Диагностика наследственной патологии тромбоцитов у детей и подростков с геморрагическим синдромом тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.21, кандидат наук Федорова Дарья Викторовна

• Федорова Дарья Викторовна
• кандидат наук
• 2020

Оглавление диссертации кандидат наук Федорова Дарья Викторовна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Роль тромбоцитов в осуществлении первичного гемостаза

1.1.1 Адгезия тромбоцитов

1.1.2 «Снаружи внутрь» (outside-in) активация тромбоцитов

1.1.3 Активация интегрина атРш «изнутри наружу» (inside-out)

1.1.4 Секреция гранул тромбоцитов

1.1.5 Изменение формы тромбоцитов

1.1.6 Агрегация тромбоцитов

1.1.7 Взаимодействие тромбоцитов и фактов свертывания

1.2 Классификация наследственной патологии тромбоцитов

1.3 Обследование пациентов с наследственной патологией тромбоцитов

1.3.1 Клинические проявления: геморрагический синдром

1.3.2 Стандартизованные шкалы оценки кровоточивости

1.3.3 Негематологические проявления

1.3.4 Риск развития гемобластозов

1.3.5 Лабораторные исследования

1.3.5.1 Исследование гемограммы

1.3.5.2 Нормальное число тромбоцитов

1.3.5.3 Исследование мазка периферической крови

1.3.5.4 Время кровотечения и прибор PFA-100

1.3.5.5 Тесты оценки функций тромбоцитов

1.3.5.6 Особенности оценки функций тромбоцитов у детей

1.3.5.7 Молекулярно-генетические исследования

1.4 Заключение

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Основные положения

2.2 Характеристика пациентов

2.2.1 Пациенты с подозрением на наследственные тромбоцитопении

2.2.2 Термины и определения

2.2.3 Пациенты с подозрением на качественные дефекты тромбоцитов без тромбоцитопении

2.3 Клиническое и лабораторное обследование пациентов

2.4 Методика проведения лабораторных тестов

2.5 Статистическая обработка результатов

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Пациенты с подозрением на наследственные

тромбоцитопении

3.1.1 Характеристики пациентов с изолированной тромбоцитопенией

3.1.2 Пациенты, направленные на обследование на предмет наследственных тромбоцитопений

3.1.3 Пациенты, завершившие необходимый объем обследования на предмет наследственных тромбоцитопений

3.1.3.1 Диагностированные нозологические формы

3.1.3.2 Клинико-анамнестические характеристики пациентов с доказанным диагнозом наследственной тромбоцитопении

3.1.3.4 Анализ проявлений кровоточивости в отдельных группах

3.1.3.5 Сравнение геморрагических проявлений у пациентов с наследственными тромбоцитопениями и пациентов с иммунной тромбоцитопенией

3.1.3.6 Клинические проявления помимо геморрагического синдрома

3.1.3.7 Выраженность тромбоцитопении у пациентов с наследственными тромбоцитопениями

3.1.3.8 Корреляция степени тромбоцитопении и выраженности геморрагических проявлений

3.1.3.9 Терапия первой линии иммунной тромбоцитопении в анамнезе

3.1.3.10 Особенности, выявленные при исследовании мазка периферической крови

3.1.3.11 Оценка размеров тромбоцитов

3.1.3.12 Другие параметры проточной цитофлуориметрии тромбоцитов

3.1.4 Пациенты с неподтвержденным диагнозом (подозрение на TUBB1-ассоциированную тромбоцитопению)

3.1.5 Пациенты с неустановленным диагнозом

3.1.6 Алгоритм обследования пациентов на предмет наследственных тромбоцитопений

3.2 Пациенты с подозрением на качественные дефекты тромбоцитов

3.2.1 Клинико-анамнестические характеристики пациентов

3.2.2 Результаты функциональных лабораторных тестов

2.2.2.1 Изменения в результатах агрегометрии

2.2.2.2 Изменения в результатах проточной цитофлуориметрии тромбоцитов

3.2.3 Молекулярно-генетическое исследование

3.2.4 Сравнение тяжести клинических проявлений в зависимости от результатов лабораторных тестов

3.2.5 Чувствительности и специфичность оценок по шкалам PBQ и ISTH BAT при диагностике качественных дефектов тромбоцитов

3.2.6 Особенности отдельных групп пациентов

3.2.6.1 Тромбастения Гланцмана

3.2.6.2 Дефекты рецептора коллагена GPIV

3.2.6.3 Синдромом Германского-Пудлака

3.2.7 Заключение

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Диагностика наследственной патологии тромбоцитов у детей и подростков с геморрагическим синдромом»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы исследования

Заболевания из группы наследственной патологии тромбоцитов (НПТ) крайне гетерогенны по тяжести проявлений, распространенности и патогенезу [1-3]. Во многих случаях качественные дефекты тромбоцитов могут сочетаться с количественными. Подразделение НПТ на тромбоцитопатии и семейные тромбоцитопении иногда используется из практических соображений, но с точки зрения патофизиологии является весьма условным [4]. Для большинства заболеваний данной группы установление диагноза является длительным процессом, требующим проведения большого числа лабораторных тестов и их последующей комплексной оценки [1-3].

Считается, что нозологии из группы НПТ являются крайне редкими заболеваниями, однако, возможно, что их истинная распространенность недооценивается вследствие гиподиагностики [2]. Точная распространенность НПТ неизвестна, для отдельных заболеваний она может варьировать от 2:1 000 000 до 1:10 000 (расчетная частота для ряда нетяжелых форм) [2, 4, 5]. Для большого количества заболеваний из данной группы в литературе доступны описания только единичных семей и отдельных пациентов, что делает расчет распространенности невозможным [4].

Диагноз НПТ часто устанавливается уже в подростковом и даже во взрослом возрасте, поскольку умеренные дефекты функций тромбоцитов часто реализуются только в исключительных условиях (травмы, оперативные вмешательства и инвазивные диагностические процедуры, роды) [3]. Тяжесть геморрагических проявлений варьирует даже в пределах одного типа НПТ и часто не коррелирует со степенью выраженности изменений в лабораторных тестах [6].

Одним из главных препятствий на пути выработки общих подходов к диагностике НПТ является плохая воспроизводимость и недостаточная стандартизация большинства используемых лабораторных методик [2], а также необходимость работы исключительно со свежими образцами крови и крайняя чувствительность тромбоцитов к любым манипуляциям [3].

Диагностика НПТ является актуальной и пока нерешенной медицинской проблемой. Пациенты с такой патологией могут не страдать от проявлений повышенной кровоточивости в повседневной жизни, однако имеют пожизненный риск развития тяжелых кровотечений при выполнении инвазивных манипуляций и оперативных вмешательств. В таких случаях своевременное установление диагноза может спасти пациента от серьезных осложнений. С другой стороны, гипердиагностика патологии гемостаза подвергает пациента риску потенциальных осложнений от применения

гемостатических агентов, а также ухудшает качество жизни, накладывая ненужные ограничения на выбор профессии, занятия спортом и т.д. [7].

Установление точного диагноза НПТ особенно актуально для тех заболеваний из этой группы, где помимо качественных дефектов присутствует еще и тромбоцитопения. На сегодняшний день группа наследственных тромбоцитопений (НТ) охватывает более 30 заболеваний, вызванных мутациями в более чем 25 генах. НТ крайне гетерогенны с точки зрения выраженности тромбоцитопении, тяжести геморрагических проявлений и прогноза заболевания [8]. Многим пациентам с НТ на начальном этапе диагностики устанавливается неправильный диагноз иммунной тромбоцитопении и назначается неэффективное лечение, часто не лишенное побочных эффектов (глюкокортикостероидные гормоны и другие иммуносупрессивные препараты, спленэктомия) [9, 10].

Своевременная диагностика НТ особенно важна для ряда форм, в которых присутствуют негематологические проявления, иногда выходящие на первый план в клинической картине у конкретного пациента. Примером такого мультисистемного поражения являются заболевания, ассоциированные с мутациями в гене тяжелой цепи немышечного миозина (MYH9), для которых помимо макротромбоцитопении характерны пресенильная катаракта, прогрессирующая нейросенсорная тугоухость и гломерулярная нефропатия с возможным исходом в хроническую почечную недостаточность [8, 11].

Особую группу НПТ составляют НТ с предрасположенностью к развитию злокачественных новообразований. На сегодняшний день выделяют три наследственные формы НТ с доказанной предрасположенностью к гематологическим злокачественным новообразованиям: семейная тромбоцитопения/тромбоцитопатия с предрасположенностью к развитию острого миелодного лейкоза (FPD/AML, от англ. familial platelet disorder with propensity to acute myeloid leukemia), ANKRD26-связанная тромбоцитопения и ETV6-связанная тромбоцитопения [8]. Оптимальный подход к клиническому наблюдению пациентов с герминальными мутациями, ассоциированными с развитием острого лейкоза и других миелопролиферативных заболеваний, в настоящее время неизвестен. Ряд экспертов считает, что пациентам с острым лейкозом, возникшем на фоне наследственной предрасположенности, целесообразно проведение аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) независимо от других прогностических факторов. Данный подход обосновывается необходимостью полной эрадикации не только злокачественного клона кроветворения, но и нормального клона кроветворения с предрасположенностью к гемобластозам, однако не является универсальным и требует дополнительных исследований [12-14]. Крайне важным является обследование потенциальных родственных доноров на предмет наличия герминальной мутации, даже в

тех случаях, когда у донора отсутствует тромбоцитопения и явные проявления кровоточивости. ТГСК от такого родственного донора может снова привести к повторному развитию острого лейкоза из донорских клеток. Теоретически существует потенциальное увеличение риска развития острого лейкоза/миелодиспластического синдрома у родственного донора из-за процедуры мобилизации стволовых клеток [12, 15].

Таким образом, пациенты с НПТ и их родственники требуют комплексного обследования, соответствующего генетического консультирования и тщательного наблюдения. Своевременная идентификация пациентов с НПТ и определение конкретной нозологической формы важны для оценки прогноза пациентов, проведения генетических консультаций, персонализации последующего наблюдения для предотвращения геморрагических осложнений и выбора оптимального лечения в случае развития дополнительных заболеваний. Однако к настоящему времени многие из вышеперечисленных задач остаются нерешенными даже для хорошо известных форм НПТ, в то время как благодаря успехам молекулярной биологии ежегодно появляются данные о новых генах, вовлеченных в развитие НПТ.

Цель исследования

Разработать клинико-лабораторные алгоритмы диагностики НПТ с учетом особенностей их отдельных форм.

Задачи исследования

1. Оценить встречаемость НПТ среди детей и подростков с геморрагическим синдромом и/или изолированной тромбоцитопенией, обращающихся за специализированной гематологической помощью.

2. Охарактеризовать клинико-анамнестические особенности пациентов с НТ, включая семейный и личный анамнез заболевания и характеристику геморрагического фенотипа.

3. Охарактеризовать геморрагический фенотип и анамнестические особенности пациентов с качественными дефектами тромбоцитов без тромбоцитопении.

4. Сравнить клинико-анамнестические особенности пациентов с НТ и пациентов с ИТП и оценить значимость выявленных различий для дифференциальной диагностики.

5. Исследовать роль стандартных шкал оценки кровоточивости (русифицированные варианты опросников International Society on Thrombosis and Haemostasis Bleeding Assessment Tool и Pediatric Bleeding Questionnaire) в определении показаний к

обследованию на предмет качественных дефектов тромбоцитов у пациентов с жалобами на кровоточивость.

6. Проанализировать ценность отдельных лабораторных методов, применяемых для диагностики НТ.

7. Проанализировать значение отдельных лабораторных методик, используемых для диагностики качественных дефектов тромбоцитов.

Новизна исследования

1. Впервые в Российской Федерации (РФ) проанализированы клинико-анамнестические особенности крупной группы пациентов детского возраста с НПТ.

2. Роль использования нескольких стандартных шкал оценки кровоточивости у детей и подростков с НПТ оценена впервые в РФ.

3. Значимость метода проточной цитофлуориметрии тромбоцитов до и после активации в диагностике НПТ у пациентов детского возраста оценена впервые в РФ.

4. Роль методов высокопроизводительного секвенирования ДНК в диагностике НПТ оценена впервые в РФ.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Показаниями для обследования на предмет на НТ у пациентов с изолированной тромбоцитопенией являются: отягощенный семейный анамнез, дебют тромбоцитопении с рождения, отсутствие хотя бы кратковременного ответа на терапию первой линии ИТП, а также наличие у пациента умеренной тромбоцитопении (минимальное число тромбоцитов > 20 х109/л) при отсутствии данных о нормальном числе тромбоцитов когда-либо в течение жизни.

2. Группа НТ характеризуется крайней гетерогенностью, однако в целом для нее характерны умеренная тромбоцитопения (минимальное число тромбоцитов в течение жизни > 20 х109/л) и умеренные проявления кожного геморрагического синдрома и кровотечений со слизистых, а также корреляция степени тромбоцитопении и выраженности кровоточивости.

3. В первой линии обследования пациентов с подозрением на НТ целесообразно применение проточной цитофлуориметрии тромбоцитов с активацией (тест ФАТ).

4. У пациентов с нормальными размерами тромбоцитов при подозрении на НТ должны применяться методики высокопроизводительного секвенирования.

5. При обследовании на предмет качественных дефектов тромбоцитов обязательными является проведение и световой трансмиссионной агрегометрии (СТА), и ФАТ; указанные методы не являются взаимозаменяемыми. Исключение могут составлять пациенты с явным подозрением на тромбастению Гланцмана (ТГ), у которых необходимо минимизировать объем забираемой для анализа крови; в этом случае первая линии обследования может быть ограничена тестом ФАТ.

6. Пациенты с качественными дефектами тромбоцитов, за исключением пациентов с ТГ, не могут быть отличены по клиниченской картине. от пациентов с жалобами на кровоточивость, не имеющих нарушений в тестах функций тромбоцитов.

7. Шкалы оценки кровоточивости PBQ и ISTH BAT являются удобным инструментом для документирования проявлений кровоточивости, но не обладают достаточной предиктивной способностью относительно выявления функциональных дефектов тромбоцитов у пациентов с повышенной кровоточивостью.

Практическая значимость

1. Предложены алгоритмы обследования пациентов с подозрением на НПТ (с и без снижения числа тромбоцитов).

2. Обоснована целесообразность применения проточной цитофлуориметрии тромбоцитов и методик высокопроизводительного секвенирования в диагностике НПТ.

Внедрение результатов в практику

Материалы диссертации используются в работе ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Д.Рогачева» Минздрава России, а также в общеобразовательном процессе на кафедре гематологии с курсом лучевой терапии ФГАОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России.

Апробация результатов

Результаты работы и ее основные положения были доложены и обсуждены на следующих конференциях: XVIII Съезд педиатров России (Москва, февраль 2017г), VIII Межрегиональное совещание НОДГО (Москва, май 2017г), IX Межрегиональное совещание НОДГО (Санкт-Петербург, апрель 2018г), Объединенный Конгресс «Congress on Open Issues in Thrombosis and Hemostasis» совместно с 9-й Всероссийской конференцией по клинической гемостазиологии и гемореологии (Санкт-Петербург, октябрь 2018г), X

Межрегиональное совещание НОДГО (Сочи, апрель 2019г), the 24th EHA Anniversary Congress (Амстердам, июнь 2019г).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 12 печатных работ (11 в журналах, входящих в перечень рецензируемых научных изданий Высшей аттестационной комиссии (ВАК) при Министерстве науки и высшего образования Российской Федерации).

Объем и структура диссертации

Работа изложена на 201 странице машинописного текста, иллюстрирована 32 таблицами и 27 рисунками. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы по теме диссертации, двух основных глав, содержащих результаты и их обсуждение, выводов и практических рекомендаций, списка использованной литературы и 5 приложений. Библиография включает 264 источника литературы (17 - отечественные, 247 - зарубежные).

Участие автора в получения результатов исследования

Совместно с научными руководителями были определены цель, задачи и методы исследования. Лично автором был проведен анализ литературных данных по теме исследования, составлена база данных для хранения информации о пациентах, проведены статистическая обработка и анализ полученных результатов, сформулированы выводы и практические рекомендации. Лично автором проводилось обследовании и лечение пациентов, вошедших в исследование. Кроме того, автор принимал участие в формировании перечня генов, впоследствии вошедших в таргетную панель высокопроизводительного секвенирования «Гемостаз», использованную для обследования пациентов в диссертационной работе.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Роль тромбоцитов в осуществлении первичного гемостаза

Тромбоциты играют ключевую роль в осуществлении первичного гемостаза Схематично этот процесс может быть разделен на 4 этапа: адгезия тромбоцитов к сайту нарушения целостности сосудистого эндотелия, активация тромбоцитов и секреция содержимого их гранул, агрегация тромбоцитов (прикрепление тромбоцитов друг к другу), взаимодействие тромбоцитов и факторов свертывания крови [16, 17].

1.1.1. Адгезия тромбоцитов

После повреждения сосудистого эндотелия компоненты субэндотелиальной выстилки (коллаген, ламинин, фибронектин, тромбоспондин, фактор Виллебранда) оказываются открыты контакту с циркулирующими тромбоцитами, благодаря чему становится возможным их взаимодействие [18]. Адгезия тромбоцитов к экстрацеллюлярному матриксу представляет собой координированный процесс, включающий прикрепление (англ. tethering), «качение» тромбоцитов (англ. rolling), активацию и устойчивую адгезию. Первичное взаимодействие тромбоцитов и белков субэндотелиального экстрацеллюлярного матрикса зависит от локальных реологических условий в месте повреждения эндотелия [19]. При низких скоростях сдвига (< 1000c-1), присутствующих в венах и крупных артериях, возможно непосредственные связывание тромбоцитов с коллагеном, фибронектином и ламинином. При высоких скоростях сдвига (>1000c-1), как в капиллярах, мелких артериях, а также сосудах, пораженных атеросклерозом, критическое значение имеет взаимодействие поверхностного гликопротеина GP1ba на тромбоцитах и фактора Виллебранда [19]. Это взаимодействие позволяет «замедлить» тромбоциты, быстро перемещающиеся в потоке крови и делает возможным дальнейшее взаимодействие других рецепторов и лигандов, результатом которого является статическая адгезия тромбоцитов [4]. Фактор Виллебранда представляет собой мультимерный гликопротеин, синтезируемый эндотелиальными клетками и мегакариоцитами [20]. В сайтах повреждения эндотелия фактор Виллебранда, циркулирующий в кровотоке, связывается с волокнами коллагена посредством своих коллаген-связывающих доменов А1 и А3. После иммобилизации фактора Виллебранда на коллагене в условиях высоких скоростей сдвига происходит изменение конформации А1 домена фактора Виллебранда, вследствие чего оказывается доступным участок связывания с рецептором GPlba на тромбоцитах. GP1ba является частью комплекса GPIb/IX/V на поверхности тромбоцитов [21]. Связывание фактора Виллебранда с GPIb приводит не

только к «замедлению» движения тромбоцитов в кровотоке, но и к активации тирозинкиназного сигнального каскада [19], стимуляции кальциевой сигнализации, активации протеинкиназы С и протеинкиназы G, фосфоинозитид-3-киназы и запуску перестройки цитоскелета. Также были описаны прямые взаимодействия комплекса ОР1Ь/1Х/У с цитоскелетом [22, 23].

Важность взаимодействиях фактора Виллебранда и его рецептора на тромбоцитах в первичном гемостазе демонстрируется наличием значимых проявлений клинической кровоточивости у пациентов с наследственными дефицитами обоих компонентов (болезнь Виллебранда и синдром Бернара-Сулье, соответственно) [19]. Отсутствие или снижении экспрессии комплекса ОР1Ь/1Х/У, обусловленное мутациями в генах ОР1БЛ, ОР1ББ или ОР9, лежит в основе синдрома Бернара-Сулье, аутосомно-рецессивного расстройства, характеризующегося умеренной тромбоцитопенией, гигантскими размерами тромбоцитов и, в части случаев, тяжелым геморрагическим фенотипом [4, 24, 25]. Макротромбоцитопения и уменьшение экспрессии на тромбоцитах ОР1Ь/1Х/У также характерны для велокардифациальноо синдрома (синдрома ДиДжоржи), причиной которого является хромосомная делеция 22q11.2, вовлекающая ген ОР1ББ [26]. Напротив, §ат-оГ-Шпс1;юп («с повышенной функцией») мутации в гене ОР1БЛ ассоциированы с тромбоцитарным типом болезни Виллебранда, очень редким аутосомно-доминантным расстройством с кровоточивостью различной тяжести, при котором гликопротеину ОР1Ьа свойственна повышенная аффинность к фактору Виллебранда [27, 28].

Коллаген является одним из самых сильных медиаторов адгезии тромбоцитов, однако взаимодействие тромбоцитов с коллагеном не только обеспечивает адгезию тромбоцитов, но и является стимулом для их активации [4]. На поверхности тромбоцитов находятся два рецептора коллагена: интегрин а2в1 и гликопротеин ОР1У [19, 29]. Интегрин а2в1 функционирует в первую очередь как «якорь» для прикрепления тромбоцитов к коллагеновым волокнам на участках повреждения сосудистого эндотелия. Рецептор ОР1У в большей степени ответственен за коллаген-индуцированную агрегацию и секрецию тромбоцитов, хотя при низких скоростях сдвига также может выполнять и «якорную» функцию [30, 31]. Дефекты ОРУ1 и а2$1 были описаны у небольшого числа пациентов с умеренными проявлениями кровоточивости, нормальным числом и морфологией тромбоцитов или умеренной макротромбоцитопенией [31, 32].

На поверхности тромбоцитов находится еще ряд интегринов, способных взаимодействовать с белками экстрацеллюлярного матрикса: аУРэ (связывается с витронектином), а5в1 (связывается с фибронектином), абв1 (связывается с ламинином). Все

эти интегрины имеют низкую плотность экспрессии на поверхности тромбоцитов, и их роль в физиологии тромбоцитов до сих пор мало изучена [19].

1.1.2. Активация тромбоцитов «снаружи внутрь» (outside-in) Как и клетки других типов, тромбоциты могут быть активированы с помощью различных сигнальных путей, в том числе с помощью каскада тирозинкиназ [19].

После связывания со своим лигандом гликопротеин GPIb осуществляет дальнейшую передачу сигнала посредством тирозинкиназ семейства Src и, в меньшей степени, благодаря ассоциации с ITAM-содержащими субъединицами (immunoreceptor tyrosine-based activation motif). Итогом этих взаимодействий становится фосфорилирование и активация фосфолипазы Су2 (PLCy2) [33]. Гликопротеин GPIV, коллагеновый рецептор, находится в нековалентной ассоциации с ITAM-несущим Fc-рецептором. Связывание GPIV c коллагеном приводит к активации тирозинкиназного каскада и в итоге с активации PLCy2. Фосфолипаза Су2 является «ключевым игроком» в запуске дальнейших сигнальных процессов, которые в итоге приводят к переходу поверхностных интегринов в их активную конформацию, изменению формы тромбоцитов и секреции гранул [34].

Фосфолипаза С осуществляет разрезание мембранного фосфатидилинозитол-4,5-бифосфата (PIP2), в результате чего образуются инозитол-1,4,5-трифосфат (IP3) и диацилглицерол (DAG), являющиеся вторичными мессенджерами. Синтезированный DAG, в свою очередь, активирует протеинкиназу С, которая фосфорилирует плекстрин, белок необходимый для секреции гранул, изменения конформации интегринов и изменения формы тромбоцитов [35]. IP3 связывается с рецепторами в плотной тубулярной системе и способствует высвобождению секвестрированного кальция в цитоплазму. Ионы кальция представляют собой внутриклеточный вторичный мессенджер, влияющий на активность ферментов и межбелковые взаимодействия. В процессе активации тромбоцитов концентрация внутриклеточного Ca2+ повышается вследствие выброса из плотной тубулярной системы и инфлюкса ионов кальция через внешнюю мембрану тромбоцитов. Выход Ca2+ в цитоплазму способствует активации ферментов, которые обладают низкой активностью при низкой концентрации Ca2+ (в частности, фосфолипазы С, кальпаина, киназы легкой цепи миозина, цитоплазменной фосфолипазы А2) [36, 37].

Адгезия тромбоцитов и ранние активационные сигналы необходимы для образования тромба, однако образование стабильного тромба невозможно без привлечения к месту повреждения сосудистой стенки дополнительных тромбоцитов и их активации. Рекрутирование и активация дополнительных тромбоцитов реализуются с помощью

дополнительных лиганд-рецепторых взаимодействий, представляющих собой так называемые петли амплификации сигнала [19].

Одним из важнейших агонистов тромбоцитов, реализующих петли амплификации сигнала, является аденозиндифосфат (АДФ). АДФ находится в плотных гранулах тромбоцитов и высвобождается из них в процессе активации тромбоцитов. АДФ взаимодействует с рецепторами P2Y1 и P2Y12 на поверхности тромбоцитов [38]. Связывание АДФ с рецептором P2Y1, сопряженный с G-белком, содержащим aq-субъединицу, стимулирует фосфоинозитидный гидролиз, образование тромбоксана А2, фосфорилирование белков и возрастание концентрации кальция в цитоплазме тромбоцитов. Связывание АДФ с рецептором P2Y12 приводит к ингибированию образования цАМФ. Снижение концентрации цАМФ потенцирует действие других агонистов, поскольку позволяет освободившимся из плотной канальциевой системы ионам кальция оставаться в цитоплазме [39]. Наследственный дефицит рецептора P2Y12 описан в нескольких семьях и представляет собой аутосомно-рецессивное расстройство, характеризующееся умеренными проявлениями кровоточивости и нарушениями агрегации с АДФ [40-42].

Помимо АДФ, в активацию тромбоцитов и амплификацию сигнала вовлечен еще целый ряд лигандов. Тромбоциты несут на своей поверхности несколько трансмембранных рецепторов, сопряженных с G-белками. К их числу относятся рецепторы адреналина, тромбоксана А2, рецепторы тромбина PAR1 и PAR4, рецепторы вазопрессина и серотонина, рецепторы АДФ P2Y1 и P2Y12. Цитоплазменные домены этих рецепторов взаимодействуют с гетеродимерными G-белками. G-белки состоят из ГТФ-связывающей a-субъединицы и Р-у-гетеродимера [19].

Функция G-белка и, соответственно, роль сопряженного с ним поверхностного рецептора зависит от типа (подкласса) a-субъединицы G-белка. Рецепторы, сопряженные с G-белками, содержащими aq-субъединицу, стимулируют фосфоинозитидный гидролиз, осуществляемый фосфолипазой СР (PLCP) наряду с PLCy, активация которой запускается адгезией тромбоцитов. Рецепторы, сопряженные с G-белками, содержащими as-субъединицу, стимулируют образование циклического аденозинмонофосфата (цАМФ), а сопряженные с G-белками, содержащими ai-субъединицу, напротив, ингибируют продукцию цАМФ и кроме того, стимулируют фосфатидилионозитол-3-киназу (PI3Ky) и PLCp. И наконец, G-белки, содержащие атэ-субъединицу, стимулируют сигнальные пути, ведущие к изменению формы активированных тромбоцитов и активации фосфоинозитидный гидролиза [43].

Тромбоксан А2 образуется из арахидоновой кислоты под действием ферментов циклоксигеназы-1 и тромбоксан-синтазы. Тромбоксан А2, будучи однажды синтезированным, диффундирует через мембрану тромбоцитов, вызывает спазм гладкой мускулатуры сосудистой стенки и реализует петлю положительной обратной связи, активируя другие тромбоциты с помощью тромбоксанового рецептора на их поверхности. Этот процесс является сугубо локальным вследствие короткого периода полужизни тромбоксана А2, однако важным для активации тромбоцитов непосредственно в месте повреждения сосудистой стенки [44]. В настоящее время описан наследственный дефект, а также дефекты циклоксигеназы и тромбоксансинтазы тромбоцитов. Предполагается также, что плохо изученные на данный момент нарушения внутриклеточной сигнализации тромбоцитов, включая, дефекты цитоплазменной фосфолипазы А2а (CPLA2 а), фосфолипазы Ср2, протеинкиназы А, дефекты G-белков могут составлять значительную часть НПТ [4].

Второй класс рецепторов, участвующих в амплификации сигнала, представляет собой интегрины, основным из которых является рецептор фибриногена апьРш. После связывания лигандов с интегринами ассоциированные с цитоплазменными «хвостами» интегринов киназы семейства Src запускают не до конца изученную серию процессов, имеющих собирательное название «outside-in» (снаружи внутрь) сигнализации и приводящих в итоге к активации PLCy2 [45, 46].

Третьим классом рецепторов, задействованных в амплификации сигнала, являются рецепторные тирозинкиназы (Axl, Sky, Mer, EphA4, EphABl), которые участвуют в осуществлении inside-out («изнутри наружу») сигнализации, необходимой для перехода интегрина в активную конформацию anbPm, а также активируют PB-киназу, способствуя секреции гранул [47, 48]. Схематично активация тромбоцитов представлена на Рисунке 1.

Рисунок 1. Активация тромбоцитов (по [19] c изменениями). TxA2 - тромбоксан А2, GPCR (G-protein coupled receptors) - рецепторы, сопряженные с G-белками, ФВ - фактор Виллебранда, PLC (phospholipase C) - фосфолипаза С, DAG (diacylglycerol) -диацилглицерол, IP3 (1,4,5-inositol triphosphate) - 1,4,5-инозитолтрифосфат, ПТС - плотная тубулярная система, PKC (proteinkinase C) - протеинкиназа С, RTK (receptor tyrosine kinase) - рецепторные тирозинкиназы, Gas6 - Growth arrest-specific 6 protein.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Федорова Дарья Викторовна, 2020 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Dovlatova, N. Current status and future prospects for platelet function testing in the diagnosi s of inherited bleeding disorders / N. Dovaltova //Br J Haematol. - 2015. - Vol. 170, №2. - p. 150-161.

2. Gresele, P. Diagnosis of inherited platelet function disorders: guidance from the SSC of the ISTH / P. Gresele, Subcommittee on Platelet Physiology of the International Society on Thrombosis and Hemostasis // J Thromb Haemost. - 2015. - Vol. 13, № 2. - p. 314-322

3. Genotyping and phenotyping of platelet function disorders / S.P. Watson, G.C. Lowe, M. Lordkipanidze, N. V. Morgan et al. // J Thromb Haemost. - 2013. - Vol. 11 Suppl 1. - p. 351-363.

4. Gresele, P. Laboratory diagnosis of clinically relevant platelet function disorders / P. Gresele, E.Falcinelli, L.Bury // Int J Lab Hematol. -2018. - Vol. 40 Suppl 1. - p. 34-45.

5. A review of inherited platelet disorders with guidelines for their management on behalf of the UKHCDO / P. H.Bolton-Maggs, E. A. Chalmers, P. W. Collins, P. Harrison, et al. // Br J Haematol. -2006. - Vol. 135, № 5. -p. 603-633.

6. Utility of the ISTH bleeding assessment tool in predicting platelet defects in participants with suspected inherited platelet function disorders / G. C. Lowe, M. Lordkipanidze, S. P. Watson, UK GAPP study group // J Thromb Haemost. - 2013. - Vol. 11, № 9. - p. 16631668.

7. Boender J., A diagnostic approach to mild bleeding disorders/ J. Boender, M. J. Kruip, F. W Leebeek // J Thromb Haemost. - 2016. - Vol. 14, № 8. - p. 1507-1516.

8. Melazzini, F. Bleeding is not the main clinical issue in many patients with inherited thrombocytopaenias / F. Melazzini, C. Zaninetti, C. L. Balduini // Haemophilia. - 2017. -Vol. 23, № 5. - p. 673-681.

9. Misdiagnosis of chronic thrombocytopenia in childhood / B. Bader-Meunier, V. Proulle, C. Trichet, D. Debray // J Pediatr Hematol Oncol. - 2003. - Vol. 25, № 7. - p. 548-552.

10. Moiz, B. BSS misdiagnosed as ITP / B. Moiz, A. Rashid // Blood. -2013. - Vol. 122, № 10. - p. 1693.

11. Althaus, K. MYH9-related platelet disorders / K. Althaus, A. Greinacher // Semin Thromb Hemost. - 2009. - Vol. 35, № 2. - p. 189-203.

12. Hereditary Myelodysplastic Syndrome and Acute Myeloid Leukemia: Diagnosis, Questions, and Controversies / I. J. Akpan, A. E. G. Osman., M. W. Drazer, L. A. Godley // Curr Hematol Malig Rep. - 2018. - Vol. 13, № 6. - p. 426-434.

13. Galera, P. Inherited thrombocytopenia and platelet disorders with germline predisposition to myeloid neoplasia /P. Galera, A. Dulau-Florea, K. R. Calvo // Int J Lab Hematol. -2019. - Vol. 41 Suppl 1. - p. 131-141.

14. University of Chicago Hematopoietic Malignancies Cancer Risk Team. How I diagnose and manage individuals at risk for inherited myeloid malignancies / University of Chicago Hematopoietic Malignancies Cancer Risk Team // Blood. -2016. - Vol. 128, № 14. - p. 1800-1813.

15. Identifying Inherited and Acquired Genetic Factors Involved in Poor Stem Cell Mobilization and Donor-Derived Malignancy / K. Rojek, E. Nickels, B. Neistadt, R. Marquez// Biol Blood Marrow Transplant. -2016. - Vol. 22, № 11. -p. 2100-2103.

16. Jackson, S. P. The growing complexity of platelet aggregation / S. P. Jackson // Blood. -2007. - Vol. 109, № 12. - p. 5087-5095.

17. Полохов, ДМ. Современные подходы в лабораторной диагностике тромбоцитарного гемостаза / Д.М. Полохов, М.А. Пантелеев // Гематология. Трансфузиология. Восточная Европа. - 2016. - №2. - с. 270-290.

18. Coller, B. S. The GPIIb/IIIa (integrin alphaIIbbeta3) odyssey: a technology-driven saga of a receptor with twists, turns, and even a bend / B.S. Coller, S. J. Shattil // Blood. - 2008. -Vol. 112, № 8. - p. 3011-3025.

19. Platelets at work in primary hemostasis / K. Broos, H. B. Feys, S. F. De Meyer., K. Vanhoorelbeke, et al. // Blood Rev. - 2011. - Vol. 25, № 4. - p. 155-167.

20. Von Willebrand factor: drug and drug target / S. F. De Meyer, B. De Maeyer, H. Deckmyn, K. Vanhoorelbeke // Cardiovasc Hematol Disord Drug Targets. -2009. - Vol. 9, № 1. - p. 9-20.

21. Of von Willebrand factor and platelets / M. Bryckaert, J. P. Rosa, C. V. Denis, P. J. Lenting // Cell Mol Life Sci. - 2015. - Vol. 72, № 2. -p. 307-326.

22. Syk Activity Is Dispensable for Platelet GP1b-IX-V Signaling / R. Badolia, J. C. Kostyak, C. Dangelmaier, S. P. Kunapuli // Int J Mol Sci. - 2017. - Vol. 18, № 6. - e1238.

23. GPIbalpha-selective activation of platelets induces platelet signaling events comparable to GPVI activation events / E. E. Gardiner, J. F. Arthur, Y. Shen, D. Karunakaran, et al. // Platelets. - 2010. - Vol. 21, № 4. -p. 244-252.

24. Особенности диагностики синдрома Бернара-Сулье / М.А. Кумскова, О.И. Яструбинецкая, Е.А. Лихачева, С.А. Васильев и др. // Гематология и трансфузиология. - 2016. - № 4. - с. 217-221.

25. Andrews, R. K. Bernard-Soulier syndrome: an update / R. K. Andrews, M. C. Berndt // Semin Thromb Hemost. - 2013. - Vol. 39, № 6. - c. 656-662.

26

27

28

29

30

31

32

33

34

35

36

37

38

39

The 22q11.2 deletion syndrome: Cancer predisposition, platelet abnormalities and cytopenias / M. P. Lambert, A. Arulselvan, A. Schott, S. J. Markham, et al. // Am J Med Genet A. -2018. - Vol. 176, № 10. - p. 2121-2127.

Mechanisms of thrombocytopenia in platelet-type von Willebrand disease / L. Bury, A. Malara, S. Momi, E. Petito, et al. // Haematologica. - 2019. - Vol. 104, № 7. - p. 14731481.

Othman, M. Platelet-type von Willebrand disease: new insights into the molecular pathophysiology of a unique platelet defect / M. Othman, H. Kaur, J. Emsley // Semin Thromb Hemost. - 2013. - Vol. 39, № 6. - p. 663-673.

Clemetson, K. J. Platelet collagen receptors / K.J. Clemetson, J. M. Clemetson // Thromb Haemost. - 2001. - Vol. 86, № 1. - p. 189-197.

Madamanchi, A. Alpha2beta1 Integrin / A. Madamanchi, S. A. Santoro, M. M. Zutter // Adv Exp Med Biol. - 2014. - Vol. 819. - p. 41-60.

Nurden, A. T. Clinical significance of altered collagen-receptor functioning in platelets with emphasis on glycoprotein VI / A.T. Nurden // Blood Rev. - 2019. - Vol. 38. - p. 100592.

Arthur, J. F. Platelet glycoprotein Vl-related clinical defects / J.F. Arthur, S. Dunkley, R.

K. Andrews // Br J Haematol. - 2007. - Vol. 139, № 3. - p. 363-372.

Jackson, S. P. Signaling events underlying thrombus formation / S.P. Jackson, W. S.

Nesbitt, S. Kulkarni // J Thromb Haemost. - 2003. - Vol. 1, № 7. -p. 1602-1612.

Chen, H. Reciprocal signaling by integrin and nonintegrin receptors during collagen

activation of platelets / H. Chen, M. L. Kahn // Mol Cell Biol. - 2003. - Vol. 23, № 14. - p.

4764-4777.

Loss of pleckstrin defines a novel pathway for PKC-mediated exocytosis /L. Lian, Y. Wang, M. Flick, J. Choi, et al.// Blood. - 2009. - Vol. 113, № 15. - p. 3577-3584. Dolan, A. T. Systems modeling of Ca(2+) homeostasis and mobilization in platelets mediated by IP3 and store-operated Ca(2+) entry / A.T. Dolan, S. L. Diamond // Biophys J. - 2014. - Vol. 106, № 9. - p. 2049-2060.

Varga-Szabo, D. Calcium signaling in platelets / D. Varga-Szabo, A. Braun, B. Nieswandt // J Thromb Haemost. - 2009. - Vol. 7, № 7. - p. 1057-1066.

Murugappan, S. Platelet receptors for adenine nucleotides and thromboxane A2 / S. Murugappan, H. Shankar, S. P. Kunapuli // Semin Thromb Hemost. -2004. - Vol. 30, № 4. - p. 411-418.

Platelet purinergic receptors / S. P. Kunapuli, R. T. Dorsam, S. Kim, T. M. Quinton // Curr Opin Pharmacol. - 2003. - Vol. 3, № 2. - p. 175-180.

40. Identification of a new dysfunctional platelet P2Y12 receptor variant associated with bleeding diathesis / A. Lecchi, C. Razzari, S. Paoletta, A. Dupuis, et al. // Blood. - 2015. -Vol. 125, № 6. - p. 1006-1013.

41. Receptor homodimerization plays a critical role in a novel dominant negative P2RY12 variant identified in a family with severe bleeding / S. J. Mundell, D. Rabbolini, S. Gabrielli, Q. Chen, et al. // J Thromb Haemost. - 2018. - Vol. 16, № 1. - p. 44-53.

42. Inherited dysfunctional platelet P2Y12 receptor mutations associated with bleeding disorders / A. Lecchi, E. A. Femia, S. Paoletta, A. Dupuis, et al. // Hamostaseologie. - 2016.

- Vol. 36, № 4. -p. 279-283.

43. Offermanns, S. The role of heterotrimeric G proteins in platelet activation / S. Offermanns // Biol Chem. - 2000. - Vol. 381, № 5-6. - p. 389-396.

44. Eicosanoids in platelets and the effect of their modulation by aspirin in the cardiovascular system (and beyond) / M. Crescente, L. Menke, M. V. Chan, P. C. Armstrong, et al. // Br J Pharmacol. - 2019. - Vol. 176, № 8. - p. 988-999.

45. Durrant, T. N. Integrin alphaIIbbeta3 outside-in signaling / T.N. Durrant, M. T. van den Bosch, I. Hers // Blood. - 2017. - Vol. 130, № 14. -p. 1607-1619.

46. Shattil, S. J. Integrins: dynamic scaffolds for adhesion and signaling in platelets / S. J.Shattil, P. J. Newman // Blood. - 2004. - Vol. 104, № 6. -p. 1606-1615.

47. Growth arrest specific gene (GAS) 6 modulates platelet thrombus formation and vascular wall homeostasis and represents an attractive drug target / A. O. Maree, H. Jneid, I. F. Palacios, K. Rosenfield, et al. // Curr Pharm Des. - 2007. -Vol. 13, № 26. -p. 2656-2661.

48. Eph kinases and ephrins support thrombus growth and stability by regulating integrin outside-in signaling in platelets / N. Prevost, D. S. Woulfe, H. Jiang, T. J. Stalker, et al. // Proc Natl Acad Sci U S A. - 2005. - Vol. 102, № 28. -p. 9820-9825.

49. Stefanini, L. CalDAG-GEFI and platelet activation / L. Stefanini, W. Bergmeier // Platelets. - 2010. -Vol. 21, № 4. -p. 239-243.

50. A structural mechanism of integrin alpha(IIb)beta(3) "inside-out" activation as regulated by its cytoplasmic face / O. Vinogradova, A. Velyvis, A. Velyviene, B. Hu, et al. // Cell. -2002. - Vol. 110, № 5. - p. 587-597.

51. Rognoni, E. The kindlin family: functions, signaling properties and implications for human disease / E. Rognoni, R. Ruppert, R. Fassler // J Cell Sci. -2016. - Vol. 129, № 1. - p. 1727.

52. Human CalDAG-GEFI gene (RASGRP2) mutation affects platelet function and causes severe bleeding / M. Canault, D. Ghalloussi, C. Grosdidier, M. Guinier, et al. // J Exp Med.

- 2014. - Vol. 211, № 7. - p. 1349-1362.

53

54

55

56

57

58

59

60

61

62

63

64

65

66

Chen, Y. Sorting machineries: how platelet-dense granules differ from alpha-granules / Y. Chen, Y. Yuan, W. Li// Biosci Rep. - 2018. - Vol. 38, № 5.

Rendu, F. The platelet release reaction: granules' constituents, secretion and functions / F.

Rendu, B. Brohard-Bohn // Platelets. - 2001. -Vol. 12, № 5. -p. 261-273.

Yadav, S. The cellular basis of platelet secretion: Emerging structure/function relationships

/ S. Yadav, B. Storrie // Platelets. - 2017. - Vol. 28, № 2. - p. 108-118.

Nurden, A. T. Should any genetic defect affecting alpha-granules in platelets be classified

as gray platelet syndrome? / A.T. Nurden, P. Nurden // Am J Hematol. - 2016. - Vol. 91,

№ 7. -p. 714-718.

The road to lysosome-related organelles: Insights from Hermansky-Pudlak syndrome and other rare diseases / S. L. Bowman, J. Bi-Karchin, L. Le, M. S. Marks // Traffic. - 2019. -Vol. 20, № 6. -p. 404-435.

Синдром Германского-Пудлака: особенности дифференциальной диагностики / Демина И.А., Зозуля Н.И., Лихачева Е.А., Васильев С.А. и др. // Гематология и трансфузиология. - 2015. - № 4. - с. 41-44.

Kaplan, J. Chediak-Higashi syndrome / J. Kaplan, I. De Domenico, D. M. Ward // Curr Opin Hematol. - 2008. - Vol. 15, № 1. - p. 22-29.

Cerecedo, D. Platelet cytoskeleton and its hemostatic role / D. Cerecedo // Blood Coagul Fibrinolysis. - 2013. - Vol. 24, № 8. -p. 798-808.

Bearer, E. L. The role of the cytoskeleton in the life cycle of viruses and intracellular

bacteria: tracks, motors, and polymerization machines / E.L. Bearer, P. Satpute-Krishnan

// Curr Drug Targets Infect Disord. - 2002. - Vol. 2, № 3. - p. 247-264.

Tubulin in Platelets: When the Shape Matters / E. J. Cuenca-Zamora, F. Ferrer-Marin, J.

Rivera, R. Teruel-Montoya // Int J Mol Sci. - 2019. - Vol. 20, № 14.

Visualization of microtubule growth in living platelets reveals a dynamic marginal band

with multiple microtubules / S. Patel-Hett , J. L. Richardson, H. Schulze, K. Drabek, et al.

// Blood. -- 2008. - Vol. 111, № 9. -p. 4605-4616.

Sadoul, K. New explanations for old observations: marginal band coiling during platelet activation / K. Sadoul // J Thromb Haemost. - 2015. - Vol. 13, № 3. - p. 333-346. Noris, P. Hereditary thrombocytopenias: a growing list of disorders / P. Noris, A. Pecci // Hematology Am Soc Hematol Educ Program. - 2017. - Vol. 2017, № 1. - p. 385-399. Sereni, L. Platelets in Wiskott-Aldrich syndrome: Victims or executioners? / L. Sereni, M.C. Castiello, A. Villa // J Leukoc Biol. - 2018. - Vol. 103, № 3. -p. 577-590.

67. CalDAG-GEFI integrates signaling for platelet aggregation and thrombus formation / J. R. Crittenden, W. Bergmeier, Y. Zhang, C. L. Piffath,et al. // Nat Med. - 2004. -Vol. 10, № 9.

- p. 982-986.

68. Kindlin supports platelet integrin alphaIIbbeta3 activation by interacting with paxillin / J. Gao, M. Huang, J. Lai, K. Mao, et al. // J Cell Sci. - 2017. - Vol. 130, № 21. - p. 37643775.

69. Reconstructing and deconstructing agonist-induced activation of integrin alphaIIbbeta3 / J. Han, C. J. Lim, N. Watanabe, A. Soriani, et al.// Curr Biol. - 2006. - Vol. 16, № 18. -p. 1796-1806.

70. Talin binding to integrin beta tails: a final common step in integrin activation / S. Tadokoro, S. J. Shattil, K. Eto, V. Tai, et al. // Science. - 2003. - Vol. 302, № 5642. -p. 103-106.

71. Cytoskeletal perturbation leads to platelet dysfunction and thrombocytopenia in variant forms of Glanzmann thrombasthenia / L. Bury, E. Falcinelli, D. Chiasserini, T. A. Springer, et al. // Haematologica. - 2016. - Vol. 101, № 1. -p. 46-56.

72. Abnormal cytoplasmic extensions associated with active alphaIIbbeta3 are probably the cause for macrothrombocytopenia in Glanzmann thrombasthenia-like syndrome / H. Hauschner, R. Mor-Coher, S. Messineo, W. Mansour, et al. // Blood Coagul Fibrinolysis.

- 2015. - Vol. 26, № 3. - p. 302-308.

73. van Geffen, J. P. Platelets and coagulation in thrombus formation: aberrations in the Scott syndrome / J.P. van Geffen, Swieringa F., Heemskerk J. W. // Thromb Res. - 2016. - Vol. 141 Suppl 2. - p. S12-6.

74. Lacruz, R. S. Diseases caused by mutations in ORAI1 and STIM1 / R. S. Lacruz, S. Feske// Ann N Y Acad Sci. - 2015. - Vol. 1356. -p. 45-79.

75. A dominant STIM1 mutation causes Stormorken syndrome / D. Misceo, A. Holmgren, W. E. Louch, P. A. Holme, et al.// Hum Mutat. - 2014. -Vol. 35, № 5. - p. 556-564.

76. Демина, И.А. Тромбоцитопатии / И.А. Демина, М.А. Кумскова, М.А. Пантелеев // Российский журнал детской гематологии и онкологии (РЖДГиО). - 2015. - № 1. - с. 54-60.

77. TUBB1 mutation disrupting microtubule assembly impairs proplatelet formation and results in congenital macrothrombocytopenia / S. Kunishima, S. Nishimura, H. Suzuki, M. Imaizumi, et al. // Eur J Haematol. - 2014. - Vol. 92, № 4. - p. 276-282.

78. Mutations in tropomyosin 4 underlie a rare form of human macrothrombocytopenia / I. Pleines, J. Woods, S. Chappaz, V. Kew, et al. // J Clin Invest. - 2017. - Vol. 127, № 3. -p. 814-829.

79. Defects in TRPM7 channel function deregulate thrombopoiesis through altered cellular Mg(2+) homeostasis and cytoskeletal architecture / S. Stritt, P. Nurden, R. Favier, M. Favier, et al.// Nat Commun. - 2016. - Vol. 7. -p. 11097.

80. A gain-of-function variant in DIAPH1 causes dominant macrothrombocytopenia and hearing loss / S. Stritt, P. Nurden, E. Turro, D. Greene, et al. // Blood. - 2016. -Vol. 127, № 23.-p. 2903-2914.

81. Expanded repertoire of RASGRP2 variants responsible for platelet dysfunction and severe bleeding / S. K. Westbury, M. Canault, D. Greene, E. Bermejo, et al. // Blood. - 2017. -Vol. 130, № 8. -p. 1026-1030.

82. ACTN1-related Macrothrombocytopenia: A Novel Entity in the Progressing Field of Pediatric Thrombocytopenia / H. Boutroux, B. David, P. Gueguen, P. Frange,et al. // J Pediatr Hematol Oncol. - 2017. -Vol. 39, № 8. - e515-518.

83 Harris, E. S. Lessons from rare maladies: leukocyte adhesion deficiency syndromes / E.S. Harris, A. S. Weyrich, G. A. Zimmerman // Curr Opin Hematol. - 2013. -Vol. 20, № 1. -p. 16-25.

84. Novel integrin-dependent platelet malfunction in siblings with leukocyte adhesion deficiency-III (LAD-III) caused by a point mutation in FERMT3 / K. Jurk, A. S. Schulz, B. E. Kehrel, D. Rapple, et al. // Thromb Haemost. -2010. -Vol. 103, № 5. -p. 1053-1064.

85. Thrombocytopenia and CD34 expression is decoupled from alpha-granule deficiency with mutation of the first growth factor-independent 1B zinc finger / D. J. Rabbolini, M. C. Morel-Kopp, Q. Chen, S. Gabrielli, et al. // J Thromb Haemost. - 2017. -Vol. 15, № 11. -p. 2245-2258.

86. Macrothrombocytopenia and dense granule deficiency associated with FLI1 variants: ultrastructural and pathogenic features / P. Saultier, L. Vidal, M. Canault, D. Bernot, et al. // Haematologica. - 2017. - Vol. 102, № 6. - p. 1006-1016.

87. Falet, H. Singling out FLI1 in Paris-Trousseau syndrome / H. Falet // Blood. -2017. - Vol. 129, № 26. - p. 3399-3401.

88. A novel GFI1B mutation at the first zinc finger domain causes congenital macrothrombocytopenia / Y. Uchiyama, Y. Ogawa, S. Kunishima, M. Shiina, et al. // Br J Haematol. - 2018. - Vol. 181, № 6. - p. 843-847.

89. A dominant gain-of-function mutation in universal tyrosine kinase SRC causes thrombocytopenia, myelofibrosis, bleeding, and bone pathologies / E. Turro, D. Greene, A. Wijgaerts, C. Thys, et al. // Sci Transl Med. - 2016. - Vol. 8, № 328. - p. 328-330.

90. A new form of macrothrombocytopenia induced by a germ-line mutation in the PRKACG gene / V. T. Manchev, M. Hilpert, E. Berrou, Z. Elaib, et al. // Blood. - 2014. - Vol. 124, № 16. --p. 2554-2563.

91. SLFN14 gene mutations associated with bleeding / R. J. Stapley, V. P. Pisareva, A. V. Pisarev, N. V. Morgan // Platelets. - 2019. - e. 1-4.

92. Balduini, C. L. Mean platelet volume for distinguishing between inherited thrombocytopenias and immune thrombocytopenia--response to Beyan / C. L. Balduini, P. Noris // Br J Haematol. - 2013. - Vol. 163, № 3. - p. 413-414.

93. Platelet diameters in inherited thrombocytopenias: analysis of 376 patients with all known disorders / P. Noris, G. Biino, A. Pecci, E. Civaschi, et al.// Blood. - 2014. - Vol. 124, № 6. - e4-e10.

94. Greinacher, A. Simplifying the diagnosis of inherited platelet disorders? The new tools do not make it any easier / A. Greinacher, J. J. M. Eekels // Blood. - 2019. - Vol. 133, № 23.

- p. 2478-2483.

95. Аксенова, М.Е. Тромбоцитопения, ассоциированная с мутацией в гене MYH9: этиология, патогенез, клинические проявления, терапия / М.Е. Аксенова, Е.В. Сунцова // Педиатрия. Журнал им. Г.Н.Сперанского. - 2019. - № 5. - с. 79-84.

96. MECOM-associated syndrome: a heterogeneous inherited bone marrow failure syndrome with amegakaryocytic thrombocytopenia / M. Germeshausen, P. Ancliff, J. Estrada, M. Metzler, et al. // Blood Adv. - 2018. - Vol. 2, № 6. - p. 586-596.

97. Khincha, P. P. Neonatal manifestations of inherited bone marrow failure syndromes / P.P. Khincha, S. A. Savage // Semin Fetal Neonatal Med. - 2016. - Vol. 21, № 1. - p. 57-65.

98. Thrombopoietin mutation in congenital amegakaryocytic thrombocytopenia treatable with romiplostim / A. Pecci, I. Ragab, V. Bozzi, D. De Rocco, et al. // EMBO Mol Med. - 2018.

- Vol. 10, № 1. - p. 63-75.

99. Expanding the phenotypic and genetic spectrum of radioulnar synostosis associated hematological disease / A. Walne, H. Tummala, A. Ellison, S. Cardoso, et al. // Haematologica. - 2018. -Vol. 103, № 7. - e.284-287.

100. NBEAL2 mutations and bleeding in patients with gray platelet syndrome / F. G. Pluthero, J. Di Paola, M. D. Carcao, W. H. A. Kahr // Platelets. - 2018. - Vol. 29, № 6. - p. 632-635.

101. Thrombocytopenia-associated mutations in the ANKRD26 regulatory region induce MAPK hyperactivation / D. Bluteau, A. Balduini, N. Balayn, M. Currao, et al. // J Clin Invest. - 2014. - Vol. 124, № 2. - p. 580-591.

102. Germline mutations in ETV6 are associated with thrombocytopenia, red cell macrocytosis and predisposition to lymphoblastic leukemia / L. Noetzli, R. W. Lo, A. B. Lee-Sherick, M. Callaghan, et al.// Nat Genet. - 2015. -Vol. 47, № 5. - p. 535-538.

103. Schlegelberger, B. RUNX1 deficiency (familial platelet disorder with predisposition to myeloid leukemia, FPDMM) / B. Schlegelberger, P. G. Heller // Semin Hematol. - 2017. -Vol. 54, № 2. - p. 75-80.

104. Renin-angiotensin system blockade is effective in reducing proteinuria of patients with progressive nephropathy caused by MYH9 mutations (Fechtner-Epstein syndrome) / A. Pecci, A. Granata, C. E. Fiore, C. L. Balduini // Nephrol Dial Transplant. - 2008. - Vol. 23, № 8. - p. 2690-2692.

105. Шитикова, А.С. Тромбоцитопатии, врожденные и приобретенные. Под ред. Л.П. Папаян, О.Г. Головиной. /Шитикова А.С. - СПб., 2008. - 320с.

106. Пшеничная, К.И. Клинические проявления геморрагического синдрома у детей с наследственными тромбоцитопатиями / К.И. Пшеничная, Т.А. Мельникова // Педиатрия. Журнал им. Г.Н.Сперанского. - 2002. - № 2. - с. 48-54.

107. Quiroga, T. Is my patient a bleeder? A diagnostic framework for mild bleeding disorders / T. Quiroga, D. Mezzano // Hematology Am Soc Hematol Educ Program. - 2012. - Vol. 2012. -p. 466-474.

108. Quebec platelet disorder: update on pathogenesis, diagnosis, and treatment / J. Blavignac, N. Bunimov, G. E. Rivard, C. P. Hayward // Semin Thromb Hemost. - 2011. - Vol. 37, № 6. - p. 713-720.

109. Hayward, C. P. Quebec platelet disorder / C. P. Hayward, G. E. Rivard // Expert Rev Hematol. - 2011. - Vol. 4, № 2. - p. 137-141.

110. Brennan, Y. Acquired platelet function disorders / Y. Brennan, M. Levade, C. M. Ward // Thromb Res. - 2019.

111. Casari, C. Acquired platelet disorders / C. Casari, W. Bergmeier // Thromb Res. - 2016. -Vol. 141 Suppl 2. - p. S73-5.

112. Konkle, B. A. Acquired disorders of platelet function / B. A. Konkle // Hematology Am Soc Hematol Educ Program. -2011. -Vol. 2011. - p. 391-396.

113. A unique phenotype of acquired Glanzmann thrombasthenia due to non-function-blocking anti-alphaIIbbeta3 autoantibodies / K. Akuta, H. Kashiwagi, T. Yujiri, N. Nishiura, et al. // J Thromb Haemost. - 2019. - Vol. 17, № 1. - p. 206-219.

114. Rituximab for treatment of autoimmune acquired platelet function disorders: description of two cases of acquired Glanzmann thrombasthenia and one case of acquired delta storage

pool disease / M. A. Alberelli, M. Bacci, M. Marchetti, P. Ferrazzi, et al. // Br J Haematol. - 2019.

115. The successful use of plasma exchange and immunosuppression in the management of acquired Glanzmann's thrombasthenia / R. V. Thomas, H. Bessos, M. L. Turner, E. H. Horn, et al. // Br J Haematol. - 2002. -Vol. 119, № 3. -p. 878-880.

116. Acquired delta-storage pool deficiency associated with idiopathic myelofibrosis / S. Mouly, T. Youssefian, F. Souni, E. Cramer, et al.// Leuk Lymphoma. - 2000. -Vol. 37, № 5-6. -p. 623-627.

117. Hereditary Hemorrhagic Telangiectasia / T. Kuhnel, K. Wirsching, W. Wohlgemuth, A. Chavan, et al. // Otolaryngol Clin North Am. - 2018. - Vol. 51, № 1. -p. 237-254.

118. Ghali, N. Ehlers-Danlos syndromes / N. Ghali, G. Sobey, N. Burrows // BMJ. - 2019. -Vol. 366. -p. l4966.

119. O'Brien, S. H. An update on pediatric bleeding disorders: bleeding scores, benign joint hypermobility, and platelet function testing in the evaluation of the child with bleeding symptoms / S. H. O'Brien // Am J Hematol. - 2012. -Vol. 87 Suppl 1. -p. S40-44.

120. O'Brien, S. H. Bleeding scores: are they really useful? / S. H. O'Brien // Hematology Am Soc Hematol Educ Program. - 2012. -Vol. 2012. - p. 152-156.

121. Mezzano, D. Diagnostic challenges of inherited mild bleeding disorders: a bait for poorly explored clinical and basic research / D. Mezzano, T. Quiroga // J Thromb Haemost. -2019. - Vol. 17, № 2. -p. 257-270.

122. Bleeding/bruising symptomatology in children with and without bleeding disorders / B. Nosek-Cenkowska, M. S. Cheang, N. J. Pizzi, E. D. Israels, et al. // Thromb Haemost. -1991. -Vol. 65, № 3. - p. 237-241.

123. Bleeding disorders among young women: a population-based prevalence study / B. Friberg, A. K. Orno, A. Lindgren, S. Lethagen // Acta Obstet Gynecol Scand. - 2006. -Vol. 85, № 2. - p. 200-206.

124. Impact of sex, age, race, ethnicity and aspirin use on bleeding symptoms in healthy adults / A. C. Mauer, N. A. Khazanov, N. Levenkova, S. Tian, et al. // J Thromb Haemost. - 2011. -Vol. 9, № 1. - p. 100-108.

125. High prevalence of bleeders of unknown cause among patients with inherited mucocutaneous bleeding. A prospective study of 280 patients and 299 controls / T. Quiroga, M. Goycoolea, O. Panes, E. Aranda, et al. // Haematologica. -2007. - Vol. 92, № 3. -p. 357-365.

126. The discriminant power of bleeding history for the diagnosis of type 1 von Willebrand disease: an international, multicenter study / F. Rodeghiero, G. Castaman, A. Tosetto, J. Batlle, et al. // J Thromb Haemost. - 2005. - Vol. 3, № 12. - p. 2619-2626.

127. Evaluation of the diagnostic utility for von Willebrand disease of a pediatric bleeding questionnaire / M. Bowman, J. Riddel, M. L. Rand, A. Tosetto, et al. // J Thromb Haemost. - 2009. - Vol. 7, № 8. - p. 1418-1421.

128. ISTH/SSC bleeding assessment tool: a standardized questionnaire and a proposal for a new bleeding score for inherited bleeding disorders / F. Rodeghiero, A. Tosetto, T. Abshire, D M. Arnold, et al. // J Thromb Haemost. - 2010. - Vol. 8, № 9. - p. 2063-2065.

129. Normal range of bleeding scores for the ISTH-BAT: adult and pediatric data from the merging project / M. Elbatarny, S. Mollah, J. Grabell, S. Bae, et al // Haemophilia. - 2014. -Vol. 20, № 6. - p. 831-835.

130. Prospective evaluation of a pediatric bleeding questionnaire and the ISTH bleeding assessment tool in children and parents in routine clinical practice / C. Bidlingmaier, V. Grote, U. Budde, M. Olivieri, et al. // J Thromb Haemost. - 2012. - Vol. 10, № 7. - p. 13351341.

131. A comparison between two semi-quantitative bleeding scales for the diagnosis and assessment of bleeding severity in type 1 von Willebrand disease / A. Tosetto, F. Rodeghiero, G. Castaman, A. Goodeve, et al. // Haemophilia. - 2011. -Vol. 17, № 1. - p. 165-166.

132. Use of a quantitative pediatric bleeding questionnaire to assess mucocutaneous bleeding symptoms in children with a platelet function disorder / T. T. Biss, V. S. Blanchette, D. S. Clark, C. D. Wakefield, et al. // J Thromb Haemost. - 2010. - Vol. 8, № 6. - p. 1416-1419.

133. Quantitation of bleeding symptoms in a national registry of patients with inherited platelet disorders / S. Revel-Vilk, C. Richter, T. Ben-Ami, J. Yacobovich, et al. // Blood Cells Mol Dis. - 2017. - Vol. 67. - p. 59-62.

134. The utility of International Society on Thrombosis and Haemostasis-Bleeding Assessment Tool and other bleeding questionnaires in assessing the bleeding phenotype in two platelet function defects / H. Kaur, M. Borhany, H. Azzam, C. Costa-Lima, et al. // Blood Coagul Fibrinolysis. - 2016. - Vol. 27, № 5. - p. 589-593.

135. Use of ISTH bleeding assessment tool to predict inherited platelet dysfunction in resource constrained settings / A. Rashid, B. Moiz, F. Karim, M. S. Shaikh, et al. // Scand J Clin Lab Invest. - 2016. - Vol. 76, № 5. - p. 373-378.

136. Diagnostic utility of the ISTH bleeding assessment tool in patients with suspected platelet function disorders / M. Adler, J. Kaufmann, L. Alberio, M. Nagler // J Thromb Haemost. -2019. - Vol. 17, № 7. - p. 1104-1112.

137. Balduini, C. L. Diagnosis and management of inherited thrombocytopenias / C. L. Balduini, A. Pecci, P. Noris // Semin Thromb Hemost. - 2013. - Vol. 39, № 2. - p. 161171.

138. Семейная тромбоцитопения/тромбоцитопатия с предрасположенностью к развитию острого миелоидного лейкоза: описание новой семьи и мутации в гене RUNX1 / В.О. Бобрынина, О.Ю. Баранова, Е.В. Самочатова, А.А. Масчан // Онкогематология. -2011. - № 4. - с. 6-12.

139. Случай редкой наследственной тромбоцитопении с предрасположенностью к развитию острого миелоидного лейкоза у детей-близнецов / Ф.Р. Хаджиева, П.А. Жарков, Д.В. Федорова, Е.В. Райкина и др. // Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. - 2018. - № 4. - c. 51-56.

140. Sood, R. Role of RUNX1 in hematological malignancies / R. Sood, Y. Kamikubo, P. Liu // Blood. -- 2017. - Vol. 129, № 15. -c. 2070-2082.

141. Mutations in the 5' UTR of ANKRD26, the ankirin repeat domain 26 gene, cause an autosomal-dominant form of inherited thrombocytopenia, THC2 / T. Pippucci, A. Savoia, S. Perrotta, N.Pujol-Moix, et al. // Am J Hum Genet. - 2011. - Vol. 88, № 1. -p. 115-120.

142. Mutations in ANKRD26 are responsible for a frequent form of inherited thrombocytopenia: analysis of 78 patients from 21 families / P. Noris, S. Perrotta, M. Seri, A. Pecci, et al. // Blood. - 2011. - Vol. 117, № 24. - p. 6673-6680.

143. ANKRD26-related thrombocytopenia and myeloid malignancies / P. Noris, R. Favier, M. C. Alessi, A. E. Geddis, et al. // Blood. - 2013. - Vol. 122, № 11. - p. 1987-1989.

144. Clinical and pathogenic features of ETV6-related thrombocytopenia with predisposition to acute lymphoblastic leukemia / F. Melazzini, F. Palombo, A. Balduini, D. De Rocco, et al. // Haematologica. - 2016. - Vol. 101, № 11. - p. 1333-1342.

145. Hayward, C. P. M. How I investigate for bleeding disorders / C. P. M. Hayward // Int J Lab Hematol. - 2018. - Vol. 40 Suppl 1. - p. 6-14.

146. Nathan and Oski's Hematology and Oncology of Infancy and Childhood, 2-Volume Set, 8th Edition. / S. H. Orkin, D. G. Nathan, D. Ginsburg, A. T. Look, et al. - St. Louis MO, 2015. - 2752 с.

147. Segal, J. B. Platelet counts differ by sex, ethnicity, and age in the United States / J. B. Segal, A. R. Moliterno // Ann Epidemiol. - 2006. -Vol. 16, № 2. - p. 123-130.

148. A novel approach to the assessment of variations in the human platelet count / M. F. Buckley, J. W. James, D. E. Brown, G. S. Whyte, et al.// Thromb Haemost. - 2000. -Vol. 83, № 3. - p. 480-484.

149. Personalized reference intervals for platelet count reduce the number of subjects with unexplained thrombocytopenia / C. Zaninetti, G. Biino, P. Noris, F. Melazzini, et al. // Haematologica. - 2015. - Vol. 100, № 9. - e. 338-340.

150. The critical gap for pediatric reference intervals of complete blood count in China / Y. Lv, G. Feng, X. Ni, W. Song, et al. // Clin Chim Acta. - 2017. -Vol. 469. - p. 22-25.

151. Complete blood count reference intervals for healthy Han Chinese adults / X. Wu, M. Zhao, B. Pan, J. Zhang, et al. // PLoS One. - 2015. -Vol. 10, № 3. - e. 0119669.

152. De novo variant in tyrosine kinase SRC causes thrombocytopenia: case report of a second family / L. De Kock, C. Thys, K. Downes, D. Duarte, et al. // Platelets. - 2019. - Vol. 30, № 7. -p. 931-934.

153. Freson, K. GATA1 gene variants associated with thrombocytopenia and anemia / K. Freson, A. Wijgaerts, C. Van Geet // Platelets. - 2017. -Vol. 28, № 7. - p. 731-734.

154. Duke, W. W. The relation of blood platelets to hemorrhagic disease / W. W. Duke // Journal of the American Medical Association. - 1910. - Vol. 55. - p. 1185-1192.

155. How should we test for nonsevere heritable platelet function disorders? / J. E. Norman, S. K. Westbury, M. L. Jones, A. D. Mumford // Int J Lab Hematol. - 2014. - Vol. 36, № 3. -p. 326-333.

156. Usefulness of PFA-100 testing in the diagnostic screening of patients with suspected abnormalities of hemostasis: comparison with the bleeding time / G. M. Podda, P. Bucciarelli, F. Lussana, A. Lecchi, et al. // J Thromb Haemost. - 2007. - Vol. 5, № 12. - p. 2393-2398.

157. Template bleeding time and PFA-100 have low sensitivity to screen patients with hereditary mucocutaneous hemorrhages: comparative study in 148 patients / T. Quiroga, M. Goycoolea, B. Munoz, M. Morales, et al. // J Thromb Haemost. - 2004. -Vol. 2, № 6. -p. 892-898.

158. Kratzer, M. A. Detection of abnormal platelet functions with an in vitro model of primary haemostasis / M. A. Kratzer, S. Bellucci, J. P. Caen // Haemostasis. -- 1985. -Vol. 15, № 6. - p. 363-370.

159. Kratzer, M. A. Simulation of primary haemostasis in vitro / M. A. Kratzer, G. V. Born // Haemostasis. - 1985. - Vol. 15, № 6. - p. 357-362.

160. Description of an in vitro platelet function analyzer--PFA-100 / S. K. Kundu, E. J. Heilmann, R. Sio, C. Garcia, et al. // Semin Thromb Hemost. - 1995. - Vol. 21 Suppl 2. -p. 106-112.

161. Platelet function analyzer (PFA)-100 closure time in the evaluation of platelet disorders and platelet function / C. P. Hayward, P. Harrison, M. Cattaneo, T. L. Ortel, et al. // J Thromb Haemost. - 2006. -Vol. 4, № 2. - p. 312-319.

162. Born, G. V. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal / G. V. Born // Nature. - 1962. - Vol. 194. - p. 927-929.

163. Standardization of Light Transmission Aggregometry for Diagnosis of Platelet Disorders: An Inter-Laboratory External Quality Assessment / K. Althaus, B. Zieger, T. Bakchoul, K. Jurk, et al. // Thromb Haemost. - 2019. - Vol. 119, № 7. -p. 1154-1161.

164. Platelet Aggregometry Testing: Molecular Mechanisms, Techniques and Clinical Implications / K. Koltai, G. Kesmarky, G. Feher, A. Tibold, et al. // Int J Mol Sci. - 2017. -Vol. 18, № 8.

165. Recommendations for the Standardization of Light Transmission Aggregometry: A Consensus of the Working Party from the Platelet Physiology Subcommittee of SSC/ISTH / M. Cattaneo, C. Cerletti, P. Harrison, C. P. Hayward, et al. // J Thromb Haemost. - 2013.

166. Guidelines for the laboratory investigation of heritable disorders of platelet function / P. Harrison, I. Mackie, A. Mumford, C. Briggs, et al. // Br J Haematol. - 2011. - Vol. 155, № 1. - p. 30-44.

167. Development of North American consensus guidelines for medical laboratories that perform and interpret platelet function testing using light transmission aggregometry / C. P. Hayward, K. A. Moffat, A. Raby, S. Israels, et al. // Am J Clin Pathol. - 2010. -Vol. 134, № 6.- p. 955-963.

168. Diagnostic utility of light transmission platelet aggregometry: results from a prospective study of individuals referred for bleeding disorder assessments / C. P. Hayward, M. Pai, Y. Liu, K. A. Moffat, et al. // J Thromb Haemost. - 2009. - Vol. 7, № 4. -p. 676-684.

169. Cytofluorimetric platelet analysis / C. Carubbi, E. Masselli, M. Gesi, D. Galli, et al. // Semin Thromb Hemost. - 2014. - Vol. 40, № 1. -p. 88-98.

170. Linden, M. D. Platelet flow cytometry / M. D. Linden // Methods Mol Biol. - 2013. - Vol. 992. - p. 241-262.

171. Michelson, A. D. Evaluation of platelet function by flow cytometry / A.D. Michelson // Pathophysiol Haemost Thromb. - 2006. - Vol. 35, № 1-2. - p. 67-82.

172. Функциональная активность тромбоцитов: физиология и методы лабораторной диагностики / Е.А. Пономаренко, А.А. Игнатова, Д.В. Федорова, П.А. Жарков и др.

// Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. - 2019. - Vol. 18, № 3. - p. 112-119.

173. Usefulness of Flow Cytometric Mepacrine Uptake/Release Combined with CD63 Assay in Diagnosis of Patients with Suspected Platelet Dense Granule Disorder / H. Cai, F. Mullier, B. Frotscher, M. E. Briquel et al. // Semin Thromb Hemost. - 2016. - Vol. 42, № 3. - p. 282-291.

174. Validation of flow cytometric analysis of platelet function in patients with a suspected platelet function defect / I. van Asten, R. E. G. Schutgens, M. Baaij, J. Zandstra, et al. // J Thromb Haemost. - 2018. - Vol. 16, № 4. - p. 689-698.

175. A simplified flow cytometric method for detection of inherited platelet disorders-A comparison to the gold standard light transmission aggregometry / K. Navred, М. Martin, L. Ekdahl, E. Zetterberg, et al. // PLoS One. - 2019. - Vol. 14, № 1. - e.0211130.

176. Congenital defects of platelet function / G. Podda, E. A. Femia, M. Pugliano, M. Cattaneo // Platelets. - 2012. - Vol. 23, № 7. - p. 552-563.

177. Hayward, C. P. Diagnostic evaluation of platelet function disorders / C. P. Hayward // Blood Rev. - 2011. - Vol. 25, № 4. - p. 169-173.

178. Cattaneo, M. Light transmission aggregometry and ATP release for the diagnostic assessment of platelet function / M. Cattaneo // Semin Thromb Hemost. - 2009. - Vol. 35, № 2. - p. 158-167.

179. A review of platelet secretion assays for the diagnosis of inherited platelet secretion disorders / A. D. Mumford, A. L. Frelinger 3rd, C. Gachet, P. Gresele, et al. // Thromb Haemost. - 2015. - Vol. 114, № 1. - p. 14-25.

180. The limitation of genetic testing in diagnosing patients suspected for congenital platelet defects / M. W. Blaauwgeers, I. van Asten, M. Kruip, E. A. M. Beckers, et al. // Am J Hematol. - 2019.

181. Diagnosis of inherited platelet disorders on a blood smear: a tool to facilitate worldwide diagnosis of platelet disorders / A. Greinacher, A. Pecci, S. Kunishima, K. Althaus, et al. // J Thromb Haemost. - 2017. -Vol. 15, № 7. - p. 1511-1521.

182. Bleeding issues in neonates and infants - update 2015 / U. Nowak-Gottl, V. Limperger, A. Bauer, D. Kowalski, et al. // Thromb Res. - 2015. - Vol. 135 Suppl 1. - p. S41-43.

183. Israels, S. J. Diagnostic evaluation of platelet function disorders in neonates and children: an update / S. J. Israels // Semin Thromb Hemost. - 2009. - Vol. 35, № 2. - p. 181-188.

184. Knofler, R. Strategies in Clinical and Laboratory Diagnosis of Inherited Platelet Function Disorders in Children / R. Knofler, W. Streif // Transfus Med Hemother. - 2010. - Vol. 37, № 5. - p. 231-235.

185. Diagnostic and therapeutic considerations on inherited platelet disorders in neonates and children / N. Schlegel, V. Bardet, G. Kenet, W. Muntean, et al. // Klin Padiatr. - 2010. -Vol. 222, № 3. -p. 209-214.

186. Neonatal platelets from cord blood and peripheral blood / A. G. Sitaru, S. Holzhauer, C. P. Speer, D. Singer, et al. // Platelets. - 2005. - Vol. 16, № 3-4. - p. 203-210.

187. Strauss, T. Developmental hemostasis: primary hemostasis and evaluation of platelet function in neonates / T. Strauss, R. Sidlik-Muskatel, G. Kenet // Semin Fetal Neonatal Med. - 2011. - Vol. 16, № 6. - p. 301-304.

188. The platelet hyporeactivity of extremely low birth weight neonates is age-dependent / F. J. Bednarek, S. Bean, M. R. Barnard., Frelinger A. L., et al. // Thromb Res. - 2009. - Vol. 124, № 1. - p. 42-45.

189. Assessment of neonatal platelet adhesion, activation, and aggregation / S. M. BakerGroberg, S. Lattimore, M. Recht, O. J. McCarty, et al. // J Thromb Haemost. - 2016. - Vol. 14, № 4. - p. 815-827.

190. Imparied platelet--dense granule release in neonates / P. Mankin, J. Maragos, M. Akhand, K. L. Saving // J Pediatr Hematol Oncol. - 2000. - Vol. 22, № 2. - p. 143-147.

191. Platelet aggregation and adenosine triphosphate release values in children and adults / M. Bonduel, J. P. Frontroth, M. Hepner, G. Sciuccati, et al. // J Thromb Haemost. - 2007. -Vol. 5, № 8. - p. 1782-1783.

192. Ravn, H. B. Hemostasis in Pediatric Cardiac Surgery / H. B. Ravn // Semin Thromb Hemost. - 2017. - Vol. 43, № 7. - p. 682-690.

193. Flow cytometry for pediatric platelets / A. A. Ignatova, E. A. Ponomarenko, D. M. Polokhov, E. V. Suntsova, et al. // Platelets. - 2019. - Vol. 30, № 4. - p. 428-437.

194. Unexpected persistence of platelet hyporeactivity beyond the neonatal period: a flow cytometric study in neonates, infants and older children / N. Hezard, G. Potron, N. Schlegel, C. Amory, et al. // Thromb Haemost. - 2003. - Vol. 90, № 1. - p. 116-123.

195. Nonsense mutation in the glycoprotein Ib alpha coding sequence associated with Bernard-Soulier syndrome / J. Ware, S. R. Russell, V. Vicente, R. E. Scharf, et al. // Proc Natl Acad Sci U S A. - 1990. - Vol. 87, № 5. - p. 2026-2030.

196. A spontaneous mutation of integrin alpha IIb beta 3 (platelet glycoprotein IIb-IIIa) helps define a ligand binding site / M. L. Bajt, M. H. Ginsberg, A. L. Frelinger 3rd, M. C. Berndt, et al. // J Biol Chem. - 1992. - Vol. 267, № 6. - p. 3789-3794.

197. Glanzmann thrombasthenia secondary to a Gly273-->Asp mutation adjacent to the first calcium-binding domain of platelet glycoprotein IIb / M. Poncz, S. Rifat, B. S. Coller, P. J. Newman, et al. // J Clin Invest. - 1994. - Vol. 93, № 1. - p. 172-179.

198. Derry, J. M. Isolation of a novel gene mutated in Wiskott-Aldrich syndrome / J. M. Derry, H. D. Ochs, U.Francke // Cell. - 1994. - Vol. 79, № 5. - p. following 922.

199. Mutation in the gene encoding the alpha chain of platelet glycoprotein Ib in platelet-type von Willebrand disease / J. L. Miller, D. Cunningham, V. A. Lyle, C. N. Finch // Proc Natl Acad Sci U S A. - 1991. - Vol. 88, № 11. - p. 4761-4765.

200. A high-throughput sequencing test for diagnosing inherited bleeding, thrombotic, and platelet disorders / I. Simeoni, J. C. Stephens, F. Hu, S. V. Deevi, et al. // Blood. - 2016. -Vol. 127, № 23. - p. 2791-2803.

201. A dominant-negative GFI1B mutation in the gray platelet syndrome / D. Monteferrario, N. A. Bolar, A. E. Marneth, K. M. Hebeda, et al. // N Engl J Med. - 2014. - Vol. 370, № 3. -p. 245-253.

202. SLFN14 mutations underlie thrombocytopenia with excessive bleeding and platelet secretion defects / S. J. Fletcher, B. Johnson, G. C. Lowe, D. Bem, et al. // J Clin Invest. -2015. -Vol. 125, № 9. - p. 3600-3605.

203. Deleterious mutation in the FYB gene is associated with congenital autosomal recessive small-platelet thrombocytopenia / C. Levin, A. Koren, E. Pretorius, N. Rosenberg, et al. // J Thromb Haemost. -- 2015. -Vol. 13, № 7. - p. 1285-1292.

204. Activating mutations in STIM1 and ORAI1 cause overlapping syndromes of tubular myopathy and congenital miosis / V. Nesin, G. Wiley, M. Kousi, E. C. Ong, et al. // Proc Natl Acad Sci U S A. - 2014. - Vol. 111, № 11. - p. 4197-4202.

205. ACTN1 mutations cause congenital macrothrombocytopenia / S. Kunishima, Y. Okuno, K. Yoshida, Y. Shiraishi, et al. // Am J Hum Genet. - 2013. - Vol. 92, № 3. - p. 431-438.

206. Mutations in MECOM, Encoding Oncoprotein EVI1, Cause Radioulnar Synostosis with Amegakaryocytic Thrombocytopenia / T. Niihori, M. Ouchi-Uchiyama, Y. Sasahara, T. Kaneko, et al. // Am J Hum Genet. - 2015. - Vol. 97, № 6. - p. 848-854.

207. Mutations in NBEAL2, encoding a BEACH protein, cause gray platelet syndrome / W. H. Kahr, J. Hinckley, L. Li, H. Schwertz, H. Christensen, et al. // Nat Genet. - 2011. - Vol. 43, № 8. - p. 738-740.

208. Whole exome sequencing identifies genetic variants in inherited thrombocytopenia with secondary qualitative function defects / B. Johnson, G. C. Lowe, J. Futterer, M. Lordkipanidze, et al. // Haematologica. - 2016. - Vol. 101, № 10. - p. 1170-1179.

209. Application of High-Throughput Sequencing in the Diagnosis of Inherited Thrombocytopenia / Q. Wang, L. Cao, G. Sheng, H. Shen, et al. // Clin Appl Thromb Hemost. - 2018. - p. 1076029618790696.

210. Outcome of an enhanced diagnostic pipeline for patients suspected of inherited thrombocytopenia / E. Leinoe, M. Gabrielaite, O. Ostrup, E. Funding, et al. // Br J Haematol. - 2019. - Vol. 186, № 2. - p. 373-376.

211. Introducing high-throughput sequencing into mainstream genetic diagnosis practice in inherited platelet disorders / J. M. Bastida, M. L. Lozano, R. Benito, K. Janusz, et al. // Haematologica. - 2018. - Vol. 103, № 1. - p. 148-162.

212. Whole exome sequencing in the diagnostic workup of patients with a bleeding diathesis / J. L. Saes, A. Simons, S. A. de Munnik, M. R. Nijziel, et al. // Haemophilia. - 2019. - Vol. 25, № 1. - p. 127-135.

213. The thrombocytopathy in the Netherlands study: a horizontal diagnostic approach for suspected congenital platelet defects / M. W. Blaauwgeers, I. van Asten, M. J. Kruip, E. A. M. Beckers., et al. // International Society on Thrombosis and Haemostasis Congress. -Melbourne, 2019.

214. Development and Validation of Clinical Whole-Exome and Whole-Genome Sequencing for Detection of Germline Variants in Inherited Disease / M. Hegde, A. Santani, R. Mao, A. Ferreira-Gonzalez, et al. // Arch Pathol Lab Med. - 2017. - Vol. 141, № 6. - p. 798-805.

215. An evaluation of copy number variation detection tools from whole-exome sequencing data / R. Tan, Y. Wang, S. E. Kleinstein, Y. Liu, et al. // Hum Mutat. - 2014. - Vol. 35, № 7. - p. 899-907.

216. Heremans, J. High-throughput sequencing for diagnosing platelet disorders: lessons learned from exploring the causes of bleeding disorders / J. Heremans, K. Freson // Int J Lab Hematol. - 2018. - Vol. 40 Suppl 1. - p. 89-96.

217. Lippi, G. EDTA-dependent pseudothrombocytopenia: further insights and recommendations for prevention of a clinically threatening artifact / G. Lippi, M. Plebani // Clin Chem Lab Med. - 2012. - Vol. 50, № 8. - p. 1281-1285.

218. Effective estimation of correct platelet counts in pseudothrombocytopenia using an alternative anticoagulant based on magnesium salt / P. Schuff-Werner, M. Steiner, S. Fenger, H. J. Gross, et al. // Br J Haematol. - 2013. -Vol. 162, № 5. - p. 684-692.

219. International consensus report on the investigation and management of primary immune thrombocytopenia / D. Provan, R. Stasi, A. C. Newland, V. S. Blanchette, et al. // Blood. -2010. - Vol. 115, № 2. - p. 168-186.

220. International consensus report on the investigation and management of primary immune thrombocytopenia / F. Rodeghiero, M. A. Sanz, M. Tarantino, S. Watson, et al. // Blood. -2010. - Vol. 115, № 2. - p. 168-186.

221. Румянцев, А.Г. Федеральные клинические рекомендации по диагностике и лечению иммунной тромбоцитопенической пурпуры у детей / А.Г. Румянцев, А.А. Масчан // 2015.

222. Мазурин, А.В. Пропедевтика детских болезней / А.В. Мазурин, И.М. Воронцов. -Спб., 2009. - 1008 с.

223. Геппе, Н.А. Пропедевтика детских болезней / Н.А. Геппе, Н.С. Подчерняева. - М., 2008. - 460с.

224. Standards and guidelines for the interpretation of sequence variants: a joint consensus

recommendation of the American College of Medical Genetics and Genomics and the Association for Molecular Pathology / S. Richards, N. Aziz, S. Bale, D. Bick, et al. // Genet Med. - 2015. - Vol. 17, № 5. - p. 405-424.

225. Руководство по интерпретации данных, полученных методами массового параллельного секвенирования (MPS) / Рыжкова О.П., Кардымон О.Л., Прохорчук Е.Б., Коновалов Ф.А., и др. // Медицинская генетика. - 2017. - № 7. - c. 4-17.

226. Fogarty, P. F. The epidemiology of immune thrombocytopenic purpura / P. F. Fogarty, J. B. Segal // Curr Opin Hematol. - 2007. -Vol. 14, № 5. - p. 515-519.

227. Спектр дифференциальной диагностики иммунной тромбоцитопении у детей / Е.В. Сунцова, Д.Д. Байдильдина, И.И. Калинина, У.Н. Петрова и др. // Педиатрия. Журнал им. Г.Н.Сперанского. - 2019. - № 4. - C. 62-71.

228. Inherited platelet disorders: toward DNA-based diagnosis / C. Lentaigne, K. Freson, M. A. Laffan, E. Turro, et al. // Blood. - 2016. -Vol. 127, № 23. - p. 2814-2823.

229. Exome sequencing reveals a thrombopoietin ligand mutation in a Micronesian family with autosomal recessive aplastic anemia / M.J. Dasouki, S.K. Rafi, A.J. Olm-Shipman, N.R. Wilson, et al. // Blood. - 2013. Vol.122, №20. - p. 3440-3449.

230. Bone marrow failure unresponsive to bone marrow transplant is caused by mutations in thrombopoietin / A. Seo, M. Ben-Harosh, M. Sirin, J. Stein // Blood. - 2017. - Vol.130, №7. - p. 875-880.

231. Mechanisms underlying platelet function defect in a pedigree with familial platelet disorder with a predisposition to acute myelogenous leukemia: potential role for candidate RUNX1 targets / A. C. Glembotsky, D. Bluteau, Y. R. Espasandin, N. P. Goette, et al. // J Thromb Haemost. - 2014. - Vol. 12, № 5. - p. 761-772.

232. Molecular phenotype and bleeding risks of an inherited platelet disorder in a family with a RUNX1 frameshift mutation / M. S. Badin, J. K. Iyer, M. Chong, L. Graf, et al. // Haemophilia. - 2017. -Vol. 23, № 3. - e204-213.

233. Clinical and genetic aspects of Bernard-Soulier syndrome: searching for genotype/phenotype correlations / A. Savoia, A. Pastore, D. De Rocco, E. Civaschi, et al. // Haematologica. - 2011. - Vol. 96, № 3. - p. 417-423.

234. Patients with Bernard-Soulier syndrome and different severity of the bleeding phenotype / D. Boeckelmann, H. Hengartner, A. Greinacher, U. Nowak-Gottl, et al // Blood Cells Mol Dis. - 2017. -Vol. 67. - p. 69-74.

235. SLFN14-related thrombocytopenia: identification within a large series of patients with inherited thrombocytopenia / C. Marconi, C. A. Di Buduo, S. Barozzi, F. Palombo, et al. // Thromb Haemost. - 2016. - Vol. 115, № 5. - p. 1076-1079.

236. Clinical and laboratory characteristics in congenital ANKRD26 mutation-associated thrombocytopenia: A detailed phenotypic study of a family / J. Perez Botero, D. Chen, R. He, D. S. Viswanatha et al. // Platelets. - 2016. - Vol. 27, № 7. - p. 712-715.

237. Lee, A., Poon M. C. Inherited platelet functional disorders: General principles and practical aspects of management / A. Lee, M.C. Poon // Transfus Apher Sci. - 2018. -Vol. 57, № 4.

- p. 494-501.

238. Pecci, A. Pathogenesis and management of inherited thrombocytopenias: rationale for the use of thrombopoietin-receptor agonists / A. Pecci // Int J Hematol. - 2013. - Vol. 98, № 1.

- p. 34-47.

239. Thrombocytopenia-absent radius syndrome: a clinical genetic study / K. L. Greenhalgh, R. T. Howell, A.Bottani, P. J. Ancliff, et al. // J Med Genet. - 2002. - Vol. 39, № 12. - p. 876881.

240. Gray platelet syndrome: natural history of a large patient cohort and locus assignment to chromosome 3p / M. Gunay-Aygun, Y. Zivony-Elboum, F. Gumruk, D. Geiger, et al. // Blood. - 2010. - Vol. 116, № 23. - p. 4990-5001.

241. Correction of Severe Myelofibrosis, Impaired Platelet Functions and Abnormalities in a Patient with Gray Platelet Syndrome Successfully Treated by Stem Cell Transplantation / M. Favier, E. Daguindau, P. Nurden, E. Deconinck // Platelets. - 2019. - p. 1-5.

242. Mechanisms in endocrinology: The spectrum of haemostatic abnormalities in glucocorticoid excess and defect / A. M. Isidori, M. Minnetti, E. Sbardella, C. Graziadio, et al. // Eur J Endocrinol. - 2015. - Vol. 173, № 3. - p. R101-13.

243. Franchini, M. Thrombocytopenia and infections / M. Franchini, D. Veneri, G. Lippi // Expert Rev Hematol. - 2017. - Vol. 10, № 1. - p. 99-106.

244. Mutation of the beta1-tubulin gene associated with congenital macrothrombocytopenia affecting microtubule assembly / S. Kunishima, R. Kobayashi, T. J. Itoh, M. Hamaguchi, et al. // Blood. - 2009. - Vol. 113, № 2. - p. 458-461.

245. Fiore, M. A new mutation in TUBB1 associated with thrombocytopenia confirms that C-terminal part of betal-tubulin plays a role in microtubule assembly / M. Fiore, C. Goulas, X. Pillois // Clin Genet. - 2017. Vol. 91, № 6. - p. 924-926.

246. Freson, K. High-throughput sequencing approaches for diagnosing hereditary bleeding and platelet disorders / K. Freson, E.Turro // J Thromb Haemost. - 2017. - Vol. 15, № 7. - p. 1262-1272.

247. Buchanan, G. R. Grading of hemorrhage in children with idiopathic thrombocytopenic purpura / G. R. Buchanan, L. Adix // J Pediatr. -2002. - Vol. 141, № 5. - p. 683-688.

248. Kumar, M. Application of ITP-BAT bleeding score in clinical practice / M. Kumar, S. Dutta, M. Bhattyacharyya // Int J Hematol. - 2015. - Vol. 101, № 2. - p. 207-208.

249. Prospective study of low-dose ristocetin-induced platelet aggregation to identify type 2B von Willebrand disease (VWD) and platelet-type VWD in children / J. P. Frontroth, M. Hepner, G. Sciuccati, A. Feliu Torres, et al. // Thromb Haemost. - 2010. -- Vol. 104, № 6. - p.1158-1165.

250. Diz-Kucukkaya, R. Inherited disorders of platelets: membrane glycoprotein disorders /R. Diz-Kucukkaya, J. A. Lopez // Hematol Oncol Clin North Am. - 2013. -Vol. 27, № 3. -p. 613-627.

251. Prevalence of impaired responsiveness to epinephrine in platelets among Japanese / J. Kambayashi, N. Shinoki, T. Nakamura, H. Ariyoshi, et al. // Thromb Res. - 1996. -Vol. 81, № 1. - p. 85-90.

252. Evaluating platelet function disorders in children with bleeding tendency - A single center study / O. Tanous, O. Steinberg Shemer, J. Yacobovich, M. Zoldan, et al. // Platelets. -2017. - Vol. 28, № 7. - p. 676-681.

253. Landis, J. R. The measurement of observer agreement for categorical data / J. R. Landis, G. G. Koch // Biometrics. - 1977. - Vol. 33, № 1. - p. 159-174.

254. High proportion of patients with bleeding of unknown cause in persons with a mild-to-moderate bleeding tendency: Results from the Vienna Bleeding Biobank (VIBB) / J. Gebhart, S. Hofer, S. Panzer, P. Quehenberger, et al. // Haemophilia. - 2018. -Vol. 24, № 3. - p. 405-413.

255. The power of a standardized bleeding score in diagnosing paediatric type 1 von Willebrand's disease and platelet function defects / P. D. Marcus, K. G. Nire, L. Grooms, J. Klima, et al. // Haemophilia. - 2011. - Vol. 17, № 2. - p. 223-227.

256. Mild Bleeders: Diagnosis is Elusive in Large Number of Patients / M. Kotru, D. Mutereja, A. Purohit, S. Tyagi, et al. // Mediterr J Hematol Infect Dis. - 2016. - Vol. 8, № 1. -e.2016049.

257. Evaluation of low PAI-1 activity as a risk factor for hemorrhagic diathesis / A. Agren, B. Wiman, V. Stiller, P. Lindmarker, et al. // J Thromb Haemost. - 2006. - Vol. 4, № 1. - p. 201-208.

258. Gupta, P. K. Spectrum of Von Willebrand disease and inherited platelet function disorders amongst Indian bleeders / P. K. Gupta, V. D. Charan, R. Saxena // Ann Hematol. - 2007. -Vol. 86, № 6. - p. 403-407.

259. Ocular Findings in Patients with the Hermansky-Pudlak Syndrome (Types 1 and 3) / J. Jardon, N. J. Izquierdo, J. Y. Renta, O. Garcia-Rodriguez, et al. // Ophthalmic Genet. -2016. - Vol. 37, № 1. - p. 89-94.

260. El-Chemaly, S. Hermansky-Pudlak Syndrome / S. El-Chemaly, L. R. Young // Clin Chest Med. - 2016. Vol. 37, № 3. - p. 505-511.

261. Crohn's-like colitis, enterocolitis and perianal disease in Hermansky-Pudlak syndrome / D. Hazzan, S. Seward, H. Stock, S. Zisman, et al. // Colorectal Dis. - 2006. - Vol. 8, № 7. -p. 539-543.

262. Fibrinolysis in patients with a mild-to-moderate bleeding tendency of unknown cause / J. Gebhart, S. Kepa, S. Hofer, S. Koder, et al. // Ann Hematol. - 2017. - Vol. 96, № 3. - p. 489-495.

263. Румянцев, А.Г. Федеральные клинические рекомендации по диагностике и лечению тромбоцитопатий у детей и подростков / А.Г. Румянцев, А.А. Масчан, М.А. Кумскова // 2015.

264. Пшеничная, К. И. Лечение тромбоцитопатий / К. И. Пшеничная, Н. П. Шабалов // Педиатрия. Журнал им. Г.Н.Сперанского. - 2005. - № 3. - p. 89-93.

Таблица 1. Pediatric Bleeding Questionnaire (PBQ) - педиатрический опросник кровоточивости

Симптомы Баллы

-1 0 1 2 3 4

Носовые - Нет/тривиаль- Более 5 раз в Только консультация Тампонада носовых Трансфузии

кровотечения ные (<5 год или ходов или компонентов крови или

эпизодов в год) продолжительн остью более 10 минут коагуляция сосудов зоны Киссельбаха или антифибринолитики использование концентратов факторов свертывания (КФС) или десмопрессина

Кожный - Нет/тривиаль- Диаметр Только консультация - -

геморрагичес- ный (диаметр экзимозов >1см

кий синдром экхимозов < 1 см) без явной травмы

Кровотечения - Нет/тривиаль- Более 5 раз в Только консультация Хирургический Трансфузии

из незначитель- ные (<5 год или или наложение гемостаз или компонентов крови или

ных ран эпизодов в год) продолжительн остью более 10 минут пластырного шва антифибринолитики использование КФС или десмопрессина

Кровотечения - Нет Было хотя 1 раз Только консультация Хирургический Трансфузии

со слизистой гемостаз или компонентов крови или

ротовой антифибринолитики использование

полости концентратов ФС или десмопрессина

Кровотечения - Нет Ассоциировано Только консультация Хирургический -

из желудочно- с или без гемостаз или

кишечного анатомической идентифицирован- антифибринолитики

тракта причиной ной причины трансфузии компонентов крови

или использование КФС или десмопрессина

Кровотечения при удалении зубов Отсутствие кровотечения при >2 удалениях зубов Нет/не было в 1 случае Было, за консультацией не обращались Только консультация Тампонада или ушивание лунки Трансфузии компонентов крови или использование концентратов ФС или десмопрессина

Кровотечения при хирургических операциях Отсутствие кровотечения при > 2 операциях Нет/не было при 1 операции Было, за консультацией не обращались Только консультация Хирургический гемостаз, антифибринолитики Трансфузии компонентов крови или использование КФС или десмопрессина

Меноррагии Нет Есть жалобы или только консультация Антифибринолити- ки или комбинированные оральные контрацептивы Кюретаж или прием препарата железа Трансфузии компонентов крови /использование КФС/ десмопрессина или гистерэктомия

Послеродовые кровотечения Не было > в 2 родах Не было родов/не было кровотечения в 1 родах Было, за консультацией не обращались Кюретаж или препараты железа или антифибринолитики Трансфузии компонентов крови /использование КФС/ десмопрессина

Межмышечные гематомы Не было Посттравматические, за консультацией не обращались Спонтанные, за консультацией не обращались Спонтанные или посттравматические, требующие использования КФС/ десмопрессина Спонтанные или посттравматические, требующие хирургического вмешательства или гемотрансфузий

Гемартрозы Никогда Посттравматические, не требующие специальной терапии Спонтанные, не требующие специальной терапии Спонтанные или посттравматические, требующие использования КФС/ десмопрессина Спонтанные или посттравматические, требующие хирургического вмешательства или гемотрансфузий

Кровотечения на территории ЦНС Никогда - - Субдуральные, любая терапия Интрацеребральные, любая терапия

Другие кровотечения: после циркумцизии, из пуповинного остатка, кефалогема- тома, макрогематурия, после венепункций, субконъюнк- тивальные кровоизлияния Нет Были Только консультация Хирургический гемостаз, антифибринолитики Трансфузии компонентов крови или использование КФС или десмопрессина

Таблица 2. International Society on Thrombosis and Hemostasis Bleeding Assessment Tool (ISTH BAT) - шкала оценки кровоточивости

Международного общества тромбоза и гемостаза

Симптомы (к настоящему моменту) Баллы

0 1 2 3 4

Носовые кровотечения Нет/тривиальные Более 5 раз в год или продолжительностью >10 минут Только консультация11 Тампонада носовых ходов или коагуляция сосудов зоны Киссельбаха или антифибринолитики Трансфузии компонентов крови или использование концентратов факторов свертывания (КФС) или десмопрессина

Кожный геморрагический синдром Нет/тривиальный > 5 экхимозов (диаметром >1см) на открытых участках Только консультация Распространенный Подкожная гематома, требующая гемотрансфузии

Кровотечения из незначительных ран Нет/тривиальные >5 раз в год или продолжительностью > 10 минут Только консультация Хирургический гемостаз Трансфузии компонентов крови или использование КФС или десмопрессина

Кровотечения со слизистой ротовой полости Нет/тривиальные Были Только консультация Хирургический гемостаз или антифибринолитики Трансфузии компонентов крови или использование КФС или десмопрессина

11 Пациент обращался ко врачу с жалобами на повышенную кровоточивость и был направлен на консультацию специалиста или на расширенное лабораторное обследование.

Кровотечения из желудочно-кишечного тракта Нет/тривиальные Были (не ассоциированы с язвами, портальной гипертензией, ангиодисплазией или геморроидальными узлами) Только консультация Хирургический гемостаз или антифибринолитики Трансфузии компонентов крови или использование КФС или десмопрессина

Гематурия Нет/тривиальная Была (макроскопическая) Только консультация Хирургический гемостаз, терапия препаратами железа Трансфузии компонентов крови или использование КФС или десмопрессина

Кровотечения при удалении зубов Нет/тривиальные/не было удаления зубов Были в <25% всех процедур, не требовали дополнительных вмешательств Были в >25% всех процедур, не требовали дополнительных вмешательств Тампонада или ушивание лунки Трансфузии компонентов крови или использование КФС или десмопрессина

Кровотечения при хирургических операциях Нет/тривиальные/не было хирургических операций Были в <25% всех процедур, не требовали дополнительных вмешательств Были в >25% всех процедур, не требовали дополнительных вмешательств Хирургический гемостаз, антифибринолитики Трансфузии компонентов крови или использование КФС или десмопрессина

Меноррагии Нет/тривиальные Только консультация или смена гигиенических прокладок чаще, чем 1 раз в 2 часа, или «протекание» гигиенических прокладок, или выделение сгустков Необходимость в период менструального кровотечения пропускать работу/учебу более 2 раз в год, или необходимость антифибринолити-ков/гормональной Комбинированная терапия (антифибринолитики и гормональные контрацептивы) или меноррагии с момента менархе и в течение более чем 12 мес Необходимость экстренной госпитализации или трансфузии компонентов крови /использование КФС/ десмопрессина или необходимость кюретажа/абляции эндометрия/гистерэктомии

или оценка по шкале РВАС >10012 терапии/приема препаратов железа

Послеродовые кровотечения Нет/тривиальные/не было родов Только консультация или применение окситоцина или лохии более 6 недель Препараты железа или антифибринолити-ки Трансфузии компонентов крови /использование КФС/ десмопрессина или необходимость в поднаркозном обследовании полости матки или баллонная маточная тампонада Хирургические вмешательства (гистерэктомия/лигирова ние внутренней подвздошной артерии/эмболизация маточных артерий/прошивание матки)

Межмышечные гематомы Не было Посттравматические, не требующие специальной терапии Спонтанные, не требующие специальной терапии Спонтанные или посттравматические, требующие использования КФС/ десмопрессина Спонтанные или посттравматические, требующие хирургического вмешательства или гемотрансфузий

Гемартрозы Никогда Посттравматические, не требующие специальной терапии Спонтанные, не требующие специальной терапии Спонтанные или посттравматические, требующие использования КФС/ десмопрессина Спонтанные или посттравматические, требующие хирургического вмешательства или гемотрансфузий

12 Шкала РВАС (Pictorial Blood Loss Assessment Chart) - валидированный опросник для, используемый в гинекологии для диагностики тяжелых менструальных кровотечений. Шкала позволяет учитывать число используемых в период менструации гигиенических прокладок и тампонов, а также наличие дополнительных симптомов (выделение сгустков крови, эпизоды «протекания», необходимость одновременно использовать и гигиеническую прокладку, и тампон). Шкала снабжена визуальным рядом, позволяющим оценивать степень «заполненности» гигиенический тампонов и прокладок перед их сменой.

Кровотечения на территории ЦНС Никогда - - Субдуральные, любая терапия Интрацеребральные, любая терапия

Другие 13 кровотечения13 Нет/тривиальные Были Только консультация Хирургический гемостаз, антифибри-нолитики Трансфузии компонентов крови или использование КФС или десмопрессина

13 Включают: кровотечение из пуповинного остатка, кефалогематому, субъконъюнктивальные кровоизлияния, длительное кровотечение после венепункций, циркумцизии.

Таблица 1. Референсные интервалы показателей световой трансмиссионной агрегометрии.

Агонист АФД Адреналин Коллаген Ристоце-тин Низкая доза ристоце- тина TRAP

Референ-сный интервал, % 25-65 50-85 50-80 55-90 0-10 50-100

АДФ - аденозиндифосфат, TRAP - thrombin receptor activating peptide.

Таблица 2. Референсные интервалы показателей теста функциональной активности тромбоцитов для лиц младше 18 лет.

Параметр Норма < 18 лет Ед. изм.

Антиген CD42b

Неактив. 65-137 % от нормы

Активир. 40-87 % от нормы (неактивированных)

Антиген CD61

Неактив. 66-127 % от нормы

Активир. 186316 % от нормы (неактивированных)

Связывание PAC1

Неактив. < 5,5 % от нормы (активированных)

Активир. 30-136 % от нормы

Флуоресценция загруженного мепакрина

Количество плотных гранул в неактивированных тромбоцитах 51-107 % от нормы

Остаточное количество плотных гранул в тромбоцитах после активации 9-42 % от нормы (неактивированных)

Индекс активации плотных гранул (Степень дегрануляции) 1,7-4,9

Объём секреции плотных гранул 25-84 % от нормы (неактивированных)

Антиген CD62p

Неактив. < 4,3 % от нормы (активированных)

Активир. 56-116 % от нормы

Доля прокоагулянтных тромбоцитов (по аннексину V)

Неактив. < 2,7 % от полного числа клеток

Активир. < 50,0 % от полного числа клеток

Прямое светорассеяние (Е8С) -размер

Неактив. 80-117 % от нормы

Активир. 44-83 % от нормы (неактивированных)

Боковое светорассеяние (88С)-гранулярность

Неактив. 67-94 % от нормы

Активир. 49-84 % от нормы (неактивированных)

Рисунок 1. Рентгенография костей предплечья пациентки с мутацией в гене МЕСОМ: двухсторонний проксимальный радиоульнарный синостоз. Клинически имело место минимальное ограничение супинации, не ограничивающее повседневную активность и не являвшееся предметом жалоб со стороны пациентки.

А