Гликолипидные биосурфактанты, продуцируемые нефтеокисляющими бактериями рода RHODOCOCCUS при пониженной температуре тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат наук Лыонг Тхи Мо

• Лыонг Тхи Мо
• кандидат наук
• 2018

Оглавление диссертации кандидат наук Лыонг Тхи Мо

ВВЕДЕНИЕ

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Поверхностно-активные вещества, продуцируемые микроорганизмами

1.2. Трегалолипидные биосурфактанты бактерий-нефтедеструкторов рода КЪойососст

1.2.1 Структурное разнообразие трегалолипидов, продуцируемых родококками

1.2.2 Физиологическая роль и биологическая активность трегалолипидов

1.2.3 Характеристика трегалолипидов как сурфактантов

1.2.4 Влияние субстратов на способность родококков продуцировать биосурфактанты

1.2.5 Адаптация бактерий рода КЪойососст к пониженным температурам и продукция биосурфактантов в этих условиях

1.2.6 Биодеградация углеводродов нефти родококками при пониженых температурах

1.2.7 Применение трегалолипидных биосурфактантов, в том числе в биоремедиации загрязненных территорий

1.3 Методы изучения биосурфактантов

1.3.1 Скрининговые методы определения поверхностной и эмульгирующей активности

1.3.2 Выделение, характеристика и очистка трегалолипидных биосурфактантов

1.3.3 Определение структуры трегалолипидов

Заключение

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты исследования и условия культивирования

2.2 Рост микроорганизмов и продуцирование биосурфактантов

2.3 Гидрофобность клеточной поверхности микроорганизмов

2.4 Трансмиссивная электронная микроскопия

2.5 Содержание общих липидов клеток бактерий

2.6. Клеточносвязанный гексадекан

2.7 Выделение внеклеточных биосурфактантов

2.8 Тонкослойная хроматография гликолипидов

2.9 Определение жирнокислотного состава липидов и биосурфактанта

2.10 Разделение трегалолипидов методом колоночной хроматографии

2.11 Определение структуры биосурфактантов методом масс-спектрометрии

2

2.12 Физико-химические свойства трегалолипидов

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЯ

3.1 Рост бактерий Я вгу^горо^ Х5 и Я вгу^горо^ 867 и их способность

продуцировать биосурфактанты в зависимости от источника углерода

3.2. Влияние температуры на способность родококков продуцировать биосурфактанты

3.3 Адгезивная активность бактерий Я.вгу^гороШ Х5 и ЯвгуМгороШ Б67

3.4 Общее содержание и жирнокислотный состав липидов бактерий и внеклеточных липидов

3.4.1 Выделение и характеристика суммарных липидов бактерий

3.4.2 Содержание связанного гексадекана в биомассе бактерий и жирнокислотный состав клеточных липидов

3.4.3 Жирнокислотный состав внеклеточных липидов

3.5. Морфология и ультраструктурная организация клеток Я. вгу^горо^ Х5 и

К егуШгоро^ 867 при росте на гексадекане

3.5.1. Морфология Я вгу^горо^ Х5 и Я. вгу^горо^ 867 при росте на гексадекане

3.5.2. Ультраструктурная организация клеток Я. вгу^горо^ Х5 и Я. вгу^горо^ Б67 при росте на гексадекане

3.6 Выделение и характеристика гликолипидных биосурфактантов

3.6.1 Обнаружение гликолипидов в культуральной среде бактерий

3.6.2. Выделение и очистка гликолипидных биосурфактантов

3.5.2 Определение структуры трегалолипидов

3.7. Характеристика сукцинилтрегалолипидов как сурфактантов

3.7.1 Критическая концентрация мицеллообразования

3.7.2 Солюбилизация н-гексадекана под действием сукцинилтрегалолипидов

3.8 Биодеградация гексадекана бактериями Я вгу^горо^ Х5 и Я. вгу^горо^ 867 при

участии биосурфактантов

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Загрязнение окружающей среды углеводородами нефти является глобальной проблемой в современном мире. Способность микроорганизмов к потреблению и утилизации углеводородов нефти хорошо известна и позволяет использовать их в технологиях биоремедиации. Представители рода Ккойососст являются эффективными деструкторами углеводородов нефти различных групп, они легко адаптируются к экстремальным условиям окружающей среды и часто входят в состав биопрепаратов для очистки от нефтяных загрязнений. В условиях холодного климата, где в последние годы интенсивно ведется нефтедобыча, восстановление загрязненных территорий природными микроорганизмами происходит крайне медленно. При низких температурах многие углеводороды нефти переходят в твердое агрегатное состояние, что значительно влияет на их биодоступность и степень биодеградации микроорганизмами. Известно, что бактерии рода Ккойососст продуцируют гликолипидные биосурфактанты (биоПАВ), повышающие биодоступность гидрофобных субстратов [1, 2]. В ряде работ показано, что при пониженных температурах родококки могут продуцировать биосурфактанты, как при росте на жидких (керосине) [3], так и при росте на твердых углеводородных субстратах (тетрадекане [4] и н-гексадекане [5]). Однако, биосурфактанты, которые продуцируют родококки при пониженной температуре, не идентифицированы, и их роль в биодеградации гидрофобных субстратов при низких температурах пока мало изучена.

Бактерии Ккойососст егу1ЬгороИ8 Х5 и Ккойососст егу1ЬгороИ8 8867 входят в состав биопрепарата «МикроБак», разработанный для очистки нефтезагрязненных почв в интервале температур +4 - +30°С [6]. Ранее было показано, что эти бактерии продуцируют в культуральную среду

трегалолипидные биосурфактанты при температуре около 25°С [7].

4

Однако, взаимосвязь между степенью биодеградации гидрофобных субстратов и продукцией биосурфактантов этими бактериями не выявлена, тем более при пониженной температуре.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Гликолипидные биосурфактанты, продуцируемые нефтеокисляющими бактериями рода RHODOCOCCUS при пониженной температуре»

Цель работы

Определить структуру и свойства биосурфактантов, продуцируемых бактериями Я. егу1ЬгороИ8 Х5 и Я. егу1ЬгороИ8 Б67 при 10оС, и обосновать потенциал применения биосурфактантов для утилизации углеводородов на примере н-гексадекана

Задачи исследования

1. На основе сравнительного анализа физико-химических показателей культуральной среды при температурах культивирования 26оС и 10оС (поверхностное натяжение, содержание сахаров), свойства клеточной поверхности и роста клеток на н-гексадекане выявить влияние температуры на продукцию биосурфактантов родококками и адгезию клеток бактерий к гидрофобному субстрату.

2. Определить общее содержание и жирнокислотный состав внеклеточных и клеточных липидов бактерий при росте на н-гексадекане при 26оС и 10оС.

3. Выяснить особенности ультраструктурной организации клеток родококков, выращенных на н-гексадекане при пониженной температуре.

4. Определить химическую структуру и физико-химические свойства основного компонента внеклеточных гликолипидных биосурфактантов, продуцируемых родококками при 10оС.

5. Для выявления возможности увеличения эффективности биоремедиации нефтезагрязненных территорий провести сравнительный анализ результатов биодеградации н-гексадекана родококками при дополнительном внесении в систему выделенного биосурфактанта.

Научная новизна работы

Впервые показано, что качественный состав продуцируемых родококками биосурфактантов при росте на гексадекане в условиях пониженной температуры 10°С соответствует составу биосурфактантов, продуцируемых при 26°С. Это означает, что важную роль в процессе потребления гидрофобных субстратов бактериями-нефтедеструкторами играют гликолипидные биосурфактанты, которые способствуют доступности для микроорганизмов н-гексадекана, как в жидком, так и в твердом состоянии при пониженной температуре.

Выявлена общая тенденция снижения гидрофобности клеточной поверхности при увеличении содержания гликолипидов, продуцируемых бактериями в культуральную среду, и подтверждена научная гипотеза об адаптации родококков к росту на гидрофобных субстратах путем перераспределения биосурфактантов между средой и клеточной поверхностью.

Впервые выделены и идентифицированы главные компоненты гликолипидов, которые продуцируют нефтеокисляющие бактерии рода Ккойососст при пониженной температуре (10оС). Эти соединения представляют собой смесь изомерных гомологов: 2,3,4-деканоил-октаноил-сукцинил-2'-деканоилтрегалозы; 2,3,4-диоктаноил-сукцинил-2'-

деканоилтрегалозы; 2,3,4-диоктаноил-сукцинил-2'-октаноилтрегалозы; 2,3,4-дидеканоил-сукцинил-2'-деканоилтрегалозы.

Впервые установлено, что родококки при росте на гексадекане формируют мультимембранные структуры (ММС), которые напоминают ламеллярные внутримембранные структуры. Эти структуры связаны с накоплениями гидрофобных веществ в виде включений внутри клетки, что указывает на их роль в транспорте и первичной трансформации гексадекана до гексадекановой кислоты.

Теоретическая и практическая значимость

Данная работа расширяет представления о биосурфактантах грамположительных бактерий рода Якойососст и их участии в биодеградации гидрофобных субстратов. Показано, что штамм Я. егу1ЬгороИ8 X5 выделяет в культуральную среду сукцинилтрегалолипиды (2,3,4-деканоил-октаноил-сукцинил-2'-

деканоилтрегалозы; 2,3,4-диоктаноил-сукцинил-2'-деканоилтрегалозы; 2,3,4-диоктаноил-сукцинил-2'-октаноилтрегалозы; 2,3,4-дидеканоил-

сукцинил-2'-деканоилтрегалозы) с высоким выходом и может служить продуцентом трегалолипидных биосурфактантов. Физико-химические характеристики сукцинилтрегалолипидов свидетельствуют об их эффективности как биосурфактантов, что определяет дальнейшие широкие возможности их применения. Обоснована целесообразность использования штаммов Я. егу1кгоро118 X5 и Я. егу1ЬгороИ8 S67 в биопрепаратах для очистки нефтезагрязненных территорий в условиях холодного климата, в том числе за счет их способности продуцировать сукцинилтрегалолипиды. Выявленные закономерности функционирования микроорганизмов при участии биосурфактантов в процессе биодеградации гексадекана при пониженной температуре формируют теоретическую основу для разработки биопрепаратов и биотехнологий для очистки нефтезагрязненных территорий в условиях холодного климата.

Апробация работы. Результаты работы были доложены на

международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы

развития» (Москва, 19-21 февраля 2017г.); IV международной

конференции «Микробное разнообразие - ресурсный потенциал»

(Москва, 23 ноября 2016); Научно-практической конференции

«Биотехнология: наука и практика» (Крым, Ялта 2014, 2015, 2016); II

Пущинской школе-конференции "Биохимия, физиология и биосферная

роль микроорганизмов" (Пущино, 07-11 декабря 2015); Всероссийской

7

конференции с элементами научной школы для молодежи «Экотоксикология» (Тула, 2014, 2015 и 2016г); IX Региональной молодёжной научно-практической конференции ТулГУ (Тула, 14 октября 2015).

Результаты исследований по теме диссертации представлены в 3-х статьях в журналах, входящих в Перечень ведущих рецензируемых журналов и изданий ВАК, в 5-и статьях в журналах (РИНЦ), и 9 сообщениях в форме тезисов и материалов конференций.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Поверхностно-активные вещества, продуцируемые микроорганизмами

Поверхностно-активные вещества (ПАВ) представляют собой амфифильные соединения с гидрофильными и гидрофобными частями, которые способны снижать поверхностное и межфазное натяжение на границе раздела фаз "жидкость-воздух", "жидкость-жидкость". Основу классификации составляет химическая структура соединений, что позволяет выделить четыре основных класса ПАВ: анионные, катионные, амфотерные и неионогенные. По молекулярной массе, ПАВ делят на низкомолекулярные и высокомолекулярные. Основной количественной характеристикой ПАВ является критическая концентрация мицеллообразования (ККМ), при которой формируются молекулярные агрегаты или мицеллы, и соответствуют точке, при которой поверхностное натяжение ПАВ достигает минимального значения. Известно, что большинство синтетических ПАВ получают химическим синтезом из углеводородов нефти. Синтетические ПАВ проявляют токсичность и с трудом разрушаются природными микроорганизмами [8].

Живые организмы способны продуцировать ПАВ, из-за их биологического происхождения такие соединения получили название биоПАВ. Изучение биоПАВ началось еще в 60-х годах прошлого столетия, и интенсивно продолжается в последние время [9-11]. Такое внимание обусловлено тем, что биоПАВ находят применение в различных отраслях промышленности благодаря преимуществам перед синтетическими ПАВ. Они обладают низкой токсичностью; биоразлагаемостью; способностью функционировать в широких диапазонах рН, температуры и солености среды; высокой поверхностной активностью и могут быть получены

биотехнологически из промышленных отходов и побочных продуктов нефтепереработки [12] .

Самыми эффективными продуцентами являются микроорганизмы. Они продуцируют биоПАВ с разнообразными химическими структурами. Гидрофобная часть этих веществ (неполярный "хвост") наиболее часто представлена остатками жирных кислот, а гидрофильная (полярная "головка") - остатками фосфорной кислоты, карбоксильными группами природных кислот, аминокислотами, пептидами, моно-, ди-, или полисахаридами и др. БиоПАВ характеризуются высокой поверхностной и эмульгирующей активностью.

БиоПАВ разделяют на два основных класса [13]: низкомолекулярные соединения, называемые биосурфактантами (липопептиды, гликолипиды, пептиды), и высокомолекулярные полимеры (полисахариды, протеины, липополисахариды, липопротеины или комплекс этих биополимеров), которые называются биоэмульсанами [14] или биоэмульгаторами [15]. В первую группу входят молекулы, которые могут эффективно снижать поверхностное и межфазное натяжение, а ко второй относятся амфифильные и полифильные полимеры, обладающие высокой и стабильной эмульгирующей активностью в системе «масло-вода», но не высокой поверхностной активностью [16].

По своему строению биоПАВ классифицируются на гликолипиды (рамнолипиды, трегалолипиды, софоролипиды); липопеплиды и липопротеины; жирные кислоты; фосфолипиды; полимерные сурфактанты; связанные биосурфактанты [12]. Для микроорганизмов разных родов характерны различные типы биоПАВ (табл.1).

Типы биоПАВ Микроорганизмы - продуценты

Низкомолекулярные биоПАВ Гликолипиды

Рамнолипиды Pseudomonas [17-20]; Acinetobacter [21];

Трегалолипиды Rhodococcus [22-27]; Tsukamurella [28].

Софоролипиды Candida [29] [30, 31];

Маннозилэритроллипи ды (МЭЛ) - Pseudozyma [32];

Липопептиды Bacillus [33]; Candida [34]; Acinetobacter [35]; Rhodococcus [36]; Arthrobacter [37]

Другие

Жирные кислоты Corynebacterium lepus [38]

Триглицериды Norcadia erythropolis [39]

Флаволипиды Flavobacterium [40]

Фосфолипиды Klebsiella pneumoniae [41], Pseudomonas [42]

Высокомолекулярные биоПАВ Биоэмульгат ор ы

Гликопротеины: Аласан Эмульсан Acinetobacter [43-45] Acinetobacter [14]

Полисахариды и липопротеины Acinetobacter [46]

Наиболее распространенными и изученными микробными

сурфактантами являются гликолипиды и липопептиды.

Липопептиды представляют собой циклические молекулы, такие как антрофактин, интурин, сурфактин, продуцируемые бактериями Arthrobacter sp. MIS38 (рис.1) [47]; лихенизин А - продуцент Bacillus licheniformis [48]; вискозин - Pseudomonas fluorescens [49]. Циклические липопептиды, такие как сурфактин, способны очень сильно снижать поверхностное натяжение воды. Сурфактин бактерий Bacillus subtilis является одним из наиболее эффективных биосурфактантов. Он может

снижать поверхностное натяжение воды с 72 до 27мН/м при содержании 25мг/л [50].

Рисунок 1. Структуры липопептидных биосурфактантов бактерий

ЛПктоЪасгег sp. MIS38 [47]

Гликолипиды часто представляют собой моно- или дисахариды, ацилированные жирными кислотами. К ним относятся рамнолипиды, софоролипиды, трегалолипиды, маннозилэритроллипиды (МЭЛ) [10] (рис.2).

Рисунок 2. Структура основных гликолипидных биосурфактантов,

продуцируемых бактериями

Среди гликолипидных биосурфактантов, наиболее изученными являются рамнолипиды бактерий Pseudomonas и софоролипиды дрожжей. Они производятся в значительных количествах и коммерчески доступны. Трегалолипидные биосурфактанты менее изучены. Они наиболее известны, как трегалозомиколаты, синтезируемые бактериями Mycobacterium tuberculosis (туберкулезными палочками). Однако, трегалолипиды продуцируются не только патогенными микроорганизмами, но и актинобактериями родов Rhodococcus, Norcadia, Tsukamurella при росте на гидрофобных субстратах.

1.2. Трегалолипидные биосурфактанты бактерий-

нефтедеструкторов рода Rhodococcus

1.2.1 Структурное разнообразие трегалолипидов, продуцируемых родококками

Впервые трегалолипиды были выделены из липидов бактерии из липидов Mycobacterium tuberculosis [51]. Эти соединения представляют собой молекулу трегалозы, этерифицированную остатками миколовых кислот - трегалозомиколаты (рис.3). Трегалозомиколаты являются основными гликолипидами клеточных стенок патогенных бактерий M. tuberculosis.

Эти соединения считают фактором токсичности и вирулентности микобактерий (cord-factor) [52]. Позже трегалозомиколаты были выделены также из бактерий рода Rhodococcus [53]. Кречмер с соавторами [54] обнаружили 6-монокориномиколаты, 6,6'-диацилаты и 6-ацилаты трегалозы в органических экстрактах R. erythropolis DSM43215. В ряде работ установлено, что бактерии R. erythropolis способны синтезировать трегалозомономиколаты [54, 55], трегалозодимиколаты [24, 22, 56] и трегалозотримиколаты [57]. В работе [58] показано, что бактерии R. erythropolis S-1 при росте на эфире фталата способны продуцировать

13

трегалолипиды, в состав которых входят остатки среднецепочечных и длинноцепочечных насыщенных и ненасыщенных жирных кислот (С10-С22) и их гидроксипроизводные (10-метилгексадекановая и 10-метилоктадекановая кислоты), а также остатки миколовых кислот (Сз5-С40 миколовых кислот).

Дпнокардпомпко.чат трегалозы бактерий R. opacas 1СР (Niescher et al., 2006); Rl, R2 находятся в пределе С48 - С54

Рисунок 3. Структуры основных трегалолипидов, продуцируемых

бактериями рода Rhodococcus.

В зависимости от физиологии и условий культивирования родококки часто продуцируют несколько типов биосурфактантов, типичными представителями которых являются трегалолипиды различного строения [1, 59]. Кроме миколатов трегалозы родоккоки способны синтезировать различные неионгенные трегалолипиды, такие как моно-, ди-, тетра-, гекса- и октаацильные производные трегалозы [24, 54, 60] и анионные трегалолипиды - сукцинилтрегалолипиды (рис. 3) [23, 25, 26, 53, 61-63]

[7].

Трегалолипиды, как биосурфактанты, привлекли внимание исследователей только после изучения динамики роста актинобактерий Arthrobacter paraffineus KI4303 на углеводородных субстратах [64]. В этой работе было показано, что в составе слоя эмульсии на поверхности

культуральной среды содержатся трегалолипиды с разными остатками жирных кислот. Позже было показано, что микроорганизмы рода Rhodococcus при росте на гидрофобных субстратах (пример на н-гексадекане) продуцируют трегалолипиды в качестве биосурфактантов, и прежде всего, сукцинилтрегалолипиды (табл.2) [23, 26, 61, 63].

Таблица 2. Трегалолипиды, продуцируемые родококками при росте на гидрофобных субстратах

Штамм Субстраты Биосурфактанты Источник

R.erythropolis Б8М 43215 С14 С15 н- алканы или керосин дикориномиколаты трегалозы; монокориномиколаты трегалозы (внеклеточные -70%) [53]

Rhodococcus Н13-А н-алканы и жирные спирты гликолипиды (эндо- и экзотипа) [60]

R.erythropolis М811 н-гексадекан сукцинилтетраэфиры трегалозы [23]

R.wratislaviensis ВШ8 н-гексадекан сукцинилтетраэфиры трегалозы [63]

R. erythropolis н-гексадекан сукцинилтрегалоза [61]

Rhodococcus 8Б-74 н-гексадекан сукцинилтрегалолипиды [26]

R.erythropolis 3С-9 н-гексадекан трегалолипиды [65]

R. erythropolis 51-Т7 н-алканы (тетрадекан) тетраэфиры трегалозы [25]

Rhodococcus sp. РМЬ026 подсолнечное масло трегалолипиды [27]

R. opacus 1СР н-алканы трегалозодимиколаты [56]

R.ruЪer 225 н-гексадекан гликолипиды [66]

В ряде работ [23,25,26,63,67-70] установлено, что сукцинилтрегалолипиды обладают хорошими поверхностными и

эмульгирующими свойствами, в том числе низким значением критической константы мицеллообразования (ККМ), высокой биологической активностью, биодеградабельностью, низкой токсичностью. Они нашли применение в экобиотехнологии, в медико-биологических исследованиях, в косметологии, в пищевой промышленности [71].

Сукцинилтрегалолипиды играют важную роль в деградации углеводородов нефти [23].

1.2.2 Физиологическая роль и биологическая активность трегалолипидов

Функции трегалолипидов зависят от их строения и типа взаимодействия с клетками бактерий. Бактерии способны продуцировать внеклеточные трегалолипиды (экзотип) и трегалолипиды, связанные с клеточной стенкой бактерий (эндотип). Трегалозомиколаты, как правило, связаны с клеточной стенкой бактерий. Как уже отмечали выше, эти соединения играют важную роль в физиологии микобактерий Mycobacterium tuberculosis (туберкулезной палочки), определяя их патогенность и токсичность. Они представляют собой трегалозо-6,6'-димиколаты (ТДМ), которые являются наиболее распространенными грануломатогенными и токсичными гликолипидами (корд-фактор) в мембране вирулентных Mycobacterium tuberculosis, что делает бактерии устойчивыми к противотуберкулезным препаратам [72]. Димиколаты трегалозы оказывают ряд иммуномодулирующих эффектов [52]. Они способны стимулировать как гуморальный, так и адаптивный иммунитет клеток. В работах [73,74] было выявлено, что мыши, которых инкубировали с ТДМ, приобрели высокую устойчивость к инфекции вирусом гриппа. Большинство функций ТДМ могут быть связаны с их способностью индуцировать широкий спектр хемокинов (MCP-1, MIP-1альфа, IL-8) и цитокинов (например, IL-12, IFN-гамма, TNF-альфа, IL-4, IL-6, IL-10). ТДМ вместе с арабиногалактаном миколатов и трегалозомономиколатом (ТММ) образуют неотъемлемую часть цитоскелета клеточной стенки микобактерий, что обеспечивает высокую гидрофобность и кислотоустойчивость клеточной поверхности.

Трегалолипиды родококков не обладают патогенными свойствами.

Это обусловлено различиями в структуре трегалолипидов микобактерий и

актинобактерий, к которым относятся родококки. Актинобактерии, как

правило, продуцируют тетраэфиры трегалозы, в состав которых входят

остатки среднецепочечных жирных кислот и остаток янтарной кислоты -

сукцинилтрегалолипиды. Тем не менее, трегалолипиды, продуцируемые

родококками, могут проявлять биологическую активность. Так,

трегалолипиды штамма R.erythropolis DSMZ 43215 не ингибировали рост

грамотрицательных микроорганизмов и дрожжей, но подавляли рост

конидий гриба Glomerella cingulata [75]. Изучение биологической

активности трегалолипидов родококков, проводимые на моделях

фосфолипидных мембран, позволили описать молекулярные механизмы

взаимодействий между мембранами и этими соединениями [76].

Взаимодействия между трегалолипидом и фосфатидилхолином приводило

к изменению стабильности бислоя, что указывает на способность

трегалолипидов изменять проницаемость фосфолипидных мембран. В

работе [77] изучали влияние очищенного трегалолипида, продуцируемого

бактериями Rhodococcus sp., на термотропные и структурные свойства

мембран на основе фосфатидилэтаноламинов, содержащих остатки

жирных кислот различной длины и насыщенности. Было обнаружено, что

трегалолипиды влияют на фазу перехода фосфатидилэтаноламиного

биослоя от геля к прозрачной жидкости, что приводит мембрану в

состояние геля при более низкой температуре. Подобные результаты были

получены при изучении влияния трегалолипидов на

фосфатидилсериновую мембрану [78]. Авторы работы [68] предложили

механизм мембранной пермеабилизации, в которой трегалолипиды

включаются в мембраны фосфатидилхолина и образуют латеральные

домены, которые могут образовывать дефекты мембраны или «поры». В

результате изучения гемолитической активности сукцинилтрегалолипидов,

17

продуцируемых бактериями Rhodococcus sp., обнаружена способность этих соединений вызывать гемолиз эритроцитов человека путем коллоидно -осмотического механизма, скорее всего, за счет образования областей усиленной проницаемости, или «пор», обогащенных сукцинилтрегалолипидами в мембране эритроцитов [68].

Однако, в некоторых исследованиях у родококков обнаружены трегалозомиколаты [24, 58, 64]. Так, в работе [23] авторы отмечают, что только около 10% трегалозодимикалатов выделялось в культуральную среду бактериями R.erythropolis, а остальные были связаны с клеточной стенкой бактерий, что и обуславливало высокую гидрофобность поверхности клеток.

Следует отметить, что, большинство исследователей все-таки

считают сукцинилтрегалолипиды типичными трегалолипидами

актинобактерий, в том числе родококков. Синтез трегалолипидов у

актинобактерий часто связан с ассимиляцией гидрофобных субстратов. В

ряде работ [79-81] представлены результаты изучения роли

трегалолипидов, как биосурфактантов в биодеградации гидрофобных

субстратов бактериями. Показано, что продукция трегалолипидных

биосурфактантов тесно связана с поверхностными свойствами клеток

бактерий-деструкторов. Биосурфактанты, связанные с клетками,

способствуют увеличению гидрофобности клеточной поверхности,

обеспечивая прямой контакт между клетками и каплями гидрофобных

субстратов [82]. Это согласуется с данными Тулевой с соавт. о спонтанном

присоединении на ранней экспоненциальной фазе роста высоко

гидрофобной клеточной поверхности бактерий R. wratislaviensis и

Micrococcus luteus к поверхности гидрофобного субстрата [63, 83]. Рост

микроорганизмов ограничивался разделом фаз углеводород-вода, что

подтверждало высокую аффинность клеток к гидрофобному субстрату.

Микроорганизмы могут использовать продуцируемые ими биоПАВ для

18

регулирования свойств клеточной поверхности, чтобы присоединяться или отделяться от гидрофобным субстратам или поверхностях при необходимости [14]. Показано, что клетки Gordonia обладали высокой гидрофобностью клеточной поверхности на ранней экспоненциальной фазе роста и оставались прикрепленными к крупным каплям гидрофобного субстрата, поэтому поглощения субстрата осуществлялось клетками за счет прямого контакта [84]. Во время поздней экспоненциальной фазы роста клетки становились гидрофильными, степень адгезии к углеводородам уменьшилась. Авторы предположили, что это привело к изменению механизма, посредством которого достигалась доступность гидрофобного субстрата для бактерий Gordonia во время роста. Оказалось, что бактерии выделяют биоэмульгаторы в культуральную среду, что позволяет гидрофильным клеткам присоединяться к гидрофильному наружному слою капель псевдосолюбилизированных углеводородов. Таким образом, трегалолипиды родококков могут выполнять важные функции в ходе адаптации бактерий к росту на гидрофобных субстратах, главным образом, за счет поверхностной и эмульгирующей активности.

Для микроорганизмов, способных утилизировать гидрофобные субстраты, характерны три основных способа поглощения углеводородов [86]:

- формирование в клеточной стенке липофильных каналов, заполненных гидрофобным веществом и обладающих высоким сродством к углеводородам;

- выделение в среду биоПАВ, которые могут эмульгировать и солюбилизируют углеводороды в водной фазе;

- образование гидрофобной клеточной стенки на основе липофильных соединений, что обеспечивает прямой контакт клеток с каплями углеводородов.

Поглощение псевдосолюбилизированных углеводородов Поглощение гидрофобных соединений в виде солюбилизированных капелей распространено среди микроорганизмов-деструкторов гидрофобных соединений. Продуцирование биосурфактантов приводит к увеличению псевдорастворимости гидрофобных веществ за счет образования эмульсии. Ли с соавторами [86] предложили, что поглощение алканов клетками происходит в виде мицелл. Согласно данной модели, молекулы биоПАВ образовали мицеллы с углеводородами (рис. 4).

Рисунок 4. Схема поглощения гидрофобного субстрата бактериями в виде

На первом этапе свободные плавающие мицеллы с солюбилизированной каплей углеводородов собираются вблизи клетки, после этого происходит процесс обмен между этими мицеллами и формируемым вокруг клетки гемимицеллярным слоем биосурфактанта. На завершающем этапе углеводороды переносятся с гемимицеллярного слоя в клетку. Процесс образования мицелл зависит от кинетики агрегирования мицеллы, решающими этапами являются второй и третий этапы, они обычно отвечают за скорость деградации углеводородов в мицеллярной фазе [87].

1 -й этап

Микробная клетка

мицелл.

Поглощение углеводородов путем прямого контакта клеток со слоем гидрофобного субстрата

В работе [82] продемонстрировано, что продуцируемый бактериями Rhodococcus equi Эи2 биосурфактант играет незначительную роль в деградации гексадекана. Авторы предположили, что основный путь поглощения углеводорода у данного штамма является прямой контакт со слоем углеводорода. Согласно другой гипотезе о роли биоПАВ в доступности гидрофобных субстратов для бактерий, биосурфактанты, связанные с клеточной стенкой, могут увеличивать гидрофобность клеточной поверхности, что способствует адгезии бактерий к углеводородам нефти [14].

При поглощении гидрофобных субстратов путем прямого контакта микроорганизмы непосредственно адсорбируются на жидких углеводородных субстратах, формируют при этом агломераты, что приводит к тесному контакту клеток с субстратом [86]. Проникновение бактерий внутрь капли гидрофобного субстрата указывает на высокое сродство их клеточной стенки к компонентам нефти (рис.5).

Рисунок 5. Гидрофобные клетки рода Rhodococcus (слева) и Pseudomonas (справа) на н-гексадекане при 2000 кратном приближении (http://dop-

uni.ru/destructor_of_oil_polution)

Актинобактерии рода Rhodococcus обладают высокой адгезивной активностью по отношению к жидким углеводородам и их производным [88]. Это позволяет бактериям эффективно усваивать углеводородные

субстраты, что и является преимуществом бактерий рода Rhodococcus. Адгезия бактерии может отличаться у разных штаммов, и зависит от условий культивирования [89].

Большую роль в гидрофобности клеточной стенки играют поверхностные гликолипиды и пептидолипиды. Гидрофобность клеточной поверхности Rhodococcus может быть обусловлена содержащимися в клеточной стенке актинобактерий миколовыми кислотами. По данным Коронелли [90] подавление синтеза миколовых кислот ведет к потере клетками способности окислять углеводороды, поскольку миколовые кислоты, как считает автор, непосредственно обеспечивают транспорт молекул углеводородов внутрь клетки.

Другие авторы отмечали, что содержание клеточных липидов способно увеличиваться при культивировании клеток на углеводородном субстрате [91, 92]. Механизм повышения гидрофобности клеточной стенки родококков они объяснили образованием гликолипидных биосурфактантов на начальной фазе роста бактерий. Гидрофобные «хвосты» миколовых кислот трегалолипидов придают дополнительную гидрофобность клеточной стенке (рис.6). Никайдо предположил, что продуцируемые в культуральную среду гликолипиды могут быть заменены фосфолипидами, что приводит к повышению гидрофобного характера клеточной стенки [93].

Рисунок 6. Строение клеточной стенки бактерий-продуцентов гликолипидных биосурфактантов

Таким образом, процесс утилизации гидрофобных субстратов бактериями Rhodococcus связан с продукцией биосурфактантов в среду и с изменением гидрофобности клеточной поверхности. Однако предлагаются различные объяснения этой взаимосвязи. Механизмы участия биосурфактантов в поглощении гидрофобных субстратов бактериями до конца не ясны. Предложены и некоторые другие пути поступления гидрофобных субстратов в клетки бактерий.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Лыонг Тхи Мо, 2018 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Franzetti A., G.I., Bestetti G., Smyth J., Banat I. Production and aplications trehalose lipid biosurfactants // Eur J Lipid Sci Technol 2010. - V.120. - P. 617-627.

2. Matvyeyeva O.L, V., O.A, Alieva O.R. Microbial biosurfactants role in oil products biodegradation // International Journal of Evironmental Bioremediation and Biodegradation. - 2014. - V2. - №.2. - P. 69-74.

3. Dang N.P., Landfald B., Willassen N.P. Biological surface-active compounds from marine bacteria // Environ Technol. - 2016. - V.37. - №.9: p. 1151-1158.

4. Malavenda R., Carmen R., Michaud L.,Ger9e B.,Bruni V., Syldatk C.,Hausmann R.,Lo Giudice A. Biosurfactant production by Arctic and Antarctic bacteria growing on hydrocarbons // Polar Biology. - 2015. - V38. - №10. - P.1565-1574.

5. Whyte L.G., Hawaii J., Zhou E., Bourbonniere L., Inniss W. E., Greer C. W. Biodegradation of Variable-Chain-Length Alkanes at Low Temperatures by a Psychrotrophic Rhodococcus sp // Applied and Environmental Microbiology. - 1998. -V.64. - №.7. - P. 2578-2584.

6. Пырченкова И.А., Гафаров А.Б., Пунтус И.Ф., Филонов А.Е., Боронин А.М. Выбор и характеристика активных психротрофных микроорганизмов-деструкторов нефти // Прикладная биохимия и микробиология. -2006. - T.42-№.3. - P. 298-305.

7. Petrikov K.,Delegan Ya., Surin A., Ponamoreva O., Puntus I., Filonov A., Boronin A. Glycolipids of Pseudomonas and Rhodococcus oil-degrading bacteria used in bioremediation preparations: Formation and structure // Process Biochemistry. - 2013. - V.48 - №.(5-6). - P.931-935.

8. Santos D.K., Rufino R.D., Luna J.M., Santos V.A., Sarubbo L.A. Biosurfactants: Multifunctional Biomolecules of the 21st Century // Int J Mol Sci. -2016. -V17. -№.3. - P.401-432.

9. Rosenberg, M., Microbial adhesion to hydrocarbons: twenty years of doing MATH // FEMS Microbiol, - 2006. -V.262. - P.129-134.

10. Banat I.M., Franzetti A., Gandolfi I., Bestetti G., Martinotti M.G., Fracchia L., Smyth T.J., Marchant R. Microbial biosurfactants production, applications and future potential // Appl Microbiol Biotechnol. - 2010. -V.87. - №.2. - P. 427-444.

11. Silva E.J., Rocha e Silva N.M., Rufino R.D., Luna J. M., Silva R.O., Sarubbo L.A. Characterization of a biosurfactant produced by Pseudomonas cepacia CCT6659 in the presence of industrial wastes and its application in the biodegradation of hydrophobic compounds in soil // Colloids Surf B Biointerfaces. - 2014. -V.117. - P. 36-41.

12. Desai J.D. and Banat I.M. Microbial production of surfactants and their commercial potential // Microbiol Mol Biol Rev. - 1997. - V.61- №.1. - P. 47-64.

13. Neu T.R. Significance of bacterial surface-active compounds in interaction of bacteria with interfaces // Microbiological Reviews, -1996. - V.60 - №.1. - P. 151-166.

14. Ron E.Z. and Rosenberg E. Natural roles of biosurfactants // Environ Microbiol. -2001. - V.3. - №4. - P. 229-236.

15. Smyth T.J.P., Perfemo A., Marchant R., Banat I.M. Isolation and Analysis of Lipopeptides and High Molecular Weight Biosurfactants in Handbook of Hydrocarbon and Lipid Microbiology / Timmis K.N. (ed). - Springer Berlin Heidelberg: Berlin. -2010. - P.3687-3704.

16. Smyth T. J. P., Rudden M., Tsaousi K., Marchant R., Banat I.M. Protocols for the Detection and Chemical Characterisation of Microbial Glycolipids in Hydrocarbon

and Lipid Microbiology Protocols / McGenity T.J.(ed.) - Springer Berlin Heidelberg: Berlin. - 2014. - P.32.

17. Ji F., Li L., Ma S., Wang J., Bao Y. Production of rhamnolipids with a high specificity by Pseudomonas aeruginosa M408 isolated from petroleum-contaminated soil using olive oil as sole carbon source // Annals of Microbiology. - 2016. - V.66. -№.3. - P1145-1156.

18. Sharma D., Ansari M., Al-Ghamdi A., Adgaba N., Khan K., Pruthi V., Al-Waili N. Biosurfactant production by Pseudomonas aeruginosa DSVP20 isolated from petroleum hydrocarbon-contaminated soil and its physicochemical characterization // Environmental Science and Pollution Research. - 2015. - V.22. - №.22. - P. 176367643.

19. Amani H., Muller M.M., Syldatk C., Hausmann R. Production of microbial rhamnolipid by Pseudomonas aeruginosa MM1011 for ex situ enhanced oil recovery // Appl Biochem Biotechnol, - 2013. -V.170. - №.5. -P. 1080-1093.

20. Pacwa-Plociniczak M., Plaza G. A., Poliwoda A., Piotrowska-Seget Z. Characterization of hydrocarbon-degrading and biosurfactant-producing Pseudomonas sp. P-1 strain as a potential tool for bioremediation of petroleum-contaminated soil // Environ Sci Pollut Res Int. - 2014. - V.21. - №15. - P. 9385-95.

21. Rooney A.P., Price N.P., Ray K.J., Kuo T.M. Isolation and characterization of rhamnolipid-producing bacterial strains from a biodiesel facility // FEMS Microbiol Lett. - 2009. - V.295. - №1. - P. 82-7.

22. Rapp P., Bock H., Wray V., Wagner F. Formation- Isolation and characterization of trehalose dimycolates from Rhodococcus erythropolis grown on n-alkanes // Microbiology. - 1979. - №.115. - P.13.

23. Rapp P. and Gabriel-Jurgens L.H. Degradation of alkanes and highly chlorinated benzenes, and production of biosurfactants, by a psychrophilic Rhodococcus sp. and genetic characterization of its chlorobenzene dioxygenase // Microbiology. - 2003. -V.149. - №10. - P. 2879-90.

24. Philp J.C., Kuyukina M.S., Ivshina I.B., Dunbar S.A., Christofi N., Lang S., Wray V. Alkanotrophic Rhodococcus ruber as a biosurfactant producer // Appl Microbiol Biotechnol. - 2002. - V.59. - №.(2-3). - P. 318-24.

25. Marques A.M., Teruel J.A., Ortiz A., Manresa A., Espuny M.J. The physicochemical properties and chemical composition of trehalose lipids produced by Rhodococcus erythropolis 51T7 // Chem Phys Lipids. - 2009. - V.158. - №2. - P.110-7.

26. Tokumoto Y., Nomura N., Uchiyama H., Imura T., Morita T., Fukuoka T., Kitamoto D. Structural characterization and surface-active properties of a succinoyl trehalose lipid produced by Rhodococcus sp. SD-74 // J Oleo Sci. - 2009. - V.58. - №.2. -P.97-102.

27. White D.A., Hird L.C., Ali S.T. Production and characterization of a trehalolipid biosurfactant produced by the novel marine bacterium Rhodococcus sp., strain PML026 // J Appl Microbiol. - 2013. - V .115. - №3. - P .744-55.

28. Kugler J.H., Kraft A., Heissler S., Muhle-Goll C., Luy B., Schwack W., Syldatk C., Hausmann R. Extracellular aromatic biosurfactant produced by Tsukamurella pseudospumae and T. spumae during growth on n-hexadecane // J Biotechnol. - 2015. - V.211. - P. 107-14.

29. Konishi M., Fukuoka T., MoritaT., Imura T., Kitamoto D. Production of new types of sophorolipids by Candida batistae // J Oleo Sci. - 2008. - V.57. - N.6. - P. 359-69.

30. Daverey A., Pakshirajan K. Sophorolipids from Candida bombicola using mixed hydrophilic substrates: production, purification and characterization // Colloids Surf B Biointerfaces. - 2010. - V.79. - №.1. - P. 246-53.

31

32

33

34

35

36

37

38

39

40

41

42

43

44

45

46

Elshafie A.E.J., Al-Wahaibi S.J., Al-Bemani Y.M., Al-Bahry A.S., Al-Maqbali S.N. Banat, D., Sophorolipids Production by Candida bombicola ATCC 22214 and its Potential Application in Microbial Enhanced Oil Recovery // Front Microbiol. - 2015. - V.6. - P. 1324.

Morita T.K., Fukuoka M., Imura T., Kitamoto T. Physiological differences in the formation of the glycolipid biosurfactants, mannosylerythritol lipids, between Pseudozyma antarctica and Pseudozyma aphidis // Appl Microbiol Biotechnol. -

2007. - V.74. - №.2. - P. 307-15.

Suthar H., Nerurkar A. Characterization of Biosurfactant Produced by Bacillus licheniformis TT42 Having Potential for Enhanced Oil Recovery // Appl Biochem Biotechnol. - 2016. - V.180. - №.2. - P. 248-60.

Biniarz P.B., Feder-Kubis G., Krasowska J. The lipopeptides pseudofactin II and

surfactin effectively decrease Candida albicans adhesion and hydrophobicity //

Antonie van Leeuwenhoek. - 2015. - V.108. - №.2. - P. 343-353.

Bao M.P., Wang Y., Sun L., Li P., Cao Y. Lipopeptide biosurfactant production

bacteria Acinetobacter sp. D3-2 and its biodegradation of crude oil // Environmental

Science: Processes & Impacts. - 2014. - V.16. - №.4. - P. 897-903.

Peng F., Wang Y., Sun F., Liu Z., Lai Q., Shao Z. A novel lipopeptide produced by a

Pacific Ocean deep-sea bacterium, Rhodococcus sp. TW53 // J Appl Microbiol. -

2008. - V.105. - №3. - P. 698-705.

Morikawa M.D., Takao H., Murata T., Shimonishi S., Imanaka Y. A new lipopeptide biosurfactant produced by Arthrobacter sp. strain MIS38 // J Bacteriol. - 1993. -V.175. - №.20. - P. 6459-66.

Cooper D.G., Zajic J.E., Gerson D.F. Production of surface-active lipids by Corynebacterium lepus // Applied and Environmental Microbiology. - 1979. - V.37 -№.1. - P. 4-10.

Macdonald C.R., Cooper D.G., Zajic J.E. Surface-active lipids from Nocardia erythropolis grown on hydrocarbons // Applied and Environmental Microbiology. -1981. - V.41. - №.1. - P. 6.

Bodour A.A., Guerrero-Barajas C., Jiorle BV. Structure and characterization of flavolipids, a novel class of biosurfactants produced by Flavobacterium sp. strain MTN11 // Applied and Environmental Microbiology. - 2004. - V.70. - P. 6. Nwaguma I.V., Chikere C.B., Okpokwasili G.C. Isolation, characterization, and application of biosurfactant by Klebsiella pneumoniae strain IVN51 isolated from hydrocarbon-polluted soil in Ogoniland, Nigeria // Bioresources and Bioprocessing. -2016. - V.3. - №1. - P. 40.

Janek T., Lukaszewicz M., Krasowska A. Identification and characterization of biosurfactants produced by the Arctic bacterium Pseudomonas putida BD2 // Colloids Surf B Biointerfaces. - 2013. - V.110. - P. 379-86.

Navon-Venezia S.Z., Gottlieb Z., Legmann A., Carmeli R., Ron S., Rosenberg E.Z., Alasan, a new bioemulsifier from Acinetobacter radioresistens // Appl Environ Microbiol. - 1995. - V.61. - №.9. - P. 3240-4.

Navon-Venezia S.B., Ron E., Rosenberg, E. Z. The bioemulsifier alasan: role of protein in maintaining structure and activity // Applied Microbiology and Biotechnology. - 1998. -V.49. - №.4. - P. 382-384.

Toren A.O., Paitan E., Ron Y., Rosenberg E Z. The Active Component of the Bioemulsifier Alasan from Acinetobacter radioresistens KA53 Is an OmpA-Like Protein // Journal of Bacteriology. - 2002. - V.184. - №.1. - P. 165-170. Kaplan N., Zosim Z., Rosenberg E. Reconstitution of emulsifying activity of Acinetobacter calcoaceticus BD4 emulsan by using pure polysaccharide and protein // Appl Environ Microbiol. - 1987. - V.53. - №.2. - P. 440-6.

47. Morikawa M., Daido H., Takao T., Murata S., Shimonishi Y., Imanaka T. A new lipopeptide biosurfactant produced by Arthrobacter sp. strain MIS38 // J Bacteriol. -1993. - V.175. - №.20. - P. 6459-66.

48. Yakimov M.M., Wray V., Fredrickson H.L. Characterization of a new lipopeptide surfactant produced by thermotolerant and halotolerant subsurface Bacillus licheniformis BAS50 // Applied and Environmental Microbiology. - 1995. - V.61. -№.5. - P. 1706-1713.

49. Neu T.R. and Poralla K. Emulsifying agents from bacteria isolated during screening for cells with hydrophobic surfaces // Applied Microbiology and Biotechnology. -1990. - V.32. - №.5. - P. 521-525.

50. Cooper D.G. and Zair J.E. Surface active compounds from microorganisms // Adv Appl Microbiol. - 1980. - V.26. - P. 4.

51. Asselineau J. The chemical structure of the cord factor of Mycobacterium tuberculosis // Biochimica et Biophysica Acta. - 1956. - V.20. - P. 11.

52. Ryll R., Kumazawa Y. and Yano I. Immunological properties of trehalose dimycolate (cord factor) and other mycolic acid-containing glycolipids--a review // Microbiol Immunol. - 2001. - V.45. - №12. - P. 801-11.

53. Ristau C.A. and Wagner A. Formation of novel anionic trehalosetetraesters from Rhodococcus erythropolis under growth limiting conditions // Biotechnology letters. -1983. - V.5. - №.2. - P. 6.

54. Kretschmer A., Bock H., and Wagner F. Chemical and physical characterization of Interfacial-Active Lipids from Rhodococcus erythropolis grown on n-alkanes // Applied and Environmental Microbology. - 1982. - V.44. - №.4. - P. 7.

55. Ueda S.F., Naka N., Sakaguchi T., Ozeki I., Yano Y., Kasama I., Kobayashi T. Structure-activity relationship of mycoloyl glycolipids derived from Rhodococcus sp. 4306 // Microb Pathog. - 2001. - V.30. - №.2. - P. 91-9.

56. Niescher S., Lang S., Kaschabek S.R, Schlomann M. Identification and structural characterization of novel trehalose dinocardiomycolates from n- alkane - grown Rhodococcus opacus 1CP // Appl Microbiol Biotechnol . - 2006. - V .70. - P. 605611.

57. Tomiyasu I.Y., Kurano J., Kato F., Kaneda Y., Imaizun K., Yano S., Occurrence of a novel glycolipid, 'trehalose 2,3,6'-trimycolate' in a psychrophilic, acid-fast bacterium, Rhodococcus aurantiacus (Gordona aurantiaca) // FEBS Letters. - 1986. - V.203. -№.2 . - P. 239-242.

58. Kurane R., Kakuno T., Kiyohara M., Tajima T., Hirano M., Taniguchi Y. Chemical Structure of Lipid Bioflocculant Produced by Rhodococcus erythropolis // Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. - 1995. - V.59. - №.9. - P. 1652-1656.

59. Ivshina I.B., Kuyukina M.S. Rhodococcus Biosurfactants: Biosynthesis, Properties, and Potential Applications Biology of Rhodococcus in Microbiology Monographs 16 / Alvarez H.M. (ed). - Springer -Verlag Berlin. - 2010. - P.291-309.

60. Singer M.E., Finnerty W.R., Tunelid A. Physical and chemical properties of a biosurfactant synthesized by Rhodococcus species H13-A // Can J Microbiol. - 1990. - V.36. - №.11. - P. 746-50.

61. Uchida Y., T.R., Chino M., Hirano J.,Tabuchi T. Extracellular accumulation of mono-and di-succinoyl trehalose lipids by strain of Rhodococcus erythropolis grown on n-alkans // Agric Biol Chem. - 1989. - V.53. - №3. - P. 6.

62. Espuny M.J., Mercade M.E., Manresa A. Characterization of trehalose tetraester produced by a waste lube oil degrader Rhodococcus sp. 51T7 // Toxicological & Environmental Chemistry. - 1995. - V.48. - №.(1-2). - P. 83-88.

63

64

65

66

67

68

69

70

71

72

73

74

75

76

77

Tuleva B., Cohen R., Stoev G., Stoineva I. Production and structural elucidation of trehalose tetraesters (biosurfactants) from a novel alkanothrophic Rhodococcus wratislaviensis strain // J Appl Microbiol. - 2008. - V.104. - №.6. - P.1703-10. Suzuki T., Tanaka K., Matsubara I., Kinoshita S. Trehalose Lipid and a-Branched-P-hydroxy Fatty Acid Formed by Bacteria Grown on n-Alkanes // Agricultural and Biological Chemistry. - 2014. - V.33. - №.11. - P. 1619-1627. Peng F., L.Z., Wang L., Shao Z. An oil-degrading bacterium: Rhodococcus erythropolis strain 3C-9 and its biosurfactants // J Appl Microbiol. - 2007. - V.102. -№.6. - P.1603-11.

Zheng C., Yu L., Huang L.,Wu Q. Study of the biosurfactant-producing profile in a newly isolated Rhodococcus ruber strain // Ann Microbiol. - 2009. - V.59. - №.4. -P. 6.

Sudo T., Wakamatsu Y.,Shibahara M., Nomura N., Nakahara T., Suzuki A., Kobayashi Y., Jin C., Murata T., Yokoyama K.K., Induction of the differentiation of human HL-60 promyelocytic leukemia cell line by succinoyl trehalose lipids // Cytotechnology. - 2000. - V.33. - №.(1-3). - P. 259-64.

Zaragoza A., Espuny M. J., Teruel J. A., Marques A., Manresa A., Ortiz A., Hemolytic activity of a bacterial trehalose lipid biosurfactant produced by Rhodococcus sp.: evidence for a colloid-osmotic mechanism // Langmuir. - 2010. -V.26. - №.11. - P. 8567-72.

Zaragoza A., Espuny M. J., Teruel J. A., Marques A., Manresa A., Ortiz A., Interaction of a Rhodococcus sp. trehalose lipid biosurfactant with model proteins: thermodynamic and structural changes // Langmuir. - 2012. - V.28. - №.2. - P. 138190.

Christova N., Wray V., Kaloyanov K., Konstantinov S., Stoineva I. Production, Structural Elucidation, and In Vitro Antitumor Activity of Trehalose Lipid Biosurfactant from Nocardia farcinica Strain // J Microbiol Biotechnol. - 2015. -V.25. - №.4. - P 439-47.

Christova N., Stoineva I. Trehalose Biosurfactants in Biosurfactants: Research Trends and Applications / Mulligan C.N., Sharma S.K., Mudhoo A. (ed) - Taylor and Fransis. New York. - 2014. - P.197-212.

Hunter R.L., Venkataprasad N., Olsen M.R. The role of trehalose dimycolate (cord factor) on morphology of virulent M. tuberculosis in vitro // Tuberculosis (Edinb). -2006. - V.86. - №.5. - P. 349-56.

Yano I., Kaneda K., Kato Y., Sumi Y., Kurano S., Sugimoto N., Sawai H. Isolation of mycolic acid-containing glycolipids in Nocardia rubra and their granuloma forming activity in mice // Journal of pharmacobio-dynamics. - 1987. - V.10. - P.113-23. Natsuhara Y., Kaneda K., Kato Y., Yano I. Parallel antitumor, granuloma-forming and tumor-necrosis-factor-priming activities of mycoloyl glycolipids from Nocardia rubra that differ in carbohydrate moiety: structure-activity relationships // Cancer Immunol Immunother. - 1990. - V.31. - №.2. - P. 99-106.

Kitamoto D., Isoda H., Nakahara T. Functions and potential applications of glycolipid biosurfactants--from energy-saving materials to gene delivery carriers // J Biosci Bioeng. - 2002. - V.94. - №.3. - P. 187-201.

Aranda F.J., Teruel J.A., Espuny M.J., Marques A., Manresa A., Palacios-Lidon E., Ortiz A. Domain formation by a Rhodococcus sp. biosurfactant trehalose lipid incorporated into phosphatidylcholine membranes // Biochim Biophys Acta. - 2007. -V. 1768. - №10. - P. 2596-604.

Ortiz A., Teruel J.A., Espuny M.J., Marques A., Manresa A., Arandda F.J. Interactions of a Rhodococcus sp. biosurfactant trehalose lipid with phosphatidylethanolamine membranes // Biochim Biophys Acta. - 2008. - V.1778. - №.12. - P. 2806-13.

78

79

80

81

82

83

84

85

86

87

88

89

90

91

92

93

94

95

Ortiz A., Espuny M.J., Marques A., Manresa A., Aranda F.J. Interactions of a bacterial biosurfactant trehalose lipid with phosphatidylserine membranes // Chem Phys Lipids. - 2009. - V.158. - №.1. - P. 46-53.

Bouchez-Naitali M., R.H., Marchal R., Leveau J.Y., Vandecasteele J.P. Diversity of bacterial strains degrading hexadecane in relation to the mode of substrate uptake // J Appl Microbiol. - 1999. - V.86. - №.3. - P. 421-8.

Bouchez-Naitali M., Bardin V., Vandecasteele J.P. Evidence for interfacial uptake in hexadecane degradation by Rhodococcus equi: the importance of cell flocculation // Microbiology. - 2001. - V.147. - №.9. - P. 2537-43.

Bouchez-Naitali M., Vandecasteele J.P. Biosurfactants, an help in the biodegradation of hexadecane? The case of Rhodococcus and Pseudomonas strains // World Journal of Microbiology and Biotechnology. - 2008. - V.24. - №.9. - P. 1901-1907. Lang S. and Philp J.C. Surface-active lipids in Rhodococci // Antonie Van Leeuwenhoek. - 1998. - V.74. - №.(1-3). - P. 59-70.

Tuleva B., Cohen R., Antonovka D., Todorov T., Stoineva I. Isolation and characterization of trehalose tetraester biosurfactants from a soil strain Micrococcus luteus BN56 // Process Biochemistry. - 2009. - V.44. - №.2. - P. 135-141. Franzetti A., Caredda P., La Colla P., Tamburini E. Surface-active compounds and their role in the access to hydrocarbons in Gordonia strains // FEMS Microbiol Ecol. -2008. - V.63. - №.2. - P. 238-48.

Коронелли Т.В. Принципы и методы интенсификации биологического разрушения углеводородов в окружающей среде // Прикл. биохимия и микробиол. - 1996. - T. 32. - N.6. - P. 7.

Li, Y., Wang H. and Hua F. Uptake Modes of Fluoranthene by Strain Rhodococcus Sp. Bap-1// Biotechnology & Biotechnological Equipment. - 2014. - V.27. - №.6. -P. 4256-4262.

Li J-L., Chang B.-H. Surfactant-mediated Biodegradation of Polycyclic Aromatic Hydrocarbons // Materials. - 2009. - V.2. - №. 1. - P. 76-94.

Рубцова Е.В., Куюкина М.С., Ившина И.Б. Влияние условия культивирования на адгезию родококков в отношенении к н-гексадекану // Прикладная биохимия и микробиология. - 2012. - T.48. - №.5. - P. 9.

Гоголева О.А., Немцева Н.В. Углеводородокисляющие микроорганизмы природных экосистем // Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН. -2012. - T2. - P. 7.

Коронелли Т.В., Калюжная Т.В. Изменение ультраструктуры клеток сапротрофных микобактерий под влиянием изониазида // Микробиология. -1983. - T.2. - P. 5.

Hua, F. and Wang H.Q. Uptake and trans-membrane transport of petroleum hydrocarbons by microorganisms // Biotechnol Biotechnol Equip. - 2014. - V.28. -№.2. - P. 165-175.

Коронелли Т.В., Поршнева О.В. Липиды R- и S-вариантов Rhodococcus erythropolis // Микробиология. - 1995. - T.6. - P. 4.

Nikaido H. Multidrug efflux pumps of gram-negative bacteria // J Bacteriol. - 1996. -V. 178. - №.20. - P. 5853-9.

Дмитриев В.В., Рогачевский В. В., Звонарев А. Н. Экзополимеры микроорганизмов в утилизации гидрофобных субстратов // Известия Тульского государственного университета. Естественные науки. - 2012. - T.2. - P. 3. Липиды микобактерий и родственных микроорганизмов. [Коронелли Т.В.]. Изд-во Московского университета. - 1984. - 157c.

96. Kim I.S., Foght J.M. Gray M.R. Selective transport and accumulation of alkanes by Rhodococcus erythropolis S+14He // Biotechnol Bioeng. - 2002. - V.80. - №.6. - P. 650-9.

97. Bicca F.C., Ayub M.A. Production of biosurfactant by hydrocarbon degrading Rhodococcus ruber and Rhodococcus erythropolis // Revista de Microbiologia. -1999. - V.30. - P. 6.

98. Ivshina I.B., Kuyukina M.S., Philp J.C., Christofi N. Oil desorption from mineral and organic materials using biosurfactant complexes produced by Rhodococcus species // World J Microbiol Biotechnol. - 1998. - V.14. - №.5. - P. 711-717.

99. Griffin W.C. Classification of Surface-Active Agents by "HLB" // The Journal of the Society of Cosmetic Chemists. - 1949. - V.1. - P. 311-326.

100. Kuyukina M.S., Ivshina I.B., Gavrin A.Y., Podorozhko E.A., Lozinsky V.I., Jeffree C.E., Philp J.C. Immobilization of hydrocarbon-oxidizing bacteria in poly(vinyl alcohol) cryogels hydrophobized using a biosurfactant // J Microbiol Methods. -2006. - V.65. - №.3. - P. 596-603.

101. Kim J.S., Lang S., Wagner F., Lunsdorf H., Wray V. Microbial glycolipid production under nitrogen limitation and resting cell conditions // J Biotechnol. - 1990. - V.13. -N4. - P. 257-66.

102. Pal M P., Desai K.M., Joshi R.M., Nene S.N., Kulkarni B.D. Media optimization for biosurfactant production by Rhodococcus erythropolis MTCC 2794: artificial intelligence versus a statistical approach // J Ind Microbiol Biotechnol. - 2009. - V.36. - N.5. - P. 747-56.

103. Pirog T.P., Voloshina I.N., Karpenko E.V. Production of surfactants by Rhodococcus erythropolis strain EK-1, grown on hydrophilic and hydrophobic substrates // Prikl Biokhim Mikrobiol. - 2004. - V.40. - №.5. - P. 544-50.

104. Kuyukina M.S., Ivshina I.B., Philp J.C., Christofi N., Dunbar S.A., Ritchkova M.I., Recovery of Rhodococcus biosurfactants using methyl tertiary-butyl ether extraction // J Microbiol Methods. - 2001. - V.46. - №.2. - P. 149-56.

105. Pacheco G.J., Gomes Ede B., Junior N.P. Biosurfactant production by Rhodococcus erythropolis and its application to oil removal // Braz J Microbiol. - 2010. - V.41. -№.3. - P. 685-93.

106. Haddadin Y., Abu Reesh I. Kinetics of hydrocarbon extraction from oil shale using biosurfactant producing bacteria // Energy Conversion and Management. - 2009. -V.50. - №.4. - P. 983-990.

107. De Carvalho C.C. Adaptation of Rhodococcus erythropolis cells for growth and bioremediation under extreme conditions // Res Microbiol. - 2012. - V. 163. - №.2. -P. 11.

108. Suutari M. and Laakso S. Microbial fatty acids and thermal adaptation // Crit Rev Microbiol. - 1994. - V.20. - №.4. - P. 285-328.

109. Nishiuchi Y., Baba T., Yano I. Mycolic acids from Rhodococcus, Gordonia, and Dietzia // J Microbiol Methods. - 2000. - V.40. - №.1. - P. 1-9.

110. Whyte L.G., Pietrantonio F., Bourbonniere L., Koval S.F., Lawrence J.R., Inniss W.E., Greer C.W. Physiological adaptations involved in alkane assimilation at a low temperature by Rhodococcus sp. strain Q15 // Appl Environ Microbiol. - 1999. -V.65. - №.7. - P. 2961-8.

111. de Carvalho C.C. and da Fonseca M.M. Degradation of hydrocarbons and alcohols at different temperatures and salinities by Rhodococcus erythropolis DCL14 // FEMS Microbiol Ecol. - 2005. - V.51. - №.3. - P. 389-99.

112. Alvarez H.M., Mayer F., Fabritius D., Steinbüchel A. Formation of intracytoplasmic lipid inclusions by Rhodococcus opacus strain PD630 // Archives of Microbiology. -1996. - V.165. - №.6. - P. 377-386.

113

114

115

116

117

118

119

120

121

122

123

124

125

126

127

128

129

Alvarez H.M., Silva R.A., Cesari A.C., Zamit A.L., Peressutti S.R., Reichelt R., Keller U. Physiological and morphological responses of the soil bacterium Rhodococcus opacus strain PD630 to water stress // FEMS Microbiol Ecol. - 2004. - V .50. - №.2.

- P. 75-86.

Waltermann M. and Steinbüchel A. Neutral lipid bodies in prokaryotes: recent insights into structure, formation, and relationship to eukaryotic lipid depots // J Bacteriol. -2005. - V. 187. - №.11. - P. 3607-19.

Packter N.M. and Olukoshi E.R. Ultrastructural studies of neutral lipid localisation in Streptomyces // Arch Microbiol. - 1995. - V.164. - №.6. - P. 420-7. Waltermann M., Hinz A., Robenek H., Troyer D., Reichelt R., Malkus U., Galla H.J., Kalscheuer R., Stoveken T., von Landenberg P., Steinbuchel A. Mechanism of lipid-body formation in prokaryotes: how bacteria fatten up // Mol Microbiol. - 2005. -V.55. - №.3. - P. 750-63.

Alvarez H.M., Kalscheuer R. and Steinbuchel A. Accumulation and mobilization of storage lipids by Rhodococcus opacus PD630 and Rhodococcus ruber NCIMB 40126 // Appl Microbiol Biotechnol. - 2000. - V.54. - №.2. - P. 218-23. Alvarez H.M. and Steinbüchel A. Physiology, Biochemistry, and Molecular Biology of Triacylglycerol Accumulation by Rhodococcus in Biology of Rhodococcus Alvarez H.M.(ed). - Springer Berlin Heidelberg: Berlin. - 2010. - P. 263-290. McDonald R. and Knox OG. Cold region bioremediation of hydrocarbon contaminated soils: do we know enough? // Environ Sci Technol. - 2014. - V.48. -№.17. - P. 9980-1.

Li C., Zhou Z.X., Jia X.Q., Chen Y., Liu J.,Wen J.P. Biodegradation of Crude Oil by a Newly Isolated Strain Rhodococcus sp. JZX-01 // Appl Biochem Biotechnol. - 2013.

- V.171. - №.7. - P. 1715-1725.

Margesin R., Moertelmaier C., and Mair J. Low-temperature biodegradation of petroleum hydrocarbons (n-alkanes, phenol, anthracene, pyrene) by four actinobacterial strains // Int Biodeterior Biodegradation. - 2013. - V.84. - P. 185-191. Shao Z. Trehalolipids in Biosurfactants in Microbiology monographs 20 / Soberon-Chavez G. (ed.). - Springer-Verlag Berlin. - 2011. - P. 121-140. Kanga S.A., Page C.A., Mills M.A. Autenrieth R. L., Solubilization of Naphthalene and Methyl-Substituted Naphthalenes from Crude Oil Using Biosurfactants // Environmental Science & Technology. - 1997. - V.31. - №.2. - P. 556-561. Singh A., Van Hamme J.D. and Ward O.P. Surfactants in microbiology and biotechnology: Part 2. Application aspects // Biotechnol Adv. - 2007. - V.25. - №.1.

- P. 99-121.

Rodrigues L., Banat I.M., Teixeira J., Oliveira R. Biosurfactants: potential applications in medicine // J Antimicrob Chemother. - 2006. - V.57. - №.4. - P. 60918.

Isoda H. Succinoyl trehalose lipid induced differentiation of human monocytoid leukemic cell line U937 into monocyte-macrophages // Cytotechnology. - 1996. -V19. - P. 10.

Chang J.S., Radosevich M., Jin Y., Cha D.K. Enhancement of phenanthrene solubilization and biodegradation by trehalose lipid biosurfactants // Environ Toxicol Chem. - 2004. - V .3. - №.12. - P. 2816-22.

Cameotra S.S. and Makkar R.S. Biosurfactant-enhanced bioremediation of hydrophobic pollutants // Pure and Applied Chemistry. - 2010. - V.82. - №. 1. - P. 97

- 116.

Manickam N., Bajaj A., Saini H.S., Shanker R. Surfactant mediated enhanced biodegradation of hexachlorocyclohexane (HCH) isomers by Sphingomonas sp. NM05 // Biodegradation. - 2012. - V.23. - №.5. - P. 673-682.

130

131

132

133

134

135

136

137

138

139

140

141

142

143

144

145

146

Oberbremer A., Müller-Hurtig R., and Wagner F. Effect of the addition of microbial surfactants on hydrocarbon degradation in a soil population in a stirred reactor // Applied Microbiology and Biotechnology. - 1990. - V.32. - №.4. - P. 485-489. Munstermann B., Poremba K., Lang S., and Wagner F. Studies on environmental compatibility: Influence of (bio)surfactants on marine microbial and enzymatic systems // In Proceedings of the International Symposium on Soil Decontamination Using Biological Processes. - 1992. - V.6. - №.9. - P. 6.

Biosurfactants. Advances in experiamental medicine and biology / Sen R. (ed). -Springer Science. New York. - 2010. - 361p

Cooper D.G. and Goldenberg B.G. Surface-active agents from two Bacillus species // Appl Environ Microbiol. - 1987. - V.53. - №.2. - P. 7.

Willumsen P.A. and Karlson U. Screening of bacteria, isolated from PAH-contaminated soils, for production of biosurfactants and bioemulsifiers // Biodegradation. - 1996. - V. 7. - №.5. - P. 415-423.

van der Vegt W. et al. Assessment of bacterial biosurfactant production through axisymmetric drop shape analysis by profile // Applied Microbiology and Biotechnology. - 1991. - V.35. - №.6. - P. 766-770.

Rotenberg Y., Boruvka L. and Neumann A.W. Determination of surface tension and contact angle from the shapes of axisymmetric fluid interfaces // Journal of Colloid and Interface Science . - 1983. - V.93. - №.1. - P. 169-183.

Tadros T.F. Adsorption of Surfactants at the Air/Liquid and Liquid/Liquid Interfaces, in Applied Surfactants. - Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA. - 2005. - P. 73-84. Chen C.Y., Baker S.C., and Darton R.C. The application of a high throughput analysis method for the screening of potential biosurfactants from natural sources // J Microbiol Methods. - 2007. - V.70. - №.3. - P. 503-10.

Jain D.K., Collins-Thompson D.L., Lee H., Trevors J.T. A drop-collapsing test for screening surfactant-producing microorganisms // Journal of Microbiological Methods. - 1991. - V.13. - №.4. - P. 271-279.

Persson A. and Molin G. Capacity for biosurfactant production of environmental Pseudomonas and Vibrionaceae growing on carbohydrates // Applied Microbiology and Biotechnology. - 1987. - V.26. - №.5. - P. 439-442.

Bodour A.A. and Miller-Maier R.M. Application of a modified drop-collapse technique for surfactant quantitation and screening of biosurfactant-producing microorganisms // Journal of Microbiological Methods. - 1998. - V32. - №.3. - P. 273-280.

Maczek J., Junne S., Götz P. Examining biosurfactant producing bacteria - an example for an automated search for natural compounds, in Application Note CyBio AG. -2007.

Plaza G.A., Zjawiony I., Banat I.M. Use of different methods for detection of thermophilic biosurfactant-producing bacteria from hydrocarbon-contaminated and bioremediated soils // Journal of Petroleum Science and Engineering. - 2006. - V.50. - №.1. - P. 71-77.

Tugrul T. and Cansunar E. Detecting Surfactant-producing Microorganisms by the Drop-collapse Test // World Journal of Microbiology and Biotechnology. - 2005. -V.21. - №. 6. - P. 851-853.

Vaux D., Cottingham M. Method and apparatus for measuring surface configuration, patent number WO 2007/039729 A1. - 2001

Morikawa M., Hirata Y., Imanaka T. A study on the structure-function relationship of lipopeptide biosurfactants // Biochim Biophys Acta. - 2000. - V.1488. - №.3. - P. 211-8.

147

148

149

150

151

152

153

154

155

156

157

158

159

160

161

162

163

Fracchia L., C.M., Martinotti M.G., Banat I.M. Biosurfactants and bioemulsifiers biomedical and related applications: Present status and future potentials // Biomedical Science, Engineering and Technology. - 2012. - P. 48.

Youssef N.H., Duncan K.E., Nagle D.P., Savage K. N., Knapp R.M., Mclnerney M. J. Comparison of methods to detect biosurfactant production by diverse microorganisms // J Microbiol Methods. - 2004. - V.56. - №.3. - P. 339-47.

Rosenberg M. Bacterial adherence to polystyrene: a replica method of screening for bacterial hydrophobicity // Applied and Environmental Microbiology. - 1981. - V.42, - №.2. - P. 375-377.

Pruthi V. and Cameotra S.S. Rapid identification of biosurfactant-producing bacterial strains using a cell surface hydrophobicity technique // Biotechnology Techniques. -1997. - V.11. - №.9. - P. 671-674.

Bryant F.O. Improved Method for the Isolation of Biosurfactant Glycolipids from Rhodococcus sp. Strain H13A // Appl Environ Microbiol. - 1990. - V.56. - №.5. - P. 1494-6.

Hodge J.E. and Hofreiter B.T. Determination of reducing sugars and carbohydrates. In: Methods in Carbohydrate Chemistry, Whistler R.L. and Wolfrom, M.L. (ed). -Academic Press. New York, - 1962. - P. 380-394.

Dubois M., Gilles K.A., Hamilton J.K., Rebers P.A., Smith F. Colorimetric method for determnation of sugers and related substances // Anal Chem. - 1956. - V.28. - №.3. -P. 350-356.

Kai M., Fujita Y., Maeda Y., Nakata N., Izumi S., Yano I.,Makino M. Identification of trehalose dimycolate (cord factor) in Mycobacterium leprae // FEBS Lett. - 2007. -V.581. - №.18. - P . 3345-50.

Kugler J. H., Muhle-Goll C., Kuhl B., Kraft A., Heinzler R. Trehalose lipid biosurfactants produced by the actinomycetes Tsukamurella spumae and T. pseudospumae // Appl Microbiol Biotechnol. - 2014. - V.98. - №.21. - P. 8905-15. Филонов А.Е., Шкидченко А.Н., Боронин А.М. Биопрепарат для очистки почв от загрязнений нефтью и нефтепродуктами, способ его получения и применения // Патент 2378060 РФ, Опубл. 10.01.2009, Бюл. №1 Evans C.G.T., Herbert D. The continiuous cultivation of microorganisms. 2.Construction of a Chemostat // Methods in Microbiology. - 1970. - V.2. - P. 277324.

Carhart G., Hegeman G. Improved method of selection for mutants of Pseudomonas putida // Appl. Microbiol. - 1975. - V30. - P. 1046

Rosenberg M. Bacterial adherence to hydrocarbons: a useful technique for studying cell surface hydrophobicity // FEMS Microbiology. - 1984. - V.22. - P. 289-295. Satpute S. K., Banpurkar A.G., Dhakephalkar P.K., Banat I.M., Chopade B.A. Methods for investigating biosurfactants and bioemulsifiers: a review // Crit Rev Biotechnol. - 2010. - V.30. - №.2. - P. 127-44.

Reynolds E.S. The use of lead citrate at high pH as an electron-opaque stain in electron microscopy // J Cell Biol. - 1963. - V.17. - P. 208-12. Bligh E.G. and Dyer W.J. A rapid method of total lipid extraction and purification // Canadian Journal of Biochemistry and Physiology. - 1959. - V.37. - №.8. - P. 911917.

Soultani S., Ognier S., Engasser J-M., Ghoul M. Comparative study of some surface active properties of fructose esters and commercial sucrose esters // Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects. - 2003. - V.227. - №.(1-3). -P. 35-44.

164. Francy D.S., Thomas J.M., Raymond R.L., Ward C.H. Emulsification of hydrocarbons by subsurface bacteria // Journal of Industrial Microbiology. - 1991. - V.8. - №.4. -P. 237-245.

165. Chang W.N., Liu C.W., and Liu H.S. Hydrophobic cell surface and bioflocculation behavior of Rhodococcus erythropolis // Process Biochemistry. - 2009. - V.44. -№.9. - P. 955-962.

166. Sadouk Z., Hacene H. Biosurfactants Production from Low Cost Substrate and Degradation of Diesel Oil by a Rhodococcus Strain // Oil Gas Sci Technol - Rev IFP Energies nouvelles. - 2008. - V.63. - №.6. - P. 747-753.

167. Alvarez H., Silva R., Herrero M., Hernández M., Villalba M. Metabolism of triacylglycerols in Rhodococcus species: insights from physiology and molecular genetics // J Mol. Biochem. - 2013. - V.2 - P. 69-78.

168. Mishra S. and Singh S.N. Microbial degradation of n-hexadecane in mineral salt medium as mediated by degradative enzymes // Bioresour Technol. - 2012. - V.111. - P. 148-54.

169. de Carvalho C., Wick L. and Heipieper H. Cell wall adaptations of planktonic and biofilm Rhodococcus erythropolis cells to growth on C5 to C16 n-alkane hydrocarbons // Applied microbiology and biotechnology. - 2009. - V.82. - P. 311-320.

170. Сузина И.Е., Северина Л.О., Сенюшкин А.А., Каравайко Г.И., Дуда В.И., Ультраструктурная организация мембранного аппарата sulfobacillus thermosulfidooxidans // Микробиология. - 1999. - T.68. - №.4. - C. 491-500.

171. Ставская С.С., Сузина Н.Е., Григорьева Т.Ю., Фихте Б.А., Ротмистров М.Н. Ультраструктурная организация бактерий-деструткоров ДСН // Доклады Академии Наук СССР. - 1982. - T.262. - №.5. - P. 1261-1265.

172. Сузина Н.Е. , Ставская С.С., Фихте Б.А. Изменение в ультраструктурной организации клеток Pseudomonas aeruginosa под действием ДСН // Микробиология. - 1988. - T.57. - №.2. - P. 255-260.

173. Scott C.C. and Finnerty W.R. Characterization of intracytoplasmic hydrocarbon inclusions from the hydrocarbon-oxidizing Acinetobacter species HO1-N // J Bacteriol. - 1976. - V.127. - №.1. - P. 481-9.

174. Beal R. and Betts W.B. Role of rhamnolipid biosurfactants in the uptake and mineralization of hexadecane in Pseudomonas aeruginosa // J Appl Microbiol. -2000. - V.89. - №.1. - P. 158-68.

175. Albino J.D. and Nambi I.M. Effect of biosurfactants on the aqueous solubility of PCE and TCE // J Environ Sci Health A Tox Hazard Subst Environ Eng. - 2009. - V.44. -N.14. - P. 1565-73.

176. Ivshina I. et al. Removal of polycyclic aromatic hydrocarbons in soil spiked with model mixtures of petroleum hydrocarbons and heterocycles using biosurfactants from Rhodococcus ruber IEGM 231 // Journal of Hazardous Materials. - 2016. - V .312. -P. 8-17.