Иммобилизация уреазы на поверхности органокремнеземов и свойства полученных препаратов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.04, кандидат химических наук Любинский, Георгий Вадимович

• Любинский, Георгий Вадимович
• кандидат химических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат химических наук Любинский, Георгий Вадимович

Общая характеристика работы.

Глава I. Обзор литературы.

1.1. Иммобилизованные ферменты.

1.2. Роль диффузии в катализе иммобилизованными ферментами.

1.3. Уреаза и ее использование в аналитической химии.

1.4. Кинетика иммобилизации ферментов.

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Синтез носителей для иммобилизации ферментов.

2.2. Иммобилизация уреазы и исследование ее свойств

2.3. Получение пористых кремнеземов с различным средним диаметром частиц.

2.4. Исследование кинетики иммобилизации ферментов на поверхности пористых неорганических носителей при постоянной концентрации белка в растворе.

2.5. Изучение кинетики иммобилизации белков при изменяющейся в ходе эксперимента концентрации последних.

2.6. Определение скорости гидролиза мочевины растворимой и иммобилизованной уреазой.

2.7. Определение концентрации мочевины при помощи иммобилизованной на силохроме уреазы.

2.8. Исследование стабильности ферментного электрода.

Глава 3. рН-зависимость процесса иммобилизации.

Глава 4. Уреаза из staphylococcus saprophyticus L

4.1. Некоторые свойства нативного фермента.

4.2. Иммобилизованная уреаза и ее свойства.

4.3. Использование иммобилизованной уреазы для опре деления концентрации мочевины.

Глава 5. Кинетика иммобилизации ферментов

5.1. Исследование лимитирующей стадии процесса иммобилизации.

5.2. Математическое описание кинетики иммобилизации ферментов на поверхности пористых неорганических матриц

5.3. Влияние среднего диаметра пор и удельной поверхности носителей на кинетику иммобилизации ферментов

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммобилизация уреазы на поверхности органокремнеземов и свойства полученных препаратов»

Актуальность работы, В настоящее время иммобилизованные ферменты нашли применение как в ряде технологических процессов, так и в составе анализаторов, предназначенных для определения концентрации некоторых веществ. Фиксированные на искусственных матрицах ферменты рассматривают как модель мембранно-связанных биокатализаторов, которые широко распространены в природе. Исследование их свойств позволяет лучше понять, как осуществляется катализ в живой клетке. Все это обусловило повышенный интерес исследователей к получению и изучению свойств иммобилизованных ферментов. Описано большое число последних, предложено множество носителей с различной химической природой поверхности. Однако выбор матрицы, способа и условий иммобилизации все еще остается во многом эмпирическим, а результат - труднопредсказуемым. Вследствие этого исследование оптимизации процессов иммобилизации ферментов - задача важная и актуальная.

В значительной степени дискуссионным остается вопрос об изменении свойств ферментов при иммобилизации. Далеко не всегда понятно, чем оно вызвано: изменением кинетических констант ферментов вследствие связывания последних с поверхностью матрицы, или диффузионным торможением по веществам, оказывающим влияние на скорость ферментативной реакции.

Довольно удобным объектом для проведения систематических исследований по этим вопросам является уреаза. Относительно высокая растворимость ее субстрата - мочевины - дает возможность работать с иммобилизованным энзимом в условиях, когда диффузионный транспорт этого вещества не оказывает существенного влияния на измеряемую скорость катализа. Помимо этого, иммобилизованная уреаза -весьма перспективный препарат с практической точки зрения. Он нашел применение в составе анализаторов для определения концентрации мочевины в биологических жидкостях, а также для очистки диализной жидкости аппаратов типа "искусственная почка". Однако при этом применяются уреазы, выделенные из высших растений. Вместе с тем, ферменты, выделенные из микроорганизмов, как известно, весьма перспективны в первую очередь из экономических соображений.По-этому изучение оптимальных условий иммобилизации уреазы микробиологического происхождения и исследование свойств полученных препаратов является актуальной задачей.

Цель работы - поиск оптимальных условий фиксации уреазы микробиологического происхождения на поверхности пористых кремнеземов и изучение факторов, оказывающих влияние как на активность иммобилизованных препаратов, так и на степень сохранения активности фермента при его гетерогенизации. Задача состояла также в том, чтобы попытаться распространить полученные закономерности и на процессы фиксации иных ферментов.

Целью работы было также и изучение каталитических свойств иммобилизованной уреазы в сравнении с таковыми нативного фермента. При этом предполагалось выяснить основные причины изменения свойств этого фермента при иммобилизации.

Научная новизна работы. Были наЦдены оптимальные условия связывания уреазы из staphylococcus saprophytics L-1 с активированной поверхностью кремнеземов. Доказано, что величина рй иммобилизации этого фермента, при которой получаются наиболее активные препараты, практически не зависит от способа связывания фермента с поверхностью матрицы и составляет 7-8.

Установлено, что величина оптимального рН иммобилизации ряда иных ферментов не зависит ни от химической природы матрицы, ни от способа связывания белка с поверхностью, а определяется величиной изоэлектрической точки фермента. Впервые предложено эмлирическое уравнение, связыващее рН-оптимум иммобилизации ферментов с величинами их изоэлектрических точек.

Показано, что степень сохранения активности уреазн при иммобилизации на кремнеземах определяется не только способом связывания ее с носителем, но и длиной органического радикала между поверхностью матрицы и ферментом. Остаточная ферментативная активность в случае адсорбции на исходном кремнеземе составляет 26 + 2% и достигает ~ 100$, если молекула биокатализатора отделена от поверхности достаточно длинной "ножкой".

Показано, что время завершения иммобилизации уреазы из staphylococcus saprophytics L-1 на активированных кремнеземах практически не зависит ни от способа, ни от рН связывания фермента с матрицей и для силохромов С-80 (фракция 0,25 - 0,365 мм) составляет 4 - 5 ч. Изучение кинетики связывания уреазы и модельного белка - трипсина - позволило установить, что процесс иммобилизации лимитируется стадией диффузии белковых макромолекул в поры матрицы. Кинетика иммобилизации ферментов при постоянной и при уменьшающейся в ходе эксперимента концентрации белка удовлетворительно описывается уравнениями, предложенными для кинетики физической адсорбции на пористых адсорбентах.

Изучены некоторые свойства иммобилизованной уреазы. Установлено, что изменение свойств гетерогенизированного фермента по сравнению с растворимым в значительной степени определяется диффузионным торможением по веществам, оказывающим влияние на скорость ферментативной реакции. Полученные препараты иммобилизованной уреазы достаточно стабильны для использования их в составе анализаторов для определения концентрации мочевины в водных растворах.

Научно-практические аспекты работы. Полученные препараты иммобилизованной уреазы отличаются высокой степенью сохранения активности (70 - 100$) и достаточно стабильны для их использования в составе анализаторов для определения концентрации мочевины в водных растворах. Данные по исследованию кинетики и рН-зависимости иммобилизации могут быть использованы для предсказания оптимальных условий иммобилизации ферментов.

Структура работы. Диссертация состоит из общей характеристики работы, обзора литературы (глава I), описания объектов и методов исследования (глава 2), трех экспериментальных глав (3 - 5), выводов и списка цитируемой литературы. Глава 3 посвящена изучению рН-зависимости иммобилизации ферментов. В главе 4 представлены данные по изучению оптимальных условий связывания уреазы из Staphylococcus saprophytics L-1 с активированными кремнеземами, некоторых свойств полученных препаратов и возможности их применения в составе анализаторов для определения концентрации мочевины в водных растворах. В главе 5 описаны результаты исследования кинетики иммобилизации ферментов на поверхности пористых кремнеземов со сферическими частицами.

Основные публикации автора по рассматриваемым вопросам указаны после названия каждого параграфа соответствущей главы.

Диссертационная работа выполнена в отделе хемосорбции Института физической химии им. Л.В.Писаржевского АН УССР.

Заключение диссертации по теме «Физическая химия», Любинский, Георгий Вадимович

выводы

1. Найдены оптимальные условия иммобилизации уреазы микробиологического происхождения - ИЗ Staphylococcus saprophytics L-1 на активированных силохромах. Показано, что степень сохранения активности биокатализатора определяется не только способом связывания с носителем, но и длиной органического радикала между поверхностью матрицы и ферментом.

2. Впервые показано, что независимо от химической природы матрицы и способа связывания оптимальные рН иммобилизации ферментов близки к значениям их изоэлектрических точек. Предложено эмпирическое уравнение, связывающее эти две величины.

3. Установлено, что константа Михаэлиса уреазы при иммобилизации существенно не изменяется. Изменение кинетических свойств связанного с силохромом фермента обусловлено диффузионным торможением по субстрату и конкурентно ингибирующим продуктам реакции. Аналогичное объяснение находит и отклонение от линейности зависимости активности фиксированного на силохроме фермента от степени заполнения поверхности матрицы. Диффузионное торможение по образующимся в результате реакции ионам ОН" приводит к искажению рН-зависимости гидролиза мочевины,иммобилизованной на силохроме уре-азой, если буферная емкость раствора субстрата относительно невелика.

4. На основании исследования кинетики связывания уреазы и трипсина с активированными пористыми кремнеземами установлено, что процесс иммобилизации лимитируется стадией диффузии фермента в поры матрицы. Кинетика иммобилизации ферментов при постоянной и уменьшающейся в ходе эксперимента концентрации белка удовлетворительно описывается уравнениями, предложенными для кинетики физической адсорбции на пористых адсорбентах.

5. Показано, что при практически одинаковом радиусе частиц матрицы время окончания процесса иммобилизации уменьшается при увеличении отношения диаметров пор и макромолекулы фермента.

6. Предложено уравнение, позволяющее рассчитать коэффициент диффузии фермента в порах, радиус которых соизмерим с радиусом молекулы белка.

7. Показана возмэжность применения полученных препаратов иммобилизованной уреазы в составе анализаторов для определения концентрации мочевины в водных растворах. Установлено, что реактор с иммобилизованным ферментом существенно не изменяет своих характеристик при проведении по крайней мере 200 анализов.

ОСНОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

Ц - активность фермента й - текущая величина иммобилизации белка величина связывания белка после завершения процесса иммобилизации С0 - начальная концентрация белка С^ - текущая концентрация белка концентрация белка после завершения процесса иммобилизации

2) - коэффициент диффузии вещества

- коэффициент диффузии вещества в пористой частице

- коэффициент диффузии вещества в капилляре, диаметр которого сопоставим с размерами молекулы диффузанта

В а - энергия активации ферментативной реакции интеграл вероятности Гаусса ^ - диффузионный поток вещества /7 - модуль Тиле кт - константа Михаэлиса

Кр - константа конкурентного ингибирования фермента продуктом реакции $ - константа скорости реакции первого порядка М - молекулярная масса белка Гп - количество связавшегося с носителем фермента [р] - концентрация продуктов реакции Р - емкость носителя по белку рНапт - оптимальное рН иммобилизации ферментов р] - изоэлектрическая точка белка £ - средний радиус частиц носителя

- радиус молекулы диффузанта

Zp - радиус поры

SJ0 - начальная концентрация субстрата [S]p - концентрация субстрата в перемешиваемом растворе LS]n - концентрация субстрата возле каталитически активной поверхности - удельная поверхность носителя ty2 - полувремя иммобилизации t - время lf0 - начальная скорость ферментативной реакции Ут - максимальная скорость ферментативной реакции li^f- - скорость расходования протонов для поддержания постоянного рН Vp - объем раствора белка \fa - объем адсорбента Г - коэффициент Генри иммобилизации белка fi - коэффициент массопереноса

Г - эффективная толщина гидродинамического пограничного слоя

Т - степень заполнения поверхности носителя

S - пористость носителя 0 - коэффициент извилистости пор

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Любинский, Георгий Вадимович, 1984 год

1. Березин И.В., Антонов В.К., Мартшек К. Иммобилизованные ферменты. Современное состояние и перспективы. - М.: МГУ, 1976, т. 1. - 296 с.

2. Porath J. Conditions for biospecific adsorption. Biochimie, 1973» 55» N 8, p. 985 - 990.

3. Munro P.A., Dunill P., Lilly M.D. Honporous magnetic materials as enzyme supports: studies with immobilized chymo-trypsin. Biotechnol. Bioeng., 1977, 19, И 1, p. 101 - 124.

4. Grunwald P., GlinBer W. The influence of anodizing conditions on the activity of urease immobilized to anodize sheet aluminium. Biophys. Struct, and Mech., 1981, 7, N 4» p. 259.

5. Ringard L.B., Ellis D., Yao S.J., Schiller J.G., Lin C.C., Wolfson S.K., Drash A.L. Direct coupling of glucose oxidase to platinum and possible use for in vivo glucose determination.

6. J. Solid-Phase Biochem., 1979, 4, N 4, p. 253 262.

7. Munro P.A., Dunill P., Lilly M.D. Casein hydrolysis in stirred tank reactors using chymotrypsin immobilized on magnetic supports. Biotechnol. Bioeng., 1981, 2^, N 4, p. 677 - 689.

8. Пат. АНГЛИИ I5I4707. Improvement in or relating to immobilization of biologycally active substances / Rosevear A. Опубл. 21.06.78 Г.

9. Charles M., Coughlin R.W., Paruchuri E.K., Allen B.R., Haselberger F.X. Enzyme immobilized on alumina and stainless steel supports. Biotechnol. Bioeng., 1975» 17.» N 1, p. 203-210.

10. Rich S., I,aniello R.M., Jespersen N.D. Development and application of thermistor enzyme probe in the urea-urease system. Anal. Chem., 1979, 51, N 2, p. 204 - 206.

11. Kennedy J.P., Kay I.M. The use of titanium (IV) oxide for the immobilization of carbohydrate-direction enzymes. Carbo-hydr.Rec., 1977, 56, К 2, p. 211 - 218.

12. Messing R.A. A stanuous bridge for coupling urease to controlled-pore titanium. Biotechnol. Bioeng., 1974, J6., N 6, p. 1419 - 1423.

13. Weetall H.H., Hersh L.R. Preparation and characterization of glucose oxidase covalently linked to nickel oxyde. Biochim.

14. Biophys. Acta, 1970, 20б, N 1, p. 54 60.

15. Лауринавичюс В.А., Кулис Ю.Ю. Иммобилизация ферментов на гидратированных окислах переходных металлов и алюминия. Прикл. биохим. микробиол., 1977, 13, Л 3, с. 443 - 448.

16. Grunwald P., GiinBer W. Chemishe und adsorbtive Pixierung von Urease auf Aluminiumhydroxid. Naturwissenschaften, 1978,65, N 1, s. 60-61.

17. Makboul H.E., Ottow C.G. Clay minerals and the Michaelis constant of urease. Soil. Biol, and Biochem., 1979, 1J-» N 6» p. 683 - 686.

18. Monsan P., Durand G. Preparation d'invertase insolubi-lisee par fixation sur bentonite. PEBS Let., 1971, J6, N 1, p. 39 - 42.

19. Van Leemputten E., Horisberger M. Immobilization of enzymes on magnetic particles. Biotechnol. Bioeng., 1974» 16., N 2, p. 385 - 396.

20. Puvanakrishnan R., Bose S.M. Stidies on the immobilization of trypsin on sand. Biotechnol. Bioeng., 1980, 22, И 5, p. 919 - 928.

21. Parkin K., Hultin H.O. Immobilization and characterization of D-amino acide oxidase. Biotechnol. Bioeng., 1979, 21.» H 6, p. 939 - 953.

22. Flynn A., Johnson D.B. Some factors affecting the stability of glucoamilase immobilized on hornblende and other inorganic supports. Biotechnol. Bioeng., 1978, 20, H 9» p. 1445 -1454.

23. Messing R.A. Carriers for immobilized enzymes. Process Biochem., 1974, 9, N 9, p. 26 - 28.

24. Ramesh V., Singh C. Bacterial dextranase immobilized on zirconia-coated alkilamine glass glutaraldehyd. Biochim. Biophys. Res. Commun., 1980, 97, N 2, p. 779 - 786.

25. Cardoso J.P., Chaplin M.F., Emery A.N., Kennedy J.F.,Revel-Chion L.P. The immobilization of ensymes on titanium-activated supports.-J. Appl. Chem. Biotechnol., 1978, 28, N 11, p. 775 783.

26. Кивисилла K.A., Киппер Х.Я. Иммобилизация некоторых протеолитических ферментов микроорганизмов на модифицированных неорганических носителях, Труды ТЛИ, 1981, № 510, с. 93 - 99.

27. Пат. США 4I939IQ. Preparation of support matrices for immobilized enzymes/Rohrbach R.P., Lake P., Levi J., Beach D. -Опубл. 18.03.80 г.

28. Киппер Х.Я., Егоров Х.Р., Кивисилла К.А. Характеристика модифицированных полимерами неорганических носителей. Тр. ТЛИ, 1979, В 465, с. 33 - 39.

29. Березин Й.В., Антонов В.К., Мартинек К. Иммобилизованные ферменты. Современное состояние и перспективы. М.: МГУ, 1976, т. 2. - 358 с.

30. Давиденко Т.И., Севастьянов О.В., Чуенко A.B. Иммобилизация ферментов на силохромах, модифицированных солями переходных металлов. Укр. Биохим. Журн., 1981, 53, № 4, с. 60 - 64.

31. Sahai V., Das К. A method for immobilizing glucose oxydase. Ind.J. Biochem. Biophys., 1980, 17.» N 4, p. 287 - 289.

32. Ямсков И.А., Буданов M.B., Даванков Д.А. Координационная иммобилизация ферментов. I. Связывание пенициллин амидогвдролазы через комплексы меди. Биорг. Хим., 1979, 5, й 5, с. 757 - 767.

33. Штильман М.И. Реакции в системе белок-полимерный носитель, используемые при иммобилизации ферментов. Успехи химии, 1979, 48, Jfc II, с. 2061 - 2086.

34. Тертых В.А., Янишпольский В.В. Химические аспекты иммобилизации ферментов на неорганической матрице. Адсорбция и адсорбенты (г. Киев), .1980, №8, с. 3-27.

35. Тертых В.А., Чуйко A.A., Неймарк И.В. Исследование взаимодействия Т-аминопропил- и ß -цианоэтилтриэтоксисиланов с поверхностью аэросила методом инфракрасной спектроскопии. Теор. Экспер. Хим., 1965, I, № 3, с. 400 - 405.

36. Тертых В.А., Агзамходжаев A.A., Чуйко A.A., Журавлев Л.Т.

37. Синтез и исследование химии поверхности аминоорганокремнеземов. -Изв. АН СССР, сер. хим., 1968, № 8, с. 1739 1743.

38. Lee Е.С., Senyk G.E., Shipe W.P. Preparation and stability of trypsin immobilized on porous glass. J. Pood Sci., 1974, ¿9, N 5, p. 927 - 929.

39. Weetall H.H. Alkaline phosphotase insolubilized by cova-lent linkage to porous glass.- Nature, 19б9, 22Д., p. 959 960.

40. Robinson P.J., Dunill P., billy M.D. Porous glass as a solid support for immobilization and affinity chromatography of enzymes* Biochim. Biophys. Acta, 1971, 242, N 3» p. 659 - 661.

41. Monsan P. Optimization of glutaraldehyd activation of a supports for enzyme immobilization. J. Mol. Catal., 1977/78,1. N 2, p. 371 384.

42. Галич 1.П., Циперович О.С., Ковальчук Т.О., Янишпольсысий В.В., Чуйко 0.0., Тьортих В.А. Ковалентне зв'язування </-ам!лази з кремнеземвм!сним матер!алом. Укр. Б!ох1м. Журн., 1977, 49,6, с. 44 48.

43. Wachter Е., Machleidt W., Hofner Н., Otto J. Amynopropyl glass and its p-phenylendiisothiocyanate derivative, a new support in solid-phase Edman degradation of peptides and proteins.-FEBS Let., 1973, ¿5, И 1, p. 97 102.

44. Lynn M. Biomaterial supports. Chim. Ind., 1973, H 9,p. 601 605.

45. Weibell M.K., Barrios R., Dellotto R., Humphrey A.E. Immobilized enzymes: pectine esterase covalently coupled to porousglass particles. Biotechnol. Bioeng., 1975, 17, N 1, p. 85~98.

46. Янишпольский B.B., Тертых B.A., Любинский Г.В. Иммобилизация трипсина на поверхности органокремнеземов. Укр. Биохим. Журн., 1979, 51, № 4, с. 324 - 329.

47. Nelboeck М., Jaworek D. ImmobiIizierte Enzyme und Principen für ihre Anwendung bei analytischen und präparativen Verfahren. -Chimia, 1975» 29, И 3» s. 109 129.

48. Janilino V.G., Swaisgood H.E. Analysis and optimization of methods using water-insoluble carbodiimide for immobilizationof biochemicals to porous glass. Biotechnol. Bioeng., 1982, 24, N 5, p. 1069 - 1080.

49. Cheryan Ш., Van Wyk P.J., Olson N.F., Richardson T. Continuous coagulation of milk using immobilized enzyme in a flui-dized-bed reactor. Biotechnol. Bioeng., 1975» 17, N 4» p. 585 -598.

50. Cho J.C., Swaisgood H.E. The reactivation of anfolded subunite enzyme linked to a solid surface. Biochim. Biophys. Acta, 1972, 258, N 2, p. 675 - 679.

51. Егоров П.А., Шахпаронов М.И., Давидович Ю.А., Лозинский

52. В.И., Заславский Б.Ю., Рогожин С.В. Получение нерастворимого носителя с активированной -SH группой и его использование в химии белка. Биоорг. Химия, 1977, 3, № 8, с. IIII - III6.

53. Пат. США 4176006. Enzyme immobilized with a disulphide bridge/Cornier R.A., Gagnon С.P. Опубл. 27.10.79 г.

54. A.C. СССР 707923. Хага М.Э., ЛяэнеА.Э., Пеэнема Э.В., Лавиксаар A.A. Способ получения иммобилизованных холинэстераз. Опубл. в Б.И., 1980, № I.

55. Паппель К.Э., Кестнер А.И., Тихомирова A.C., Загустила H.A., Летунова Е.В. Иммобилизация ß -галактозидазы на неорганических носителях. Труды ТЛИ, 1975, Jfc 383, с. 9 - 15.

56. Carlsson J., Axen R., Brocklehurst K., Crook E.M. Immobilization of urease by thiol-disulphide interchange with concomitant purification. Europ. J. Biochem., 1974» 44» N 1» p. 189 -192.

57. Brocklehurst K.» Carlsson J., Kierstan M.P.J., Crook E.M. Covalent chromatography. Preparation of fully active papain from dried papaya latex. Biochem. J., 1973» 1Ц,. N 3» p. 573 - 584.

58. Seeling G.F., Meister A. Cystamin-sepharose. A probe for the active site of -glutamylcystein synthetase. J. Biol. Chem., 1982, 257, H 9» p. 5092 - 5096.

59. Weetall H.H., Havewala И.В., Garfinkel H.M., Buehl W.M. Covalent bound between the enzyme amyloglucosidase and a porous glass carriers the effect of shearing. Biotechnol. Bioeng., 1974, 16, U 1, p. 169 - 174.

60. Шервуд Т., Пигфорд P., Уилки Ч. Массопередача. М.: Химия, 1982. - 695 с.

61. Березин И.В., Варфоломеев С.Д. Биокинетика. М.: Наука, 1979. - 311 с.

62. Франк-Каменецкий Д.А. Диффузия и теплопередача в химической кинетике. М.: Наука, 1967. - 491 с.

63. Пряхин А.Н., Полторак О.М. Кинетика реакций, описываемая схемой Михаэлиса-Ментен, с учетом внешней диффузии. Журн. Физ. Хим., 1983, 57, # I, с. 226 - 228.

64. Ollis D.F. Diffusion influences in denaturable insolu-bilized enzyme catalysts. Biotechnol. Bioeng., 1972, Ы, N 6, p. 871 - 884.

65. Naik S.S., Karanth N.G. Effect of internal and external diffusion on the appearent stability of immobilized enzyme catalysts. J. Appl. Chem. Biotechnol., 1978, 28, N 8, p. 569 -580.

66. Пряхин A.M., Полторак О.М. Кинетика ферментативных реакций с учетом эффектов внутренней диффузии. Вестн. МГУ, сер. хим., 1982, 23, В 5, с. 452 - 457.

67. Engasser J.M., Horwath С. Inhibition of bound enzymes. II. Characterization of product inhibition and accumulation. Biochemistry, 1974, 12., H 19, p. 3848 - 3854.

68. Кестнер A.M., Таммерайц И.И. Макрокинетика иммобилизованных ферментов в случав комплексного ингибирования продуктами. -Труды ТЛИ, 1979, № 465, с. 3-9.

69. Sundaram P.V. An analysis and interpretation of MichaelisMenten kinetics of immobilized enzymes pertubed by film diffusion. J. Solid-Phase Biochem., 1978, И 3» p. 241 - 246.

70. Lee S.B., Kim S.M., Ryu D.D.Y. Effect of external diffusion and design geometry on the performans of immobilized glucosoisomerase reactor system. Biotechnol. Bioeng., 1979, 2J, N 11, p. 2o23 - 2043.

71. Lee S.B., Ryu D.D.Y. External diffusion constant of immobilized enzyme system. J. Theor. Biol., 1980, 84, N 2, p. 259 -279.

72. Onyezili F.H., Onitiri A.C. The effect of substrate flow-rate on immobilized urease assay. Biochim. Biophys. Acta, 1981, 659, N 2, p. 244 - 248.

73. Bliss P.M., Hultin H.O. Enzyme inactivation by an immobilized protease in a plug-flow reactor. J. Pood. Sci., 1977,42, И 2, p. 425 428.

74. Monsan P., Durand G. Utilisation en continu d'invertase fixee sur supports solides. Possibilités d'application aux industries agricoles et alimentaizes. Ann. Technol. Agric., 1972, 2J., К 4, p. 555 - 565.

75. Самсонов В.Г., Миргородская О.А., Москвичев Б.В. Исследование кинетических закономерностей гидролиза низкомолекулярного субстрата трипсином. Биохимия, 1979, 44, № 7, с. 1192 - 1196.

76. Greenfield Р.Е., Laurens R.L. Determination of MichaelisKenten parametrs for immobilized enzymesi detection and measurement of diffusion. Enzyme Eng., vol. 4» N.Y. - London, 1978, p. 384 - 386.

77. Креэн М.И., Кестнер А.И., Каск B.A. Кинетика фиксированной в полиакриламидном геле инвертазн. Труды ТЛИ, 1973, № 331,с. 117 129.

78. Jefferies S.R., Gutmann J.L. A collagen-alkaline phosphatase conjugate membrane: enzymatic kinetics and in vitro stability. Biotechnol. Bioeng., 1982, 24, H 6, p. 1327 - 1340.

79. Мандель M.O. Кинетика гидролиза бензилленициллина с применением иммобилизованной пенициллинамидазы. Труды ТЛИ, 1981, J6 510, с. 85 - 92.

80. Chun M., Dickopp G., Sernetz M. Immobilization ofp galac-tosidase on benzoquinone- activated bead-cellulose. J. SolidPhase Biochem., 1980, 5, N 4, p. 211 - 221.

81. Weibell M.K., Bright H.J. Immobilized enzymes. Kinetic behaviour of glucose oxidase bound to glass particles. Biochem. J., 1971, 124, N 6, p. 801 - 807.

82. Ramachandran K.B.,Perlmutter D.D. Effect of immobilization on the kinetics of enzyme-catalyzed reactions. I. Glucose oxidase in a recirculation reactor system. Biotechnol. Bioeng., 1976,18, N 5, p. 669 684.

83. Ramachandran K.B., Perlmutter D.D. Effect of immobilization on the kinetics of enzyme-catalized reactions. II. Urease in a packed-column differential system. Biotechnol. Bioeng.,1976, 18, N 5, p. 685 699.

84. Mason R.D., Weetall H.H. Invertase covalently coupled to porous glass: preparation and characterization. Biotechnol. Bioeng., 1972, 14, N 5, p. 637 - 645.

85. Woichik J.H., Wondolowski M.V. Govalent binding of fungal p -galactosidase to glass. Biochim. Biopfcys. Acta, 1972, 289, N 2, p. 347 - 351.

86. Dixon J.E., Stolzenbach P.E., Berenson J.A., Karlan N.O. Immobilized enzymes: the catalytic properties of lactate dehydrogenase covalently attached to glass beads. Biochim. Biophys. Res. Commun., 1973, 52, N 3, p. 905 - 912.

87. Guilbault G.G., Das J. Immobilization of Cholinesteraseand urease. Anal. Biochem., 1970, ¿3., N 2, p. 341 - 355.

88. Müller J., Zwing T. An experimental verification of the theory of diffusion limitation of immobilized enzymes. Biochim. Biophys.Acta, 1982, 705, N 1, p. 117 - 123.

89. Yochiki M., Yasumi Y.Preparation and properties of various enzymes covalently immobilized on polymethylglutamate. Chem. Bull., 1980, 28, N 7, p. 2052 - 2058.

90. Taylor P., Chen L., Gong C.S., Tsao G.T. Kinetics of immobilized sucrose phosphorylase. Biotechnol. Bioeng., 1982, 24, N 2, p. 317 - 328.

91. Duggal S.K., Buhholz K. Effect of immobilization on intrinsic kinetics and selectivity of trypsin. Europ. J. Appl. Microbiol. Biotechnol., 1982, 16, N 2 - 3, p. 81 - 87.

92. Mazid M.A., Laidler K.J. Temperature effects with immobilized yeast alcoholdehydrogenase in flow system. Biochim. Biophys. Acta, 1980, 614,' N 2, p. 237 - 241.

93. Karanth N.G., Bailey J.E. Diffusional influences on the parametric sensitivity of immobilized enzyme catalysts. Biotechnol. Bioeng., 1978, 20, N 11, p. 1817 - 1831.

94. Royer G.P., Andrews J.P. Immobilized derivatives of leycine aminopeptidase and aminopeptidase M. J. Biol. Chem., 1973, 248, К 5, p. 1807 - 1812.

95. Weetall H.H., Havewala N.B. Continuous production of dextrose from cornstarch. A study of reactor parameters necessary to commertial application. Biotechnol. Bioeng. Symp., 1972,1. N 3, p. 241 266.

96. Maeda H., Suzuki H. Preparation of immobilized enzymes by H-vinil-pyrolidone and the general properties of glucoamylase gel. Biotechnol. Bioeng., 1974, 16, N 7, p. 1517 - 1528.

97. Райт А.С., Райт B.K., Салганик Р.И. Свойства иммобилизованной на алвдегидосилохроме полинуклеотидфосфорилазы.-Биоорг. Химия, 1976, 2, й 5, с. 706 711.

98. Lee Y.Y., Fratzke A.R., Wun К., Tsao G.T. Glucose isomerase immobilized on porous glass. Biotechnol. Bioeng., 1976, 18, N 2, P. 389 - 413.

99. Калашникова A.M., Меняйлова И.И., Нахапетян Л.А., Грачева И.М., Термо- и ^-стабильность растворимой и иммобилизованной на силохроме С-80 дротеиназы Bacillus subtiiis. Прикл. Биохим. Микробиол., 1975, И, № 6, с. 842 - 847.

100. Greenfield P.P., Laurence R.L. Characterization of glucose oxidase and catalase on inorganic supports. J. Pood Sci., 1975, 40, N 5, p. 906 - 910.

101. Royer G.P., Green G.M. Immobilized pronase. Biochim. Biophys. Res. Commun., 1971, 44, Ш 2, p. 427 - 432.

102. Ю7. Atkinson В., Rott J., Rousseau I. Characteristics of unbuffered gel-immobilized urease particles. Biotechnol. Bioengg, 1977, 19, N 5, p. 1037 - Ю64.

103. Atkinson В., Rousseau I. Characteristics of unbuffered gel-immobilized urease particles. II. Overall rate of reactions. Biotechnol. Bioeng., 1977, 19, N 5, p. 1065 - 1086.

104. Engasser J.M., Horwath C. Buffer-facilitate proton transport. pH profile of immobilized enzymes. Biochim. Biophys. Acta, 1974, ¿58, N 1, p.178 - 192.

105. Konecny J., Voser W. Effect of carrier morphology and buffer diffusion on the expression of enzymatic activity. -Biochim. Biophys. Acta, 1977, 485, N 2, p. 367 378.

106. Haynes R.» Walsh K.A. Enzyme envelope on collodien particles. Biochim. Biophys. Res. Commun.,1969,36,N 2,p.235-242.

107. Крылова Ю.И., Козлов Л.В., Антонов B.K., Гаина B.C., Датунашвили Е.Н., Павленко Н.М. Иммобилизация кислых протеаз. -Биоорг. Химия, 1976, 2, гё 2, с. 273 278.

108. Johnson P., Whateley T.L. On the use of polymerizing silica gel system for the immobilization of trypsin. J. Colloid Interfase Sci., 1971, ¿7, N 3, p. 557 - 563.

109. Wangenmayer P., Linder D., Wallenfels К. 1,4- c^-glucan Phosphorylase from Klebsiella . pseudomanLae covalently coupled on porous glass. Biotechnol. Bioeng., 1977, 19., N 9, p. 1387 -1403.

110. Horigone T.,Kasai Н., Okuyama Т. The stability of Taka amylase A immobilized on various sizes of matrix. J. Biochem., 1974, 75, N 2, p. 299 - 307.

111. Wasserman В., Jacobson В., Hultin H.O. Explanation of anomalous binding kinetics with a high yield immobilized enzyme system. Biochim. Biophys. Acta, 1981, 657, N 1, p. 52 - 57.

112. Solomon В., Levin Y. Adsorption of amyloglucosidase on inorganic carriers. Biotechnol. Bioeng., 1975» 1.7» 11p. 1323 1333.

113. Cabral J.M.C., Uovais J.M., Cardoso J.P. Immobilization of amyloglucosidase on alkylamine derivatieves of metall-link-activated inorganic supports. Biotechnol. Bioeng., 1981, 2^, N 9, p. 2083 ~ 2092.v

114. Valentova 0., Turkova J., Lapka R., Zima J., Capek J. Covalent binding of pepsin. Biochim. Biophys. Acta, 1975» 403, N 1, p. 192 - 196.

115. Manecke G. Immobilizierte enzyme. Chimia, 1974, 28, N 9, s. 467 - 474.

116. Pekin В., Telefoncu A., Asian A. Covalent attachment of papain to PAB-cellulase by means of terephtalic aldehyd. Biotechnol. Bioeng., 1981, 23., N 8, p. 1907 - 1911.

117. Johnson D.B., Brougham M.J. Stability of immobilized alcoholdehydrogenase prepared from yeast mitochondria. Enzyme

118. Microbiol. Technol., 1981, Д, К 3» p. 258 259.

119. Нахапетян Л.А., Меняйлова И.И., Жданов С.П., Коромальди К.В., Антонов В.К. Иммобилизация глюкоамилазы на пористом стекле. Ферм. Спирт. Промышл., 1975, j£ I, с. 37 - 39.

120. Хохлова Т.Д., Янина М.М., Дихтерев С.И., Никитич Ю.С., Курганов Б.И., Киселев Л.В., Чернобай В.Т. Иммобилизация уреазы на макропористых кремнеземах. Прикл. Биохим. Микробиол., 1983, |9, В 3, с. 378 - 382.

121. Лауринавичюс В.А., Кулис Ю.Ю., Песлякас И.-Г.И. Иммобилизация ферментов на носителях, активированных ионами металлов. -Труды ВНИИ прикладной энзимологии, 1976, вып. 3, с. 135 145.

122. Чухрай Е.С.Адсорбционная иммобилизация как метод изучения ассоциирующих ферментных систем. Вестн. МГУ, сер. хим., 1978, 19, $ 3, с. 235 - 248.

123. Guigan J.M., Ballesteros A. Preparation of immobilized sepharose-micrococcal nuclease derivatieves: activity and stability. J. Solid-Phase Biochem, 1979, 4, N 4, p. 245 - 252.

124. Müller J., Pfleiderer C. Factors 'affecting the activity of immobilized enzymes. I. Diffusional limitation Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 1980, ¿61., N 5, p. 675 - 680.

125. Yamana T. A proposal for accurate determination of "true" fractional retention of enzyme activity on immobilization. -Biotechnol. Bioeng., 1977, 19., N 5, p. 749 756.

126. Suzuki K., Benno Y., Mitsuoka Т. Takebe S., Kobashi K., Hase J.Urease-producting species of intestinal anaerobes and their activities.-Appl.Envirom.Microbiol.,1979,¿7,N 3, p. 379 382.

127. Leftley J.W., Syrett P.J. Urease and ATP: urea amidolyase activity in unicellular algae. J. Gen. Mocrobiol., 77, N 1,p. 109 115.

128. Kostecka-Madalska 0., Nokulak A. Actywnosc ureazy wnasionach roslin z rodziny Cucurbitaceae i Papilionaceae. -Acta Pol. Pharm., 1973» ¿0» К 5, s. 533 537.

129. Shimbayashi K., Obara Y., Yonemura Т., Desuchi H. Effect of caprohydroxamic acid on ruminal urease. Jap. J. Vet. Sci., 1973, ¿5, H 4, p. 327 - 334.

130. Barbel P., Magasanic B. Urease of Klebsiella aerogenes: control of it's synthesis by glutamat synthetase. J. Bacterid., 1977, 131, N 2, p. 446 - 452.

131. Mc-Donald J.A., Vorhaben J.E., Campbell J.W.Invertebrate urease: purification and properties of the enzyme from a band snail, Otata lactea. Сотр. Biochem. Physiol., 1980, Вбб, N 2, p. 223 - 231.

132. Tirell M., Middelman S. Urease oligomerized in a linear pattern: futher hydrodynamic evidence from intrinsic viscosity.-Biopolilners, 1979, 18, N 1, p. 59 72.

133. Bleckeley R.L., Webb E.C., Zerner B. Jack-bean urease (E.C.3.5.1-5). A new purification and reliable rate assay. -Biochemistry, 1969, 8, N 5, p. 1984 1990.

134. Kuff E.L.t Hogeboom G.H., Striebich M.J. The sedimentation behavior of alcoholdehydrogenase and urease in crude solutions. J. Biol. Chem., 1955, 212, H 2, p. 439 - 448.

135. Gorin G-., Chin C.C. Urease. IY. It's reaction with N-et-hylmaleimide and with silver ion. Biochim. Biophys. Acta,1965, 99, N 2, p. 418 426.

136. Lynn K.R. Some properties and purification of urease. -Biochim. Biophys. Acta, 1967, U6, II 1, p. 206 218.

137. Kamel M.Y., Rogaa R.H. Aerobacter aerogenese PRL-R3 urease. Purification and properties. Acta Biol. Med. Germ., 1975, ¿4, N 9, p. 971 - 979.

138. Dixon N.E., Bleckeley R.L., Zerner B. Jack-bean urease (E.C.1.5.3.5.). I. A simple dry ashing procedure for the microdetermination of trace metalls in proteins. The nickel content. -Can. J. Biochem., 1980, 58, N 6, p. 469 473.

139. Dixon N.E., Bleckeley R.L., Zerner B. Jack-bean urease (E.G.3.5.1.5). HI. The involvement of active-site nickel ion in inhibition by y$~mereaptoethanol, phosphoramidate and fluoride. -Can. J. Biochem., 1980, 58, N 6, p. 481 488.

140. Mackey E.M., Pateman H.A. Nickel requirement of a urea-deficient mutant in Aspergillus nidulans. J. Gen. Microbiol., 1980, 116, N 1, p. 249 - 251.

141. Polacco J.C. Nitrogen metabolism in soybean tissue culture. Plant. Physiol., 1977, 59, N 5, p. 827 - 830.

142. Gazzola C., Bleckeley R.L., Zerner B. On the substrate specifity of jack-bean urease (urea aminohydrolase E.C.3.5.1.5)• Can. J. Biochem., 1973, ¿1» N 9, p. 1325 133o.

143. Dixon U.S., Fiddles P.N., Gazzola C., Bleckeley R.L., Zerner B. Jack-bean urease (E.C.3.5.1«5.)• V. On the mechanizm of action of urease on urea, formamid, acetamide, N-methylurea and related compounds. Can. J. Biochem., 1980, 58, N 12,p. 1335 1344.

144. Benett J., Wren E.A. The interaction of p-nitrophenyl carbamate with urease. Biochim. Biophys. Acta, 1977, 482, N 2, p. 421 - 426.

145. Mc Donald J.A., Campbell J.W. Invertebrate urease: Effectof sulfhydryl reagent and heavy metals on the Otata enzyme. -Сотр. Biochem. Physiol., 1980, B66, N 2, p. 215-222.

146. Romano N., Tolone G., Ajello F., La Licata R. Characterization of urease of Ureaplasma ureoliticum. Zbl. Bacteriol. Parasitenk. Infectionskrankh. und Hyg. Abt. Orig., 1978, A241,

147. Волгин В.Д., Волкова Л.Н., Чижов С.В. Очистка воды от мочевины с помощью иммобилизованной уреазы. В кн.: I Всесоюзн. конф. по микробиол. очистке воды (Киев, декабрь 1982). Тез. докл. Киев, 1982, с. 528 - 529.

148. Пат. США 3669878. Treatment of dialysate solution for removal of urea / Liar ant z L.B., Greenbaum M.A.- Опубл. 13.06.72 Г.

149. Collis J.S., Knox J.M. The use of immobilized urease for the determination of plasma urea by continuous flow analysis. -Med. Lab. Sci., 1978, ¿5, N 3, P* 275 282.

150. Kirch P., Danzer J., Krisam G., Schmidt H.-L. Nylon-tube bound ensymes in systems for the determination of substrates in serum and urine by electrochemical and colorimetric detectors. -Ensyme Eng., 1978, N.Y.-London, v. 4, p. 217 218.

151. Danielsson N.D., Bossu T.M., Kruempelman M. Immobilizationof enzymes on polychlorfluoroethylen particles packed in a smoll column. Anal. Lett., 1982, 15, N B16, p. 1289 - 1300.

152. Tran-Minh С., Tallin D. Enzyme-bound thermistor as an enthalpimetric sensor. Anal. Chem., 1978, 50, 1Д, p. 1874 -1878.

153. Okada Т., Karube I., Suzuki S. Hybride urea sensor using nitrofying bacteria. Europ. J. Appl. Microbiol. Biotechnol., 1982, Г4, И 3, p. 149 - 154.

154. Барт Т.Н., Матерова E.A., Орлиевская O.B., Ягодина О.В. Сравнительное исследование различного типа ферментных электродовдля определения мочевины. Журн. Аналит. Хим., 1980, 35, № 8, с. 1555 - 1560.

155. Tran-Minh С., Beaux J. Etude du compartement des electrodes enizymatiques sensibles a l'uree en milieu fluoruse. -C.R. Acad. Sci., 1978, C287, И 5, p. 191 195.

156. Nilsson H., Akerlung A.-C., Mosbach K. Determination of glucose, urea and penicillin using ещуте pH-electrodes. Bio-chim. Biophys. Acta, 1973, 320, N 2, p. 529 - 534.

157. Sundaram P.V., Jayaraman S.S. Immobilized ensyme pipette, impette. Routine estimation of serum and urine urea. -Clin. Chim. Acta, 1979, 94» N 3, p. 309 316.

158. Mattiasson В., Danielsson C.H., Mosbach K. Enzyme thermistor analysis of heavy metal ions with use of immobilizedurease. FEBS Let., 1978, 85, N 2, p. 203 - 206.

159. Qgren L., Johanson G-. Determination of traces of mercury (II) by inhibition of an enzyme reactor electrode loaded with immobilized urease. Anal. Chim. Acta, 1978, 96, N 1, p. 1-11.

160. Заявка Великобритании I48403I. immobilized biologically active proteins and preparation thereof / Yasumi Y., Yoshiki M.-Опубл. 3.04.76 г.

161. Maneke G., Vogt H.G. Some new reactive polymers for theimmobilization of enzymes. Biochimie, 1980, 62, N 8 - 9» p. 603 - 613.

162. Sundaran P.V. A new method of coupling proteins to insoluble polymers. Biochim. Biophys. Res. Commun., 1974» 61.» N 2, p. 717 - 722.

163. Фесенко Р.И., Артемова Ю.Я., Вирник А.Д., Роговин 3,А., Яковлев В.А. Синтез и исследование свойств нерастворимых в воде продуктов взаимодействия уреазы и производных целлюлозы. -Вопр. мед. химии, 1975, 21, № I, с. 82 84.

164. Фесенко Р.И., Артемова Ю.В., Вирник А.Д., Яковлев В.А., Роговин З.А. Синтез производных уреазы, химически присоединенной к полимерам, и исследование их свойств. Журн. Всес. Хим. Общ. им. Д.И.Менделеева, 1974, J9, № 5, с. 594 - 595.

165. Shemer L., Granot R., Freeman A., Sokolowsky M., Goldstein L. Multilayer immobilized enzyme filter reactors: urease bound to nylon fabric filters. Biotechnol. Bioeng., 1979, 21, И 9, p. 1607 - 1627.

166. Grunwald P., Giinfier W. Preparation and properties of urease covalently bound to polyaminostyrol. Biophys. Struct, and Mech., 1980, 6, Suppl., p. 39.

167. Johynsson A.C., Mosbach K. Acrylic copolymers as matrices for the immobilization of enzymes. I. Covalent binding or entrapping of various enzymes to bead-formed acrylic copolimers. -Biochim. Biophys. Acta, 1974, ¿70, И 2, p. 339 347.

168. Sada E., Batch S., Terashima M. Performance of an enzyme reactor utilising a magnetic fields. Biotechnol. Bioeng., 1980, 22, N 1, p. 243 ~ 246.

169. Grunwald P., Brandt C. Kinetic properties of urease immobilized to Merrifield resin. Biophys. Struct. Mech., 1980, 6, Suppl., 38.

170. Bollmeyer J.P., Middlemen S. Hydrolysis of urea by gelatin immobilized urease: separation of kinetic and diffusion phenomena in a model immobilized-enzyme reactor system. - Bio-technol. Bioeng., 1979, 2±, N 12, p. 2303 - 2321.

171. Warwick M.A. A micromethod for determination of broad urea nitrogen in serum. Microchim. J., 1972, 17, И 2, p. 160 -166.

172. Ramsing A., Hansen E.H., Ruzicka J. A new approach to enzymatic assay based on flow-injection spectrophotometry with acid-base indicators. Anal. Chim. Acta, 1980, 114, N 1,p. 165 181.

173. Жуховицкий A.A. Основы жидкостной хроматографии. M.: Мир, 1973. - 204 с.

174. Tran-Minh С., Beaux J. Enzyme electrode for inhibitors determination: urease-fluoride system. Anal. Chem., 1979, 51., N 1, p. 91 - 95.

175. Kay G-., Lilly M.D. The chemical attachment of chimotrypsin to water-insoluble polymers using 2-amino-4,6-dichloro-s-tria-zine. Biochim. Biophys. Acta, 1970, 198, N 2, p. 276 - 285.

176. Messing R.A. Molecular inclusions. Adsorption of macro-molecules on porous glass membranes. J. Amer. Chem. Soc., 1969, 91, N 9, p. 2370 - 2371.

177. Тарасевич Ю.И., Смирнова В.А., Монахова Л.И. Адсорбция альбумина на кремнеземе.-Коллоида. Журн., 1978, 40, № 6,c.I2I4-1216.

178. Жирков Ю.А., Чухрай Е.С., Полторак О.М., Бармакова Т.В., Киселев А.В., Ковалева Н.В. Адсорбционная иммобилизация щелочной фосфатазы на карбохроме. Вестн. МГУ, сер. хим., 1978, Г9, № 2, с. 127 - 132.

179. Galunsky B.P., Voivodov K.I., Dyankov S.S. Immobilization of alkaline mezentericopeptidase on-NCS modified silochro-me. Comptes rendus de l'Academie bulgare des Sciences, 1978,1. H 12, p. 1601 1604.

180. Fleming C., Gabert A., Camoll M., Roth P. Synthese und Eigenschaften Trägerfixirter enzyme. VIII. Kinetische Untersuchungen über die Geschwindigheit der Bindung von Enzymen an makroporöse Träger. Acta Biol. Med. Germ., 1977, ВЗб, H7/8, s. 1007 - 1018.

181. Чухрай E.C. Кинетика адсорбции ферментов на твердых носителях и проблемы изучения адсорбционных равновесий глобулярных белков. Вестн. МГУ, сер. хим., 1981, 22, .№ 3, с. 261 -265.

182. Грег. С., Синг К. Адсорбция, удельная поверхность, пористость. М.: Мир, 1976. - 278 с.

183. Полторак U.M., Пряхин А.Н., Чухрай Е.С. Кинетическое изучение процессов адсорбции и иммобилизации ферментов. -Вестн. МГУ, сер. хим., 1982, 23, Ш 6, с. 527-543.

184. Тимофеев Д.П. Кинетика адсорбции. М.: АН СССР,1962. 250 с.

185. Brockman H.L., Low J.H., Kezdy P.J. Catalysis by adsorbed enzymes. The hydrolysis of tripropionin by pancreatic lipase adsorbed by siliconized glass beads. J. Biol. Chem., 1973, 248, N 14, p. 4965 - 4970.

186. Carleysmith S.W., Eames M.B.L., Lilly M.D. Staining method for determination of the penetration of immobilized enzymes into a porous supports. Biotechnol. Bioeng., 1980, H 7, p. 957 - 967.

187. Do D.D., Clark D.S., Bailey J.E. Modelling enzyme immobilization in porous supports. Biotechnol. Bioeng., 1982, 24, N 7, p. 1527 - 1546.

188. Юодвалысите Д.Ю., Глемжа A.A. Гальвидис И.Ю. Биосинтез и выделение уреазы Staphylococcus saprophytics L-l.-Прикл.

189. Биохим. Микробиол., 1983, 19, № I, с. 83 91.

190. Гудкова Л.В., Латышко Н.В., Дегтярь Р.Г., Гулый М.Ф., Янишпольский В.В., Тертых В.А. Иммобилизация каталаыРеШси-lum vitaie Pidopi. et Biiai на неорганических носителях. Укр. Биохим. Журн., 1980, 52, В 5, с. 614 - 623.

191. Торчинский Ю.М., Сера в белках. М.: Наука, 1977. -302. с.

192. Ford G.R., Lambert А.Н., Cohen W., Chambers R.P. Recirculation reactor system for kinetic studies of immobilized enzymes. Biotechnol. Bioeng. Symp., 1972, N 3» Р» 267 -284.

193. Пат. США 3796634. Insolubilized biologycally active enzymes Haynes R., Walsh K.A. Опубл. 12.03.74 Г.

194. Валуева T.A., Валуев Л.Й., Ванчугова Л.В., Маклакова И.А., Мосолов В.В., Плата Н.А. 0 регулировании оптимума рН-действия иммобилизованных белков. Прикл. Биохим. Микробиол., 1982,18, № 3, с. 346 351.

195. Monsan P. Influence of the conditions of trypsin immobilization onto spherosil on coupling effitiency. Europ. J. Appl. Microbiol, Biotechnol., 1978, 5, N 1, p. 1 -11.

196. Royer Gr.P., Liberatore P.A., Green G.M. Immobilization of enzymes on aldehyd matrices by reductive alkylation. Biochim. Biophys. Res. Commun., 1975, 64, N 2, p. 478 484.

197. Киселева E.M., Миргородская O.A., Москвичев Б.В., Момот

198. H.H., Самсонов Г.В. Изучение сорбции сС-амилазы карбоксильным катионитом типа КМТ. Прикл, Биохим. Микробиол., 1977, 13, № 5, с. 721 - 724.

199. Селезнева А.А., Варнавская О.В., Бабенко Г.А., Самсонов Г .В. Изучение взаимодействия «¿-амилазы с катионитами различной структуры. Прикл. Биохим. Микробиол., 1976, 12, & 5, с.698-703.

200. Богачева Е.К., Киселев А.В., Никитин Ю.С., Эльтеков Ю.А. Влияние размеров пор сиЛикагеля на адсорбцию полистирола. -Журн. Физ. Хим., 1965, 39, & 7, с. 1777 1780.

201. Saini R., Vieth W.R., Wang S.S. Preparation and characterization of several forme of immobilized invertase. Trans. N.Y. Acad. Sci., 1972, ¿4, N 8, p. 664 - 674.

202. Шустрова Н.И-., Стальная И.Д., Самошина H.M., Нахапетян Л.А. Иммобилизация дрожжевой инвертазы на неорганическом носите^-' ле. Прикл. Биохим. Микробиол., 1980, J6, Ш 5, с. 780 - 783.

203. Хорунжина С.И., Шамолина И.И., Хохлова В.А., Вольф Л.А. Иммобилизация папаина на волокнистом полимере из поливинилового спирта. Прикл. Биохим. Микробиол., 1978, 14, № I, с. II - 14.

204. Борисова В.Н., Стальная И.Д., Меняйлова И.И., МотинаЛ.И., Нахапетян Л.А. Иммобилизация ферментов на носителях с азидными группировками. Прикл. Биохим. Микробиол., 1978, 14, В 5,с. 709 714.

205. Pifferi P.Cr., Vaccari A., Ricci G. Stability of glocose oxidase and catalase adsorbed on variously activated 13X zeolite. Biotechnol. Bioeng., 1982, 24, N 10, p. 2155 - 2165.

206. Hayashida S., Flor P.G. Row starch-digestive chitin-immobilized amylase from a protease-glucosidase-less mutant of Aspergillus awamori var. kawachi. Agr. Biol. Chem., 1982, 46, и б, p. 1639 - 1645.

207. Medda S., Saha B.C., Ueda S. Raw starch adsorption and elution bihaviour of glucoamylase I of black Aspergillus.

208. J. Perm. Technol., 1982, 60, H 8, p. 2б1 264.

209. Kennedy J.P., Watts P.M. The insolibilization of jS -D-glucosidase by attachment to glass. Carbohydr. Res., 1974, ¿2,1. H 1, p. 155-160.

210. Папдель К.Э., Кестнер А.И., Летунова E.B., Тихомирова A.C. Иммобилизация ß -галактозидазы на силохроме. Прикл. биохим. микробиол., 1976, 12, № 3, с. 411 - 415.

211. Лукошевичюне Ю.Ю., Кипдер Х.Я., Креэн М.И., Кестнер А.И. Изучение иммобилизации пепсина на модифицированном пористом стекле. В кн.: Методы в биохимии, Вильнюс, 1975, с. 87-91.

212. Гауровитц Ф. Химия и биология белков. М.: ИЛ, 1953. -435 с.

213. Безбородов A.M., Родионова H.A., Тиунова H.A. ß -гликоназымикроорганизмов. Прикл. Биохим. Микробиол., 1982, 18, № 6, с. 806 - 815.

214. Wallenfels К., Weil R.ß -galactosidase. in »The Enzymes" (ed. Ъу Boyer P.D.). Acad. Press. N.Y.-London, 1972, v. VII, p. 618 - 663.

215. Калинин Ф.Л., Лобов В.П., Жидков B.A. Справочник биохимика. Киев.: Наукова думка, 1971. - 1013 с.

216. Ленинджер А., Биохимия. М.: Мир, 1976. - 957 с.

217. Данилевская Т.И., Максимов В.И., Молодова Г.А., Сазонова H.H. Декстраназа Fusarium soiani. Прикл. Биохим, Микробиол., 1978, 14, iß 5, С. 694 - 698.

218. Березин И.В., Клесов A.A. Практический курс химической и ферментативной кинетики. М.: МГУ, 1976. - 320 с.

219. Fishbein W.N., Nagarajan К. Urease catalysis and structure. Till. Ionic strenth dependence of urease polymerization and polymer pi. Arch. Biochem. Biophys., 1972, 151., N 2,p. 370 377.

220. Keil В. Trypsin. in "The Enzymes" (ed. by Boyer P.D.). N.Y.-London, Acad. Press, 1971, v. Ill, p. 249 - 275.

221. Robin J.M., Raymond J., Uliana R., Azanza J.L., Creach P.V. Gorrelation entre l'inhibition de l'activite ureasique et les modifications structurales de l'urease apres irradiation par les Ry du б0Со. C.R. Soc". Biol., 1973/74, 167, N11,p. 1585 1590

222. Богачева E.K., Киселев A.B., Никитин Ю.С., Эльтеков Ю.А. Адсорбция полистирола макропористыми силикагелями. Высокомол. Соед., 1968, I0A, В 3, с. 574 - 579.

223. Когановский A.M. Адсорбция и ионный обмен в процессах водоподготовки и очистки сточных вод. Киев: Наукова думка, 1983. - 239 с.

224. Волощук A.M., Дубинин М.М., Золотарев П.П. Неоднородность пористой структуры адсорбентов и кинетика физической адсорбции. В кн.: Адсорбция и пористость. - М.: Наука, 1976, с. 285 - 290.

225. Когановський О.М^,Айзен A.M., Марутовський P.M., Рода 1.Г. Визначення коеф^ента внутр1шньо1 дифузи в сорбентах сферич-Hoi форми при сталому об'ем1 системи. Доп. АН УРСР, 1974,1. Сер. Б, № 6, с. 546 548.

226. Янке Е., Эвде Ф., Леш Ф. Специальные функции. М.: Наука, 1968. - 312с.

227. Ройтер В.А., Радченко В.А. Кинетика процессов химического взаимодействия газов с твердыми телами. Журн. физ. хим., 1939, 13, № 7, с. 896 - 900.

228. Тимофеев Д.П., Воскресенский А.А. Исследование механизма внутренней диффузии методом рентгеновской диаскопии. Докл. АН СССР, 1958, 122, Я 3, с. 434 - 436.

229. Kierstone М., Darey G., Reilly J. Studies on the characteristics of the alginate gels in relation to their use in separation and immobilization applications. Biotechnol. Bioeng., 1982, 24, N 7, p. 1507 - 1517.

230. Engasser J.M. A fast evaluction of diffusion effects on bound enzyme activity. Biochim.Bin^ys. Acta, . 1978, 526, N 2,p. 301 310.

231. Nakao S.I., Kimura S. Model membrane transport phenomena and their application for ultrafiltration date. J. Chem. Eng. Jap., 1982, 15, Ы 3, p. 200 - 205.

232. Черкасов А.Н., Жемков В.П., Мчедлишвили Г.В., Самохина Г Д., Булыгин А.Н., Третьякова С.П., Козлова Т.Н., Потокин И.Л. О влиянии соотношения размеров частицы и поры на селективность мембраны. Коллоид. Журн., 1978, 40, № 6, с. 1155 - 1160.

233. Мосолов В.В. Протеолитические ферменты. М.: Наука, 1971. - 430 с.

234. Айлер Р. Химия кремнезема. М.: Мир, 1982. Ч. 2. -I127 с.

235. Любинский Г.В., Янишпольский В.В., Тертых В.А., Юодваль-ките Д.Ю., Глемжа A.A. Свойства уреазы, иммобилизованной на силохроме с помощью дисульфидных связей. Укр. Биохим. Журн. 1984, 56, № I, с. 24 - 27.

236. Любинский Г.В., Янишпольский В.В., Тертых В.А. Кинетика иммобилизации трипсина на силохроме при постоянной концентрации фермента в растворе. Теор. Экспер. Хим., 1984 , 20, J£ I,с. 112 116.

237. Любинский Г.В. Взаимосвязь между оптимальными pH иммобилизации белков и их изоэлектрическими точками. Укр. Биохим. Журн., 1984, 95, Я 4, с. 390 - 394.

238. Янишпольський В.В. Дюбинський Г.В. К1нетика зв'язування ферментIB на nosepxHi органосилохром!в. В кн.: Тези доп. IУ Ук-рашського 6ioxiMi4Horo зЧзду. - Ки1в: Наукова думка, 1982,ч. 2, с. 257 258.

239. Любинский Г.В., Янишпольский В.В., Тертых В.А. Кинетика иммобилизации трипсина на активированном силохроме. Укр. Биохим. Журн., 1983, 55, £ 5, с. 499 502.

240. Любинский Г.В. .Кинетика хемосорбции белков на поверхности пористых неорганических носителей. В кн.: Тез. докл. 1У Всесоюзного симпозиума "Инженерная энзимология". - М., 1983, ч. 3, с. 29.

241. Любинский Г.В., Янишпольский В.В., Тертых В.А., Юодваль-ките Д.Ю., Глемжа A.A. Свойства уреазы, иммобилизованной на поверхности функциональных органокремнеземов. Укр. Биохим. Журн,, 1982, 54, J& 2, с. 145 - 148.