от \Vieczorek они выявили присутствие РНК-содержащего липопротеидного комплекса в сыворотке крови не только онкологических больных, но и у 10-15% доноров и у 40% больных с доброкачественными опухолями (Базанова, Сейц, 1989).

Позже, с использованием более точного метода обратнотранскриптазной полимеразной цепной реакции в сыворотке крови онкологических больных была обнаружена мРНК. В сыворотке крови больных меланомой присутствовала тиразиназная мРНК (ОссоппеП е1 а1., 1998), мРНК цитокератина обнаруживалась в сыворотке крови больных колоректальной карциномой (Бипак! е1 а1., 1998). У пациентов не страдающих онкологическими заболеваниями и здоровых людей эти РНК отсутствовали. Рипак! с сотрудниками предлагают использовать данные по присутствию мРНК цитокератина в сыворотке крови в качестве индикатора развития колоректальной карциномы.

Метод полимеразной цепной реакции требует соблюдения особой чистоты и тщательности проведения экспериментов, так как

из-за высокой чувствительности метода существует вероятность контаминации образцов. Обнаружение мРНК цитокератина у единичных здоровых доноров (Bostick et al, 1998; Wyld et al, 1998) может быть вызвана вышеперечисленными причинами.

Относительно происхождения рибонуклеиновых кислот, обнаруживаемых в сыворотке крови, имеются лишь предположения. Причиной повышенного содержания нуклеиновых кислот в сыворотке крови при злокачественных новообразованиях, по мнению одних исследователей, является выделение их активно делящимися опухолевыми клетками (Kolodny, 1972; Wieczorek et al., 1985; Белохвостов, 1976). Другие авторы повышение содержания РНК в плазме при опухолевом росте и многих заболеваниях объясняют распадом ткани, сопровождающим многие патологические процессы (Меклер, 1978; Gabor et al, 1983).

Еще одним источником РНК плазмы крови могут быть лимфоциты, которые, как известно, тоже секретируют РНК (Федоров, Янева, 1982; Stroun et al, 1985).

Во время обострения инфекционных заболеваний, вызванных РНК-вирусами, в крови может циркулировать вирусная РНК. У детей больных бронхитами в сыворотке крови обнаруживается РНК респираторно-синцитиального вируса (Rohwedder et al, 1998; Odonnell et al, 1998)

Функция РНК, содержащейся в плазме крови, пока еще остается неясной. Не исключена возможность ее участия в процессах дифференцировки клеток и тканей, а также при формировании иммунного ответа (Кочергина и др., 1986; Lee, Sullengen, 1997; Marx et al, 1996). В этом отношении заслуживают внимания данные Chen с сотрудниками (Chen et al, 1975), которые показали, что РНК в сыворотке крови может повлиять на спектр иммуноглобулинов, секретируемых лимфоцитами. Ученые обнаружили, что выделенная

из плазмы крови мышей с плазмоцитомой РНК способна влиять на экспрессию поверхностных иммуноглобулинов лимфоцитами, делая их моноклональными.

Есть сообщение о том, что при обработке лимфоцитов экзогенной РНК у мышей больных меланомой уменьшались метастазы, такая способность РНК может быть использована при иммунотерапии метастазирующих опухолей (\¥а1аЬаЬе е1 а1., 1996).

Из вышесказанного можно сделать вывод, что способность выделять РНК присуща многим типам клеток. Таким свойством, по-видимому, обладают как нормальные, так и трансформированные жизнеспособные клетки. Не исключена возможность, что РНК, обнаруживаемая многими исследователями в сыворотке крови, является обязательным ее компонентом и соответственно может участвовать во многих жизненно важных процессах, происходящих как в клетках, так и в организме в целом.

1.3 Заключение по обзору литературы

Как следует из обзора литературы аутоантитела к нуклеиновым кислотам, и в частности к РНК. образуются в организме человека и животных, как в норме, так и при различных заболеваниях. Уровень их содержания колеблется в широких пределах и зависит от факторов среды, физиологических состояний организма (возраста, стресса. беременности, физических перегрузок), от вида заболевания. Многочисленные данные литературы свидетельствуют о том, что уровень содержания аутоантител может иметь диагностическое значение для выявления возникновения опухоли. Тем не менее, многие аспекты участия РНК и аутоантител к РНК в иммунологических взаимоотношениях опухоли и организма практически не изучены. В настоящее время изучение этих вопросов может способствовать ранней диагностике

онкологических заболеваний и выяснению взаимосвязи опухолевого роста с аутоиммунным состоянием. Поэтому представляется актуальным необходимость исследования РНК-антигена как индуктора ААТ и содержания ААТ к РНК в сыворотке крови в норме и при опухолевом росте.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Зайнуллина, Альфия Салиховна

ВЫВОДЫ

1. Интактные опухолевые клетки секретируют в культуральную среду РНК, секреция РНК регулируется гомеостатическим механизмом по типу обратной связи и зависит от концентрации внеклеточной РНК в среде.

2. Содержание РНК в плазме крови крыс с асцитной опухолью Эр лиха коррелирует со стадиями развития опухоли. Максимальное содержание РНК в плазме крови наблюдается в период интенсивного роста опухоли. Регрессия опухоли у крыс сопровождается снижением уровня содержания РНК в плазме крови.

3. Разработана тест-система на основе иммуноферментного анализа для определения уровня содержания аутоантител к РНК в сыворотке крови человека.

4. В сыворотке крови здоровых людей постоянно обнаруживаются аутоантитела к РНК. Пороговый уровень содержания аутоантител к РНК у здоровых людей составляет 0,36±0,06. Установление порогового уровня содержания аутоантител к РНК в сыворотке крови человека может иметь диагностическое значение для определения группы риска среди здоровых людей.

5. Существует возрастная зависимость содержания аутоантител к РНК в сыворотке крови у здоровых людей. Наиболее высокий уровень содержания аутоантител к РНК наблюдается у новорожденных (0,47±0,01 отн. ед.) и детей до 8 лет (0,44±0,02 отн. ед.). У возрастной группы от 9 до 20 уровень содержания аутоантител к РНК снижается до 0,27±0,04 отн. ед. У лиц в возрасте от 20 до 40 лет уровень содержания аутоантител к РНК совпадает со средним значением уровня нормы. В возрасте от 40 до 60 лет уровень аутоантител к РНК повышается до 0,43±0,02 отн. ед. После 60 лет уровень содержания аутоантител снижается до 0,29±0,01 отн. ед.

6. У пациентов со злокачественными опухолями различной локализации и типов содержание аутоантител к РНК в сыворотке крови превышает норму в 1,9 раз. Исключение составляют больные с лимфопролиферативными заболеваниями, у которых содержание аутоантител к РНК не превышает порогового значения нормы.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Зайнуллина, Альфия Салиховна, 1998 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Абдрахманов Б.А., Кайнова A.C. ДНК и РНК плазмы крови в оценке активности ревматоидного артрита // Тер. архив. - 1979. - N 7. - с. 29-33

2. Адаме Р. Методы культуры клеток для биохимиков. Москва: Мир. -1983. -263с

3. Албертс Б., Брей Д., Льюис Дж. и др. Молекулярная биология клетки. В 5 томах - М.: Мир. - 1987

4. Антитела. Методы. Книга 1 / Под ред. Д. Кетти . - М.: Мир. - 1991

5. Арутюнов Л.И. Показатели неспецифической резистентности в условиях жаркого климата Средней Азии // Иммунный гомеостаз в экстремальных природных условиях. Под ред. Миррахимова М.М. и др. - Фрунзе: Илим. - 1985. - с. 273

6. Базанова Н.В., Сейц И.Ф. Может ли присутствие РНК -липопротеидного комплекса в сыворотке крови человека свидетельствовать об онкологическом заболевании? // Экспер. онкол. - 1989. - т. 2. - с. 37 -39.

7. Белохвостов A.C., Козлов А.П., Зеленкова Н.П. Внеклеточная нуклеиновая кислота в асцитных экспериментальных опухолях // Вопросы онкологии. - 1976. - т. 22, N 8. - с. 45 - 49

8. Блинов М.Н., Луганова И.С., Владимирова А.Д. О факторах нуклеиновой природы в плазме крови человека // Вопр. мед. химии. -1981.-т. 27.-е. 600-603.

9. Бобкова Н.В., Плакхинас Л.А., Башарова Л.А. и др. Влияние индукции антител к серотонину на потребление алкоголя и состояние медиаторных систем мозга у крыс с разной

выраженностью алкогольной мотивации // Патол. Физиология и эксп. Терапия. - 1989. - №3. - с. 31 - 36

Ю.Бруслова Е.М. Изучение антител к ДНК у детей с острым лейкозом // Гематология и переливание крови. - 1985. - вып. 20. - с. 32 - 34

П.Буковская С.Н., Невская A.B., Медуницин Н.В. и др. Влияние вакцинации на синтез аутоантител к ДНК // Иммунология. - 1993. -N 5. - с. 46 - 47.

12.Бунеева A.B., Андриевская O.A., Романишкова И.В. Взаимодействие каталитически активных антител с олигорибонуклеотидом// Мол. Биол.-1994.-т.28.-вып.4.-с.738-743.

И.Бурдыгина И.Ф., Венгерова H.A., Эльцеорон Б.С. Изучение возможности модификаций функциональных свойств отечественных планшетов // Биотехнология. - 1994. - N11-12.-с. 35-37

14.Бутенко Г.М. Проблема оценки иммунного статуса человека и возрастные изменения иммунитета // Иммунология. - 1993.- N 4.- с. 4-6.

15.Винтер В.Г. Выход рибонуклеиновой кислоты из клеток карциномы Эрлиха // Бюлл. экспер. биол. и мед. - 1968. - N 10. - с.68-71.

16.Винтер В.Г., Алимова Ф.К., Зоткина Н.Л. Обнаружение двуспиральной РНК в асцитной жидкости Зайделя // Экспер. Онкол. -1982.-т. 4, вып. 1. - с. 28-32.

17.Вылегжанин Н.И. Иммунологические методы исследования злокачественных новооброзований // Труды науч. конф., Москва. -1959.

18.Гогичадзе Г.К. Возможная роль аутоиммунных процессов в формировании злокачественных новообразований // Иммунология. - 1992.-N 2.-с. 58-59

19.Гололобов Г.В.. Богомолова А.Э., Ядов Р.П. и др. Выявление и характеристика каталитических антител к ДНК при системной красной волчанке // Биохимия. - 1993. - т. 58, вып. 2. - с. 313 - 318

20.Гороховец Н.В., Бобренева P.A., Юрин B.J1. Получение и характеристика ксеногенных антиидиотипических антител к антителам против антигенов главного комплекса гистосовместимости крыс // Иммунология. - 1989. - N 2. - с. 17-20

21.Грищенко A.M.. Терещенко М.И. Твердофазный иммуноферментный анализ иммуноспецифичности нативной, термоденатурированной и модифицированной тиофосамидом ДНК фага Т4 // Ж. Иммунология. - 1987. - N 6. - с. 81 - 85

22. Данилова P.A., Ашмарин И.П. Инверсная иммунорегуляция поведения и проблема существования регуляторных аутоантител II Успехи физиолог, наук. - 1994. - №1. - с. 3 - 22

23.Добродеева Л.К., Суслонова Г.А. Аутоантитела у практически здоровых людей II Иммунология. - 1990. - N 2 - с. 52 - 55

24.3амчук Л.А., Страхова Т.С., Квачадзе К.И. Индукция гиперчувствительности немедленного типа к нуклеиновым кислотам // Иммунология. - 1988. - N 4. - с. 52 - 55.

25.3емсков В.М., Медуницын Н.В., Алексеев Л.П. и др. Стимуляция клеточного иммунитета низкомолекулярной РНК и ее мононуклеотидами // Иммунология. - 1978. - N 1. - с. 27 - 30

26. Ибрагимов А.Р. Гены аутоантител // Мол. биол. - 1989. - т. 23, вып. 1. - с. 5 -32

27.Иммунология. В 3 томах / Под ред. У. Пола. - М.: Мир. - 1989

28.Иммуноферментный анализ / Под ред. Нго H.H., Ленхоффа Г. М. -М.:Мир. - 1988

29.Китон Ю.Я., Семенов Д.В., Несвижинский P.A. Существуют ли каталитически активные антитела у здоровых людей? (Протеинкиназная активность slgA антител из молока человека) // Мол. биология. - 1995. - т. 29, вып. 4. - с. 893 - 905

30.Клемпарская H.H.. Шальнова Г.А. Нормальные аутоантитела как радоизащитные факторы. - М.: Атомиздат. - 1978

31.Козырь A.B., Колесников A.B., Яхнина Е.И. и др. ДНК-гидролизующие антитела при лимфопролифертивных заболеваниях //Бюлл. экспер. биол. и мед. - 1996. - N2. - с.204-206

32.Конов A.B., Подгородниченко В.К. Иммуногенные и антигенные свойства модифицированной полирибоадениловой кислоты // Иммунология. - 1988. - N 5. - с. 39 - 42.

33.Косицкая J1.C., Шемеровская Т.Г., Сафронов Б.И. Изучение толерантного действия антиидиотипических антител // Иммунология. - 1990. - N 3. - с. 16-17.

34.Костржевская Е.Г. Циркулирующие иммуноглобулиносодержащие комплексы при злокачественном росте // Экспер. онкол. - 1986. - т. 8. - N3.-C. 10-17.

35. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии. Москва: Высшая школа. - 1980. - 272с.

36.Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа. - 1990. - с. 352

37.Лямперт И.М. Аутоантитела, реагирующие с базальным эпителием кожи и эндокринным эпителием тимуса - первый этап возникновения различных аутоиммунных процессов // Иммунология. -1988. - N 4. - с. 5 - 9.

38.Макарова О.В., Полонский Ю.С.. Замчук Л.А., Зограф Ю.Н. Влияние на синтез РНК и поли (А) белков, связывающихся с

однонитчатой ДНК. 1. антитела против ДНК // Мол. биол. - 1975. -т. 9,-N6.-с. 861 - 870

39.Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д. Молекулярное клонирование. - М.: Мир. - 1984

40.Меклер Л.Б. Антигенная топография поверхности клеток, нуклеиновые кислоты плазмы крови и онкогенез // Журнал Всес. хим. об-ва им. Д.И. Менделеева. - 1968. - т. 13. - N 4. - с. 431 - 445.

41.Меклер Л.Б. Механизмы индукции опухолей в свете общей теории онкогенеза. // Успехи соврем, биол. - 1978. - т. 85. - N 1. - с. 134 - 151.

42.Новые методы иммуноанализа / Под ред. Коллинза У.П. - М.: Мир, - 1991

43.Петров Р.В. Старение и аутоиммунные болезни // Иммунология. -1984.-N 4.-с. 88-92

44.Подгородниченко В.К.. Поверенный A.M.. Коноплянников И.Г., Брыксина Л. А. Действие изологичных антител к ДНК на колониеобразование в селезенке // Иммунология. - 1982. - N 5. - с. 58 -61

45.Рыкова В.И., Кропотова С.А., Каледин В.И., Семенова Л.А. Сравнительное исследование состава гликозаминогликанов в плазматических мембранах нормальных и трансформированных клеток печени мышей II Биохимия. - 1990. - т. 55. - вып. 3. - с. 439 -444

46.Рыжикова Е.В., Спирина Г.В., Черкасов В.Л. и др. Антитела, реагирующие с эпителиальными клетками тимуса и кожи, в сыворотке больных ревматизмом и рожей // Вестник АМН СССР. -1986.-N 7.-с. 45-49

47.Саттарова JI.И., Гафиятуллина Л.А., Аглиуллина Д.Г., Винтер В.Г. Оптимизация иммуноферментной тест-системы для определения антител к ДНК // Биотехнология. - 1994. - N11-12.-с.38-41

48.Сафронов Б.Н.. Косицкая Л.С. Иммунный комплекс идиотип-антиидиотип: Антиидиотипический компонент играет роль антигена // Иммунология. - 1990. - N 3. - с. 17 - 19

49.Семенов Б.Ф. Концепция аутоиммунитета в редакции конца 80-х и начала 90-х годов // Журн. микробиол. - 1995. - N 3. - с. 42 - 45

50.Сидорова Е.В. Антигензависимые неспецифические иммуноглобулины. Природа и возможные механизмы образования //Успехи совр. биол. - 1993.-т. 113. - с. 615 - 701

51.Сухоруков A.M., Пономарева A.M. Изучение сорбционных свойств полистироловых планшетов, используемых в иммуноферментном анализе // Журн. Микроб., эпид. и иммун. - 1987. - N 9. - с. 18 - 22

52.Таранова Н.П., Гузеева В.И., Коровин A.M., Лучакова О.С. Антитела к галактоцереброзидам мозга в сыворотке крови у здоровых детей раннего возраста и женщин // Иммунология. - 1993.

- N 6. - с. 57 -58

53.Тейлор Д. Введение в теорию ошибок. - М.: Мир. - 1985

54.Терещенко И.П., Сараева З.М. Роль нормальных противотканевых антител в стимуляции противоопухолевого иммунитета //Тез. докл. Межреспубликанского симпозиума "Неспецифические стимуляторы противоопухолевого иммунитета. " - Юрмала, 29-31 марта. - 1983. -с. 105-106

55.Тимофеева E.H., Куст C.B., Добров E.H. Определение эффективности индуцированного УФ-облучения сливания РНК с белком в частицах Х-вируса картофеля // Мол. ген. микроб, и вирус.

- 1992.-N 3-4.-с. 6-8

56.Трунова JI.А., Шваюн А.П., Амирова Т.Д. и др. Изучение иммунного статуса новорожденных от здоровых и больных матерей // Иммунология. - 1989. - N 3. - с. 75 - 77

57.Федоров H.A., Янева И.С. Экскреция ДНК лимфоцитами человека // Успехи совр. биол. - 1982. - т. 93. - вып. 2.-е. 171 - 182

58.Цебецауер Л., Поверенный А.И., Насонов Е.Л. и др. Клиническое значение определения антител к ДНК с различной авидностью при СКВ // Тер. архив. - 1987. - N 4. - с. 48 - 50

59.Чередеев А.Н., Горлина Н.К., Стонанс И.Я., Ляхов В.Ф. О функциях гибридных клеток //Успехи соврем, биол. - 1987. - т. 104. -N 3. - с. 392 - 399

бО.Чернушенко Е.Д., Середа Н.И. Значение иммунных комплексов при заболеваниях лекгих // Аутоиммунные процессы и их роль в клинике внутренних болезней. - Киев. - 1985

61.Шаткин А. Колориметрические методы определения ДНК, РНК и белка. /В кн.: Методы вирусологии и молекулярной биологии. Москва: Мир. - 1972. - 444с.

62.Шваюн И.В. К вопросу нуклеинового обмена в крови больных лейкозом крупного рогатого скота // Меры борьбы с лейкозом крупного рогатого скота: Тез. докл. респ. научно - произв. конф. -Белая церковь. - 1976. - с. 46 - 47

63.Шматко В.А., Франциянц Е.М., Картанов С.З. и др. Каталитические свойства сыворотки крови больных злокачественными заболеваниями // Лекарственные компоненты в лечении онкологических больных / Моск. НИИ. - М., 1992. - с. 162 -169

64.Шубик В.М., Левин М.Я. Иммунитет и здоровье спортсменов. - М.: Изд-во "Физкультура и спорт", 1985

65.Щуров Д.В., Макаревич О.И., Лопаева О.А. и др. Взаимодействие ДНК гидролизующих антител с низкомолекулярными субстратами // ДАН. - 1994. - т. 387, N 3. - с. 407 - 409

66.Ястребова Н.Е.. Ванеева Н.П. Аутоантитела к ДНК и иммуноферментный метод их определения //В сб. трудов: Иммуноферментный анализ в диагностике заболеваний. - М.: Медицина. - 1989. - с, 110- 124

67.Ackermann-Scliopf С., Ackerman R., Terasaki P.J., Levy J. Natural and acquired epidermal autoantibodies in man // J.Immunol. - 1974. - v.l 12. -p.2063 - 2067

68.Aksenova N.N., Sleptsova L.A., Tsikarishvili T.N. Effect of exogenous immunogenic RNA on the antibody synthesis in rat transplantable lymphocarcoma cells // neoplasma. - 1983. - v. 30. -N4. - p. 395 - 402

69.Alargon - Segovia D., Ruiz A.A.. Fishbein E. Antibody to nuclear ribonucleoprotein penetrates live human mononuclear cells through Fc receptors // Nature. - 1978. - v. 271. - N 5640. - p. 68 - 69

70.Anderson N.E. Anti-neuranals autoanibodies and neurological paraneoplastic syndromes//Austr. and N.Z. J. Med. - 1989.-v. 19.-N4. - p. 379- 389

71.Anker P., Stroun M. Spontaneous release of nucleic acids by living bacteria and sells of higher organisms // Abstracts internat. Congress of Cell Biology, 8th, Brighton: Sussex University Press. - 1972. - p. 3

72.Bataille R., Klein В., Durie B.G.M., Sany J. Interrelati-onship between autoimmunity and B-lymphoid cell oncogenesis inhumans // Clin, and Exper. Rheumatol. - 1989. - v.7, N3 - p. 319 - 328

73.Bather R., Sebastian I., Webb S. J. Inositol and protection of cells. II. The release of nucleic acids from normal and malignant cells. // Canad. J. Biochem. - 1964. - v. 42. - p. 167

74.Baum H., Huw D., Peakman M. Molecular mimicry in the MHC: Hidden clues to autoimmunity?// Immun. Today.- 1996.- v.17.-№1 .-pp.64-70

75.Biassoni L., D Andrea V., Biancari F. et al. Radiolabeled monoclonal antibodies in clinical and surgical oncology. A review // Panminerva med.- 1997.-v.39.-p. 36-52

76.Bird C.R., Garing A.J.H., Throper R. The use of Tween-20 alone as blocking agent for immunobloting can cause artefactual results // J. of Immun. Meth. -1988. - v. 106. - p. 175 - 179

77.Blair D.G.R., Eng C.P., Morgan J.E. Nucleic acids and acid-soluble derivatives released by isotonic solutions of cryoprotective agents from Ehrlich - Lettre ascites carcinoma and mouse spleen cells. // Europ. J. Cancer. - 1971.-v. 7. - p. 397-410

78.Blanco F., Kalsi J., Isenberg D.A. Analysis of antibodies to erythematosus and other autoimmune rheumatic diseases // Clin. Exp. Immun. - 1991. - v. 86, N 1. - p. 66 -70

79.Bostick P., Shatterjee S., chi D. et al. Limitations of specific reverse-transcriptase of metastases in the lymph nodes and blood of breast cancer patients //J. of Clin. Oncol. - 1998,-v. 16. - N8,-p. 2632 -2640

80.Brashet J. Arch. Biol. - 1940. - v. 51. - p. 167 - 202. Цитируется no: Sanchez S. Cabada M.O., Barbieri F.D. Newly synthesized extracellular ribonucleic acids in the amphibian gastrula // Cell Differ. - 1983. - v. 13. -p. 149-157

81.Bunn C.C., Berstein R.M., Mathews M. B. Autoantibodies against alanyl -tRNA synthetase and tRNAala coexist and are associated with myositis. // J. Exp. Med. - 1986. - v. 163. - p. 1281 - 1291.

82.Bunn C.C., Mathews M.B. Autoreactive epitope difind as the anticodon region of alanin transfer RNA // Science. - 1987. - v. 238. - p. 1116 - 1118

83. (a) Bunn C.C., Mathews M.B. Two human tRNAala families are recognized by autoantibodies in polymyositis sera. // Mol. Biol. Med. - 1987. - v. 4. -Nl.-p.21-36.

84.Burnham T.K. Antinuclear antibodies in patients with malignancies // Lancet.

- 1972.-p. 436 -437

85.Castko-Mussot M.E., Haamarstram L., Smith E. et al. Induction of anti DNA antibody response by hydrocortisonetreatment // 11-th Eur. Immun. Mut., Espoo, 9 -12 june, 1991. - Abstr. // Eur. Fed. Immun. Soc. -Helsinki. - 1991.-p. 14- 15

86.Cech T.R., Bass B.L. Biological catalysis by RNA // Ann. Rev. Biochem.

- 1986.-v. 55.-p. 599-629

87.Cesar E.B., Nadala Jr., Loh P.C. A nitrocellulose-enzyme immunnoassay method for the detection of hepatitis A virus // J. of Virolog. Methods. -1990.-v. 28.-p. 155-164

88.Chang S.A, Huh M.S, Kim H. R. Cross reactivity of antibodies immunoadsorbed to laminin with recombinant human La(SS-B) protein // J. of Autoimmunity.-1998.-v. 11 .-2.-p. 163-167

89.Chen Y., Bhoopolam N., Yaculis V., Heller P. Changes in lymphocyte surface Immunoglobuline in myeloma and the effect of an RNA -containing plasma factor // Ann. Intern. Med. - 1975. - v. 83. - p. 625 -631

90.Chu J.-L., Brot N., Weissbach H., Eleon K. Lupus antiribosomal P antisera contain antibodies to small fragment of 28 Sr RNA located in the proposed ribosomal GTPase center // J. Exp. Med. - 1991. - v. 174 - p. 507 - 514

91.Comer M. Harvey A.R. Remission of scleroderma duringy for lymphoma // Ann. Rheum Diseases. - 1992. - v. 51, N 8 - p. 998 - 1000

92.Cook J.A., Mitchell J.B. Viability measurement in mammalian cell systems // Anal. Biochem. - 1989. - v. 179. - p. 1 - 7

93.Curtis A.S.W. A ribonucleoprotein from amfibian gastrulae // Nature. - 1958. -v. 181.-p. 185

94.Deutsher S.L.,Keene J.D. A sequence-specific conformational epittope on U1 RNA is recognised by a unique autoantibody // Proc. Nath. Acad. Sci. USA. -1988. - v. 85. - p. 3299 - 3303

95.Dighiero G., Hart S., Lim A. et al. Autoantibody activity of immunoglobulins isolated from B cell follicular lymphomas // Blood. -1991. - v. 78. - p. 581 - 585

96.Dropcho E.I., King P.H. Autoantibodies aganist the Hel-Nl RNA-binding protein among patients with lung carcinoma: an association with type I antineuranal nuclear antibodies // Ann. of Neurol. - 1994. - v. 36, N 2. - p. 200 - 205

97.Eilat D., Schechter A.N., Steinberg A.D. Antibodies to native tRNA in NZB/NZW mise // Nature. - 1976. - v. 259. - p. 141 - 143

98.Elleman C.J., Elding D. Suppressive factors in ascitic fluids and sera of mise bearing ascites tumors // J. Nath. Cancer Inst. - 1977. - v. 59, N 3. - p. 925 -931

99.Eng C.P., Morgan J. The release of nuclear acids from ascites tumor cells incubated with glycerol, dimethylsulfoxide and inositol. // Canad. J. Biochem. - 1969. - v. 47. - p. 871 - 876

100.Epstein P., Lictsky R., Tan E. et al. Identification of three differant anti-4S RNA sera associated with autoimmune disease // J. Immun. Meth. - 1982. -v. 109. -N2. -p. 548 - 556

101.Faber P., Capel P.J.A., Ruhe G.P.M. et al. Cross-reactivity of anti-DNA antibodies with proteoglycans // Clin. Exp. Immun. - 1984. - v. 55. - p.- 502

102.Fairley C.H. Autoantibodies in malignant disease // Br. J. Hematol. - 1972. -v. 23-p. 31

103.Falcini F., Taccetti G., Trapani S. A lymphocytic leukemia with dermatomyositis - like onset in cildhood // J. Rheum. - 1993. - v. 20, N 7. - p. 1260- 1262

104.Fields B.A., Goldbaum F.A., Ysern X. et al. Molecular basis of antigen mimicry by an anti-idiotype // Nature. - 1995. - v. 374, N 6524. - p. 739 -742

105.Flippo P.M., Deprez X., Fardellone P. et al. Polyarthriterhumatoide et myelome. A propos devingt-deux observations.Resultats d'une enquete nationale multicentrique // Rev. rheum, et malad, osteo-artic. - 1993. - v. 60, N 4 - p. 269 - 273

106.Friedman A.W., Targoff J.N., Arnett F.G. Interstitial lung disease with autoantibodies aganist aminoacil-tRNA syntetases in absence of apparent myositis // Semin - Arthritis - Rheum. - 1996. - v. 26, N 1. - p. 459 - 467

107.Fritzler M., Pauls J., T. Kinsella et al. Antinuclear, anticytoplasmic and anti

- Sjogren's syndrom antigen A (SSA/Ro). Autoantibodies in famole blood donors // Clin. Immun. Immunopat. - 1985. - v. 36. - p. 120 - 128

108.Funaki N., Tanaka J., Ohshio G. Citoceratin 20 mRNA in peripheral venous blood of colorectial carcinoma patients //Brit. J. of Cancer.- 1998.-v.77.-N8.-p. 1327-1332

109.Gabibov A.G., Gololobov G.V., Makarevich O.J. et al. DNA-hydrolysing autoantibodies // Appli- Biochem & Biotechnology. - 1994.

- v. 47, N 2 - 3 (May-June). - p. 293 - 303

110.Gabor J., Konecna H., Molcanova A. Changes in nucleic acid concentrations in blood plasma of rats in relation to radiation and chemical injury // Bratislab. Lek. Listy. - 1983. - v. 80, N 6. - p. 669 - 676

111.Gillo L., Wirtheimer G.W. Extraction of cancer factor from Ehrlich ascites carcinoma // Nature. - 1966. - v. 211. - N 5056. - p. 1422 - 1423

112.Grabar P. Hypothesis: Autoantibodies and immunological theories: an analytical review 11 Clin. Immunol. Immunopathol. - 1976. - v. 4 - p. 453 - 466

113.Good R.A., Yunis E.J. Association of autoimmunity, immunodeficiency and aging in man, rabbits and mice // Fed. Proc. -1974. - v. 33. - p. 2040-2050

114.Guialis A., Patrinou - Georgoula M., Tsisefaki N. et al. Anti 5S RNA/protein (RNP) antibody levels correlate with disease activity in a patient with SLE nephritis. // Clin, and Exp. Immunol. - 1994. - v. 95. - N 3.-p. 385 - 389.

115.Habets W.J., Hoet M.H., Sillikens P.T.G. et al. Detection of autoantibodies in a quatitaive immunoassay using recombinant ribonucleoprotein antigens // Clin, and Exp. Immun. - 1989. - v. 76. - p. 172 - 177

116.Hansen B. // Med. Hypothes. - 1986. - v. 19. - p. 79 - 82 (Цит. no Глушкову A.H. Иммунология автономного поведения опухоли // Иммунология. - 1991. - N 5. - с. 11 - 14

117.Hassfeld W., Steiner G., Studnickabenke A. et al. Autoimmune response to the spliceosome: an immunologic line between rheumatoid arthritis, mixed connective tissue disease and systemic lupus erythematosus // Arthritis and Rheumatism. - 1995. - v. 38, N 6. - p. 777 -785

118.Herrmann M., Leitmann W., Krapf E.F., Kalden J.R. Molecular characteristics and in vitro effect of nucleic acids from plasma of patients with systemic lupus erythematosus // Molecular and cellular mechanisms of human hypersensitivity and autoimmunity. - 1989. - p. 147-157

119.Hiyoshi Toru, Eisi Joshinbu, H. Shigeru. Human autoantibody to Sertoli cells detected in helthy individuals // Acta pathol. jap. - 1991. - v. 41, N 12. - p. 879 - 888

120.Hoet R.M., Kastrer В., Luhrmann R., Venrooij W. Purification and characterization of human autoantibodies directed to specific region on U1RNA; recognition of native U1RNP complexes // Nucl. Acids Res. - 1993. - v. 21, N 22. - p. 5130 - 5136

121 .Hoet R.M., Koorneef J., Rooij D.J. Changes in anti-Ul RNA antibodies levels correlate with disease activity in patients with systemic lupus erythematosus overlap syndrome // Arthtitis and Rheumatism. 1993.-v. 35, N 10.-p. 1202

122.Hoet R.M., Koorneef J., Rooij D.J. et al. Correlation between anti-Ul RNA antibodies and disease activity // Mol. Biol. Rep. - 1991. - v. 15. - p. 193 (Abstr.)

123.Hoet R.M., van Venrooij W.J. B-cell epitopes of RNA autoantibodies // Mol. Biol. Rept. - 1992. - v. 16, N 3. - p. 199 - 205

124.Hoet R.M., Weerd P., Gunnewiek H. et al. Epitope region on U1 small nuclear RNA recognized by anti-Ul-RNA-specific autoantibodies // J. Clin. Invest. - 1992. - v. 90. - p. 1753 -1762

125.Hoffman R.W., Sharp G.C., Deutscher S.L. Analisis of anti-Ul RNA antibodies in patients with connective tissue disease : association with HLA and clinical manifestations of disease // Arthris and Rheumatism. - 1995. - v. 38, N 12.-p. 1837 - 1844

126.Hooper В., Frion G., Chandra P. Autoimmunity in a reral community // Clin. Exp. Immun. - 1972. v. 12, N1. - p. 79

127.Hughes W., Fuchs F. Предупреждение в детском возрасте состояний, приводящих к заболеваниям у взрослых / Под ред. Ф. Фолкнера: Пер. с англ. - М: 1982.-е. 117

128.Huminer D., Tomer Y., Pitlick S., Shoenfeld Y. Autoantibodies in cancer patients: Are they tumor related orage related? (Letter) // Autoimmunity. - 1990. - v. 5 - p. 232 - 233

129.Hussain A.M.Z., Marchette N.J., James J. A nitrocellulose membrane based solid phase enzyme immunoassay for detecting polioviruses in stool // J. of Virol. Methods. - 1988. - N 19. - p. 207 - 217

130.1keola S., Shuyi S., Watanabe S. Et al. Detection of possible DNA Repair enzymes on sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide beds by protein blotting to demaged DNA-fixed membrane // Anal. Biochem. - 1991. - v. 192. - p. 96

- 103

131.Ivorra J., Mossuti B., Roman J. et al. Arthritis reumatoide and neoplasia multiple // Med. Clin. - 1991. - v. 97, N 10. - p. 383 - 385

132.Jerne N. Toward a network theory of the immune system // Ann. Immunol. - 1974. - v. 125. - p. 373 - 389

133.Job-Deslandre Ch., Menkes C.J., Michalski B., Tessier F. Polyarthrite rheumatoide syndrome de Gougerot-Sjogren et leucemie myeloide chronique // Rev. Rheum. - 1985. - v. 52, N 4 - p. 247 - 249

134.Kala K.Ch., Antony A. Effect of nucleic acids reactive autoantibodies on tumor cells grown in vivo // Immun. Invest. - 1996. - v. 25, N 4. - p. 321331

135.Kamm R.C., Smith A.G. Nucleic acid concentration in normal human plasma. // Clin. Chem. - 1972. - v. 18. - p. 519 - 522

136.Kasjanova A., Cebecauer L., Balaz V. Antibodies against ssDNA in persons of various age // Mechanisms of ageing and development. - 1984.

- v. 28 - p. 289 - 295

137.Khandjian E.W., Turian G. Release of RNA-DNA protein complex during differentiation of the water mould Allomyces arbuscula II Cell Differentiation. - 1976. - v. 5. - p. 171 - 188

138.Kimberly K.Gither , Owen F.Fox, Hajime Yamagota et al. Implications of anti-Ro/Sjogren's syndrome A antigen. Autoantibody in normal sera for autoimmunity // J. Clin. Invest. - 1987. - v.19, N 3. - p. 841 - 846

139.Kindas-Mugge J., Steiner G., Smolen Y. Similar frequense of autoantibodies aganist 70 kD class heat-shock proteins in helthy subjects and systemic lupus erythematosus patients // Clin, and Exp. Immunol. - 1993. -v. 92, N 1. - p. 46 - 50

140. Kirby K.S. Isolation and characterization of ribosomal ribonucleic acid // Biochem. J. - 1965. - v. 96, N 1. - p. 266 - 269

141.Koffler D., Carr R.I., Agnello V. et al. Antibodies to polynucleotides: distribution in human serum // Science.- 1969. - v. 166. - p. 1648 - 1649

142.Koffler D., Carr R., Angello V. et al. Antibodies to polynucleotides in human sera: antigenic specifity and relation to disease // Science. - 1971. - v. 116.-p. 294-312

143.Koire T., Tomioka H., Kumagai A. Antibodies cross-reactive with DNA and cardiolipin in patients with systemic lupus erythematosus // Clin. Exp. Immun. - 1982. - v. 50. - p. 298 - 302

144.Kolodny G.M., Culp L.A., Rosental L.J. Secretion of RNA by normal and transformed cells // Exptl. Cell Res. - 1972. - v. 73. - p. 65 - 72

145.Koren E., Koscec M., Wolfsonreichlin M. et. al. Murine and human antibodies to native DNA that cross-react with the A and D snRNP polypeptides couse direct injure of cultured kidney cells. // J. of Immunol. - 1995. - v. 154, N 9. - p. 4857 - 4864.

146.Kumar A., Ali R. Detection of anti-RNA antibodies in systemic lupus erythematosus by ELISA using nylon as solid support // Immun. Letters. -1984.-N 7.-p. 293 -296

147.Lacy M., Voss E.W. Direct adsorbtion of ssDNA to polystyrene for characterization of the DNA/anti-DNA interaction and immunoassay for anti-

DNA autoantiddy in New Zeland white mice 11 J. of Immun. Meth. - 1989. -v. 116.-p. 87-98

148.Lanier L.L., Warner N.Z., Ledbetter J.A., Herzenberg L.A. Expression of Lyt-1 antigen on certain murine B-cell lymphomas // J. Exp. Med. - 1981. - v. 153.-p. 998- 1003

149.Le Pecq J.В., Paoletti C.R. A fluorescent complex between ethidium bromide and nucleic acids. Physical and chemical characterization //J. Mol. Biol. - 1967. - v. 27. - p. 87 - 106

150.Ledbetter J.A., Rouse R.V., Micklen S., Herzenberg L.A. T-cell subsets defened by expression of Ly-123 and TLy-1 antigens. Two parameter immunofluorescence and cytotoxicity analysis modifies current views // J. Exp. Med. - 1980. - v. 192. - p. 280 - 295

151.Lee S.W., Sullengen A. Isolation of nuclease-resistant duoy RNA that can protect human acetylcholine receptors from myasthenic antibodies // Nat. Biotechnol. - 1997. - v. 15, N 3. - p. 41 - 45

152.Lei S.W., Yongchao D.H. et al. Предварительная оценка значения нуклеарного антигена при диагностике лейкоза (на кит. яз.) // J. Blijing Normal Univ. Nat. Sci. - 1989. - N 4. - p. 72 - 74. (Цит. по: РЖ Онкология / ВИНИТИ. - 1990. - N 8. - с. 508)

153.Lenkey R., Bibenfild G., Magnius B. et al. // Clin . Immun. Immunopath. - 1985. - v. 34. - p. 11 - 19. (Цит. по Лямперт И.М. // Иммунология. - 1988. - N 4. - с. 5 - 9)

154.Lerner M.P., Lucid S.W., Wen G.J., Nordqueist R.E. Selected area membrane shedding by tumor cells // Cancer Letters. - 1983. - v. 20. - p. 125-130

155.Lundkvist J., Coutinho A., Varela F., Holmberg D. Evidence for a functional idiotypic network among natural antibodies in normal mice // Proc. Nath. Acad. Sci. USA. - 1989. - v. 86, N 13. - p. 5074 - 5078

156.Mandel P., Metais P. Les acides riucleiques du plasma sanguin chez l'homme // Compt. Rend. Soc. biol. - 1948. - v. 142. - p. 241 -243

157.Marx A., Wilisch A., Schuetz A. Expression of neurofilaments and of a fitin epitope in thymic epithelial tumor . Implications for the pathogenesis of myastenia gravis // Am. J. Pathol. - 1996. - v. 148, N 6. - p. 1839 - 1850

158.Matheus M., Bernstein R. Myositis autoantibody inhibits histidil-tRNA synthetase: a model for autoimmunity // Nature. - 1983. - v. 304. - p. 177 -179

159.Matsumura M., Ohosone Y., Miyacki K. et al. Novel autoantibodies directed against the common tertiary configuration of transfer RNA in a patient with interstitial lung disease // Arthritis Rheum. - 1996. - v. 39, N 8. -p. 1308 - 1312

160.Mittra I., Pervin J., Kumaoka S. Thyroid and other autoantibodies in British and Japanese women: an epidemiological study of breast cancer. -Br. Med. J. - 1976,-v. 1 - p. 257

161.Mohammad K., Esen A. A blocking agent and a blocking step are not needed in ELISA, immunostaining dot-blots and Western blots // J. Immunol. Meth. - 1989. - v. 117 - p. 141 - 145

162.Mounford C.E., May G.L., Wright L.C. Proteolipid identified by magnetic resonance spectroscopy in plasma of patient withborder line ovarian tumor // Lancet. - 1987. - v. 1, N 8537. -p. 829 - 834

163.Nossent J.C., Hugsen V., Smeenk R.T., Swaak A.G. Low avidity antibodies to ss DNA as a diagnostic tool // Annals of the Rheumat. Diseases .- 1989. -v. 48, N9.-p. 748-752

164.0cconell C.D., Juhasz A., Kuo C. et al. Detection of tyrosinase mRNA in melanoma by reverse transcription - PCR and electrochemiluminescena// Clin. Chem.-1998.- v.44.-N6.-p.l 161-1169

165.0donnell D.R., Mcgarrey M. J., Tully I. M. Resperatjry syncytial virus RNA in cells from the peripheral blood during acute infection //J. of Pediatrics.- 1998,- v. 133,-N2.-p. 272-274

166.Ghnishi K., Sagawa A., Nakabayashi T. et al. Generation of monoclonal anti-dermatan sulfate antibodies cross reacting to calf thymus DNA // Clin. Exp. Immun. - 1989. - v. 75. - p. 118 - 122

167.Pantel K., Jochson J. Tumor immunologic // MTA. -N8. - p. 410-416

168.Peller S., Kaufman S. Decreased CD45RA T cells in B-cell chronic lymphatic leukemia patients correlation with disease stage // Blood. -1991. - v. 78, N6. - p. 1569- 1573

169.Perofsky B. Clinical aspects of autoimmune hemolytic anemia // Semin. Hematol. - 1985.-v. 13.-p. 251 -265

170.Piront M.L., Schmidt R. Inhibition of long - tern formation by anti-ependymin antisera after active shock-avoidance learning in gold fish // Brain Res. - 1988. - v. 442. N1. - p. 53 - 62

171.Pirozzi S., Voung D.V. Evidence for a transforming growth factors in the serum - free conditioned medium of SV-40 transformed 3T3 fibroblasts // Int. J. Cancer. - 1984,- v.33. - p. 525 - 532

172.Poletaev A.B. Autoantibodies as an universal modulators of biological functions // Bio-Mol. Med. "2000 in Search of Approaches.: I Int. Workshop Proc., Moscow-Riga, 23-24 May, 1992. - Moscow, 1993 - p. 42-48

173.Porzelly S. Molekular mimicry and the generation of autoimmune disease//Rheumatol. Rev. - 1993. - v.2, N1. - p.41 -50

174.Prehn R. // J. Reticuloendothel. Soc. - 1971. - v. 10, N 1. - p. 1 - 16. (Цит. по Гогичадзе Г. К. Возможная роль аутоиммунных процессов в формировании злокачественных новообразований // Иммунология. - 1992. - N 2. - с. 58 - 59)

175.Probes I., Bishop M., Benfield I. Tumor surveillance: have tumor may resist macrophage-mediated host defense // Science. - 1979. - v. 203. - p. 179 - 183

176.Rabek J.F. Singlet O2 // Polymers and Biomolekules. - 1985. - v. 14 - p. 16

177.Ray A., Bazzilai R., Spira G., Inbar M. Oncogenity and immunogenicity associated with membranes isolated from cell free ascites fluid of lymphoma-bearing mice // Cancer Res. - 1978. - v. 38, N 8. - p. 2480 -2485

178.Reichlin M., Hahn B., Koren E. Characterization of anti-ds DNA antibody: crossreaction with Sn RNP polypeptides and cell-binding abilites // The immunologist. - 1995. - v. 3, N 3. - p. 84 - 88

179.Rohwedder A., Keminer O., Foster J. et al. Detection of respiratory syncytial virus RNA in blood of neonates by polymerase chain reaction // J. of Med. Virology. - 1998. - v.54. - N4. - p. 320 -327

180.Rosi A., Guidoni L., Luciani A.M. et al. RNA - lipid complexes released from the plasma membrane of human colon carcinoma cells II Cancer Letters. - 1988. - v. 39. - p. 153 -160

181.Ruold M.A., Perona J.J., Koren E. //Nature. - 1991. - v. 252. -p. 213 - 218. (L1,ht. no Hoet R.M., van Venrooij W.J. B-cell epitopes of RNA autoantibodies II Mol. Biol. Rept. - 1992. - v. 16, N 3. - p. 199 - 205)

182.Sato T., Uchiumi T., Arakawa M., Kominami R. Serological association of lupus autoantibodies to limited functional domain of 28 S ribosomal RNA and to the ribosomal proteins bound to domain // Clin. Exp. Immun. - 1994. -v. 98. p. 35 -39

183.Scherly D., Boelens W., Datan N. et al. Major Determinants of the specificity of interaction between small nuclear ribonucleoproteins U1A and U2B" and their cognate RNAs //Nature . - 1990. v. 345, N 7. - p. 502 - 506

184.Schuller E., Allinquant A. Immunological studies in human aging. II. Associated increase in anti - RNA and anti - DNA antibodies // J. Clin. Lab. Immunol. - 1981. - v. 6. - p. 107 - 108 185.Shoenfeld Y. Idiotypic networ, pathogenic autoantibodies and autoimmunity II Clin, end Exp. Immun. - 1995. - v. 101, N 1. - p. 26 - 28. 186.Shoenfeld Y., Vilner Y., Coates A.R.M. et al. Monoclonal antituberculosis antibodies react with DNA and monoclonal anti-DNA autoantibodies react with Micobacterium tuberculosis // Clin, and Exp. Immunol. - 1986. - v. 66 - p. 255 - 261. 187.Shur P., Monroe M. Antibodies to ribonucleic acid in systemic lupus

erythematosus // Proc. Nath. Acad. Sci. - 1969. - v. 63. - p. 1108 - 1112. 188.Sillevis-Smitt P., Manley G., Dalmau J., Posner J. The The HuD paraneoplastic protein shares immunogenetic regions between PEM/PSN patients and several strains and species of experimental animals // J. Nueroimmunol. - 1996. - v. 71, N 1-2 . - p. 199 - 206 189.Slavkin H.C., Flores Ph., Bringas P., Bavetta L.A. Epithelial -mesenhymal interactions during ontogenesis. I. Isolation of several intracellular matrix low molecular weight methylated RNAs // Developmental Biology. - 1970. - v. 23. - p. 276 - 296 190.Smeenk R.J.T., Rooijen A.V., Swaak J.G. Dissociation studies of DNA/anti-DNA complex in relation to anti-DNA avidity // J.Immunol. Meth. - 1988.-v. 109.-p. 27-35 191.Spencer-Green G., Kellyy L., Adams L.E. et al. Polynucleotide antibodies in connective tissue disease: viral markers or disease mediators? // J. Lab. Clin. Med. - 1986.-v. 107.-p. 159-165 192.Stollar D., Mclnerrey T., Gavron T. et al. Cross-reaction of nucleic acids with monoclonal antibodies to phophatidylinositol phosphate and cholesterol // Mol. Immunol. - 1989. - v. 28, N 1. - p. 73 - 79

193.Stroun M., Ancer Ph. Nucleic acids spontaneously released by living frog auricles.// Biochem. J., - 1972- v. 128.-pp.-100-101

194.Stroun M., Ancer Ph., Beljanski M. et al. Presence of RNA in the nucleoprotein complex spontaneosly released by human lymphocytes and frog auricles in culture // Cancer Res. - 1987. - v. 38. p. 3446 - 3454

195.Stroun M., Ancer Ph., Lyautey J. et al. Isolation and characterization of DNA from the plasma of cancer patients// Cancer Res. - 1987. - v.23.-pp. 707-712

196.Sun K.H., Lin W.T., Tsai C.Y. et al. Anti-ds DNA antibodies cross-react with ribosomal P proteins expressed on the surface of glomerular mesangial cells to a cytostatic effect // Immunology. - 1995. - v. 85, N 2. -p. 262 - 269

197.Suzuki N.,Sakane T., Engleman E.G. Anti-DNA antibody production by CD5+ and CD5- B cells of patients with systemic lupus erythematosus // J. Clin. Invest. - 1990. - v. 85 - p. 238 - 247

198.Swaak T., Smeenk R. Detection of anti-dsDNA as a diagnostic tool: a prospective study in 441 non SLE patients with anti-dsDNA antibody // Ann. Rheum. Dis. - 1985. - v. 44 - p. 245 - 251

199.Swissa M., Amital-Teplizki H., Haim N„ Cohen Y.,Shoenfeld Y. Autoantibodies in neoplasia. An unresolved enigma // Cancer. - 1990. - v. 65, N 11. - p. 2554-2558

200.Taillan B., Gamier G., Ferrari E. et al. Limphome malin un cours d'une polyarthrite rheumatoide traifee par de faibles doses de methotrexate // Rew. rheum. et malad. osteo-artic. - 1993. - v. 60, N 3. - p. 248 - 250

201.Talal N., Steinberg A.D., Daley G. Inhibition of antibody binding polyinosinic-polycytoclytic acid in human and mouse lupus sera by viral and synthetic ribonucleic acids //J. Clin. Invest. - 1971. - v. 50. - p. 1248 - 1252

202.Tannenberg A.E.G., Muller H.K., Cauchi M.N., Nairn R.C. Incidence of autoantibodies in cancer patients // Clin. Exp.Immunol. - 1973. - v. 15 -p. 153-158

203.Tatal N., Bunin J.J. Development of malignant lymphoma in the course of Sjogren's syndrome // Am. J. Med. - 1969. - v.36 - p.529-540

204.TayIor D.D., Black P.H. Shedding of plasma membrane fragments. Neoplastic and developmental importance. In: The cell surface in development and cancer. // Develop. Biol. - 1985. - v. 3. - p. 33 - 37

205.Terasaki T., Miyamoto K. Correlation of electrophoretic mobility and oxygen uptake of Ehrlich ascites tumor cells. // Cancer Res. - 1979. - v. 39. - p. 250 - 256

206.Tsai R.E., Harper D.S., Keene J.D. UlsnRNP-A protein selects a ten nucleotide consensus sequence from degenerative RNA pool presented in various structural contexts // Nucl. Acids Res. - 1991. - v. 19. - p. 4931 -4936

207.Tsusaka K., Winkler T.H., Kalden J.R., Reichlin M. Autoantibodies to double-stranded (ds) DNA immunoprecipitate 18 S ribosomal RNA by vireo their interaction with ribosomal protein SI and suppers in vitro protein syntheses // Clin. Exp. Immunol. - 1996- v. 106, N 3. - p. 504 - 508

208.Turnbull A.R., Turner D.T.L., Fraser J.D., Lloyd R.S., Lang C.J., Wright R. Autoantibodies in early breast cancer: a stage-related phenomenon? // Br. J. Cancer - 1978 - v. 38. - p. 461 - 463

209.Uchiumi T., Kominami R. A functional site of GTPase-associated center within 28S ribosomal RNA probed with an anti-RNA autoantibody // The EMBO Journal. - 1994. - v. 13, N 14. - p. 3389 - 3394

210.Uchiumi T., Kominami R. Binding of mammalian ribosomal protein complex P0, PI, P2 and protein LI2 to GTPase associated domain of 28S

ribosomal RNA and effect on the accessibility to anti-28S RNA autoantibody // J. Biol. Chem. - 1997. - v. 272, N 6. - p. 3302 - 3308

211.Uchiumi T., Traut R.R., Elkon K., Kominami R. A human autoantibody specific for a unique conserved region of 28 S ribosomal RNA inhibits the interaction of elongation factors la and 2 with ribosomes // J. Biol. Chem. -1991. - v. 266, N 4. - p. 2054 - 2062

212.Uchiumi T., Wada A., Kominami R. A base substitution within the GTPase-associated domain of mammalian 28S ribosomal RNA causes high thiostrepton // J. Biol. Chem. - 1995. - v. 270, N 50. - p. 2889 - 2893

213.Vaishnov Y.N., Antony A. Antibodies raised against denatured DNA bind to double-stranded DNA // J. Immun. Meth. - 1989. - v. 118, N 1. - p. 25 -30

214.Van Damm A.P., Wekking E.M., Callewaert J.A. Psychiatric symptomes before systemic lupus erythematosus is diagnosed // Rheumatal. Ins. - 1994. V. 14.-p. 57-62

215.Van Venrooij W.J., Hoet R., Castrop J. et al. Anti- (Ul) small nuclear RNA autoantibodies in anti-small nuclear ribonucleoproteid sera from patients with connective tissue diseases // J. Clin. Invest. - 1990. - v. 86. - p. 2154 -2160

216.Vasques S., Kavanough A.F., Schneider N.R.. Wacholtz M.C., Lipsky P.E. Acut nonlymphocytic leucemia after treatment of systemic lupus erythematosus with immunosuppressive agent // J. Rheumatol. - 1992. -v. 19, N 10. - p. 1625 - 1627

217.Vinter V.G., Agliullina D.G., Sattarova L.I. Autoantibodies to nucleic acids in neoplasia // Accepted to XIV European Congress of Allergology and Clinical Immunology EC ACL 95, Spain, Madrid, June 1995

218.Wasserman J., Glash U., Blomeren H. Autoantibodies in patients with carcinoma of the breast: Correlation withprognosis // Clin. Exp. Immunol. - 1975. - v. 19 - p. 417 - 423

219.Watahabe M., Almeida D., Serrano S. Immunotherapy of metastases with lymphocytes treated with exogenic RNA in mice bearing B16 melanoma. Abstr. 2-nd World "Congr. C.M.W., Ottawa. - 1996. - Sept., 3-7 // Cell and mol Biol.- 1996. - v. 42. - p. 44 - 45

220.Wieczorek A.J., Rhyjner C., Block L.H. Isolation and characterization of an RNA - proteolipid complex associated with the malignant state in humans // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1985. - v. 82. - p. 3455 - 3459

221.Weiczorek A.J., SitaramanV., Machleidt W. Et al. Diagnostic and prognostic voles of RNA-proteolipid in sera of patients with malignant disorders following therapy: first clinical evaluation of a novel tumor marker // Cancer Res. - 1987. - v. 1, N 8537. - p. 6407 - 6412

222.Weiss L., Sinks L.F. The electrokinetic surfaces of human cells of lymphoid origin and their ribonuclease succeptibility // Cancer Res. -1970.-v. 30.-p. 90-94

223.Wilusz J., Keene J.D. Autoantibodies specific for U1 RNA and initiator metionine tRNA. // J. Biol. Chem. - 1984. - v. 261. - p. 5467 - 5472

224.Wortman J., Rosse W., Logue G. Gold agglutinin autoimmune hemolytic anemia in non-hematologic malignancies // Am. J. Hematol. - 1975. - N 6. -p. 275 - 276

225.Wyld D.K., Selby P., Perren T. et al. Detection of colorectal cancer cells in peripheral blood by reverse-transcriptase polimerase chain reaction for cytoceratin 20 // Inter. J. of Cancer.- 1998.- v. 79, N 3. - p. 288 - 293

226.Yadin O., Sarov B., Naggan L., Slor H., Shoenfeld Y. Natural autoantibodies in the serum of healthy woman - a five-year follow up // Clin, and Exp. Immunol. - 1989. - v. 75. - p. 402 - 406

227.Yamamoto K. Possible mechanisms of autoantibody production and connection of viral infections in human autoimmune desease // Tohoku Journal of Exper. Medicine. - 1994. - v. 173, N 1. - p. 75 - 82

228.Youinon P., Mackenzie L.E., Lamuor A.et al. Human CD5-positive B-cells in Limphoid malignancy and connective tissue diseases // Eur. J. Clin. Invest. - 1993.-v. 23, N3,-p. 139-150

229.Zeromski J.O., Gorny M.K., Jarczewska K. Malignancy associated with antinuclear antibodies // Lancet. - 1972. - v. 11 - p. 1035 - 1036

230.Zouali M., Stollar B.D. Thymidine and guanine base specificity of human myeloma proteins with anti-DNA activity // J. Clin. Invest. -1986.-v. 78-p. 1173-1178