«Фармакогностическое изучение кульбабы осенней (Leontodon autumnalis L.) и кульбабы шершавоволосистой (Leontodon hispidus L.)» тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат наук Гончаров Николай Николаевич

• Гончаров Николай Николаевич
• кандидат наук
• 2016

Оглавление диссертации кандидат наук Гончаров Николай Николаевич

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 АНАЛИЗ ДАННЫХ ЛИТЕРАТУРЫ ПО БОТАНИЧЕСКОЙ ХАРАКТЕРИСТИКЕ, ХИМИЧЕСКОМУ СОСТАВУ, ПРИМЕНЕНИЮ КУЛЬБАБЫ ОСЕННЕЙ И КУЛЬБАБЫ ШЕРШАВОВОЛОСИСТОЙ В

НАРОДНОЙ МЕДИЦИНЕ И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИМ ИССЛЕДОВАНИЯМ

1.1 Ботаническая характеристика кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой

1.2 Химический состав кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой

1.3 Применение кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой в народной медицине и фармакологические исследования

ГЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объекты исследования

2.2 Методы исследования биологически активных веществ

2.2.1 Приготовление водных извлечений для качественного анализа

2.2.2 Анализ углеводов

2.2.3 Анализ азотсодержащих соединений

2.2.4 Анализ дубильных веществ

2.2.5 Анализ органических кислот

2.2.6 Приготовление спирто-водных извлечений и разделение природных соединений

2.2.7 Анализ кумаринов

2.2.8 Анализ фенолкарбоновых кислот

2.2.9 Анализ флавоноидов

2.2.10 Исследование методом ВЭЖХ фенольных соединений

2.2.11 Анализ тритерпеновых соединений

2.2.12 Анализ каротиноидов

2.2.13 Исследование жирно-кислотного состава

2.2.14 Анализ сесквитерпеновых лактонов

2.2.15 Минеральный состав исследуемых видов растений

2.3 Методы изучения углеводов

2.3.1 Выделение полисахаридов

2.3.2 Изучение полисахаридов

2.4 Установление числовых показателей

2.5 Проведение морфолого-анатомических исследований

2.6 Методы токсико-фармакологических исследований

2.6.1 Определение острой токсичности

2.6.2 Определение антиоксидантной активности

2.6.3 Определение отхаркивающего действия

2.6.4 Определение противовоспалительной активности

2.6.5 Определение антибактериальной активности

2.7 Статистическая обработка полученных результатов

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ КАЧЕСТВЕННОГО И КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОДЕРЖАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ КУЛЬБАБЫ ОСЕННЕЙ И КУЛЬБАБЫ ШЕРШАВОВОЛОСИСТОЙ

3.1 Результаты анализа углеводных производных

3.1.1 Результаты анализа свободных сахаров

3.1.2 Результаты анализа связанных сахаров

3.2 Результаты анализа азотсодержащих соединений

3.2.1 Результаты анализа азотистых оснований

3.2.2 Результаты анализа аминокислотного состава

3.3 Результаты анализа дубильных веществ

3.3.1 Результаты качественного обнаружения дубильных веществ

3.3.2 Результаты количественного определения дубильных веществ

3.4 Результаты анализа органических кислот

3.4.1 Результаты качественного обнаружения органических кислот

3.4.2 Результаты количественного определения свободных органических кислот

3.5 Результаты анализа кумаринов

3.6 Результаты анализа фенолкарбоновых кислот

3.7 Результаты анализа флавоноидов

3.8 Результаты исследования методом ВЭЖХ фенольных соединений

3.9 Результаты анализа тритерпеновых соединений

3.9.1 Результаты качественого обнаружения тритерпеновых соединений

3.9.2 Результаты количественного определения тритерпеновых соединений

3.10 Результаты анализа каротиноидов

3.10.1 Результаты качественого обнаружения каротиноидов

3.10.2 Результаты количественного определения каротиноидов

3.11 Результаты исследования жирно-кислотного состава

3.12 Результаты исследования сесквитерпеновых лактонов

3.12.1 Результаты качественого обнаружения сесквитерпеновых лактонов

3.12.2 Результаты количественного определения сесквитерпеновых лактонов

3.13 Результаты анализа минерального состава растений

3.14 Результаты изучение углеводов

3.14.1 Выделение полисахаридных фракций

3.15 Результаты анализа углеводных фракций

3.15.1Результаты количественного определения моносахаридов в углеводных фракциях

3.15.2 Результаты анализа функциональных групп пектиновых веществ

ГЛАВА 4 ИССЛЕДОВАНИЕ ПОДЛИННОСТИ, ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА

ТРАВЫ КУЛЬБАБЫ ОСЕННЕЙ И КУЛЬБАБЫ ШЕРШАВОВОЛОСИСТОЙ

4.1 Определение подлинности сырья

4.1.1 Определение морфологических признаков травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой

4.1.2 Определение микродиагностических признаков травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой

4.2 Установление числовых показателей сырья

4.2.1 Результаты определения влажности

4.2.2 Результаты определения золы

4.2.3 Результаты определения экстрактивных веществ

4.3 Результаты определения суммы флавоноидов

4.3.1 Результаты разработки методики определения содержания суммы флавоноидов

4.3.2 Методика количественного определения суммы флавоноидов

4.3.3 Результаты валидации методики количественного определения суммы флавоноидов в траве кульбабы осенней

4.3.4 Содержание суммы флавоноидов в траве кульбабы осенней и кульбабы шершавоволоситой

4.4 Результаты количественного определения полисахаридов

4.4.1 Результаты изучения условий гравиметрического определения суммы

полисахаридов

4.4.2 Методика количественного определения суммы полисахаридов

4.4.3 Результаты валидации методики количественного определения суммы полисахаридов в траве кульбабы осенней

4.5 Изучение динамики кумуляции флавоноидов и полисахаридов в зависимости от фазы вегетации

4.6 Установление сроков годности сырья

4.7 Разработка нормативной документации на лекарственное растительное сырье «Кульбабы трава»

ГЛАВА 5 ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КУЛЬБАБЫ ОСЕННЕЙ И КУЛЬБАБЫ ШЕРШАВОВОЛОСИСТОЙ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ

ИХ ВОДНЫХ ИЗВЛЕЧЕНИЙ

5.1 Результаты определения острой токсичности

5.2 Результаты определения антиоксидантной активности

5.3 Результаты определения отхаркивающей активности

5.4 Результаты определения противовоспалительной активности

5.5 Результаты определения антибактериальной активности

5.6 Стандартизация водных извлечений

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему ««Фармакогностическое изучение кульбабы осенней (Leontodon autumnalis L.) и кульбабы шершавоволосистой (Leontodon hispidus L.)»»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Обеспечение населения доступными и эффективными лекарственными средствами является актуальной и социально-значимой задачей. Несмотря на тот факт, что на сегодняшний день мировая фармацевтическая промышленность разрабатывает около трех тысяч оригинальных и несколько десятков тысяч воспроизведенных лекарственных препаратов, современная фармацевтическая наука продолжает активный поиск лекарственных источников растительного происхождения и создание на их основе новых лекарственных средств.

С этой целью необходимо проводить максимально полный, критический анализ базы народной медицины. Так, в народной медицине широко применяются растения рода Leontodon (L.).

На территории областей Центральной России произрастают два представителя данного рода: кульбаба шершавоволосистая и кульбаба осенняя, которые с давних пор применяются в качестве противовоспалительных, желчегонных, седативных и противокашлевых средств. Но несмотря на широкое применение их в народной медицине, в официнальной они не используются.

Для изучения возможности использования растений народной медицины в медицинской практике необходимы исследования по изучению химического состава биологически активных веществ, разработке показателей качества и методов стандартизации сырья. В связи с этим фармакогностическое изучение кульбабы шершавоволосистой и кульбабы осенней является актуальной задачей и нуждается в решении.

Степень разработанности темы исследования. Фитохимическим изучением надземных и подземных органов кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой занимались отечественные и зарубежные ученые А. Гроссгейм, С. Сапожников, С. Станков, J. Pyrek, С. Zidorn, T. Barzynski, S. Hooper, R. Chandler, O. Volker и M. Kapula. Ими были обнаружены отдельные представители таких классов биологически активных веществ как флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, сесквитерпены, витамины, тритерпены, каротиноиды, стероиды, жирные масла и углеводы. C. Zidorn и соавторы изучили противовоспалительную и цитотоксическую активность сесквитерпенов, выделенных из кульбабы шершавоволосистой. Несмотря на проведенные исследования, кульбаба осенняя и кульбаба шершавоволосистая продолжают оставаться малоизученными растениями, так как изучение различных классов биологически активных соединений проводилось фрагментарно и не носило системный характер. Стандартизация сырья кульбабы не проводилась.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось фармакогностическое изучение травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой, произрастающей на территории Центральной России, проведение стандартизации и диагностики сырья.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

• фитохимическое изучение кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой;

• изучение фенольных соединений;

• выделение и изучение полисахаридных комплексов;

• проведение морфолого-анатомических исследований кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой;

• разработка методик определения содержания флавоноидов и полисахаридов;

• изучение динамики кумуляции флавоноидов и полисахаридов в зависимости от фазы вегетации для установления сроков заготовки сырья;

• проведение фармакологического скрининга;

• получение и стандартизация водных извлечений;

• разработка проекта нормативной документации «Кульбабы трава».

Научная новизна. Впервые изучен минеральный и аминокислотный состав травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой. Аминокислотный состав растений рода кульбаба представлен 15 аминокислотами, из которых 7 являются незаменимыми. В траве растений установлено 15 минеральных элементов. Для каждого вида определены преобладающие аминокислоты и минеральные вещества. Содержание токсичных минеральных элементов не превышает предельно допустимых концентраций, нормированных для продовольственного сырья и пищевых продуктов.

Методами бумажной, тонкослойной, газожидкостной и высокоэффективной жидкостной хроматографии в сырье исследуемых видов идентифицировано 17 веществ фенольной природы. Обнаружены кумарины: скополетин, умбеллиферон, кумарин; флавоноиды: цинарозид, лютеолин, апигенин; производные дубильных веществ: галлокатехин, эпигаллокатехин, эпикатехин, эпикатехингаллат; производные фенолкарбоновых кислот: хлорогеновая, кофейная, галловая, эллаговая, розмариновая, феруловая, п-кумаровая кислоты. 13 соединений фенольной природы установлены для данных видов впервые.

Выделены и изучены полисахариды кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой. Полисахариды изучаемых видов представлены водорастворимыми полисахаридными комплексами (ВРПС), пектинами, гемицеллюлозами А и Б. Проведено изучение качественного и количественного моносахаридного состава полисахаридных фракций. Изучены функциональные группы пектинов.

Методом ГЖХ изучены карбоновые кислоты, представленные органическими, жирными

и фенолкарбоновыми кислотами в сырье изучаемых видов. В траве растений установлено наличие 37 карбоновых кислот. Среди органических кислот преобладающими являются, яблочная, лимонная и левулиновая кислоты, среди жирных - линолевая, линоленовая и пальмитиновая кислоты, среди фенолкарбоновых кислот - п-оксибензойная, п-кумаровая и феруловая кислоты.

Проведено морфолого-анатомическое изучение травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой. Установлены морфологические и микродиагностические признаки для определения подлинности сырья.

В ходе проведения скрининговых фармакологических исследований водных и водно-спиртовых извлечений, а также полисахаридных комплексов травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой установлено наличие антиоксидантной, противовоспалительной, отхаркивающей и антибактериальной активностей.

Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты проведенных исследований позволяют расширить представления о химическом составе, морфолого-анатомических признаках и фармакологической активности травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой.

Обоснована необходимость стандартизации травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой по содержанию флавоноидов и полисахаридов. Установлены оптимальные условия экстрагирования из сырья флавоноидов и полисахаридов. Разработаны методики спектрофотометрического определения суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид и гравиметрического определения суммы полисахаридов для изучаемых видов. Методики валидированы по показателям линейности, правильности, воспроизводимости и повторяемости.

Сведения, полученные в ходе изучения фармакологической активности травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой, выступают в качестве практического базиса для последующего углубленного изучения видов с целью их внедрения в научную медицину.

Результаты диссертационного исследования используются в учебных, научных процессах, а также внедрены в практическую деятельность:

- методика количественного определения суммы флавоноидов в траве кульбабы осенней (акт внедрения в научно-исследовательскую и учебную работу кафедры фармакогнозии и ботаники КГМУ от 02.03.2015 г., акт внедрения в работу отдела контроля качества ООО Фирмы «Здоровье» от 17.03.2015 г.);

- методика количественного определения суммы полисахаридов в траве кульбабы осенней (акт внедрения в научно-исследовательскую и учебную работу кафедры фармакогнозии и ботаники КГМУ от 02.03.2015 г., акт внедрения в работу отдела контроля качества ООО Фирмы «Здоровье» от 19.02.2015 г.);

На базе отдела контроля качества ООО Фирмы «Здоровье» проведена апробация проекта нормативной документации «Кульбабы трава» (акт апробации от 16.07.2015 г).

Методология и методы исследования. Методология фармакогностического исследования подразумевает научно обоснованную и целесообразно организованную последовательность действий, включающую информационно-исследовательский, фитохимический, стандартизационный, морфолого-анатомический и фармакологический блоки. В процессе выполнения диссертационной работы при проведении фармакогностического исследования использованы химические, физико-химические, макроскопический, микроскопический, фармакологический, микробиологический и статистические методы анализа.

Основные положения, выносимые на защиту

• результаты фитохимического изучения кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой;

• результаты изучения фенольных соединений;

• результаты исследования полисахаридных комплексов;

• результаты морфолого-анатомических исследований кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой, характеристики подлинности сырья;

• результаты разработок методик количественного определения флавоноидов и полисахаридов, характеристики и нормы качества сырья;

• результаты изучения динамики кумуляции флавоноидов и полисахаридов в зависимости от фазы вегетации;

• результаты фармакологического скрининга травы кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность полученных результатов подтверждена проведением большого объема экспериментальных исследований и применением современных методов исследования, позволяющих получать воспроизводимые и достоверные результаты. Полученные результаты исследований статистически обработаны в соответствии с требованиями ГФ XI издания при помощи программного обеспеченья Microsoft Excel 2013.

Основные положения диссертационной работы представлены на III Международной научно-практической конференции «Современные проблемы отечественной медико-биологической и фармацевтической промышленности. Развитие инновационного и кадрового потенциала Пензенской области» (г. Пенза, 21-23 ноября 2013г.), XII Международной конференции «Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы» (г. Минск 11-12 апреля 2014 г.), 79-ой Всероссийской научной конференции студентов и молодых учёных

с международным участием «Молодёжная наука и современность» (г. Курск, 16-17 апреля 2014 г.), 80-ой Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием, посвященная 80 -летию КГМУ «Молодежная наука и современность» (г. Курск, 15-16 апреля 2015 г.), международной научно-практической конференции «Свободные радикалы в химии и жизни» (г. Минск, 25-26 июня 2015 г.).

Апробация работы проходила на межкафедральной научно-практической конференции кафедр фармацевтического и медико-биологического профиля КГМУ (23 октября 2015, г. Курск).

Публикации. По теме диссертационного исследования опубликовано 24 научных работы, в том числе 5 в журналах, рекомендованных для печати Высшей аттестационной комиссией Минобрнауки России.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Диссертационная работа соответствует паспорту специальности 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия. Результаты исследования соответствуют области исследования специальности, а именно пунктам 2,3,6 паспорта специальности «фармацевтическая химия, фармакогнозия».

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Курского государственного медицинского университета (номер государственной регистрации 01.2.014.50337).

Личный вклад автора. Диссертационная работа представляет собой самостоятельный научный труд и включает исследования автора за период с 2010 по 2015 гг. Автором проведен анализ отечественных и зарубежных научных публикаций по теме исследования, выполнены фитохимические, микродиагностические и фармакологические исследования. Анализ полученных экспериментальных данных, статистическая обработка результатов и выводы сделаны под руководством научного руководителя.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 162 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (главы 2, 3, 4, 5), общих выводов, списка литературы, приложений. В диссертации содержится 43 таблицы и 66 рисунков. Библиографический список состоит из 248 источников, из которых 45 - на иностранных языках.

ГЛАВА 1 АНАЛИЗ ДАННЫХ ЛИТЕРАТУРЫ ПО БОТАНИЧЕСКОЙ ХАРАКТЕРИСТИКЕ, ХИМИЧЕСКОМУ СОСТАВУ, ПРИМЕНЕНИЮ КУЛЬБАБЫ ОСЕННЕЙ И КУЛЬБАБЫ ШЕРШАВОВОЛОСИСТОЙ В НАРОДНОЙ МЕДИЦИНЕ И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИМ ИССЛЕДОВАНИЯМ

1.1 Ботаническая характеристика кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой

В медицине с давних времен используются лекарственные растения, многие из которых являются представителями семейства Астровых.

Семейство Астровые (Asteraceae) является крупнейшим семейством цветковых растений, насчитывающим около 1300 родов и более 20000 видов, распространенных по всему земному шару. В странах СНГ произрастает свыше 3500 видов [73]

Представители семейства чаще всего - травянистые растения, реже полукустарники; в тропиках имеется несколько древесных представителей [46].

Астровые распространены повсюду, где встречаются высшие растения - от тундровой до экваториальной зоны, от океанических берегов до горных вершин, на скупых барханах и плодороднейших черноземах [ 169].

Семейство разделяется на два не равных по объему подсемейства. Относительно невелико подсемейство Латуковые (Lactucoideae или Liguliflorae, Cichorioideae), к которому относятся все роды, имеющие корзинки исключительно с язычковыми цветками, причем язычки 5 -зубчатые, вегетативная часть несет только у данного подсемейства млечники. Все остальные роды относятся к подсемейству Астровые (Asteroideae или Tubuliflorae) [73, 169].

Род Кульбаба - Leontodon L. относится к подсемейству Латуковые и включает в себя до 45 видов растений, большая часть которых распространена в Средиземноморье. На востоке род доходит до западной части Западной Сибири, на севере достигает тундровой зоны. Имеется несколько видов в Южной и Северной Америке [176].

В Европейской части России произрастают 4 представителя рода кульбаба: кульбаба осенняя (Leontodon autumnalis К), кульбаба шершавоволосистая (Leontodon hispidus L.), кульбаба дунайская (Leontodon danubialis Jacq.) и кульбаба шершавая (Leontodon biscutellifolius DC.) [100].

В ходе изучения флоры Курской области А. В. Полуянов и Н. А. Прудников установили, что на территории данной области произрастают 2 вида кульбабы: кульбаба осенняя (Leontodon autumnalis К) и кульбаба шершавоволосистая (Leontodon hispidus L.) [135].

Представители рода Кульбаба являются одно- и многолетними травянистыми растениями. Для них характерен простой стебель с одной корзинкой или ветвистый, с несколькими корзинками. Листья зубчатые или перисто надрезанные, реже почти цельнокрайние, образуют прикорневую розетку. Многоцветковые корзинки желтого или оранжевого цвета. Обвертки почти черепитчатые, состоящие из 1 -3 рядов листочков, с более короткими наружными листочками. Цветоложе голое, ячеистое, волокнистое или мелкоямчатое, по краям ямок с маленькими волосистыми пленками. Семянки цилиндрические, более-менее веретенообразные, без носика или с коротким носиком, продольнобороздчатые, поперечноморщинистые; хохолок не опадающий, из 1 -2 рядов щетинок, при основании не сросшихся. Щетинки внутреннего ряда перистые, наружного ряда всегда более короткие, часто просто зубчатые [176].

Кульбаба осенняя (Leontodon autumnalis L.) (рисунок 1) - многолетнее травянистое растение. Корневище укороченное, как бы обрубленное, с многочисленными крепкими волокнами. Стебель обычно ветвистый, реже простой, гладкий или более-менее обильно снабженный простыми волосками. Прикорневые листья лежачие, удлиненные, довольно широкие, с длинными крылатыми черешками, зубчатые или перисто надрезанные, или перисто раздельные с линейными долями, реже цельнокрайние или почти цельнокрайние.

ф>

Рисунок 1 - Кульбаба осенняя (Leontodon autumnalis L.) (фото автора) Цветоносы длинные, полые, на вершине утолщенные, снабженные линейными или шиловидными, прижатыми к стеблю листочками. Корзинки до цветения прямостоячие, во время цветения до 2 см длиной, при плодах до 2,5 см шириной. Обвертка из ланцетных листочков с белым паутинистым опушением или кроме того с рыжими щетинистыми, реже белыми или черными волосками. Венчик желтый или очень редко бледно-фиолетовый. Семянки веретеновидные, 5 мм длиной, к верхушке и к основания слабо суженные, бороздчатые, поперечноморщинистые. Хохолок до 6-7 мм длиной, грязно-белый, с одним рядом перистых к основанию слабо расширенных и зубчатых щетинок, реже среди перистых

встречаются простые зубчатые щетинки [176]. Цветет с июня до осени [100].

Кульбаба осенняя распространена в Центральной и Атлантической Европе, Скандинавии, странах СНГ, занесена в Северную Америку. Она произрастает в Европейской части России, Предкавказье, Южном Закавказье, Западной и Восточной Сибири, на Камчатке, на Сахалине. Кульбаба осенняя растет на полях, выгонах, лугах, в кустарниковых зарослях, в разреженных лесах [73, 176]. Согласно Флоры Центрального Черноземья коэффициент встречаемости кульбабы осенней составляет 81-100 % [77].

Кульбаба шершавоволосистая (Leontodon 1ш|ж1и$ Ь.) (рисунок 2) - многолетнее травянистое растение высотой 10-60 см. Корневище короткое, как бы обрубленное, горизонтально или вертикально вниз направленное, с многочисленными нитевидными корнями, стрелка прямая, шероховатая от мелких вильчатых волосков, внизу иногда розоватая, вверху под корзинкой слабо утолщенная, густоволосистая, безлистная, или реже с одним линейным листом, преимущественно в верхней части.

Рисунок 2 - Кульбаба шершавоволосистая (Leontodon hispidus К) (фото автора) Прикорневые листья длиной 5-20 см, 1-3 см шириной, продолговатые или ланцетные, выемчато-зубчатые, надрезанно-выемчатые, покрытые короткими жесткими вильчатыми волосками, на нижней поверхности с многочисленными точечными ямками, на дне которых сидят вильчатые волоски, в живом состоянии большей частью волнисто-курчавые, к основанию постепенно сужающиеся в довольно длинный, иногда розовый черешок.

Корзинки во время цветения прямостоячие, до цветения поникающие, диаметром 1,2-3 см. Язычковые цветки желтые, листочки обвертки линейные, линейно-ланцетные, темно-зеленые, наружные отклоненные листочки щетинисто-волосистые, с простыми щетинистыми волосками и с небольшой примесью двувильчатых волосков, вверху по краю паутинисто-

волосистые. Цветоложе пленчатое, волосистое, слегка выпуклое. Семянки длинной 4-6 мм, шириной 0,75 мм, веретеновидные, с относительно коротким носиком, прямые или слегка изогнутые, продольнобороздчатые, поперечноморщинистые, светло-коричневые, блестящие. Хохолок двурядный, щетинки наружного ряда короткие, зубчатые, внутреннего ряда перистые - до 7 мм длиной, при основании расширенные, блестящие [176]. Цветет в июне-июле, иногда вторично в августе [100].

Распространена в различных регионах Цетральной и Атлантической Европы, Скандинавии, на Балканском и Антолийском полуострове и на территории стран СНГ. В России кульбаба шершавоволосистая произрастает в Европейской части, в Причерноморье и на Кавказе. Растет на полянах, опушках, лугах, в степях, среди зарослей кустарников [73, 176, 100].

Согласно Флоры Центрального Черноземья коэффициент встречаемости кульбабы шершавоволосистой составляет 21-40 % [77].

1.2 Химический состав кульбабы осенней и кульбабы шершавоволосистой

Наиболее изученной группой биологически активных веществ растений рода кульбаба являются сесквитерпеновые лактоны. Начало изучению сесквитерпеновых лактонов в исследуемых видах было положено в 1985 г. J. Pyrek. Им были найдены 2 сесквитерпеновых лактона: 8-дезоксилактуцин и яквеленин в листьях, подземной части и нектаре кульбабы осенней [235] (таблица1).

В 1998 году С. Zidom c соавторами выделил из целого растения кульбабы шершавоволосистой, используя в качестве экстрагента метилен хлористый, два известных гваян-5,12 олида: 14-гидроксигипокретенолид и 14-гидросигипокретенолид-Р-О-глюкопиранозид и один новый гваян-5,12 олид. Структура нового соединения была установлена методом ЯМР-спектроскопии как 14-гидроксигипокретенолид-Р-О-глюкопиранозид-4'-14''-гидроксигипокретеноат [248].

При продолжении исследований кульбабы шершавоволосистой ими же методом ВЭЖХ были выделены 5 сесквитерпеновых лактонов, из них 3 описанных ранее и 2 новых, структура которых установлена методом одномерной и двумерной ЯМР-спектроскопии как 14-гидрокси-11,13-дигидрогипокретенолид и 14-гидрокси-11,13-дигидрогипокретенолид-Р-0-глюкозид. Проведено определение количественного содержания сесквитерпеновых лактонов методом ВЭЖХ с диодно-матричным детектором в различных органах растения. Количественное

содержание сесквитерпеноидов было оценено как соотношение площадей пиков в области сантонина, используемого в качестве внутреннего стандарта.

В корнях были обнаружены все 5 лактонов, с преобладанием 14-гидроксигипо-кретенолид-Р-О-глюкопиранозид-4'-14''-гидроксигипокретеноата (3,94 мг/г) и 14-гидроксигипо-кретенолид-Р-О-глюкозида (1,73 мг/г).

Таблица 1 - Химический состав растений рода кульбаба

Части растения Выделенные соединения Литература

1 2 3

Кульбаба осенняя

Все части Тритерпены: [143, 229]

растения а-амирин

Р-амирин

Стероиды: [143, 229]

Р-систостерин

Каротиноиды [143, 245]

Каучук [143]

Надземная часть Сесквитерпены: [214, 234]

крепидиазид А

крепидиазид Б

15 -глюкопиранозилокси-2-оксо-гвая-3,11(13)-диен-

1а,5а,бр,7а,10аИ- 12,6-олид

15-глюкопиранозилокси-2-оксо-гвая-3-ен-

1а,5а,бр,7а,10а,11рИ- 12,6-олид

15-гидрокси-2оксо-гвая-3 -ен- 1а,5а,бр,7а,10а,11рН- 12,6-олид

15 -гликопиранозилокси-2-оксо-гвая-3,11(13)

-диен-1Р,5а,бр,7а,10аН-12,6-олид

Стероиды [143, 212]

Алкалоиды [143,212]

Дубильные вещества [143,212]

Флавоноиды: [143, 212]

Лейкоантоцианы

Подземная часть Сесквитерпены: [143, 235]

8-дезоксилактуцин

яквиленин

Каротиноиды [143, 235]

Листья Сесквитерпены: [143, 235]

8-дезоксилактуцин

яквиленин

Каротиноиды: [143, 154]

виолоксантин

Флавоноиды: [143, 154]

лютеолин

Цветки Флавоноиды: [214, 234]

лютеолин

лютеолин-7-0-Р-0-гентиобиозид

лютеолин-7-0-Р-0-глюкозид

лютеолин-7-O-P-D-глюкуронид лютеолин- 4'-O-P-D-глюкозид Фенолкарбоновые кислоты: хлорогеновая кислота 3,5-дикофеил хинная кислота кофеилвинная кислота цикориевая кислота [214, 234]

Семена Жирное масло [55, 143, 167]

Нектар Углеводы: сахароза Сесквитерпены: 8-дезоксилактуцин яквиленин Каротиноиды [143, 231] [143, 235] [143, 235]

Витамины: Токоферол [143, 208]

Кульбаба шершавоволосистая

Все части растения Каучук [143]

Корни Флавоноиды: лютеолин лютеолин-7-O-P-D-глюкозид лютеолин-7-O-P-D-глюкуронид лютеолин- 4'-O-P-D-глюкозид Фенолкарбоновые кислоты: 3,5-дикофеил хинная кислота кофеилвинная кислота хлорогеновая кислота цикориевая кислота Сесквитерпеноиды: 14-гидрокси-11,13 -дигидрогипокретенолид 14-гидрокси-11,13 -дигидрогипокретенолид-P-D-глюкозид 14-гидроксигипокретенолид 14-гидроксигипокретенолид-P-D-глюкозид 14-гидроксигипокретенолид-P-D-глюкозид-4'-14м-гидрокси- гипокретеноат [247] [246] [247, 248]

Корневища Флавоноиды: лютеолин лютеолин-7-O-P-D-глюкозид лютеолин-7-O-P-D-глюкуронид Фенолкарбоновые кислоты: 3,5-дикофеил хинная кислота кофеилвинная кислота хлорогеновая кислота цикориевая кислота Сесквитерпеноиды: 14-гидрокси-11,13 -дигидрогипокретенолид 14-гидрокси-11,13 -дигидрогипокретенолид-Р^-глюкозид 14-гидроксигипокретенолид [247] [246] [247, 248]

14-гидроксигипокретенолид-Р^-глюкозид

14-гидроксигипокретенолид-Р-0-глюкозид-4'-14"-гидрокси-

гипокретеноат

Флавоноиды: [235, 239]

лютеолин,

лютеолин-7-O-P-D-глюкозид

лютеолин-7-O-P-D-глюкуронид

лютеолин- 4'-O-P-D-глюкозид

изоэтин

Фенолкарбоновые кислоты: [246]

3,5-дикофеил хинная кислота

Листья кофеилвинная кислота

хлорогеновая кислота цикориевая кислота

Сесквитерпеноиды: [247, 248]

14-гидрокси-11,13 -дигидрогипокретенолид

14-гидрокси-11,13 -дигидрогипокретенолид-P-D-глюкозид

14-гидроксигипокретенолид

14-гидроксигипокретенолид-P-D-глюкозид

14-гидроксигипокретенолид-Р-0-глюкозид-4'-14"-гидрокси-

гипокретеноат

Флавоноиды: [247]

лютеолин

лютеолин-7-O-P-D-глюкозид

лютеолин-7-O-P-D-глюкуронид

Фенолкарбоновые кислоты: [246]

3,5-дикофеил хинная кислота

кофеилвинная кислота

Стебель хлорогеновая кислота

цикориевая кислота

Сесквитерпеноиды: [247, 248]

14-гидрокси-11,13 -дигидрогипокретенолид

14-гидрокси-11,13 -дигидрогипокретенолид-Р^-глюкозид

14-гидроксигипокретенолид

14-гидроксигипокретенолид-Р^-глюкозид

14-гидроксигипокретенолид-Р-0-глюкозид-4'-14"-гидрокси-

гипокретеноат

Флавоноиды: [247]

лютеолин

лютеолин-7-O-P-D-глюкозид

лютеолин-7-O-P-D-глюкуронид

лютеолин- 4'-O-P-D-глюкозид

Фенолкарбоновые кислоты: [246]

Обвертка 3,5-дикофеил хинная кислота

кофеилвинная кислота хлорогеновая кислота цикориевая кислота

Сесквитерпеноиды: [247, 248]

14-гидрокси-11,13 -дигидрогипокретенолид

14-гидрокси-11,13 -дигидрогипокретенолид-Р^-глюкозид

14-гидроксигипокретенолид

14-гидроксигипокретенолид-Р-О-глюкозид 14-гидроксигипокретенолид-Р-О-глюкозид-4'-14"-гидрокси-гипокретеноат

Цветки Флавоноиды: [247]

лютеолин

лютеолин-7-0-Р-0-гентиобиозид

лютеолин-7-О-Р-О-глюкозид

лютеолин-7-О-Р-О-глюкуронид

лютеолин- 4'-0-Р-Э-глюкозид

Фенолкарбоновые кислоты: [246]

3,5-дикофеил хинная кислота

кофеилвинная кислота

хлорогеновая кислота

цикориевая кислота

Сесквитерпеноиды: [247, 248]

14-гидрокси-11,13 -дигидрогипокретенолид

14-гидроксигипокретенолид

14-гидроксигипокретенолид-Р-В-глюкозид

14-гидроксигипокретенолид-Р-О-глюкозид-4'-14"-гидрокси-

гипокретеноат

Витамины: [149, 205]

токоферол

Семена Жирное масло [55, 143]

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Гончаров Николай Николаевич, 2016 год

Литература:

1. Государственная Фармакопея СССР: Вып.2: Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М. : Медицина, 1987. - 336 с.

Инструкцию составили:

Доцент кафедры фармакогнозии и ботаники

ГБОУ ВПО КГМУ, д.ф.н. Р.А. Бубенчиков

Аспирант кафедры фармакогнозии и ботаники

ГБОУ ВПО КГМУ Н.Н. Гончаров