Экспрессия биомаркеров при раке молочной железы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат биологических наук Лукашина, Марина Игоревна

• Лукашина, Марина Игоревна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Лукашина, Марина Игоревна

Введение.

Роль молекулярно-биологических маркеров при раке молочной железы.

Рецепторы стероидных гормонов.

Плоидность.

Пролиферативная активность.

Рецептор эпидермального фактора роста (Нет- 2/пеи).

Взаимосвязь экспрессии Нег-2 пей и гормональной терапии.

Взаимосвязь экспрессии Нег-2/пеи и цитотоксической терапии.

Опухолевый ангиогенез.

Фактор роста эндотелия сосудов (УЕСРа).

Тирозин-киназные рецепторы (УЕОГШ, УЕОРЯ2).

Прогностическое значение 1/ГЕОЕ и его рецепторов.

Тимидин фосфорилаза.

Методы определения биомаркеров.

Материалы и методы исследования.

Результаты исследования.

Иммуногистохимическое исследование.

Сравнение статуса рецепторов эстрогенов, определяемого разными методами.

Сравнение ИГХ и ИЦХ методов определения биомаркеров.

Иммуноцитохимическое исследование.

Исследование содержания ДНК в опухолевых клетках и распределение их по фазам клеточного цикла.

Экспрессия маркеров ангиогенеза в зависимости от плоидности опухолевых клеток и их распределения по фазам клеточного цикла.

Обсуждение.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экспрессия биомаркеров при раке молочной железы»

Актуальность темы исследования

Рак молочной железы (РМЖ) в России, а также в странах Европы и Америки, занимает первое место в структуре онкологических заболеваний среди женщин [Трапезников Н.Н., Аксель Е.М. 1998]. РМЖ является основной причиной смерти женщин в возрасте 15-54 лет. При лекарственной терапии опухолей молочной железы регрессия наблюдается в 50-80% случаев, но остается проблемой достижение полных ремиссий, которые составляют 10-40%, а также резистентность опухолей к проводимой химио- и гормональной терапии.

Исследования по проблеме рака молочной железы занимают одно из ведущих мест в современной онкологической науке. Концентрация усилий в этом направлении привела к тому, что за последние годы существенно расширились представления об особенностях биологии рака молочной железы, идентифицирован ряд характерных генетических изменений. Определение геномных нарушений, определяющих развитие опухоли, степень ее злокачественности, метастатический потенциал и скорость прогрессии, является приоритетной областью молекулярно-генетических исследований в современной онкологии.

В настоящее время активно изучаются различные молекулярно-биологические факторы, которые подвергаются изменениям при развитии и прогрессии злокачественных новообразований, среди них Her-2/neu (c-erbB-2), Ki-67, BCL-2, р53 и др. Исследование этих параметров, изучение их роли в канцерогенезе, возможно, позволили бы прогнозировать течение заболевания, определять отдаленные результаты, а также предсказать ответ на цитотоксическую и гормональную терапию.

При РМЖ амплификация Her-2/neu гена и/или гиперэкпрессия его белковых продуктов наблюдается в 20 - 40% случаев [Press MF et al 1993, Charpin С et al 1997, Ross JS et al 1998, Depowski PL et al 1998]. Гиперэкспрессия Her-2/neu ассоциируется с более агрессивным течением опухолей молочной железы, повышенным пролиферативным потенциалом опухолевых клеток, утратой рецепторов эстрогена и прогестерона [Zafrani В et al 1994, Bobrow WLG et al 1995, Bose S et al 1996, Mack L et al 1997, Hardy-Bessard AC et al 1998]. Гиперэкспрессия Her-2/neu может быть перспективным маркером эффективности химиотерапии.

В ряде работ было показано, что при неоадъювантной терапии выявлялось значительное снижение пролиферативной активности без изменения других показателей [Bottini A et al, 1996, 1998], установлена корреляция уровня Ki-67 и гистологической степени злокачественности опухоли [van Slooten et al, 1998; Jeziorski A et al, 2000; Taniguchi E et al, 2000]. Пролиферативная активность опухолевых клеток может использоваться как прогностический фактор.

В последнее время большой интерес представляет изучение опухолевого ангиогенеза. Этот процесс инициируется увеличением уровня экспрессии определенных ангиогенных факторов и, соответственно, снижением количества ингибиторов ангиогенеза. Различные исследования подтвердили, что степень ангиогенеза связана со способностью опухолевых клеток к местному росту и отдаленному распространению [Folkman J. 1990, Weidner N. et al 1991, Ferrara N. Et al 1995]. Оценка экспрессии ангиогенных маркеров в опухолевой ткани также может служить прогностическим и предсказывающим маркером.

Чаще всего для исследования биомаркеров применяют иммуногистохимический метод, предусматривающий использование достаточно большого объема опухолевой ткани. Однако у ряда пациентов по социальным или техническим причинам получение клинического материала, необходимого для гистологического исследования, не представляется возможным. В качестве альтернативы иммуногистохимическому методу может быть рассмотрен иммуноцитохимический метод определения экспрессии молекулярно-биологических маркеров.

Целью настоящего исследования является изучение прогностической роли молекулярно-биологических маркеров при раке молочной железы; оценка возможности использования иммуноцитохимического метода определения молекулярно-биологических маркеров в сравнении с иммуногистохимическим методом.

Задачи исследования

1. Определить экспрессию молекулярно-биологических маркеров (Нег-2/пеи, Кл-67, УБОИН (БМ), УЕОРК2(Р1к1Ж1Ж), тимидин фосфорилазы, рецепторов эстрогенов) иммуногистохимическим методом на архивном материале.

2. Определить экспрессию молекулярно-биологических маркеров (Нег-2/пеи, Кл-67, рецепторов эстрогенов) иммуноцитохимическим методом на цитологических препаратах (мазках).

3. Провести сравнительный анализ иммуногистохимического и иммуноцитохимического методов определения экспрессии маркеров.

4. Определить содержание ДНК в опухолевых клетках и провести анализ их распределения по фазам клеточного цикла (00/1, 8-, 02+М) с помощью проточной цитофлуориметрии.

5. Провести сравнительный анализ экспрессии маркеров с клинико-морфологическими характеристиками.

Научная новизна и практическая значимость

Дана характеристика экспрессии маркеров, характеризующих пролиферацию и ангиогенез при РМЖ. Проведен: 1) корреляционный анализ экспрессии биомаркеров с клинико-морфологическими характеристиками б опухоли; 2) сравнительный анализ иммуногистохимического (тканевые срезы) и иммуноцитохимического (мазки) методов определения молекулярно-биологических маркеров; 3) анализ сочетания экспрессии биомаркеров с содержанием ДНК в опухолевых клетках, распределением их по фазам клеточного цикла. Полученные данные могут быть использованы для отбора пациентов с неблагоприятным прогнозом течения РМЖ и определения для них адекватной тактики лечения.

Объем и структура диссертации

Материалы диссертации изложены на 137 страницах и состоят из введения, обзора данных литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований (6 глав), обсуждения, выводов и указателя литературы, который содержит 7 отечественных и 189 зарубежных источника. Диссертация иллюстрирована 29 таблицами и 40 рисунками.

Диссертация выполнена в лаборатории экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей (зав. - профессор, доктор медицинских наук А.Ю.Барышников), на базе лаборатории клинической цитологии (зав. -профессор, доктор медицинских наук В.Н.Богатырев) Российского онкологического научного центра им.Н.Н.Блохина РАМН.

Пути практической реализации

Внедрение полученных результатов в клиническую практику предполагается осуществлять через их публикацию в периодической печати.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Лукашина, Марина Игоревна

выводы

1. Обнаружена ко-экспрессия маркеров ангиогенеза (\nEGF, УЕОРШ и УЕОРК2) в ткани РМЖ. В половине случаев обнаруживается ко-экспрессия УЕОБЮ и УЕОРР2, УЕОР112 и УЕОБ - более чем в 70%, а ко-экспрессия всех трех факторов встречается в 36% опухолей молочной железы.

2. Обнаружена обратная корреляция между экспрессией УЕОР в опухолевых клетках и рецепторами эстрогенов (г = -0,26 р<0,05). Экспрессия УЕОБ в опухоли и эндотелии кровеносных сосудов коррелировала с экспрессией Кл-67. Связывание УЕвБ с эндогелиальными клетками улучшало безрецидивную выживаемость больных РМЖ.

3. Экспрессирующие УБОРЮ опухоли чаще были прогестерон-положительными. Положительная экспрессия УЕОРЮ, определяемая в опухоли улучшала безрецидивную выживаемость больных РМЖ после проведенной неоадъвантной химиотерапии (р<0,05). Экспрессия УЕОРКЛ в эндотелии предсказывала лучшую общую выживаемость больных (р<0,05).

4. В опухолях с экспрессией УЕОБК2 независимо от локализации экспрессия Кь67 была выше. Экспрессия УЕОРИ2 в опухоли ухудшала БРВ больных РМЖ (р<0,05).

5. Экспрессия тимидин фосфорилазы в строме чаще ассоциировалась с положительной экспрессией Кл-67, УЕОБопухоли и УЕОР Е12 опухоли и находилась в обратной зависимости с экспрессией УЕОРЮопухоли. Экспрессия ТФ в опухоли ухудшала безрецидивную выживаемость больных РМЖ.

6.Пролиферативная активность и экспрессия Нег-2/пеи в опухоли могут быть использованы как дополнительные маркеры к факторам, показавшим свою значимость на прогноз течения РМЖ.

7.Наиболее часто встречающееся сочетание благоприятных факторов это РЭ(+)-УЕОРсосудов(+)-УЕОРШопухоли(+) обнаружено в 13 случаях из

75, из них в 1 случае установлено прогрессирование заболевания и в 1 случае

111 наступила смерть. Неблагоприятные факторы чаще всего встречаются в следующем сочетании: РЭ(-)-УЕСРК.1 сосудов(-)-УЕОР112опухоли(+)-ТФ опухоли(+). При анализе этих факторов в различных сочетаниях между собой получили примерно одинаковые результаты, а именно: прогрессирование наблюдалось в 50-60% случаев, смерть - в 40-50%.

8.Высокий уровень корреляции существует между иммуногистохимическим (ИГХ) и иммуноцитохимическим (ИЦХ) методами определения молекулярно-биологических маркеров, что позволяет использовать ИЦХ в клинической практике для прогнозирования течения заболевания.

9.Экспрессия УЕОБ в опухолевых клетках ассоциируется с анеуплоидией опухолей, а экспрессия УЕОРЮ в опухолевых клетках - с диплоидным содержанием ДНК.

10. Количество клеток в 8-, 02+М-фазах и индекс пролиферации имеют обратную корреляцию с экспрессией \nEGF и УЕОР112 в эндотелии сосудов, а количество анеуплоидных клеток в тканевых образцах — обратную корреляцию с экспрессией УЕОРШ и \ZEGFR2 на опухолевых клетках.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Лукашина, Марина Игоревна, 2003 год

1. Богатырев В.Н. Значение количественных методов исследования (морфометрии, проточной цитофлуорометрии, сканирующей микрофотометрии) в клинической онкоцитологии. Автореф. дисс. доктора мед. наук. М., 1991. С.42

2. Богатырев В.Н. Прогностическое значение отдельных количественных параметров клеток опухоли. Клиническая лабораторная аналитика, под ред. Меньшикова В.В.//М., 1999. Т.2. - С. 189

3. Двойрин В.В., Аксель Е.М., Трапезников Н.Н. Заболеваемость и смертность от злокачественных новообразований населения России и некоторых других стран СНГ в 1993г. Москва, 1995.

4. Ермилова В.Д. Опухоли и опухолеподобные процессы молочной железы. // Рукововодство по паталогоанатомической диагностике опухолей человека. М.,1993. - Т. 11. - С. 162-198

5. Меньшиков В.В. Клиническая лабораторная аналитика. М., 1999.-Т.2,-187 с.

6. Портной С.М. Рак молочной железы (факторы прогноза и лечение). Автореф. дисс. доктора мед. наук. М., 1997, 40с.

7. Трапезников Н.Н., Аксель Е.М. Статистика рака молочной железы. Новое в терапии рака молочной железы. М.,1998.

8. Ahmed A, Dunk С, Kniss D, Wilkes М. Role of VEGF receptor-1 (Fit-1) in mediating calcium-dependent nitric oxide release and limiting DNA synthesis in human trophoblast cell.// Lab Invest J. 1997. - V.76. - P.779-791.

9. Akiama T, Saito T, Ogavara H et al. Tumor promoter and epidermal growth factor stimulate phosphorylation of c-erbB-2 gene product in human adenocarcinoma cell.//Mol Cell Biol. 1988. - V.8. - P. 1019-1026.

10. Allred DC, Clark GM, Tandon AK et al. HER-2/neu node-negative breast cancer: prognostic significance of overexpression influenced by the presence of in-situ carcinoma.// J Clin Oncol. 1992. - У.10. - P.599-605.

11. Alon T, Hemo I, Itin A et al. Vascular endothelial growth factor acts as survival factor for newly formed retinal vessels and has implication for retinopathy of prematurity.//Nature Med. 1995. - V.l. - P.1024-1028.

12. Anan K, Morisaki T, Katano M et al. Vascular endothelial growth factor and platelet-derived growth factor are potential angiogenic and metastatic factors in human breast cancer.// Surgery. 1996. - V.l 19. - P.333-339.

13. Archer SG, Eliopoulos A, Spandidos D et al. Expression of ras, p21, p53 and c-erbB-2 in advanced breast cancer and response to first line hormonal therapy.// Br J Cancer. 1995. - V.72. - P.1259-1266.

14. AxeIsson K, Ljimg BME, Moore H et al. Tumor angiogenesis as a prognostic assay for invasive ductal breast carcinoma.// J Natl Cancer Inst. -1995. V.87. - P.997-1008.

15. Babiak J., Hugh J., Poppema S. Significance of c-erbB-2 amplification and DNA aneuploidy.// Cancer. 1992. - V.70. - P.770-776.

16. Bacus S.S., Bacus J.W., Slamon D.J. et al. Her-2/neu oncogene expression and DNA ploidy analysis in breast cancer J J Arch. Pathol. Lab. Med. 1990. - V.114. - P.164-169.

17. Bacus S.S., Chin D.M., Stern R.K. et al. Her-2/neu oncogene expression, DNA ploidy and proliferation index in breast cancer.// Anal. Quant. Cytol. Histol. 1992. - V.14. - P.433-445.

18. Barleon B, Sozzani S, Zhou D et al. Migration of human monocytes in response to vascular endothelial growth factor (VEGF) is mediated via the VEGF receptor flt-1.// Blood. 1996. - V.87. - P.3336-3343.

19. Baselga J, Seidman AD, Rosen PP et al. HER-2 overexpression and paclitaxel sensitivity in breast cancer: therapeutic implication.// Oncology. -1997,-V.ll.-P.43-48.

20. Baslev I., Chistensen I.J., Rasmussen B.B. et al. Flow cytometric DNA ploidy defines patients with poor prognosis in node-negative breast cancer. // Int. J. Cancer. 1994. - V.56. -P.16-25.

21. Benz CC, Scott GK, Sarup Johnson RM et al. Estrogen-dependent tamoxifen-resistant tumorigenic growth of MCF-7 cell transfected with HER-2/neu.// Br Cancer Res Treat. 1992. - V.24. -P.85-95.

22. Berger MS, Locher GW, Saurer S et al. Correlation of c-erbB-2 gene amplification and protein expression in human breast cancer with nodal status and nuclear grading.// Cancer Res. 1988. - V.48. - P.1238-1243.

23. Berger MS, Locher GW, Saurer S et al. Correlation of c-erbB2 gene amplification and protein expression in human breast carcinoma with nodal status and nuclear grading.// Cancer Res. 1988. - V.48. - P.1238-1243.

24. Berns EMJJ, Foekens JA, van Staveren IL et al. Oncogene amplification and prognosis in breast cancer: relationship with systemic treatment.// Gene. -1995. V.159.-P.ll-18.

25. Berry DA, Muss HB, Thor AD et al. HER-2/neu and p53 expression versus tamoxifen resistance in estrogen receptor-positive, node-positive breast cancer.// J Clin Oncol 2000. - V.18. - P.3471-3479.

26. Bobrow WLG, Happerfield LC, Gregory WM et al. Ductal carcinoma in-situ: assessment of necrosis in nuclear morphology and their association with biological markers.// J. Pathol. 1995. - V.176. - P.333-341.

27. Borg A, Tandon AX, Sigurdsson H et al. HER-2/neu amplification predicts poor survival in node-positive breast cancer.// Cancer Res. 1990. - V.50. -P.4332-4337.

28. Bose S, Lesser ML, Norton L et al. Immunoplienotype of intraductal carcinoma.// Arch. Pathol. Lab. Med. 1996. - V.120. - P.81-85.

29. Bottini A, Berruti A, Bersiga A et al. Effect of neoadjuvant chemotherapy on Ki67 labelling index, c-erbB-2 expression and steroid hormone receptor status in human breast tumours.// Anticancer Res. 1996. - V.16. - P.3105-3110.

30. Bottini A, Berruti A, Bersiga A et al. P53 expression and reduction in kinetic cell activity predict clinical complete response (CR) to primary chemotherapy in breast cancer (BC) patients.// Ann Oncol. 1998. - V.9. -Supp4. -№210

31. Bozzetti C, Nizzoli R, Naldi N, et al. Fine-needle aspiration technique for the concurrent immunocytochemical evaluation of multiple biologic parameters in primary breast carcinoma.//Breast Cancer Res Treat. 1994. -V.32. - P.221-228.

32. Brower FT, Ahmed S, Tartter P et al. Prognostic variables in invasive breast cancer: Contribution of comedo versus non-comedo in-situ component.// Ann. Surg. Oncol. 1995. - V.2. - P.440-444.

33. Camplejohn R.S. and Macartney J.C. Flow cytometry. In Cell Proliferation in Clinical Diagnosis. Hall P.A., Levison D.A., Wright N.A. (eds) . 1993. - Springer: London. - P.95-111.

34. Camplejohn R.S., Ash C.M., Gillett C.E. et al. The prognostic significance of DNA flow cytometry in breast cancer: results from 881 patients treated in a single center. // Br J Cancer. 1995. - V.71. -P.140-145.

35. Carlomagno C, Perrone F, Gallo C et al. c-erb-B2 overexpression decreases the benefit of adjuvant tamoxifen in early-stage breast cancer without axillary lymph node metastases. J Clin Oncol. 1996. - V.14. - P.2702-2708.

36. Charpin C, Garsia S, Bouvier C et al. C-erbB-2 oncoprotein detected by automated quantitative immunocytochemistry in breast carcinomas correlate with patients' overall and disease-free survival.// Br J Cancer. 1997. -V.75. -P.1667-1673.

37. Clark G.M., Dressier L.G., Owens M.A. et al. Prediction of relapse or survival in patients with node-negative breast cancer by DNA flow cytometry. // N Engl J Med. 1989. - V.320. - P.627-633.

38. Colomer R, Montere S, Lluch A et al. Circulating HER-2/neu predicts resistance to Taxol/Adriamycin in metastatic breast carcinoma: preliminary results of a multicentric prospective study.// Proc Am Soc Clin Oncol. -1997. -V.16.- 140a.

39. Coussens L, Yang-Feng TL, Liao Y.-C. et al. Tyrosine kinase receptor with extensive homology to EGF receptor shares chromosomal location with neu oncogene.// Science. 1985. - V.230. - P. 1132-1139.

40. Cowan WK, Angus B, Henry J et al. Immunohistochemical and other features of breast carcinomas presenting clinically compared with those detected by cancer screening.// Br. J. Cancer. 1991. - V.64. - P.780-784.

41. De Paola F, Granato AM, Scarpi E et al. Vascular endothelial growth factor and prognosis in patients with node-negative breast cancer.// Int J Cancer. -2002. V.98. - P.228-233.

42. Devries C, Escobedo JA, Ueno H et al. The fms-like tyrosine kinase, a receptor for vascular endothelial growth factor.// Science. 1992. - V.255. -P.989-991.

43. Dvorak HF, Brown LF, Detmar M, Dvorak AM. Vascular permeability factor/ vascular endothelial growth factor, microvascular hyperpermeability, and angiogenesis.// Am J Pathol. 1995. - V.146. -P.1029-1039.

44. Eda H, Fujimoto K, Watanabe S et al. Cytokines induce thymidine Phosphorylase expression in tumor cellsand make them more susceptible to 5'-deoxy-5-fluorouridine.// Cancer Chemother Pharmacol. 1993. - V.32. -P.333-338.

45. Elledge RM, Green S, Ciocca D et al. HER-2 expression and response to tamoxifen in estrogen receptor-positive breast cancer: A Southwest Oncology Group study.// Clin Cancer Res. 1998. - V.4. - P.7-12.

46. Ellege RM, Fuqua SA, Clark GM et al. Prognostic significance of p53 gene alterations in node-negative breast cancer. // Breast Cancer Res Treat. -1993. V.26.-P.225-235.

47. Feig LA, Shauffhausen B. The hunt for ras targets.// Nature. 1994. -V.370. - P.508-509.

48. Ferrara N, Heinsohn H, Walder CE et al. The regulation of blood-vessel growth by vascular endothelial growth factor.// Ann N Y Acad Sei. 1995. - V.752. - P.246-256.

49. Finnis C, Dodsworth N, Pollitt CE et al. Thymidine phosphorylase activity of platelet-derived endothelial cell growth factor is responsible for endothelial cell mitogenicity.// Eur J Biochem. 1993. - V.212. - P.201-210.

50. Folkman J. What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent?// J Nat Cancer Inst. 1990. - V.82. -P.4-6.

51. Fong GH, Rossant J, Gertsenstein M, Breitman ML. Role of the Flt-1 receptor tyrosine kinase in regulating the assembly of vascular endothelium.// Nature. 1995. - V.376. -P.66-70.

52. Fox SB, Moghaddam A, Westwood M et al. Platelet-derived endothelial cell growth factor thymidine phosphorylase expression in normal tissues an immunohistochemical study.// J Pathol. - 1995. - V.176. - P.183-190.

53. Gagliardi A, Taylor M, Hennig B, Collins DC. Antiestrogens inhibit endothelial cell growth.// Proceedings of the American Association of Cancer Research. 1995. - V.36. - P. 1014.

54. Gajewski TF, Thompson CB. Apoptosis meets signal transduction: elimination of a BAD influence.// Cell. 1996. - V.87. - P.589-592.

55. Gasparini G, Toi M, Gion M et al. Prognostic significance of vascular endothelial growth factor protein in node-negative breast carcinoma.// J Natl Cancer Inst. 1997. - V.89. - P.139-147.

56. Gerber H-P, Dixit V, Ferrara N. Vascular endothelial growth factor induces expression of the antiapoptotic proteins Bcl-2 in vascular endothelial cells.// J Biol Chem. 1998. - V.273. - P.13313-13316.

57. Gerdes J., Schwab U., Lemke H., Stein H. Production of a mouse monoclonal antibody reactive with a human nuclear antigen associated with cell proliferation.// Int J Cancer. 1983. - V.31. - P.13-20.

58. Ghanem MA, van Steenbrugge GJ, Sudaryo MK et al. Expression and prognostic relevance of vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptor (FLT-1) in nephroblastoma.// J Clin Pathol. 2003. - V.56. -P.107-113.

59. Giai M, Roagna R, Ponzone R et al. Prognostic and predictive relevance of C-erb B2 and ras expression in node-positive and negative breast cancer.// Anticancer Res. 1994. - V.14. - P. 1441-1450.

60. Goldstein P. Controlling cell death.// Science. 1997. - V.275. - P.1081-1082.

61. Greb RR, Maier I, Wallwiener D, Kiesel L. Vascular endothelial growth factor A (VEGF-A) mRNA expression levels decrease after menopause in normal breast tissue but not in breast cancer lesions.// Br J Cancer. 1999. -V.81. - P.225-231.

62. Gregory R.K., Ellis P.A., Powles T.J., Dowsett M. Apoptotic index (AI) and Ki-67 as prognostic factors in a trail of primary medical therapy (PMT) for primary carcinoma of the breast.// Ann Oncol. 1998. - V.9. - Supp4. -№230.

63. Guidi AJ, Schnitt SJ, Fischer L et al. Vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) expression and angiogenesis in patients with ductal carcinomain situ of the breast.// Cancer. 1997. - V.80. - P.1945-1953.

64. Gusterson BA, Gelber RD, Goldhirsch A et al. Prognostic importence of c-erb-B2 expression in breast cancer.// J Clin Oncol. 1992. - V.10. - P. 10491056.

65. Haraguchi M, Miyadera K, Uemura K et al. Angiogenic activity of enzymes.// Nature. 1994. - V.368. - P. 198.

66. Harari D, Yarden Y. Molecular mechanisms underlying ErbB2/HER2 action in breast cancer.// Oncogene. 2000. - V.19. - P.6102-6114.

67. Hardy-Bessard AC, Roquancourt AD, Cremoux PD et al. Prognostic value of p53 and HER-2 (over)expression in premenopausal women with node-negative cancer prospectively treated with no or adjuvant CMF.// Ann. Oncol. 1998. - V.9. - Supp. 4. - Abs.190.

68. Hedley D.W., Clark G.M., Cornelisse C.J. et al. Concensus reviewof the clinical utility of DNA cytometry in carcinoma of the breast. // Cytometry. -1993. V.14.-P.482-485.

69. Heintz N.H., Leslie K.O., Rogers L.A. et al. Amplification of the c-erbB-2 oncogene in prognosis of breast adenocarcinoma.// Arch. Pathol. Lab. Med.- 1990. -V.114.-P.160-163.

70. Hidaka M, Stanford WL, Bernstein A. Conditional requirement for the Flkl receptor in the in vitro generation of early hematopoietic cell.// Proc Natl Acad Sci USA. 1999. - V.96. - P.7370-7375.

71. Hiratsuka S, Maru Y, Okada A et al. Involvement Flt-1 tyrosine kinase (vascular endothelial growth factor receptor-1) in pathological angiogenesis.// Cancer Res. 2001. - V.61. -P.1207-1213.

72. Horwitz K.B., Wei L.L., Sedlacek S.M., d'Arville C.N. Progestin action and progesterone receptor structure in human breast: a review. // Recent Prog Horn Res. 1985. - V.41. - P.249-316

73. Houck KA, Ferrara N, Winer J et al. The vascular endothelial growth factor family identification of a fourth molecular species and characterization of alternative splicing of RNA.// Mol Endocrinol. - 1991. - V.5. - 1806-1814.

74. Jacobs TW, Gown AM, Yaziji H et al. Comparison of fluorescence in situ hybridization and immunohistochemisrty fro the evaluation of HER2/neu in breast cancer.// J Clin Oncol. 1999. - V. 17. - P. 1974-1982.

75. Jacquemier J.D., Penault-Llorca F.M., Bertucci F. et al. Angiogenesis as a prognostic marker in breast carcinoma with conventional adjuvant chemotherapy: a multiparametric and immunohistochemical analysis.// J. Pathol. 1998. - V.184. - P.130-135.

76. Jeziorski A, Blonski JZ, Niewiadomska H. The expression of products of oncogens c-erbB2 and EGFR and proliferating antigens Ki67 and PCNA in primary invasive ductal cancer of female breast.// J Exp Clin Cancer Res. -2000. V.19.-P.61-67.

77. Jussila L, Valtola R, Partanen T et al. Lymphatic endothelium and Kaposi'sarcoma spindle cells detected by antibodies against the vascular endothelium growth factor receptor-3.// Cancer Res. 1998. - V.58. -P.1599-1604.

78. Kaio E, Tanaka S, Kitadai Y, et al. Clinical significance of angiogenic factor expression at the deepest invasive site of advanced colorectal carcinoma.// Oncology. 2003. - V.64. -P.61-73

79. Kaipainen A, Korhonen J, Mustonen T et al. Expression of the fms-like tyrosine kinase FLT4 gene becomes restricted to endothelium of lymphatic vessels during development.// Proc Natl Acad Sci USA. 1995. - V.92. -P.3566-3570.

80. Keyt BA, Berlean LT, Nguen HV et al. The carboxy-terminal domain of vascular endothelial growth factor is critical for its mitogenic potency.// J Biol Chem. 1996. - V.271. - P.7788-7795.

81. Kitazono M, Takebayashi Y, Ishitsuka K et al. Prevention of hypoxia-induced apoptosis by the angiogenic factor thymidine phosphorylase.// Biochem Biophys Res Commun. 1998. - V.253. - P.797-803.

82. Klijn J.G.M., Berns E.M.J.J., Bontenbal M., Alexieva-Figusch J.A. Clinical breast cancer, new development in selection and endocrine treatment of patients. // J Steroid Biochem Mol Biol. 1992. - V.43. -P.211-221.

83. Kommoss F, Pfisterer J, Idris T et al. Steroid receptors in carcinoma of the breast.// Acta Cytol. 1994. - V.16. - P.203-210.

84. Kubiak R, Miszezak-Zaborska E, Jesionek-Kupnicka D, Greger J. The activity of thymidine phosphorylase correlates with tumor size and lymph node status in breast carcinoma.// Z Naturforsch. 1999. - V.54. - P. 10961102.

85. Kuenen-Boumeester V, Van der Kvast ThH, Van Laarhoven HAJ, Henzen-Logmans SC. Ki67 staining in histological subtypes of breast carcinoma and fine-needle aspirations smears.// J Clin Pathol. 1991. -V.44. - P.208-210.

86. Leitzel K, Teramoto Y, Konrad K et al. Elevated serum c-erb-B2 antigen levels and decreased response to hormone therapy of breast cancer.// J Clin Oncol. 1995. - V.13. - P. 1129-1135.

87. Levesque M.A., Yu H., Clark G.M. et al. Enzyme-linked immuno-absorbent assay-detected p53 protein accumulation: a prognostic factor in a large breast cancer cohort. // J. Clin. Oncol. 1998. - V.16. -P.2641-2650.

88. Levy AP, Levy NS, Goldberg MA. Post-transcriptional regulation of vascular endothelial growth factor by hypoxia.// J Biol Chem. 1996. -V.271. - P.2746-2753.

89. Linder C, Byström P, Engel G et al. Correlation between basic fibroblast growth factor immunostaining of stromal cells and stromelysin-3 mRNA expression in human breastcarcinoma.// Br J cancer. 1998. - V.77.- P.941-945.

90. Linderholm B, Lindh B, Tavelin B et al. P53 and vascular endothelial growth factor (VEGF) expression predict outcome in 833 patients with primary breast carcinoma.// Int J Cancer. 2000. - V.89. - P.51-62.

91. Lindner DJ, Borden EC. Effects of Tamoxifen and Interferon-ß or the combination on tumor-induced angiogenesis.// Int J Cancer. 1997. - V.71.- P.456-461.

92. Lymbousaki A, Partanen TA, Olofsson B et al. Expression of the vascular endothelial growth factor receptor VEGFR-3 in lymphaticendothelium of the skin and in vascular tumor.// Am J Pathol. 1998. -V.153. - P.395-403.

93. MacConmara M, O'Hanlon DM, Kiely MJ et al. An evaluation of the prognostic significance of vascular endothelial growth factor in node positive primary breast carcinoma.// Int J Oncol. 2002. - Y.20. - P.717-721

94. MacGrogan G, Mauriac L, Durand M et al. Primary chemotherapy in breast invasive carcinoma: predictive value of the immunohistochemical detection of hormonal receptors, p53, c-erbB-2. MIB1, pS2 and GST.// Br J Cancer. 1996. - V.74. - P.1458-1465.

95. Mack L, Kerkzelit N, Doig G et al. Relationship of a new histological categorization of ductal carcinoma in-situ of the breast with size and the immunohistochemical expression of p53, C-erbB2, bcl2 and Ki-67.// Hum.Pathol. 1997. - V.28. -P.974-979.

96. Makris A, Allred DC, Powles TJ, et al. Cytological evaluation of biological prognostic markers from primary breast carcinomas.// Breast Cancer Res Treat.- 1997. V.44. - P.65-74.

97. Manders P, Beex LV, Tjan-Heijnen VC, et al. The prognostic value of vascular endothelial growth factor in 574 node-negative breast cancer patients who did not receive adjuvant systemic therapy.// Br J Cancer. -2002. V.87. - P.772-778.

98. Marson LP, Kurian K, Miller WR, Dixon JM. To determine the effect of primary tamoxifen treatment on the vascularity of breast cancer.// Br J Cancer. 1998. - V.78. - P.50.

99. Masters J.R.W., Camplejohn R.S., Millis R.R., Rubens R.D. Histological grade, elastosis, DNA ploidy and the response to chemotherapy of breast cancer. // Br J Cancer. 1987. - V.55. - P.455-457.

100. Matsuura T, Kuratate I, Teramachi K et al. Thymidine phosphorylase expression is associated with both increase of intratumoral microvessels anddecrease ofapoptosis in human colorectal carcinomas.// Cancer Res. 1999. - V.59. -P.5037-5040.

101. McGuire W.L. Hormone receptors: their role in predicting prognosis and response to endocrine therapy. // Semin Oncol. 1978. - V.5. - P.428-433

102. Meden H, Marx D, Schauer A et al. Prognostic significance of pi 05 (c-erbB-2, HER2/neu) serum levels in patients with ovarian cancer.// Anticancer Res. 1997. -V. 17. -P.757-760.

103. Mineta H, Miura K, Ogino T et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) expression correlates with p53 and ki-67 expressions in tongue squamous cell carcinoma.// Anticancer Res. 2002. - 22. - P.1039-1044.

104. Moghaddam A, Zhang HT, Fan TPD et al. Thymidine phosphorylase is angiogenic and promotes tumor growth.// Proc Natl Acad Sei USA.1995. V.92. -P.998-1002.

105. Morales DE, McGowan KA, Grant DS et al. Estrogen promotes angiogenic activity in human umbilical vein endothelial cells in vitro and in murine model.// Circulation. 1995. - V.91. - P.755-763.

106. Muss HB, Thor AD, Berry DA et al. c-erb-B2 expression and response to adjuvant therapy in women with node-positive early breast cencer.//N Engl J Med. 1994. - V.330. - P. 1260-1266.

107. Nagaoka H, Lino Y, Takei H, Morishita Y. PD-ECGF/TP expression in macrophages correlates with tumor angiogenesis and prognosis in invasive breast cancer.// Int J Oncol. 1998. - V.13. - P.449-454.

108. Nakamura J, Savinov A, Lu Q, Brodie A. Estrogen regulates vascular endothelial growth permeability factor expression in 7,12-dimethylbenz(a)anthracene-induced rat mammary tumor.// Endocrinology.1996. V.137. - P.5589-5596.

109. Nakopoulou L, Stefanaki K, Panayotopoulou E et al. Expression of the vascular endothelial growth factor receptor-2/Flk-l in breast carcinomas: correlation with proliferation.// Hum Pathol. 2002. - V.33. - P.863-870.

110. Newby JC, Johnston SRD, Smith IE et al. Expression of epidermal growth factor receptor and C-erb B2 during the development of tamoxifen resistance in human breast cancer.// Clin Cancer Res. 1997. - V.3. -P.1643-1651.

111. Nicholson RI, McClelland RA, Finlay P et al. Relationship between EGF-R, c-erb-B2 protein expression and Ki67 immunostaining in breast cancer and hormone sensitivity.// Eur J Cancer. 1993. - V.29A. - P. 10181023.

112. Nishimoto K, Miyadera K, Takebayashi Y et al. Thymidine phosphorylase activity required for tumor angiogenesis and growth.// Oncol Rep. 1997. - V.4.-P.55-58.

113. Niskanen E, Blomqvist C, Franssila K et al. Predictive value of c-erb-B2, p53, cathepsin D and histology of the primary tumor in metastatic breast cancer.//Br J Cancer. 1997. - V.76. - P.917-922.

114. Nizzoli R, Bozzetti C, Savoldi L, et al. Immunocytochemical assay of estrogen and progesterone receptors in fine needle aspirates from breast cancer patients.// Acta Cytol. 1994. - V.38. - P.933-938.

115. Obermair A, Kucera E, Mayerhofer K et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) in human breast cancer: correlation with disease-free survival.// Int J Cancer. 1997. - V.74. - P.455-458.

116. Okuyama N, Hatano Y, Park Y et al. Quantitation of c-erbB-2 gene amplification in breast cancer tissue by competitive PCR.// Tumor Biol. -1999.-V.20.-P.153-161.

117. O'Reilly S.M., Camplejohn R.S., Barnes D.M. et al. DNA index, S-phase fraction, histological grade and prognosis in breast cancer. // Br J Cancer. 1990. - V.61. -P.671-674.

118. Paik S, Bryant J, Park C et al. erbB-2 and response to doxorubicin in patients with axillary lymph node positive, hormone receptor negative breast cancer.//J Natl Cancer Inst. 1998. - V.90. -P.1361-1370.

119. Pauletti G, Godolphin W, Press MF et al. Detection and quantitation of HER-2/neu gene amplification in human breast cancer archival material using fluorescence in situ hybridization.// Oncogene. 1996. - V.13. - P.63-72.

120. Pepper MS, Montesano R, Mandriota SJ et al. Angiogenesis: a paradigm for balanced extracellular proteolysis during cell migration and morphogenesis.// Enzyme Protein. 1996. - V.49. - P. 138-162.

121. Plate KH, Breier G, Weich HA et al. Vascular endothelial growth factor and glioma angiogenesis: coordinate induction of VEGF receptors, distribution of VEGF protein and possible in vivo regulatory mechanisms.// Int J Cancer. 1994. - V.59. - P.520-529.

122. Poltorak Z, Cohen T, Sivan R et al. VEGF145, a secreted vascular endothelial cell isoform, that binds to extracellular matrix.// J Biol Chem. -1997. V.272. - P.7151-7158.

123. Press MJ, Bernstein L, Thomas PA et al. Her-2/neu gene amplification characterized by fluorescence in situ hybridization: poor prognosis in node-negative breast carcinomas.// J Clin Oncol. 1997. - V.15. - P.2894-2904.

124. Ravdin PM, Green S, Albain V et al. Initial report of the SWOG biological correlative study of C-ERBB2 expression as a predictor of outcome in a trail comoaring adjuvant CAF with Tamoxifen alone.// Proc Am Soc Clin Oncol. 1998. - V.17. - 97a.

125. Rilke F, Colnaghi MI, Cascinelli N et al. Prognostic significance of HER-2/neu expression in breast cancer and its relationship to other prognostic factors.// Int J Cancer. 1991. - V.49. - P.44-49.

126. Riou G, Mathieu MC, Spielmann M, Le MG. C-erbB2 gene amplification but not protein expression is an indicator of poor prognosis at long term in operable breast cancer.// Ann Oncol. 1998. - V.9. - Supp4. -№20.

127. Ross J.S., Fletcher J.A. The HER-2/neu oncogene in breast cancer: prognostic factor, predictive factor and target for therapy.// Stem. Cell. -1998. V.16. -P.413-428.

128. Ross JS, Muraca PJ, Jaffe D, et al. Multivariate analysis of prognostic factors in lymph node negtive breast cancer.// Mod Pathol. 1998. - V.l 1. -26a.

129. Rosse T, Olivier R, Monney L et al. BCL-2 prolongs cell survival after Bax-induced release of cytochrome c.// Nature. 1998. - V.391. -P.496-499.

130. Rozan S, Vincent-Salomon A, Zafrani B et al. NO significant predictive value of c-erb-B2 or p53 expression regarding sensitivity to primary chemotherapy or radiotherapy in breast cancer.// Int J Cancer. -1998. V.79. - P.27-33.

131. Sauer T, Beraki E, Jebsen PW et al. Assessing estrogen and progesterone receptor status in fine needle aspirates from breast carcinomas.// Acta Cytol. 1998. - V.20. - P.122-126.

132. Sauter G, Feichter G, Torhorst J et al. Fluorescence in situ hybridization for detecting ERBB-2 amplification in breast tumor fine needle aspiration biopsies.// Acta Cytol. 1996. - V.40. - P.164-173.

133. Shalaby F, Ho J, Stanford WL et al. A requirement for Flkl in primitive and definitive hematopoesis and vasculogenesis.// Cell. 1997. -V.89. -P.981-990.

134. Shalaby F, Rossant J, Yamaguchi TP et al. Failure of Blood-island formation and vasculogenesis in Flk-1-deficient mice.// Nature. 1995. -V.376. - P.62-66

135. Silvestrini R., Daidone M.G., DelBinoG. et al. Prognostic significance of proliferative activity and ploidy in node-negative breast cancers.// Ann. Oncol. 1993. - V.4. -P.213-219.

136. Simpson JE, Aim C, Battifora H, Esteban JM. Endothelial area as a prognostic indicator for invasive breast carcinoma.// Cancer. 1996. - V.77. - P.2077-2085.

137. Solomides ChC, Zimmennan R, Bibbo M. Semiquantitative assessment of c-erbB-2(Her-2) status in cytology specimens and tissue section from breast carcinoma.// Anal and Quant Cytol and Histol. 1999. -V.21. - P.121-125.

138. Stender MJ, Neuberg D, Wood W, Slegde G. Correlation of circulating c-erbB-2 extracellular domain (HER-2) with clinical outcome in patients with metastatic breast cancer.// Proc Am Soc Clin Oncol. 1997. -V.16. - 154a.

139. Stern D, Kamps M. EGF-stimulated tyrosine phosphorylation of pi 85 protein: a potential model for receptor interaction.// EMBO J. 1988. - V.7. -P.995.

140. Stimpfl M, Tong D, Fasching B et al. Vascular endothelial growth factor splice variants and their prognostic value in breast and ovarian cancer.// Clin Cancer Res. 2002. - V.8. - P.2253-2259.

141. Sypridopoulos I, Sullivan AB, Kearney M et al. Estrogen-receptor-mediated inhibition of human endothelial cell apoptosis.// Circulation. -1997. V.95. -P.1505-1514.

142. Takahashi H, Maeda Y, Watanabe K et al. Correlation between elevated intratumoral thymidine Phosphorylase and prognosis of node-positive breast carcinoma undergoing adjuvant doxifluridine treatment.// Int J Oncol. -2000. V.17. -P.1205-1211.

143. Takahashi Y, Bucana CD, Liu W et al. Platelet-derived endothelial cell growth factor in human colon cancer angiogenesis: role of infiltrating cells.//J Natl Cancer Inst. 1996. - V.88. - P. 1146-1151.

144. Takebayashi Y, Yamada K, Miyadera K et al. The activity and expression of thymidin Phosphorylase in human solid tumor.// Eur J Cancer. 1996a. - V.32a. - P.1227-1232.

145. Takebayashi Y, Akiyama S, Akida S et al. Clinicopathologic and prognostic significance of an angiogenic factor, thymidine Phosphorylase, inhuman colorectal carcinoma.// J Natl Cancer Inst. 1996b. - V.88. -P.1110-1117.

146. Takebayashi Y, Akiyama S, Tani A et al. Induction of thymidine Phosphorylase by hypoxia and relationship between expression of thymidine Phosphorylase and apoptosis.// Proc Am Assoc Cancer Res. 1997. - V.38. -P.48.

147. Tan DC, Kini RM, Jois SD et al. A small peptide derived from Flt-1 (VEGFR-l) functions as an angiogenic inhibitor.// FEBS Lett. 2001. -Y.494. - P.150-156/

148. Taniguchi E, Yang Q, Tang W et al. Cytologic grading of invasive breast carcinoma.// Acta Cytologica. 2000. - V.44. - P.587-591.

149. Terman BI, Dougher-Vermazen M, Carrion ME et al. Identification of the KDR tyrosine kinase as a receptor for vascular endothelial cell growth factor.// Biochem Biophys Res Commun. 1992. - Y.187. - P.1579-1586.

150. Thor AD, Berry DA, Budman DR et al. erbB-2, p53 and the efficacy of adjuvant therapy in lymph node-positive breast cancer.// J. Natl. Cancer. Inst. 1998. - V.90. - P.1346-1360.

151. Toi M, Hoshina S, Taniguchi T et al. Expression of platelet-derived endothelial cell growth factor/thymidine phosphorylase in human breast cancer.// Int J Cancer. 1995. - V.64. - P.79-82.

152. Toi M, Ohashi T, Takatsuka Y et al. Selective effect of adjuvant 5'-deoxy-5-fluorouridine treatment for thymidine phosphorylase positive tumor in primary breast cancer.// Proc Am Soc Clin Oncol. 1997. - V.16. - 136a (abs.481).

153. Toi M, Tanaguchi T, Yamamoto Y et al. Clinical significance of the determination of angiogenic factors.// Eur J Cancer. 1996. - V.32A. -P.2513-2519.

154. Twaddle GM, Turbov J, Liu N, Murthy S. Tyrisine kinase inhibitors as antiproliferative agents against an estrogen-dependent breast cancer cell line in vitro.// J Surg Oncol. 1999. - Y.70. - P.83-90.

155. Vona G, Caldini A, Sestini R et al. The c-erbB-2 oncogene amplification by competitive PCR in aneuploid cell clones flow sorted from breast cancer samples.// Clin Chem Lab Med. 1999. - V.37. - P.649-654.

156. Weidner N, Semple JP, Welch WR, Folkman J. Tumor angiogenesis and metastasis-correlation in invasive breast carcinoma.// New Engl J Med. -1991.-V.324.-P.1-8.

157. Write C, Nicholsin S, Angus B et al. Relationship between c-erb-B2 protein product expression and response to endocrine therapy in advanced breast cancer.// Br J Cancer. 1992. - V.65. - P. 118-121.

158. Yamamoto T, Ikawa S, Akiyama T et al. Similarity of protein encode by the human c-erbB-2gene to epidermal growth factor receptor.// Nature. -1986.-V.319. -P.230-234.

159. Yang Q, Shan L, Yoshimura G et al. Thymidine phosphrylase expression in invasive carcinoma: correlation with clinicopathologic variables and in vitro chemosensitivity to 5-fluorouracil.// Anticancer Res. -1999.-V.19.-P.5543-5546.

160. Yang Q, Barbareschi M, Mori I et al. Prognostic value of thymidine Phosphorylase expression in breast carcinoma.// Int J Cancer. 2002. -V.97. -P.512-517.

161. Yonenaga F, Takasaki T, Ohi Y et al. The expression of TP/PD-ECGF is correlated to angiogenesisin breast cancer.// Pathol Int. 1998. - V.48. -P.850-856.

162. Yoshiji H, Gomes DE, Shibuya M, Thorgeirsson UP. Expression of vascular endothelial growth factor, its receptor, and other angiogenic factors in human breast cancer.// Cancer Res. 1996. - V.56. - P.2013-2016.

163. Yu D, Liu B, Tan M et al. Overexpression of cerbB2/neu in breast cancer cells confers increased resistance to Taxol via mdr-1 -independent mechanisms.// Oncogene. 1996. - V.13. - P.1359-1365.

164. Zafrani B, Leroyer A, Fourquet A et al. Mammographically-detected ductal in-situ carcinoma of the breast analyzed with a new classification.// Sem. Diagn. Pathol. 1994. - V. 11. - P.208-214.

165. Zava DT, Blen M, Duwe G. Estrogenic activity of netural and synthetic estrogens in human breast cancer cell in culture.// Environ Health Perspect. 1997. - V.105. - Supp.3. - P.637-645.