Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) в крови больных первичными новообразованиями костей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Кузнецова, Ольга Матвеевна

• Кузнецова, Ольга Матвеевна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Кузнецова, Ольга Матвеевна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Ангиогенез

1.2 Фактор роста эндотелия сосудов.

1.2.1 Изоформы VEGF.

1.3 Семейство VEGF ростовых факторов.

1.3.1 Плацентарный фактор роста (P1GF).

1.3.2 VEGF-В.:.

1.3.3 VEGF-С.

1.3.4 VEGF - D.

1.4 Рецепторы VEGF.

- • 1.5 Регуляция активности VEGF и VEGF-родственных молекул.

1.6 Экспрессия VEGF опухолевыми тканями.

1.7 Особенности секреции VEGF в костной ткани. Норма и патология.

1.8 Ингибиторы ангиогенеза.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Характеристика больных.

2.2 Характеристика группы сравнения.

2.3 Иммуноферментное определение (ELISA) содержания u-PA, t

РА и PAI-1 в цитозолях опухолей.

2.4 Статистическая обработка данных.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Сравнительный анализ содержания УЕСР в сыворотке крови

1 здоровых людей и больных первичными злокачественными и доброкачественными новообразованиями костей.

3.2 Концентрация УЕСР в сыворотке крови людей, составивших группу контроля.

3.2.1 Содержание УЕвР в зависимости от пола и возраста у здоровых людей.

3.3 Концентрация УЕвР в сыворотке крови пациентов больных остеосаркомой

3.3.1 Концентрация УЕвР у пациентов с остеосаркомой в зависимости от пола и возраста

3.3.2 Содержание УЕвР в зависимости от гистологического

4 варианта остеосаркомы.

3.3.3 Содержание УЕвР в зависимости от метастатических потенциалов остеосаркомы.

3.3.4 Концентрация УЕвР в зависимости от сроков метастазирования остеосарком.

3.4 Концентрация УЕОР в сыворотке крови пациентов больных хондросаркомой.

3.4.1 Содержание УЕвР в зависимости от пола и возраста пациентов с хондросаркомой.

3.4.2 Содержание УЕвР в зависимости от гистологического строения

•1 хондросарком.

3.5. Концентрация УЕСР в сыворотке крови пациентов больных опухолью Юинга.

3.6. Концентрация УЕСР в сыворотке крови пациентов больных гигантоклеточной опухолью.

3.7. Концентрация УЕСР в сыворотке крови пациентов больных злокачественной фиброзной гистиоцитомой.

3.8. Концентрация УЕСР в сыворотке крови пациентов с доброкачественными новообразованиями.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) в крови больных первичными новообразованиями костей»

Актуальность проблемы

Гипотеза о том, что рост опухолей и возникновение метастазов зависят от образования новых кровеносных сосудов, в настоящее время в значительной степени подтверждена последними открытиями в области молекулярных и клеточных процессов, участвующих в ангиогенезе опухолей. (Kaya М.,2000; Maeda Т., 2003;)

Ведущую роль в регуляции неоангиогенеза, сопровождающего рост опухоли и ее метастазов, по-видимому, играют многие ростовые факторы, среди которых выделяют фактор роста эндотелия сосудов (VEGF). Этот фактор, являясь активным митогеном для микро- и макроваскулярных клеток кровеносных и лимфатических сосудов, в то же время не оказывает влияния на другие типы клеток.

В обозримой перспективе наиболее многообещающим направлением терапии опухолей, в том числе костных, представляется комплексная методика - сочетание направленной доставки антиопухолевых препаратов с иммунотерапией и антиангиогенной терапией. Антиангиогенная терапия направлена на противодействие процессам прорастания опухоли кровеносными сосудами, одно из направлений антиангиогенной терапии так или иначе связано с воздействием непосредственно на VEGF или его рецепторы.

В литературе опубликованы лишь единичные сообщения , касающиеся вопросов патогенетических механизмов развития костных опухолей и связи этих процессов с УЕОР, процессами метастазирования и прогнозом заболевания. Таким образом, планируемые исследования представляются своевременными и актуальными.

Цель настоящего исследования - изучение содержания УЕСР в образцах сыворотки крови здоровых людей, больных первичными злокачественными и доброкачественными новообразованиями костей для оценки взаимосвязи концентрации фактора роста с клинико-морфологическими особенностями заболевания, гистологическим строением опухоли, клиническим течением и прогнозом заболевания.

Достижение указанной цели требует решения следующих задач:

1. Иммуноферментным методом определить концентрации УЕСР в сыворотке крови здоровых людей и больных первичными злокачественными и доброкачественными новообразованиями костей.

2. Провести сравнительный анализ содержания УЕСР в образцах сыворотки крови с тем, чтобы выявить варианты опухолей, отличающихся по содержанию изучаемого фактора роста.

3. Оценить взаимосвязь между концентрацией УЕСР в сыворотке крови и степенью малигнизации опухоли.

4. Изучить связь между содержанием УЕвР в крови больных первичными новообразованиями костей с основными клиническими факторами (пол, возраст, локализация), морфологическими вариантами строения опухоли, стадией заболевания.

5. Провести анализ содержания УЕйР в крови больных с метастатическим потенциалом опухоли и продолжительностью безметастатического периода.

Научная новизна

Впервые проведено сравнительное определение содержания фактора роста эндотелия сосудов (УЕОР) в сыворотке крови здоровых людей и больных доброкачественными и злокачествеными новообразованиями костей с учетом основных клинико-морфологических характеристик заболевания.

На основании лабораторных и клинических исследований выяснена связь концентрации УЕОР с клиническим течением и прогнозом заболевания.

Впервые показана зависимость степени малигнизации опухоли от содержания УЕОР в сыворотке крови, а так же выявлена зависимость между концентрацией УЕвР, метастатическим потенциалом остеосаркомы и сроками метастазирования.

Практическое значение исследования

Настоящая работа представляет практический интерес для анализа роли УЕСР в крови больных опухолями костей при оценке клинического течения и прогноза заболевания.

Сравнительное исследование содержания УЕСР в первичной опухоли может быть использовано как критерий прогноза болезни, а также после дополнительных исследований возможно введение в схемы комплексной терапии заболевания препаратов, влияющих на экспрессию УЕСР у больных первичными новообразованиями костей с целью повышения эффективности терапии.

Количественное определение содержания УЕСР в крови больных саркомами костей в сочетании с другими клиническими и биохимическими показателями позволит дифференцированно подходить к выбору методов лечения этой категории пациентов.

Публикации исследования: Материалы диссертации опубликованы в 6 научных работах.

Апробация диссертации: Материалы исследования обсуждались на международных, всероссийских и региональных научно-практических конференциях.

Диссертация апробирована 27 июня 2003 года на заседании кафедры биохимии медицинского факультета Российского Университета Дружбы народов.

Структура и объем работы. Диссертация содержит следующие разделы: введение, обзор данных литературы, материалы и методы исследований, собственные данные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, список литературы. Работа изложена на 122 страницах машинописного текста, иллюстрирована 3 рисунками и 14 таблицами.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Кузнецова, Ольга Матвеевна

Выводы

1. Концентрации УЕСР в сыворотке крови больных первичными злокачественными новообразованиями костей значительно выше, чем концентрации УЕСР в сыворотке крови здоровых людей и больных доброкачественными новообразованиями:

- с помощью сравнительного анализа впервые обнаружена достоверная разница между концентрацией УЕСР в группе больных опухолью Юинга и показателями в группе пациентов с доброкачественными новообразованиями (р<0,01), а также группой контроля (р<0,05).

- при определении содержания УЕСР в сыворотке крови больных остеосаркомой и доброкачественными новообразованиями получены достоверные отличия между концентрациями УЕвР в этих группах. Достоверная разница выявлена также между содержанием УЕСР в сыворотке крови больных остеосаркомой и показателями в группе контроля.

2. Не найдено какой-либо зависимости между содержанием сывороточного УЕСР у обследованных пациентов с полом и возрастом.

3. Содержание УЕСР в сыворотке крови больных остеосаркомой с метастазами достоверно выше, чем у пациентов без метастазов.

4. Впервые получены доказательства о существовании достоверной разницы между концентрацией УЕСР у больных с метастазами остеосаркомы, возникшими в период до года, и пациентов с метастазами, возникшими в более поздние сроки (р<0,05).

5. Не обнаружено достоверной разницы между содержанием УЕвР в зависимости от степени дифференцировки хондросаркомы и гистологичсеких вариантов остеосаркомы.

6. Высказано предположение о важной и существенной роли фактора роста эндотелия сосудов в биологии опухоль-трансформированных тканей.

103

Заключение

По прогнозам специалистов, в ближайшее время рак займет первое место в "летальной иерархии" болезней, вытеснив заболевания сердечнососудистой системы. Сейчас, по данным Всемирной организации здравоохранения, от рака в мире ежегодно умирает более 6 млн человек.

Опухоли костей это один из наиболее сложных разделов онкологии. Обусловлено это целым рядом факторов. Наряду с чётко очерченными злокачественными и доброкачественными процессами имеется большая группа "условно - злокачественных" новообразований, ряд явно доброкачественных процессов при определённых условиях могут трансформироваться в злокачественные. Существует довольно большая группа так называемых "пограничных процессов" в костях, способных по клинико-рентгенологической картине симулировать опухоль, а порою и перерождаться в костную саркому, а также кости скелета служат местом метастазирования злокачественных новообразований других локализаций

Кроме того, учитывая то обстоятельство, что это довольно редкая патология (до 1%) , количество диагностических, тактических и лечебных ошибок при курации этой группы больных довольно высок. Актуальность изучения сарком костей обусловлена тем, что в большинстве случаев опухоли поражают пациентов молодого возраста. Пик возникновения остеосаркомы - это поздний пубертатный период и подростковый возраст. Средний стандартизированный показатель колеблется от 1 до 3 на 100000 населения. 25% от всех опухолей - дети до 16 лет. Важной отличительной особенностью злокачественных опухолей костей, в частности остеосаркомы и опухоли Юинга, является склонность к инвазивному росту и гематогенному метастазированию (Трапезников H.H. 1986)

Несмотря на определенный прогресс в мультимодальном лечении, предполагающем агрессивную адьювантную химиотерапию и радикальное удаление опухоли, легочные метастазы наблюдаются в 40-50% случаев у пациентов с остеосаркомой ( Wada Т., 1996); преимущественная локализация метастазов у пациентов с опухолью Юинга - легкие (45-65%), кости (25-30%) и относительно редко - регионарные лимфатические узлы, головной мозг, внутренние органы. Причем, согласно данным большинства авторов уже к моменту поступления в клинику у 20-26% больных опухолью Юинга определяются метастазы (Аббасов Ф.А., 2000).

Рост солидных опухолей, а так же процессы инвазии и метастазирования зависят от ангиогенеза, процесса формирования и роста новых кровеносных сосудов (Folkman J., 1991.)

Именно поэтому в обозримой перспективе наиболее многообещающей представляется комплексная методика - сочетание направленной доставки антиопухолевых препаратов с иммунотерапией и антиангиогенной терапией. Антиангиогенная терапия направлена на противодействие процессам прорастания опухоли кровеносными сосудами.

По представленным литературным данным VEGF является ключевым фактором в развитии ангиогенеза, следовательно одно из направлений антиангиогенной терапии так или иначе связано с воздействием непосредственно на VEGF или его рецепторы.

Выживаемость эндотелиальных клеток признана важной характеристикой развития неоваскуляризации. Так как VEGF одновременно является ангиогенным фактором и фактором выживаемости эндотелиальных клеток, именно анти-VEGF терапия может дать необходимый лечебный эффект в отношении регрессии опухолевых клеток (Fidler I., et al., 2001).

Резюмируя литературные данные, можно с уверенностью утверждать, что анализ уровней экспрессии VEGF в сыворотке крови здоровых людей и больных различными доброкачественными и злокачественными новообразованиями даст новую информацию, которая может быть использована для дифференциальной диагностики, оценки прогноза заболевания, степени малигнизации опухоли и коррекции стратегии адьювантной терапии.

Задача нашего исследования состояла в изучении экспрессии фактора роста эндотелия сосудов в крови практически здоровых людей и больных первичными новообразованиями костей с тем, чтобы попытаться открыть еще одно звено в длинной цепи патогенетических процессов развития опухолей костей.

Данные, полученные после обработки клинического материала, в основном, отражают уже ранее установленные тенденции. Согласно этим данным процент больных остеосаркомой и опухолью Юинга в возрасте от 15 до 20 лет, т.е. во второй декаде жизни, оказался достоверно выше по сравнению с другими возрастными группами. Этот факт хорошо согласуется с многочисленными литературными данными.

Проведенное нами количественное определение концентрации УЕвР в сыворотке крови здоровых людей и больных первичными новообразованиями костей позволило ответить на поставленные вопросы и подтвердить ряд закономерностей, существование которых можно было предположить на основании экспериментальных данных и анализа результатов публикаций последнего времени.

Анализ средних концентраций УЕвР как в группе контроля, так и в группе больных различными новообразованиями костей показал, что полученные нами показатели вполне согласуются с результатами последних исследований, опубликованных в литературе. Концентрации УЕвР в группе контроля варьировали от 20,65 до 461,99 пг/мл (медиана 126,48; среднее±стандартное отклонение - 150,87±113,55). В общей группе больных значения показателя были таковы: медиана 190,14; среднее±стандартное отклонение - 254,09±230,35; минимальное значение 30,35; максимальное -1252,12.

Как видно из данных, представленных в таблице 1., в группе контроля наблюдается большой разброс значений, причем как в общей группе, так и в группах в зависимости от пола. У женщин показатели VEGF несколько выше, чем у мужчин, но эти различия статистически недостоверны (р>0,05).

Так как значения VEGF в группе контроля в зависимости от пола достоверно не отличались, дальнейшее сравнение мы провели с показателями VEGF, полученными для общей группы.

Исследование зависимости содержания VEGF в сыворотке крови от возраста в группе контроля так же не дало статистически значимых результатов (табл.2).

Аналогично группе контроля во всех остальных случаях был проведен анализ концентрации VEGF в зависимости от пола и возраста пациентов. Какой-либо существенной зависимости средних показателей VEGF от пола и возраста не выявлено.

Наибольшие значения VEGF обнаружены в группе больных опухолью Юинга: медиана - 363,3 пг/мл; среднее±стандартное отклонение - 452,2± 352,9 пг/мл, наименьшие - в группе пациентов с доброкачественными новообразованиями: медиана - 77,6 пг/мл; среднее±станд.отклонение -116,1 ±85,0 пг/мл.

С помощью сравнительного анализа данных мы обнаружили статистически достоверные различия между показателями VEGF в группе больных опухолью Юинга и группой пациентов с доброкачественными новообразованиями (р<0,01), при сравнении значений УЕвР в группе больных опухолью Юинга с группой контроля также обнаружена статистически достоверная разница (р<0,05).

Средние показатели концентрации УЕвР в группе больных остеосаркомой оказались несколько ниже, чем в группе больных опухолью Юинга. Проведенный сравнительный анализ выявил статистически достоверную разницу между показателями УЕвР в группе больных остеосаркомой с группой контроля (р<0,05) и группой пациентов с доброкачественными новообразованиями (р<0,05).

Значения УЕвР в группах больных хондросаркомой и гигантоклеточной опухолью были выше, чем в группах контроля и доброкачественных новообразований, однако статистическая достоверность в этих случаях была больше 0,05.

Таким образом, сравнительный анализ средних значений УЕвР в вышеуказанных группах больных свидетельствует о том, что экспрессия УЕвР в новообразованиях костей вероятнее всего связана со степенью малигнизации и, следовательно, данные о содержании УЕвР могут быть использованы при дифференцировании диагноза. Такое заключение представляется нам особенно важным в связи с тем, что диагностические ошибки, как показывает опыт, регистрируются в 60-85% наблюдений.

Известно, что определенные трудности возникают, например, при дифференцировании остеосаркомы с остеоид-остеомой, очагами оссифицирующего миозита, гетеротипической оссификации на месте посттравматической гематомы или фиброзной дисплазии кости, особенно при ее монооссальной форме.

Нами получены следующие данные о концентрации VEGF в сыворотке крови больных остеосаркомой: медиана -190,14 пг/мл, интервал 34,76 - 674,31; среднее 241,09± 180,76 пг/мл.

Известно, что остеосаркома может быть представлена несколькими гистологическими вариантами, отличающимися по степени злокачественности и прогнозу (Трапезников H.H., 1983).

Учитывая эти обстоятельства, нами были предприняты исследования содержания VEGF в различных вариантах остеосаркомы. Наиболее высокие значения VEGF оказались характерными для телеангиоэктатической и смешанной вариантов остеосаркомы ( табл.5). Проведенный сравнительный анализ данных в зависимости от гистологического варианта остеосаркомы однако не дал статистически значимых результатов; возможно для обнаружения достоверных различий необходимо большее количество наблюдений в группах.

Остеосаркома известна как опухоль, образующая ранние гематогенные метастазы, частота которых составляет более 75%. Чаще всего диссеминация происходит в легкие, множественное поражение которых и является основной причиной смерти. Средние сроки диссеминации обычно не превышают 8-12 месяцев.

Результаты наших исследований подтверждают предположения о ключевой роли УЕвР в процессе гематогенного метастазирования.

Проведенная нами оценка связи экспрессии УЕвР с процессами метастазирования показала, что у пациентов с метастазами концентрация УЕвР в сыворотке крови существенно выше, чем у пациентов без метастазов. Сравнительный анализ обнаружил статистически достоверную разницу между показателями УЕвР в этих двух группах. Результаты представлены в таблице 6.

Предполагая, что концентрация УЕвР в крови больных остеосаркомой связана со сроками метастазирования, больные с метастазами были разделены на две группы: первую группу составили больные, у которых метастазы обнаружены в первые 12 месяцев от начала лечения, во вторую группу были включены пациенты, у которых метастазы обнаружены в более поздние сроки. Данные представлены в таблице 7.

Оказалось, что содержание УЕвР значительно выше в случаях, когда метастазы обнаруживались в период до года (р<0,05).

Вероятнее всего это объясняется тем, что высокие концентрации УЕвР активируют развитие УЕОР-зависимого ангиогенеза и усиленный рост количества мелких сосудов. В свою очередь эти процессы увеличивают шанс опухолевых клеток проникнуть в кровеносное русло, поскольку вновь образованные мелкие капилляры, которые имеют фрагментированную базальную мембрану, гораздо легче пропускают опухолевые клетки, чем цельные крупные сосуды. Кроме того, большое количество мелких сосудов обладает большей поверхностью, через которую опухолевые клетки быстрее метастазируют (Kaya М. et al., 2000).

Выявленная корреляция между концентрацией VEGF в крови, наличием метастазов и сроками метастазирования у пациентов с остеосаркомой свидетельствует о важной прогностической значимости VEGF для таких больных.

Результаты настоящего исследования дают основание для предположения о возможном использовании VEGF в качестве биохимического маркера, предсказывающего наличие метастазирования у пациентов с остеосаркомой.

Хондросаркома составляет 10-15% всех злокачественных опухолей костей. Чаще возникает у лиц старше 30 лет. По степени анаплазии опухолевых клеток выделяют высоко-, умеренно- и низкодифференцированную формы хондросарком. По мере снижения степени дифференцировки возрастает метастатический потенциал опухоли.

Характерно гематогенное метастазирование, которое наблюдается реже и в более поздние сроки, чем при остеосаркомах. По литературным данным S мезенхимальный и дедифференцированный варианты хондросарком отличаются быстрым темпом роста, ранним гематогенным метастазированием.

В нашем исследовании группу хондросарком составили 8 пациентов.

При изучении возрастной зависимости экспрессии УЕСР в хондросаркомах положительных результатов неполучено.

Гистологические варианты хондросаркомы в нашем исследовании были представлены 4 случаями 2 степени анаплазии, 1 случаем 3 степени анаплазии, 2 случаями мезенхимальной хондросаркомы и 1 случаем дедифференцированной хондросаркомы. Как видно из данных, приведенных в таблице 10, наиболее высокие показатели УЕСР характерны для хондросаркомы 2 степени анаплазии и мезенхимальной хондросаркомы.

В группе пациентов больных опухолью Юинга наблюдались наиболее высокие значения УЕвР (медиана - 363,3 пг/мл; среднее±стандартное отклонение - 452,2± 352,9 пг/мл).

Как известно, опухоль Юинга метастазирует гематогенным и лимфогенным путями и относится к разряду высокозлокачественных опухолей. Согласно данным большинства авторов уже к моменту поступления в клинику у 20-26% больных опухолью Юинга определяются метастазы (Аббасов Ф.А., 2000).

В наших наблюдениях метастазы были обнаружены у 5 больных, один из них с опухолью Юинга седалищной кости поступил в клинику уже имея метастазы в головном мозге, концентрация УЕвР в сыворотке крови у него равнялась 464,7 пг/мл. У пациента с наиболее отдаленными сроками появления метастазов (16 месяцев с момента поступления в клинику) содержание УЕвР в сыворотке крови соответствовало 216,8 пг/мл.

В настоящее исследование были включены данные о 4 больных гигантоклеточной опухолью, содержание УЕСИ в крови больных ГКО составило: медиана-143,7 пг/мл; с реднее±ст.откл.- 245,2±279,2 пг/мл. Сравнительный анализ, проведенный между группами, не дал статистически достоверных различий, хотя средние показатели в группе больных ГКО были выше, чем в группах доброкачественных новообразований и в группе контроля.

Метастазов и рецидивов в этой группе больных за время изучения не наблюдалось, поэтому исследования в этой группе было ограниченным.

Доброкачественные опухоли разной природы и опухолеподобные поражения костей были объединены нами в одну группу - группу доброкачественных новообразований. Средние значения УЕвР, полученные нами в этой группе, оказались весьма низкими: медиана - 77,6 пг/мл; среднее±станд.отклонение - 116,1 ±85,0 пг/мл.

Данные средних показателей УЕвР в зависимости от диагноза представлены в таблице 12.

В заключении следует отметить, результаты исследования экспрессии фактора роста эндотелия сосудов в крови больных различными морфологическими вариантами новообразований костей указывают на существование определенной связи между экспрессией УЕвР, степенью злокачественности опухоли и процессами метастазирования; это дает основание для предположения о существенности данного фактора в биологии опухоль-трансформированных тканей. Последующие наблюдения за обследованными группами больных и изучение сроков их выживаемости, с учетом выявленных метастазов, позволит проверить и обосновать представленную гипотезу. Дальнейшие исследования должны быть направлены на разработку патогенетических методов лечения вышеуказанных заболеваний костей, в частности методов специфической антиангиогенной терапии возможно в сочетании с другими средствами воздействия на ткань опухоли.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Кузнецова, Ольга Матвеевна, 2003 год

1. Asahara Т., Takahashi Т., Masuda H., Kalka C., Chen D. VEGF contributes to postnatal neovasculorization by mobilizing bone marrow-derived endothelial progenitor cells. EMBO, 18: 3964-3972, 1999.

2. Asano M, Yukita A, Matsumoto T et al. Inhibition of tumor growth and metastasis by an immunoneutralizing monoclonal antibody to human vascular endothelial growth factor/vascular permeability factorl21. Cancer Res 1995;55:5296-5301.

3. Asano M, Yukita A, Suzuki H. Wide spectrum of antitumor activity of a neutralizing monoclonal antibody to human vascular endothelial growth factor. Jpn J Cancer Res 1999;90:93-100.

4. Ayala G, Liu C, Nicosia R, Horowits S, Lackman R. Microvasculature and VEGF expression in cartilaginous tumors. Hum Pathol 2000, 3 l(3):34I-6.

5. Bacci G., Picci P., Ruggieri P., Merucuri M., Avella M., Capanna R., Brach.

6. Blood C.H. and Zetter B.R. Tumor interactions with the vasculature: angiogenesis and tumor metastasis. Biochim Biophys Acta 1990, 1032: 89-118.

7. Boehm T, Folkman J, Browder T, O'Reilly MS. Antiangiogenic therapy of experimental cancer does not induce acquired drug resistance. Nature 1997; 390: 404-407.

8. Carmeliet P, Ferreira V, Breier G et al. Abnormal blood vessel development and lethality in embryos lacking a single VEGF allele. Nature 1996;380:435-439.

9. Claesson-Welsh L, Welsh M, Ito N, et al.Angiostatin induces endothelial cell apoptosis and activation of focal adgesion kinase independently of the integrin-binding motif RGD. Proc Natl Acad Sci USA 1998; 95:5579-5583.

10. Colvard D.S., Eriksen E.F., Keeting P.E., et al. Proc Natl Acad Sci USA Biochemistry. V-86:854-857; 1989.

11. David Lynden. Bone marrow cells contribute to tumor blood supply and growth-1,2001.

12. Deckers M, Karperien M et al. Expression of Vascular Endothelial Growth Factor and Treir Receptors during Osteoblast Differentiation. Endocrinology, 141: 1667-1674, 2000.

13. Delany A.M., Dong Y., Canalis E. Mechanisms of glucocorticoid action in bone cells. Cell Biochem. 56,3:295-302; 1994.

14. Dhanabal M, Volk R, Ramchandran R, et al. Endostatin induces endothelial cell apoptosis. J Biol Chem 1999; 274:11721-11726.

15. Dvorak HF, Brown LF, Detmar M et al. Vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor, microvascular hyperpermeability, and angiogenesis. Am J Pathol 1995;146:1029-1039.

16. Ellis LM, Walker RA, Gasparini G. Is determination of angiogenic activity in human tumours clinically useful? Eur J Cancer 1998;34:609-618.

17. Eriksen E.F., Colvard D.S., BergN.G. Evidence of estrogen receptors in normal human osteoblast-like cells. Science 241:84-86; 1988.

18. Ferrara N, Davis-Smyth T: The biology of vascular endothelial growth factor. EndocrRev 1997, 18:4-25

19. Ferrara N, Henzel WJ. Pituitary follicular cells secrete a novel heparin-binding growth factor specific for vascular endothelial cells. Biochem Biophys Res Commun 1989;161:851-858.

20. Ferrara N, Houck K, Jakeman L et al. Molecular and biological properties of the vascular endothelial growth factor family of proteins. Endocr Rev 1992;13:18-32.

21. Ferrara N. Molecular and biological properties of vascular endothelial growth factor. J Mol Med 1999, 77: 527-43.

22. Ferrara N. Role of vascular endothelial growth factor in the regulation of angiogenesis.Kidney Int 1999, 56: 794-814.

23. Folkman J, Cole P, Zimmerman S. Tumor behavior in isolated perfused organs: in vitro growth and metastases of biopsy material in rabbit thyroid and canine intestinal segment. Ann Surg 1966;164:491-502.

24. Folkman J. Seminars in Medicine of the Beth Israel Hospital, Boston. Clinical applications of research on angiogenesis. N Engl J Med 1995;333:1757-1763.

25. Folkman J. Tumor angiogenesis: therapeutic implications. N Engl J Med 1971;285:1182-1186.

26. Folkman J. What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent? J Natl Cancer Inst 1990, 82: 4-6.

27. Gasparini G, Harris AL. Clinical importance of the determination of tumor angiogenesis in breast carcinoma: much more than a new prognostic tool. J Clin Oncol 1995;13:765-782.

28. Gerber HP, Hillan KJ, Ryan AM et al. VEGF is required for growth and survival in neonatal mice. Development 1999; 126:1149-1159.

29. Gimbrone MA Jr, Cotran RS, Leapman SB et al. Tumor growth and neovascularization: an experimental model using the rabbit cornea. J Natl Cancer Inst 1974;52:413-427.

30. Gimbrone MA Jr, Leapman SB, Cotran RS et al. Tumor dormancy in vivo by prevention of neovascularization. J Exp Med 1972;136:261-276.

31. Glasser D.B., Lane J.M., Huvos A.G., Marcove R.C. and Rosen G. Survival, prognosis and therapeutic respose in osteogenic sarcoma: the Memorial Hospital Experienca. Cancer (Phila.), 69: 698-708, 1992.

32. Gordon M.S., Talpaz M., Margolin K. et al. Phase I trial of recombinant humanized monoclonal anti-vascular endothelial growth factor (anti-VEGF

33. Mab) in patients(pts) with metastatic cancer. Proc Am Soc Clin Oncol 1998., 17:210.

34. Goustin A.F., Leof E.B., Shiplay G.D., Moses H.L. Growth facors and cancer. Cancer Res. 46:1015-1046; 1986.

35. Grunstein J, Roberts WG, Mathieu-Costello O et al. Tumor-derived expression of vascular endothelial growth factor is a critical factor in tumor expansion and vascular function. Cancer Res 1999;59:1592-1598.

36. Guidi AJ, Schnitt SJ, Fischer L et al. Vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) expression and angiogenesis in patients with ductal carcinoma in situ of the breast. Cancer 1997;80:1945-1953.

37. Hanahan D, Folkman J. Patterns and emerging mechanisms of the angiogenic switch during tumorigenesis. Cell 1996;86:353-364.

38. Hauser S, Wech HA: A heparin-binding form of placental growth factor (Plgf-2) is expressed in human umbilical vein endothelial cells, and in placenta. Growth Factors 1993, 9:259-268

39. Holzer G, Obermair A, Koschat M, Preyer O, Kotz R, Trieb K. Concentration of vascular endothelial growth factor(VEGF) in the serum of patients with malignant bone tumors. Med Pediatr Oncol 2001; 601-4.

40. Horner A, Bord S, Kelsall A W, Coleman N, Comptston JF. Tie2 ligands angiopoietin-1 and angiopoietin-2 are coexpressed with vascular endothelial cell growth factor in growing human bone. Bone 2001 Jan 28:65-71

41. Houck KA, Leung DW, Rowland AM, Winer J, Ferrara N: Dual regulation of vascular endothelial growth factor availability by genetic and proteolytic mechanisms. J Biol Chem 1992, 267:26032-26037

42. Huvos A.G., Heiweil M., Bretsky S.S. The pathology of malignant fibrous histiocytoma of bone: a study of 130 patient. Am. J. Surg. Pathol., 9:853-71; 1985.

43. I Iyder SM, Murthy L, Stancel GM. Progestin regulation of vascular endothelial growth factor in human breast cancer cells. Cancer Res 1998;58:392-395.

44. Joukov V, Sorsa T, Kumar V, Jeltsch M, Claesson-Welsh L, Cao Y, Saksela O, Kalkkinen N, Alitalo K: Proteolytic processing regulates receptor specificity and activity of VEGF-C. EMBO J 1997, 16:3898-3911

45. Kato T, Kimura T, Ishii N et al. The methodology of quantitation of microvessel density and prognostic value of neovascularization associated with long-term survival in Japanese patients with breast cancer. Breast Cancer Res Treat 1999;53:19-31.

46. Kawauchi S., Fukuda T. and Tsuneyoshi M. Angiogenesis does not correlate with prognosis or expression of vascular endothelial growth factor in synovial sarcoma. Oncol. Rep. 6: 959-964,1999.

47. Kaya M., Wada T., Akatsuka T., Kawaguchi S., Nagoya S. et al. Vascular endothelial growth factor expression in untreated osteosarcoma is predictive of pulmonary metastasis and poor prognosis. Clin Cancer Res, 2000, 6, 572-577.

48. Kieser A, Weich H, Brandner G, Marine D, Kolch W: Mutant p53 potentiates protein kinase C induction of vascular endothelial growth factor expression. Oncogene 1994,9:963-969

49. Kim KJ, Li B, Winer J et al. Inhibition of vascular endothelial growth factor-induced angiogenesis suppresses tumour growth in vivo. Nature 1993;362:841-844.

50. Kost C, Benner K, Stockmann A, Linder D, Preissner KT. Limited plasmin proteolisis of vitronectin. Characterization of the adhesion protein as morpho-regulatory and angiostatin-binding factor. Eur J Biochem 1996; 236: 682-688.

51. Kukk E, Lymboussaki Taira S, Kaipanen A, Jeltsch M, Joukov V, Alitalo K: VEGF-C receptor binding, and pattern of expression with VEGFR-3 suggests a role in lymphatic vascular development. Development 1996, 122:3829-3837

52. Kumar S, Ghellal A, Li C et al. Breast carcinoma: vascular density determined using CD 105 antibody correlates with tumor prognosis. Cancer Res 1999;59:856-861.

53. Kushlinskii N, Babkina I, Solov'ev Y, Trapeznikov N. Vascular endothelial growth factor and angiogenin in the serum of patients with osteosarcoma and Ewing's tumor. Bull Exp Biol Med 2000; 130: 691-3.

54. Leenders W, Lubsen N, Altena M, Clauss M, Deskers M, et al . Design of a Variant of Vascular Endothelial Growth Factor-A (VEGF-A) Antagonizing KDR/Flk-1 and Flt-1. Lab Invest 82: 473-481, 2002.

55. Leung DW, Cachianes G, Kuang WJ et al. Vascular endothelial growth factor is a secreted angiogenic mitogen. Science 1989;246:1306-1309.

56. Lucas R, Holmgren L, Garciaa I, et al. Multiple forms of angiostatin induce apoptosis in endothelial cells. Blood 1998; 92:4730-4741.

57. Luo JC, Toyoda M, Shibuya M. Differential inhibition of fluid accumulation and tumor growth in two mouse ascites tumors by an antivascular endothelialgrowth factor/permeability factor neutralizing antibody. Cancer Res 1998;58:2594-2600.

58. Maeda T, Kawane T, Horiuchi N. Statins Augment Vascular Endothelial Growth Factor Expression in Osteoblastic Cells via Inhibition of Protein Prenylation. Endocrinology, 144: 681-692,2003.

59. McLeskey SW, Kurebayashi J, Honig SF et al. Fibroblast growth factor 4 transfection of MCF-7 cells produces cell lines that are tumorigenic and metastatic in ovariectomized or tamoxi fen-treated athymic nude mice. Cancer Res 1993;53:2168-2177.

60. Millauer B, Shawver LK, Plate KH et al. Glioblastoma growth inhibited in vivo by a dominant-negative Flk-1 mutant. Nature 1994;367:576-579.

61. Millauer B, Wizigmann-Voos S, Schnurch H et al. High affinity VEGF binding and developmental expression suggest Flk-1 as a major regulator of vasculogenesis and angiogenesis. Cell 1993;72:835-846.

62. Mohan S., Baylink D. Bone growth factors. Clin. Ortoped. And Related Res. 263:30-43; 1991.

63. Moser TL, Stack MS, Asplin I, et al. Angiostatin binds ATP syntase on the surfase of human endothelial cells. Proc Natl Acad Sci USA 1999; 96:28112816.

64. Mukhopadhyay D, Tsiokas L, Sukhatme VP. Wild-type p53 and v-Src exert opposing influences on human vascular endothelial growth factor gene expression. Cancer Res 1995;55:6161-6165.

65. MuIler Y., Li B., Christinger H., Wells J et al. Vascular Endothelial Growth Factor: Crystal structure and functional mapping of the kinase domain receptor binding site. Biochemistry, 1997, 94, 7192-7197.

66. Nagy J. A., Brown L.F., Senger D.R., Lanir N., Van De Water L., Dvorak A.M. and Dvorak H.F. Pathogenesis of tumor stroma generation: a critical role for leaky blood vessels and fibrin deposition. Biochim. Biophys. Acta., 948: 305326, 1989.

67. Nicosia R.F What is the role of vascular endothelial growth factor-related molecules in tumor angiogenesis? Am J of Pathology 1998, 153: 11-16.

68. O'Reilly MS, Holmgre L, Chen CC, Folkman J. Angiostatin induces and sustains dormancy of human primary tumors in mice. Nature Med 1996; 2:689692.

69. P£rast * C., Mroczkowski B., Pinko C. et al.Characterization and kinetic mechanism of catalytic domen of human vascular endothelial growth factor receptor-2 tyrosine kinase (VEGFR2 TK), a key enzyme in angiogenesis. Biochemistry, 1998,37,16788-16801.

70. Poltorak Z, Cohen T, Silvan R, Kandelis Y, Spira G, Vlodavsky I, Keshet E, Neufeld G: VEGF145, a secreted vascular endothelial growth factor isoform that binds to the extracellular matrix. J Biol Chem 1992, 272:7151-7158

71. Praus M., Wauterickx K., Collen D., Gerard R.D. Reduction of tumor cell migration and metastasis by adenoviral gene transfer of plasminogen activator inhibitors. Gene Ther. Fb;6(2):227-36, 1999.

72. Presta LG, Chen H, O'Connor SJ et al. Humanization of an anti-vascular endothelial growth factor monoclonal antibody for the therapy of solid tumors and other disorders. Cancer Res 1997;57:4593-4599.

73. Ramchandran R, Dhanabal M, Volk R, et al. Antiangiogenic activity of restin, NC10 domain of human collagen XV: comparison to endostatin. Biochem Biophys Res Commun 1999; 255: 735-739.

74. Rastinejad F, Polverini PJ, Bouck NP. Regulation of the activity of a new inhibitor of angiogenesis by a cancer suppressor gene. Cell 1989;56:345-355.

75. Risau W. Mechanisms of angiogenesis. Nature 1997;386:671-674.

76. Ristimaki A, Narko K, Enholm B, Joukov V, Alitalo K: Proinflammatory cytokines regulate expression of the lymphatic endothelial mitogen vascular endothelial growth factor C. J. Biol Chem 1998, 273:8413-8418

77. Salven P, Lymboussaki A, Heikkilä, Jääskelä-Saari, Aase K, von Euler G, Eriksson U, Alitalo K, Joensuu H: Vascular endothelial growth factors VEGF-B and VEGF-C are expressed in human tumors. Am J Pathol 1998, 153:103-108

78. Senger DR, Van de Water L, Brown LF et al. Vascular permeability factor (VPF, VEGF) in tumor biology. Cancer Metastasis Rev 1993;12:303-324.

79. Shalaby F, Ho J, Stanford WL et al. A requirement for Flkl in primitive and definitive hematopoiesis and vasculogenesis. Cell 1997;89:981-990.

80. Sowter HM, Corps AN, Evans AL, Clark DE, Charnock-Jones DS, Smith SK: Expression and localization of the vascular endothelial growth factor family in ovarian epithelial tumors. Lab Invest 1997, 77:607-614

81. Steinbach N., Process of tumor growth; Science report-2., 2001.

82. Tanaka Y., Ijiri R., Kato K., Nishi T., Nishihira H., Aida N. Intrapulmonary lymph nodes in children versus lung metastases. Med. Pediatr. Oncol., Dec., 33(6): 580-2, 1999.

83. Terman BI, Carrion ME, Kovacs E et al. Identification of a new endothelial cell growth factor receptor tyrosine kinase. Oncogene 1991;6:1677-1683.

84. Tsurumi Y, Murohara T, Krasinski K et al. Reciprocal relation between VEGF and NO in the regulation of endothelial integrity. Nat Med 1997;3:879-886.

85. Weidner N, Folkman J, Pozza F et al. Tumor angiogenesis: a new significant and independent prognostic indicator in early-stage breast carcinoma. J Natl Cancer Inst 1992;84:1875-1887.

86. Weidner N, Semple JP, Welch WR et al. Tumor angiogenesis and metastasis—correlation in invasive breast carcinoma. N Engl J Med 1991;324:1-8.

87. Weinstat-Saslow DL, Zabrenetzky VS, VanHoutte K et al. Transfection of thrombospondin 1 complementary DNA into a human breast carcinoma cell line reduces primary tumor growth, metastatic potential, and angiogenesis. Cancer Res 1994;54:6504-6511.

88. Yamada Y, Nezu J, Shimane M, Ilirata Y: Molecular cloning of a novel vascular endothelial growth factor, VEGF-D. Genomics 1997,42:483-488

89. Yihai Cao, Hua Chen, Li Zhou, Ming-Ko Chiang, Bela Anand-Apte, James A. Weatherbee, Yongda Wang, Faye Fang, John G. Flanagan, Monica Lik-Shing Tsang. Heterodimers of Placenta Growth Factor/Vascular Endothelial Growth Factor. JBC, 1996, 271: 3154-3162

90. Zajchowski DA, Band V, Trask DK et al. Suppression of tumor-forming ability and related traits in MCF-7 human breast cancer cells by fusion with immortal mammary epithelial cells. Proc Natl Acad Sei USA 1990;87:2314-2318.

91. Zelzer E, McLean W, Yin-Shan Ng, Fukai N, Reginato AM, Lovejoy S et al. Skeletal defects in VEGF 120/120 mice reveal multiple roles for VEGF in skeletogenesis. Development, 129: 1893-1904, 2002.

92. Zhang HT, Craft P, Scott PA et al. Enhancement of tumor growth and vascular density by transfection of vascular endothelial cell growth factor into MCF-7 human breast carcinoma cells. J Natl Cancer Inst 1995;87:213-219.

93. Zhang L, Kharbanda S, Chen D et al. MCF-7 breast carcinoma cells overexpressing FGF-1 form vascularized, metastatic tumors in ovariectomized or tamoxifen-treated nude mice. Oncogene 1997;15:2093-2108.

94. Zheng MH, Xu J, Robbins P, Pavlos N, Wysocky S, Kumta SM, Wood DJ, Papadimitriou JM. Gene Expression of Vascular Endothelial Growth Factor in giant cell tumors of bone. Hum Pathol 2000, 31 (7):804-12.

95. Ziehe M, Maglione D, Ribatti D, Morbidelli L, Lago CT, Battisti M, Paoletti I, Barra A, Tucci M, Parise G, Vincenti V, Granger Ш, Viglietto G, Pérsico MG: Placenta growth factor-1 is chemotactic, mitogenic and angiogenic. Lab Invest 1997, 76:517-531

96. Аббасов Ф.А. Метастазы злокачественных опухолей костей. Диссертация РОНЦ РАМН. Москва - 2000.

97. Амирасланов А.Т. Комплексные методы лечения больных остеогенной . саркомой// Дисс.Док.мед.наук.- М,- 1984.

98. Бабкина И.В. Ингибиторы апоптоза вкрови больных новообразованиями костей// Дисс. д.м.н.- М.- 2000.

99. Виноградова Т.П. Опухоли костей. М., Медицина.- 1973.

100. Карамышева А.Ф. Ангиогенез опухоли: механизмы, новые подходы ктерапии. Канцерогенез под ред.Д.Г.Заридзе.-М. Научный мир. 2000.С.298309.

101. Костылева О.И., Герштейн Е.С., Радченко A.A. и др. Клиническое значение рецепторов эпидермального фактора роста и их лигандов при остеогенной саркоме// Вопр.биол.мед. и фарм.хим.-1998.- №1.- с.30-34.

102. Некачалов B.B. Патология костей и суставов. Руководство.- СПб.: Сотис, 2000.-288с.

103. Патолого-анатомическая диагностика опухолей человека: Руководство в 2 томах.Т.2/Под ред. Н.А.Краевского, А.В.Смолянникова, Д.С.Саркисова. -4-е изд.,перераб. и доп. М.:Медицина. --1993.-688с.

104. Синюков П.А. Современные подходы к химиотерапии остеогенной саркомы// Дисс.Докт.Мед.Наук. Москва.- 1993.

105. Соловьев Ю.Н. Опухоли и опухолеподобные поражения скелета. (Опыт изучения 4899 наблюдений)// Вестник ОНЦ РАМН. 1998.-№1.-С. 13-18.

106. Трапезников Н.Н, Алиев М.Д., Синюков П.А., Щербаков С.Д., Соколовский В.А., Тепляков В.В., Мачак Г.Н. Прогресс и перспективы развития методов лечения злокачественных опухолей костей. Вестник РОНЦ-1:7-13; 1998.

107. Трапезников H.H., Л.А.Еремина, А.Т.Амирасланов, П.А.Синюков. Опухоли костей. М. Медицина -1986.

108. Трапезников H.H., Соловьев Ю.Н., Еремина JI.A., Амирасланов А.Т. Саркомы костей:(Клиника, диагностика, лечение).- Ташкент, Медицина.-1983.-314 с.

109. Трапезников H.H., Соловьев Ю.Н., Еремина JI.A., Амирасланов А.Т., Феденко А.Н., Синюков П.А., Григорова Т.М., Токарева З.И., Ковалевский Е.Е., Готько Е.С. Прогресс в лечении остеогенной саркомы. Вестник ОНЦ РАМН России, №1, С:3-9; 1993.

110. Юсифов А.И. Активаторы плазминогена урокиназного и тканевого типов и их ингибитор при опухолях костей//Дисс. К.б.н.- М.-2001.