Динамика естественного отбора опухолевых клеток in vivo при локальном росте и диссеминации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат биологических наук Дьякова, Наталья Анатольевна

• Дьякова, Наталья Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Дьякова, Наталья Анатольевна

Введение

I. Фенотипические изменения опухолевых клеток при прогрессии опухоли in vivo (обзор литературы)

1.1. Клональная эволюция опухоли

1.2. Отбор опухолевых клеток в организме при формировании опухоли, 10 диссеминации и метастазировании

1.3. Влияние эффекторов системы естественного иммунитета 15 организма на отбор опухолевых клеток in vivo

1.4. Связь отбора опухолевых клеток по НР-фенотипу с изменениями 23 их злокачественных свойств

1.5. Некоторые механизмы защиты опухолевых клеток 27 от эффекторов естественного иммунитета

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Динамика естественного отбора опухолевых клеток in vivo при локальном росте и диссеминации»

Термин «прогрессия опухоли», впервые использованный в 1935г. Пейтоном Раусом для описания процесса развития опухолей «от плохого к худшему» подразумевает ряд изменений злокачественных свойств опухолевых клеток, возникающих при их росте in vivo. Анализ этого процесса в работах Фулдса (1954) свидетельствовал о независимости развития признаков прогрессии, в частности таких, как усиление туморогенной (ТГА) и возникновение спонтанной метастатической активностей (СМА), снижение гормонозависимости (для гормонозависимых опухолей) и изменения в уровне дифференцировки. Ни один из этих признаков не является дискретным, и каждый представляет сложную многокомпонентную систему, варьирующую качественно и количественно. Было установлено, что процесс канцерогенеза носит многоступенчатый характер и связан с возникновением и накоплением различных мутаций, в т.ч. обеспечивающих редкие варианты опухолевых клеток (ОК) селективными преимуществами для выживания и роста in vivo.

Исследования процесса канцерогенеза в последние 20 лет были в основном сосредоточены на определении роли онкогенов, генов-супрессорог, и генов, участвующих в репарациях ДНК и регуляции апоптоза при опухолевой трансформации нормальных клеток. Меньшее внимание было уделено исследованию процесса отбора злокачественных вариантов опухолевых клеток in vivo, дискретных характеристик, которые определяют их селективные преимущества in vivo и роли эффекторов противоопухолевого иммунитета в этом процессе. Очевидно, что проблема взаимоотношений опухолевых клеток с системой противоопухолевого иммунитета организма хозяина включает следующие основные аспекты: (1) защита хозяина, т.е. механизмы распознавания и элиминации мутантных, трансформированных и опухолевых клеток эффекторами системы врожденного противоопухолевого иммунитета (и специфического противоопухолевого иммунитета в случае антигенных опухолей); (2) механизмы защиты трансформированных и опухолевых клеток против эффекторов системы врожденного противоопухолевого иммунитета; (3) влияние селективного давления врожденного и специфического противоопухолевого иммунитета хозяина на прогрессию опухоли.

Иммунологические взаимоотношения опухолевых клеток с нормальным клеточным микроокружением in vivo основаны на способности эффекторов системы естественного иммунитета хозяина /макрофагов (Мф), дендритных клеток, нейтрофилов и НК клеток/ распознавать и элиминировать опухолевые клетки. При этом значительное число трансформированных клеток погибает путем апоптоза, вызванного различными сигналами, в том числе цитотоксической активностью (ЦТА) этих эффекторов. Моноклональный характер первичных опухолей свидетельствует о том, что для роста in vivo отбираются редкие варианты опухолевых клеток, обладающие (в числе других) различными механизмами преодоления ЦТА эффекторов системы естественного иммунитета хозяина.

Исследование отобранных in vivo высоко-злокачественных вариантов опухолевых клеток по сравнению с их трансформированными in vitro предшественниками демонстрирует усиление туморогенной активности (ТГА), сопровождаемое, или не сопровождаемое спонтанной метастатической активностью (СМА), а также ряд других новых характеристик. Среди них важно отметить повышение резистентности опухолевых клеток к цитотоксической активности макрофагов, НК клеток и нейтрофилов.

Механизмы защиты опухолевых клеток против эффекторов системы естественного иммунитета хозяина и их роль в выживании опухолевых клеток in vivo, естественном отборе и прогрессии опухолей являются областью основных интересов и экспериментальных исследований лаборатории противоопухолевого иммунитета НИИ Канцерогенеза РОНЦ РАМН на протяжении более 20 последних лет. В ходе исследования этих вопросов были получены данные о дискретных фенотипических отличиях /маркерах/, закономерно приобретаемых опухолевыми клетками при отборе in vivo по сравнению с их предшественниками /клетками, трансформированными in vitro/, не проходившими отбора in vivo. Основной подход в этих исследованиях состоял в прослеживании процесса опухолевой прогрессии, начиная с трансформации нормальных клеток Сирийского хомяка in vitro (или in vivo) различными онкогенами, онкогенными вирусами или спонтанно, с последующим естественным отбором их потомков in vivo и приобретением ими злокачественного фенотипа. Этот подход позволяет исследовать прогрессию индивидуальных опухолей in vivo в динамике и идентифицировать те дискретные изменения опухолевых клеток, которые регулярно возникают при злокачественном их развитии, т.е. вторичные фенотипические изменения опухолевых клеток, характерные для прогрессии опухоли. Так впервые было обнаружено, что в процессе подкожного роста и прогрессии опухолей in vivo из клеток, исходно трансформированных in vitro, регулярно отбираются варианты, обладающие двумя новыми дискретными биохимическими свойствами, существенными для защиты опухолевых клеток против эффекторов системы естественной резистентности. Эти свойства: (1) высокий уровень антиоксидантной, Н202-катаболизирующей активности (Н202СА), позволяющей клеткам нейтрализовать повреждающее воздействие реактивных форм кислорода, продуцируемых Мф; и (2) способность к выбросу простагландина Е2 типа (PGES) при контактном сигнале НК клеток, ведущему к подавлению ЦТА НК клеток. Показано, что эти свойства опухолевых клеток возникают в процессе их отбора in vivo одновременно и экспрессируются как кластер признаков, лд о обозначенный [Н202 +PGE ]-фенотип (сокращенно - HP-фенотип) (Deichman et al., 1989а).

Полученные данные свидетельствовали о возможности использовать НР-фенотип в качестве маркера определенной, относительно ранней (предметастатической) стадии опухолевой прогрессии. Исключительные селективные преимущества опухолевых клеток, связанные с приобретением ими HP-фенотипа, т.е. способности защищаться против эффекторов системы естественной резистентности, обязательный характер приобретения этих свойств в процессе опухолевой прогрессии и связь с туморогенностью, составляют уникальность описанного фенотипа по сравнению со многими другими вторичными изменениями опухолевых клеток, возникающими в процессе опухолевой прогрессии in vivo.

Целью нашей работы являлось определение скорости отбора in vivo опухолевых клеток различной этиологии /первичных и перевиваемых/ при их подкожном росте и диссеминации, используя в качестве маркера НР-фенотип.

При выполнении данной работы мы поставили перед собой следующие задачи:

1) определение скорости отбора in vivo по НР-фенотипу опухолевых клеток, трансдуцированных различными онкогенами;

2) изучение динамики естественного отбора опухолевых клеток при первичном вирусном канцерогенезе;

3) сравнение скорости отбора опухолевых клеток при подкожном росте и при их естественной и искусственной диссеминации.

Полученные результаты могут способствовать лучшему пониманию мало изученного вопроса о динамике процесса отбора при прогрессии опухолевых клеток in vivo в условиях их локального роста и диссеминации.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ В ДИССЕРТАЦИИ

ОК - опухолевые клетки;

ТГА - туморогенная активность;

СМА - спонтанная метастатическая активность;

ЭМА - экспериментальная метастатическая активность; в/в - внутривенный; и/к - подкожный;

Мф - макрофаги;

НК-клетки - натуральные (естественные) киллеры; ЦТА - цитостатическая активность; ЦТД - цитотоксическое действие; 125ПЛЖ - 125йоддезоксиуридин;

Н202СА - катаболизирующая перекись водорода активность опухолевых клеток; Н202к - резистентность опухолевых клеток к перекиси водорода; о

РОЕ - способность опухолевых клеток к выбросу простагландина Е2; НР-фенотип - [Н202са+РСЕ8]-фенотип

I. ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК

Заключение диссертации по теме «Онкология», Дьякова, Наталья Анатольевна

ВЫВОДЫ:

Показана возможность использования в качестве маркера ранней /предметастатической/ стадии опухолевой прогрессии in vivo ранее описанного в лаборатории HP-фенотипа, закономерно приобретаемого опухолевыми клетками in vivo. Разработана стандартная схема отбора опухолевых клеток Сирийского хомяка in vivo по HP-фенотипу при их локальном росте и диссеминации;

Впервые показано, что в процессе трансформации клеток in vitro, спонтанной или вызванной онкогенами Ha-ras, myc, р53175 и bcl-2, они не приобретают экспрессию HP-фенотипа; однако их рост in vivo сопровождается естественным отбором клеточных вариантов, экспрессирующих НР-фенотип; Установлено, что скорость отбора трансформированных клеток in vivo в подкожно растущих опухолевых узлах по HP-фенотипу была одинаковой для большинства исследованных трансформантов и коррелировала с существенным усилением их туморогенной активности. Исключением явились клетки Ьс1-2-трансформантов, скорость отбора которых по HP-фенотипу, как и по туморогенности, была существенно замедлена;

Впервые показано, что при первичном вирусном канцерогенезе индуцированном вирусами SV40 и SA7(C8) на новорожденных Сирийских хомяках, возникновение и отбор вариантов опухолевых клеток, экспрессирующих НР-фенотип, происходят во время латентного периода. Этот процесс может быть завершен к моменту появления пальпируемой опухоли. Минимальные сроки отбора по HP-фенотипу клеток исследованных первичных вирусных опухолей совпадают со сроками отбора in vivo НР-фенотип-экспрессирующих опухолевых клеток, исходно трансформированных различными агентами in vitro;

Показано, что скорость возникновения и отбора вариантов опухолевых клеток, экспрессирующих НР-фенотип, при их естественной и искусственной диссеминации ускоряется десятикратно; исключение составляют клетки bcl-2-трансформантов, скорость отбора которых при диссеминации, как и в условиях локального роста опухоли, существенно замедлена. Рассматривается связь такого замедления с антиапоптозной активностью продукта гена bcl-2.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Дьякова, Наталья Анатольевна, 2002 год

1. Дейчман Г.И. (1979) Современные концепции иммунологических взаимоотношений опухоли и организма. Глава в кн. «Опухолевый рост как проблема биологии развития», Изд. «Наука», Москва, 208-230

2. Дейчман Г.И. (1984) Роль естественной резистентности организма в реакции на возникновение, рост и метастазирование опухоли (обзор литературы). ВИНИТИ. Серия Онкология, 13, 46-97

3. Дейчман Г.И. (2000а) Естественный отбор и ранние изменения фенотипа опухолевых клеток in vivo: приобретение механизмов защиты. Биохимия, 65 (1), 92-111

4. Дейчман Г.И. (20006) Опухолевые антигены и противоопухолевый иммунитет. «Канцерогенез». Коллективная монография. Изд. Научный мир. 308-330

5. Дейчман Г.И., Вендров Е.Л. (1985) Резистентность опухолевых клеток к перекиси водорода как фактор отбора in vivo высокоместатических клеточных вариантов. ДАН СССР, 284, 6, 1510-1513

6. Дейчман Г.И., Кашкина Л.М., Матвеева В.А., Дьякова H.A., Уварова Э.Н. (2001) Фенотипические различия между трансформированными in vitro и опухолевыми клетками: ранние стадии естественного отбора in vivo Вестник РОНЦ (юбилейный выпуск), 3, 16-24

7. Дейчман Г.И., Капшева Е.А. (1987) Чувствительность к перекиси водорода и выживаемость in vivo клеток сирийского хомяка, трансформированных in vitro вирусом саркомы Рауса. ДАН СССР, 292, 2, 473-476

8. Дейчман Г.И., Ключарёва Т.Е., Кашкина Л.М., Матвеева В.А., Теплова М.А., Вендров Е.Л. и Земцова В.А. (1981) Подавляющая резистентность активность трансформированных клеток сирийского хомяка и их способность к метастазированию. БЭБ и М, 11, 596-598

9. Кашкина Л.М., Прилуцкая М.О., Горожанская Э.Г., Михаевич О.Д., Кушлинский Н.Е. и Дейчман Г.И. (1996) Антиоксидантная защита отобранных in vivo высоко- и низкозлокачественных вариантов опухолевых клеток сирийского хомяка. ДАН, 351, 5,

10. Ключарева Т.Е., Матвеева В.А. (1983) Характеристика нормальных киллеров (НК-клеток) и особенности цитотоксического теста у сирийских хомяков. БЭБиМ, XCVI, 10, 86-88

11. Ключарева Т.Е., Матвеева В.А. (1985) Характеристика НК-клеток у сирийских хомяков носителей опухолей с различной метастатической и резистентность подавляющей активностью. БЭБ и М, XCIX, 6, 732-734

12. Ключарева Т.Е., Матвеева В.А. (1987) Способ определения способности клеток секретировать простагландин Е в среду культивирования. Авторское свидетельство № 1529125

13. Ключарева Т.Е., Матвеева В.А. и Уварова Э.Н. (1990) Чувствительность опухолевых клеток к цитостатическому действию НК-клеток и их способность к выбросу простагландинов E-типа. БЭБ и М, 9, 308-310

14. Ключарева Т.Е., Матвеева В.А., Бассалык A.C. и Кушлинский Н.Е. (1988) Секреция простагландинов типа Е (ill Е) опухолевыми клетками сирийского хомяка при их контакте in vitro с естественными кипллерами. БЭБ и М, CV, 2, 204-205

15. Лавникова Н.А., Бурделя Л.Г. (1990) Чувствительность клеток различной степени злокачественности к цитотоксическому действию резидентных перитонеальных макрофагов сирийских хомяков. БЭБ и М, 7, 83-85

16. Матвеева В.А. (2001) Выброс простагландина Е2 опухолевыми клетками человека и сирийского хомяка и их чувствительность к цитостатической активности естественных киллеров. БЭБ иМ, 131,2, 191-194

17. Матвеева В.А., Ключарева Т.Е. и Уварова Э.Н. (1993) Динамика секреции и ингибиции простагландинов Е (ПГЕ) в опухолевых клетках при их контакте с НК-клетками in vitro. БЭБ и М, 2, 193-194

18. Пирогов А.В., Аббасова С.Г., Дьякова Н.А., Кушлинский Н.Е. и Дейчман Г.И. (2002) Изменения в соотношении мембраносвязанной и растворимой форм CD95 (Fas) при отборе опухолевых клеток in vivo. Биохимия, 67 (2), 286-292

19. Adams DO, Johnson WJ and Marino PA (1982) Mechanisms of target recognition and destruction in macrophage-mediated tumor cytotoxicity. Fed. Proc., 41, 22122221

20. Adams DO, Nathan CF (1983) Molecular mechanisms in tumor-cell killing by activated macrophages. Immunology Today 4: 165-170

21. Aebi H (1984) In: Methods of Enzymatic Analysis 2, 673-684

22. Alexander P (1977) Innate host resistance to malignant cells not involving specific immunity. In: SB Day et. al (eds), Cancer Invasion and metasis: biological mechanisms and therapy, 259-275. Raven press, NY

23. Alexander P, Eccles S (1984) Host-mediated mechanisms in the elimination of circulating cancer cells. In: Cancer Invasion and Metastasis: Biological and

24. Therapentic Aspects. G.L. Nicolson and L. Milas (Eds). Raven Press N.Y. pp.293308

25. Alstrom CG (1964) Neoplasms in mammals induced by Rous chiken sarcoma material. Natl. Cancer Inst. Monograph, 17,299-317

26. Alterman AL, Fornabaio DM and Stackpole CW (1985) Metastatic dissemination of B16 melanoma: pattern and sequence of metastasis. J. Natl. Cancer Inst., 75, 691-702

27. Amber IJ, Hibbs JB, Taintor RR and Vavrin Z (1988) Cytokines induce an L-arginine-dependent effector system in nonmacrophage cells. J. Leukoc. Biol., 44, 58-65

28. Aslakson CJ, Miller FR (1992) Selective events in the metastatic process defined by analysis of the sequential dissemination of subpopulations of a mouse mammary tumor. Cancer Res., 52, 1399-1405.

29. Balaban GB, Herlyn M, Clark WH and Nowell PC (1986) Karyotypic evolution in human malignant melanoma. Cancer Genet Cytogenet. 19(1-2): 113-22.

30. Bishop JM (1991) Molecular themes in oncogenesis. Cell.64(2):235-48

31. Boon T, Cerrottini J-C, Van den Eynde B, Van den Bruggen P and Van Pel A (1994) Tumor antigens recognized by T lymphocytes Ann. Rev. Immunol., 12, 337-365

32. Brunda MJ, Herberman RB and Holden H.T. (1980) Inhibition of murine natural killer cell activity by prostaglandins. J.Immunol., 124,2682-2687

33. Burdelya LG (1997) Growth-regulating influence of non-activated resident macrophages on transformed and tumor cells in the in vitro contact interactions. Neoplasma, 44, 1, 31-35

34. Burdelya LG, Grosheva IA, Dyakova NA and Deichman GI (1998) Nonactivated macrophage-induced nitric oxide production by tumor cells differing in tumorigenic and spontaneous metastatic activities. Tumor Biology, 19, 5, 346-355

35. Cascino I, Fiucci G, Papoff G and Ruberti G. (1995) Three functional soluble forms of the human apoptosis-inducing Fas molecule are produced by alternative splicing. J. Immunol., 154, 2706-2713.

36. Cheng J, Zhou T, Liu C, Shapiro JP, Brauer MJ, Kiefer MC, Barr PJ and Mountz JD (1994) Protection from Fas-mediated apoptosis by a soluble form of the Fas molecule Science, 263, 1759-1762.

37. Cifone MA, Fidler IJ (1981) Increasing metastatic potential is associated with increasing genetic instability of clones isolated from murine neoplasms. PNAS, 78, 11,6949-6952

38. Deichman GI (1983) Host natural resistance and experimental carcinogenesis. В кн. "Modulators of experimental carcinogenesis". IACR, Lyon, Eds. Turusov V. and Montesano R., 113-122

39. Deichman GI (1988) Natural host resistance and in vivo selection of malignant tumor cells. Cancer Surveys, 7, 4, 675-690

40. Deichman GI (2002) Early phenotypic changes of in vitro transformed cells during in vivo progression: possible role of the host innate immunity. В кн. "Seminars of Cancer Biology", Academic Press (в печати)

41. Deichman GI, Matveeva VA, Kashkina LM, Dyakova NA, Uvarova EN, Nikiforov MA and Gudkov AV (1998) Cell transforming genes and tumor progression: in vivo unified phenotypic secondary cell changes. Int.J.Cancer, 75, 2, 277-283

42. Deichman GI, Vendrov EL (1986) Characteristics of in vitro transformed cells essential for their in vivo survival, selection and metastasizing activity. Int. J. Cancer, 37, 401-409

43. DePinho RA (2000) The age of cancer. Nature, 408, 248-254.

44. Droller M, Schneider M and Perlman P. (1979) A possible role of prostaglandins in the inhibition of natural and antibody dependent cell-mediated cytotoxicity against tumor cells. Cell Immunol., 39, 165-177

45. Dyson N, Bulkovich K, Whyte P and Harlow E (1989) Cellular proteins that are targetted by DNA tumor viruses for transformation. Princess Takamatsu Symp., 20, 191-198

46. Fearon ER, Volgenstein B (1990) A genetic model for colorectal tumorigenesis. Cell. 61, 5, 759-767

47. Fidler IJ (1970) Metastasis: quantitative analysis of distribution and fate of tumor emboli labeled with I-5-Iodo-2'-deoxyuridine. J. Natl. Cancer Inst., 45, 773-782.

48. Fidler IJ (1978) Tumor Heterogeneity and the Biology of Cancer Invasion and Metastasis. Cancer Res., 38, 2651-2660

49. Fidler IJ (1990) Critical factors in the biology of human cancer metastasis: twenty-eighth GHA Clowes memorial award lecture. Cancer Res., 50, 6130-6138.

50. Fidler IJ, Kripke ML (1977) Metastasis results from preexisting variant cells within a malignant tumor. Science, 197, 4306, 893-895

51. Fidler IJ, Poste G (1982) Macrophage-mediated destruction of malignant tumor cells and new strategues for the therapy of metastatic disease. Spr. Sem Immun., 5, 161-174

52. Fischel R, Lescoe MK, Rao MRS, Copeland NG, Jenkins NA, Garber J, Kane M and Kolodner R (1993) The human mutator gene homolog MSH2 and its association with hereditary nonpolyposis colon cancer. Cell, 75, 1027-1038.

53. Flint J, Shenk T (1997) Viral transactivating proteins. Annu Rev Genet., 31, 177212

54. Foulds L (1954) Tumor progression. Cancer Res., 17, 355-356.

55. Fulton AM (1984) Effects of indomethacin on the growth of cultured mammary tumors Int.J.Cancer, 33, 375-379

56. Glaves D (1983) Correlation between circulating cancer cells and incidence of metastases. Br. J. Cancer, 48, 665-673.

57. Glaves D (1986) Intravascular death of disseminated cancer cells mediated by superoxide anion. Inv. Metast., 6, 101-111

58. Gorelik E, Feldman M and Segal S (1982) Selection of 3LL tumor subline resistant to natural effectors cells concomitantly selected for increased metastatic potency Cancer Immunol, and Immunother., 12, 105-109

59. Gronberg A, Kisseling R, Ericksson E and Hannson M (1981) Variants from a MLV-induced lymphoma selected for decreased sensitivity to NK lysis. J. Immunol, 127, 1734-1739

60. Hahn WC, Counter CM, Lundberg AS, Behersbgarn RL, Brooks MW and Wamberg RA (1999) Creation of human tumor cells with defined genetic elements. Nature, 400, 464-468.

61. Hamilton TA, Adams DO (1987) Molecular mechanisms of signal transduction in macrophages. Immunol. Today, 8, 151-158

62. Hanahan D, Weinberg RA (2000) The Hallmarks of Cancer. Cell, 100, 57-70

63. Hanna N (1982) Role of natural killer cells in control of cancer metastasis. Cane. Metast. Rev., 1, 45-64

64. Hanna N, Burton RC (1981) Definite evidence that natural killer (NK) cells inhibit experimental tumor metastasis in vivo. J.Immunol, 127, 1754-1758

65. Hart IR, Fidler IJ (1980) Cancer invasion and metastasis. Q Rev Biol., 55, 2, 121142

66. Hooper ML (1998) Tumour suppressor gene mutations in humans and mice: parallels and contrasts. EMBO J., 17, 23, 6783-6789

67. Hoppe-Seyler F, Butz K (1995) Molecular mechanisms of virus-induced carcinogenesis: the interaction of viral factors with cellular tumor suppressor proteins. J Mol Med., 73, 11, 529-538

68. Hunter T (1997) Oncoprotein networks. Cell, 88, 3, 333-346

69. Kanner SB, Parsons SJ, Parsons JT and Gilmer TM (1988) Activation of pp60c-src tyrosine kinase specific activity in tumor-derived Syrian hamster embryo cells. Oncogene, 2, 327-335

70. Kinzler K, Vogelstein B (1996) Lessons from hereditary colorectal cancer. Cell, 87, 159-170.

71. Kirsh R, Poste G (1986) Macrophage-mediated tumor cell destruaction: opportunities for treatment of metastatic disease. In: CM Chadwick (ed), Receptors in tumor biology, 34-57 Cambrige Univer. Press, Canbrige

72. Klein E (1955) Gradual transformation of solid into ascites tumors. Evidence favouring mutation-selection theory. Exp. Cell Res., 8, 188-212

73. Klein E, Mantovani A (1993) Action of natural killer cells and macrophages in cancer. Current Opinion in Immunology, 5, 714-718

74. Klein G (1998) Foulds' dangerous idea revisited: the multistep development of tumors 40 years later. Adv Cancer Res., 72, 1-23

75. Klein G, Klein E (1985) Evolution of tumours and the impact of molecular oncology. Nature, 315, 6016, 190-195

76. Kluchareva TE, Matveeva VA and Kushlinsky NE (1992) In vitro bioassay for type E prostaglandins based on their NK immunodepressing activity. Imm. Lett., 33, 3, 239-246

77. Koch FE (1939) Krebsforsch., 48, 495-505

78. Levine AJ (1993) The tumor suppressor genes. Annu Rev Biochem., 62, 623-651

79. Liotta LA, Kleinerman J and Saidel GM (1974) Quantitative relationships of intravascular tumor cells, tumor vessels and pulmonary metastases following tumor implantation. Cancer Res., 34, 997-1004.

80. Loeb LA (2001) A mutator phenotype in cancer. Cancer Res., 61, 3230-3239.

81. Nathan CF, Arrick BA, Murray HW, De Santis NM and Cohn ZA (1981) Tumor cell antioxidant defences. Inhibition of the glutathione redox cycle enhances macrophage-mediated cytolysis. J.Exp.Med., 153, 766-782

82. Nathan CF, Cohn ZA (1981) Antitumor effects of hydrogen peroxide in vivo. J. Exp. Med., 154, 1539-1553

83. Nathan CF, Silverstein SC, Brukner LH, Cohn ZA (1979) Extracellular cytolysis by activated macrophages and granulocytes. II. Hydrogen peroxide as a mediator of cytotoxicity. J.Exp.Med., 149, 100-113

84. Naylor SL, Johnson BE, Minna JD, Sakaguchi AY (1987) Loss of heterozygosity of chromosome 3p markers in small-cell lung cancer. Nature, 329, 6138, 451-454

85. Nicolson GL (1984) Generation of phenotypic diversity and progression in metastatic tumor cells. Cancer Metastasis Rev., 3, 1, 25-42

86. Nicolson GL (1988) Cancer metastasis: tumor cell and host organ properties important in metastasis to specific secondary sites. Biochim Biophys Acta, 948, 2, 175-224

87. Nolibe D, Popupon MF (1986) Enhancement of pulmonary metastases induced by decrease lung natural killer cell activity. JNCI, 77, 99-103

88. Old LJ (1981) Cancer immunology: the search for specificity~G. H. A. Clowes Memorial lecture. Cancer Research, 47, 261-275

89. Patek PO, Lin Y, Collins JL and Cohn M (1986) In vivo or in vitro selection for resistance to natural cytotoxic cell lysis selected for variants with increased tumorigenicity. J.Immunol., 136, 741-745

90. Plescia OJ, Smith AH and Grenwich K (1975) Subversion of the immune system by tumor cells and the role of prostaglandins. PNAS, 72, 1848-1851

91. Poste G, Fidler IJ (1980) The pathogenesis of cancer metastasis. Nature, 2o3, 5743, 139-146

92. Poste G, Greig R (1982) On the genesis and regulation of cellular heterogeneity in malignant tumors. Invasion Metastasis, 2, 3, 137-176.

93. Price JE, Aukerman SL and Fidler IJ (1986) Evidence that the process of murine melanoma metastasis is sequental and selective and contains stochastic elements. Cancer Res., 46, 5172-5178.

94. Price JE, Carr D and Tarin D (1981) Spontaneous and induced metastasis of naturally occuring tumors in mice: analysis of cell shedding into the blood. J. Natl. Cancer Inst., 73, 1319-1326.

95. Renan MJ. (1993) How many mutations are required for tumorigenesis Implication from human cancer data. Mol. Carcinogenesis, 7,139-146.

96. Riccardi C, Puccetti P, Santoni A and Herberman RB (1979) Rapid in vivo assay of mouse natural killer cell activity. J Natl Cancer Inst., 63, 4, 1041-1045

97. Riccardi C, Santoni A, Barlozzari T, Puccetti P and Herberman RB. (1980) In vivo natural reactivity of mice against tumor cells. Int J Cancer, 15, 25,4, 475-486

98. Scarpa A, Tognon M (1998) Molecular approach in human tumor investigation: oncogenes, tumor suppressor genes and DNA tumor polyomaviruses (review). Int J Mol Med., 1,6, 1011-1023.

99. Schrieber H (1993) Tumor immunology. In: Fundamental Immunology. Third Edition. W.E. Paul (Editor). Raven Press, N.Y. 1143-1178

100. Schröter M, Peli J, Hahne M, Tschopp J and Reichmann E (2000) Fas-dependent tissue turnover is implicated in tumor cell clearance. Oncogene, 19, 1794- 1800.

101. Schultz RM, Pavlidis NA, Stylos WA and Chirigos MA (1978) Regulation of macrophage tumoricidal function: a role for prostaglandins of the E series. Science, 202, 4365,320-321.

102. Sniderman R, Pike MC (1976) An inhibitor of macrophage chemotaxix produced by neoplasms. Science, 192, 370-372

103. Stackpole CW (1981) Distinct lung-colonizing and lung-metastasizing cell populations in B16 mouse melanoma. Nature (Lond.), 289, 798-800.

104. Sugden B (1993) How some retroviruses got their oncogenes. Trends Biochem Sei., 18, 7, 233-235

105. Svoboda J (1964) Malignant interaction of Rous virus with mammalian cells in vivo and in vitro. Natl. Cancer Inst. Monograph, 17, 277-298

106. Talmadge JE and Fidler IJ (1982) Enhanced metastatic potential of tumor cells harvested from spontaneous metastases of heterogeneous murine tumors. J Natl Cancer Inst., 69,4, 975-980

107. Varmus H (1984) The molecular genetics of cellular oncogenes. Annual Rev. Genet., 18, 553-612

108. Volpe EA (1992) Acquisition of a malignant phenotype by low-malignant STHE hamster cells: in vitro selection by activated macrophages. J.Exp.Clin.Cancer Res., 11, 2, 109-122

109. Walker PR, Saas P and Dietrich P-Y (1997) Role of Fas ligand (CD95L) in immune escape: the tumor cell strikes back. J.Immun., 158, 4521-4524

110. Weinberg RA (1995) The molecular basis of oncogenes and tumor suppressor genes. Ann N Y Acad Sci., 758, 331-338

111. Wexler H, Ryan JJ and Ketcham AS (1969) The study of circulating tumor cells by the formation of pulmonary embolic tumor growths in a secondary host. Cancer, 23,946-951

112. Yamashina K, Fulton A and Heppner G (1985) Differential sensitivity of metastatic versus nonmetastatic mammary tumor cells to macrophage-mediated cytostasis. J. Natl. Cancer Inst., 75, 765-770

113. Yokuta J (2000) Tumor progression and metastasis. Carcinogenesis, 21, 497503.

114. Young R, Knies S (1984) Prostaglandin E production by Lewis lung carcinoma: mechanisms for tumor establishment in vivo. J. Natl. Cancer Inst., 72, 919-922