Биосинтез поли-3-гидроксибутирата разной молекулярной массы культурой Azotobacter chroococcum и его биодеградация тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Николаева, Дария Александровна

• Николаева, Дария Александровна
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Николаева, Дария Александровна

Введение

Часть 1. Литературный обзор

Глава 1. История изучения полигидроксиалканоатов

Глава 2. Физико-химические свойства полигидроксиалканоатов

2.1. Строение ПГБ. Гранулы ПГБ.

2.2. Вариабельность мономерного состава ПГА.

2.3.Физико-химические свойства поли-3-гидроксибутирата и поли-З-гидроксибутирата-З-гидроксивалерата

Глава 3. Физиологические функции ПГА

3.1. Распространенность ПГА среди прокариот.

3.2. Условия, способствующие накоплению ПГБ в клетках. ПГБ как резервное вещество для запасания углерода и энергии

3.3. ПГБ как депо восстановительных эквивалентов

3.4. Низкомолекулярный ПГБ в составе клеточных мембран

Глава 4. Пути синтеза и распада ПГБ

4.1. Синтез поли-3-гидроксибутирата

4.2. Внутриклеточная деградация ПГБ

Глава 5. Влияние условий культивирования на молекулярную массу ПГА 34 5.1. Влияние разных факторов на молекулярную массу ПГБ, синтезируемого метилотрофными и водородоокисляющими бактериями 35 5.2. Влияние разных факторов на молекулярную массу и выход ПГБ у бактерий рода Azotobacter

5.3. Использование неочищенных субстратов для биосинтеза ПГБ бактериями рода Azotobacter

5.4.Синтез сополимера поли-З-гидроксибутирата-З-гидроксивалерата бактериями рода Azotobacter

Глава 6. Внеклеточная биодеградация ПГА

6.1. Исследование биодеградации ПГБ в природных условиях и в модельных системах

6.2. Микроорганизмы, способные к внеклеточной деградации ПГА. ПГА-деполимеразы.

Глава 7. Применение ПГА в медицине

Часть 2. Материалы и методы исследования

1. Объекты исследования

1.1. Культурально - морфологические признаки штаммов

Azotobacter chroococcum 7Б и Azotobacter chroococcum 35.

1.2. Физиолого-биохимические признаки.

2. Получение высокоочищенного ПГБ из бактериальной массы

3. Определение содержания поли-3-гидроксибутирата в клетках по Зевенхаузену

4. Определение молекулярной массы полимера

5. Газохроматографические измерения

6. Исследование состава полимера методом ядерно-магнитного резонанса

7. Определение степени кристалличности образцов полимера методом рентгеноструктурного анализа

8. Механические испытания образцов пленок полимера

9. Электронная микроскопия

10. Исследование биодеградации пленок ПГБ в почвенной суспензии

11. Изучение биодеструкции пленок ПГБ в накопительной культуре денитрифицирующих бактерий

12. Изготовление пленок ПГА матричного типа с включением модельного лекарственного вещества метилового красного)

Источники углерода, используемые в качестве ростовых субстратов

Часть 3. Результаты и их обсуждение

Глава 1. Влияние разных источников углерода и условий культивирования на степень полимеризации поли-3-гидроксибутирата синтезируемого культурой Azotobacter chroococcum. Получение сополимера поли-3-гидроксибутирата- 3-гидроксивалерата (ПГБ-ГВ)

1.1. Биосинтез поли-3-гидроксибутирата и динамика изменения молекулярной массы ПГБ в процессе периодического культивирования Azotobacter chroococcum 7Б

1.2. Влияние условий культивирования на степень полимеризации ПГБ 68 1.2.1. Влияние разных источников углерода на молекулярную массу ПГБ

1.2.2. Влияние дополнительного источника углерода (ацетата натрия) на молекулярную массу ПГБ, синтезируемого A. chroococcum 7Б и A. chroococcum

1.2.3. Влияние рН среды на молекулярную массу синтезированного ПГБ

1.2.4. Влияние уровня аэрации

1.2.5. Влияние температуры

1.3. Условия синтеза сополимера поли-3-гидроксибутирата-3-гидроксивалерата при использовании в качестве продуцента A. chroococcum 7Б.

Глава 2. Биодеградация ПГБ . Изменение физико-химических характеристик полимера в процессе биодеградации.

2.1. Биодеградация ПГБ в модельных условиях почвенного сообщества

2.2. Биодеструкция ПГБ сообществом денитрифицирующих микроорганизмов

2.3. Биодеструкция ПГБ микроскопическими грибами

Глава 3. Кинетика высвобождения модельного лекарственного вещества (метилового красного) из полимерной матрицы ПГБ и ПГБ-ГВ в зависимости от физико-химических характеристик полимера

Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биосинтез поли-3-гидроксибутирата разной молекулярной массы культурой Azotobacter chroococcum и его биодеградация»

Истощение нефтяных ресурсов и необходимость создания специальных полимерных материалов, совместимых с природой, послужили мощным стимулом для разработки принципиально новых полимеров - биоразлагаемых термопластиков, изучение которых является сравнительно молодой областью науки. Поли-З-гидроксибутират и его сополимеры, которые относятся к семейству микробных полигидроксиалканоатов (ПГА), синтезируются в клетках микроорганизмов как запасные вещества. По своим базовым показателям эти полимеры близки к синтетическим термопластикам (полипропилену и полиэтилену), но обладают рядом уникальных свойств, главными из которых являются биосовместимость и биодеградабельность. В отличие от обычных пластиков, ПГА не засоряют окружающую среду, а полностью разлагаются до СС>2 и воды. Перспективными областями использования ПГА являются: в промышленности - производство биоразлагаемых пластмасс, упаковок и материалов одноразового пользования; в сельском хозяйстве - создание систем медленного высвобождения удобрений и агрохимикатов; в медицине -изготовление рассасывающихся шовных нитей, хирургических пластин, пленок для покрытия ран, эндопротезов, матриц для лекарственных форм пролонгированного действия и др.

В связи с тем, что для разных целей требуется полимер с определенными технологическими характеристиками, которые, в первую очередь, определяются качественным составом мономеров и молекулярной массой полимера, необходимо уметь управлять процессом биосинтеза с целью получения полимера с заданными свойствами.

Целью нашей работы было изучение влияния условий культивирования на величину молекулярной массы поли-3-гидроксибутирата синтезируемого штаммом-продуцентом Azotobacter chroococcum 7Б; получение сополимера поли-З-гидроксибутирата-З-гидроксивалерата; изучение влияния условий среды на скорость биодеструкции полученных биопластиков.

Часть 1. Литературный обзор Глава 1. История изучения полигидроксиалканоатов

Суданофильные, липидоподобные включения впервые были отмечены в клетках Azotobacter chroococcum в начале прошлого столетия (Meyer, 1903). Стап (Stapp, 1924) обнаружил растворимость "жира" из клеток Azotobacter в хлороформе, но ему не удалось установить химическую природу этого вещества. Состав вещества был открыт Лемуанем в 1926 г. благодаря случайному наблюдению, что в анаэробных условиях происходит подкисление суспензии Bacillus megaterium. Образовавшаяся кислота была идентифицирована как Р-гидроксимасляная, а вещество - источник этой кислоты как поли-{5-гидроксибутират (Lemoigne, 1926). ПГБ не привлекал к себе широкого внимания исследователей вплоть до конца 50х гг., когда была опубликована работа, посвященная синтезу ПГБ у бактерий рода Bacillus, в которой было показано, что в клетках синтезируется тем больше ПГБ, чем больше соотношение C/N в среде культивирования, а внутриклеточная деградация ПГБ происходит в отсутствие экзогенного источника углерода (Macrae and Wilkinson, 1958). Авторы сделали вывод, что ПГБ является резервным веществом для запасания углерода и энергии, которое задерживает лизис клетки в период голодания. Кроме того, в работе была описана процедура выделения гранул ПГБ щелочным гипохлоритом, благодаря чему стало возможным быстро выделять ПГБ из клеток. Начиная с этого времени, интерес к поли-3-гидроксибутирату резко возрос. В последующие пятнадцать лет интенсивно изучались такие аспекты, как распространенность ПГБ среди микроорганизмов, в частности среди бактерий рода Pseudomonas ( Doudoroff, Stanier, 1959; Delafield et al., 1965), Azotobacter

Stockdale et al., 1968), Hydrogenomonas (Schlegel et al., 1961), Chromatium (Schlegel, 1962), цианобактерий (Jensen, Sicko, 1971), и многих других (в обзоре Dawes, Senior, 1973); физические и химические свойства ПГБ (Lundgren et al., 1965); влияние разных методов экстракции ПГБ на молекулярную массу полимера (Alper, Lundgren, 1963); кристаллическая структура ПГБ (Alper, Lundgren, 1963; Wilkinson, Munro, 1967; Cornibert, Marchessault, 1972); морфология и свойства гранул ПГБ (Merrick, Doudoroff, 1961; Boatman, 1964; Lundgren et al., 1964; Merrick et al., 1965; Griebel et al., 1968); новые методы качественного и количественного определения ПГБ (Norris, Greenstreet, 1958; Williamson, Wilkinson, 1958; Law, Slepecky, 1961); регуляция биосинтеза ПГБ (Slepecky, Law, 1961; Kominek, Halvorson, 1965; Ritchie, Dawes, 1969; Senior, Dawes, 1971; Senior et al., 1972; Dawes, Senior, 1973; Oeding, Schlegel, 1973); энзимология биосинтеза ПГБ (Kominek, Halvorson, 1965; Griebel et al., 1968; Griebel, Merrick, 1971; Ritchie et al., 1971; Dawes, Senior, 1973; Oeding, Schlegel, 1973; Senior, Dawes, 1973); внутриклеточная и внеклеточная деградация ПГБ, энзимология этих процессов (Chowdhury,1963; Merrick, Doudoroff, 1964; Delafield et al., 1965; Gavard et al., 1966; Lusty, Doudoroff, 1966; Merrick, Yu, 1966; Griebel et al., 1968; Griebel, Merrick, 1971; Senior, Dawes, 1973). К концу 60x гг. накопилось достаточное количество исследований, свидетельствующих о том, что синтез этого резервного полимера - широко распространенное явление среди грамотрицательных бактерий. В обзоре, опубликованном в 1973 г. и посвященном роли и регуляции метаболизма резервных полимеров в микроорганизмах, поли-3-гидроксибутират рассматривался в широком аспекте,

1900

Обнаружение суданофильных включений в кпетках прокариот

Изучение функций П(ЗГБ) в клетке Определение свойств гашвного П(ЗГБ) в гранулах Описание других 3-гндроксиалканоатов

Синтез ПГА, содержащих 3-, 4-, н 5- гидроксналканоаты Промышленное производство П(ЗГБ ■ ко ■ ЗГВ) Клонирование генов биосинтеза ПГА

Синтез ПГА рекомбинатнымн бактериями Изучение П(ЗГБ) m vivo методом ЯМР

Продукция ПГА в трансгенных растениях Биосинтез ПГА ш vitro Выявлене путей, связывающих биосинтез ПГА с центральными метаболическими путами

История изучения ПГА в XX столетни как бактериальное резервное вещество, функционально аналогичное крахмалу и гликогену у эукариот (Dawes and Senior, 1973).

Поли-З-гидроксибутират более полувека оставался единственным известным видом бактериальных полигидроксиалканоатов. В дальнейшем было обнаружено, что, кроме бутирата, ряд других гидроксипроизводных кислот (валериановой, гексановой, октановой и др.) могут входить в состав бактериальных ПГА. В начале 70х гг. полиэфир, обнаруженный в активированном иле был проанализирован методом газовой хроматографии. Полиэфир, подобный, но не идентичный ПГБ по своим химическим и физическим свойствам, содержал С4 и Cs-мономеры как основную фракцию и Сб и С7-мономеры как минорные компоненты (Wallen, Rohwedder, 1974). Затем список ПГА, отличных от ПГБ пополнился благодаря открытию поли-3-гидроксиоктановой кислоты, которую синтезирует Pseudomonas oleovorans при росте на октане (De Smet et al., 1983). Полиэфиры, содержащие 3-гидр оксидекановую и 3-гидроксидодекановую кислоты были обнаружены у других псевдомонад (Haywood et al.,1990; Timm and Steinbuchel, 1990). К настоящему времени известно около 100 различных гидроксиалканоатов, входящих в состав биосинтетических ПГА. Был проведен скрининг природных и генетически модифицированных микроорганизмов на наличие и состав ПГА, однако ПГА, включающих в себя мономеры с длиной цепи больше, чем Ci6, не обнаружено (Steinbuchel and Valentin, 1995).

Следующим этапом в изучении бактериальных ПГА было клонирование и описание генов, участвующих в биосинтезе резервных полиэфиров. В конце 80х гг. клонированы гены Ralstonia eutropha (прежнее название - Alcaligenes eutrophus), кодирующие ферменты биосинтеза ПГА, и получены рекомбинантные штаммы Esherichia coli с функционально активным комплексом этих генов (Slater et al., 1988; Schubert et al., 1988; Peoples and Sinskey, 1989). Ключевым в биосинтезе ПГА является фермент, ответственный за реакцию полимеризации и названный ПГА-синтазой. К настоящему времени клонировано около 38 структурных генов ПГА-синтазы из более чем 32 разных видов бактерий. Успешное клонирование генов биосинтеза ПГА сделало возможным создание трансгенных растений, которые рассматриваются как возможные продуценты ПГА в будущем (Poirier et al., 2002; Lossl et al., 2003).

До 70-х гг. интерес к ПГБ в основном определялся его физиологической ролью в микроорганизмах, возможному использованию этого природного полимера для нужд человека уделялось мало внимания, хотя в 60-х гг. появились первые патенты по получению ПГБ путем микробной ферментации (Baptist, 1962а), выделению ПГБ из бактериальной биомассы (Baptist, 1962b) и др. Резкое повышение цен на нефть в середине 70-х гг. послужило импульсом к разработке технологии промышленного производства ПГБ путем микробиологической ферментации. Пионером в этой области была английская компания ICI (Imperial Chemical Industries). В качестве продуцента использовалась водородоокисляющая бактерия Ralstonia eutropha. Компанией ICI были получены патенты на разные способы производства ПГБ (Powell et al., 1980; Hughes, Richardson, 1981; Richardson, 1984), экстракции полимера из бактериальной биомассы (Holmes et al., 1980; Holmes, Jones, 1981; Barcham, Selwood, 1982; Stageman, 1984), изготовление композитов ПГБ с другими полимерами (Holmes et al., 1981), а также на технологию производства бактериальных сополимеров 3-гидроксибутирата и ряда других мономеров, включая 3-гидроксивалерат (Holmes et al., 1982). В настоящее время лидерами в развитии промышленного производства ПГА за рубежом являются компании Monsanto и Metabolix Inc. (Madison, Huisman, 1999).

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Николаева, Дария Александровна

107 Выводы

1. Показано, что при росте на разных источниках углерода Azotobacter chroococcum 7В синтезирует полигидроксибутират разной молекулярной массы. Максимальная степень полимеризации полигидроксибутирата отмечена при росте на сахарозе.

2. Показана возможность варьирования степени полимеризации ПГБ путем изменения условий культивирования: рН среды, температуры, уровня аэрации, внесения в среду культивирования дополнительного источника углерода - органических кислот.

3. Впервые разработан способ получения ПГБ заданной молекулярной массы при внесении в среду определенной концентрации дополнительного источника углерода - ацетата натрия. Способ запатентован.

4. Прослежена динамика изменения молекулярной массы ПГБ в процессе роста Azotobacter chroococcum: молекулярная масса ПГБ постепенно увеличиваясь, достигает максимума к 26 ч культивирования (1900 kDa), а к концу ферментации снижается до 1500 kDa.

5. Показано, что ПГБ легко подвергается биодеструкции разными сообществами почвенных микроорганизмов. Активной биодеградации способствуют аэробные условия и дополнительное обеспечение среды нитратами.

6. Впервые выделено и рекомендовано как тест-система для оценки биодеградации ПГА сообщество микроорганизмов, способное разрушать ПГБ в короткие сроки (3-7 дней). Показана зависимость скорости биодеструкции пленок полимера от его исходной молекулярной массы.

7. Показано, что скорость высвобождения модельного лекарственного вещества из полимерной матрицы ПГБ зависит от молекулярной массы полимера: чем меньше молекулярная масса ПГБ, тем выше скорость высвобождения.

8. Получен сополимер полигидроксибутират-со-гидроксивалерат с содержанием гидроксивалерата 17 % и 2,5% при использовании соответственно валериановой и пропионовой кислот в качестве дополнительных источников углерода.

9. Показано, что скорость высвобождения модельного лекарственного вещества зависит от мономерного состава полимерной цепи: скорость высвобождения из полимерной матрицы П(ГБ-ГВ) выше, чем из гомополимера ПГБ и зависит от процентного содержания гидроксивалерата в составе сополимера.

В заключение хочу выразить большую благодарность своему научному руководителю кандидату биологических наук Гарине Александровне Бонарцевой за внимательное руководство на протяжении всего времени выполнения работы.

Выражаю искреннюю благодарность кандидату биологических наук Вере Леонидовне Мышкиной и сотруднику Института микробиологии РАН кандидату биологических наук Марине Владимировне Кевбриной за существенную помощь в экспериментальной работе.

Хочу также поблагодарить заведующего группой биохимии азотфиксации Института биохимии им. А.Н. Баха РАН доктора биологических наук Алексея Федоровича Топунова и всех сотрудников лаборатории за доброжелательное отношение ко мне и моей работе.

Хочу поблагодарить сотрудников Института нефтехимического синтеза им. А.В. Топчиева РАН Виктора Анатольевича Герасина, кандидатов химических наук Александра Васильевича Реброва и Марину Юрьевну Горшкову за помощь в работе.

Также хочу поблагодарить кандидата биологических наук Надежду Эдуардовну Петрову и сотрудника Института нефтехимического синтеза им. А.В. Топчиева РАН Татьяну Константиновну Махину за дружеское участие, помощь и поддержку.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Николаева, Дария Александровна, 2004 год

1. Биосовместимость. Под ред. В.И. Севастьянова// Москва: "Информационный центр ВНИИ геосистем", 1999, 368 с.

2. Волова Т.Г., Беляева О.Г., Плотников В.Ф., Пузырь А.П. Исследование биодеградации микробных полиоксиалканоатов// Докл. АН, 1996, т. 350, с. 707-711.

3. Волова Т.Г., Луковенко С. Г., Васильев А.Д. Получение и исследование физико-химических свойств микробных полиоксиалканоатов// Биотехнология, 1994, № 1, с. 19-22.

4. Кабанов В.А. Практикум по высокомолекулярным соединениям// Москва: Химия, 1985, 224 с.

5. Козловский А.Г., Желифонова В.П., Винокурова Н.Г., Антипова Т.В., Иванушкина Н.Е. Изучение биодеградации полигидроксибутирата микроскопическими грибами//Микробиология, 1999, т.68(3), с. 340-346.

6. Короткова Н. А., Доронина Н. В., Троценко Ю.А. Биосинтез сополимера 3-гидроксибутирата/3-гидроксивалерата Methylobacterium extorquens: метаболизм пропанола, пропионата, пентанола и валерата// Микробиология, 1999, т. 68(3), с. 347-355.

7. Краткий определитель бактерий Берги. Под ред. Дж. Хоулта. 8-е изд./ Москва: Мир, 1980,495 с.

8. Платэ Н.А., Васильев А.Е. Физиологически активные полимеры/ Москва: Химия, 1986, 294 с.

9. Пхакадзе Г.А. Биодеструктивные полимеры/ Киев: Наукова думка, 1990, 143 с.

10. Ю.Рафиков C.P., Будтов В.П., Монаков Ю.Б. Введение в физико-химию растворов полимеров/ Москва: Наука, 1978, 328 с.

11. П.Ребров А.В., Дубинский В.А., Некрасов Ю.П., Бонарцева Г.П., Антипов Е.М., Stamm М.М. Структурные особенности высокоориентированного полигидроксибутирата при его упругой деформации// Высокомол. Соед., сер. А, 2002, т. 44, с. 1-5.

12. Семчиков Ю.Д. Высокомолекулярные соединения/ Москва Н. Новгород: Изд-во НГУ, "Академия", 2003, 368 с.

13. Троценко Ю.А., Белова Л.Л. Организация и регуляция биосинтеза полигидроксибутирата/валерата у бактерий// Микробиология, 2000, т. 69(6), с. 753-763.

14. Abe Н., Doi Y. Structural effects on enzymatic degradability for poly(R )-3-hydroxybutyric acid. and its copolymers: mini-review// Int. J. Biol. Macromol., 1999, v. 25, pp. 185-192.

15. Akhtar S., Pouton C.W., Notarianni L.J. The influence of crystalline morphology and copolymer composition on drug release from solution cast and melt-processed P(HB-HV) copolymer matrices// J. Controlled Release, 1991, v. 17, pp. 225-234.

16. Akhtar S., Pouton C.W., Notarianni L.J. Crystallisation behaviour and drug release from bacterial polyhydroxyalkanoates// Polymer, 1992, v. 33(1), pp. 117-126.

17. Akita S., Einada Y., Miyaki Y., Fugita H. Properties of poly(P-hydroxybutyrate) as a solution// Macromol., 1976, v. 9, pp. 774-780.

18. Alper R., Lundgren D.G. Properties of poly-P -hydroxybutyrate. I. General considerations concerning the naturally occuring polymer// Biopolymers, 1963, v. 1, pp. 545-556.

19. Anderson A. J., Dawes E.A. Occurrence, metabolism, metabolic role, and industrial uses of bacterial polyhydroxyalkanoates// Microbiol. Rev., 1990, v. 54(4), pp. 450-472.

20. Asrar J., Gruys K.J. Biodegradable Polymer (Biopol®)// In Series of Biopolymers in 10 vol. Ed. A. Steinbuchel. Wiley-VCY Verlag GmbH, 2002, v. 4, pp. 55-86.

21. Atkins T.W., Peacock S.J. In vitro biodegradation of polyhydroxybutyrate-hydroxyvaleate microcapsules exposed to Hank's buffer, newborn calf serum, pancreatin and synthetic gastric juice// J. Microencapsulation, 1997, v. 14, pp. 35-49.

22. Ballard D.G.H., Holmes P.A., and Senior P.J. In: Recent Advances in Mechanistic and Synthetic Aspects of Polymerization, v. 215// Reidel (Kluwer) Publishing, 1987, pp. 293-314.

23. Baptist J.N. Process for preparing poly-P-hydroxybutyric acid. 1962a. US Patent N 3,036,959.

24. Baptist J.N. Process for preparing poly-P-hydroxybutyric acid. 1962b. US Patent N 3,044,942.

25. Barcham P.J., Selwood A. Extraction of poly(beta-hydroxybutyric acid). 1982. European Patent N 58,480.

26. Barnard G.N., Sanders J.K., The poly-P-hydroxybutyrate granule in vivo. A new insight based on NMR spectroscopy of whole cells// J. Biol. Chem., 1989, v. 264(6), pp. 3286-91.

27. Biedermann J., Owen A.J., Schloe K.T, Gassner F., Susmuth R. Interaction between poly-3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate and a denitrifying Pseudomonas strain // Can. J. Microbiol., 1997, v. 43, pp. 561 -569.

28. Boatman E.S. Observation on the fine structure of spheroplasts of Rhodospirillum rubrum// J. Cell Biol., 1964, v. 20, pp. 297-311.

29. Brandle H., Bachofen R., Mayer J., Wintermantel E. Degradation and application of polyhydroxyalkanoates // Can. J. Microbiol. 1995. V. 41 . P. 143-153.

30. Brandl H., Puchner P. Biodegradation of plastic bottles made from "Biopol" in an aquatic ecosystem under in situ conditions// Biodegrasdation, 1992, v. 2, pp. 237-243.

31. Braunegg G., Bogensberger B. Zur Kinetik des Wachstums und der Speicherung von Poly-D(-)-3-hydroxybutersaure bei Alcaligenes latusll Acta Biotechnol., 1985, v. 4, pp. 339-345.

32. Braunegg G., Lefebvre G., Genser K.F. Polyhydroxyalkanoates, biopolyesters from renewable resources: Physiological and engineering aspects// J. Biotechnol., 1998, v.65, pp. 127-161.

33. Budwill K., Fedorak Ph.M., Page W.J. Anaerobic microbial degradation of poly(3-hydroxyalkanoates) with various terminal electron acceptors// J. Environ. Polym. Degrad., 1996, v. 4, pp. 91-102.

34. Byrom D. Polymer synthesis by microorganisms: technology and economics// Trends Biotechnol., 1987, v. 5, pp. 246-250.

35. Byrom D. Production of poly-p-hydroxybutyrate: poly-P-hydroxyvalerate copolymers// FEMS Microbiol. Rev., 1992, v. 103, pp. 247-250.

36. Cammas S., Bear M.M., Moine L., Escalup R., Ponchel G., Kataoka K., Guerin Ph. Polymers of malic and 3-alkylmalic acid as synthetic PHA in the design of biocompatible hydrolisable devices// Int. J. of Biol. Macromol., 1999, v. 40, pp. 6821-6830.

37. Choi J., Lee S.Y. Process analysis and economic evaluation for Poly(3-hydroxybutyrate) production by fermentation// Bioprocess Engineering, 1997, v. 17, pp. 335-342.

38. Choi M.H., Yoon S.C. Polyester biosynthesis characteristics of Pseudomonas citronellis grown on various carbon sources, including 3-methyl-branched substrates// Appl. Environ. Microbiol., 1994, v. 60, pp. 3245-3254.

39. Cornibert J., Marchessault R.H. Physical properties of poly-P-hydroxybutyrate. IV. Conformational analysis and crystalline structure// J. Mol. Biol., 1972, v. 71, pp. 735-756.

40. Davis J.B. Cellular lipids of a Nocardia grown on propane and n-butane// Appl. Microbiol., 1964, v. 12, pp. 301-304.

41. Dawes E.A., Senior P.J. The role and regulation of energy reserve polymers in microorganisms//Adv. Microb. Physiol., 1973, v. 10, pp. 135-266.

42. Delafield F. P., Doudoroff M., Palleroni N.J., Lusty C.J., Contopoulos R. Decomposition of poly-P-hydroxybutyrate by Pseudomonas// J. Bacteriol., 1965, v. 90, pp. 1455-1466.

43. DeSmet M., Eggink G., Witholt В., Kingma J. Characterization of intracellular inclusions formed by Pseudomonas oleovorans during growth on octane// J. Bacteriol., 1983, v. 154, pp. 870-878.

44. Doi Y., Microbial Polyesters// VCH, New York, 1990, pp. 89-98.

45. Doi Y., Segawa A., Kawaguchi Y., Kunioka M. Cyclic nature of poly(3-hydroxybutyrate) metabolism in Alcaligenes eutrophus // FEMS Microbiol. Lett., 1990a, v. 67, pp. 165-170.

46. Doi Y., Segawa A., Kunioka M. Biosynthesis and characterization of poly(3-hydroxybutyrate-co-4-hydroxybutyrate) in Alcaligenes eutrophusll Int. J. Biol. Macromol., 1990b, V. 12(2), pp. 106-111.

47. Doi Y., Kanesawa Y., Kunioka M. Biodegradation of microbial copolyesters: poly(3 -hy droxybutyrate-co-3 -hydroxyvalerate) and poly(3 -hydroxybutyrate-co-4-hydroxybutyrate)//Macromolecules, 1990c, v. 23, pp. 26-31.

48. Doi Y., Kanesawa Y., Tanahashi N., Kumagai Y. Biodegradation of microbial polyesters in the marine environment// Polym. Degrad. Stab., 1992, v. 36, pp. 173177.

49. Doi Y., Kunioka M., Nakamura Y., Soga K. Biosynthesis of copolyesters in Alcaligenes eutrophus HI 6 from 13C-labeled acetate and propionate// Macromolecules, 1987, v. 20, pp. 2988-2991.

50. Doi Y., Tamaki A., Kunioka M., Soga K. Production of copolyesters of 3-hydroxybutyrate and 3-hydroxyvalerate by Alcaligenes eutrophus from butyric and pentanoic acids// Appl. Microbiol. Biotechnol., 1988, v. 28, pp. 330-334.

51. Doudoroff M., Stanier R.Y. Role of poly-p-hy droxybutyriс acid in the assimilation of organic carbon by bacteria//Nature, 1959, v. 183, pp. 1440-1442.

52. Duarte M.G., Brunnel D., Gil M.H., Schacht E. Microcapsules prepared from starch derivatives// J/ Mater. Sci: Mater. In Medicine, 1997, v. 8, pp. 321-323.

53. Findlay R.H., White D.C. Polymeric beta- hydroxyalkanoates from environmental samples and Bacillus megateriumlf Appl. Environ. Microbiol., 1983, v. 45, pp. 7178.

54. Fritzsche K., Lenz R.W., Fuller R.C. Production of unsaturated polyesters by Pseudomonas oleovoranslt Int. J. Biol. Macromol., 1990a, v. 12, pp. 85-91.

55. Fritzsche K., Lenz R.W., Fuller R.C. Bacterial polyesters containing branched poly(p-hydroxyalkanoate) units// Int. J. Biol. Macromol., 1990b, v. 12, pp. 92-101.

56. Galego N., Miguens F.C., Sanchez R. Physical and functional characterization of PHAscl membranes// Polymer, 2002, v. 43, pp. 3109-3114.

57. Gangrade N., Price J.C. Poly(hydroxybutyrate-co-hydroxyvalerate) microspheres containing progesterone preparation, morphology and release properties// J. of Microencapsulation, 1991, v. 8, pp. 185-202.

58. Gavard R., Dahinger A., Hauttecoeur В., Reynaud C. Degradation du lipide P-hydroxybutyrique par un extrait enzymatique de Bacillus megaterium I. depolymerase AM C.R. Acad. Sci. Paris, 1966, v. 263, pp. 1273-1275.

59. Genser K.F., Renner G., Schwab H. Molecular cloning, sequencing and expression in Escherichia coli BL21 (DE3) of the poly(3-hydroxyalkanoate)-synthesis genes of Alcaligenes latus DSM 1124// J. Biotechnol., 1998, v. 64, pp. 123-135.

60. Gilkes N.R., Henrissat В., Kilburn D.G., Miller R.C.J., Warren R.A.J. Domains in microbial p-l,4-glycanases: sequence conservation, function and enzyme families// Microbiol. Rev., 1991, v. 55, pp. 303-315.

61. Gordeev S.A., Nekrasov Y.P. Processing and mechanical properties of oriented poly(P-hydroxybutyrate) fibers// J. Mater. Sci. Lett., 1999, v. 18, pp. 1691-1692.

62. Gordeev S.A., Nekrasov Y.P., Shilton .J. Processing of gel-spun poly(P-hydroxybutyrate) fibers// J. Appl. Polym. Sci., 2001, v. 81, pp. 2260-2264.

63. Gross R. A. Bacterial Polyesters: Structural Variability in Microbial Synthesis. In: Biomedical Polymers: Designed-to-Degrade Systems, ed. S. Shalaby// Hanser Publishers, NY, 1994, pp. 173-188.

64. Griebel R., Merrick J.M. Metabolism of poly-P-hydroxybutyrate, effect of mild alkaline extraction on native poly-P-hydroxybutyrate granules// J. Bacteriol., 1971, v. 108, pp. 782-789.

65. Griebel R., Smith Z., Merrick J.M. Metabolism of poly-P-hydroxybutyrate. I. Purification, composition and properties of native poly-P-hydroxybutyrate granules from Bacillus megateriumll Biochemistry, 1968, v. 7, pp. 3676-3681.

66. Gursel I., Hasirci V. Properties and drug release behavior of poly(3-hydroxybutyric acid) and various poly(3-hydroxybutyrate-hydroxyvalerate) copolymer microcapsules//J. Microencapsulation, 1995, v. 12, pp. 185-193.

67. Harrison S.T., Chase H.A., Amor S.R., Bonthrone K.M., Sanders J.K. Plasticization of poly(hydroxybutyrate) in vivo// Int. J. Biol. Macromol., 1992, v. 14(1), pp. 50-56.

68. Haywood G.W., Anderson A.J., Dawes E.A. The importance of PHB-synthase substrate specificity in PHA synthesis by Alcaligenes eutrophusll FEMS Microbiol. Lett., 1989, v. 57, pp. 1-6.

69. Hocking P.J., Marchessault R.H., Timmins M.R., Lenz R.W., Fuller R.C. Enzymatic degradation of single crystals of bacterial and synthetic poly(P-hydroxybutyrate)// Macromolecules, 1996, v. 29, pp. 2472-2478.

70. Holland S.J., Jolli A.M., Yasin M., Tighe B.J. Polymers for biodegradable medical devices. II. Hydroxybutyrate-hydroxyvalerate copolymers: hydrolytic degradation studies// Biomaterials, 1987, v.8, pp. 289-295.

71. Holmes P.A. Biologically produced ( R)-3- hydroxyalkanoate polymers and copolymers. In: Basset D.C., ed. Developments in crystalline polymers, v.2// London: Elsevier, 1998, pp. 1-65.

72. Holmes P.A., Newton A.B., Willmouth F.M. Polymer blends. 1981. European Patent N 52,460.

73. Holmes P.A., Wright L.F., Collins S.H. Copolyesters and process for their production. 1982. European Patent N 69,497.

74. Holmes P.A., Jones E. Extraction of poly(beta-hydroxybutyric acid). 1981. European Patent N 46,335.

75. Hrabak O. Industrial production of poly-p-hydroxybutyrate// FEMS Microbiol. Rev., 1992, v. 103, pp. 251-256.

76. Hughes L., Richardson K.R. Fermentation process. 1981. European Patent N46,344.

77. Huisman G.W., Wonink E., de Koning G., Preusting H., Witholt B. Synthesis of poly(3-hydroxyalkanoates) by mutant and recombinant Pseudomonas strains// Appl. Microbiol. Biotechnol., 1992, v.38, pp. 1-5.

78. Huang R., Reusch R.N. Poly(3-hydroxybutyrate) is associated with specific proteins in the cytoplasm and membranes of Escherichia colill J. Biol. Chem., 1996, v. 271(36), pp. 196-202.

79. Jackson F.A., Dawes E.A. Regulation of the tricarboxylic acid cycle and poly-(3 -hydroxybutyrate metabolism in Azotobacter beijerinkiill J. Gen. Microbiol., 1976, v. 97, pp. 303-312.

80. Jendrossek D., Handrick R. Microbial degradation of polyhydroxyalkanoates // Annual Review of Microbiology, 2002, v.56, pp. 403-432.

81. Kassab A.C., Xu К., Denkbas E.B., Dou Y., Zhao S., Piskin E. Rifampicin carrying polyhydroxybutyrate microspheres as potential chemoembolization agent// J. Biomater. Sci. Polymer Edn, 1997, v. 8, pp. 947-961.

82. Kawaguchi Y. and Doi Y., Kinetics and mechanism of synthesis and degradation of poly(3-hydroxybutyrate) in Alcaligenes eutrophusll Macromolecules, 1992, v. 25, pp. 2324-2329.

83. Kichise Т., Fukui T.,Yoshida Y., Doi Y. Biosynthesis of polyhydroxyalkanoates (PHA) by recombinant Ralstonia eutropha and effects of PHA synthase activity on in vivo PHA biosynthesis// Int. J. Biol. Macromol., 1999, v.25, pp. 69-77.

84. Kim B.S., Chang H.N. Production of poly(3-hydroxybutyrate) from starch by Azotobacter chroococcumll Biotechnol. Lett., 1998, v. 20(2), pp. 109-112.

85. Kizlo Z., Savenkova L., Gercberga Z., Kalnins M. Polyhydroxybutyrate biosynthesis by Azotobacter chroococcum 23 from renewable unrefined carbon sources// Proc. of the Latvian Academy of sciences, 1999, v. 53, pp. 117-120.

86. Kominek L.A., Halvorson H.O. Metabolism of poly-(5 -hydroxybutyrate and acetoin in Bacillus cereusll J. Bacterid., 1965, v. 90, pp. 1251-1259.

87. Kumagai Y., Kanesawa Y., Doi Y. Enzymatic degradation of microbial poly(3 -hydroxybutyrate) films// Macromol. Chem., 1992, v. 193, pp. 53-57.

88. Kusaka S., Abe H., Lee S.Y., Doi Y. Molecular mass of poly(R)-3-hydroxybutyrate. produced in a recombinant Escherichia colill Appl. Microbiol. Biotechnol., 1997, v. 47, pp. 140-143.

89. Lauzier C., Revol J.F., Marchessault R.H. Topotactic crystallization of isolated poly(P-hydroxybutyrate) granules from Alcaligenes eutrophall FEMS Microbiol. Rev., 1992, v. 103, pp. 299-310.

90. Law J. H., Slepecky R.A. Assay of poly-P-hydroxybutyric acid// J. Bacterid., 1961, v. 82, pp. 33-36.

91. Lee I.Y., Stegantseva E.M., Savenkova L., Park Y.H. Effects of nitrogen and oxygen supply on production of poly-beta-hydroxybutyrate in Azotobacter chroococcum!I J. Microbiol. Biotechnol., 1995, v. 5(2), pp. 100-104.

92. Lee S.Y., Choi J., Wong H.H. Recent advances in polyhydroxyalkanoate production by bacterial fermentation: mini-review// Int. J. Biol. Macromol., 1999, v. 25(1-3), pp. 31-36.

93. Lemoigne M. Produit de deshydratation et de polymerisation de 1'acide P-oxybutyrique// Bull. Soc. Chim. Biol., 1926, v. 8, pp. 770-82.

94. Liebergesell M., Hustede E., Timm A., Steinbushel A., Fuller R.C., Lenz R.W, Schlegel H.G. Formation of poly(3-hydroxyalkanoates) by phototrophic and chemolithotrophic bacteria // Arch, of Microbiology, 1991, v.155(5), pp. 415-421.

95. Luizier W.D. Materials derived from biomass/biodegradable materials// Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, v. 89, pp. 839-842.

96. Lundgren D.G., Alper R., Schnaitman C., Marchessault R. M. Characterization of poly-P -hydroxybutyrate extracted from different bacteria// J. Bacteriol., 1965, v. 89, pp. 245-251.

97. Lundgren D.G., Pfister R.M., Merrick J.M. Structure of poly-P -hydroxybutyric acid granules// J. Gen. Microbiol., 1964, v. 34, pp. 441-446.

98. Luo S., Netravali A.N. Characterization of henequen fibers and the henequen fiber/ poly(hydroxybutyrate-co-hydroxyvalerate) interface// J. Adhesion Sci. Technol., 2001, v. 15, pp. 423-437.

99. Lusty C.J., Doudoroff M. Poly-P -hydroxybutyrate depolymerase of Pseudomonas lemoigneill Biochemistry, 1966, v. 56, pp. 960-965.

100. Madison L.L., Huisman G.W. Metabolic engineering of poly(3-hydroxyalkanoates): From DNA to plastic// Microbiol. Mol. Biol. Rev., 1999, v.63, pp. 21-31.

101. Macrae R.M., Wilkinson J.R. Poly-P-hydroxybutyrate metabolism in washed suspensions of Bacillus cereus and Bacillus megateriumll J. Gen. Microbiol., 1958, v. 19, pp. 210-222.

102. Manchak J., Page W.J. Control of polyhydroxyalkanoate synthesis in Azotobacter vinelandii strain UWD// Microbiology, 1994, v. 140, pp. 953-963.

103. Matavulj M., Molitoris H.P. Fungal degradation of polyhydroxyalkanoates and a semiquantitative assay for screening their degradation by terrestrial fungi // FEMS Microbiol. Rev., 1992, v. 103, pp. 323-332.

104. Maulding H. V. Prolonged delivery of peptides by microcapsules// J. Controlled Release, 1987, v. 6, pp. 167-176.

105. Mergaert J., Anderson C., Wouters A., Swing J. Microbial degradation of poly(3-hydroxybutyrate) and poly(3-hydroxybutyrate-co- hydroxyvalerate) in compost// J. Environ. Polym. Degrad., 1994, v. 1, pp. 177-183.

106. Mergaert J., Wouters A.,Anderson C., Swing J. In situ biodegradation of poly(3-hydroxybutyrate) and poly(3 -hydroxybutyrate-co- hydroxyvalerate) in natural waters// Can. J. Microbiol., 1995, v. 41, pp. 154-159.

107. Merrick J.M., Doudoroff M. Enzymatic synthesis of poly-P-hydroxybutyric acid in bacteria//Nature, 1961, v. 189, pp. 890-892.

108. Merrick J.M., Doudoroff M. Depolymerization of poly-p-hydroxybutyrate by an intracellular enzyme system// J. Bacteriol., 1964, v. 88, pp. 60-71.

109. Merrick J.M., Lundgren D.G., Pfister R.M. Morphological changes in poly-P-hydroxybutyrate granules associated with decreased susceptibility to enzymatic hydrolysis// J. Bacteriol., 1965, v. 89, pp. 234-239.

110. Merrick J.M., Yu C.J. Purification and properties of a D(-)-P-hydroxybutyric acid dimer hydrolase from Rhodospirillum rubrumll Biochemistry, 1966, v. 5, pp. 35633568.

111. Meyer A. Praktikum der botanischen bakterienkunde// Jena, 1903.

112. More G.S., Sauders S.M. Advances in biodegradable polymer// UK, Kapra. Shropshire, 1998, 1000 p.

113. Muller В., Jendrossek D. Purification and properties of poly(3-hydroxyvaleric acid) depolymerase from Pseudomonas lemoigneill Appl. Microbiol. Biotechnol., 1993, v. 38, pp. 487-492.

114. Muller H.M., Seebach D. Polyhydroxyalkanoates: a fifth class of physiologically important organic biopolymers?// Angew Chem., 1993, v.32, pp. 477-502.

115. Nojiri M., Saito T. Structure and function of poly(3-hydroxybutyrate) depolymerase from Alcaligenes faecalis T1 // J. Bacteriol., 1997, v. 179, pp. 69656970.

116. Page W.J. Suitability of commercial beet molasses fractions as substrates for polyhydroxyalkanoate production by Azotobacter vinelandii UWD// Biotechnol. Lett., 1992, v. 14(5), pp. 385-390.

117. Page W.J., Bhanthumnavin N., Manchak J., Ruman M. Production of poly(p-hydroxybutyrate-P-hydroxyvalerate) copolymer from sugars by Azotobacter salinestris/f Appl. Microbiol. Biotechnol., 1997, v. 48, pp. 88-93.

118. Page W.J., Cornish A. Growth of Azotobacter vinelandii UWD in fish peptone medium and simplified extraction of poly-P-hydroxybutyrate// Appl. Environ. Microbiol., 1993, v. 59(12), pp. 4236-4244.

119. Page W.J., Manchak J., Rudy B. Formation of poly(hydroxybutyrate-co-hydroxyvalerate) by Azotobacter vinelandii strain UWD// Appl. Environ. Microbiol., 1992, v.58, pp. 2866-2973.

120. Page W.J., Manchak J. The role of P-oxidation of short-chain alkanoates in polyhydroxyalkanoate copolymer synthesis in Azotobacter vinelandii UWD// Can. J. Microbiol., 1995, v.41(Suppl. 1), pp. 106-114.

121. Page W.J., Knosp O. Hyperproduction of poly-P -hydroxybutyrate during exponential growth of Azotobacter vinelandii UWD// Appl. Environ. Microbiol., 1989, v. 55, pp. 1334-1339.

122. Poirier Y., Erard N., Petetot J.M.C. Synthesis of polyhydroxyalkanoate in the peroxisome of Pichia pastoris// FEMS Microbiology Letters, 2002, v.207(l), pp. 97102.

123. Pouton C.W., Akhtar S. Biosynthetic polyhydroxyalkanoates and their potential drug delivery//Adv. Drug Deliv. Rev., 1996, v. 18, pp. 133-162.

124. Powell K.A., Collinson B.A, Richardson R. Microbiological process for the production of poly(beta-hydroxybutyric acid) and micriorganisms for use therein. 1980. European Patent N 15,669.

125. Quagliano J. C., Miyazaki S.S. Effect of aeration and carbon/nitrogen ratio on the molecular mass of the biodegradable polymer poly-a-hydroxybutyrate obtained from Azotobacter chroococcum 6B// Appl. Microbiol. Biotechnol., 1997, v. 48, pp. 662664.

126. Ramsay B.A., Lomaliza K., Chavarie C., Dube В., Bataille P., Ramsay J.A. Production of poly(p-hydroxybutyric-co-p-hydroxyvaleric) acids// Appl. Environ. Microbiol., 1990, v. 56, pp. 2093-2098.

127. Repaske R., Repaske A.C. Quantitative requirements for exponentional growth of Alcaligenes eutrophusll Appl. Environ. Microbiol., 1976, v. 32, pp. 585-591.

128. Reusch R.N. Low molecular weight complexed poly(3-hydroxybutyrate): a dynamic and versatile molecule in vivo// Can. J. Microbiol. (Suppl), 1995, v. 41(1), pp. 50-54.

129. Reusch R.N., Sadoff H.L. Putative structure and functions of a poly-P-hydroxybutyrate/ calcium polyphosphate channel in bacterial plasma membranes// Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988, v. 85, pp. 4176-80.

130. Richardson K.R. Production of beta-hydroxybutyrate polymers. 1984. European Patent N 114,086.

131. Salman M.A., Sahin A., Onur M.A., Oge K., Kassab A., Aypar U. Tramadol encapsulated into polyhydroxybutyrate microspheres: in vitro release and epidural analgesic effect in rats// Acta Anaesthesiol. Scand., 2003, v.47, pp. 1006-1012.

132. Savenkova L., Gercberga Z., Kizhlo E., Stegantseva E. Effect of phosphate supply and aeration on poly-P-hydroxybutyrate production in Azotobacter chroococcum// Process Biochemistry, 1999, v. 34, pp. 109-114.

133. Savenkova L., Gercberga Z., Nikolaeva V., Dzene A., Bibers I., Kalnin M. Mechanical properties and biodegradation characteristics of PHB-based films// Process Biochemistry, 2000, v. 35, pp. 573-579.

134. Schirmer A., Jendrossek D., Schlegel H.G. Degradation of poly(3-hydroxyoctanoic acid) P(3HO). by bacteria: purification and properties of a P(3HO) depolymerase from Pseudomonas fluorescens GK13// Appl. Environ. Microbiol., 1993, v. 59, pp. 1220-1227.

135. Schneider F., Steinmuller H. Raw material. Strategies Economical Problems// In: Biotechnology, v. 6, 2-nd edn., VCH Verlagsgesellschaft mbH, Weinheim, pp. 47-56.

136. Sendil D., Gursel I., Wise D.L., Hasirci V. Antibiotic release from biodegradable PHBV microparticles// J. Controlled Release, 1999, v. 59, pp. 207-217.

137. Senior P.J., Beech G.A., Ritchie G.A.F., Dawes E.A. The role of oxygen limitation in the formation of poly-P-hydroxybutyrate during batch and continuous culture of Azotobacter beijerinkiill Biochem. J., 1972, v. 128, pp. 1193-1201.

138. Senior P.J., Dawes E.A. Poly-P-hydroxybutyrate biosynthesis and the regulation of glucose metabolism in Azotobacter beijerinkiill Biochem. J., 1971, v. 125, pp. 5566.

139. Senior P.J., Dawes E.A. The regulation of poly-P-hydroxybutyrate metabolism in Azotobacter beijerinkiill Biochem. J., 1973, v. 134, pp. 225-238.

140. Sim S.J., Snell K.D., Hogan S.A., Stubbe J., Rha C., Sinskey A.J. PHA synthase activity controls the molecular weight and polydispersity of polyhydroxybutyrate in vivo//Nat. Biotechnol., 1997, v.15, pp.63-67.

141. Siegel R.A., Kost J., Langer R. //J. Controlled Release, 1989, v. 8, pp. 223-229.

142. Schlegel H.G. Die Speicherstoffe von Chromatium okeniill Arch. Mikrobiol., 1962, v. 42, pp. 110-116.

143. Schlegel H.G., Gottschalk G., Bartha R. Formation and utilization of poly-P-hydroxybutyric acid by knallgas bacteria (Hydrogenomonas)// Nature, 1961, v. 191, pp. 463-465.

144. Stockdale H., Ribbons D.W., Dawes E.A. Occurence of poly-p-hydroxybutyrate in the Azotobacteriaceae//J. Bacteriol., 1968, v. 95, pp. 1798-1803.

145. Sudesh K., Abe H., Doi Y. Synthesis, structure and properties of polyhydroxyalkanoates: biological polyesters// Prog. Polym. Sci., 2000, v. 25, pp.1503-1555.

146. Sudesh K., Fukui Т., Taguchi K., Iwata Т., Doi Y. Improved production of poly(4-hydroxyalkanoates) by Comamonas acidovorans and its freeze-fracture morphology// Int. J. Biol. Macromol., 1999, v.25, pp.79-85.

147. Suzuki Т., Deguchi H., Yamane Т., Shimizu S., Gekko K. Control of molecular weight of poly-P-hydroxybutyric acid produced in fet-batch culture of Protomonas extorquensll Appl. Microbiol. Biotechnol., 1988, v. 27, pp. 487-491.

148. Swift G. Biodegradability of polymers in the environment: complexities and significance of definitions and measurements // FEMS Microbiol. Reviews, 1992, v. 103, pp. 339 -346.

149. Taidi В., Mansfield D.A., Anderson A J. Turnover of poly(3-hydroxybutyrate) (PHB) and its influence on the molecular mass of the polymer accumulated by Alcaligenes eutrophus during bath culture// FEMS Microbiol. Lett., 1995, v. 129, pp.201-206.

150. Tiedje J.M. Ecology of denitrification and dissimilatory nitrate reduction to ammonium// In: Biology of anaerobic microorganisms. Ed. Zehnder A.J.B., J. Willy&sons Inc., New York, 1988, pp. 179 244.

151. Timm A., Steinbuchel A. Formation of polyesters consisting of medium-chain-length 3-hydroxyalkanoic acids from gluconate by Pseudomonas aeruginosa andother fluorescent pseudomonads// Appl. Environ. Microbiol., 1990, v. 56, pp. 33603367.

152. Unverdorben M., Spielberger A., Schywasky M., Labahn D. et al. A polyhydroxybutyrate biodegradable stent: Preliminary experience in the rabbit// Cardiovasc. Intervent. Radio., 2002, v. 25, pp. 127-132.

153. Wallen L.L., Rohwedder W.K. Poly-P-hydroxyalkanoate from activated sludge// Environ. Sci. Technol., 1974, v. 8, pp. 576-579.

154. Wang M., Chen L.J., Weng J., Yue C.Y. Manufacture and evaluation of bioactive and biodegradable materials and scaffolds for tissue engineering// J. Mater. Science: Materials in medecine, 2002, v. 12, pp. 856-860.

155. Ward A.C., Rowley B.I., Dawes E.A. Effect of nitrogen and oxygen limitation on poly-P-hydroxybutyrate biosynthesis in ammonium-grown Azotobacter beijerinkiill J. Gen. Microbiol., 1977, v. 102, pp. 61-68.

156. Wilkinson J.F., Munro A.L.S. The influence of growth limiting conditions on the synthesis of carbon and energy storage polymers in Bacillus megateriumll In:

157. Microbial physiology and continuous culture (Eds. Powell E.O., Evans C.G.T., Strange R.E., Tempest D.W.) H.M.S.O., London, 1967, pp. 173-185.

158. Williams S.F., Martin D.P., Horowitz D.M., Peoples O.P. PHA application: addressing the price performance issue. I. Tissue engineering// Int. J. of Biol. Macromol., 1999, v. 25, pp. 11-121.

159. Williams S.F., Martin D.P. Applications of PHAs in medicine and farmacy// in Series of Biopolymers in 10 vol. Ed. A. Steinbuchel, Wiley-VCY Verlag GmbH, 2002, v. 4, pp. 91-121.

160. Williamson D.H., Wilkinson J.F. The isolation and estimation of poly-P-hydroxybutyrate inclusions of Bacillus species// J. Gen. Microbiol., 1958, v. 19, pp. 198-209.

161. Yamane H., Terao K., Hiki S., Kawahara Y., Kimura Y., Saito T. Processing melt spun polyhydroxybutyrate fibers// Polymer, 2001, v. 42, pp. 3241-3249.

162. Yang X., Zhao K., Chen G.Q. Effect of surface treatment on the biocompatibility of microbial polyhydroxyalkanoates//Biomaterials, 2002, v. 23, pp. 1391-1397.

163. Yeom S.H., Yoo Y.J. Effect of pH on the molecular weight of poly-3-hydroxybutyric acid produced by Alcaligenes sp.// Biotechnol. Lett., 1995, v. 17(4), pp. 389-394.

164. Zevenhuisen L.P. Cellular glycogen, P-l,2-glucan, poly-P-hydroxybutyric acid and extracellular polysaccharides in fast-growing species of Rhisobium// Antonie van Leeuwenhoek, J. Microbiol, and Serol., 1981, v. 47, pp. 481-497.