Иммунобиологические свойства нового специфического иммуномодулятора на модели экспериментального туберкулеза тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Горелова, Любовь Алексеевна

• Горелова, Любовь Алексеевна
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Горелова, Любовь Алексеевна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ИММУНОМОДУЛЯТОРЫ. ИХ КЛАССИФИКАЦИЯ И СВОЙСТВА ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЛЕГКИХ

1.1. Классификация иммуномодуляторов .И

1.2. Применение иммуномодуляторов при туберкулезе

1.2.1. Левамизол и диуцифон

1.2.2. Иммуномодуляторы вилочковой железы

1.2.3. Иммуномодулирунщее действие цитокинов

1.2.4. Бактериальные иммуномодуляторы

1.2.5. Синтетические иммуномодуляторы

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты исследования

2.2. Методы исследования

ГЛАВА 3. КОНСТРУИРОВАНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОГО ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНОГО ИММУНОМОДУЛИРУЙЩЕГО ПРЕПАРАТА ЦП-БЦ

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ТОКСИЧЕСКИХ СВОЙСТВ И РЕАКТО-ГЕННОГО ДЕЙСТВИЯ ПРЕПАРАТА ЦП-БЦШ

4.1. Токсические свойства препарата ЦП-БЦШ и его составляющих

4.1.1. Изучение острой токсичности

4.1.2. Изучение хронической токсичности

4.1.3. Изучение характера патоморфологических изменений в органах

4.2. Реактогенность различных доз препарата

ЦП-БЦ

4.2.1. Анафилактические свойства

4.2.2. Способность препарата ЦП-БЦШ индуцировать туберкулиновые пробы у зараженных животных

ГЛАВА 5. ИММШШМОДиЛИРиНЩИЕ СВОЙСТВА ПРЕПАРАТА ЦП-БЦ

5.1. Изучение иммуногенного действия препарата

ЦП-БЦ1 на здоровых мышах

5.1.1. Модуляция клеточного и гуморального иммунитета

5.1.2. Изучение фагоцитарной активности макрофагов в перитонеальном экссудате

5.1.3. Патоморфологические сдвиги в структуре внутренних органов здоровых мышей, получавших препарат ЦП-БЦШ

5.2. Иммуномодулирунщее действие препарата ЦП-БЦ1 при экспериментальном туберкулезе у мышей

5.2.1. Развитие гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ)

- 4

5.2.2. Динамика специфических антитеАнтигенов в сыворотках крови мышей, зараженных Н37ЭД в процессе лечения

5.2.3. Патоморфологическая картина органов зараженных Н37Ш/ мышей исследуемых групп в процессе лечения

5.2.4. Изучение высеваемости микобактерий из легких зараженных Н371Ш мышей в процессе лечения

5.2.5. Продолжительность жизни зараженных мышей в группах

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммунобиологические свойства нового специфического иммуномодулятора на модели экспериментального туберкулеза»

В последние годы в России значительно возросли заболеваемость и смертность от туберкулеза (22). Зто связано с ухудшением экологической и эпидемиологической обстановки, социально-экономических условий, со снижением качества противотуберкулезных мероприятий, в том числе связанных с лечением больных (22, 33). В частности, участились случаи неэффективности химиотерапии туберкулеза, что связано в первуш очередь с полирезистентностью мико-бактерий к назначаемым химиопрепаратам и с возникновением в ряде случаев вторичных иммунодефицитов у больных (50, 84, 88). Для решения этой проблемы необходим поиск новых подходов к повышении эффективности лечения,связанных, в частности, с получением новых специфических препаратов, обладавших способностью модулировать противотуберкулезный иммунитет.

Известно, что в возникновении и течении туберкулеза, большое значение имеет состояние системы иммунитета. Выявлена связь динамики основных иммунологических показателей с клинико-рентгеноло-гической картиной туберкулезного процесса (11, 33, 84, 90). Поэтому идея иммуностимуляции, как способа терапии вторичного иммунодефицита и нормализации измененных иммунологических показателей у больных туберкулезом актуальна и в настоящее время.

При туберкулезе легких многие годы используют специфическую патогенетическую терапию с помощью туберкулина или вакцины БЦ1 (93). Однако индивидуальная туберкулино- и БЦ1-терапия легче переносятся больными на раннем этапе заболевания и показаны не всем больным. При наличии тяжелых форм заболевания применение данного вида лечения противопоказано (44, 93).

В последние два десятилетия при лечении туберкулеза применяются разнообразные природные и синтетические иммуностимуляторы, осуществляющие неспецифическую коррекцию ряда показателей иммунного ответа. В основном это синтетические иммуностимуляторы: диу-цифон, левамизол, нуклеинат натрия и другие (8, 35, 86); вещества выделенные из тимуса: тимолин, Т-активин, тимактин и другие (8, 12, 50, 96); вещества выделенные из бактерий: рибомунил (9, 2?, 84).

Введение выше перечисленных иммуномодуляторов вызывало увеличение количества Т-лимфоцитов, повышение их функциональной активности, нормализацию соотношения Т-хелперов и супрессоров.

Новым направлением является применение для лечения туберкулеза, пока в эксперименте, принципиально новых синтетических стимуляторов иммунного ответа, таких как полиакриловая кислота (ПАК), поливинилпирролидон СЫА-5) и др. (66, 68). К ним относится иммуномодулятор - полиоксидоний (ПО), который усиливая иммунную резистентность организма используется при лечении иммунодефицит-ных состояний, как локальных так и генерализованных у больных целым рядом заболеваний (46, 60, 61).

Полиоксидоний значительно усиливает функциональный потенциал иммунной системы, активирует три важнейшие субпопуляции лимфоцитов, при этом, не нарушает естественных механизмов торможения иммунных реакций (61). Как показали исследования последних лет, синтетические иммуномодуляторы нового типа, (в том числе и полиоксидоний) при соединении их с белками, являющимися слабыми имму-ногенами в комплексы или конъюгаты -усиливали иммуногенность последних в организме животных (66, 68).

В настоящее время разработана принципиальная возможность соединения синтетических иммуномодуляторов нового типа с антигенами туберкулезных микобактерий с целью усиления их иммуногенных свойств. Зто позволило провести сравнительное изучение иммуногенных свойст антигенных препаратов, выделенных из микобактерий туберкулеза вакцинного штамма БЦШ, на модели экспериментального туберкулеза (74) и явилось основой для конструирования соединений полиоксидоний-туберкулезные антигены для специфической иммуномо-дуляции иммунного ответа при туберкулезе.

Идея специфической иммуностимуляции возникла еще в 60-е годы, когда J.Youmans с соавторами С118, 134) показали роль рибосо-мального материала, а Ribi с соавторами (118) значение клеточных стенок в осуществлении защиты против туберкулеза.

Учитывая все эти данные, очевидна актуальность разработки специфических противотуберкулезных стимуляторов и их иммунобиологического изучения, что стало возможным на новой основе, благодаря наличию искусственных синтетических полимеров, моделирующих иммунный ответ.

В последние три года в ЦНИИ туберкулеза РАМН и ГНЦ институте Иммунологии МРФ начаты работы в данном направлении. На основе по-лиоксидония сконструированы и на здоровых и зараженных туберкулезом мышах исследованы токсико-аллергические, иммунобиологические и иммуномодулирунщие свойства иммунных конъюгатов, содержащих туберкулезные антигены, полученные из клеточных стенок.

Настоящая работа посвящена разработке препарата представляющего собой комплекс антигенов цитоплазмы микобактерий туберкулеза BUS с полиоксидонием, изучению его токсико-аллергических свойств, подбору оптимальных доз и иммуномодулирующему действию.

Цель исследования

Разработка специфического противотуберкулезного иммуномоду-лятора, состоящего из антигенного комплекса цитоплазмы микобактерий БЦШ и неспецифического иммуномодулятора - полиоксидония (П), (препарат ЦП—БЦШ)»изучение его иммунобиологических свойств.

Задачи исследования

1. Выделить из микобактерий туберкулеза вакцинного штамма БЦ1 антигенный комплекс цитоплазмы (АКЦ).

2. Сконструировать специфический противотуберкулезный имму-номодулятор ЦП-БЦ1 из антигенного комплекса цитоплазмы и полиок-сидония.

3. Изучить токсичность, иммунологическую реактогенность и специфическую активность препарата ЦП-БЦШ на здоровых животных.

4. Отработать оптимальную дозу препарата ЦП-БЦШ не вызывающую токсико-аллергических реакций у животных.

5. Изучить иммуномодулирующее и лечебное действие препарата ЦП-БЦШ на модели экспериментального туберкулеза.

Научная новизна

1. Разработан и синтезирован специфический иммуномодулятор -ЦП-БЦ1, содержащий комплекс туберкулезных антигенов, выделенных из цитоплазмы микобактерий туберкулеза штамма БЦ1 и синтетического носителя, иммуномодулятора - полиоксидония.

2. Изучены токсические и реактогенные свойства препарата ЦП-БЦМ с помощью современных морфологических и иммунологических методов.

3. Впервые показана возможность применения данного специфического иммуномодулятора (самостоятельно и в сочетании с противотуберкулезной химиотерапией) при экспериментальном туберкулезе у мышей. Изучены иммуномодулирующие свойства препарата.

4. Получен патент на изобретение "Иммуномодулирующее лекарственное средство" N 2112543 от 10 июня 1998 г.

Практическая значимость

1. Сконструирован специфический противотуберкулезный иммуно-модулятор - ЦП-БЦ1 способный восстановить нарушенные параметры противотуберкулезного иммунитета, не вызывая при этом токсико-ал-лергических реакций в организме экспериментальных животных.

2. На основании проведенных экспериментов отработаны дозы препарата ЦП-БЦ1 и схемы его введения больным туберкулезом.

Внедрение результатов в практику здравоохранения

Разработанный специфический противотуберкулезный иммуномоду-лятор ЦП-БЦШ внедрен в ЦНИИТ РАМН (акт внедрения ЦНЙЙТ РАМН).

С целью получения разрешения на клинические испытания имму-номодулятора на ограниченном контингенте больных туберкулезом, осложненным вторичным иммунодефицитом разработаны:

1) Инструкция по приготовлению и контролю препарата ЦП-БЦ1.

2) Результаты лабораторно-экспериментального (доклинического) изучения препарата ЦП-БЦШ - специфического противотуберкулезного иммуномодулятора.

3) Программа клинических испытаний препарата ЦП-БЦ1 при туберкулезе.

4) Приготовлены 3 серии препарата ЦП-БЦШ.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 6 работ.

Результаты исследований доложены на конференции "Молекулярные основы патогенеза и диагностики туберкулеза и другой легочной патологии" (Москва, 1995), II Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1995), Всемирном Глобальном конгрессе по легочным заболеваниям (Париж, 1997), Межотделенческой

- 10 конференции ЦНИИТ РАМН (Москва, 1998).

Диссертация апробирована на научной конференции отдела иммунологии ЦНИИ туберкулеза РАМН 14 июля 1998 г.

Положения, выносимые на защиту

1. Сконструирован специфический противотуберкулезный иммуно-модулятор - ЦП-БЦ1, состоящий из антигенного комплекса цитоплазмы (АКЦ), содержащего 0,1 мкг белка и 1 мг полиоксйдония (П).

2. Обосновано, что препарат ЦП-БЦ1 с содержанием белка 0,1 мкг белка АКЦ является безвредным и не вызывает токсико-ал-лергических реакций.

3. Показано, что введение специфического иммуномодулятора ЦП-БЩВ в отработанной дозе и схеме (2x2) повышает фагоцитарную активность макрофагов, индуцирует развитие в организме здоровых мышей специфических реакций ГЗТ и антителообразования.

4. Использование препарата ЦП-БЦШ по отработанной дозе и схеме как самостоятельно, так и совместно с противотуберкулезной химиотерапией оказывает иммуномодулирунщее действие и обеспечивает высокий терапевтический эффект.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 112 страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов, использованных в работе, 3 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего 100 отечественных и 32 иностранных работ.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Горелова, Любовь Алексеевна

ВЫВОДЫ

1. Разработан новый противотуберкулезный иммуномодулирующий препарат - цитоплазма-полиоксидоний-БЦ1 (ЦП-БЦЮ, состоящий из комплекса антигенов цитоплазмы микобактерий вакцинного штамма БЩИ, содержащего 0,1 мкг белка и 1 мг неспецифического иммуномо-дулятора - полиоксидония, представляющий собой порошок белого цвета, хорошо растворимый в воде, рН=7,0-?,2.

2. Найдена биологически безопасная доза противотуберкулезного иммуномодулятора с содержанием белка антигенного комплекса цитоплазмы - 0,1 мкг, которая в отличии от доз с более высоким содержанием белка,не вызывает развитие токсических реакций в организме мышей.

3. Иммуномодулирующий препарат цитоплазма-полиоксидоний-БШБ в дозе 0,1 мкг белка не вызывает местных и общих реакций гиперчувствительности немедленного или замедленного типа при однократном введении его вакцинированным микобактериями БЦЖ или больным туберкулезом экспериментальным животным.

4. Многократное введение иммуномодулятора здоровым мышам оказывает иммуномодулирующее действие, выражающееся в развитии гиперчувствительности замедленного типа, специфического антитело-образования, увеличении фагоцитарной активности макрофагов, а также вызывает пролиферацию и дифференцировку иммунокомпетентных клеток в органах иммуногенеза.

5. На модели экспериментального туберкулеза выявлен высокий модулирующий эффект противотуберкулезного иммуномодулятора в дозе 0,1 мкг белка, направленный на восстановление нарушенных специфических показателей клеточного иммунитета, выражающийся в статистически достоверном увеличении специфической пролиферативной ак

- 96 тивности лимфоцитов в реакции бласттрансформации и туберкулиновых проб. Увеличение дозы белка (0,5 мкг) не привело к повышению им-муномодулирунщего действия препарата ЦП-БЦИ.

6. Наибольшее иммуномодулирунщее действие препарата в дозе 0,1 мкг белка антигенного комплекса цитоплазмы выявлено при введении его больным туберкулезом мышам по схеме 2 раза в недели в течение 2-х недель на фоне противотуберкулезной терапии по сравнению с другими группами (без химиотерапии и без препарата ЦП-БЦЖ >, а также по сравнению с группами мышей, получавших отдельно антигенный комплекс цитоплазмы или полиоксидоний.

7. Иммуномодулирунщий эффект препарата в дозе 0,1 мкг белка антигенного комплекса цитоплазмы оказывает положительное действие на туберкулезное воспаление, выражающееся в активном рассасывании туберкулезных очагов, уменьшении высеваемости вирулентных мико-бактерий из органов, статистически достоверном увеличении средней продолжительности жизни мышей и увеличивает эффективность противотуберкулезной химиотерапии.

- 97 -СОКРАЩЕНИЯ

АКЦ - антигенный комплекс цитоплазмы

АОК - антителообразующие клетки

БСА - бычий сывороточный альбумин

ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа

ГЛА - глютаральдегид

Д - дальтон

ДДС - додецилсульфат

ЕК - естественные киллеры

ИИК - искусственный иммуногенный комплекс

ИЛ - интерлейкины

ИФН - интерферон

- иммуноглобулины

КОЕ - колоний образующие единицы

1!. - молекулярная масса

МАТ - моноклональные антитела

НЦМ - нитроцеллюлозная мембрана

ПАГ - полиакриловый гель

ПАК - полиакриловая кислота

ПВП - поливинилпирролизин

ПФК - процент фагоцитирующих клеток

ПЭ - полиэлектролит

РАГА - реакция аггрегат-гемагглютинации

РБТ - реакция бласттранформации

РПГА - реакция пассивной гемагглютинации

ФГА - фитогемагглютинин

ФЧ - фагоцитарное число

ХБ - хронический бронхит

ЦП-БЦ1 - цитоплазма-полиоксидоний-БЦ!

ЦИТ - цитоплазма

- 98

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время участились случаи неэффективности лечения туберкулеза, что связано с одной стороны, с полирезистентностью больных к химиопрепаратам, с другой с тем, что при туберкулезе часто развивается состояния вторичного иммунитета. Кроме того, в последние годы заболеваемость этой нозологией постоянно увеличивается за счет больных туберкулезом на фоне СПИДА. Поэтому проблема иммунокоррекции при туберкулезе легких является высоко актуальной. Нарядуепротивотуберкулезной химиотерапией идет поиск новых способов и средств повышения эффективности лечения туберкулеза. Исследователями разработана идея иммуностимуляции как способа терапии нарушений иммунной реактивности. Данному вопросу посвящено большое количество работ, проведенных как в эксперименте, так и в клинике (8,10,27,32,84).

В клинике туберкулеза легких в качестве иммуностимулирующих средств в комплексе с химиотерапией широко применяются разнообразные природные и синтетические иммуностимуляторы (продигиозан, рибомунил, левализол, диуцифон, нуклеинат натрия и др.). Однако все они осуществляют в основном неспецифическую коррекцию иммунного ответа. Поэтому важной проблемой повышения эффективности лечения является направленная коррекция иммунного ответа за счет применения специфических иммуномодуляторов.

В связи с вышеизложенным, целью нашего исследования явилась разработка и изучение иммунобиологических свойств: токсичности, реактогенности и иммуномодулирующего действия, иммуномодулятора нового типа - ЦП-БЦ1, представляющего собой соединение антигенного комплекса цитоплазмы микобактерий туберкулеза вакцинного штамма БЦ1 и неспецифического иммуногенного носителя - полиоксидония.

Данный препарат был разработан ЦНИИТ PftMH совместно с ГНЦИЙ РАМН.

Для решения этой проблемы на 1-м этапе исследования было проведено изучение токсичности, иммунологической реактивности и специфической активности препарата ЦП-БЦ1, в экспериментах на здоровых мышах с использованием методов, рекомендованных в "Основных положениях по доклиническому испытании новых медицинских иммунобиологических препаратов" (Москва, 1989г.).

На втором этапе работы было изучено иммуномодулирующее действие препарата ЦП-БЦ! как самостоятельно, так и в сочетании с химиотерапией изучено на моделях экспериментального туберкулеза у мышей.

В качестве критериев иммунокоррегирующего действия препарата Щ1-БЦ1 были использованы иммунологические методы in vivo и in vitro, оценивающие показатели клеточного и гуморального иммунитета, патоморфологические и микробиологические методы, а также данные о выживаемости животных.

Для конструирования иммуномодулирущего препарата был использован антигенный комплекс цитоплазмы и рибосом микобактерий БЦ1. Он обладал большим набором специфических антигенов: 8 - серологически активных антигенов, полученных в реакции преципитации (РП) в геле и 52 специфически активных антигенов выявленных в им-муноблотинге при использовании кроличьей гипериммунной антисыворотки к ЙКЦ микобактерий БЦ1. Данные антигенные компоненты оказались идентичными с таковыми M.bovinus, M.huianus, хотя и отличаются в количественном отношении (74). При самостоятельном введении небольших количеств эти антигены не обладали высокой иммуно-генностьш, т.к. быстро элиминировались из организма. Введение больших концентраций микобактериальных антигенов оказывали в организме животных токсическое действие. Следовательно, был необходим адьювант-носитель, который мог бы обеспечить в организме длительное сохранение и направленное специфическое действие небольших и безопасных доз антигена из туберкулезных микобактерий и, в частности^антигенный комплекс цитоплазмы.

Таким адьювантным носителем был выбран синтетический поли-мер-полиоксидоний, разработанный в ГНЦ Иммунологии, который самостоятельно обладал иммунокорригирующим действием (60, 61). Он использовался в модельных экспериментах в комплексной терапии гнойно-раневых инфекций, а также в эксперименте при лечении обожженных животных (42).

Использование в клинике полиоксидония разрежено Фармакологическим Комитетом (В.Ф.С. 42-27-27-96).

В настоящее время полиоксидоний используется в клинике как иммуномодулятор при различных формах хронических неспецифических заболеваний легких, при комплексном лечении хронического рецидивирующего фурункулеза, гнойно-раневых инфекций и др (46,60,61).

Соединение антигенного комплекса цитоплазмы БЦ1 в дозах 100 мкг, 10 мкг, 5 мкг, 1 мкг, 0,5 мкг, 0,1 мкг с полиоксидонием в количестве 1 мг на мыяь было проведено в ГНЦИ Иммунологии.

На I этапе нашего исследования было необходимо изучить токсические свойства различных доз данного препарата и выбрать токсически безопасную дозу. Использовали препарат ЦП-БЦ1 с содержанием АКЦ в дозах 100 мкг, 10 мкг, 5 мкг, 1 мкг, 0,5 мкг и 0,1 мкг белка и Полиоксидоний 1 мг.

Все они при однократном внутривенном введении не вызывали острой токсичности у мышей. Лишь доза с содержанием белка 100 мкг через 4 суток приводила к небольшой задержке веса, которая к концу наблюдения не регистрировалась.

При изучении хронической токсичности использовали дозы с содержанием белка 10 мкг, 5 мкг, 1 мкг, 0,5 мкг и 0,1 мкг. Многократное (20 раз) подкожное введение мышам препарата ЦП-БЦ1 в дозе

10 мкг белка приводило к снижению массы животных. Препарат в дозах 1 мкг белка и ниже (0,5 мкг, 0,1 мкг) такого действия у животных не вызывал.

Таким образом, на эти дозы препарата ЦП-БЦ1 не было призна- . ков хронической токсичности.

Изучение патоморфологических изменений в органах также было проведено с использованием выше перечисленных доз. Гистологический анализ не выявил выраженных дистрофических изменений в легких, почках, селезенке и лимфатических узлах. Однако в печени они имели место и носили дозозависимый характер. При введении дозы 0,5 мкг выявлялись единичные участки с белковой дистрофией цитоплазмы клеток, умеренной вакуолизацией цитоплазмы гепатоцитов и небольшим периваскулярным отеком. В тоже время препарат ЦП-БЦ1 в дозе 0,1 мкг белка токсических изменений в печени не вызывал.

Таким образом, изучение острой и хронической токсичности, а также патоморфологических изменений внутренних органов животных, позволило отобрать дозу препарата ЦП-БЩ с содержанием белка 0,1 мкг, которая была токсически безопасной.

На следующем этапе данной работы было проведено изучение иммунологической реактогенности препарата ЦП-БЦ1 исследованием при введении вакцинированным М.bovis 5ЦЖ морским свинкам и мышам линии СВА препарата ЦП-БЦ1 в дозах 10 мкг, 5 мкг, 1 мкг, 0,5 мкг и 0,1 мкг белка.Анафилактического шока на препарат не получено. Дозы с содержанием белка 10 мкг и 5 мкг в организме животных вызывали незначительные анафилактоидные реакции, которые через 30 минут исчезали. Тогда как дозы препарата ЦП-БЦЖ 1 мкг, 0,5 мкг и 0,1 мкг реакций анафилактоидного типа не вызывали.

Для изучения аллергических реакций замедленного типа у сенсибилизированных мышей и морских свинок с помощью внутрикожных туберкулиновых проб были использованы дозы препарата 10 мкг,5 мкг, 1 мкг, 0,5 мкг и 0,1 мкг. Дозы препарата ЦП-БЦЖ 10 мкг и 5 мкг белка в организме животных вызывали развитие туберкулиновой реакции, адекватной с реакцией, полученной при введении коммерческого туберкулина.

Дозы препарата с содержанием белка 0,5 мкг и 0,1 мкг не индуцировали реакции туберкулинового типа.

Таким образом, изучение фармакологических свойств исследуемого препарата ЦП-БЦ1, позволило отобрать две дозы с содержанием белка 0,5 мкг и 0,1 мкг, которые в организме здоровых животных не вызывали острой и хронической токсичности и не индуцировали анафилактических и кожных туберкулиновых реакций.

При изучении патоморфологической картины, доза с содержанием белка 0,1 мкг не вызывала патоморфологических изменений внутренних органов животных.

Следующим этапом данного исследования явилось изучение имму-номодулирующих свойств препарата ЦП-БЦЖ и его составляющих антигенного комплекса цитоплазмы (АКЦ) и полиоксидония в эксперименте на здоровых и зараженных М.Ьшапиз Н371Ш микобактериями туберкулеза мышах линии СБА. Было изучено иммуногенное действие препарата ЦП-БЦЖ в дозе 0,1 мкг белка на здоровых мышах и в дозах 0,5 мкг и 0,1 мкг белка на модели экспериментального туберкулеза по 4 раза в каждом исследовании.

При изучении клеточного иммунитета выявлена стимуляция реакций гиперчувствительности замедленного типа в подушечках лапок мышей на туберкулин. Четырехразовое введение препарата ЦП-БЦЖ в дозе 0,1 мкг белка используемое при лечении больных туберкулезом мышей стимулировало развитие ГЗТ, выражавшееся в появлении туберкулиновых кожных реакций (0,21), которые отсутствовали при введении АКЦ и Полиоксидония.

Введение препарата ЦП-БЦ1 в дозе 0,1 мкг белка стимулировало антителообразование в организме здоровых мышей, при этом туберкулезные антигены у мышей не выявлялись. Наши данные подтверждаются исследованиями, в которых введение внутриклеточных микобактери-альных антигенов в виде вакцинных препаратов соединенных с полиакриловой кислотой, вызывало у мышей стимуляцию гранулематозных реакций в органах РЭС, развитие ГЗТ и антителообразования (74).

Введение препарата ЦП-БЦ1 вызывало значительную стимуляцию фагоцитарной активности полиморфноядерных лейкоцитов перитонеаль-ного экссудата.

Наиболее выраженным иммуногенное действие препарата ЦП-БЦ1 в дозе 0,1 мкг белка, выявлено при изучении иммуноморфологической перестройки внутренних органов здоровых мышей. В органах здоровых мышей наблюдались выраженные иммуногенные тканевые реакции. В легких и селезенке было отмечено формирование лимфоидно-макрофа-гально-гистиоцитарных скоплений различной величины, в которых преобладали молодые формы лимфоцитов- лимфобласты. В стенках и просветах синусов также было отмечено большое количество лимфоцитов и лимфобластов. Аналогичные реакции имели место в лимфатических узлах.

Наиболее выраженное иммуногенное действие препарата было выявлено в печени, где также имела место гиперплазия лимфоидной ткани, скопления лимфоидно-макрофагальных клеток.

Иммуногенное действие препарата подтверждено в следующем эксперименте на мышах зараженных вирулентной культурой микобакте-рий.

Исследовались 7 групп мышей зараженных М.Ьишапиз Н371*у в до$ зе 2-5x10. Через 2 недели после заражения мышей начали лечить.

1 группа - препарат ЦП-БЦ1 в дозе 0,1 мкг совместно с хими-опрепаратами;

2 группа - препарат ЦП-БЦ1 в дозе 0,5 мкг совместно с хими-опрепаратами;

3 группа - лечение химиопрепаратами;

4 группа - препарат ЦП-БЦ1 в дозе 0,1 мкг;

5 группа - антигенный комплекс цитоплазмы (АКЦ);

6 группа - полиоксидоний;

7 группа - контроль, зараженные мыши без лечения.

Наиболее выраженным, пролонгирующим жизнь эффектом, обладал препарат ЦП-БЦЖ в дозе 0,1 мкг белка, применяемый по схеме (4 раза) совместно с противотуберкулезной химиотерапией (1 группа). Средний период жизни животных данной группы, был достоверно выше всех других и, особенно, контрольной группы зараженных мышей, без лечения. В среднем эти животные прожили на 23 дня дольше по сравнению с контролем (63±0,7 и 40,1±0,6) соответственно.

Изучение высеваемости микобактерий из легких также выявило высокий положительный эффект лечения мышей препаратом ЦП-БЦ1 в дозе 0,1 мкг белка совместно с противотуберкулезной химиотерапией. Высеваемость микобактерий из легких у мышей этой группы после проведенного лечения была значительно ниже (2,0х1(? ), чем у мышей получавших только химиотерапию (2,5x10*).

Лечение зараженных мышей одним препаратом ЦП-БЦЖ в аналогичной дозе имело определенный терапевтический эффект, однако он был менее выражен, но отличался от такового показателя у зараженных

5й мышей без лечения (1,2x10 и 2,5x10) соответственно.

Патоморфологический анализ органов зараженных Н371Ш мышей проведен в группах животных, которые получали две дозы препарата ЦП-БЦЖ 0,5 мкг и 0,1 мкг белка как самостоятельно, так и в сочетании с химиотерапией, в сравнении с мышами леченными просто химиотерапией, АКЦ и Полиоксидонием. Исследование выявило наиболее выраженные процессы заживления в группе с использованием препарата Щ1-БЦ1 в дозе 0,1 мкг белка совместно с химиотерапией, по сравнению с остальными группами. Туберкулезные очаги в легких мышей этой группы были небольших размеров, вокруг них имелась обширная продуктивная реакция в виде инфильтратов и отдельных гранулем, а также выявлялась обширная лимфоидная инфильтрация межальвеолярных перегородок. При лечении дозой 0,5 мкг белка туберкулезные очаги были больших размеров.

При самостоятельном введении препарата ЦП-БЦЖ в дозах 0,5 и 0,1 мкг туберкулезные очаги в легких были больших размеров, встречались чаще в поле зрения и были менее продуктивными.

Таким образом, препарат ЦП-БЦ1 в дозе 0,1 мкг белка совместно с противотуберкулезной химиотерапией, по микробиологическим, патоморфологическим данным и показателем средней продолжительности жизни оказал наиболее выраженный положительный терапевтический эффект на течение туберкулезной инфекции при экспериментальном туберкулезе у мышей.

Коррекция иммунологических параметров у больных туберкулезом мышей изучалась с помощью гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ)' пролиферативная активность лимфоцитов (РБТ на туберкулин), туберкулинивые пробы и антителообразования.

Изучение пролиферативной активности лимфоцитов селезенки в РБТ на РРД у зараженных Н371Ш мышей, проведенное в различные периоды после заражения и лечения препаратом ЦП-БЦЖ в дозе 0,1 мкг белка самостоятельно, в сочетании с противотуберкулезной химиотерапией, а также просто химиотерапией показало, что введение препарата вызывало в организме мышей высокую стимуляцию бластообра-зования, выявленного во все периоды исследования. Зтот эффект был наиболее выраженным в группе, где препарат ЦП-БЦЖ использовался в комбинации с химиотерапией (4,7). Даже через б недель после заражения, когда контрольные животные погибли, индекс пролиферации лимфоцитов селезенки был на высоком уровне (3,5). У мышей, получавших противотуберкулезную химиотерапию индекс пролиферации лимфоцитов равнялся соответственно (2,9).

Анализ имеющихся работ показал, что введение неспецифических иммуномодуляторов, таких как рибомунил, левамизол, нуклеинат натрия и др., повышает функциональную активность лимфоцитов (8,9,35, 27). Однако в нашей работе выявлена более высокая стимуляция бластообразования.

В группах мышей, получавших самостоятельно ЙКЦ и Полиоксидо-ний индекс пролиферации мало чем отличался от контрольной группы без лечения, тогда как у мышей получавших просто ЦП-БЦ1 он был несколько выше, по сравнению с контрольной группой.

Таким образом, полученные данные позволили сделать вывод, что введение препарата ЦП-БЦШ в различных вариантах обладает иммуностимулирующим эффектом, что выражалось в высоких индексах пролиферации лимфоцитов селезенки. Но наиболее высоким этот показатель был в группе, где препарат использовался в дозе 0,1 мкг белка совместно с противотуберкулезной химиотерапией.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Горелова, Любовь Алексеевна, 1999 год

1. Авербах М.М., Чуканов В.И., Гергерт В.Я. Применение Т-ак-тивина в комплексном лечении больных с легочным туберкулезом // Метод, рекомендации -М. 1979. -с.10.

2. Авербах М.М. и другие. Методические рекомендации по проведении иммунологических исследований при туберкулезе и других заболеваниях легких. -М., 1984.

3. Авербах М.М., Литвинов В.И., Гергерт В.Я. и др. Применение новых иммунологических методов при туберкулезе. // Москва, 1992.

4. Авербах М.М., Чуканов В.И., Гергерт В.Я. и др. "Сочетан-ное применение кортикостероидов и иммуностимуляторов в комплексном лечении больных туберкулезом легких" (методические рекомендации) // Проблемы туберкулеза. -1992.- N9-10. -с.33-34.

5. Андросова М.В., Владимирский М.А., Алексеева Г.И. Иммунологический метод идентификации М.tuberculosis и М.bovis (БЦ1) на основе применения моноклональных антител. // Пробл.туб. -1989. -N5. -с.43-46.

6. Арион В.Я. В кн.гйтоги науки и техники.: Иммунология. -1982. -т.10 -с.45-53.

7. Арион В.Я., Иванушкин Е.Ф. Принципы иммунокорригирувщей терапии препаратом тимуса Т-активин. // Хирургия -1984 -Nil -с.23-26.

8. Баранова Т.В. Роль нуклеината натрия в комплексном лечении больных туберкулезом легких. // Дисс.канд.мед.наук.- М.,-1986.

9. Борисова A.M. Применение высокоэффективного иммуномодуля-тора рибомунила для лечения и профилактики бронхолегочных заболеваний. //-Сборник трудов. Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии, М.,- 1997,- с.182-189.

10. И. Гергерт В.9. Клинико-иммунологические исследования при туберкулезе легких и других заболеваниях легких. // Дисс.д.мед.н.,- М.,- 1985.

11. Гергерт В.Я. с соавт. Комплексное применение химиотерапии и Т-активина в лечении больных с деструктивным туберкулезом легких // Пробл. туб. -1986 -Н2 -с.28-31.

12. Гергерт с соавт. Изменение синтеза интерлейкинов при туберкулезе. // Тезисы докл. симпозиума : Иммунодефициты при туберкулезе, ХНЗЛ и др.заболеваниях легких. Ташкент.- 1991.- с.43.

13. Гергерт В.Я., Космиади Г.А., Абрамова З.П. Цитокины в иммунопатогенезе туберкулеза легких. // Пробл.туб., 1994. Н2. с. 32-35.

14. Гергерт В.Я., Авербах М.М., Космиади Г.А. и др. Цитокины при туберкулезе. // 1урн. Вестник Российской Академии мед.наук, 1995.- Н7.- с.33-38.

15. Гильбурд Б.1. Определение методом иммуноферментного анализа антител к антигенам микобактерий туберкулеза у больных туберкулезом легких. // Пробл.туб. -1987. -N6. -с.61-63.

16. Горелова Л. А. с соавт. Изучение иммунобиологических свойств специфических иммуномодуляторов адьшвантного действия при экспериментальном туберкулезе. // Пробл. туберкулеза, 1996.-N3.- с.46-4?.

17. Горина Л.Г. Микоплазмы и L-формы стрептококков (иммунобиологическая характеристика и лабораторная диагностика) // Авто-реф.дисс.докт.мед.наук. -М., 1990. -с.48.

18. Грачева Л.А. "Цитокины в онкогематологии" -М., 1996.

19. Драбкина P.A. Микробиология туберкулеза. //М., Медицина.- 1963. -с.45.

20. Демографический Ежегодник межгосударственного статистического комитета Содружества Независимых государств.- М., 1995.

21. Ельманская М.П. Патоморфология тимуса при различных формах туберкулеза легких человека // Пробл.туб. 1980. -N5. -с.52-55.

22. Ельманская М.П. Изучение цитопатологии тимуса при экспериментальном туберкулезе по данным морфометрии и клеточного состава // Пробл.туб. 1981 -Н5. -с.58-63.

23. Еремеев В.В., Авдиенко В.Г., Мороз A.M. и др. Модуляция течения экспериментального туберкулеза у мыией введением in vitro МАТ к интерлейкину -2 (ИЛ), гамма-интерферону (ИФН- ) и интерлей-кину-4 (ИЛ-4).// Вестник РАМН, 1995. т.?.- с.38-42.

24. Ерохин В.В., Ельшанская М.П. Морфологические проявления вторичного иммунодефицита // Пробл.туб. -1990. -N6 с.65-70.

25. Местков A.B. с соавт. Иммунокоррекция препаратом "Рибо-мунил" при хронических инфекциях верхних дыхательных путей. // Сб. трудов. Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии. -М., 1997.- с.468.- 101

26. Земсков А.М., Земсков В.М., Петров А.В. и др. К механизму стимуляции иммуногенеза нуклеинатом натрия.// Иммунология, 1981.- N1.- с.52-55.

27. Земсков В.М. с соавт. Низкомолекулярное РНК. Получение гидролиз и применение в медицине. // Рига, "Знание", 1985.-е.190.

28. Земсков В.И., Родионов С.В., Пантин В.И. Перераспределение и активация перитонеальных микрофагов при пероральном применении нуклеината натрия. // 1урн.микробиологии, эпидемиологии, 1985.- Н8.- с.46-50.

29. Иванова Л.А. с соавт. Терапия Т-активином в комплексном лечении больных туберкулезом легких // Пробл.туб. 1986. -Н5. -с.37-40.

30. Иммунология и иммунопатология туберкулеза. Под ред. М.М.Авербаха. // М., Медицина 1976. -с.37-41.

31. Инсанов А.Б. Химиотерапия больных хроническим деструктивным туберкулезом легких с применением иммуномодуляторов. Автореферат дисс. докт. мед. наук.- М.- 1984.

32. Инсанов А.Б. Эффективность химиотерапии с применением туберкулина, продигиозана, пирогенала у больных деструктивным туберкулезом легких. // Пробл. туб. 1981. - N10. - с.31-32.

33. Кабанов В.А., Мустафаев М.Н., Гончаров В.В. Растворимые комплексы бычьего сывороточного альбумина с поли-4-винилпиридино-выми катионами, содержащими Н-цетильные боковые радикалы. //Высо-комолек.соед. -1981. -т.23. -Н2. -с.261-270.- 102

34. Кабанов В.ft., Петров Р.В., Хаитов P.M. Новый принцип создания искусственных иммуногенов //Нурнал Всесоюзного химического общества им.Д.И.Менделеева. -1982. -t.XXUII. -с.57-68.

35. Корнилова З.Х. с соавт. Продигиозан в терапии деструктивного туберкулеза легких. // Пробл.туб. -1980. -HI. -с.30-32.

36. Когосова Л.С., Мамолат ft.С., Чумак ft.ft. и др. Нуклеинат натрия как иммуномодулятор при туберкулезе легких. // В кн.: Туберкулез Киев - 1984.- вып.16.-с.46-48.

37. Когосова Л.С. и соавт. Состояние Т и B-систем иммунитета у больных с впервые выявленным деструктивным туберкулезом легких в процессе комплексной химиотерапии. // Пробл.туб. -1981. -N2. -с.24-28.

38. Козлов ffl.fi., Прокопенков В.Д., Иванова A.C. Значение им-мунокоррекции в комплексной терапии гнойно-раневых инфекций. // Сборник трудов. Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии. -М., 1997.- с.478.

39. Кононович О.Л. Действие иммуностимулирующих препаратов на противотуберкулезный иммунитет. // Автореф. дисс. к.м.н.- М., 1983.

40. Крылов В.А. Применение методик индивидуальной туберкули-нотерапии и туберкулино-БЦ1 терапии в комплексном лечении больных туберкулезом легких. // Методические рекомендации. -Москва, 1995.

41. Кшановский С.А., Рущак В.А. и др. Использование продиги-озана в комплексном лечении туберкулеза легких детей и подростков. // Пробл.туб. -1980.- N1.- с.33-36.- 103

42. Лактионова Л.В. и др. Клинико-иммунологическая оценка эффективности применения полиоксидония при различных формах хронической патологии. // Сб.трудов. Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии. -М., 1997.-с.483.

43. Леви Д.Т. Современные препараты туберкулина методы получения, контроля, стандартизации и применения. /./ Авто-реф.дисс.докт.мед.наук - М., 1987. -с.37.

44. Литвинов В.И., Гильбурд Б.1., Черноусова Л.Н. Антигены микобактерий туберкулеза. //Пробл.туб., -1987. -N5. -с.68-71.

45. Литвинова Н.В. Применение тимогена в лечении хронического бронхита у больных старших возрастных групп. // Автореф.дисс. к.м.н., М., 1994.

46. Лопухин Ю.М., Арион В.9. Тимус, иммунодефициты, иммуно-коррекция. // Сб.трудов. Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии. -М., 1997.- с.113-119.

47. Медуницын Н.В., Литвинов В.И., Мороз А.М. Медиаторы клеточного иммунитета и межклеточного взаимодействия. // М., 1980.-с.245.

48. Методические рекомендации по проведении иммунологических исследований при туберкулезе и других заболеваниях легких. // М., 1984.

49. Межлумова М.Б. Иммуногенетический анализ гиперчувствительности замедленного типа к туберкулину у мышей методом локального адаптивного переноса // Пробл.туб. 1990. -N47 -с.55-58.

50. Михеева Г.Н., Некрасов А.В., Пучкова Н.Г. и др. Полиок-сидоний в комплексной терапии атонической бронхиальной астмы. // Сб.трудов. Современные проблемы аллергологии, клинической иммуно- 104

51. Мороз A.M., Галкин Ю.М., Литвинов В.И. Летальная инфекция БЦ1 у тимэктомированных мышей // БЗБИМ. -N12 1976. -с.1464-1466.

52. Мустафаев М.И., Норимов А.Ш. Иммуногенность и протектив-ная активность ворастворимых полиметалических комплексов белковых антигенов. // Тезисы Первого Всесоюзного иммунологического съезда. -1989. —т.I. -с.160.

53. Нажмитдинов A.M. Вакцинирующие препараты на основе синтетических полиэлектролитов // Тез.докл. I Всесоюзного съезда иммунологов. -1989. -T.I -с.163.

54. Некрасов A.B., Мельников С. Я. Некоторые аспекты создания конывгированных вакцин. // Тез. докл. I Всесоюзного съезда иммунологов. -1989. -T.I. -с.162.

55. Некрасов A.B., Пучкова Н.Г., Иванова A.C. Новый иммуно-модулятор полиоксидоний. // Тезисы докладов II Российский национальный конгресс "Человек и лекарство". -М., 1995. -с.139.

56. Некрасов A.B., Иванова A.C., Пучкова Н.Г. и др. Полиок-сидоний-иммуномодулятор нового класса. // Сб. трудов. Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармаколо-гии. -М., 1997.- с.494.

57. Никоненков Б.В. Полигенный контроль противотуберкулезного иммунитета и резистентности. // Автореферат дисс.докт.мед. наук -М. 1992.- 105

58. Новоселова В.H., Литвинов В.И., Авербах М.М. и др. Получение и оценка действия тимозина. // Лаб. дело, 1979.- N7.-с.435-436.

59. Осипова Л.С., Демидов C.B., Мясников В.Г. Иммунокоррели-рующее действие тимогена у больных туберкулезом легких. // Всес. конгресс по болезням органов дыхания. 2-й. -Сб.тезисов. -Челябинск. -1991. -с.146.

60. Островский А.Б. Лечение нуклеинатом натрия больных хроническим бронхитом. // Терапевтический архив, 1986.- N2.-с.37-40.

61. Петров Р.В., Хаитов P.M., Атасклуханов Р.Н. Иммуногене-тика и искусственные антигены. // М., Медицина -1983.

62. Петров Р.В. Иммунология. Оценка Т-системы иммунитета (клеточный иммунитет) //М., Медицина. -1987. -с.366-368.

63. Петров Р.В., Хаитов P.M. Искусственные полимер-субъеди-ничные вакцины. // Тез.докл. ¡Всесоюзного съезда иммунологов. -1989. —т.I -с.169.

64. Приймак А.А., Должанский Б.М., Владимирский М.А. Применение иммуноферментного твердофазного метода выявления антител к микобактериям для серологической диагностики туберкулеза. // Лаб.дело. -1986 -Н9. -с.558-560.

65. Романова Р. К). Использование дифференционального ультрацентрифугирования для выделения субклеточных компонентов микобак-терий туберкулеза. // Пробл.туб. 1981. -N7. -с.54-56.

66. Романова Р.И. с соавт. Морфологический аспект защитного действия антигенов субклеточных фракций микобактерий БЦ1. // Сборник "Фундаментальная морфология легких при туберкулезе и других заболеваниях", М., 1988.- t.XUII.- 106

67. Романова Р.Ю. Иммунологические тесты для экспресс диагностики туберкулеза при массовых обследованиях населения. // Сб.научн. трудов "Методология фундаментальных исследований в гигиене окружающей среды". -М.- 1989. -с.52-56.

68. Романова Р.Ю. Иммунологический анализ и антигенные свойства поверхностных белков микобактерий БЦ1. // Сб. трудов "Актуальные вопросы лабораторной диагностики туберкулеза в эксперименте и клинике". -М., 1989 -т.1. -с.122-126.

69. Романова Р.Ю. Иммуногенные свойства и диагностическая ценность антигенов микобактерий БЦ1. //Дисс.докт.биол.наук. -М., 1991.

70. Рослик С.М. и соавт. Эффективность лечения впервые выявленных больных деструктивным туберкулезом легких в условиях современной химиотерапии. // Всесоюзный съезд фтизиатров. 10-й. Тезисы докладов. -Киев. -1986.

71. Селитская Р.П. Изменение клеточных элементов тимуса при экспериментальном деструктивном туберкулезе. // Архив патологии. -1978. -N40/11 с.61-66.

72. Сибирская Р.Н., Белякова О.И. Некоторые показатели иммунологической реактивности макроорганизма при включении в химиотерапию туберкулеза патогенетических средств. // Проблемы туберкулеза. 1984.- N9.- с.28-31.

73. Скворцова Р.Т., Никитина О.И. Злектрофоретическая мобильность лимфоцитов периферической крови у больных с туберкулезом легких. // Пробл.туб. 1990 -N5 -с.11-14.

74. Трапезников Н.Н., Кадагидзе З.Г. Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии. // Сб. трудов.- М., 1997.- с.169-172.

75. Трофимов Г.К., Тимофеева Л.Н. Реакция бласттрансформации лимфоцитов на различные антигены как показатель активности туберкулезного процесса. // В кн.: Механизмы аллергии и иммунитета. -М. Медицина. -1973.- с.91-94.

76. Фадеева Н.И. Исследование механизма антимикробного действия противотуберкулезных препаратов и производных хиноксамина. // Автореферат дисс. докт.мед.наук Пущино. -1987. -с.40.

77. Фарбер Н.А. Клиническое применение левамизола перспективы и предостережения. // Тер.арх. -1990. -Н1. - с.95-100.

78. Хоменко И.С. Течение деструктивного туберкулеза легких у больных с иммунодефицитом. // Дисс.д.м.н., М.,- 1993.

79. Хоменко А.Г., Инсанов А.Б. Эффективность терапии антибактериальным препаратами в сочетании с левализолом и диуцифоном деструктивного туберкулеза легких в эксперименте. // Пробл.туб. -1984. -N4. с.55-59.

80. Хоменко А.Г., Инсанов А.Б. Иммунохимиотерапия с применением левамизола и диуцифона больных хроническим деструктивным туберкулезом легких. // Проблемы туберкулеза, 1984. -N9.- с.23-27.

81. Хоменко А.Г. Руководство по туберкулезу. // М. -1985г.

82. Хоменко А.Г. Методика современной химиотерапии туберкулеза. // Пробл. туб. -1988 -Н8. -с.53-58.

83. Хавинсон В.Х., Морозов В.Г. Экспериментальное изучение нового иммунорегулирушщего препарата тималина. //Воен.мед.журн. -1982. -Н5 -с.37-39.

84. Чернуменко Е.Д., Круглова И.Ф., Кадан Д.П. и др. Особенности влияния иммуномодулирующих препаратов при вторичных иммуно-дефицитах в клинике и эксперименте. //Тез.докл. I Всесоюзн.имму-нол. съезда -1989. -т.1. -стр.398.

85. Чернуменко Е.Ф., Когосова Л.С., Чумак A.A. Особенности иммуностимулирующей терапии при заболеваниях легких.// В кн.: Механизмы иммуностимуляции. Тез. сообщений Респ.конф.- Киев, 1985.-, с.254-255.

86. Чернуменко Е.К., Когосова Л.С., Костромина В.П. Иммунологические исследования в клинике туберкулеза. // Пробл. туб. -1976. -N1 -с.37-41.

87. Чуканов В.И. Лечение больных легочным туберкулезом антибактериальными препаратами в сочетании с вакциной БЦ1. // Авто-реф.дисс.канд.мед.наук. -Харьков. -1968.

88. Чуканов В.И., Гергерт В.Я., Хоменко А.Г. и др. "Эффективность противотуберкулезной химиотерапии в сочетании с корти-костероидами и иммуностимуляторами". // 1урн. "Проблемы туберкулеза". 1990, -Mi. -с.24-28.

89. Чумак A.A. Иммуномодулирующая терапия резерв для повышения лечения туберкулеза. // В кн.: Актуальные вопросы фтизио-пульмонологии (тез.докл. Республиканской научной конференции), Киев, 1983.

90. Чумак A.A. Экспериментальное обоснование применения нук-леината натрия в комплексной терапии туберкулеза. // В кн.: Туберкулез, вып.15.- Киев, 1983.- с.102-106.

91. Шмелев Е.Й., Бумагина Т.К., Митерев И.Г. и др. Применение левамизола у больных с хроническими неспецифическими заболеваниями легких. // Сов.мед. -1980.- N11.-с.26-31.

92. Юдина С.М., Снимщикова И.Л. и др. Экстракорпоральная им-мунокоррекция у больных с абсцессами легких. // Сб.трудов. Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммуно-фармакологии. -М., 1997.- стр.526.

93. Яблокова Т.Б. Противотуберкулезная вакцинация. // Кн. "Иммунология и иммунопатология туберкулеза". -М.-1976.-с.248-266.

94. Ярилин А.А. Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии. // Сб.трудов, М., 1997.-с.165-166.

95. Arzabe A.R., Machado I.U., Fernandes В. et al. Cellular immunity in current active pulmonary tuberculosis // Am. Rev. Dis.-1991.-v.143(3).-p.496-500.

96. Boom H.H., Leibster L., Abul K.A. et al.// Infect. Immun.-1990.-v.58.-p.3863-3879.

97. Brehmer S.H., Ribi E., Meyer T. Biologically active components from mycobacterial cell walls. Protection of mice against aerosol infection with virulent Mycobacterium tuberculosis // Cell. Immunol.-1975.-v.16.-p.1-10.

98. Collins F.M., Campbell S.C. Immunity to intracellular bacteria // Uet. Immunol.Immunopathol.-1982.-v.3.-p.5-66.

99. Collins F.M. The immunology of tuberculosis // Am. Rev. Resp.Bis.-1992.-v.125(3).-p.42-49.

100. Crowle А.Л. Immunization against tuberculosis: what kind of vaccine // Infect. Immun.-1988.-v.56.-p.2769-2773.

101. Bam H.Q., Pio A. Pathogenesis of tuberculosis and vaccination // Tubercle.-1982.-v.63.-p.225-233.

102. Bannenberg A.M. Pathogenesis of pulmonary tuberculosis // Am. Rev. Resp. Bis.-1982.-v.125.-p.25-30.- 110

103. Das Gramelon Mankle H.C., Kleckow M. Tuberculose und Iiaunologie // Therapie woche.-1983.-v.33(41 ).-p.5384, 5387, 5390.

104. Ellner I.I., Wallis R.S. // Rew. Infect. Dis.-1989.-V.U.-p.455-459.

105. Fan X.H., Sao H. Determination of lymphocyte subsets in pulmonary tuberculosis by Mc-Ab-rozette reagent method // Chung. Hua. Chich. Ho. Ho. Hu. Hsi. Tsa. Chih.-1990.-v.13(5).-p.297-298, 319.

106. Frappier ft., Portelanc U., Pierre O.S., Pannisset M. BCG strains: characteristice and relative efficacy // Fogarty Inf. ctr. Proc.-1972.-v.14.-p.157-178.

107. Fujiwara H., Kleinhend M.E., Hallis R.S. // ftmer. Rev. Dis.-1986.-v.133.-p.73-77.

108. Fujiwara H., Ohnishi K., Kishimoto S. et al. // 3. Immunology.-1991.-v.72.-p.194-198.

109. Le Garrec U., Galelli ft.L. Immunomodulation ot les immunomodulateurs // Bull. Assoc. anciens, eleves. Inst. Pasteurs., Paris.-1981.-v.89.-p.23-29.

110. Goren M. Immunoreactive substances of mycobacterium // Am. Rev. Resp. Dis.-1982.-v.l25(1).-p.50-63.

111. Gorski A., Kozezak-Kowalska G. Thymosin: an Immunomodulator of antibodyproduction in man // 3.Immunology.-1982.-v.47(3).-p.497 -500.

112. Grange I.M., Kardjito T. Serological teste for tuberculosis BCG vaccination on the antibody levels determined by ELISA // Tubercle.-1982.-v.63.-p.269-274.

113. Haak-Frendsebo M.H., Bronin J.F., Lizasa G. et al. // 3. Immunol.-1992.-v.148.-p.3978-3985.1. Ill —

114. Harris J.H., Harris S. Serologically dtectabio rabbit hiatocoapatibility antigene solubilesed by several antigene // Transplantation.-1968.-v.6.-p.427-438.

115. Heinzel F.P., Sadick M.D., Holiday B.3. et al. // 3.E.M.-1989.-v.169.-p.59-67.

116. D, Hinterland D.L., Serre H. Preparation de vaccins a base de fraccions ribosoiales antigeniques // Brevet. Pierre Fabre S.A.-1973.-v.73.-p.439-457.

117. D, Hinterland D.L., Fontanques M. Ribosoaes bacterienset dexense iaauniteire // Revue française d'Allergologie et d'Iaaunologie.-1977.-v.48.

118. Koshino T., Nishioka S., Fujiaura M. et al. ELÏSA for IgG antibody to PPD of patients with pulaonary tuberculosis // Kekkaku.-1984.-v.59(12).-p.19-33.125. Launer R.P., Lue K.M.,

119. Geha R.S. Engageaent of CD 14 on huaan monocytes inhibits T-cell proliferation // Schweizeriche Mediz. Wochen. Schrift.-1991.-v.40.-p.41.

120. Leiby D.A., Fortier A.H. Crawwford R.M. et al. // Infect. Iaaun.-1992.-v.60.-p.84-90.

121. Michel F.B., Dussourd D., Hinterland L. Pinel A.M. Prevention of the bacterial respiratory infection by a ribosoaal vaccine // Allergologia y Iaaunopathologia.-1977.-v.5(4).-p.409-413.

122. Pearse E.3., Caspar P. Grzych 3.M. et al. // 3. E. M.-1991.- v.173.-p.159-168.

123. Scott P., Kaufaan S.H.E. // Iaaunology Today.-1991.-v.12.- p.346-348.