Факторы ангиогенеза в сыворотке крови больных саркомами костей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Кузнецов, Игорь Николаевич

• Кузнецов, Игорь Николаевич
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Кузнецов, Игорь Николаевич

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ 5

ВВЕДЕНИЕ 6

ГЛАВА 1. НЕОАНГИОГЕНЕЗ В НОРМЕ И ПРИ РАЗВИТИИ ОПУХОЛЕВОГО ПРОЦЕССА (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ) 19

1.1. Общие представления о неоангиогенезе.19

1.2. Ключевой активатор ангиогенеза - УЕСЕ.27

1.3. Рецепторы УЕСЖ.31

1.4. Исследование ангиогенеза в онкологии.36

1.5. Ангиогенез и опухоли костей.38

1.6. Ангиогенез - мишень противоопухолевой терапии.43

1.7. Щелочная фосфатаза и новообразования костей скелета.50

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 53

2.1. Характеристика больных доброкачественными новообразованиями костей. 56

2.2. Характеристика больных гигантоклеточной опухолью кости.61

2.3. Характеристика 285 больных злокачественными новообразованиями костей. 65

2.4. Характеристика больных остеосаркомой кости.66

2.5. Характеристика больных хондросаркомой кости.74

2.6. Характеристика больных саркомой Юинга.78

2.7. Характеристика больных злокачественной фиброзной гистиоцитомой кости. 83

2.8. Характеристика больных хордомой кости.85

2.9. Специальные биохимические методы исследования.85

2.10. Статистический анализ результатов исследования.86

ГЛАВА 3. СОДЕРЖАНИЕ VEGF И ЕГО РЕЦЕПТОРОВ VEGF-R1, VEGF-R2 В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ НОВООБРАЗОВАНИЯМИ КОСТЕЙ (РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ) 88

3.1. Содержание VEGF и его рецепторов в сыворотке крови больных новообразованиями костей и практически здоровых людей.88

3.2. Содержание VEGF и его рецепторов в сыворотке крови больных новообразованиями костей с учетом характеристики новообразования и в контроле.90

3.3. Содержание VEGF, VEGF-R1 и VEGF-R2 в сыворотке крови практически здоровых людей.95

3.4. Содержание VEGF, VEGF-Rl, VEGF-R2 в сыворотке крови больных доброкачественными новообразованиями костей.95

3.5. Содержание VEGF, VEGF-Rl и VEGF-R2 в сыворотке крови больных гигантоклеточной опухолью кости.101

3.6. Содержание VEGF, VEGF-Rl и VEGF-R2 в сыворотке крови больных злокачественными новообразованиями костей с учетом гистологического строения опухоли.105

3.6.1. Содержание VEGF, VEGF-Rl и VEGF-R2 при остеосаркоме. 111

3.6.2.

Отдаленные результаты лечения больных остеосаркомой.

3.6.3. Связь исходных уровней УЕСЕ и его рецепторов, определенных в сыворотке крови больных остеосаркомой, с отдаленными результатами. 131

3.6.4. Связь между общей активностью ЩФ и содержанием УЕСЕ,

УЕСЕ-Ш и УЕСЕ-К2 в сыворотке крови больных остеосаркомой. 132

3.6.5. УЕСЕ, УЕСЕ-Ш и УЕСЕ-Ы2 в сыворотке крови больных хондросаркомой. 134

3.6.6. Связь между содержанием УЕСЕ, УЕСЕ-Ш, УЕСЕ-1*2 в сыворотке крови больных хондросаркомой и отдаленными результатами лечения. 142

3.6.7. Содержание УЕСЕ и его рецепторов в сыворотке крови больных саркомой Юинга. 146

3.6.8. Связь отдаленных результатов лечения больных саркомой Юинга с клиническими признаками заболевания и исходными уровнями УЕСЕ в сыворотке крови. 154

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Факторы ангиогенеза в сыворотке крови больных саркомами костей»

Актуальность проблемы. Первичные саркомы костей считают одним из наиболее сложных разделов клинической онкологии, особенно в вопросах морфологической диагностики, оценке их биологического поведения и прогноза (И.Т.Кныш, 1984; Ю.Н.Соловьев, 1998, 2003; М.Д.Алиев, 2005; Г.Н.Берченко, 2008; Meyers Р., 1998; Brosjo О. et al., 2004; Bernstein M. et al., 2006). Несмотря на более редкую частоту выявления этих заболеваний (они составляют 1-4% всех опухолей) эти новообразования встречаются в основном у детей и подростков второго десятилетия жизни, отличаются крайне агрессивным течением и быстрым гематогенным метастазированием (Т.П.Виноградова, 1973; М.В.Волков, 1985; Н.Н.Трапезников и соавт., 1993; Е.М.Аксель и соавт., 2002; И.В.Булычева, 2008; Grimer R.J., 2000; ICotz R. et al., 2002; Goorin A.M. et al., 2003).

Комбинированное лечение данной категории больных - очень сложно, часто сопровождается токсическими эффектами химиотерапии (Juergens С. et al., 2006; Stohr W. et al., 2007). В связи с этим, не теряет своей актуальности разработка новых подходов к оценке биологического поведения опухоли и выделение факторов, определяющих общий прогноз и склонность к раннему метастазированию (Ю.Н.Соловьев, 1998; М.Д.Алиев и соавт., 2006; Pallotta M.G. et al., 2004; Moon S.H. et al., 2005), a также выбору наиболее адекватных схем лечения для каждого больного (И.Т.Кныш, 1986; В.Т.Долгих, 2001; Dahlin D. et al., 1986; Abe S. et al., 2002; Assi H. et al., 2004).

В последние годы все большее внимание в этой области уделяется различным молекулярным и клеточным маркерам, характеризующим фундаментальные биологические свойства опухоли, а именно, пролиферативную и инвазивную способности, активность апоптоза и неоангиогенеза в первичных опухолях и метастазах, склонность к метастазированию (С.И.Кусень и соавт., 1985; Н.Е.Кушлинский, 1999; М.А.Пальцев, 2004; Е.Н.Имянитов и соавт., 2007; Н.Н.Белушкина, 2008; Delany A.M., 1994; Fulda S., 2009). Тем не менее, ввиду большого числа молекулярно-биологических факторов и значимых расхождений в литературе об их прогностической ценности, выбор определенного вида терапии, основанный на биологических характеристиках опухоли, остается затруднительным и неопределенным для врача, хотя в ряде наблюдений молекулярно-генетические методы исследования могут быть полезны при выборе более адекватных методов противоопухолевой терапии (К.П.Хансон, 2005; Е.Н.Имянитов и соавт., 2008; Кигигакл К. е! а1., 1999). Некоторые исследователи вообще довольно скептически относятся к возможностям практического использования этих показателей у онкологических больных из-за существующей во многих западных странах тенденции к повсеместному использованию адъювантной химиотерапии при различных онкологических заболеваниях (П.А.Синюков, 1993; Н.Е.Кушлинский, 1999). Вместе с тем, по крайней мере, в двух ситуациях прогностические факторы при опухолях, в том числе и первичных саркомах костей, могут быть полезны: 1) для определения чувствительности или резистентности опухоли к конкретным видам терапии; 2) для выявления группы больных с неблагоприятным прогнозом, которым настоятельно требуется проведение более агрессивного адъювантного лекарственного лечения (Е.С.Герштейн и соавт., 2005; В.В.Меньшиков, 2006).

Кроме того, на основании изучения молекулярно-биологических особенностей опухолей, в том числе и сарком костей, может быть создана новая стратегия лечения, непосредственно влияющая на определенные молекулы и процессы. Знание специфических биологических характеристик опухоли может помочь в усовершенствовании существующих схем лекарственного лечения, в развитии новых подходов к патогенетической «таргетной» терапии опухолей, основанных на модификации системы передачи регуляторных сигналов в клетке (Д.Б.Корман, 2006; Е.Н.Имянитов и соавт"., 2007; Н.В.Жуков и соавт., 2008).

Основными характеристиками злокачественных новообразований считается их способность к неограниченному росту, что связано с нарушением механизмов апоптоза, устойчивостью к действию факторов, регулирующих процессы пролиферации и дифференцировки, а также склонностью к инвазии и метастазированию (В.В.Некачалов, 2000; А.А.Новик и соавт., 2004; Sezer О. et al., 2001; Fulda S., 2009). Механизмы, определяющие способность опухолевых клеток к инвазии в окружающие ткани и метастазированию, до конца не изучены. Однако, в экспериментальных исследованиях установлено, что в основе способности раковых клеток к инвазивному росту и гематогенному метастазированию может быть активация механизмов ангиогенеза в первичной опухоли и ее метастазах (Dvorak H.F. et al., 1995; Tung-Ping Poon R. et al., 2001; Kaya M., 2000; Maeda Т., 2003). При этом, показано, что плотность микроваскулярной сети на единицу поверхности опухолевой ткани прямо пропорционально коррелирует с частотой образования метастазов у некоторых солидных опухолей человека, в частности, при меланоме, раке легкого, предстательной железы, шейки матки, толстого кишечника (Sledge G. et al., 2002). Доказано, что плотность сосудов является важным фактором прогноза при раке молочной железы (РМЖ) (И.С.Давиденко и соавт., 2007; Guidi А., 1996), опухолях слизистой полости рта, раке предстательной железы и мочевого пузыря (Zhang Н., 1995; Zhang L., 1997). Исследователи полагают, что предпосылкой для неоангиогенеза является размножение и миграция эндотелиальных клеток, которые подобно опухолевым клеткам, продуцируют протеазы и локально инвазируют базальную мембрану и периваскулярный внеклеточный матрикс, формируя новую капиллярную сеть в опухоли (С.В.Луценко и соавт., 2004; Kushlinskii N. et al., 2000).

Среди ангиогенных цитокинов особое место занимает фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), который связывается с эндотелиальными клетками и стимулирует их пролиферацию, продуцируется клетками некоторых опухолей человека, способствуя процессу неоваскуляризации новообразования и, возможно, связанной с этим ранней генерализацией процесса (Г.И.Абелев и соавт., 2008; Д.А.Головков, 2009; Folkman J., 2001). VEGF является активным митогеном для микро- и макроваскулярных клеток кровеносных, лимфатических сосудов и практически не действует на другие типы клеток (Ю.А.Панков, 1998). При этом, экспрессия VEGF обнаруживается также и в нормальных тканях, в частности, в легких, почках, сердце, надпочечниках, в меньшей степени - в печени, селезенке, слизистой оболочке желудка, еще меньше -в молочной железе. Однако сосудистый эндотелий этих тканей в большинстве случаев находится в покоящемся состоянии, т.е. VEGF в них неактивен.

•Семейство VEGF включает 6 ростовых факторов: VEGF-A (более раннее обозначение - VEGF), VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E и плацентарного ростового фактора (P1GF) (Leenders W. et al., 2002), а их продукция в клетках зависит от гистогенеза опухолей.

В настоящее время известны четыре основные изоформы VEGF-A, которые различающиеся по длине полипептидной цепи и состоящие, соответственно из, 121, 165, 189 и 206 аминокислот (О.М.Кузнецова и соавт., 2005). В секретирующих VEGF нормальных и опухоль трансформированных клетках преимущественно обнаруживается изоформа VEGF(165), зрелая форма которой представляет собой гомодимер с молекулярной массой 45 кДа. В большинстве экспрессирующих VEGF клеток обнаруживаются также транскрипты, кодирующие VEGF(121) и VEGF(189), тогда как изоформа VEGF(206) встречается крайне редко.

В настоящее время убедительно доказано, что в развитии и регенерации костной ткани важную роль играют процессы ангиогенеза и костно-хрящевой резорбции (Maeda Т. et al., 2003). Причем эти процессы тесно связаны между собой и, стало быть, можно предположить существование в костной ткани общих для этих процессов медиаторов (Street J., 2002). Так, в культурах зрелых остеокластов обнаружены высокоаффинные рецепторы VEGF (KDR/Flk-1 и Flt-1), в этих клетках выявлена также активация процессов резорбции под действием VEGF. Следовательно, функции остеокластов и ангиогенез вероятнее всего регулируются общим медиатором, которым является VEGF. Показано также, что VEGF является ключевым регулятором процесса инвазии сосудов в растущей костной пластинке. Иммуногистохимическими методами обнаружено наличие экспрессии двух изоформ VEGF: свободной растворимой формы VEGF(121) и VEGF(189), которая связана с протеогликанами внутриклеточного матрикса. Незначительная продукция VEGF-A, -В и -D выявлена на ранних стадиях дифференцировки остеобластов, в тоже время максимальную экспрессию выше указанных молекул наблюдали на стадии минерализации (Deckers М., 2000).

В доступной нам литературе выявлены единичные работы по изучению продукции VEGF у больных первичными опухолями костей и, в частности, так называемыми «пограничными» новообразованиями (гигантоклеточная опухоль кости) (Zheng М.Н., 2000) и злокачественными костеобразующими опухолями костей (остеосаркома) (О.Н.Кузнецова и соавт., 2005), а соотношение изоформ VEGF-A в различных саркомах костей значимо различалось. Причем, в остеосаркомах, экспрессирующих VEGF(165), обнаружено значительное увеличение степени васкуляризации по сравнению с остеосар комами, которые экспрессировали только VEGF(121). В исследованиях Mitsunori Kaya et al. (2000) показано, что экспрессия VEGF в первичных остеосаркомах коррелировала с ростом локальной плотности сосудов в ткани опухоли, с развитием метастазов в легких, неблагоприятным их клиническим течением, а стало быть, и прогнозом.

Следует отметить, что продукцию VEGF активно изучали при других злокачественных новообразованиях человека: РМЖ (Н.Л.Вищипанова, 2005; Е.Г.Герштейн и соавт., 2005, 2006; М.Б.Ориновский и соавт., 2005; А.М.Щербаков и соавт., 2005), РПЖ (М.Ф.Трапезникова и соавт., 2006; А.П.Морозов, 2007), раке яичников (Е.В.Степанова и соавт., 2002; И.Н.Полушкина и соавт., 2004), щитовидной железы (Shushanov S. et al., 2000), колоректальном раке (Г.Х.Кусаинов и соавт., 2005; Lurje D. et al., 2008), раке пищевода, желудка (Н.А.Огнерубов и соавт., 2002; Е.С.Герштейн и соавт., 2004) и коры надпочечников (Т.А.Бритвин, 2006).

Относительно недавно стало известно, что биологическое действие VEGF-А осуществляется после его взаимодействия с собственными высокоаффинными рецепторами: Fltl (VEGF-R1) и Flkl/KDR (VEGF-R2), которые образуют отдельную группу в суперсемействе рецепторных тирозинкиназ (Parast С., 1998; Ferrara N. et al., 2003). В эту группу входит также рецептор FLT4 (VEGF-R3), взаимодействующий с VEGF-C и VEGF-D, но не с VEGF-A. Эта группа рецепторов представляет собой трансмембранные белки со сходной структурой: их внеклеточная рецепториая часть состоит из 7 иммуноглобулинподобных доменов, а во внутриклеточной области находится тирозинкиназный домен, разделенный на 2 участка короткой последовательностью, так называемой, интеркиназной вставкой, специфичной для каждого рецептора (А.Ф.Карамышева, 2000). После взаимодействия рецептора с лигандом происходит димеризация рецептора с последующей активацией их каталитической активности (Muller Y., 1997). Показано, что рецепторы VEGF-A экспрессируются преимущественно в клетках эндотелия сосудов, прилегающих к опухоли и проникающих в нее. Следует отметить, что реакция клеток на воздействие VEGF-A может быть различной, в зависимости от того, с каким из рецепторов свяжется этот ростовой фактор. О функциональных различиях сигнальных путей, осуществляемых посредством передачи сигнала через рецепторы Fltl и Flkl/KDR, свидетельствуют также данные, полученные в эксперименте с поврежденным геном Fltl или Flkl (Millauer В., 1994). При этом, в эндотелиальных клетках была открыта растворимая форма рецептора Fltl. Эта форма рецептора образуется в результате альтернативного сплайсинга, и в ней отсутствуют 7-й иммуноглобулинподобный домен, трансмембранный домен и цитоплазматический домен. Такой растворимый рецептор способен ингибировать индуцируемый VEGF митогенез клеток эндотелия. Предполагается, что растворимая форма Fltl может выполнять роль негативного регулятора действия VEGF. Действительно, данные о торможении опухолевого роста при ингибировании активности VEGF с помощью растворимой формы другого рецептора (Flk-1) были получены в экспериментальных моделях (А.Ф.Карамышева, 2000).

В литературе не представлено работ, в которых проводили сравнительный анализ продукции VEGF и его растворимых форм рецепторов 1 и 2 типа (VEGF-Rl, VEGF-R2) у больных различными морфологическими вариантами сарком костей. Изучив этот вопрос, можно выделить больных опухолями костей, которые будут отличаться по продукции VEGF, VEGF-R1, VEGF-R2, разработать критерии эффективности проводимого на сегодняшний день лечения этих пациентов с учетом содержания этих белков в крови, а также обсудить возможности использования препаратов, влияющих на продукцию VEGF и его рецепторов в опухолях костей с целью разработки новых патогенетических методов терапии с использованием антиангиогенных препаратов. Следует отметить, что ингибиторы ангиогенеза начали активно изучать и с эффектом использовать в онкологической клинике (например, авастин) (С.М.Киселев и соавт., 2003; С.В.Луценко и соавт., 2004; В.А.Горбунова, 2006). Кроме того, результаты исследований M.Asano (1999) показали, что в случае блокирования с помощью моноклональных антител только VEGF-R1 или только VEGF-R2 наблюдается частичная остановка роста опухоли, а при выключении обоих рецепторов - полная блокада опухолевого роста. В связи с этим, важное практическое значение приобретает поиск, выделение и синтез разнообразных ингибиторов ангиогенеза, в том числе эндогенных факторов (Kondo Т. et al., 2002; Chang X. et al., 2005; McCarty M.F. et al., 2005). В последние годы пристальный интерес исследователей привлекает изучение не только ангиогенных факторов у экспериментальных животных и онкологических больных, но и особенности экспрессии генов ангиогенных факторов, как основы новой стратегии лечения злокачественных новообразований дополнительно к химиотерапии и противоопухолевой биотерапии (В.О.Пустыльняк и соавт., 2008; Yukata К. Et al., 2005; Weiss K.R. et al., 2006; Yang S.Y. et al., 2007; Yin D. Et al., 2008).

Все выше изложенное свидетельствует об актуальности изучения роли ключевого активатора неоангиогенеза VEGF и его растворимых форм рецепторов 1 и 2 типа (VEGF-Rl, VEGF-R2) в клиническом течении и прогнозе первичных сарком костей.

Помимо выше указанных ангиогенных факторов, большой интерес у исследователей вызывает изучение общей активности щелочной фосфатазы (ЩФ) у больных новообразованиями костей. Прежде всего, это связано с тем, что при нормальной функции печени преимущественным источником повышенного содержания фермента в сыворотке крови больных первичными опухолями костей является костная ткань (В.М.Кеттайл и соавт., 2001). При этом, известно, что ЩФ вырабатывается в костях остеобластами, а ее активность увеличивается в периоды усиленной остеобластической активности, а именно, при росте опухоли или нормальной кости, заживлении переломов (Л.И.Беневоленская, 2003). Доказано, что активности остеобластов и остеокластов связаны между собой, поэтому любое усиление обменных процессов в костях, в том числе и рост опухоли, приводит к повышению уровня активности ЩФ, что подтверждено в исследованиях некоторых авторов (Д.А.Борисов и соавт., 2004; Xing W. et al., 2004). Общая активность ЩФ считается общепризнанным маркером при обследовании больных с различной костной патологией. Поэтому комплексный анализ уровней общей активности ЩФ с продукцией VEGF, VEGF-R1 и VEGF-R2 при различных морфологических вариантах сарком костей позволит выявить их связь между собой, а также с основными клинико-морфологическими характеристиками новообразований и их прогнозом. Следует отметить, что подобных комплексных исследований на клиническом материале не проводили.

Цель исследования.

Цель настоящего исследования - сравнительный анализ содержания фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), его растворимых форм рецепторов 1 и 2 типа (VEGF-R1, VEGF-R2) в сыворотке крови практически здоровых людей, больных первичными злокачественными, доброкачественными и пограничными (гигантоклеточной опухолью) опухолями костей для оценки их взаимосвязи с основными клинико-морфологическими характеристиками новообразований и прогнозом.

Задачи исследования.

1. Провести сравнительное иммуноферментное определение исходного (до лечения) содержания УЕОР, УЕОЯ-Ю, УЕОР-Я2 в сыворотке крови практически здоровых людей, больных первичными злокачественными, пограничными (гигантоклеточная опухоль) и доброкачественными новообразованиями костей.

2. Изучить связь между исходным содержанием УЕОР, УЕОР-Ю, УЕОБ-Ю в сыворотке крови больных при новообразованиях костей с учетом основных клинических и морфологических их характеристик: возраст, пол, гистологическое строение опухоли и степень ее злокачественности - критерий в, анатомический тип пораженной кости, стадия распространенности процесса - показатели Т и М, степень выраженности лечебного патоморфоза.

3. Сопоставить исходные уровни УЕОР с показателями УЕСЯ-Ш, УЕОР-К2, общей активностью ЩФ в сыворотке крови больных первичными новообразованиями костей.

4. Проанализировать длительность . общей выживаемости больных злокачественными новообразованиями костей с учетом исходных уровней УЕОР, УБОЯ-Ш и УЕОР-Я2 в сыворотке крови.

5. Провести многофакторный математический анализ связи общепринятых клинико-морфологических показателей, характеризующих клиническое течение и прогноз первичных сарком костей, с исходными показателями УЕОР, УЕСЫ-Ш, УЕОР-К2 и общей активностью ЩФ в сыворотке крови этих пациентов.

Научная новизна исследования.

Впервые проведено комплексное сравнительное определение содержания фактора роста эндотелия сосудов (УЕОР), его растворимых форм рецепторов 1 и 2 типа (УЕОР-Ш, УЕОР-К2) и общей активности ЩФ в сыворотке крови больных злокачественными (саркомами), пограничными гигантоклеточная опухоль) и доброкачественными новообразованиями костей.

Результаты проведенного исследования показали, что во всех образцах сыворотки крови практически здоровых людей (группа контроля) и больных новообразованиями костей выявлены измеримые уровни фактора роста эндотелия сосудов (УЕОР) и его рецепторов (УЕОР-Я1, УЕОР-112). При этом у больных концентрации маркеров были достоверно выше, чем в группе контроля; уровни УЕОР и УЕОР-Ю были также достоверно выше у больных саркомами костей по сравнению с больными доброкачественными и пограничными (гигантоклеточная опухоль) новообразованиями кости.

Впервые у больных типичной остеосаркомой кости обнаружено место достоверное увеличение уровня УЕОР в сыворотке крови мужчин по сравнению с женщинами, а также у пациентов в возрасте старше 25 лет по сравнению с более молодыми. При этом, концентрация УЕОР в сыворотке крови больных остеосаркомой зависела от локализации опухоли (у больных опухолями плечевой и болыиеберцовой костей УЕОР выше, чем при опухолях малоберцовой кости), от типа пораженной кости (при поражении трубчатых костей уровень УЕОР выше, чем при поражении плоских), показатель УЕОР зависел также от распространенности процесса (при Т2 УЕОР выше, чем при Т]).

Убедительно доказано, что уровни УЕОР и его рецепторов в сыворотке крови больных первичной и вторичной хондросаркомой кости не различались, не зависели от типа пораженной кости, локализации опухоли, степени ее злокачественности и показателя Т, но уровень УЕОР положительно коррелировал с максимальным размером первичной опухоли.

Не выявлено достоверной зависимости исследованных показателей (УЕОР, УЕОР-Ш, УЕОР-К2) от основных клинико-морфологических факторов заболевания при саркоме Юинга и злокачественной фиброзной гистиоцитомой кости.

Не обнаружено достоверной взаимосвязи исходных показателей VEGF, VEGF-R1 и VEGF-R2 в сыворотки крови со степенью выраженности лечебного патоморфоза и отдаленными результатами лечения больных остеосаркомой, хондросаркомой и саркомой Юинга.

Многофакторный анализ показал, что отдаленные результаты лечения (3-летняя выживаемость) больных остеосаркомой высокодостоверно связана со стадией заболевания, а исходные уровни VEGF и растворимых форм его рецепторов в сыворотке крови не обладали прогностической значимостью.

Практическая значимость исследования.

Настоящее исследование представляет практический интерес для анализа роли VEGF, VEGF-R1, VEGR-R2, общей активности ЩФ в сыворотке крови больных первичными злокачественными новообразованиями костей, так как имеет значение в оценке клинического их течения, основных биологических характеристик опухолевого процесса наряду с общепринятыми клинико-морфологическими особенностями этих заболеваний.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на VIII Российском онкологическом конгрессе (Москва 23-25 ноября 2004г.); на III Российском конгрессе «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии» (Москва, 26-28 октября 2004г.); на конференции «Национальные дни лабораторной медицины России-2005» (Москва, 11-14 октября 2005г.); на 16th International congress on anti-cancer treatment (Paris February lth-4th, 2005); на I Всероссийской научно-практической конференции патологоанатомов «Актуальные вопросы патологической анатомии» (Орел, 30 мая-2 июня 2005г.); на VI Всероссийском съезде онкологов «Современные технологии в онкологии» (Ростов-на-Дону, 11-15 октября 2005г.); на II Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 20-21 октября 2005г.); на IX Российском онкологическом конгрессе

Москва, 22-24 ноября 2005г.); на 17th Inter national со ngress on a nti-cancer treatment (Paris, 30th January - 2nd February, 2006); на XIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 3-7 апреля 2006г.); на Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2009г.).

Апробация диссертации проведена на совместной научной конференции сотрудников кафедры биохимии медицинского факультета Российского университета дружбы народов; кафедры клинической биохимии и лабораторной диагностики ФПДО Московского государственного медико-стоматологического университета; лаборатории клинической биохимии и отдела патологической анатомии опухолей человека НИИ клинической онкологии Российского онкологического научного центра им. Н.Н.Блохина РАМН 20 февраля 2009 года.

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 19 научных работ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы «Общая характеристика больных и методы исследований», главы «Результаты собственных исследований», обсуждения полученных данных, выводов и указателя цитируемой литературы. Общий объем диссертации 216 страниц машинописного текста. Указатель литературы содержит 306 работ отечественных и зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 76 таблицами и 42 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Кузнецов, Игорь Николаевич

ВЫВОДЫ

1. Во всех образцах сыворотки крови практически здоровых людей (группа контроля) и больных новообразованиями костей выявлены измеримые уровни фактора роста эндотелия сосудов (УЕОР) и растворимых форм его рецепторов (УЕСР-Ш, УЕСР-К2), при этом у пациентов концентрации маркеров были достоверно выше, чем в контроле; уровни УЕОР и УЕОР-Ю были также достоверно выше у больных саркомами костей по сравнению с больными доброкачественными новообразованиями и гигантоклеточной опухолью кости.

2. При типичной остеосаркоме уровни УЕОР в сыворотке крови представителей мужского пола достоверно выше, чем женского. У пациентов в возрасте старше 25 лет показатели УЕОР выше по сравнению с более молодыми больными.

3. Выявлена зависимость между сожержанием УЕОР в сыворотке крови больных остеосаркомой от локализации опухоли в костях скелета, типа пораженной кости и распространенности опухолевого процесса.

4. Показатели УЕОР и его рецепторов в сыворотке крови больных первичной и вторичной хондросаркомой не различались, не зависели от типа пораженной кости, локализации опухоли, степени ее злокачественности и показателя Т, но при этом уровень УЕвР положительно коррелировал с максимальным размером опухоли.

5. У больных саркомой Юинга и злокачественной фиброзной гистиоцитомой достоверной зависимости исследованных показателей от основных клинико-морфологических факторов не выявлено.

6. Не выявлено достоверной взаимосвязи исходных показателей УЕОР, УЕОР-НЛ и УЕОР-Я2 в сыворотки крови со степенью выраженности лечебного патоморфоза и отдаленными результатами лечения больных остеосаркомой, хондросаркомой и саркомой Юинга.

7. У больных хондросаркомой с отдаленными метастазами общая активность ЩФ в сыворотке крови была выше, по сравнению с локализованной формой, при этом не установлено корреляционной зависимости между активностью ЩФ и уровнями УЕвР и его рецепторов.

8. Не выявлено линейной связи между уровнями общей активности ЩФ в сыворотке крови больных саркомой Юинга и содержанием УЕОР, установлена обратная корреляционная зависимость между содержанием ЩФ и УЕОР-Ш.

9. Многофакторный анализ показал, что отдаленные результаты лечения (3-летнюю выживаемость) больных остеосаркомой высокодостоверно определяла стадия заболевания, а исходные уровни VEGF и растворимых форм его рецепторов в сыворотке крови не обладали прогностической значимостью.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Кузнецов, Игорь Николаевич, 2009 год

1. Абелев Г.И., Эрайзер T.JL На пути к пониманию природы рака // Биохимия.-2008.- том 73, №5.-с.605-618.

2. Аксель Е.М., Трапезников H.H. Заболеваемость и смертность от злокачественных новообразований населения России и некоторых других стран СНГ в 2002 году // М. 2002.

3. Алиев М.Д., Соловьев Ю.Н., Харатишвили Т.К. и соавт. Хондросаркома кости // М.-Издательство «ИНФРА-М».-2006.-213с.

4. Алиев М.Д. Становление и современное состояние отечественной онкологической ортопедии // Вопросы онкологии.-2005.-т.51, №3.-с.283-287.

5. Алиев М.Д. (Под ред.). Злокачественные опухоли костей // М.-Издательская группа РОНЦ.-2008.-408с.

6. Амирасланов А.Т., Кушлинский Н.Е., Казиев А.Ю., Шихаммедов H.A. Связь метастатического потенциала остеогенной саркомы с наличием или отсутствием РА и РЭ в опухоли // В материалах I Съезда онкологов стран СНГ.-1996.-Ч.2.-С.396.

7. Белушкина H.H. Особенности регуляции апоптоза опухолевых клеток // Вестник Российской АМН.-2008.-№10.-с.15-20.

8. Бритвин Т.А. Первичные опухоли надпочечников: оценка клинико-морфологических и биохимических критериев диагностики и факторов прогноза // Автореф.дисс. .докт.мед.наук.-М.-2006.

9. Булычева И.В., Махсон А.Н., узьмин И.В., Павленко Т.В., Жуков А.Г., Абрамович М.С., Искиндирова А.К. Хондросаркома костей: клинико-морфологические сопоставления // Архив патологии.-2008.-№5.-с.51-56.

10. Виноградова Т.П. Опухоли костей // М.- Медицина.- 1973.

11. Вищипанова Н.Л., Ермилова В.Д., Блохин С.Н., Карабекова З.К., Тагиева Т.Т., Лякина JI.T. Новообразования молочной железы и интерлейкин-6 (ИЛ-6) // В материалах IX Российского онкологического конгресса (Москва, 22-24 ноября 2005г.).-M.-2005.-c.136.

12. Волков М.В. Болезни костей у детей // М.-Медицина.-1985.

13. Герштейн Е.С., Щербаков A.M., Алиева С.К., Анурова O.A., Лактионов К.П., Кушлинский Н.Е. Фактор роста эндотелия сосудов в опухолях и сыворотке крови больных раком молочной железы // Бюлл. экспер. биол.-2003.-t.135, №1.-с.99-102.

14. Герштейн Е.С., Щербаков A.M., Гончаров Д.Ю. и соавт. Фактор роста эндотелия сосудов при раке пищевода // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии.-2004.-№ 1.-е.26-29.

15. Герштейн Е.С., Щербаков A.M., Обушева М.Н., Кушлинский Н.Е. Иммуноферментное исследование содержания фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) в опухолях и сыворотке крови больных раком молочной железы // Кремлевская медицина.-2005.-№3.-с.45-52.

16. Герштейн Е.С., Кушлинский Н.Е. Биологические маркеры рака молочной железы: методологические аспекты и клинические рекомендации // Маммология.-2005.-№1 .-с.65-69.

17. Герштейн Е.С., Талаева Ш.Ж., Сандыбаев М.Н., Кушлинский Н.Е. Клиническая роль системы активации плазминогена в опухолях человека // Молекулярная медицина.-2007.-№1.-с.4-8.

18. Головков Д. А. Клиническая значимость ключевых маркеров ангиогенеза, апоптоза, системы активации плазминогена в сыворотке крови и опухоли больных колоректальным раком // Автореф.дисс.докт.мед.наук.-М.-2009.-48с.

19. Горбунова В.А. Этюды химиотерапии // М.-«Литтерра».-2006,376с.

20. Гурувайораппан К., Куттан Дж. Ингибирование опухолеспецифического ангиогенеза аментофлавоном // Биохимия.-2008.-том 73, вып. 2.-С.258-269.

21. Давиденко И.С., Пефти Е.Б., Фокин А.Н. Значение ангиогенеза в терапии метастатического рака молочной железы // Российский биотерапевтический журнал.-2007.-№4.-с.8-12.

22. Долгих В.Т. Опухолевый рост.-М.-Медицинская книга.-2001.-79с.

23. Думбрайс К.О., Кушлинский Н.Е., Герштейн Е.С., Глазкова Т.Г., Байкова В.Н., Дурнов J1.A. Исследование возможных механизмов регуляции роста различных новообразований у детей // Современная онкология.-2001.-том 1, №3.-с.13-16.

24. Еремина Л. А. Разработка методов лечения первичных злокачественных опухолей костей // Автореф.дисс.докт.мед.наук.-М.-1979.

25. Жуков Н.В., Тюляндин С.А. Целевая терапия в лечении солидных опухолей: практика противоречит теории // Биохимия.-2008.-том 73, вып.5.-с.751-768.

26. Имянитов E.H., Хансон К.П. Молекулярная онкология: клинические аспекты // Санкт-Петербург.-Издательский дом СПбМАПО.-2007.-211с.

27. Имянитов E.H., Моисеенко В.М. Применение молекулярно-генетического анализа для выбора противоопухолевой терапии // Вопросы онкологии.-2008.-TOM 54, №2.-с.121-132.

28. Карамышева А.Ф. Ангиогенез опухоли: механизмы, новые подходы к терапии // В кн. «Канцерогенез» под ред. Д.Г.Заридзе.-М.-Научный мир.-2000.-с.298-309.

29. Киселев С.М., Луценко C.B., Северин С.Е., Северин Е.С. Ингибиторы опухолевого ангиогенеза // Биохимия.-2003.-т.68, №5.-с.611-631.

30. Кныш И.Т. Некоторые вопросы диагностики и прогнозирования остеогенной саркомы // Ортопед. Травматол.-1984.-№11.-C.46-49.

31. Кныш И.Т., Королев В.И., Толстопятов Б.А. Опухоли из хрящевой ткани.-Киев.-Здоров'я.-1986.-200с.

32. Корман Д.Б. Основы противоопухолевой терапии // М.-Практическая медицина.-2006.-512с.

33. Корницкий М.А. Влияние андрогенов на развитие опухолей костей в эксперименте // Вопр. онкол.-1974.-том 20, №11.-С.26-31.

34. Костылева О.И., Герштейн Е.С., Кушлинский Н.Е. Локальные регуляторы роста клеток костной и хрящевой тканей в норме и при бластомогенезе // Вестник ОНЦ АМН.-1997.-№1.-с.ЗЗ-41.

35. Костылева О.И., Тайлаков Б.Б., Кушлинский Н.Е. и соавт. Рецепторы стероидных гормонов в опухолях Юинга // Вестник ОНЦ РАМН.-1997.-№2.-с.28-31.

36. Костылева О.И., Герштейн Е.С., Радченко A.A. и соавт. Клиническое значение рецепторов эпидермального фактора роста и их лигандов при остеогенной саркоме // Вопр. биол. мед. и фарм. химии.-1998.-№1.- с.30-34.

37. Кусаинов Г.Х. Клиническое значение фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и растворимого Fas-антигена (sFas) у радикальнооперированных больных колоректальным раком //

38. Автореф.дисс. .канд.мед.наук.-Астана.-2005.

39. Кусень С.И., Стойка P.C. Молекулярные механизмы в действии полипептидных факторов роста // М.-Наука.-1985.-227с.

40. Кушлинский Н.Е. Возможности, неудачи и перспективы исследования опухолевых маркеров в онкологической практике. Часть 1 (лекция) // Клиническая лабораторная диагностика.-1999.-№3.-с.25-32.

41. Кушлинский Н.Е., Е.С.Герштейн. Роль фактора роста эндотелия сосудов при раке молочной железы // БЭБМ.-2002.-том 133, №6.-с.604-612.

42. Кушлинский Н.Е. Регуляторы опухолевого роста при остеосаркоме // Вестник РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН.-2003.-№2.-с.10-15.

43. Луценко C.B., Киселев С.М., Фельдман Н.Б., Северин С.Е. Молекулярные механизмы ангиогенеза в физиологических и патологических процесса // В кн.: Введение в молекулярную медицину под ред. М.А.Пальцева.-М.-Медицина.-2004.-с.446-495.

44. Луценко C.B., Фельдман Н.Б., Северин С.Е. Перспективы противоопухолевой антиангиогенной терапии // Молекулярная медицина.-2004.-№4.-с.13-24.

45. Мачак Г.Н. Современные возможности и перспективы комбинированного лечения остеосаркомы // Автореф.дисс.канд.мед.наук.-2006.-М.

46. Меньшиков В.В. Молекулярно-биологические исследования в клинической лабораторной диагностике: возможности и проблемы // Клиническая лабораторная диагностика.-2006.-№3.-С.23-32.

47. Меренцев С.П., Лисняк И.А., Осинский Д.С., Сергиенко Т.К. Уровень фактора роста эндотелия сосудов в сыворотке крови больных раком желудка // 0нкология.-2007.-том 9, № 1.-е.21-24.

48. Морозов А.П. Современные апекты диагностики, мониторинг и факторы прогноза рака предстательной железы // Автореф.дисс. .докт.мед.наук.-М.-2007.

49. Мясшцева H.B. Взаимодействие эйкозаноидов с факторами роста в процессах пролиферации опухолевых клеток // Биохимия.-2005.-том 125, №2.-с.157-166.

50. Нейштадт Э.Л., Маркочев А.Б. Опухоли и опухолеподобные заболевания костей // Санкт-Петербург.-Издательство «ФОЛИАНТ».-2007.-344с.

51. Некачалов В.В. Руководство «Патология костей и суставов» // Санкт-Петербург.-Издательство «Сотис».-2000.-288с.

52. Новик A.A., Камилова Т.А., Цыган В.Н. Ведение в молекулярную биологию канцерогенеза: Учебное пособие для медицинских вузов // Под ред. Ю.Л.Шевченко.-М.-ГЭОТАР-МЕД.-2004.-224с.

53. Пальцев М.А. Введение в молекулярную медицину // М.-Медицина.-2004.-496с.

54. Патрушев Л.И. Введение в молекулярную медицину // М.-2004.-с.352-402.

55. Петров C.B., Райхлин Н.Т. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека // Казань.-Издательство «Титул».-2004.-451с.

56. Петровичев H.H., Еремина Л.А., Хмелев О.Н., Касумов Н.В. Низкодифференцированная («дедифференцированная») хондросаркома // Вопросы онкологии.-1984.-№ 1 .-с.8-13.

57. Полушкина И.Н., Степанова Е.В., Дбар Ж.Н. Молекулярно-биологические маркеры, характеризующие апоптоз, пролиферацию и ангиогенез при раке яичников // Вестник РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН. -2004. -№4. с.60-64.

58. Попова О.П., Шегай П.В., Иванов A.A. и соавт. Молекулярные механизмы развития рака предстательной железы: корреляция уровней EGF, HGF и VEGF с клинико-морфологическими параметрами // Молекулярная медицина.-2008.-№4.-с.40-46.

59. Пустыльняк В.О., Лиясова М.С., Гольдинштейн 0.3., Сидоров C.B., Гуляева Л.Ф. Экспрессия генов ангиогенных факторов в злокачественных опухолях молочной железы // Молекулярная медицина.-2008.-№2.-с.60-64.

60. Северин Е.С., Муйжнек Е.Л., Северин С.Е. Концепция вторичных мессенджеров: от фундаментальных основ — к клинической практике // М.-Издательство «Димитрейд График Групп®».-2005.-329с.

61. Синюков П.А. Современные подходы к химиотерапии остеогенной саркомы // Автор, дисс. .докт.мед.наук.-М.-1993.

62. Смирнова И.О., Соловьев Ю.Н. Гормональная регуляция костной ткани и опухоли скелета // Архив патол.-1986.-№1.-с.82-86.

63. Соловьев Ю.Н. Новые нозологические формы в классификации опухолей костей // Архив патологии. 1998. — т.60, № 4. — с.57-61.

64. Соловьев Ю.Н. Опухоли и опухолеподобные поражения скелета (опыт изучения 4899 наблюдений) // Вестник ОНЦ РАМН.-1998.-№1.-с.13-18.

65. Соловьев Ю.Н. Опухоли костей: классификация, номенклатура, проблемы диагностики // Архив патологии. 2003. - т.65, № 5. - с.3-6.

66. Степанова Е.В., Барышников А.Ю., Личиницер М.Р. Оценка ангиогенеза опухолей человека // Успехи современной биологии.-2000.-т.120, N.6.-c.599-604.

67. Степанова E.B. Антиангиогенная терапия: новые возможности лечения злокачественных заболеваний // Практическая онкология. 2002. - т.З, №4. -с.246-252.

68. Степанова Е.В., Вартанян A.A., Личиницер М.Р. Васкулогенная мимикрия при злокачественных новообразованиях // Молекулярная медицина.-2006.-№1.-с.23-30.

69. Трапезников H.H., Соловьев Ю.Н., Еремина Л.А., Амирасланов А.Т. Саркомы костей: клиника, диагностика, лечение // Ташкент.-Медицина.-1983.-314с.

70. Трапезников H.H., Л.А.Еремина, А.Т.Амирасланов, П.А.Синюков. Опухоли костей //М.-Медицина.-1986.-304с.

71. Трапезников H.H., Соловьев Ю.Н., Еремина Л.А., Амирасланов А.Т., Феденко А.Н., Синюков П.А., Григорова Т.М., Токарева З.И., Ковалевский Е.Е., Готько Е.С. Прогресс в лечении остеогенной саркомы // Вестник ОНЦ РАМН России.-1993.-№1.-с.З-9.

72. Трапезников Н.Н, Алиев М.Д., Синюков П.А., Щербаков С.Д., Соколовский В.А., Тепляков В.В., Мачак Г.Н. Прогресс и перспективы развития методов лечения злокачественных опухолей костей // Вестник РОНЦ 1998.-№1.-с.7-13.

73. Трапезников H.H., Кушлинский Н.Е., Березов Т.Т. и соавт. Хондросаркома гормоночувствительная опухоль? Перспективы эндокринной терапии заболевания // В материалах Конгресса «Человек и лекарство».-М.-1998.-c.531.

74. Хансон К.П. Молекулярная онкология: фундаментальные достижения и практические перспективы // Тезисы Российской конференциипо фундаментальной онкологии «Петровские чтения-2005».-Санкт-Петербург.-2005.-c.3-4.

75. Щербаков A.M., Герштейн Е.С., Анурова О.А., Кушлинский Н.Е. Фактор роста эндотелия сосудов и его рецепторы первого и второго типа при раке молочной железы // Вопросы онкологии.-2005.-т.51, №3.-с.317-321.

76. Юсифов А.И. Активаторы плазминогена урокиназного и тканевого типов и их ингибитор при опухолях костей // Автореф.дисс.канд.биол.наук.-М.-2001.

77. Abe S., Nishimoto Y., Isu К. et al. Preoperative cisplatin for initial treatment of limb osteosarcoma: its local effect and impact on prognosis // Cancer Chemother. Pharmacol.-2002.-Vol.50, N.4.-p.320-324.

78. Abulafia O., Triest W.E., Sherer D.M., Hansen C.C., Ghezzi F. Angiogenesis in endometrial hyperplasia and stage I endometrial carcinoma // Obstet.Gynecol.-1995.-Vol.86.-p.479-485.

79. Achen M.G., Stacker S.A. Molecular control of lymphangiogenesis in cancer//Ann. NY Acad. Sci.-2008.-Vol.l 131.-p.225-234.

80. Alitalo K., Korpelainen E. Signaling angiogenesis and lymphangiogenesis // Current Opinion in Cell Biology. 1998. - Vol.l0.-p.l59-164,

81. Angiolillo A.L., Sgadari C., Taub D.D. et al. Human interferon-inducible protein 10 is a potent inhibitor of angiogenesis in vivo // J. Exp. Med.-1995.-Vol. 182.-p. 155-162.

82. Assi H.5 Le Deley M.C., Missenard G. et al. Intensive induction chemotherapy without methotrexate in adult patients with localized osteosarcoma: Updated results of the Institute Gustave Roussy phase II trial // Proc. ASCO 2004 meeting: A9020.

83. Ayala G., Liu C., Nicosia R., Horowits S., Lackman R. Microvasculature and VEGF expression in cartilaginous tumors // Hum. Pathol.-2000.-Vol.31, N.3.-p.341-346.

84. Bacci G., Longhi A., Ferrari S. et al. Prognostic significance of serum alkaline phosphotase in osteosarcoma of the extremity treated with neoadjuvant chemotherapy: recent experience at Rizzoli Institute // Oncol. Rep.-2002.-Vol.9, N.l.-p.171-175.

85. Bacci G., Picci P., Ruggieri P. et al. Primary chemotherapy and delayed surgery (neoadjuvant chemotherapy) for osteosarcoma of the extremities // Cancer (Phila.).-1990.-Vol.65.-p.2539-2553.

86. Bachelder R.E., Crago A., Chung J. et al. Vascular endothelial growth factor is an autocrine survival factor for neuropilin-expressing breast carcinoma cells //Cancer Res.-2001.-Vol. 61 (15).-P. 5736-5740.

87. Bachelder R.E., Wendt M.A., Mercurio A.M. Vascular endothelial growth factor promotes breast carcinoma invasion in an autocrine manner by regulating the chemokine receptor CXCR4 // Cancer Res.-2002.-Vol. 62 (24).-P. 7203-7206.

88. Barnhill R.L., Levy M.A. Regressing thin cutaneous malignant melanomas (<1.0 mm) are associated with angiogenesis // Am. J. Pathol.-1993.-Vol.l43.-p.93-104.

89. Batist G., Panenaude F., Chamragne P. et al. Neovastat in refractory renal call carcinoma patients: report of a phase II trial with two doses levels // Ann. Oncol.-2002.-Vol. 13.-p. 1259-1263.

90. Bielack S., Delling G., Kotz R. et al. Cooperative osteosarcoma study group trial COSS-96 of intensive, risk-stratified chemotherapy of osteosarcoma // Proc. International Sarcoma Meeting, Stuttgard.-2005.-p.103.

91. Bjornsson J., McLeod R.A., Unni K.K. et al. Primary chondrosarcoma of long bones and limb girdles // Cancer.-1998.-Vol.83, N.10.-p.2105-2119.

92. Blechman J.M., Lev S., Barg J., Eisenstein M., Vaks B., Vogel Z., Givol D., Yarden Y. The fourth immunoglobulin domain of the Stem Cell Factor receptor couples ligand binding to signal transduction // Cell. 1995. - Vol.80. - p.103-113.

93. Blood C.H., Zetter B.R. Tumor interactions with the vasculature: angiogenesis and tumor metastasis // Biochim. Biophys. Acta.-1990.-Vol.1032.-p.89-118.

94. Bosari S., Lee A.K., DeLeellis R.A., Wiley B.D., Heatley G.J., Silverman M.N. Micro vessel quantitation and prognosis in invasive breast carcinoma // Human Pathol. 1992. - Vol.23. - p.755-761.

95. Bramer J.A., Grimer R.J., Abudu A.A. et al. Alkaline phosphatase levels before and after chemotherapy as indications of chemotherapy response and survival in adults with localized osteosarcoma // Proc. EMSOS 2005 meeting (Italy).-2005.-p.65.

96. Brem S.S., Zagzag D., Tsanaclis A.M.C., Gately S., Elkoubly M.P., Brien S.E. Inhibition of angiogenesis and tumor growth in the brain // Am. J. Pathol. -1990. Vol.3 -p.l 121-1142.

97. Breslin J.W., Gaudreault N., Watson K.D. et al. Vascular endothelial factor-C stimulates the lymphatic pump by a VEGF receptor-3-dependent mechanism //Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol.-2007.-Vol.293.-p.709-718.

98. Brisse H., Ollivier L., Edeline V. et al. Imaging of malignant tumours of the long bones in children: monitoring response to neoadjuvant chemotherapy and preoperative assessment // Pediatr. Radiol.-2004.-Vol.34, N.8.-p.595-605.

99. Brosjo O., Bauer H.C.F. Diagnostic procedures and surgical treatment of bone sarcomas // Acta Orthop. Scand.-2004.-Vol.75 (Supl. 31 l).-p.57-61.

100. Burrows F.J., Thorpe P.E. Eradication of large solid tumours in mice with an immunotoxin directed against tumour vasculature // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1993 .-Vol.90.-p. 8996-9000.

101. Cao Y., Linden P., Farnebo J. et al. Vascular endothelial growth factor C induced angiogenesis in vivo // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. - Vol.95. -p.14389-14394.

102. Carmeliet P., Ferreira V., Breier G., Pollefeyt S., Kiecekens I., Gertsenstein M. et al. Abnormal blood vessel development and lethality in embryos lacking a single VEGF allele //Nature.-1996.-Vol.380.-p.435-439.

103. Charity R.M., Foukas A.F., Deshmukh N.S., Grimer R.J. Vascular endothelial growth factor expression in osteosarcoma // Clin. Orthop. Relat. Res.-2006.-Vol.448.-p. 193-198.

104. Chung J., Bachelder R.E., Lipscomb E.A. et al. Integrin (alpha 6 beta 4) regulation of eIF-4E activity and VEGF translation: a survival mechanism for carcinoma cells //J Cell Biol.-2002.-Vol. 158 (l).-P. 165-174.

105. Conn G., Soderman D.D., Schaeffer M.-T., Wile M., Hatcher V.B., Thomas K.A. Purification of a glicoprotein vascular endothelial cell mitogen from a rat glioma-derived cell line // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. - Vol.87. - p.1323-1327.

106. Conzalez R., Leyva A., Moraes M. Shark cartilage as source antiangiogenic compounds; from basic to clinical research // Biol. Pharm. Bull.-2001 .-Vol.24, N. 10.-p. 1097-1101.

107. Coradini D., Pellizzaro C., Speranza A., Daidone M.G. Hypoxia and estrogen receptor profile influence the responsiveness of human breast cancer cells to estradiol and antiestrogens // Cell Mol Life Sci.-2004.-Vol.61, N.l.-p.76-82.

108. Dahlin D.C., Unni K.K. Bone tumors: general aspects and data on 8542 cases; 4th ed. Spring-field I.L., Thomas Ch.C.-1986.

109. Dalai S., Berry A.M., Cullinane C.J. et al. Vascular endothelial growth factor: a therapeutic target for tumors of the Ewing's sarcoma family // Clin. Cancer Res.-2005.-Vol. 11. -p.2364-2378.

110. Dallas N.A., Fan F., Gray M.J. et al. Functional significance of vascular endothelial growth factor receptors on gastrointestinal cancer cells // Cancer Metastasis Rev.-2007.-Vol.26.-p.433-441.

111. Das S., Skobe M. Lymphatic vessel activation in cancer // Ann. NY Acad. Sci.-2008.-Vol. 1131 .-p.235-241.

112. De Vita F., Orditura M., Lieto E. et al. Elevated perioperative serum vascular endothelial growth factor levels in patients with colon carcinoma // Cancer.-2004.-Vol. 100.-p.270-278.

113. Deckers M., Karperien M. et al. Expression of Vascular Endothelial Growth Factor and Treir Receptors during Osteoblast Differentiation // Endocrinology .-2000.-Vol. 141 .-p. 1667-1674.

114. Degtiar W.G., Babkina T.V., Charitidi T.Yu. et al. Androgen metabolism in osteogenic sarcoma // Ninth international congress on anti-cancer treatment (February 2nd-5th, 1999).-Paris.-P.140, s.220.

115. Delany A.M., Dong Y., Canalis E. Mechanisms of glucocorticoid action in bone cells // Cell Biochem.-1994.-Vol.56, N.3.-p.295-302.

116. Dhanabal M., Ramchandran R., Waterman M. J. et al. Endostatin: yeast production, mutants, and antitumor effect in renal cell carcinoma // J. Biol. Chem.-1999.-Vol.274.-p.l 1721-11726.

117. Digue L., Lolot F., Garbe L. et al. Osteosarcoma in adolescent and adults: does the histologic response to preoperative chemotherapy really matter? // Proc. ASCO 2000 meeting.-2000.-A2210.

118. DuBois S., Demetri G. Markers of angiogenesis and clinical features in patients with sarcoma// Cancer.-2007.-Vol.l09.-p.813-819.

119. Egeblad M., Werb Z. New functions for the matrix metalloproteinases in cancer progression // Nat. Rev. Cancer.-2002.-Vol.2, N.3.-p.l61-l 74.

120. Ek E.T., Ojaimi J., Kitagawa Y., Choong P.F. Outcome of patients with osteosarcoma over 40 years of age: is angiogenesis a marker of survival? // Int. Semin. Surg. Oncol.-2006.-Vol.3.-p.7.

121. Ennekin W.F. A system for the surgical staging of musculoskeletal sarcomas // Clin. Orthop.-1986.-Vol.204.-p.9-24.

122. Ennekin W.F., Spanier S.S., Goodman M.A. A system for the surgical staging of musculoskeletal sarcomas // Clin. 0rthop.-1980.-Vol.153.-p.106-120.

123. Eroglu A., Gules S., Kurtan C. et al. Vascular endothelial growth factor 936 C/T polymorphism in cancer patients // Ann. C)ncol.-2006.-Vol.l7.-p.l467-1468.

124. Feinberg R.N., Beebe D.C. Hyaluronate in vasculogenesis // Science.-1983.-Vol.220.-p.l 177-1179.

125. Ferguson W., Goorin A.M. Current treatment of osteosarcoma // Cancer Invest.-2001 .-Vol. 19, N.3.-p.292-315.

126. Ferrara N. The role of vascular endothelial growth factor in pathological angiogenesis // Breast Cancer Res. Treat. 1995. — Vol.36, N.2. — p. 127-137.

127. Ferrara N. The role of VEGF in the regulation of physiological and pathological angiogenesis // Exs.-2005.-Vol. (94).-P. 209-231.

128. Ferrara N. Vascular endothelial growth factor: basic science and clinical progress //EndocrRev.-2004.-Vol. 25 (4).-P. 581-611.

129. Ferrara N., Carver-Moore K., Chen H., Dowd M., Lucy Lu K., CTShea S. et al. Heterozigous embrionic lethality induced by targeted inactivation of the VEGF gene // Nature. 1996. - Vol.380. - p.439-442.

130. Ferrara N., Davis-Smith T. The biology of vascular growth factor // Endocrinol. Reviews.-1997.-Vol.l, N.18.-p.4-25.

131. Ferrara N., Gerber H.P., LeCouter J. The biology of VEGF and its receptors //Nat. Med.-2003.-Vol.9.-p.669-676.

132. Fletcher C.D., Unni K.K., Mertens F. (Eds.). World Health Organization Classification of Tumours. Pathology and Genetics of Soft Tissue and Bone // Published by IARC Press, International Agency for Research on Cancer.-Lyon.-France.-2002.

133. Folkman J. Angiogenesis. In: Harrison's Textbook of Internal Medicine, 15th Edition. Braunwald E., Fauci A.S., Kasper D.L., Hauser S.L., Longo D.L., Jameson J.L., eds. New York: McGraw-Hill. 2001. - p.517-530.

134. Folkman J. Anti-angiogenesis: new concept for therapy of solid tumours // Ann. Surg.-1972.-Vol. 175.-p.409-416.

135. Folkman J. Tumor angiogenesis // Adv. Cancer Res. 1985. - Vol.43. -p.175-230.

136. Folkman J. What is the evidence that tumours are angiogenesis dependent? // J. Natl. Cancer Inst.-1990.-Vol.82.-p.4-6.

137. Folkman J., Cotran R. Relation of vascular proliferation to tumor growth // Int. Rev. Exp. Pathol. 1976. - Vol.16. - p.207-248.

138. Folkman J., Haudenschild C. Angiogenesis in vitro II Nature (Lond).-1980.-Vol.288, N.5791.-p.551-556.

139. Folkman J., Long D.M., Becker F.F. Growth and metastasis of tumor in organ culture // Cancer. 1963. - p.453-467.

140. Fong G., Rossant J., Gertsenstein M., Breitman M. Role of the Flt-1 receptor tyrosine kinase in regulating the assembly of vascular endothelium // Nature.-1995.-Vol.376.-p.66-70.

141. Fulda S. Tumor resistance to apoptosis // Int. J. Cancer.-2009.-Vol. 124.-p.511-515.

142. Gasparini G. Clinical significance of the determination of angiogenesis in human breast cancer: update of the biological background and overview of the vicenza studies // Eur. J. Cancer.-1996.-Vol.32A.-p.2585-2593.

143. Gerber HP, Hillan KJ, Ryan AM et al. VEGF is required for growth and survival in neonatal mice. Development 1999; 126:1149-1159.

144. Gimbrone M., Cotran R., Leapman S., Folkman J. Tumor growth and neovascularization an experimental model using the rabbit cornea // J. Natl. Cancer Inst. 1974. - Vol.52. - p.413-427.

145. Gimbrone M., Leapman S., Cotran R.S., Folkman J. Tumor angiogeneses: iris neovascularization at a distance from experimental intraocular tumors // J.Natl.Cancer Inst.-l973.-Vol.50.-p.219-228.

146. Gimbrone M.A., Leapman S.B., Cotran R.S., Folkman J. Tumour dormancy in vivo by prevention of neovascularisation // J. Exp. Med. 1972. -Vol.136.-p.261-276.

147. Glasser D.B., Lane J.M., Huvos A.G., Marcove R.C., Rosen G. Survival, prognosis and therapeutic respose in osteogenic sarcoma: the Memorial Hospital Experienca // Cancer (Philad.).-1992.-Vol.69.-p.698-708.

148. Gospodarowicz D., Abraham J.A., Schillng J. Isolation and characterization of a vascular endothelial cell mitogen produced by pituitary-derived folliculo stellate cells // Proc. Natl. Sci. USA.-1989.-Vol.86.-p.7311-7315.

149. Grimer R.J. Outcome after local recurrence in osteosarcoma // Proc. EMSOS 2000 meeting (London).-2000.-p.8.

150. Guidi A., Abu J.G., Tognazzi K. et al. Expression of vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) and its receptors in endometrial carcinoma // Cancer.-1996.-Vol.86.-p.454-460.

151. Guo P., Fang Q., Tao H.Q. et al. Overexpression of vascular endothelial growth factor by MCF-7 breast cancer cells promotes estrogen-independent tumor growth in vivo // Cancer Res.-2003.-Vol. 63 (15).-P. 4684-4691.

152. Halliwell W.B. Pathology of bone and joint neoplasms // Ed. By T.R.Saunders Company.-1999.

153. Harris A.L. Anti-angiogenesis therapy and strategies for integrating it with adjuvant therapy. Recent Results // Cancer Res. 1998. - Vol.152. - p.341-52.

154. Hefler L.A., Zeillinger R., Frimm Ch. et al. Preoperative serum vascular endothelial growth factor as a prognostic parameter in ovarian cancer // Gynecol. Oncol.-2006.-Vol. 103 .-p.512-517.

155. Heimann R., Ferguson D., Powers C., Recant W., Weichselbaum R., Hellman S. Angiogenesis as a predictor of longterm survival for patients with node-negative breast cancer // J. Natl. Cancer Inst.-1996.-Vol.88.-p.l764-1769.

156. Hicklin D.J., Ellis L.M. Role of the vascular endothelial growth factor pathway in tumor growth and angiogenesis // L. Clin. Oncol.-2005.-Vol.23.-p.1011-1027.

157. Hollingsworth H.C., Kohn E.C., Steinberg S.M., Rothenberg M.L., Merino M.J. Tumor angiogenesis in advanced stage ovarian carcinoma // Am. J. Pathol. 1995. - Vol.147. - p.33-41.

158. Holzer G., Obermair A., Koschat M., Preyer O., Kotz R., Trieb K. Concentration of vascular endothelial growth factor (VEGF) in the serum of patients with malignant bone tumors // Med. Pediatr. Oncol 2001.-p.601-604.

159. Horner A, Bord S, Kelsall A W, Coleman N, Comptston JF. Tie2 ligands angiopoietin-1 and angiopoietin-2 are coexpressed with vascular endothelial cell growth factor in growing human bone // Bone.-200l.-Vol.28.-p.65-71.

160. Huang Y., Lin Z., Zhuang J., Chen Y., Lin J. Prognostic significance of alpha V integrin and VEGF in osteosarcoma after chemotherapy // 0nkologie.-2008.-Vol.31.-p.535-540.

161. Huvos A.G. Bone tumots.-Saunders Company.-1993.

162. Ilhan I., Berberoglu S., Unsal I. et al. Bone-spesific alkaline phosphatase in plasma as tumor marker for osteosarcoma in childhood // Proc. ASCO 2000 meeting.-2000.-A2344.

163. Jaffer N., Pearson P., Smith T. et al. Limb salvage in pediatric osteosarcoma: local recurrent, treatment and outcome // Proc. ASCO 1999 meeting.-1999.-A2162.

164. Jia S.F., Guan H., Duan X., Kleinerman E.S. VEGF165 is necessary to the metastatic potential of Fas(-) osteosarcoma cells but will not rescue the Fas(+) cells // J. Exp. Ther. C)ncol.-2008.-Vol.7.-p.89-97.

165. Jikihara H., Tetrada N., Yamamoto R., Nishikawa Y., Tanizawa O., Matsumoto K. Inhibitory effect of medroprogesterone acetate on angiogenesis induced by human endometrial cancer // Am. J. Obstet. Gynecol.-1992.-Vol. 167.-p.207-211.

166. Karayiannakis A J., Bolanaki H., Syrigos K.N. et al. Serum vascular endothelial growth factor levels in pancreatic cancer patients correlate with advanced and metastatic disease and poor prognosis // Cancer ett.-2003.-Vol. 194.-p.l 19-124.

167. Karayiannakis A.J., Syrigos K.N., Polychronidis A. et al. Circulating VEGF levels in the serum of gastric cancer patients. Corelation with pathological variables, patient survival, and tumor surgery // Ann. Surg.-2002.-Vol.236.-p.37-42.

168. Kaste S.C., Liu T., Billups C.A. Tumor size as a predictor of outcome in pediatric non-metastatic osteosarcoma of the extremity // Pediatr. Blood Cancer.-2004.-Vol.43, N.7.-p.723-728.

169. Keck P.J., Hauser S.D., Krivi G., Sanzo K., Warren T., Feder J., Connoly D.T. Vascular permeability factor, an endothelial cell mitogen related to PDGF // Science. 1989. - Vol.246. - p.1309-1312.

170. Kerbel R.S. Acquired resistance to the antitumor effect of epidermal growth factor receptor-blocking antibodies in vivo: a role for altered tumor angiogenesis // Cancer Res.-2001 .-Vol.61 ,N.13 .-p.5090-6101.

171. Kerbel, R.S., ViloriaPetit, A., Klement, G., Rak, J.'Accidental' anti-angiogenic drugs, anti-oncogene directed signal transduction inhibitors and conventional chemotherapeutic agents as examples // Eur. J. Cancer. — 2000. — Vol.36, N.10. p.1248-1257.

172. Kim H.K., Song K.S., Park Y.S. et al. Elevated levels of circulating platelet microparticles, VEGF, IL-6 and RANTES in patients with gastric cancer: possible role of a metastatic predictor // Eur. J. Cancer.-2003.-Vol.39.-p. 184-191.

173. Kim K., Li B., Winer J., Armanini M., Gillett N., Phillips H., Ferrara, N. Inhibition of vascular endothelial growth factor induced angiogenesis suppresses tumour growth in vivo // Nature. 1993. - Vol.362. - p.841-844.

174. Knox W.F., Bowcoff M., Walls J., Faragher E.B., Bundred N.J. Prognostic significance of angiogenesis in breast cancer // J. Pathol.-1994.-Vol. 172, Suppl.-p.121.

175. Kolb E.A., Kushner B.H., Gorlick R. et al. Long-term event-free survival after intensive chemotherapy for Ewing's family of tumors in children and young adults//J. Clin. 0ncol.-2003.-Vol.2l.-p.3423-3430.

176. Kondo T., Ohta T., Igura K. et al. Tea catechins inhibit angiogenesis in vitro, measured by human endothelial cell growth, migration and tube formation, through inhibition of VEGF receptor binding // Cancer Lett.-2002.-Vol. 180, N.2.-p.139-144.

177. Kotz R., Dominkus M., Zettl T. et al. Advances in bone tumour treatment in 30 years with respect to survival and limb salvage. A singl institution experience // Int. Orthop.-2002.-Vol.26, N.4.-p. 197-202.

178. Kurachi K., Davie E.W., Strydrom D.G., Riordan J.F., Vallie B.L. Seguence of the cDNA and gene for angiogenenin, a human angiogenesis factor // Biochemistry. 1985. - Vol.24, N.20. - p.5495.

179. Kushlinskii N., Babkina I., Solov'ev Y., Trapeznikov N. Vascular endothelial growth factor and angiogenin in the serum of patients with osteosarcoma and Ewing's tumor // Bull Exp. Biol. Med.-2000.-Vol.l30.-p.691-693.

180. Kutteh W.H., Kutteh C.C. Quantitation of tumor necrosis factor-alpha, interleukin-1 beta, and interleukin-6 in the effusions of ovarian epithelial neoplasms //Am. J. Obstet. Gynecol. 1992. - Vol.167, - p. 1864-1869.

181. Kuzuzaki K., Takeshita H., Murata H. et al. Prognostic significance of DNA ploidy pattern in osteosarcomas in association with chemotherapy // Cancer Lett.-1999.-Vol. 137, N. 1 .-p.27-33.

182. Lee T.PI., Bolontrade M.F., Worth L.L. et al. Production of VEGF165 by Ewing's sarcoma cells induces vasculogenesis and the incorporation of CD34+ stem cells into the expanding tumor vasculature // Int. J. Cancer.-2006.-Vol.l 19.-p.839-846.

183. Leenders W., Lubsen N., Altena M. et al. Design of a Variant of Vascular Endothelial Growth Factor-A (VEGF-A) Antagonizing KDR/Flk-1 and Flt-1 //Lab. Invest.-2002.-Vol.82.-p.473-481.

184. Leung D.W., Cachianes G., Kuang W-J., Goeddel D.V., Ferrara N. Vascular endothelial growth factor is a secreted angiogenic mitogen // Science. -1989. Vol.246. - p.1306-1309.

185. Leung K.S., Fung K.P., Sher A.H. et al. Plasma bone-spesific alkaline phosphotase as an indicator of osteoblastic activity // J. Bone Joint Surg. Br.-1993.-Vol.75, N.2.-p.288-292.

186. Li A., Dubey S., Varney M.L. et al. IL-8 directly enhanced endothelial cell survival, proliferation, and matrix metalloproteinases production and regulated angiogenesis // J. Immunol.-2003.-Vol.l70.-p.3369-3376.

187. Lurje G., Zhang W., Schultheis FA.M. et al. Polymorphisms in VEGF and IL-8 predict tumor recurrence in stage III colon cancer // Ann. Oncology.-2008.-Vol. 19.-p. 1734-1741.

188. Machak G.N., Tkachev S.I., Solovyev Y.N. et al. Neoadjuvant chemotherapy and local radiotherapy for high-grade osteosarcoma of the extremitis // Mayo Clin. Proc.-2003.-Vol.78.-p. 147-155.

189. Maeda T., Kawane T., Horiuchi N. Statins Augment Vascular Endothelial Growth Factor Expression in Osteoblastic Cells via Inhibition of Protein Prenylation // Endocrinology .-2003.-Vol. 144.-p.681-692.

190. Masood R., Cai J., Zheng T. et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) is an autocrine growth factor for VEGF receptor-positive human tumors // Blood.-2001 .-Vol.98.-p. 1904-1913.

191. Matsumoto T., Claesson-Welsh L. VEGF receptor signal transduction // Sei STKE.-2001.-Vol. 2001 (112).-P. RE21.

192. McCarty M.F., Block K.I. Multifocal Angiostatic Therapy // Integrative Cancer Therapies.-2005.-Vol.4, N.4.-p.301-314.

193. Mei J., Gao Y., Zhang L. et al. VEGF-siRNA silencing induces apoptosis, inhibits proliferation and suppresses vasculogenic mimicry in osteosarcoma in vitro 11 Exp. Oncol.-2008.-Vol.30.-p.29-34.

194. Mesiano S., Ferrarre N., Jaffer R.B. Role of vascular endothelial growth factor in ovarian cancer // Am. J. Pathol. 1998. - Vol.153. - p. 1249-1256.

195. Meyers P.A., Gorlick R., Heller G. et al. Intensification of preoperative chemotherapy for osteogenic sarcoma: Results of the Memorial Sloan-Kettering (T12) protocol // J. Clin. Oncol.-1998.-Vol. 16, N.7.-p.2452-2458.

196. Mignatti P., Rifkin D.B. Plasminogen activators and matrix metalloproteinases in angiogenesis // Enzyme Protein.-1996.-Vol.49.-p.117-137.

197. Millauer B., Shawver L.K., Plate K.H. et al. Glioblastoma growth inhibited in vivo by a dominant-negative Flk-1 mutant // Nature.-1994.-Vol.367.-p.576-579.

198. Mineta H., Mirua K., Ogino T. et al. Prognostic value of vascular endothelial growth factor (VEGF) in head and neck squamous cell carcinomas // Br. J. Cancer.-2000.-Vol.86.-p.775-781.

199. Miralem T., Steinberg R., Price D., Avraham H. VEGF(165) requires extracellular matrix components to induce mitogenic effects and migratory response in breast cancer cells//0ncogene.-2001.-Vol. 20 (39).-P. 5511-5524.

200. Moon S.H., Shin K.H., Suh J.S. et al. Tumor volume change after chemotherapy as a predictive factor of disease free survival for osteosarcoma // Yonsei Med. J.-2005 .-Vol.46, N. 1 .-p. 119-124.

201. Muller Y., Li B., Christinger H., Wells J. et al. Vascular Endothelial Growth Factor: Crystal structure and functional mapping of the kinase domain receptor binding site // Biochemistry.-1997.-Vol.94.-p.7192-7197.

202. Nagy J. A., Brown L.F., Senger D.R. et al. Pathogenesis of tumor stroma generation: a critical role for leaky blood vessels and fibrin deposition // Biochim. Biophys. Acta.-1989.-Vol.948.-p.305-326.

203. Neufeld G., Cohen T., Gengrinovitch S. et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors // FASEB J.-1999.-Vol.l3.-p.9-22.

204. Nicolson G. Organ specificity of tumor metastasis: role preferential adhesion, invasion and growth of malignant cells at specific secondary sites // Cancer Metastasis Rev. 1988. - Vol.7. - p. 143-188.

205. Noden D.M. Embrionic origin and assembly of blood vessels // Am. Rev. Respir. Dis. 1989. - Vol.140. - p.1097-1103.

206. Obermair A., Kurz C., Czerwenka K., Thoma M., Kaider A., Wagner T. et al. Microvessel density and vessel invasion in lymph-node-negative breast cancer: effect on recurrence-free survival //Int. J. Cancer.-1995.-Vol.62.-p.l26-131.

207. Oda Y., Yamamoto H., Tamiya S. et al. CXCR4 and VEGF expression in the primary site and the metastatic site of human osteosarcoma: analysis within a group of patients, all of whom developed lung metastasis // Mod. Pathol.-2006.-Vol. 19.-p.738-745.

208. Olson T.A., Mohanraj D., Carson L.F., Ramakrishnan S. Vascular permeability factor gene expression in normal and neoplastic human ovaries // Cancer Res.-1994.-Vol.54.-p.276-280.

209. Paley P.J., Staskus K.A., Gebhard K., Mohanraj D., Twiggs L.B., Ramakrishnan S. Vascular endothelial growth factor expression early stage ovarian carcinoma // Cancer. 1997. - Vol.80. - p.98-106.

210. Pallotta M.G., Specterman S., Gioseffi H. et al. Tumor size as a prognostic factor in osteosarcomas // Proc. ASCO 2004 meeting.-2004.-A9061.

211. Park H.R., Min K., Kim H.S., Jung W.W., Park Y.K. Expression of vascular endothelial growth factor-C and its receptor in osteosarcomas // Pathol. Res. Pract.-2008.-Vol.204.-p.575-582.

212. Park J.E., Keller G.-A., Ferrara N. The vascular endothelial growth factor (VEGF) isifirms: differantional deposition into the subepithelial extracellular matrix and bioactivity of ECM-bound VEGF // Mol. Biol. Cell. 1993. - Vol.4. -p.1317-1326.

213. Phillips H.S., Hains J., Leung D.W., Ferrara N. Vascular endothelial growth factor is expressed in rat corpus luteum // Endocrinology. 1990. - Vol.127. -p.965-967.

214. Pintucci G., Bikfalvi A., Klein S., Rifkin D.B. Angiogenesis and the fibrinolytic system // Semin. Thromb. Hemost.-1996.-Vol.22, N.6.-p.517-24.

215. Ravindranath N., Little-Ihrig L., Phillips H. S., Ferrara N., Zeleznik A.J. Vascular endothelial growth factor messenger ribonucleic acid expression in the primate ovary //Endocrinology.-1992.-Vol.131.-p.254-260.

216. Rebhun R.B., Langley R.R., Yokoi K. et al. Targeting receptor tyrosine kinase on lymphatic endothelial cells for the therapy of colon cancer lymph node metastasis // Neoplasia.-2006.-Vol.8, N.9.-p.747-757.

217. Rech A., Castro C.G. Jr., Mattei J. et al. Clinical features in osteosarcoma and prognostic implications // J. Pediatr (Rio J.).-2004.-Vol.80, N.I.-p.65-70.

218. Rinderknecht M., Detmar M. Tumor lymphangiogenesis and melanoma metastasis // J. Cell Physiol.-2008.-Vol.216, N.2.-p.347-354.

219. Risau W. Mechanisms of angiogenesis // Nature.-1997.-Vol.386.-p.671674.

220. Rosen L. Antiangiogenic strategies and agents in clinical trials // The Oncologist.-2000.-Vol.5.-p.20-27.

221. Salven P., Teerenhovi L., Joensuu H.A. high pretreatment serum vascular endothelial growth factor concentration is associated with poor outcome in non-Hodgkins lymphoma // Blood.-1998.-Vol.90.-p.3167-3172.

222. Sato Y. Transcription factor ETS-1 as a molecular target for angiogenesis inhibition // Hum. Cell. 1998. - Vol.11, N.4. - p.207-214.

223. Schoell W., Pieber D., Reich O., Lahousen M., Janicek M., Guecer F., Winter R. Tumor of angiogenesis as a prognostic factor in ovarian carcinoma: quantification of endothelial immunoreactivity by image analysis // Cancer. -1997. -Vol.80. p.2257-2262.

224. Schoppmann S.F., Fenzl A., Schindl M. et al. Flypoxia inducible factor-1 alpha correlates with VEGF-C expression and lymphangiogenesis in breast cancer // Breast Cancer Res. Treat.-2006.-Vol.99, N.2.-p. 135-141.

225. Sezer O., Jakob C., Niemoller K., Poon R., Fan S., Wong J. Angiogenesis in cancer//J. Clin. Oncol.-2001.-Vol.l9.-p.3299-3301.

226. Shalaby F., Rossant J., Yamaguchi T., Gertsenstein M., Wu X., Breitman M., Schuh A. Failure of blood-island formation and vasculogenesis in Flk-1-deficient mice //Nature. 1995. - Vol.376. - p.62-66.

227. Shin K.H., Moon S.H., Suh J.S., Yang W.I. Tumor volume change as a predictor of chemotherapeutic response in osteosarcoma // Clin. 0rthop.-2000.-Vol.376.-p.200-208.

228. Shushanov S., Bronstein M., Adelaide J., Jussila L., Tchipysheva T., Jacquemier J., Stavrovskaya A., Birnbaum D., Karamysheva A. VEGFc and VEGFR3 expression in human thyroid pathologies // Int. J. Cancer. 2000. -Vol.86, N.l. - p.47-52.

229. Sledge G., Miller K. Angiogenesis and antiangiogenic therapy // Curr. Probl. Cancer.-2002.-Vol.26.-p. 1-60.

230. Souhami R.L., Craft A.W., Van der Eijken J.W. et al. Randomized trial of two regimens of chemotherapy in operable osteosarcoma: a study of the European osteosarcoma intergroup // Lancet.-1997.-Vol.350.-p.911-917.

231. Spannuth W.A., Nick A.M., Jennings N.B. et al. Functional significance of VEGFR-2 on ovarian cancer cells // Int. J. Cancer.-2009.-Vol.124.-p. 1045-1053.

232. Srivastava A., Laidler P., Davies R., Horgan K., Hughes L. The prognostic significance of tumor vascularity in intermediate-thickness (0,76-4,0 mm thick) skin melanoma // Am. J. Pathol. 1988. - Vol.133. - p.419-423.

233. Stewart P.A., Wiley M.J. Developing nervous tissue induces formation of blood-brain characteristics in invading endothelial cells: a study using quail-chick transplantation chimeras // Dev. Biol. 1981. - Vol.84. - p.183-192.

234. Stohr W., Paulides M., Bielack S. et al. Ifosfamide-induced nephrotoxicity in 593 sarcoma patients: A report from the Late Effects Surveilance System // Pediatr. Blood Cancer.-2007.-Vol.48.-p.447-452.

235. Street J., Bao M., Guzman L. et al. Vascular Endothelial Growth Factor stimulates bone repair by promoting angiogenesis and bone turnove // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2002.-Vol.99, N. 15.-p.9656-9661.

236. Strieter R.M., Burdick M.D., Mestas J. et al. Cancer CXC chemokine networks and tumour angiogenesis // Eur. J. Cancer.-2006.-Vol.42.-p.768-778.

237. Sznurkowska K., Lenckowski R., Popadiuk S. et al. Assessment of angiogenesis in children' s osteosarcoma // Med. Wieku. Rozwoj.-2006.-Vol.10.-p.737-744.

238. Takahashi H., Shibuya M. The vascular endothelial growth factor (VEGF)/VEGF receptor system and its role under physiological and pathological conditions // Clin Sci (Lond).-2005.-Vol.l09, N.3.-p.227-241.

239. Takigawa N., Segawa Y., Fujimoto N., Hotta K., Eguchi K. Elevated vascular endothelial growth factor levels in sera of patients with lung cancer // Anticancer Res.-1998.-Vol. 18.-p. 1251 -1254.

240. Tamura M., Ohta Y. Serum vascular endothelial growth factor-C level in patients with primary nonsmall cell lung carcinoma // Cancer.-2003.-Vol.98.-p.1217-1222.

241. Tanigawa N., Amaya H., Matsumura M., Shimomatsuya T. Association of tumor vasculature with tumor progression and overall survival of patients with non-early gastric carcinomas //Br. J. Cancer.-1997.-Vol.75.-p.566-571.

242. Toi M., Kondo S., Suzuki H., Yamamoto Y., Inada K., Imazawa T., Taniguchi T., Tominaga T. Quantitative analysis of vascular endothelial growth factor in primary breast cancer // Cancer.-1996a.-Vol.77, N.6.-p.l 101-1106.

243. Tolentino M.J., Miller J.W., Gragoudas E.S. et al. Vascular endothelial growth factor is sufficient to produce iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate // Arch. Ophthalmol. 1996. - Vol.114. - p.964-970.

244. Tung-Ping Poon R., Sheung-Tat F., Wong J. Clinical implications of circulating angiogenic factors in cancer patients // J. Clin. Onc.-2001.-Vol.4.-p.l207-1225.

245. Voest E.E., Kenyon B.M., O'Reilly M.S. et al. Inhibition of angiogenesis in vivo by interleukin 12 // J. Natl. Cancer. Inst.-1995.-Vol.87.-p.581-586.

246. Weidner N., Carroll P.R., Flax J., Blumenfeld W., Folkman J. Tumor angiogenesis correlates with metastasis in invasive prostate carcinoma // Am. J. Pathol.-1993 .-Vol. 143 .-p.401 -409.

247. Weidner N., Folkman J., Pozza F., Bevilacqua P., Allred E.N., Moore D.H. et al. Tumour angiogenesis: a new significant and independent prognostic indicator in early stage breast carcinoma // J. Natl. Cancer Inst.-1992.-Vol.84.-p. 1875-1887.

248. Weidner N., Semple J., Welch W., Folkman J. Tumor angiogenesis and metastasis correlation in invasive breast carcinoma // N. Engl. J. Med.-1991.-Vol.324.-p.l-8.

249. Weigand M., Hantel P., Kreienberg R., Waltenberger J. Autocrine vascular endothelial growth factor signalling in breast cancer. Evidence from cell lines and primary breast cancer cultures in vitro // Angiogenesis.-2005.-Vol.8, N.3.-p. 197-204.

250. Weiss K.R., Cooper G.M., Jadlowiec J.A. et al. VEGF and BMP expression in mouse osteosarcoma cells // Clin. Orthop. Relat. Res.-2006.-Vol.450.-p.111-117.

251. Wey J.S., Fan F., Gray M.J. et al. Vascular endothelial growth factor receptor-1 promotes migration and invasion in pancreatic carcinoma cell lines // Cancer.-2005.-Vol. 104.-p.427-43 8.

252. Wiggins D.L., Granai C.O., Steinhoff M., Calabresi P. Tumor angiogenesis as a prognostic factor in cervical carcinoma // Gynecol Oncol.-1995.-Vol.56.-p.353-356.

253. Winkler K., Beron G., Delling G. et al. Neoadjuvant chemotherapy of osteosarcoma: results of a randomized cooperative trial (COSS-82) with salvage chemotherapy based on histological tumor response // J. Clin. Oncol.-1988.-Vol.6.-p.329-337.

254. Xie B., Tarn N.N., Tsao S.W., Wong Y.C. Co-expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors (flk-1 and fit-1) in hormone-induced mammary cancer in the Noble rat // Br. J. Cancer.-1999.-Vol.81, N.8.-p.1335-1343.

255. Yang S.Y., Yu H., Krygier J.E., Wooley P.H., Mott M.P. High VEGF with rapid growth and early metastasis in a mouse osteosarcoma model // Sarcoma.-2007 : 95628.

256. Yin D., Jia T., Gong W. et al. VEGF blockade decelerates the growth of a murine experimental osteosarcoma // Int. J. Oncol.-2008.-Vol.33.-p.253-259.

257. Yoshiji H., Gomez D.E., Shibuya M., Thorgeirsson U.P. Expression of vascular endothelial growth factor. Its receptor, and other angiogenic factors in human breast cancer // Cancer Res.-1996.-Vol.56.-p.2013-2016.

258. Yukata K., Matsui Y., Goto T., Kubo T., Yasui N. Differential expression of VEGF isoforms and VEGF receptors in cartilaginous tumors // Anticancer Res.-2005.-Vol.25.-p.955-957.

259. Zelzer E., McLean W., Yin-Shan Ng. et al. Skeletal defects in VEGF 120/120 mice reveal multiple roles for VEGF in skeletogenesis // Development.-2002.-Vol. 129.-p. 1893-1904.

260. Zhang H.T., Craft P., Scott P.A. et al. Enhancement of tumor growth and vascular density by transfection of vascular endothelial cell growth factor into MCF-7 human breast carcinoma cells // J. Natl. Cancer Inst.-1995.-Vol.87.-p.213-219.

261. Zhang L., Kharbanda S., Chen D. et al. MCF-7 breast carcinoma cells overexpressing FGF-1 form vascularized, metastatic tumors in ovariectomized or tamoxifen-treated nude mice // Oncogene.-1997.-Vol.l5.-p.2093-2108.

262. Zhao Y., Hague S., Manek S., Zhang L., Bickell R., Rees M. PCR display identifies tamoxifen induction of the novel angiogenic factor adrenomedullin by a non estrogenic mechanism in the human endometrium // Oncogene.-1998.-Vol.16, N.3.-p.409-415.

263. Zheng M.H., Xu J., Robbins P. et al. Gene Expression of Vascular Endothelial Growth Factor in giant cell tumors of bone // Hum. Pathol.-2000.-Vol.31, N.7.-p.804-812.

264. Zhou Z., Bolontrade M.F., Reddy K. et al. Suppression of Ewing's sarcoma tumor growth, tumor vessel formation, and vasculogenesis following anti vascular endothelial growth factor receptor-2 therapy // Clin. Cancer Res.-2007.-Vol.l3.-p.4867-4873.

265. Zhou Z., Reddy K., Guan H., Kleinerman E.S. VEGF(165), but not VEGF(189), stimulates vasculogenesis and bone marrow cell migration into Ewing's sarcoma tumors in vivo II Mol. Cancer Res.-2007.-Vol.5.-p.l 125-1132.