Чувствительность эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В к химиопрепаратам тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат медицинских наук Шевченко, Елена Сергеевна

• Шевченко, Елена Сергеевна
• кандидат медицинских наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Шевченко, Елена Сергеевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.:.

РАЗДЕЛ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 1. КЛАССИФИКАЦИЯ И СТРУКТУРА ВИРУСОВ ГРИППА.

1.1. Геном вируса гриппа.

1.2. Структура и свойства поверхностных и внутренних вирионных белков.

1.2.1. Белки полимеразного комплекса (РВ2, PB 1, РА).

1.2.2. Гемагглютинин.

1.2.3. Нуклеопротеин.

1.2.4. Нейраминидаза.

1.2.5. Матриксный белок М1, мембранный белок М2.

1.2.6. Неструктурные белки NS1 и NS2.

1.3. Исторические этапы изучения эпидемиологии и этиологии гриппа.

1.4. Гипотезы о происхождении пандемических штаммов вирусов гриппа.

ГЛАВА 2. ПРОТИВОВИРУСНЫЕ ХИМИОПРЕПАРАТЫ.

2.1. Амантадин и ремантадин.

2.2. Арбидол.

2.3. Комбинированное применение арбидола и других противогриппозных химиопрепаратов.

2.4. Занамивир и озельтамивир.

2.5. Противовирусная активность препаратов в отношении вирусов гриппа птиц.

2.6. Резистентность вирусов гриппа к химиопрепаратам.

РАЗДЕЛ 2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И

НАБЛЮДЕНИЙ.

Глава 1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1.1. Методы изучения антигенных свойств эпидемических штаммов.

1.1.1. Изоляция эпидемических штаммов вирусов гриппа из носоглоточных смывов.

1.1.2. Идентификация гемагтлютинирующих изолятов.

1.2. Химиопрепараты и соединения.

1.2.1. Противовирусный препарат ремантадин.

1.2.2. Противовирусный препарат арбидол.

1.2.3. Производные индола.

1.2.4. Производные селена.

1.3. Методы определения противовирусной активности препаратов.

1.3.1. Определение цитотоксического действия соединений.

1.3.2. Изучение чувствительности эпидемических штаммов вирусов гриппа к препаратам методом ингибирования цитопатического действия вирусов и в реакции гемагглютинации (РГА).

1.3.3. Изучение чувствительности эпидемических штаммов вирусов гриппа к препаратам методом иммуноферментного анализа (ИФА).

1.3.4. Изучение комбинированного действия противогриппозных препаратов методом ИФА.

1.4. Метод секвенирования М2 белка вирусов гриппа.

1.5. Методы статистической обработки результатов.

ГЛАВА 2. ИЗУЧЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ЭПИДЕМИЧЕСКИХ

ШТАММОВ ВИРУСОВ ГРИППА А и В СЕЗОНОВ 2002-2005 гг. к РЕМАНТАДИНУ и АРБ ИДО Л У в КЛЕТКАХ КУЛЬТУРЫ ТКАНИ МОСК.

2.1. Антигенная характеристика эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В, циркулировавших в России в период 2002-2005 гг.

2.2. Изучение чувствительности к ремантадину вирусов гриппа А, циркулировавших в эпидемических сезонах 2002-2004 гг., в РГА.

2.3. Оценка чувствительности методов изучения противовирусной активности арбидола в отношении эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В в клетках культуры ткани МОСК.

2.3.1. Изучение действия арбидола на инфекционный титр эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В в реакции гемагглютинации (РГА).

2.3.2. Изучение действия арбидола на репродукцию эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В в клетках культуры МБСК с использованием метода ИФА.

2.4. Изучение чувствительности эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В сезона 2004-2005 гг. к ремантадину и арбидолу в клетках культуры ткани МБСК методом ИФА.

2.5. Оценка комбинированного применения ремантадина и арбидола в отношении эпидемических штаммов вирусов гриппа А в клетках культуры ткани МБСК методом ИФА.

2.6. Оценка вероятности частоты возникновения вирусов, резистентных к арбидолу, на фоне приема препарата у больных гриппом.

ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТИ

ПРОИЗВОДНЫХ ИНДОЛА в ОТНОШЕНИИ ШТАММОВ

ВИРУСОВ ГРИППА А и В в КЛЕТКАХ КУЛЬТУРЫ

ТКАНИ MDCK МЕТОДОМ ИФА.

3.1. Изучение цитотоксического действия соединений.

3.2. Влияние аналогов арбидола на репродукцию эталонного штамма вирусов гриппа А/Калифорния/7/04 (H3N2) и эпидемического штамма В/Хабаровск/57/05 в клетках культуры ткани MDCK.

3.3. Изучение противовирусной активности соединения 925 в отношении современных эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В в клетках культуры ткани MDCK.

3.4. Изучение противовирусной активности соединения 937 в отношении современных эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В в клетках культуры MDCK.

3.5. Изучение противовирусной активности соединения 938 в отношении современных эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В в клетках культуры MDCK.

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ АКТИВНОСТИ ПРОИЗВОДНЫХ СЕЛЕНА в ОТНОШЕНИИ ЭТАЛОННЫХ и ЭПИДЕМИЧЕСКИХ ШТАММОВ ВИРУСОВ ГРИППА А и В в КЛЕТКАХ КУЛЬТУРЫ ТКАНИ MDCK.

4.1. Изучение цитотоксического действия соединений.

4.2. Вирулицидное действие соединений селекартен, селенит и селекартеин в отношении эталонных вирусов гриппа А и В в клетках культуры MDCK.

4.3. Изучение активности селенпроизводных (селекартен, селенит, селекартеин) в отношении эталонного штамма вируса гриппа АЛСалифорния/7/04(НЗШ) в клетках культуры MDCK методом ИФА.

4.4. Изучение активности селенпроизводных (селекартен, селенит, селекартеин) в отношении эталонного вируса гриппа В/Гонконг/330/01 и современных эпидемических штаммов вирусов гриппа В в клетках культуры MDCK методом ИФА.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Чувствительность эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В к химиопрепаратам»

В настоящее время грипп остается глобальной проблемой. Во время обычных ежегодных эпидемий гриппом заболевает от 5 до 15% населения Земли, а во время пандемий гриппа это число может возрастать в 4-6 раз. Практически все эпидемии гриппа сопровождаются увеличением смертности. По данным экспертов ВОЗ, ежегодно в мире только тяжелыми формами гриппа заболевает от 3 до 5 млн. человек, а погибает от 250000 до 500000 человек [36,94]. Эпидемии гриппа наносят также огромный экономический ущерб, как отдельным лицам, так и обществу в целом. По данным Роспотребнадзора Минздравсоцразвития, в России в 2002 году экономический ущерб от гриппа и ОРВИ превышал 51 млрд. рублей, а в 2004 году уже составлял 82,6 млрд. рублей [15]. В США в последние годы экономический ущерб от эпидемий гриппа составлял от 71 до 167 млрд. долларов ежегодно [94].

Современный эпидемический процесс, обусловленный циркуляцией вирусов гриппа А(НЗШ), А(Н1Ш) и В, во многом определяется степенью изменчивости их поверхностных белков - гемагтлютининов (НА) и нейраминидаз (ИА). С одной стороны, поверхностные белки - НА и ЫА подвергаются постоянным изменениям, приводящим к постепенному вытеснению ранее циркулировавших среди людей штаммов вирусов гриппа. С другой стороны, сегментированная структура генома способствует формированию реассортантов между вирусами гриппа А человека, млекопитающих и птиц, что, в свою очередь, может привести к возникновению нового пандемического варианта [6,18,27,50,123]. Участившиеся в последние годы случаи инфицирования людей и животных вирусами гриппа птиц А(Н5Ш), А(Н7М7), А(НЖЗ) и А(НШ2) в странах Южной и Юго-Восточной Азии, а в последнее время и в странах Европы, сопровождающиеся высокой смертностью, могут привести к возникновению пандемического варианта вирусов гриппа А [89104,134,141,145,154].

Наряду с вакцинами, являющимися в настоящее время ведущим средством профилактики гриппозной инфекции, важное значение, особенно в последнее время, имеют химиопрепараты со специфической активностью в отношении вирусов гриппа А и В. К преимуществам химиопрепаратов можно отнести их значительно меньшую, чем у вакцин, зависимость от постоянной изменчивости вирусов гриппа, что увеличивает их роль в борьбе с гриппом в случае формирования и распространения нового пандемического варианта.

В России спектр препаратов, обладающих выраженной противогриппозной активностью, представлен блокаторами М2-белка вирусов гриппа А (ремантадин и альгирем), ингибитором слияния липидной оболочки вирусов гриппа А и В с мембранами эндосом арбидол) и ингибитором нейраминидаз вирусов гриппа А и В (озельтамивир или Тамифлю™) [ 11-13,25,78,82,85,106Д42,147,162,169,170].

Одним из препаратов, широко используемых на протяжении многих лет для лечения и профилактики гриппа А, как в России, так и за рубежом, является ремантадин. Однако, быстрое формирование резистентных к нему штаммов вирусов гриппа А (особенно на фоне проводимого лечения) снижает эффективность его применения [54,70,76,80,85,125].

Результаты исследований, проведенных в период 1982-1995 гг. в разных странах мира, подтвердили факт циркуляции в естественных условиях резистентных к ремантадину штаммов вирусов гриппа А, число которых составляло менее 1,0%. [177].

В сезоне 2003-2004 гг. в ряде стран мира (Китай, Таиланд, США и др.) отмечено 30-кратное увеличение числа естественно циркулирующих штаммов, резистентных к ремантадину [58,59,130]. По последним сообщениям американских коллег, проводивших изучение чувствительности вирусов гриппа А, изолированных в период октября 2005 г. -середины января 2006 г., число резистентных штаммов составило 91,0%, что стало причиной запрета применения амантадина для лечения и профилактики гриппа в США в эпидемическом сезоне 2005-2006 гг. [59]. При этом в нашей стране в течение длительного периода времени такие исследования не проводили и данных в литературе не представлено. Необходимо также отметить, что с 2003 г. большинство штаммов вируса гриппа птиц A(H5N1), выделенных от диких и домашних птиц, а также людей, инфицированных этим подтипом вируса, были резистентны к ремантадину/амантадину [63,84].

Другим препаратом, обладающим прямым противовирусным действием, является отечественный химиопрепарат арбидол. Опыт 15-летнего использования арбидола в медицинской практике подтвердил эффективность и безвредность этого препарата. Высокая профилактическая и терапевтическая эффективность арбидола обусловлена его вирусспецифической активностью в отношении вирусов гриппа и ряда возбудителей ОРВИ, а также иммуномодулирующим, интерферониндуцирующим и антиоксидантным действием [2,4,8,9,11,21,39,40,45,48,74]. В опытах in vitro и in vivo показана его ингибирующая активность по отношению к ранее циркулировавшим вирусам гриппа А и В. Определенный интерес представляло изучение спектра активности арбидола в отношении новых антигенных вариантов вирусов гриппа А и В. Данные по риску формирования резистентности к арбидолу вирусов гриппа А и В, а также факторам ее определяющим, в литературе описаны очень ограничено. Штаммы, резистентные к арбидолу, получены только в лабораторных условиях при проведении опытов in vitro после 15 и более пассажей вирусов в присутствии увеличивающихся концентраций арбидола в клетках культуры MDCK [124]. В связи с этим, большой интерес представляло изучение возможности формирования резистентных к арбидолу штаммов вирусов гриппа А и В на фоне проводимой терапии.

В настоящее время актуальным представляется дальнейший поиск новых химических соединений, обладающих специфической активностью в отношении обоих типов вирусов гриппа - А и В. В этом плане, определенный интерес могут представлять соединения, производные индола (аналоги арбидола), синтез которых в настоящее время проводится в ряде институтов нашей страны (НИИ медицинской радиологии РАМН, г.Обнинск, ЦХЛС-ВНИХФИ, г.Москва). Кроме того, недавно были синтезированы препараты, содержащие селен производства Российского фонда «Содействие развитию наномолекулярных и биоселеновых технологий им. Алексея и Николая Новицких», изучение спектра противовирусной активности которых, в т.ч. и к вирусам гриппа, также имеет научно-практический интерес.

Все вышеизложенное послужило основанием для проведения исследований, представленных в настоящей работе.

Цель исследования

Цель настоящего исследования заключалась в определении чувствительности современных эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В, циркулировавших в период 2002-2005 гг., к противовирусным препаратам с различным механизмом действия для обоснования целесообразности их применения или дальнейшего изучения.

Задачи исследования

1. Выбрать оптимальные методы и отработать условия их постановки для оценки чувствительности эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В к химиопрепаратам со специфической противовирусной активностью.

2. Определить частоту возникновения естественно циркулирующих резистентных к ремантадину вирусов гриппа А среди современных эпидемических штаммов сезонов 2002-2005 гг.

3. Изучить спектр чувствительности эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В к арбидолу.

4. Оценить эффективность комбинированного применения ремантадина и арбидола -химиопрепаратов с различным механизмом действия в отношении эпидемических штаммов вирусов гриппа А в клетках культуры ткани МОСК.

5. Изучить возможность формирования резистентных к арбидолу штаммов вирусов гриппа на фоне приема препарата пациентами в период заболевания.

6. Определить чувствительность эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В к новым химическим соединениям - производным индола.

7, Изучить активность производных селена в отношении эталонных и эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В.

Научная новизна исследования

1. Впервые в нашей стране установлен факт роста числа естественно циркулирующих резистентных к ремантадину вирусов гриппа А среди современных эпидемических штаммов сезонов 2002-2005 гг. (с 9,5% до 17,0%), по сравнению с ранними исследованиями (1990-е годы), выявившими низкий показатель ремантадинрезистентных штаммов (менее 1,0%).

2. Показано наличие высокой активности арбидола в отношении эпидемических вирусов гриппа А и В, в том числе штаммов вируса гриппа А, резистентных к ремантадину.

3. Впервые изучено комбинированное действие арбидола с ремантадином в отношении современных эпидемических штаммов вирусов гриппа А. Установлено, что комбинированное применение низких концентраций арбидола и ремантадина увеличивает ингибирующий эффект препаратов на вирусную репродукцию по сравнению с эффектом, оказываемым каждым из этих препаратов в отдельности.

4. Впервые проведено изучение возможности формирования резистентных к арбидолу штаммов вирусов гриппа А и В при приеме его пациентами в течение 5 дней в период заболевания. В клиническом наблюдении не выявлено формирования резистентных к арбидолу штаммов на фоне рекомендуемого курса лечения.

5. Изучено 14 новых соединений - аналогов арбидола. Из них выявлено 3 соединения, обладающих специфической активностью в отношении вирусов гриппа А и В, сравнимой с активностью арбидола.

6. Впервые изучено 3 новых соединения - производных селена. Установлено, что эти соединения обладали активностью в отношении эталонных и эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В.

Практическая значимость исследования

Отработан и усовершенствован для практического применения в лаборатории метод иммуноферментного анализа (ИФА), позволивший проводить исследования чувствительности к химиопрепаратам эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В на 96-луночных панелях с клетками культуры ткани МОСК.

Факт роста показателя ремантадинрезистентных вирусов гриппа А научно обосновывает необходимость дальнейшего проведения мониторинга по изучению чувствительности эпидемических штаммов вирусов гриппа А к ремантадину и целесообразность его применения для лечения и профилактики в РФ.

Высокая активность арбидола в отношении современных эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В, включая ремантадинрезистентные штаммы вирусов гриппа А, и отсутствие случаев формирования резистентных к арбидолу вирусов гриппа А и В на фоне проводимого курса лечения подтвердили существующие рекомендации для его применения в качестве профилактического и лечебного средства при гриппе в настоящее время.

Данные об увеличении противовирусной активности в клетках культуры МОСК препаратов ремантадина и арбидола при одновременном использовании открывают перспективу для клинического изучения этих препаратов при комбинированной терапии гриппа в целях более рационального и, вместе с тем, эффективного их применения и снижения риска формирования резистентных мутантов.

Выявление среди аналогов арбидола соединений с противовирусной активностью в отношении современных эпидемических штаммов вирусов гриппа, сравнимой с активностью арбидола, открывает новые возможности в расширении ассортимента средств химиопрофилактики и химиотерапии гриппа.

Результаты, полученные при исследовании противовирусной активности новых соединений производных селена, показавшие их ингибирующий эффект в отношении эталонных и эпидемических штаммов вирусов гриппа, открывают перспективы дальнейшего поиска и экспериментального изучения противовирусных препаратов среди селенпроизводных.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Иммуноферментный анализ (ИФА) является чувствительным методом для изучения спектра активности широко применяемых на практике специфических химиопрепаратов — ремантадина и арбидола в отношении циркулирующих штаммов вирусов гриппа.

2. Среди современных эпидемических штаммов установлена тенденция возрастания в России числа резистентных к ремантадину естественно циркулирующих вирусов гриппа А.

3. Арбидол обладает высокой активностью в отношении эпидемических штаммов вирусов гриппа А, в том числе, ремантадинрезистентных штаммов. Для штаммов вирусов гриппа В отмечена гетерогенность в их чувствительности к препарату.

4. Комбинированное применение ремантадина и арбидола в низких концентрациях в клетках культуры ткани MDCK в отношении современных эпидемических штаммов вирусов гриппа А увеличивает ингибирующий эффект препаратов на вирусную репродукцию по сравнению с эффектом, оказываемым каждым из этих препаратов в отдельности.

5. В клиническом наблюдении, проведенном среди пациентов в период заболевания, не выявлено формирования резистентных к арбидолу штаммов вирусов гриппа А и В на фоне приема препарата.

6. Химические соединения - аналоги арбидола и производные селена являются перспективными для дальнейшего изучения и поиска новых препаратов, обладающих активностью в отношении штаммов вирусов гриппа А и В.

Апробация результатов исследования

Результаты работ были представлены на международных симпозиумах и конференциях: Международном симпозиуме «Повышение готовности к пандемии гриппа на основе военно-гражданского сотрудничества», Санкт-Петербург, 9-11 мая 2003; Symposium materials «Strengthening influenza pandemic preparedness through civil military cooperation», Saint-Petersburg, may 9-11, 2003; Int. Conf. «Options for the Control of Influenza V», Nago City, Okinawa, Japan, October 7-11, 2003; Российской научно-практической конференции «Узловые вопросы борьбы с инфекцией», Санкт-Петербург, 1-2 декабря 2004; Международной конференции «Актуальные вирусные инфекции - теоретические и практические аспекты», Санкт-Петербург, 2-5 ноября 2004; The First International Conference on Influenza Vaccines for the World, Lisbon, Portugal, 24-26 May 2004; International Conference on Options for the Control of Influenza V, Elsevier, 2004; 5th Louis Pasteur Conference on Infectious Diseases, Institute Pasteur, Paris, France, 17-20 November 2004; IV Конгрессе детских инфекционистов России

Актуальные вопросы инфекционной патологии и вакцинопрофилактики у детей», 14-16 декабря 2005 г.; International Conference «Bird Flu: The first pandemic of the 21st centure: a central role for antivirale», London, 19-20 January 2006,

Публикации

Основные результаты диссертации опубликованы в 16 научных трудах, в том числе 4 - в реферируемых журналах, материалах докладов на Международных и Всероссийских конгрессах, симпозиумах и конференциях, а также в отчетах НИР ГУ НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН.

Соавторами научных трудов являются: А.Н.Слепушкин, Е.И.Бурцева, В.Т.Иванова, А.Л.Беляев, Т.А.Оскерко, Л.Н.Меркулова, Р.З.Гатич (ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН); И.А.Ленева (ЦХЛС-ВНИХФИ, г.Москва); А.Л.Заплатников (Российская медицинская академия последипломного образования МЗ РФ, г.Москва). Автор глубоко благодарен и признателен всем своим соавторам.

Автор выражает искреннюю благодарность и глубокую признательность своим научным руководителям Заслуженному деятелю науки РФ, доктору медицинских наук, профессору А.Н.Слепушкину и доктору медицинских наук Е.И.Бурцевой за научное руководство, а также коллективу лаборатории этиологии и эпидемиологии гриппа ГУ НИИ вирусологии им.Д.И. Ивановского РАМН за ценные рекомендации, высказанные в ходе обсуждения результатов диссертации.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, списка литературы, состоящего из 50 работ отечественных и 127 зарубежных авторов. Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста и включает 22 таблицы и 15 рисунков.

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Шевченко, Елена Сергеевна

выводы

1. Показано преимущество иммуноферментного анализа (ИФА) в модификации на панелях с клетками культуры ткани МОСК. для определения чувствительности эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В к противовирусным препаратам.

2. Впервые установлен факт возрастания в России числа естественно циркулирующих резистентных к ремантадину вирусов гриппа А среди современных эпидемических штаммов сезонов 2002-2005 гг.: в эпидсезоне 2002-2003 гг. показатель составил 9,0% А(НШ1) и 10,0% А(НЗШ); в эпидсезоне 2003-2004 гг. - 14,0% А(НЗШ) и 18,0% штаммов А(НЗЫ2) сезона 2004-2005 гг.

3. Результатами молекулярно-генетического анализа подтверждена характерная замена аминокислоты серина на аспарагин в 31 положении М2 белка эпидемических штаммов вирусов гриппа А(НЗ№), выявленных в ИФА как резистентные к ремантадину.

4. Впервые выявлена высокая активность арбидола в отношении эпидемических вирусов гриппа А, в том числе штаммов, резистентных к ремантадину. Подтверждена противовирусная активность арбидола в отношении эпидемических штаммов вирусов гриппа В, при этом отмечена гетерогенность в их чувствительности к препарату.

5. Показано увеличение эффекта подавления вирусной репродукции в клетках культуры МОСК при комбинированном использовании ремантадина и арбидола в отношении современных эпидемических штаммов вирусов гриппа А, по сравнению с эффектом, оказываемым этими же концентрациями препаратов в отдельности. Наиболее выраженное усиление активности получено при использовании низких концентраций ремантадина (0,001-0,005 мкг/мл) и арбидола (2,5-5,0 мкг/мл).

6. Впервые в клиническом наблюдении, проведенном среди пациентов, перенесших гриппозную инфекцию, вызванную вирусами гриппа А(НЗК2) или В, не выявлено формирования резистентных к арбидолу штаммов на фоне рекомендуемого курса лечения.

7. Показано, что химический ряд производных индола является перспективным для дальнейшего поиска новых соединений, обладающих активностью в отношении вирусов гриппа А и В. Из 14 изученных новых соединений, 3 - обладали специфической активностью в отношении современных вирусов гриппа А и В, сравнимой с активностью арбидола.

8. Установлено, что новые соединения - производные селена обладали активностью в отношении эталонных и эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В, что делает перспективным их дальнейшее изучение, с целью разработки противовирусных препаратов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время грипп остается серьезным заболеванием для населения всего мира, приводящим к огромным экономическим потерям и высокой смертности. Поверхностные белки вирусов гриппа - НА и ЯА подвергаются постоянным изменениям, приводящим к постепенному вытеснению ранее циркулировавших среди людей штаммов вирусов гриппа. Реассортация между штаммами вирусов гриппа А человека, млекопитающих и птиц способствует возникновению нового пандемического варианта вируса гриппа А. Участившиеся в последние годы случаи инфицирования людей вирусами гриппа птиц А(Н5К1), А(НЖ7), А(Н7Ш) и А(Н9Ш) в странах Южной, Юго-Восточной Азии и Африки, сопровождающиеся высокой смертностью, могут стать причиной возникновения пандемического варианта.

Всемирной Организацией Здравоохранения в настоящее время помимо вакцинации как основного средства борьбы против гриппа рекомендовано применение препаратов этиотропного действия, то есть препаратов, направленных на определенную вирусспецифическую мишень в цикле вирусной репродукции. Значение химиопрофилактики возможно будет более ощутимым в случае появления нового пандемического варианта вируса гриппа А, быстрое распространение которого затруднит своевременное проведение массовой вакцинации населения в необходимом объеме. В России спектр таких препаратов представлен блокатором М2-белка вирусов гриппа А - ремантадин и ингибитором слияния липидной оболочки вирусов А и В с мембранами эндосом - арбидол.

Исследования по изучению чувствительности современных эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В в период с 2002 по 2005 гг. к этим противовирусным препаратам, проведенные в ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, показали, что ремантадин обладал высокой противовирусной активностью (50,0-100%) в отношении большинства эпидемических вирусов гриппа А в клетках культуры ткани МОСК. Однако в ходе эксперимента бьши выявлены вирусы гриппа А(НЗШ), резистентные к ремантадину, циркулирующие в естественных условиях, показатель которых в эпидемическом сезоне 2004-2005 гг. составил 18,0% и оказался выше по сравнению с результатами предыдущих сезонов 2002-2003 гг. (10,0%) и 2003-2004 гг. (14,0%).

Арбидол обладал выраженной противовирусной активностью (50,0-100%) в отношении всех изученных эпидемических штаммов вирусов гриппа А, в том числе, ремантадинрезистентных штаммов. Действие арбидола в отношении эпидемических штаммов вирусов гриппа В оказалось различным: 48,0% штаммов ингибировались арбидолом менее чем на 50,0%, в отношении остальных вирусов гриппа В активность арбидола составила 51,0-100%. Не было получено естественно циркулирующих резистентных к арбидолу штаммов вирусов гриппа. Проведенные дальнейшие исследования по изучению возможности возникновения резистентных к арбидолу вирусов гриппа А и В в клинических условиях не выявили формирования арбидолрезистентных штаммов при приеме препарата пациентами в течение 5 дней лечения. Таким образом, в этом плане, лечение арбидолом обладает определенным преимуществом над ремантадином, к тому же, он эффективен при лечении гриппа В.

Одним из подходов к увеличению эффективности химиопрепарата против гриппозной инфекции является его использование в комбинации с другим препаратом, имеющим отличный от него механизм действия. Проведенное изучение эффективности сочетанного применения ремантадина и арбидола в отношении эпидемических штаммов вирусов гриппа А показало, что их комбинация увеличивает ингибирующий эффект препаратов на вирусную репродукцию по сравнению с эффектом, оказываемым каждым из этих препаратов в отдельности при использовании их низких концентраций. Полученные данные подтвердили выраженное усиление взаимодействия арбидола и ремантадина, что может способствовать снижению лечебных дозировок, а значит токсичности, частоты побочных эффектов (особенно для ремантадина) и риска формирования резистентных мутантов.

Исследования с целью поиска соединений среди производных уже известных и широко применяемых в клинике химиопрепаратов могут привести к выявлению новых препаратов, обладающих высокой активностью в отношении вирусов гриппа. В исследовании была изучена активность новых соединений - аналогов арбидола и производных селена в отношении эталонных и эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В. Метод ИФА был успешно применен для первичного скрининга активных соединений среди аналогов арбидола и производных селена в отношении вирусов гриппа в клетках культуры МОСК. Использование этого метода позволяет оценивать противовирусную активность соединений быстро, количественно и объективно. Выявление с использованием метода ИФА среди производных индола и селена соединений с высокой ингибирующей активностью в отношении эпидемических штаммов вирусов гриппа открывает перспективы дальнейшего поиска новых химических соединений с противовирусной активностью.

Подводя итог полученным результатам, необходимо отметить следующее. Проведенное исследование подтверждает специфическую эффективность арбидола в отношении современных эпидемических штаммов вирусов гриппа А и В, в том числе, ремантадинрезистентных штаммов гриппа А. Одновременно оно показывает преимущество арбидола по сравнению с ремантадином, как препарата более широкого спектра действия в настоящее время и не вызывающего формирования резистентности при применении по рекомендуемой схеме лечения. Факт роста показателя ремантадинрезистентных вирусов гриппа А обосновывает необходимость дальнейшего проведения исследований по изучению чувствительности эпидемических штаммов вирусов гриппа А к ремантадину и целесообразность его применения для лечения и профилактики. Данные об увеличении противовирусной активности препаратов ремантадина и арбидола при сочетанием использовании открывают перспективу для клинического изучения этих препаратов при комбинированной терапии гриппа.

Полученные результаты еще раз подчеркивают необходимость постоянного мониторинга определения чувствительности вирусов гриппа к химиопрепаратам и, в случае необходимости, замены их на новые и более активные препараты.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Шевченко, Елена Сергеевна, 2006 год

1. Бектимиров Т.А. Рекомендации ВОЗ и международных форумов по тактике борьбы с гриппом в связи с возможной пандемией.// Бюллетень «Вакцинация».-2003.-№3(27).-С.1-5.

2. Беляев A.JL, Бурцева Е.И., Слепушкин А.Н. и др. Арбидол новое средство для профилактики гриппа и и острых респираторных вирусных инфекций у детей.// Вестник РАМН.-1996.-№3.-С.34-37.

3. Гагаринова В.М., Игнатьева Г.С., Синицкая JI.B. и др. Новый химиопрепарат арбидол: профилактическая эффективность во время эпидемий гриппа.// ЖМЭИ.-1993.-№5.-С.40-43.

4. Гайдамович С .Я. Классификация вирусов.// В кн.: Общая и частная вирусология. М: Медицина.-1982.-С.26-60.

5. Гендон Ю.З. Пандемия гриппа: можно ли с ней бороться?// Вопросы вирусологии.-1995.-№2.-С.8-12.

6. Гендон Ю.З. Вирусные мукозальные вакцины.// Вопр. вирусол.-1999.-№3.-С. 1000-105.

7. Глушков Р.Г., Гуськова Т.А., Голиков П.П., Давыдов Б.В., Клычникова Е.В. Изучение антиокислительных свойств арбидола.// Химико-фармацевтический журнал.-1996.-№1(30).-С.3-5.

8. Глушков Р.Г., Гуськова Т.А., Крылова Л.Ю., Николаева И.С. Механизмы иммуномодулирующего действия арбидола. //Вестник РАМН.-1999.-№3.-С.36-40.

9. Гмурман В.Е. Теория вероятностей и математическая статистика. // Москва: Высшая школа.-2002.-479с.

10. Гуськова Т.А. и Глушков Р.Г. Арбидол иммуномодулятор, индуктор интерферона, антиоксидант.// Москва.-1999.-93с.

11. Дриневский В.П., Осидак Л.В., Нацина В.К. и др. Химиопрепараты в терапии гриппа и других респираторных вирусных инфекций.// Антибиотики и химиотерапия.-1998,-№9.-С.29-34.

12. Ершов Ф.И. Антивирусные препараты. — М: Медицина.-Москва.-1998, 192 с.

13. Ильюшина Н.А. Антигенная структура гемагглютинина вируса гриппа А подтипов Н5 и Н9 и фенотипические свойства его антигенных вариантов. // Дисс. на соиск.уч. степ, к. б. н. -М.-2003.

14. Информационное письмо Минздрава России от 01.09.2003. N2510/9821-03-32 «Об итогах эпидсезона по гриппу и прогнозе на 2003-2004 годы».

15. Информационное письмо Минздрава России от 01.09.2004. N1 «Об усилении мероприятий по профилактике гриппа и острых респираторных вирусных инфекций».

16. Информационное письмо Минздрава России от 30.06.2005. N0100/4961-05-32 «Об итогах эпидсезона по гриппу и ОРВИ 2004-2005 гг. и прогнозе на эпидсезон 2005-2006 гг.».

17. Каверин Н.В., Смирнов Ю.А. Межвидовая передача вируса гриппа А и пандемии гриппа. //Вопросы вирусологии.-2003.-№3.-С.4-10.

18. Карпухин Г.И. Грипп: Руководство для врачей.// СПб.: Гиппократ.-2001.-360 с.

19. Козелецкая К.Н., Каршнов В.А., Киселев О.И., Мишин В.П., Гринбаум Е.Б., Бурмистрова В.В. Происхождение резистентности к химиопрепаратам у природных изолятов вирусов гриппа. // Вестник РАМН.-1995.-№9.-С.36-41.

20. Крамарев С.А., Палатная Л.А., Литус В.И. Опыт применения арбидола при лечении и профилактике гриппа и ОРВИ у детей на Украине.// Русский медицинский журнал.-2003.-№21.-С. 1050-1051.

21. Кубарь О.И. Тез. докл. конференции, посвященной Актовому дню Санкт-Петербургского Института им. Пастера.-С.~Петербург.-1993.-С.9-11.

22. Кубарь О.И., Степанова Л.А., Сафонова Л.С., Розаева Н.Р. Клиническая аппликация иммуномодулирующих свойств арбидола при ОРВИ.-Тез. докл. IV Российского Национального Конгресса " Человек и лекарство".-Москва.-1997.-С.269.

23. Ленева И.А., Глушков Р.Г., Гуськова Т.А. Лекарственные средства для химиотерапии и химиопрофилактики гриппа: особенности механизма действия, эффективность и безопасность (обзор).//Химико-фармацевтический журнал.-2004.-Т.38.-№11.-С.8-14.

24. Львов Д.К., Ямникова С.С., Забережный А.Д., Гребенникова Т.В. Межпопуляционные взаимодействия в системе вирусы гриппа А-животные-человек. // Вопросы вирусологии.-2005.-№4.-С.4-11.

25. Методические указания к работе опорных баз Всесоюзного центра по гриппу и ОРЗ. Л.-986.-С.40-42.

26. Методы определения показателей качества иммунобиологических препаратов для профилактики и диагностики гриппа.// Методические указания МУ 3.3.2.1758-03.-М., 2005.

27. Обросова-Серова Н.П., Бурцева Е.И., Невский И.М. и др.// Вопросы вирусол.-1991,-№5.-С.380-381.

28. Патент РФ №2008004, Бюл. изобрет.-№4.-1994.

29. Патент РФ №2033156, Бюл. изобрет.-№11.-1995.

30. Селькова Е.П. «Оптимизация системы профилактических и лечебных мероприятий при гриппе и ОРВИ в условиях мегаполиса»: Дис.докг. мед. наук: 14.00.30.//Москва.-РМАПО. -2002.-203с.

31. Слепушкин АН. Грипп и другие ОРВИ.// под ред. В.И. Покровского, Г.Г. Онищенко, Б.П. Черкасского Эволюция инфекционных болезней в России в XX веке.-М.: «Медицина».-2003.-С. 184-214.

32. Смородинцев А.А. Принципы поиска, изучения новых противовирусных химиопрепаратов и место химиопрофилактики гриппа в системе противогриппозных мероприятий// Химиопрофилактика и химиотерапия гриппа.-Л.-1972.-С.11-18.

33. Соколов Б.П., Руднева И. А. Изучение изменчивости белков вируса гриппа А. // Вопр. вирусол.-1981.-№4.-С.471-477.

34. Суринов Б.П., Карпова НА., Кумин Ю.С. Иммуномодулирующие свойства арбидола.// Хим. фарм. журн.-1995.-№3.-С. 14-15.

35. Учайкин В.Ф., Харламова С.Г., Чешик С.Г. Применение арбидола и амиксина в качестве этиотропной терапии гриппа и ОРВИ у детей.// Педиатрия.-2004.-№5.-С.73-77.

36. Федякина И.Т., Ямникова С.С., Галегов Г.А., Львов Д.К. Действие противовирусных препаратов на репродукцию вируса гриппа птиц А/Н5, изолированного в России.//Вопр. вирусол.-2005.-№ 5.-С.35-37.

37. Федякина И.Т., Ленева И. А., Ямникова С.С., Львов Д.К., Глушков Р.Г., Шустер A.M. Чувствительность вирусов гриппа А/Н5, изолированных от диких птиц на территории России, к арбидолу в культуре клетокMDCK. //Вопр. вирусол.-2005.-№6.-С.32-35.

38. Феклисова Л.В., Шебекова В.М., Слепушкин А.Н. и др. Новые лекарственные препараты.-1995.-№3.-С.19-22.

39. Хохлова Г.Г. Особенности эпиднадзора при гриппе и его усовершенствование. // Автореф. K.M.H.-1992.-C.1-3.

40. Чешик С.Г., Вартанян Р.В. Эффективность терапии арбидолом при острых респираторных вирусных инфекциях у детей раннего возраста.// Новые лекарственные препараты. -2004. -№ 11. -С.37-44.

41. Чистяков В.В., Ермаченков И.А., Голованова И.В. Фармакокинетика арбидола у крыс. // Химико-фармацевтический журнал.-1993.-№9.-С.11-14.

42. Шаханина И. Грипп и острые респираторные заболевания приоритетная социально-экономическая проблема здравоохранения.// В сб. Вакцинопрофилактика гриппа.-М.: 1998.-С.10-16.

43. Шумилов В.И., Шустер А.М., Лобастов С.П., Шевцов В.А., Медников Б.Л., Пиявский С.А., Литус В.И. Эффективность арбидола при профилактике и лечении острых респираторных инфекций.//Военно-медицинский журнал.-2002.-Т.9.-С.51-53.

44. Эймар М. Антигенные варианты нейраминидазы вируса гриппа и роль антинейраминидазных антител.// В кн.: «Профилактика и лечение гриппа».-Ленинград.-1976.-С. 17-38.

45. Ямникова С.С., Ковтун Т.О., Дмитриев Г.А., Аристова В. А., Русанов Г.М., Конечный А.Г., Львов Д.К. Циркуляция вируса гриппа А серотипа Н13 среди чайковых птиц Северного Каспия (1979-1985 гг.). //Вопросы вирусологии.-1989.-Т.4.-С.426-430.

46. Air G.M., Gibbs A. J., Laver W.G., Webster R.G. Evolutionary changes in influenza В are not primary governed by antibody selection.//Proc.Natl.Acad.Sei., USA.-1990.V87.-P.3884-3888.

47. Aoki F.Y., Macleod M.D., Paggiaro P. et al. Early administration of oral oseltamivir maximizes the benefits of influenzatreatment.// J.Antim.Agents Chem.-2003.-V.51(l).-P. 123-129.

48. Baltimor D. Expression of animal virus genomes.// Bacterial Rev.-1971.-V.35-P.235-241.

49. Belshe R.B, Burk В., Newman F., Cerruti R.L., Sim I.S. Resistance of influenza A virus to amantadine and rimantadine: results of one decade of surveillance.// J.Inf. Dis.-1989.-V.159.- P.430-435.

50. Belshe R.B., Hay A.J. Drug resistance and mechanisms of action on influenza A viruses // J. Respir. Dis.-1989.-V. 10.-P.952-961.

51. Berton H.T., Webster R.G. The antigenic structure of the influenza В virus haemagglutinin: operation and topological mapping with monoclonal antibodies. // Virology.-1985.-V.143.-P.583-594.

52. Bizebard Т., Gigant В., Rigolet P. et al. Structure of influenza virus hemagglutinin complexed with a neutralizing antibody.// Nature.-1995.-V.376 (6).-P.92-94.

53. Bright R.A., Medina M., Xu X. et al. Incidence of adamantane resistance among influenza A(H3N2) viruses isolated worldwide from 1994 to 2005: a cause to concern.//Published online.-September 22, 2005.-D01:10.1016/S0140-6736(05).-67340-0.

54. Bright R.A., Shay D.K., Shu Bo, Cox N.J., Klimov A.I. Adamantane resistance among influenza A viruses isolated early during the 2005-2006 influenza season in the United StatesV/JAMA, Published online.-February 2, 2006.-D01: 10.1001/jama.295.8.joc60020.

55. Brooks M. Studies with the antiviral drug Arbidol. Диссертация. Australia, Melburn.-2003.-140 p.

56. Calfee D., Preng A., Hussey E. et aIII Antivir. Ther.-1999.-V.4(3).-P. 143-149.

57. CDC/WHO Avian influenza Response Team. Outbreaks of avian influenza A(H5N1) in Asia and interim recommendations for evaluation and reporting of suspected cases — United States.// MMWR Morb.Mort.Wkly.Rep.-2004.-V.53.-P.97-100.

58. Choppin P.W., Compans R.W., Scheild A. J.Mesharry and S.Zazarowitz Structure and assembly of viral membrane.-1972.-P. 163-179.

59. Choppin P.W., Schild A. The role of viral glycoproteine in adsorption, penetration and pathogenicity of viruses.// Rev.Infect.Diseases.-1980.-V.2.-N 1.-P.40-61.

60. Cooper N.J., Sutton A.J., Abrams K.R. et al. Effectiveness of neuraminidase inhibitors in treatment and prevention of influenza A and B: systematic review and meta-analyses of randomized controlled trials.//Br. Med. J.-2003.-V.326(7401).-P.1235.

61. Daniels R.S., Downie J.C., Hay A.J., Knossow M., Skehel JJ., Wang M.L., Wiley D.C. Fusion mutants of the influenza virus HA glycoprotein. // Cell.-1985.-V.40.-P.431-439.

62. Davies W.L., Grunert R.R., Haff R., et al. Antiviral activity of 1-adamantanamine (amantadine).// Science.-1964.-V. 144.-P.862-863.

63. Davies H.W., Appleyard G., Cunnighan P. and Pereira M.S. The use of continuous cell line for the isolation of influenza virus.// Bull. WHO.-1978.-V.56.-P. 1991-1993.

64. Englund J.A. and others Common emergence of amantadine and rimantadine resistant influenza A viruses in symptomatic immunocompromised adults. // Clin.Infect.Dis.-1998.-V.26.-P.1418-1424.

65. Foucher R.A.M., Munster V., Wallenste A. et al. Characterization of a novel influenza A virus haemagglutinin subtype (HI6) obtained from black-headed gulls. // J. of Virology. -2005.-V.79.-N5.-P.2814-2822.

66. Francis T. Jr. A new type of virus from epidemic influenza.// Science.-1940.-V.92.-P.405-406.

67. Galegov G.A., Pushkarskaya N.L., Obrosova-Serova N.P. et al. Combined action of ribavirine and rimantadine in experimental myxovirus infection //Experientia.-1977.-V.33,-N 7.-P.906-908.

68. Glushkov R.G. Arbidol. Antiviral, Immunostimulant, Interferon inducer.// Drug of the Future.-1992.-N. 17.-P. 1079-1081.

69. Gubareva L.V., Matrosovich M.N., Brenner M.K. et al. Evidence for zanamivir resistance in a immunocompromised child infected with influenza B virus.// J.Infect.Dis.-1998.-V.178.-P. 1257-1262.

70. Hay AJ. Amantadine and rimantadine mechanisms.// In book: Antiviral Drug Resistance, Richman D. (ed), Willey J. and Sons Ltd, Chichester, UK.-1996.- P.43-58.

71. Hayden F.G. Combination of antiviral agents for treatment of influenza virus infection //J.Antimirob.Chemother.-1986.-V.18.-Suppl B.-P.77-83.

72. Hayden F.G., Monto A.S. Oral rimantadine hydrochloride therapy of influenza A virus H3N2 subtype infection in adults. // Antimicrob. Agents and Chemother.-1986.-V.29.-N2.-P.339-341.

73. Hayden F.G., Belshe R.B., Clover R.D. et al. Emergence and apparent transmission of rimantadine-resistant influenza A in families.//N. Eng. J. Med.-1989.-V.281.-P.579-584.

74. Hayden F.G., Belshe R.B., Clover R.D. et al. Emergence and apparent transmission of rimantadine-resistant influenza A virus in families.// N.Eng.J.Med.-1989.-V.321.-P.1696-1702.

75. Hayden F.G., Aoki F.Y. Amantadine, rimantadine and related agents. // In Antimicrobial therapy and vaccines, ed. V.L.Yu, T.C.Merigan, S.L.Barriere, Baltimore: Williams and Wilkins.-1999.-P. 1344-1365.

76. Hayden F.G., Atmar R.L., Schilling M. Use of the selective oral neuraminidase inhibitor oseltamivir to prevent influenza // N Engl J Med.-1999.-V.341.-P. 1336-1346.

77. Hayden F.C., Gubareva L.V., Monto A.S. et al. Inhaled zanamivir for prevention of influenza in families. Zanamivir Family Study Group.// N.Eng.J.Med.-2000.-V.343.-P. 12821289.

78. Hayden F.G. Perspectives on antiviral use during pandemic influenza.// Phil.Trans.R. Soc.Lond.B.-2001 .-V.356.-P. 1877-1884.

79. Hayden F. WHO Guidelines on the Use of Vaccines and Antivirals during Influenza. // Annex 5-Considerations for the Use of Antivirals during an Influenza pandemic.-Geneva.-2-4 October, 2002.

80. Hilleman M.R. Коментарий о гриппе A(H1N1) 1977-78 годов. Молекулярная биология вируса гриппа, 1979.// Сборник Инст .вирусологии АМН СССР, Москва.-1979.-Р.6-7.

81. Hogue B.G., Nayak D.P. Synthesis and processing of the Influenza virus neuraminidase a type П transmembrane glycoprotein.// Virology.-1992.-V. 188.-P.510-517.

82. Horadam V.M., Sharp J.G., Smilack J.D. Pharmacokinetics of amantadine hydrochloride in subjects with normal and impaired renal functions. // Annals of Internal Medicine 94.-1981,-P.454-458.

83. Influenza.//Weekly Epidemiol. Rec.-2002.-N.28.-V.77.~P.230-240.

84. Influenza.// Weekly Epidemiol. Rec.-2002.-N.46.-V.77.-P.381-384.

85. Influenza.//Weekly Epidemiol. Rec.-2003.-N.8.-V.78.-P.49-50.

86. Influenza.// Weekly Epidemiol. Rec.-2003.-N.9.-V.78.-P.88-92.

87. Influenza.//Weekly Epidemiol. Rec.-2003.-N.10.-V.78.-P.65-66.

88. Influenza.//Weekly Epidemiol. Rec.-2003.-N.ll.-V.78.-P.73-78.

89. Influenza.//Weekly Epidemiol. Rec.-2003.-N.13.-V.78.-P.94-96.

90. Influenza.//Weekly Epidemiol. Rec.-2003.-N.16.-V.78.-P.136.

91. Influenza.//Weekly Epidemiol. Rec.-2003.-N.43.-V.78.-P.378-380.

92. Influenza.//Weekly Epidemiol. Rec.-2004.-N.3.-V.79.-P. 13-14.

93. Influenza.//Weekly Epidemiol. Rec.-2004.-N.4.-V.79.-P.41-42.lOO.Influenza.// Weekly Epidemiol. Rec.-2004.-N.6.-V.79.-P.53-54.

94. Influenza.//Weekly Epidemiol. Rec.-2004.-N.7.-V.79.-P.65-70.

95. Influenza.//Weekly Epidemiol. Rec.-2004.-N.9.-V.79.-P.88-92.

96. Influenza.// Weekly Epidemiol. Rec.-2004.-N.29.-V.79.-P.265-266.

97. Influenza.// Weekly Epidemiol. Rec.-2004.-N.32.-V.79.-P.291-292.

98. Ito Toshihiro, Goto Hideo, Yamamoto Eiji et al. Generation of a highly pathogenic avian influenza A virus from an avirulent field isolate by passaging in chickens // J.Virol.-2001.-V.75.-N9.-P.4439-4443.

99. Jefferson T.D, Demicheli V., Deeks JJ et al. Amantadine and rimantadine for preventing and treating influenza A in adults.// The Cochraine Library, Issue 1, Willey J. and Sons Ltd, Chichester, UK.-2004.

100. Kaiser L., Henry D., Flack N.P. et al. Short-term treatment with zanamivir to prevent influenza: results of placebo-controlled study.//Clin.Infect.Dis.-2000.-V.30.-P.587-589.

101. Kantarovich-Prokudina E.N., Semyonova N.P., Yamnikova S.S., Berezina O.N., Zhdanov V.M. DNA Sequences in influenza virions.// J. Gen. Virol.-1978.-V.41.-P.405-409.

102. Kawaoka Y., Krauss S., Webster R.G. Avian to human transmission of the PB1 gene of influenza A virus in the 1957 and 1968 pandemics.// J.Virol.-1989.-V.63.-P.4603-4608.

103. Kawaoka Y., Yamnikova S., Chambers T.M., Lvov D.K., Webster R.G. Molecular characterization of a new haemagglutinin, subtype H14 of influenza A virus. // Virology.-1990.-V. 179.-P.759-767.

104. Kinchington D., Kangro H., Jeffries D. Design and testing of antiviral compounds. // In Medical Virology: Oxford University Press.-1997.-P. 147-160.

105. Kiso M., Mitamura K., Sakai-Tagawa Y. et al. Resistant influenza A viruses in children treated with oseltamivir: descriptive study.// Lancet.-2004.-V.264.-P.759-765.

106. Kung H.C., Jen K.F., Yuan W.C. et al. Influenza in China in 1977: recurrence of Influenza virus A subtype (H1N1).//Bull. Wld Hlth Org.-1978.-V.56.-P.913-918.

107. Lamb R.A., Lai C.J., Choppin P.W. Sequences of mRNAs derived from genome RNA segment 7 of influenza virus: collinear and interrupted mRNAs code for overlapping proteins.//Proc. Natl. Acad. SciUSA.-1981.-V.78(7).-P.4170-4174.

108. Lamb R.A The Influenza virus RNA segments and their encoded proteins.// In book: Genetic of Influenza viruses. Edds. Palese P., Kingsburg D.W. Springer-Verlay, Wien. New York>1983.-P.21-70.

109. Lamb R.A.,Zebedee L.S., Richardson C.D. Influenza vims protein in an integral membrane protein expressed on the infected cell surface.// Cell.-1985.-V.40.-P.627-633.

110. Lamb R. A. Genes and proteins of the influenza viruses in the Influenza viruses.// Edited by R.M.Krug, New York -London: Plenum Press.-1989.-P.l-87.

111. Laver W.G., Bischofberger N., Webster R.G. Disarming Flu Viruses.// Scientific American.-1999.-V.280.-P.78-87.

112. Lazarowitz S.G., Compans R.W., Choppin P.W. Influenza virus structural and nonstructural proteins in infected cells and their plasma membranes.// Virology.-1971.-V.46.-P.830-843.

113. Leneva I.A., Roberts N., Webster R.G. Efficacy of oseltamivir on H5N1 and H9N2 influenza viruses // II International Symposium on Influenza and other Respiratory Viruses.-Grand Cayman, 1999.-Abstr.

114. Leneva I. and Hay A. The mechanism of action of arbidol against influenza virus-selection and characterization of arbidol-resistant mutants // 12th International Congress of Virology.-Paris.-2002.-Abs. 1077.

115. Magill T.P. A virus from cases of influenza-like upper respiratory infections.// Proc. Soc.exp. Biol.med.-1940.-V.45.-N.l.-P.162.

116. Marra F., Marra C.A., Stiver H.G. A case for rimantadine to be marketed in Canada for prophylaxis of influenza A virus infection. // Can.RespJ.-2003.-V.10.-P.381-388.

117. Masuda H., Suzuki H., Oshitani H., et al. Incidence of amantadine-resistant influenza A viruses in sentinel surveillance sites and nursing homes in Niigata, Japan.// MicrobiolJmmunol.-2000.-V.44.-P.833-839.

118. McKimm-Breshkin J., Trivedi T., Hampson A. et al. Neuraminidase sequence analysis and susceptibilities of influenza virus clinical isolates to zanamivir and oseltamivir. //

119. Antimicrob. Agents Chemotherapy.- 2003.- V. 47.-P. 2264-2272.

120. MMWR.-V.55(02).-2006.-P.44-46.

121. Monto A., Arden N. Implications of viral resistance to amantadine in control of influenza A.// Clin.Infect.Dis. -1992. -V. 15. -P.362-367.

122. Monto A.S., Fleming D.M., Henry D. Efficacy and safety of neuraminidase inhibitor zanamivir in the treatment of influenza A and B infections.// J. Infect. Dis.-1999.-V. 180(2).-P.254-261.

123. Monto A.S., Robinson D.P., Herlocher L. et al. Zanamivir in the prevention of influenza among healthy adults.// J.Am.Med.Assoc.-1999.-V.282.-P.31-36.

124. Mounts A.W., Kwong H., Izurieta H.C. et al. Case-control study of risk factors for avian influenza A(H5N1) disease, Hong Kong, 1997.//J.Infect.Dis.-1997.-V.180.-P.505-508.

125. Mungall B.A., Xu X., Klimov A. Surveillance of influenza isolates for susceptibility to neuraminidase inhibitors during the 2000-2001 influenza seasons.// Virus research. An Intern. J.Mol.Cell. Virol.-2004.-V.103.-P. 195-197.

126. Murphy K., Eivindson A., Paukens K. et al. Efficacy and safety of inhaled zanamivir for the treatment of influenza in patients with asthma or chronic obstructive pulmonary disease.// Clin. Drug Invest.-2000.-V.20.-P.337-349.

127. Nakamura K., Compans R.W. Glycopeptide components of influenza viral glycoproteins.// Virology.-1978.-V.96.-P.432-442.

128. Palese P., Shulman J.L. Mapping of the influenza virus genome: identification of the hemagglutinin and the neuraminidase genes.//PNAS USA.-1976.-V.73.-P.2142-2146.

129. Palese P. and Shulman J. in: Chemoprophylaxis and virus infections of the respiratory tract. J.S. Oxford(ed).// CRC Press, Cleveland.-1977.-V.l.-P.189-205.

130. Peiris M., Yam W.C., Chan K.H. et al. Influenza A(H9N2): aspects of laboratory diagnosis.// J.Clin.Microbiol.-1999.-V.37.-P.3426-3427.

131. Peters P.H., Gravenstein S., Norwood P. et al. Long term use of oseltamivir for the prophylaxis of influenza in a vaccinated frail elderly population.// J.Am.Geritr.Soc.-V.49.-P.1025-1031.

132. Pinto L.H., Holsinger L.J., Lamb R.A. Influenza virus M2 protein has ion channel activity.// Cell.-1992.-V.69.-P.517-528.

133. Porter A.G., Smith J.C., Emtage J.S. The sequence of influenza virus RNA segment 8 indicates that the coding regions for the NS1 and NS2 protein overlap.// PNAS USA.-1980.-V.77.-P. 5074-5078.

134. Potter Ch.W. Chronicle of Influenza Pandemics.// Chapter 1. Textbook of Influenza. Blackwell Science Ltd, London.-1998.-P.3-18.

135. Prosch S.H., Heider H., Schroder C., Kruger D.H. Mutations in the hemagglutinin gene associated with influenza virus resistance to norakin. // Arch.Virol.-1988.-V.102.-P.125-129.

136. Recommendations and Reports. Prevention and control of influenza. April 12, 2002.-V.51.-No.RR-3.-P. 16.

137. Richardson J.C.W., Scolera V. et Simmonds N.L. Identification of two strains of MDCK cells which resemble separate nephron tubule segments.// Biophys. Acta.-1981.-V.673.-P.26-36.

138. Rohm C., Zhou N., Suss J., Mackenzie J., Webster R. Characterizationof novel influenza hemagglutinin HI 5,criteria for determination of influenza A subtypes.// Virology.- 1996,-V.217.-P.508-516.

139. Shibata S., Yamamoto F.-Goshima, Maemo K. at al. Characterization of temperature-sensitive influenza B virus mutantdefective in neuraminidase.// J. Virol.-1993.- V.67.-N 6.-P.3264-3273.

140. Smorodintsev A.A., Zlydnikov D.M., Kiseleva A.M. et al. Evaluation of amantadine in artificially induced A2 and B influenza.// J. Am. Med. Ass.-1970.-V.213(9).-P. 1448-1454.

141. Steinhauer D.A., Sauter N.K., Skehel J.J., Wiley D.C. Receptor binding and cell entry by influenza viruses. // Semin.Virol.-1992.-V.3.-P.91-100.

142. Suarez D.L., Perdue M.L., Cox N.J. et al. Comparisons of highly virulent H5N1 influenza A viruses isolated from humans and chickens from Hong Kong.// J.Virol.-1998.-V.72.-P.6678-6688.

143. Subbaro K., Klimov A., Katz J. et al. Characterization of an avian influenza A (H5N1) virus isolated from a child with a fatal respiratory illness //Science.-1998.-V.279.-P.393-396.

144. Surgue R.J., Hay A.J. Srructural characteristics of the M2 protein of influenza A viruses: evidence that it forms a tetrameric channel. // Virology.-1991.-V.180.-P.617-624.

145. Taubenberger J.K., Reid A.H., Kraft A.E., Bijward K.E. Fanning T.G. Initial genetic characterization of the 1918 "Spanish influenza virus".// Science.-1997.-V.275.-P.1793-1796.

146. The MIST Study Group, Lancet.-1998.-V.352.-P.1877-1881.

147. Tisdale M. Monitoring of viral susceptibility: new challenges with the development of influenza NA inhibitors.// Rev.Med.Virol.-2000.-V.10.-P.45-55.

148. Tominack R.L., Hayden F.G. Rimantadine hydrochloride and amantadine hydrochloride use in influenza A virus infections. // Infect.Dis.Clin.of North America, Philadelphia.-1987.-P.459-478.

149. Tominack RL., Willis R.G., Gustavson L.E., Hayden F.G. Multiple-dose pharmacokinetics of rimantadine in elderly adults. // Antimicrobial Agents and Chemotherapy.-1988.-V.32,-P.1813-1819.

150. Tsuchiya E., Sugawara K., Hongo S., Matsuzaki Y., Muraki Y., Li Z.N., Nakamura K. Antigenic structure of the haemagglutinin of human influenza A(H2N2) virus. // J. Gen. Virol.-2001.-V.82.-P.2475-2484.

151. Tsunoda A., Maasab H.F.,Cochran K.W. et al. Antiviral activity of a-methil-l-adamantane-methylamine hydrochloride // Antimicrob. agents chemother.-1965.-V.5.-P. 553-556.

152. Turner D., Wailoo A., Nicholson K. et al. Systematic review and economic decision modeling for the prevention and treatment of influenza A and B.// http://www. nice, org. uk/pdf7influenzaassrep. pdf,

153. Valette M., Allard J.P., Aymard M., Millet V. Susceptibilities to rimantadine of influenza A/H1N1 and A/H3N2 viruses isolated during the epidemics of 1988 to 1989 and 1989 to 1990.// Antimicrob. Agents Chemother.-1993.-V.37.-P.2239-2240.

154. Webster KG., Bean W.J., Corman O.T., Chambers T.H., Kawaoka Y. Evolution and ecology of influenza A viruses.// Microbiol.Rev.-1992.-V.56.-P. 152-179.

155. Webster KG., Kavaoka Y. Influenza an emerging and re-emerging disease.// Seminar in Virology. -1994.-V. 5 .-P. 103-111.

156. Welliver R., Monto S., Carewicz O. et al. Effectiveness of oseltamivir in treatment of acute influenza: a randomized trial.// Lancet.-2000.-V.355.-P.1845-1850.

157. Whiley R.J., Hayden F.G., Reisinger K. et al. Oral oseltamivir treatment of influenza in children.//Pediatr.Infect.Dis.-2001.-V.20.-P. 127-133.

158. Wiley D.S., Wilson I.A., Skehel J.J. Structural identification of the antibody binding sites of Hong Kong influenza haemagglutinin and twir involvement in antigenic variation.// Nature.-1981.-V.289.-P.373-378.

159. Wiley D.C., Skehel J J. The structure and function of the hemagglutinin membrane glycoprotein of influenza virus.// Annual Revier of Biochemistry.-1987.-V.56.-P.365-394.

160. Wilson I. A., Skehel J J., Wiley D.C. Structure of haemagglutinin membrain glycoprotein of influenza virus at 3 A resolution.// Nature (London).-1981.-V.289.-P.365-373.

161. Woodhead M., Lavanchy D., Johnston S. et al. Neuraminidase inhibitors: progress in the management of influenza. // InterJ.Clin.Pract.-2000.-V.54.-P.604-610.

162. Yasuda J., Nakada S., Kato A., Toyoda T.,Ishihama A. Molecular assem by of Influenza virus association of the NS2 protein with virion matrix.// J. Virol.-1993.-V. 196.-P.249-255.

163. Ye Z., Baylor N.W., Wagner R.R. Transcription inhibition and RNA binding domains of influenza A virus matrix protein mapped with anti-idio typic antibodies and synthetic peptides.//J. Virol.-1989.-V.63.-P.3586-3594.

164. Ziegler T., Hemphill M.L., Ziegler M.L. et al. Low incidence of rimantadine resistance in field isolates of influenza A viruses. // The Journal of infectious diseases.-1999.-V. 180(4).-P.935-939.