Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота с применением полимеразной цепной реакции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат биологических наук Суханов, Игорь Павлович

• Суханов, Игорь Павлович
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Суханов, Игорь Павлович

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1. Методы диагностики туберкулеза крупного рогатого скота.

1.2. Методы прижизненной диагностики.

1.2.1. Клинический осмотр.

1.2.2. Аллергическое исследование.

1.2.3. Серологическое исследование.

1.3. Методы послеубойной (посмертной) диагностики туберкулеза крупного рогатого скота. ^

1.3.1. Патологоанатомическое исследование. I ^

1.3.2. Бактериологическое исследование.

1.3.2.1. Микроскопия.

1.3.2.2. Культуральное исследование.

1.3.2.3. Биологическое исследование (биопроба).

1.4. Полимеразная цепная реакция в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота. ^з

2. Собственные исследования.

2.1. Материалы и методы исследования.

2.2. Результаты исследования.

2.2.1 .Сравнительная оценка тест-систем ПЦР.

2.2.2 Определение режима тепловой обработки лабораторной посуды для разрушения ДНК возбудителя туберкулеза.

2.2.3.Разработка метода деконтаминации биоматериала от животных с поверхности от возбудителя туберкулеза и его ДНК.

2.2.4.Сравнительная оценка в остром опыте микроскопического, кулыуралыюго, биологического, серологического, патологоанато-мического методов исследований и ПЦР для диагностики туберку леза у крупного рогатого скота.

2.2.4.1 .Прижизненная диагностика.

2.2.4.2 .Послеубойная диагностика. 85 2.2.6.Идентификация культур кислотоустойчивых микроорганизмов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота с применением полимеразной цепной реакции»

Актуальность темы. Туберкулезом из сельскохозяйственных животных наиболее часто поражается крупный рогатый скот. Неблагополучные по туберкулезу хозяйства несут убытки, которые складываются из стоимости погибших от туберкулеза животных и выбракованных туш, пораженных органов, снижения удоев, качества молока, недополучения приплода и молока при преждевременной сдаче на убой выявленных больных коров, а также затрат на проведение противотуберкулезных мероприятий, ограничений хозяйственной деятельности и т.п. Больные животные представляют опасность для здоровья людей (12, 13, 44, 57).

Эта проблема до настоящего время актуальна для многих регионов России, в которой заболеваемость крупного рогатого скота туберкулезом составляет около 2% от имеющегося поголовья (1) и достигает 30% от общей инфекционной патологии у взрослых животных этого вида (27, 68).

В основу противотуберкулезных мероприятий в нашей стране положен комплекс мер, научно разработанных С.Н. Вышелесским совместно с В.Н. Матвеевым, дополненный и усовершенствованный П.П. Вишневским, М.К. Юсковцом . и др. (138).

В общей системе мер борьбы с туберкулезом наиболее важным звеном является своевременная и достоверная диагностика (133, 163,174). Вместе с тем, имеющиеся на ветеринарном вооружении тесты не в полной мере отвечают предъявляемым к ним, необходимым на сегодняшний день, требованиям. Многие из них весьма трудоемки и не отличаются достоверностью (133, 134, 185).

Основное в профилактике туберкулеза - разрыв контакта с источником инфекции, которым является больное животное. Поэтому своевременное выявление таких животных - главное звено противотуберкулезных мероприятий.

Особенностью туберкулеза, как одной из хронических инфекций, является преобладание латентных форм и случаев бактерионосительства (83, 85, 86). Случаи клинического проявления болезни у крупного рогатого скота возникают обычно лишь при длительном течении и особенно в неблагоприятных условиях его содержания и кормления. За это время, до обнаружения заболевания может произойти перезаражение значительной части поголовья скота (195, 196). Основой прижизненной диагностики туберкулеза является туберкулиновая проба (115,129, 153). Однако нередкими являются случаи проявления парааллергической реакции на туберкулин, вызываемые сенсибилизацией организма животных некоторыми атипичными микобактериями (17,42, 51, 52, 100). Такая ситуация может приводить к ошибочной диагностике с последующими неоправданными расходами на проведение специальных патологоанатомических, бактериологических и аллергических исследований. При послеубойном осмотре крупного рогатого скота, реагировавшего на туберкулин, не всегда удается установить туберкулезные изменения во внутренних органах и тканях животных (83-86).

Лабораторные исследования на туберкулез проводятся в сроки до трех месяцев, а в некоторых случаях могут длиться до полугода и более. Кроме того, выявление инфекционного агента при туберкулезе может быть осложнено из-за наличия у бактерий ультрамелких и Ь- форм. На проведение таких исследований затрачивается до двух лет (71-73).

Сложность определения состояния стада по туберкулезу состоит еще и в том, что заболевание считается установленным при обнаружении характерных признаков болезни на секции или выделении возбудителя, но не может быть полностью исключено при отрицательных данных этих исследований, если в стаде есть животные, реагирующие на туберкулин.

В последние годы для диагностики ряда болезней предложена поли-яеразная цепная реакция, которая является высокочувствительным экспресс методом исследования (16, 40, 43, 45, 46, 74,82). Налажено производство тест - систем ПЦР, в т.ч. и для туберкулеза.

В то же время совсем не разработаны условия исследования на туберкулез: какой биоматериал, в каком виде и объеме необходимо исследовать в ПЦР и какая требуется предварительная подготовка этого материала для исключения возможности получения ложноположительных и ложноотрица-тельных результатов ПЦР.

В связи с этим разработка метода диагностики туберкулеза крупного рогатого скота с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР), применение этой реакции для индикации и идентификации возбудителя в пробах, который не может быть быстро выявлен по каким либо причинам (длительный срок и низкая эффективность исследования, невозможность определения Ь - форм микобактерий, сложность выявления клеток возбудителя в биоматериале без выраженных туберкулезных поражений), традиционными методами исследования, является актуальной проблемой и одним из важнейших направлений научных исследований по туберкулезу.

Цель исследований. Разработать метод диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

1 .Провести испытание отечественных тест - систем ПЦР для индикации возбудителя туберкулеза в биоматериале.

2.Разработать методы разрушения ДНК возбудителя туберкулеза на поверхности биоматериала и лабораторной посуды.

3 .Испытать ПЦР для прижизненной диагностики туберкулеза у телят в эксперименте. Определить динамику появления и сохранения агглютининов в крови зараженных телят с помощью реакции агглютинации латекса (РАЛ).

4.Определить в остром опыте эффективность ПЦР при диагностике туберкулеза у животных в сравнении с традиционными методами исследования.

5.Разработать наставление по диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота с применением полимеразной цепной реакции.

Научная новизна.

Установлено, что разрушение ДНК М.Ьо^ на поверхности контами-нированного биоматериала происходит при четырехкратном фламбировании пробы.

Доказано, что воздействие концентрированным раствором перманга-ната калия и пергидроля с содержанием 30% перекиси водорода в течение соответственно 10 и 60 мин не разрушает ДНК М.Ьот.

Показано, что разрушение ДНК М.Ьот на поверхности лабораторной посуды достигается прогреванием ее при 180-200 °С в течение двух часов.

Выявлено, что для индикации ДНК М.Ьоу18 необходимо исследование в ПЦР гомогенизированного биоматериала.

Установлено раннее - от 5 до 23 суток появление возбудителя туберкулеза в носовой слизи после алиментарного заражения животных и возможность с помощью ПЦР выявления таких животных.

Установлена возможность локализации М.Ьот в миндалинах зараженных животных, что делает целесообразным включение этого органа в число проб для исследования на туберкулез.

Практическая ценность.

Испытания показали, что имеются отечественные высококачественные тест-системы ПЦР для диагностики туберкулеза.

Разработаны методы отбора и обработки проб биоматериала от крупного рогатого скота для исследования на туберкулез методом ПЦР.

Сделан сравнительный анализ чувствительности и специфичности традиционных методов диагностики туберкулеза крупного рогатого скота и ПНР. Установлено, что ПЦР может быть использована для контроля благопо лучия животных по этой болезни путем регулярного исследования носовой слизи животных.

Установлено, что ПЦР высоко эффективна при идентификации и дифференциации возбудителя туберкулеза; по достоверности получаемого результата, а также скорости исследования во много раз превосходит культу-ральные и биологические методы идентификации M.bovis и М.tuberculosis.

На основании проведенных исследований разработано "Наставление по диагностике туберкулеза крупного рогатого скота с применением полиме-разной цепной реакции (ПЦР)", утвержденное Департаментом ветеринарии 23.02.99. Издан приказ Департаментом ветеринарии № 23 от 08.06.99. "О проведении широкого производственного испытания метода диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР)", с использованием указанного наставления.

На защиту выносятся:

1 .Результаты испытания отечественных тест-систем ПЦР для диагностики туберкулеза.

2.Результаты разработки методов деконтаминации лабораторной посуды и поверхности биоматериала от ДНК M.bovis.

3 .Результаты диагностики туберкулеза с помощью полимеразной цепной реакции и реакции агглютинации латекса.

1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Суханов, Игорь Павлович

4.ВЫВОДЫ.

1 .Исследованиями установлено, что имеются отечественные тест-системы ПЦР для диагностики туберкулеза, обладающие достаточно высокой чувствительностью и специфичностью. Эти тест-системы высокоэффективны для прижизненной диагностики туберкулеза, при идентификации и дифференциации М.Ьо\т8 и М.ШЬегси^з.

2.ПЦР может быть использована для контроля благополучия молодняка крупного рогатого скота по туберкулезу и выявления зараженных животных путем регулярных исследований носовой слизи животных.

При исследовании послеубойного материала ПЦР уступает по эффективности биологическому методу диагностики. Повышение чувствительности этой реакции может быть достигнуто увеличением количества исследуемых проб и гомогенизацией плотного биоматериала. Положительные результаты реакции наиболее часты при исследовании заглоточных, подчелюстных, сре-достенных и бронхиальных лимфатических узлов.

Культуральный метод исследования мало эффективен для прижизненной диагностики туберкулеза.

3.При механической контаминации лабораторной посуды и поверхности плотного биоматериала разрушение ДНК возбудителя обеспечивается прогреванием посуды при (180-200) °С в течение двух часов и при четырехкратном фламбировании биоматериала.

Насыщенный раствор перманганата калия и пергидроль с содержанием 30% перекиси водорода при воздействии соответственно 10 и 60 мин не обеспечивает разрушение фрагментов ДНК на поверхности биоматериала.

4.С помощью реакции агглютинации латекса возможно выявление противотуберкулезных антител в разные сроки после заражения животных.

117

5.ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1 .В лабораторию ПЦР - диагностики должен поступать гомогенизированный биоматериал, предварительно деконтаминированный от механического загрязнения ДНК М.Ьот.

2.ПЦР может быть использована для прижизненной диагностики туберкулеза молодняка крупного рогатого скота путем регулярного исследования носовой слизи животных.

3.На основании полученных результатов исследований составлено и утверждено Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 23.02.99 "Наставление по диагностике туберкулеза крупного рогатого скота с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР)"

По результатам наших исследований издан приказ Департаментом ветеринарии № 23 от 08.06.99. "О проведении широкого производственного испытания метода диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР)", с использованием указанного наставления.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Наши исследования показали, что ПЦР в настоящее время может быть использована в качестве основного метода прижизненной диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота и как дополнительный метод при после

115 убойной диагностике болезни. Положительный результат ПЦР - анализа дол жен рассматриваться как основание для постановки диагноза на туберкулез.

Данный метод исследования требует проведения широких производственных испытаний, после чего можно будет сделать окончательный вывод о том какое место ПЦР займет в диагностики туберкулез крупного рогатого скота.

116

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Суханов, Игорь Павлович, 1999 год

1. Авилов В.М., Пылинин В.Ф. Эпизоотическое состояние по туберкулезу в РСФСР и меры борьбы с болезнью. // Ветеринария. 1992. - №1. - С. 3-9.

2. Айганов А.Р. Патоморфологическая выраженность туберкулеза крупного рогатого скота из неблагополучных пунктов.//Система мер борьбы с туберкулезом сельскохозяйственных животных.-1991.- Новосибирск. -С.44-56.

3. Айганов А.Р. Патоморфология экспериментального туберкулеза телят.// Система мер борьбы с туберкулезом сельскохозяйственных животных. -1991,-Новосибирск. -С.56-62.

4. Аликаева А.П. Туберкулез. Лабораторные исследования в ветеринарии. // М. Сельхозгиз. - 1964. - т. 3. - С. 238-254.

5. Аликаева А.П. Упрощенный метод выделения и выращивания чистых культур туберкулезных бацилл из патологического материала. // Советская ветеринария. 1940. - №11 - 12. - С. 47-50.

6. Аликаева А.П., Жерносек Т.П. Упрощенный метод типирования туберкулезных культур. // Ветеринария. 1950. - №4. - С.56-57.

7. Аляпкина Ю. С., Аксенов М.Ю., Чернов Б .К., Гинзбург А. Л. Количественный ПЦР- анализ: разработка системы определения содержания ампли-фицированного фрагмента ДНК.// Молекулярная генетика. Микробиология и вирусология.-М.-Медицина.-1994.-№5.-С.22-26.

8. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях. // Л. Медгиз. - 1962. - 180 с.

9. Белоусов A.B. Люминесцентная бактериоскопия микобактерий туберкулеза. // Лабораторное дело. 1965. - №5. - С. 312-313.

10. Благодарный Я.А. Источники туберкулеза и меры профилактики. //Алма-Ата. Казахстан. -1980. - 245с.

11. Благодарный Я.А. Туберкулез как антропозооноз. // Алма-Ата. Кайнар. -1972. - 199с.

12. Бойко A.A., Сапегина Е.П. Туберкулез крупного рогатого скота. // Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности. 1991. - 92с.

13. Боль Б.К. Патологоанатомическое вскрытие сельскохозяйственных животных. // М. Госил. - 1953. - 335с.

14. Бортюк Я.А. Молекулярное клонирование ДНК M.bovis BCG.// Труды ВИЭВ. М. - 1988(89). - С.26-28.

15. Булавин С., Хон Ф. Об атипичных микобактериях как причине сенсибилизации. // Ветеринарная газета. 1999. - №9-10. - С.7.

16. Буряк Е.И. Эффективность разных способов прижизненной диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота.// Ветеринария. 1986. - №6. -С.23-26.

17. Варенко Ю.С., Бескровный П.С. Модификация метода Калфина для выращивания микобактерий туберкулеза. // Проблемы туберкулеза. 1978. -№3. - С.74-76.

18. Варенко Ю.С., Ластков O.A., Бескровный П.С. Способ ускоренного выращивания микобактерий туберкулеза. // Лаб. дело. 1980. - №1. - С. 45

19. Василев В.П. Микобактериозы и микозы легких. // София. Медицина и физкультура. - 1971. - 283 с.

20. Васильева Н.П. Сравнительная характеристика чувствительности микроскопических методов выявления микобактерий туберкулеза. // Лаб. дело.- 1973.-№1.-С.32-34.

21. Васильева Н.П., Аникин В.А. Диагностические возможности методики люминесцентной микроскопии и оптимизация культурального метода диагностики туберкулеза. // Тр. Московского НИИ туберкулеза. М. - 1981. -С. 40-45.

22. Васин A.B. К вопросу о влиянии внешних факторов на аллергическое состояние при туберкулезе крупного рогатого скота. // Ветеринария. 1951.- №12. С. 29-30.

23. Вейсфейлер Ю.К. Биология и изменчивость микобактерий туберкулеза и атипичные микобактерии. // Будапешт. -Изд. Академии наук Венгрии,-1975.-327с.

24. Вишневский П.П. Серодиагностика туберкулеза у крупного рогатого скота с помощью фиксаций комплемента. // Тр. ГИЭВ. 1928. - т.5. - вып. 2. -С. 16-22.

25. Вишневский П.П. Туберкулез крупного рогатого скота. // М.-Сельхозгиз,-1937.-173 с.

26. Воробьева З.Г., Лазовская А.Л. Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота с применением агглютинации латекса. // Проблемы профилактики и лечения заболеваний сельскохозяйственных животных. Н. Новгород. - 1993.

27. Воробьева З.Г., Лазовская А.Л. Реакция агглютинации латекса при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота. // Эффективные меры борьбы с туберкулезом сельскохозяйственных животных. Казань. - 1991.-С. 37-41.

28. Воробьева З.Г., Лазовская А.Л., Лукин Ю.В. Реакция латекс агглютинации для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота. // Ветеринария. - 1996. -№ 4. - С. 27-28.

29. Воробьева З.Г., Лазовская А.Л., Слинина К.Н. Микросферные тесты для диагностики инфекционных заболеваний эукариотов. // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. 1998. - №4. - С. 59-62.

30. Воронкова Г.Н. Метод люминесцентной микроскопии в диагностике туберкулеза. //Лаб. дело. 1986. - №6. - С. 106-108.

31. Временное наставление по постановке и учету реакции агглютинации латекса с набором препаратов для выявления специфических антител к ми-кобактериям туберкулеза. // Утверждено Ветфармсоветом 17.12.98. протокол № 5.

32. Вышелесский С.Н. К вопросу об отличии активного и неактивного туберкулеза крупного рогатого скота с помощью методов : реакции связывания комплемента, мейостагминовой реакции и офтальмореакции. // Архив вет. наук. 1913. -т.1. - С. 1-42.

33. Вышелесский С.Н., Бухтилов Ф.Н. О роли комплекса мероприятий в В. ovispböe с туберкулезом крупного рогатого скота. // Ветеринария. 1956. -№5.-С. 21-26.

34. Говоров A.M. Разработка мероприятий по специфической профилактике туберкулеза крупного рогатого скота. // Научные труды УИЭВ. 1953. -т.20. - С. 115-125.

35. Голышевская В.И., Ахунов М.Б., Бибергаль Е.А. Совершенствование методов микробиологической диагностики туберкулеза. // Проблемы туберкулеза. 1987. - № 12 - С. 42-43.

36. Голышевская В.И., Гинзбург A.JL, Леви Д.Т. и др. Выявление микобакте-рий с помощью ПЦР у детей и подростков. // Проблемы туберкулеза. -1996. №1. - С.27-29. - М. - Медицина.

37. Голышевская В.И., Корнев A.A., Черноусова Л.Н. и др. Микробиологическая диагностика туберкулеза. // Вестник Российской академии медицинских наук. 1995. - №7.

38. Гондарук И.П. О туберкулиновых реакциях у крупного рогатого скота, пораженного фасциолезом. // Соц. животноводство. Киев. - 1952. -№12.-С. 31-34.

39. Гребенникова Т.В., Грабовецкий В.В., Кальнов С.Л., Непоклонов Е.А., Шумский H.H. Дифференциальная диагностика микобактерий методом полимеразной цепной реакции. // Ветеринария. 1999. - №3. - С. 17-20.

40. Григоров В., Бибиков Ф., Надточий О. Туберкулез животных и возможные пути оздоровления поголовья. Проявление эпизоотического процесса в Краснодарском крае. // Ветеринарная газета. 1999. - №9-10. - С.7.

41. Гришина Т.Д., Шагинян H.A., Пузанов В.А. и др. Идентификация возбудителя туберкулеза в клиническом материале с помощью метода ПЦР. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1995. - №1. -С.36-39.

42. Гусева Е.В., Сатина Т.А., Фомина Т.А. Применение ПЦР в диагностике инфекционных болезней сельскохозяйственных животных. // Научные основы технологии производства ветеринарных биологических препаратов.- Щелково. 1996. - С. 38-40.

43. Давыдовский И.В. Туберкулез. // Патологоанатомическая анатомия и патогенез болезней человека. М. - Медгиз. - 1956. - С. 473-536.

44. Дворникова М.А. Послеубойная диагностика туберкулеза у крупного рогатого скота. // Научные труды Саратовского СХИ. Саратов. - 1974. -Т.15.-С. 24-28.

45. Добин М.А., Кокуричев П.И. Практикум по ветеринарной патологической анатомии и вскрытию. // JT. М. - Сельхозиздат. - 1963. - 240с.

46. Донченко A.C., Донченко В.Н. Люминисцентная микроскопия в диагностике туберкулеза. // Ветеринария. 1977. - № 6. - С. 100-102.

47. Донченко H.A. Роль ареактивных к туберкулину телят в эпизоотологии туберкулеза крупного рогатого скота. // Зооантропонозные болезни, меры профилактики и борьбы. Мн. - 1997. - С. 75-76.

48. Донченко H.A. Течение туберкулеза крупного рогатого скота у животных, инфицированных микобактериями комплекса avium intracellularae. // Ав-тореф. канд. ветер, наук. ВИЭВ. - М. - 1991. - 19 с.

49. Дополнения (изменения) к Наставлению по диагностике туберкулеза животных, утвержденному Главветупром Госагропрома СССР 25.02.1986. // Утв. Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия РФ 18.10.1998.

50. Драбкина P.O. Микробиология туберкулеза. // М. Медгиз. - 1963. -255с.

51. Жак Н.Ф., Морейн Е.М. Упрощенный метод приготовления и окраски мазков для микобактерий туберкулеза люминесцентным методом. // Лаб. дело. 1986. - №6. - С. 364-365.

52. Жумашев A.C. Сравнительная оценка методов диагностики и разработка схемы выращивания молодняка при оздоровлении хозяйств от туберкулеза крупного рогатого скота. II Автореф. канд. ветер, наук. Алма-Ата.1973.-201с.

53. Злонкевич Я.Д. Некоторые вопросы эпизоотологии и диагностики туберкулеза крупного рогатого скота. // Авторф. канд. ветер, наук. Львовский ЗВИ,-Львов.-1970.-27с.

54. Иванов М.М. Некоторые вопросы борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота и специфичность туберкулиновых реакций. // Бруцеллез и туберкулез. Материалы международной конференции МЭБ. М. - Колос. -1967.-С. 204-214.

55. Иванов М.М. Туберкулин и аллергическая диагностика туберкулеза. // Труды ВГНКИ, МСХ СССР. 1959. - том №8. - С. 3-10.

56. Иванов М.М., Шаров А.Н. К вопросу дифференциации специфических и парааллергических реакций на туберкулин. // Материалы научно производственной конференции ГНКИ. - 1970. - С. 44-46.

57. Илибаев Х.М. Морфологическое проявление туберкулеза крупного рогатого скота в хозяйствах Центрального Казахстана. // Вест. с.-х. науки Казахстана. 1992. - №3. - С.118-121.

58. Ильиных Л.А. Ускоренный способ бактериологической диагностики туберкулеза. // Система мер борьбы с туберкулезом с.-х. животных. Новосибирск. - 1991. - С.30-35.

59. Инструкция по применению набора реагентов для обнаружения ДНК ми-кобактерий туберкулезного комплекса М.ШЬегсиЬзгБ, М.Ьочтб методом полимеразной цепной реакции (Политуб). // Утв. Минздравом РФ 14.11.97.

60. Исаков М.Т., Звягина С. Показатели крови телят при экспериментальном заражении микобактериями туберкулеза. // Тр. Уз. НИВИ. 1982. - т. 32. -ч. 1.-С. 36-39.

61. Кальченко М.М., Федорова В.М., Косолапов Е.А. Патологоанатомические изменения и их локализация при туберкулезе крупного рогатого скота. //

62. Профилактика и лечение с.-х. животных и птицы. Межвузовский сб. науч. тр. Одесса. - 1988. - С. 14-17.

63. Карташова В.М., Полякова О.А. Индикация патогенных бактерий в молоке и молочных продуктах. // М. Колос. - 1973. - С. 48-52.

64. Кассич Ю.Я. Значение РСК при диагностике туберкулеза. // Ветеринария.- 1982. №5. - С. 24-27.

65. Кассич Ю.Я., Кочмарский В.А., Завгородний А.И. Эффективность комплексного метода диагностики туберкулеза крупного рогатого скота. // Проблемы научного обеспечения животноводства Молдавии. Кишинев.- 1990. С.11-12.

66. Кассич Ю.Я., Тихонов П.М. Совершенствование и сравнительное изучение методов обработки материала отобранного из объектов внешней среды для культуральной диагностики туберкулеза. // Ветеринария. 1984. -№59,- С. 16-18.

67. Киселев В.С. Туберкулез. // Инфекционные и инвазионные болезни крупного рогатого скота. М. - 1956. - С. 87-107.

68. Коваленко И.В. Иммунолюминесцентная индикация Ь форм микобакте-рий. // В сб.: Санаторное лечение больных туберкулезом. - Мн. - 1982. -С.131-134.

69. Коваленко И.В. Л формы микобактерий туберкулеза : Клиническое значение и выявление. // Мн. - Наука и техника. - 1989. - 104с.

70. Коваленко И.В. Современные методы микробиологической диагностики туберкулеза. // Тр. ЦНИИ туберкулеза МЗ СССР. 1981. - т.31. - С. 98103.

71. Коваленко С.А., Бавин В.Г., Яковлев А.Ф. Использование полимеразной цепной реакции в медико-биологической практике. // Бюлл. Всеросс. НИИ генетики и разведения с.-х. животных. 1994. - Вып. 139. - С. 3-7.

72. Кокуричев П.И. Симультанная проба для диагностики туберкулеза. // Ветеринария. 1966. - №4. - С. 28-30.

73. Кокуричев П.И. Туберкулез сельскохозяйственных животных. // М. -Сельхозгиз. 1954. - 210с.

74. Кокуричев П.И., Домнин Б.Г., Ведерников B.C. Результаты послеубойно-го исследования крупного рогатого скота, реагировавшего на туберкулин. // Болезни с.-х. животных и птиц, их профилактика и лечение. JI. - 1973. -вып. 34.-С. 66-70.

75. Кокуричев П.И., Карабаинов М.А. О специфичности туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота, зараженного фасциолезом. // Сб. науч. тр. Ленинградского института усовершенствования ветер, врачей. 1957. -вып. 11.-С. 81-85.

76. Колокшанская Л.Б. Характеристика и дифференциация микобактерий, выделенных при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота. // Ав-тореф. канд. ветер, наук. Витебский ВИИ. Витебск. - 1974. - 17с.

77. Кочмарский В.А. Роль послеубойных исследований крупного рогатого скота при определении благополучия хозяйств по туберкулезу. // Автореф. канд. ветер. Наук. М. - 1983. - 19с.

78. Кривцова А.Е., Туркебаева К.А. Экспериментальный туберкулез у крупного и мелкого рогатого скота. // Ветеринария. 1980. - №1. - С. 29-30.

79. Кудрова М.Г., Мирлина Е.Д., Маничева O.A. ПЦР диагностика комплекса Mycobacterium tuberculosis: визуализация результата с помощью авидин-биотиновой системы.//Биотехнология. - 1996. - №2. - С. 48-55.

80. Кузин А.И. Латентная туберкулезная инфекция и ее значение в эпизоотологии туберкулеза крупного рогатого скота. // Автореф. докт. Ветер, наук. -М. -1977.

81. Кузин А.И. Материалы к изучению туберкулеза крупного рогатого скота в Вологодской области. //Автореф. канд. ветер, наук. -М. 1963. - 16 с.

82. Кузин А.И. Оздоровление животноводческих хозяйств от туберкулеза. //

83. М. Россельхозиздат. - 1987. - 138с.

84. Кузин А.И. Туберкулез сельскохозяйственных животных и его профилактика. // М. Россагропромиздат. - 1992. - 190 с.

85. Лаанес С.Х., Тюри Э.И. Развитие экспериментального туберкулеза при заражении морских свинок в яичко. // Пробл. Туберкулеза. 1961. - №5. -С. 94 - 96.

86. Лакман Э.Д. Диагностическое значение РСК при туберкулезе крупного рогатого скота. // Проблемы ветеринарно-санитарного обеспечения животноводческих ферм и комплексов. Саратов. - 1983. - С. 13-17.

87. Лакман Э.Д. РСК при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота. // Ветеринария. 1981. - №4. - С. 31-32.

88. Лакман Э.Д. Серологическая диагностика туберкулеза. // В кн.: Профилактика инфекционных болезней животных в промышленных комплексах. -Омск.-1976.-С. 81-83.

89. Лакман Э.Д., Шлыгин И.В. РСК с антигеном Сибирского НИВИ в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота. // Тр. Сибирского Науч. ис-след. ветер, ин. - Омск. - 1975. - С. 58-61.

90. Латышев А.С. Дифференциация типоспецифических и псевдоаллергических туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота с помощью внутривенной пробы. // Сб. Новосиб. НИВИ. 1968. - вып. 3. - С. 185187.

91. Лебедева Л.В., Цырульников Г.В. Замораживание как метод консервирования патологического материала, направляемого для исследования наналичие БК. // Пробл. туберкулеза. 1969. - №6. - С. 63-65.

92. Луценко Т.А. О возможности использования реакции связывания комплемента для раннего выявления туберкулеза. // 5 ый Всесоюзный съезд врачей фтизиатров. - М. - 1950. - С. 28-32.

93. Луценко Т.А. Смешанные антигены для реакции связывания комплемента на туберкулез. // Ветеринария. 1961. - №12. - С. 57-60.

94. Ляпунова А.Д., Бриллиантова С.А., Пресман Г.П. Сравнительная характеристика микобактерий туберкулеза на двух плотных питательных средах. // Лаб. дело. 1984. - №7. - С. 442-443.

95. Ляпунова А.Д., Пашков Ю.Н., Пресман Г.П. Выбор метода для лучших условий роста микобактерий туберкулеза. // Лаб. дело. -1981.-№10.-С. 621-622.

96. ЮО.Макаров Ю., Васильченко Г., Сорокина А. Петрухин М. Сапрофиты. Туберкулез животных и возможные пути оздоровления поголовья. // Ветеринарная газета. №9-10. - 1999. - С.7.

97. Маккавейская А.Н. Значение фекалий в распространении туберкулеза крупного рогатого скота. // Сб. науч. тр. Ленинградского института усовершенствования ветеринарных врачей. Л. - 1953. - С. 8-9.

98. Маккавейская А.Н. К вопросу о выделении туберкулезного возбудителя с молозивом реагирующих на туберкулин коров. // Тр. Ленингр. НИВИ. Л. -1939. -№1,- С. 3-10.103 .Мальков И.Г. Дифференциация Mycobacterium tuberculosis и

99. Mycobacterium bovis от атипичных методами ДНК гибридизации и ПЦР. //

100. Афтореф. канд. ветер, наук. М. - ВИЭВ. - 1993. - 21с.

101. Мальков И.Г. Дифференциация кулыур микобактерий туберкулеза человеческого и бычьего видов с помощью ДНК зонда. // Ветеринария. -1993,-№2. -С. 52-54.

102. Мальков И.Г. Идентификация комплекса М. tuberculosis -M.bovis с помощью полимеразной цепной реакции. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1993. - №4. - С. 404-406.

103. Мальков И.Г. Нетрадиционные методы анализа в ускоренной диагностике патогенных микобактерий. // Проблемы ветеринарной санитарии. М. - 1992.-вып. 2.-С. 3-17.

104. Мальков И.Г. Экспресс диагностика туберкулеза методами ДНК - зондов и полимеразной цепной реакции. // АгроНИИТЭИ ММП. - 1992. -№12. -С. 15-18.

105. Мальков ИГ., Артюшин С.К., Фомин Б.А., Коромыслов Г.Ф. Разработка метода идентификации микобактерий бычьего и человеческого видов с использованием ПЦР. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1993. - №2. - С. 27-30.

106. Манукян З.К. К вопросу о неспецифической реакции у крупного рогатого скота, инвазированного фасциолезом. // Тр. Армянского НИВИ. 1955. -Т.8.-С. 12-14.

107. Мартма О.В., Тяхнас К.К. Туберкулез крупного рогатого скота и ликвидация его в Эстонской ССР. // Сб. науч. тр. Эст. НИИ животноводства и ветеринарии. 1982. - №53. - С. 38-45.

108. Методические рекомендации по уточнению диагноза на туберкулез у крупного рогатого скота благополучных хозяйств и определению видовой принадлежности культур микобактерий. // Харьков. 1987.

109. Методические указания по диагностике туберкулеза животных. // Утверждены ГУВ Мин. сельского хозяйства СССР 11.02.76.

110. Методы лабораторной диагностики туберкулеза. // ГОСТ 26072 84 (CT СЭВ 3457 - 81) " Животные и птица сельскохозяйственные".

111. Мирлина Е.Д., Маничева O.A., Вишневский Б.И. и др. Диагностика комплекса Mycobacterium tuberculosis методом ПЦР. // Биотехнология. 1994. -№11-12.-С. 31-34.

112. Молев А.И., Никаноров Б.А., Полумисков А.Н. Неспецифические реакции на туберкулин у крупного рогатого скота, пораженного актиномико-зом и эхинококкозом. // Тр. Кировского и Пермского с.-х. институтов. -1971.-С. 80-87.

113. Мюллис К.Б. Необычайная история о том, как родилась полимеразная цепная реакция. // В мире науки. 1990. - №6.

114. Найманов А.Х. Аллергическая диагностика микобактериальных инфекций крупного рогатого скота. // Афтореф. дне. докт. вет. наук. ВИЭВ. М.- 1993. -29с.

115. Найманов А.Х. Туберкулинизация крупного рогатого скота.// Ветеринария. -1980.-№ 6. С. 39-40.

116. Найманов А.Х., Косенко В.И., Якушева О.В. Туберкулез крупного рогатого скота при естественном и искусственном заражении. // Тр. ВИЭВ. -1991.-т. 69.-С. 144-150.

117. Найманов А.Х., Нуратинов P.A., Дубовой И.С. Применение диагностических тестов в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах. // Ветеринария.- 1990. -№1. С. 31-33.

118. Налетов H.A. Восстановительные изменения при туберкулезе легких крупного рогатого скота. // Автореф. докт. ветер, наук. МВА. 1949. - 16с.

119. Налетов H.A. К вопросу о локализации туберкулезных очагов в зависимости от ворот инфекции. // Архив патологии. 1948. - №5. - С. 57-63.

120. Налетов H.A. Первичный комплекс изменений при туберкулезе телят. // Сб. работ молодых ученых в области ветеринарии ВАСХНИЛ. 1940. - С. 124-128.

121. Налетов H.A. Развитие патоморфологических изменений при туберкулезе крупного рогатого скота. // Тр. первой межреспубликанской конф. по вопросам ликвидации туберкулеза и бруцеллеза в животноводстве. Мн. -1959. - С. 42-46.

122. Наставление по диагностике туберкулеза животных. // Утв. Главветупром Госагропрома СССР 25.02.1986 г.

123. Новак Д.Д. Атипичные туберкулиновые реакции у крупного рогатого скота и их дифференциация. // Проблемы борьбы с туберкулезом и пара-туберкулезом с.-х. животных. Воронеж. - 1965. - С. 91-100.

124. Новак Д.Д. Туберкулез крупного рогатого скота. // Алма Ата. - Кайнар. - 1984.-158с.

125. Новак Д.Д. Туберкулез сельскохозяйственных животных. // Алма Ата. -1977. - 144с.

126. Обухов И.Л, Груздев К.Н. Лабораторная диагностика инфекционных болезней методом ДНК амплификации при помощи полимеразной цепной реакции (ПНР). // Сб. науч. трудов ВГНКИ. - 1995 (1996). - т.57. - С. 3645.

127. Обухов И.Л., Груздев К.Н., Панин А.Н. Использование полимеразной цепной реакции в практических ветеринарных лабораториях. // Ветеринария. 1997. - №2. - С. 24-27.

128. Панин А.Н., Обухов И.Л., Шипулин Г.А., Груздев К.Н. Правила проведения работ в диагностических лабораториях, использующих метод ПЦР. // Ветеринария. 1997. - №7. - С. 19-21.

129. Поддубский И.В. Методы борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота в СССР. // Вестник с-х. науки. 1957. - №5. - С. 67-73.

130. Поддубский И.В. Современное состояние ветеринарной науки и практики по борьбе с туберкулезом крупного рогатого скота и птицы. // Проблемы борьбы с туберкулезом и паратуберкулезом с.-х. животных. Воронеж. -1965.-С. 14-29.

131. Попов С.А. Дифференциация культур микобактерий туберкулеза методами газовожидкостной хроматографии. // Автореф. дисс. канд. ветер. Наук.-M. 1991.-25с.

132. Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Сборник санитарных и ветеринарных правил. // М. Информационно-издательский центр Госкомсанэпидемнадзора России. - 1996. - С. 160-169.

133. Пунга В.В. Выявление туберкулеза в современных условиях. // Русский медицинский журнал. Пульмонология. - 1998. - т.6. - №17. - С.1130-1131.

134. Розанцев К.Э. Цепная полимеразная реакция in vitro новый подход в диагностике. // Бюл. ВИЭВ. - 1991. - вып. 75 - 76. - С. 47-50.

135. Ротов В.И., Кокуричев П.И., Савченко П.Е. Туберкулез сельскохозяйственных животных. // Киев. Урожай. - 1973. - 381с.

136. Ротов В.И., Кокуричев П.И., Савченко П.Е., Трач Ю.А. Туберкулез сельскохозяйственных животных. // Киев. Урожай. - 1978. - 237с.

137. Румачик И.И. Методические основы лабораторной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота. // Ветеринария. 1987. - № 12. - С. 62-64.

138. Румачик И.И., Солонеко A.A. Особенности аллергических исследований на туберкулез. // Ветеринария. 1984. - №9. - С. 30-31.

139. Сафин М.А., Идрисов Г.З. Современные методы диагностики и меры борьбы с туберкулезом животных. //Казань. Таткнигоиздат. - 1992. -168с.

140. Сахно В.М. К вопросу дифференциальной диагностики туберкулеза. // Ставрополь. 1991. - С. 42-43.

141. Столповский Ю.А., Удина И.Г. Гены древних "заговорили". // Природа. -1994. -№5.-С. 44-50.

142. Струков А.И., Соловьева И.П. Морфология туберкулеза в современных условиях. // М. Медицина. - 1976. - 256 с.

143. Субботина С.Г. Совершенствование некоторых приемов бактериологической диагностики туберкулеза. // Научные аспекты формирования интеллектуальной собственности специалистов АПК России. Воронеж. - 1993. - С. 97-98.

144. Субботина С.Г. Совершенствование экспрессной бактериологической диагностики туберкулеза. // Воронеж. 1993. - 13с.

145. Сысоев В.А. Диагностическая ценность внутрикожной аллергической пробы. // Диагностика болезней животных и профилактика их на фермах и комплексах. 1984. - С. 62-65.

146. Тажгалиев Н.М. Предварительная обработка патологического материала при диагностике туберкулеза сельскохозяйственных животных. // Бюл. ВИЭВ. 1983. - вып. 51. - С. 37-38.

147. Тихомирова М.Л., Лазовская А.Л., Леви Д.Т. Проблемы диагностики бычьего туберкулеза у крупного рогатого скота. // Актуальные проблемы фтизиопульмонологии. Нижний Новгород. - 1991. - С. 94-101.

148. Ткаченко А.Ф. Сравнительные морфологические изменения начальных форм туберкулеза. // Тр. Одесского СХИ. Одесса. - 1951. - т.6. - ч.2. - С. 93-99.

149. Туберкулез. //Санитарные правила СП 3.1.093 96. - Ветеринарные правила, ВП 13.3.1325 -96.

150. Туберкулез животных и меры борьбы с ним. // Под ред. Кассича Ю.Я. -Киев. Урожай. - 1990. - 304с.

151. Туберкулез сельскохозяйственных животных. // М. Агропромиздат. -1991.-255с.

152. Тузова Р.В. Туберкулез крупного рогатого скота, методы его диагностики и профилактики. // Минск. Ураджай. - 1978. - 96с.

153. Тузова Р.В. Туберкулез сельскохозяйственных животных и птицы. // Минск. Ураджай. - 1983. - 263с.

154. Тузова Р.В., Образцова М.Н. Патологоанатомические изменения у крупного рогатого скота туберкулезных изоляторов. // Материалы научно-производственной конф. БелНИВИ. 1964. - С. 14-16.

155. Урбан В.П., Широбокова М.М., Данко Ю.Ю. и др. Аллергическая диагностика туберкулеза. // В кн.: Профилактика и ликвидация заразных болезней с.-х. животных. Сб. науч. тр. ЛВИ. Л. - 1985. - С. 80-85.

156. Урбан В.П., Широбокова М.М., Калитин Н.М., Зубков А.П. О специфичности туберкулиновой пробы при диагностике туберкулеза крупного рогатого скота. // Матер, науч. конф. — Л. — 1971. — вып. 5. С. 28-29.

157. Ушаков В.Т., Дмитриев А.Н., Паутов Ю.Н. Патологоанатомические и гистологические изменения у коров реагирующих на туберкулин. // Совершенствование мер борьбы с туберкулезом сельскохозяйственных животных. Алма - Ата. - 1988. - С. 132-136.

158. Фаизов Т.Х., Алимова A.M. Значение полимеразной цепной реакции в инфекционной патологии. // Тез. докл. науч. конф. По проблемам ветеринарии и животноводства. Казань. — 1995. - С. 4-5.

159. Фаизов Т.Х., Шилова В.И. Разработка экспресс методов выделения ДНК из микобактерий туберкулеза. // Тез. докл. респ. Науч. конф. "Достижения Казанской ветеринарной школы - в практику животноводства". -Казань. - 1991. - С. 31-32.

160. Федюшин В.П., Утешев А.И. О неспецифических туберкулиновых реакциях у крупного рогатого скота, инвазированного фасциолезом. // Ветеринария. 1952. - №6. - С. 19-21.

161. Финкель Е.А., Михайлова JI.B. Биологический метод исследований при туберкулезе. // Фрунзе. Кыргызстан. - 1976. - 556с.

162. Хазипов Н.З., Сафин М.А., Идрисов Г.З. Туберкулез крупного рогатого скота. // М. Агропромиздат. - 1985. - 128с.

163. Ходун JI.M. Выделение атипичных микобактерий от не реагирующих на туберкулин животных. // Ветеринария . 1990. - № 6. - С. 29-30.

164. Ходун Л.М. Выделение атипичных микобактерий от животных благополучных и неблагополучных по туберкулезу хозяйств. // Разработка средств и методов борьбы с туберкулезом животных. Новосибирск. - 1990.1. С.124-132.

165. Ходун Л.М. Проблема серологической диагностики туберкулеза. // Профилактика и диагностика болезней животных. Новосибирск. - 1983. - С. 119-127.

166. Ходун Л.М. Современные проблемы научных исследований диагностики туберкулеза крупного рогатого скота. // Методы диагностики и профилактики бруцеллеза и туберкулеза животных. Омск. - 1988. - С.89- 94.

167. Ходун Л.М., Цунская Н.И. Метод иммуноферментного анализа для диагностики туберкулеза крупного рогатого скота. // Туберкулез сельскохозяйственных животных. Омск. - 1989. - С. 31-34.

168. Хоменко А.Г. Вопросы борьбы с туберкулезом людей и животных. //

169. Ташкент. Медицина. - 1990. - 208с.

170. Цыбанов С.Ж., Вишняков И.Ф. Перспективы использования методов анализа генома для диагностики вирусных и бактериальных болезней животных. // Информ. бюл. УкрААНИЭКМ. 1994. - С. 69-70.

171. Черноградский И.П., Захаров В.Г. Безглицериновые среды для исследований при туберкулезе. // Ветеринария. 1973. - №4. - С. 113-114.

172. Шаров А.Н., Лукава М.А., Лакман Э.Д. Испытание аллергенов для реакции агглютинации при диагностике туберкулеза у крупного рогатого скота. // Ветеринария. 1996. - №1. - С. 15-17.

173. Шаров А.Н., Седов В.А. Тест системы ПЦР при туберкулезе. // Ветеринария. - 1998. - № 3. - С. 20-22.

174. Шебанов Ф.В. Туберкулез. // М. Медицина. - 1976. - 464с.

175. Шевцев М.В. Изучение неспецифических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота. // Тез. докл. 2 Республиканской научно-производ. конфер. Молодых ученых. Харьков. - 1986. - С. 144-146.

176. Штуйкис В.В., Куприте O.A. Патологоанатомическая диагностика туберкулеза крупного рогатого скота.// Ветеринария. 1959. - т. 45. - №9. - С. 33-34.

177. Щуревский В.Е. Туберкулез крупного рогатого скота и его взаимосвязь с туберкулезом человека. // В кн.: Вопросы взаимосвязи туберкулеза человека и животных. Алма - Ата . - 1981. - С. 8-13.

178. Щуревский В.Е., Овдиенко Н.П., Найманов А.Х., Якушева О.В. Аллергическая диагностика туберкулеза крупного рогатого скота. // Сб. науч. трудов. Пути ликв. инф. инваз. болезней с.-х. животных. Новосибирск. -1985. - С. 12-13.

179. Щуревский В.Е., Якушева О.В., Овдиенко Н.П. Патологоанатомическая диагностика туберкулеза. // Ветеринария. 1980. - №10. - С. 31-33.207 .Юдин Г.А. Значение парааллергии в диагностике туберкулеза животных. // Ветеринария. 1972. - №9,- С. 96-98.

180. Юдин Г.А. Парааллергические туберкулиновые реакции при диагностике туберкулеза животных. // Тр. ВИЭВ. М. - 1967. - т.ЗЗ. - С. 292-297.

181. Юдин Г.А. Причины, распространение, дифференциация и профилактика неспецифических реакций на туберкулин. // Ветеринария. 1987. - №12. -С. 29-32.

182. Юсковец М.К. Туберкулез сельскохозяйственных животных и птиц. // Минск. 1965.-449с.

183. Ярных B.C., Арсеньев Д.Д. Проблемы ветеринарной науки в условиях промышленного животноводства. // Вестник с.-х. наук. 1973. - №4. - С. 62-75.

184. Ященко Т.Н., Мечева И.С. Руководство по лабораторным исследованиям при туберкулезе. // М. Медицина. - 1973. - 260с.

185. Almassy К., Takats G. Agardiffiisioiis precepitacos vizgalatok gumokoros allotok versavjaval. // Magyar Allator wosok lapja. - 1961. - vol.16. - №10. -P. 345 - 346.

186. Auer L. Assessment of an ELISA for the detection of cattle infected with Mycobacterium bovis. // Auster. Yet. J. 1987. - v.64. - №6. - P. 172-176.

187. Ballagi-Pordany A. Application of polymerase chain reaction (PCR) in veterinary virology. Thesis, Swed. Univ. ofagr. sciences.-Uppsala.- 1995,-133p.

188. Bang J. Ueber die Vererbung der Tuberkuloseanfalligkeit beim Rinde. // Annales de Institut Pasteur. 1931. - vol.l 16. - P. 252-253.

189. Barry T., Glennon M., Smith T., Gannon F. Detection of Mycobacterium bovis in bovine blood by combined PCR and DNA probe methods. // Veterinary Record.- 1993,- v.132.- P.66-67.

190. Bashiruddin J., Nicholas R., Santini F., Ready R. Use of polymerase chain reaction to detect mycoplasma DNA in cattle with contagious bovine pleuropneumonia.// Veter. Ree.- 1994.- v. 134,- №10,- P.240-241.

191. Beck G., Bibrack B. Pathologiach anatomische, histologische und kulturelle diagnostilo der Mycobacterien unter besonderer Berucksichtrigung der fleischeschaulichen Vorschriften. // Tierarztl. Umsch. - 1971. - v.26. - №5. - P. 196-201.

192. Bochdalek R. Bodania nad Zachowaniem sie odezynu tuberculinowego odezynu hemaglutynala gruzlic zego.//Med. Wet. 1972,- vol. 28. - P.279- 281.

193. Boddinghaus B., Rogall T. Detection and identification of mycobacteria by amplification ofrRNA.//J. Clin. Microbiol.-1990.-v. 28,- P.1751-1759.

194. Bonme K. Noch immer das "Problem" der Tuberkulose-Schutzimpfung. Tuberk. 1927. - №48. - P. 383 - 384.

195. Boom R., Sol C., Salimans M., Jansen C., Wertheim-van Dillen P. Rapid andsimple methods for purification of nucleic acids.// J. Clin. Microbiol.-1990.-v. 2 8,-P.495-503.

196. Bose M., Chander A., Das R. A rapid and gentle method for the isolation of genomic DNA from mycobacteria. //Nucleic Acids Research.-1993.-v.21 ,№10.P.

197. Brisson-Noel A. Rapid diagnostics of tuberculosis by amplification of mycobacterial DNA in clinical samples.// Lancet.- 1989.-v.4.-№2.-P. 1069-1071.

198. Brisson-Noel A., Aznar C., Chureau C., Nguyen S., Pierre C., Bartoli M., Bonete R., Pialoux G., Gilquel B., Garrigue G. Diagnosis of tuberculosis by DNA amplification in clinical practice evaluation.// Lancet.-1991.-v.338.-P.364-366.

199. Brisson-Noel A., Gicquel B., Lecossier D., Levy-Frebault V., Hance A. Rapid diagnosis of tuberculosis by amplification of mycobacterial DNA in clinical samples. // Lancet. 1989. - v.2. - №8671. - P. 1069-1071.

200. Calmette A., Potter A. Sur le titrage des tuberculines. // Annales de Institut Pasteur. - 1926.-P. 5- 10.

201. Chou Q., Russell M., Birch D., Raymold J., Block W. Prevention of pre-PCR mis-priming and primer dimerization improues low-copy-number amplifications .//Nucleic. Acids Res.-v.20.-P. 1717-1723.

202. Clarridge J., Shawar R., Shinnick T., Plikaytis B. Large-scale use of polymerase chain reaction for detection of Mycobacterium tuberculosis in a routine mycobacteriology laboratory. // J. Clin. Microbiol.-1993.-v.31.-P.2049-2056.

203. Collins D., De Lisle G., Collins J., Costello E. DNA restriction fragment typing of Mycobacterium bovis isolates from cattle and badgers in Ireland. //Veterinary Record .-1994.-v.l34.-№26.-P.681-682.

204. Collins D., Hilbink F., West D. Investigation of Mycobacterium paratuberculosis in sheep by fecal culture, DNA characterisation and the polymerase chain reaction. //Veter. Microbiol.-1995.-v.45.-№4.-P.311-318.

205. Collins D., Stephens D., De Lisle G. Comparison of polymerase chain reaction tests and fecal culture for detecting Mycobacterium paratuberculosis in bovine faeces. //Veter. Microbiol.-1993.-v.36.-№3,4.-P.289-299.

206. Cousins D., Williams S., Ross B., Ellis T. Use of a repetitive element isolated from M. tuberculosis in hybridization studies with M. bovis. //Veter. Microbiol.-1993.-v.37.-№l/2.-P.l-17.

207. Cousins D., Wilson S., Francis B., Gow B. Use of polymerase chain reaction for rapid diagnosis of tuberculosis. // J. Clin. Microbiol.-1991.-v.30.-P.255-257.

208. Crawford A. Tuberculin reactions in cattle showing no visible lesions on postmortem. // JAVMA. 1936. - v.8. - P. 562.

209. Crews K. Post-mortem findings in bovine tuberculosis reactors. //Surveillance.-1991.-v.l8.-№l.-P.14-15.

210. De Wit D., Steyn L., Shoemaber S., Sogin M. Direct detection of Mycobacterium tuberculosis in clinical specimens by DNA amplification. // J. Clin. Microbiol.-1990.-v.28.-P.2437-2441.

211. De Wit D., Weotton M., Allan B., Steyn L. Simple method for production of internal control DNA for Mycobacterium tuberculosis polymerase chain reaction assays. //J. Clin. Microbiol.-1993.-v.31.-P.2204-2207.

212. Diernhofer K. Versuche über die praktische Verwendbarkeit der simultanprobe mit verschiedenen tuberkulinen in der bekampfung der rinder tuberkulöse. // Winer tierarzti. 1963. - vol. 50. - №1. - P. 18 - 37.

213. Dorobantu R. Demers pentru o intelegere corecta a combaterii tuberculozei bovine.//Med. Veter. Crestereaanim.-1994.-№l.-P.16-17.

214. Dziadek J., Jowska R.A., Jaworski A. Poznawcze i aplikacyjne badania genetyczne szczepow Mycobacterium w swietly najnowszych osiagniec biologi i molecularnej .//Postepy Mikrobiol.-l 992.-V.31 .-P. 159-162.

215. Eisenach K., Cave M., Bates J., Crawford J. Polymerase chain reaction amplification a repetitive DNA sequence specific for Mycobacterium tuberculosis.//J.Infect.Dis.-1990.-v. 161.-P.977-981.

216. Eisenach K., Crawford J., Bates J. Genetic relatednes among strains of the Mycobacterium tuberculosis complex. .//Am.Rev.Respir.Dis.-1986.-V.133.P.1065-1068.

217. Eisenach K., Sifford M., Cave M., Bates J., Crawford J. Detection of Mycobacterium tuberculosis in sputum samples using a polymerase chain reaction.//Am.Rev.Respir.Dis.-1991 .-v. 144.-P.1160-1163.

218. Fetcu A., Muresan G., Fagora V. Obsevatii privind incidenta unor reactii paraallergice si pseudoalergice, constatate au ocazia interpretarii tuberculinarilor prin T.C.G. // Med. Wet. 1969. - v.25. - №2. - P. 89-99.

219. Flis J., Lubkowski J. Korelacja miedzy dodathin odczynem tuberculinowym a wynikami badan poubozowych bydla tuberculinododatni ego na tezebie wojewodztwa olsztynkiego. // Med. Wet. 1969. - v.25. - №2. - P. 78-89.

220. Fodor T. Interaction of tubercle bacilli with different biological characteristics in animals. // Tuberkulozis. 1960. - v. 13. - P. 294 - 295.

221. Fodor T., Kis. A. A microscopes vizsgalat szerepe a mycobacteriological laboratorium minosegi munkujanal ellenorzeselen. // Pneumol. Hang. 1985. - v. 38.-P. 133 - 137.

222. Folgueria L., Delgado R., Palenque E., Noriega A. Detection of Mycobacterium tuberculosis DNA in clinical samples by using a simple lysis method and polymerase chain reaction. //J. Clin. Microbiol.-1993.-v.31.-P. 1019-1021.

223. Forbes B., Hicks K. Direct detection of Mycobacterium tuberculosis in respiratory specimens in a clinical laboratory by polymerase chain reaction. // J. Clin. Microbiol.-1993.-v.31.-P. 1688-1694.

224. Frawcis S., Seiler R., Wilkie I. The sensitivity and specificity of various tuberculin testing bovine PPD and other tuberculins.//-Veter. Rec.-1978.-v.103,-№19.- P.420-425.

225. Fries J., Patel R., Piessens W., Wirth D. Genus and species - specific DNA probes to identify mycobacterial using polymerase chain reaction. // Molecular and cell. Probes. - 1990. - №4. - P. 87-105.

226. Glennon M., Jager B., Dowdall D., Maher M. PCR-based fingerprinting of Mycobacterium bovis isolates.// Veter. Microbiol.-1997.-v.54.-№3/4.-P.235-245.

227. Guha A., Sarkar P. Study of tuberculosis among cattle in Calcoutta. // Ind. Vet. J. 1970. - v.47. - №3. - P. 196-200.

228. Hance A., Grandchamp B., Levy-Frebault V., et al. Detection and identification of mycobacteria by amplification of mycobacterial DNA. //Molec. Microbiol.1989.-№3.-P.843-849.

229. Hejlicer K., Benes M., Soukur M. Zdroje a priciny vzniku novych bovinnich tuberkuloz v okrese po eliminaci bovinni tuberkulozu. // Vet. Med. 1970. -v. 15. -№№6/7.-P. 361 -367.

230. Hermans P., Schuitema A., D. Van Solingen, et al. Specific detection of Mycobacterium tuberculosis complex strains by polymerase chain reaction. // J. Clin. Microbiol.-1990.-v.28.-№6.-P. 1204-1213.

231. Himes E. Histologic examination of bovine tissue suspected of being tuberculous. // Mem. I simp. Intern. Lab. Diag., Guanajuato. Mexico. - 1977. -v.l.-P. 1-8.

232. Hratwigk H., El-Ahwal A. Untersuchungen über die Bedeutung der Fasciolose als Ursache positiver. Tuberculin-reaktionen beim Rind. // Berl. Munch. Tierarztl. Wsch. 1968. - v.81. - №16. - P. 315-316.

233. Jivanesku I., Cioloca T., Coman M. Contributia diagnosticului histologic la asanerea tuberculozei taurinelor in fermele Trustului I.L.S. // Timis Luerari Sti. Ser. Med. Vet. 1978. - v.15. - P. 135-137.

234. Jivanesku I., Cioloca T., Paul W. Asanarea tuberculosei la taurinele din termole trustului I.A.S. Timis cu contributia diagnosticulai histopatologic. // Lucr. Sti. Ser. Med. Vet. (Inst. Agron.Timisosrs). 1977. - v.14. - P. 151-153.

235. Johnson H., Ranney A. Tuberculosis and its eradication. // Anim. Dis. 1956. -P. 213-221.

236. Klobouk A., Pavlas M. Dulezite problemy diagnostiky tuberkulosy pri plneni celostatniho ubolu v tlumeni tuberculosy u domacich svirat. // Veterinarstvi. -1957. -v.l. -№7.-P. 2-7.

237. Kostrzenski W., Paclerska Pobratyn H., Surmiak B. Mikrobiologiczne badania specymenow tkankowych bydla tuberkulino - dodatniego podanego ubojowi diagnostycznemu na terenie wojewodztwa Opolskiego. // Pneumon. Pol. - 1978. - v. 46. - №9. - P. 655 - 662.

238. Kuzmak J., Grundboeck J. Polymerase chain reaction (PCR)-nowa metoda w biologii molekularnej. //Med.Weter.-1993.-v.49.-№4.-P.151-154.

239. Lepper A. Serological responses in experimental bovine tuberculosis. // Nat. Inst. Anim. Health. Q. 1977. -v. 17.-P. 10-15.

240. Lesslie J., Nancy C. Practical application of bovine tuberculin PPD in testing cattle in Great Britain. // Vet. Record. 1976. - v. 98. - №9. - P. 170 - 172.

241. Little T., Naylor P., Wilesmith J. Laboratory study of Mycobacterium bovis infection in badgers and calves. //Veter. Rec.-1982.-v.lll.-№24.-P.550-557.

242. Lucos A. "Problèmes actuels dans la prophylaxie de la tuberculose bovine. // Bull. Acad. Veter. Fr. 1972. - v. 45. - №6. - P. 255 - 292.

243. Madic J. Lancana reakci ja polimeraze i mogucnosti njezine primjene u dijagnosticiranju zaraznih bolesti. //Praxis veter.-1993.-v.41.-№2/3.-P. 155-160.

244. Manjunath N., Shankar P., Rajan L., Bhargava A., Saluja S., Shriniwas D. Evaluation of a polymerase chain reaction for the diagnosis of tuberculosis. //Tubercle.-1991.-V.72.-P.21-27.

245. Manual of recomendet diagnostic techniques and requirements for biological product for lists A and B diseases. //-France.-1989.-P.196-215.

246. Markovic P., Nicolic B., Liesevic Z. Prilog proucavanju nespecificnih tuberculinskin reakcija u goveda primenom razredenog tuberculina. // Veterin. Glasmik. 1967. - v. 21. - №1. - P. 25 - 28.

247. Marmur J. A procedure for isolation of deoxyribonucleic acid from microorganisms. //J. Mol. Biol.-1961.-v.3.-P.208-218.

248. Meyer Lie W. Investigation of air and dust as venictes for tuberculosis bacteria in sanatorium wards and offices. // Acta tuberculosum Scand. - 1953. -v. 28.-P.3-4.

249. Monaghan M., Kazda J., McCill K., Quinn P., Cook B. Sensitisation of cattle to bovine and avian tuberculins with Mycobacterium cookii. //Vet. Rec.-1991.-V.29.-P.33-35.

250. Neill S., Cassidy J., Hanna J., et al. Detection of Mycobacterium bovis infection in skin test negative cattle with an assay for bovine interferon-gamma. //Veterinary Record.-1994.-v. 135 ,-№6.-P. 134-136.

251. Noordhoek G., Kolk A., Bjine G., et al. Sensitivity and specificity of PCR fordetection of Mycobacterium tuberculosis : a blind comparison study among seven laboratories. //J. Clin. Microbiol.-1994.-v.32.-P.277-284.

252. Patel R., Fries J., Piessens W., Wizth D. Sequence analysis and amplification by polymerase chain reaction of a cloned DNA fragment for identification of Mycobacterium tuberculosis. //J. Clin. Microbiol.-1990.-v.28.-№3.-P.513-518.

253. Plikaytis B., Eisenach K., Crawford J., Shinick T. Differentiation of Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium bovis BCG by a polymerase chain reaction assay. //Mol.Cell.Probes.-1991.-V.5.-P.215-218.

254. Psikal I. Practicke moznosti pouziti enzymatickeho zmnozeni nukleovych kyselin PCR ve veterinari virologii. //Veterinarstvi.-1993.-v.43.-№5.-P.188-190.

255. Report of a who (Fao) Oie consultation on animal tuberculosis vaccines. //Geneva. World Health Organization.-1995,- 35 p.

256. Ridley D., Ridley M. Rational for the histological spectrum of tuberculosis. A basis for classification. // Pathology. 1987. - v.19. - №2. - P. 186-192.

257. Ritacco V., Kantor I., Barrera L. Assessment of the sensitivity and specificity of ELISA for the detection of mycobacterial antibodies in bovine tuberculosis. // J. Vet. Med., Ser. B. 1987. - v. 34. - №2. - P. 119-125.

258. Roberts M., McMillan C., Coyle M. Whole chromosomal DNA probes for rapid identification of Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium complex. //J. Clin. Mcrobiol.-1987.-v.25.-№7.-P.1239-1243.

259. Roder K. Ursachen der unspecifischen tuberculinreaktion Tierarztl. // Umschau München.-Paris.-1963.-v. 18.-P. 107-108.

260. Ross B., Raios K., Jackson K., Dwyer B. Molecular cloning of a highly repeated DNA element from Mycobacterium tuberculosis and its use as an epidemiological tool. //J. Clin. Microbiol.-1992.-v.30.-P.942-946.

261. Sakhre P., Vyas S. The incidence of Mycobacterium tuberculosis in milk from clinically healthy udders of tuberculin positive Kankry cows. // Food Farm Agr. -1978. v.9. - №9. - P. 259-260.

262. Schroder K., Topfer M. Der nachweis von tuberkulose-bacterien in

263. Untersuchunasmaterial Verleich von kultur und Tierversuch. // Prax. Pneumol.1974. v.28. - №7. - P. 361-363.

264. Schroeder A., Brett P. Jour. Amer. Med. Assm. // 1919. - v. 54. - P. 157-158.

265. Shankar P., Manjunath N., Lakshmi R., et al. Identification of Mycobacterium tuberculosis by polymerase chain reaction. //Lancet.-l 990.-v.335.-№3686.-P.423-425.

266. Shankar P., Manjunath N., Mohan K.K., Prasad K., Behari M., Ahuja G. Rapid diagnosis of tuberculosis meningitis by polymerase chain reaction. //Lancet. -1991.-v.337.-P.5-7.

267. Shawar R., El-Zaatari F., Nataraj A., Clarridge J. Detection of Mycobacterium tuberculosis in clinical samples by two-step polymerase chain reaction and nonisotopic hybridization methods. // J. Clin. Microbiol.-1993.-V.31.-P.61-65.

268. Sing M. ELISA in the diagnosis of pulmonary tuberculosis. // Indian J. Chest Dis. Apll. Sei. 1985. - v.27. - №7. - P. 164-170.

269. Sing M. The guinea-pig virulence of Indian tubercle bacilli. // Am. Rev. Resp. Dis. 1964. - v.89. - №1. -P.l.

270. Sjobring U., Mecklenburg M., Andersen A., Miorner H. Polymerase chain reaction for detection of Mycobacterium tuberculosis. // J. Clin. Microbiol.-1990.-v.28.-№10.-P.2200-2204.

271. Spryszak A., Zorawski C., Wisnewski Z. Krajowy standart tuberculiny PPD ssakow. // Med. Weter. - 1970. - v. 26. - №10. - P. 598 - 600.

272. Spryszak A., Zorawski C. Badania nad zwiekszeniem specyficznosci porownawczego testu tuberculinowego. // Med. Weteryn. 1968. - v. 24. - №7. -P. 397-401.

273. Sritharan V., Barker R. A simple method for diagnosing M.tuberculosis infection in clinical samples using PCR. //Mol.Cell.Probes.-1991.-v.5.-P.385-395.

274. Tammemagi L. A study of tuberculosis like lesions in cattle slaughtered in Queensland meatworks. // Austral. Veter. J. - 1973. - v. 49. - №11. - P. 507 -511.

275. Telenti A., Marchesi F., Balz M., Bally F., Bottger E., Bodmer T. Rapid identification of mycobacteria to the species level by polymerase chain reaction and restriction enzyme analysis. // J. Clin. Microbiol.-1993.-V.31.-P.175-178.

276. Thierry D., Brisson-Noel A., Levy-Frebault V., Nguyen S., Guesdon J., Giequell B. Characterization of a Mycobacterium tuberculosis insertion sequence, IS 6110, and its application in diagnosis. // J. Clin. Microbiol.-1990.-v.28.-P.2668-2673.

277. Thierry D., Chureau C., Aznar C. The detection of Mycobacterium tuberculosis in uncultured clinical specimens using the polymerase chain reaction and a non-radioactive DNA probe. //Mol.Cell.Probes.-1992.-v.6.-P. 181-191.

278. Vidal C. Glycerol and carlonhydrate utilisation. // J. of bacteriology, Amer. Rev. Tuberc. 1934. - №30. - P. 343 - 344.

279. Vitale F., Capra G., Maxia L., Rëale S., Vesco G., Caracappa S. Detection of Mycobacterium tuberculosis complex in cattle by PCR using milk, lymph node aspirates, and nasal swabs. //J. Clin. Microbiol.-1998.-v.36.-№4.-P. 1050-1055.

280. Weber A., Lutz H., Bauer K. Zur erkennung von Mycobacterium bovis -reinbektionen in rinder bestanden. // Berl u munch Tierztl. Wschr. 1938. - v. 101,-№9.-P. 302-307.

281. Wilson S., McNerney R., Nye P., Godfrey-Faussett P., Stoker N., Voller A. Progress toward a simplified polymerase chain reaction and its application to diagnosis of tuberculosis. //J. Clin. Microbiol.-1993.-v.31.-P.776-782.

282. Winship P. An improved method for directly sequencing PCR amplified material using dimethyl sulphoxide. //Nucleic Acids Res.-1989.-v.17.-P.1266-1268.

283. Wood P., Corner L., Rothel J. A field evaluation of serological and cellular diagnostic tests for bovine tuberculosis. // Austral. Veter. J. 1991. - vol. 68. - № 9. - P. 286 - 290.к1. Утверждаю»инистерство1. ЗСОГО ХОЗЯЙСТВАудовольствия

284. ПЦР применяют при постановке диагноза на туберкулез в случае, если у кивотных на вскрытии не обнаруживают характерных для этой болезни изменений и для определения видовой принадлежности выделенных микобактерий.

285. Отбор и доставка материала в ветеринарную лабораторию

286. Парные лимфоузлы берут с обеих сторон туши (трупа) животного.

287. Лимфатические узлы, не имеющие при прощупывании очагов уплотнения, направляют в лабораторию целиком, без надрезов.

288. Носовую слизь отбирают ватным тампоном с помощью профламбированного пинцета, погружая его глубоко в левую и правую ноздри животного. Затем тампон помещают в пенициллиновый флакон или в пробирку, обработанные в соответствии с п. 3.1. Наставления.

289. Молоко сдаивают по 10-20 мл из всех четвертей вымени в один флакон, обработанный по п.3.1., и закрывают резиновой пробкой.

290. Материал направляют в ветеринарную лабораторию в свежем или замороженном виде. При необходимости замораживания молока флакон заполняют не более чем на V* объема.

291. Лимфоузлы и паренхиматозные органы могут быть направлены в лабораторию законсервированными 30%-ным раствором глицерина.

292. Подготовка материала в ветеринарной лаборатории

293. При подготовке материала для исследования в ПЦР необходимо соблюдение условий, исключающих возможность механической контаминации его возбудителем туберкулеза и его фрагментами и получения по этой причине ложноположитель-ных результатов реакции.

294. Инструментарий (ножницы, пинцеты и т.п.) фламбируют над пламенем горелки. Ступки, пестики после стерилизации кипячением или автоклавйрованием фламбируют с помощью ватного тампона, смоченного спиртом.

295. Фламбирование каждого лимфоузла или кусочка паренхиматозного органа проводят не менее четырех раз.

296. При фламбировании биоматериала соблюдают меры противопожарной безопасности.

297. Молоко центрифугируют при 3-4 тыс. обор. мин. в течение 15-20 минут и 0,40,5 мл осадка переносят в пробирку для ПЦР.

298. Таким образом из материала каждого животного получают две пробы для ПЦР, и от дойных коров третью пробу - молоко.

299. Оставшийся в лаборатории исходный материал в виде суспензии ткани и осадка молока хранят в замороженном виде до окончания исследования.

300. Для идентификации выделенного возбудителя в лабораторию (подразделение) ПЦР-диагностики направляют колонию культуры, снятую с питательной среды и помещенную в пробирку для ПЦР.

301. Пробы материала в пробирках для ПЦР с указанием на них номера животного, направляют с сопроводительным документом в лабораторию (подразделение) ПЦР-диагностики в свежем или замороженном виде.4

302. В лаборатории (подразделении) ПЦР-диагностики ПЦР-анализ проводят в соответствии с действующим наставлением по применению тест-системы для обнаружения и дифференциации М.Ьо\аз и М.ШЬегки1о$15.

303. Заключение по результатам ПЦР.

304. При положительном результате ПЦР животное считают зараженным возбудителем туберкулеза.

305. Отрицательный результат анализа указывает на отсутствие в исследуемых образцах ДНК МЬошв или М.й1Ьегки1о818.1. Г,

306. ШНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ

307. РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ1. ПРИКАЗг ' №1. Москва

308. О проведении широкого производственного испытания метода диагностики туберкулёза у крупного рогатого скота с применением полимераз-ной цепной реакции (ПЦР).

309. В опытах использовать тест системы ПЦР ВГНКИ - ЦНИИЭ и НПО "Нарвак" .

310. Испытания провести в соответствии с прилагаемой программой под эганизационным руководством ЦНМВЛ и под методическим руководством ГНКИ (д.в.н. Шаров А.Н., к.в.н. Ерошенко Л.А.)

311. Управлениям ветеринарии указанных областей, республики и края беспечить проведение испытания нового метода диагностики туберкулёза.

312. НПО "Нарвак" и ВГНКИ обеспечить тест системами согласно заявке Департамента ветеринарии на 1999 г. Государственную Курскую биофабрику и етлаборатории субъектов федерации, указанных в п. 1 приказа.

313. ЦНМВЛ и ВГНКИ представить результаты испытания в Департамент ■етеринарии Минсельхозпрода РФ к 1 апреля 2001 года.руководитель департамента $етеринарии1. ЖДАЮ:гель Департамента ветеринарии1. В.М. Авилов1999 г.

314. Программа широкого производственного испытания метода диагностики туберкулёза крупного рогатого скота с применением полдимеразной цепной реакции.п/п Вид работы Срок выполнения Исполнители

315. Проведение семинара по диагностике туберкулёза у крупного рогатого скота с применением ПЦР июнь 1999 г. ЦНМВЛ, ВГНКИ

316. Проверка готовности отделов ПЦР диагностики к проведению испытания июнь июль 1999 г. ЦНМВЛ, ВГНКИ

317. Обеспечение отделов ПЦР диагностики тест - системами ПЦР июнь 1999г. февраль -март 2000 г. АО "Росагро биопром"

318. Исследование материала культуральным, биологическим методами и в ПЦР. Идентификация выделенных культур в ПЦР В течение 1999 и 2000 г.г. сразу после поступления Республикан екая, краевая, областные лаборатории, Курская б/ф.

319. Проверка хода выполнения работ в лабораториях Ежекварталь но в 1999 -2000 г.г, ЦНМВЛ, ВГНКИ