Использование белковых и пептидных векторов для избирательной доставки противоопухолевых препаратов и терапевтических олигонуклеотидов в опухолевые клетки тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, доктор биологических наук Посыпанова, Галина Ароновна

• Посыпанова, Галина Ароновна
• доктор биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации доктор биологических наук Посыпанова, Галина Ароновна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Основные идеи и пути создания противоопухолевых препаратов направленного действия 15 1.1.1. Препараты направленного действия в онкологии: лекарственные препараты на основе моноклональных антител и антисмысловых олигонуклеотидов.

1.2. Рецептор-опосредованный эндоцитоз и его роль в доставке биологическиактивных соединений в клетки-мишени

1.3. Альтернативные системы адресной доставки противоопухолевых препаратов для повышения эффективности терапии рака.

1.4. Опухолево-специфические антигены как мишени адресной доставки противоопухолевых препаратов

1.5. Адресная доставка лекарственных препаратов в составе конъюгатов с белковыми и пептидными векторными молекулами.

1.6. Химерные Белки

1.7. Альфа-фетопротеин и его рецепторы в качестве мишени избирательной доставки биологически активных веществ в опухолевые клетки.

1.7.1. Структура и функции альфа-фетопротеина

1.7.2. Рецепторы альфа-фетопротеина.

1.7.3. Биологически активные фрагменты альфа-фетопротеина

1.8. Адресная доставка противоопухолевых препаратов как основной подход к преодолению множественной лекарственной устойчивости (МЛУ)

1.8.1. Феномен множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток.

1.8.2. Современные подходы к преодолению множественной лекарственной устойчивости.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Выделение природного альфа-фетопротеина человека и получение рекомбинантных белков-фрагментов АФП.

2.1.1. Выделение АФП человека

2.1.2. Получение рекомбинантного С-концевого фрагмента АФП (гАФП27)

2.1.3. Получение рекомбинантного белка PGA

2.1.4. Получение рекомбинантного фрагмента АФП AFP-3BC

2.2. Синтез конъюгатов белков и пептидов с FITC, цитостатиками и олигонуклеотидами.

2.2.1. Синтез FITC-меченых АФП, МАт и С-концевого фрагментов АФП гАФП27 и AFP-3BC.

2.2.2. Синтез FITC-меченого октапептида АФП GIP8.

2.2.3. Синтез конъюгатов АФП, гАФП27, AFP-3BC и октапептида

EMTPVNPG (GIP8) с доксорубицином.

2.2.4. Синтез конъюгатов АФП с винбластином.

2.2.5. Синтез конъюгатов АФП с фталоцианинами

2.2.6. Синтез конъюгатов АФП и GIP8 с эсперамицином Aib (EsA).

2.2.9. Синтез конъюгатов АФП с олигонуклеотидами.

2.2.10. Получение комплексов ON с белками.

2.3. Культуры клеток и условия культивирования.

2.4. Оценка связывания с рецептором и эндоцитоза флуоресцентно меченых белков, пептидов и конъюгатов с помощью метода проточной цитометрии.

2.4.1. Оценка связывания АФП и МАт с рецептором АФП.

2.4.2. Оценка эндоцитоза флуоресцентно меченных АФП, С-концевого фрагмента АФП, октапептида АФП GIP8.

2.5. Оценка эндоцитоза конъюгатов белков и пептидов с ДОКС с помощью метода проточной цитометрии.

2.6. Иммуноцитохимические и иммуногистохимические исследования.

2.6.1. Исследование экспрессии рецепторов АФП на поверхности клеток.

2.6.2. Исследование экспрессии белков с-Мус, Вс1-2 и Pgpl70.

2.6.3. Иммунохимическое окрашивание гистологических срезов.

2.7. Исследование экспрессии с-Мус, Вс1-2 и Pgpl70 в опухолевых клетках.

2.7.1. Исследование экспрессии с-Мус, Вс1-2 и Pgpl70 с помощью Western blot.

2.7.2. Исследование экспрессии с-Мус, Вс1-2 и Pgpl70 в опухолевых клетках с помощью проточной цитометрии.

2.8. Флуоресцентная микроскопия.

2.9. Определение цитостатической активности препаратов in vitro.

2.9.1. Определение выживаемости клеток.

2.9.2. Определение ингибирования пролиферативной активности клеток.

2.9.3. Анализ уровня апоптоза с помощью флуоресцентной микроскопии.

2.8.4. Определение фотоцитостатической и хемиоцитостатической активности конъюгатов АФП с фталоцианинами алюминия (А1Фц) и кобальта (СоФц).

2.9. Исследование пролиферативной активности клеток.

2.10. Анализ клеточного цикла с помощью проточной цитометрии.

2.11. Исследование противоопухолевой активности препаратов in vivo.

2.12. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Исследование экспрессии рецептора альфа-фетопротеина на клетках опухолевых линий человека.

3.1.1. Исследование специфичности клонов МАт к АФПР

3.1.2. Оценка количества АФПР на культивируемых in vitro опухолевых клетках человека.

3.2. Иммунохимическое выявление АФПР на клетках и срезах тканей

3.2.1. Исследование экспрессии рецепторов АФП на поверхности опухолевых клеток с помощью иммуноцитохимии.

3.2.2. Иммуногистохимическое окрашивание срезов опухолевых тканей

3.3. Исследование связывания и эндоцитоза флуоресцентно меченного АФП опухолевыми клетками in vitro.

3.3.1. Исследование связывания АФП с рецептором на поверхности опухолевых клеток и нормальных лимфоцитов периферической крови человека с помощью проточной цитометрии.

3.3.2. Исследование эндоцитоза АФП in vitro с помощью проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии.

3.4. Использование рецептор-опосредованного эндоцитоза для адресной доставки противоопухолевых препаратов - доксорубицина, винбластина, эсперамицина, фталоцианинов.

3.4.1. Анализ интернализации опухолевыми клетками in vitro конъюгатов

АФП с антибиотиками/цитостатиками на примере доксорубицина.

3.4.2. Исследование цитостатической активности конъюгатов белков с доксорубицином in vitro.

3.4.3. Исследование противоопухолевой активности конъюгатов АФП с ДОКС in vivo.

3.4.4. Исследование фотоцитостатической и хемиоцитостатической активности конъюгатов АФП с фталоцианинами алюминия (А1Фц) и кобальта

СоФц).

3.4.5. Исследование цитостатической активности конъюгатов АФП с некоторыми другими противоопухолевыми антибиотиками (цитостатиками).

3.4.6. Исследование цитостатической активности конъюгатов АФП с эсперамицином Ajb (EsA) in vitro.

3.4.7. Исследование противоопухолевой активности конъюгатов АФП с эсперамицином Aib (EsA) in vivo.

3.5. Преодоление множественной лекарственной устойчивости, обусловленной экспрессией гена MDR 1 с помощью конъюгатов АФП с противоопухолевыми препаратами in vitro.

3.5.1. Характеристика резистентных линий клеток.

3.5.2. Анализ интернализации ДОКС и его конъюгатов с белками в резистентных линиях клеток.

3.5.3. Исследование цитостатической активности конъюгатов ДОКС с АФП в отношении резистентных линий клеток.

3.6. Биологически активные фрагменты АФП.

3.6.1. Рекомбинантный С-концевой фрагмент АФП (гАФП27).

3.6.2. Рекомбинантный С-концевой фрагмент АФП АФП-ЗВС.

3.6.3. Биологически активный октапептид - фрагмент АФП

3.7. Адресная доставка антисмысловых олигонуклеотидов в опухолевые клетки.

3.7.1. Адресная доставка антисмысловых олигонуклеотидов в опухолевые клетки в виде их конъюгатов с АФП.

3.7.2. Исследование эффективности доставки ASON с помощью нековалентных комплексов с АФП.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Использование белковых и пептидных векторов для избирательной доставки противоопухолевых препаратов и терапевтических олигонуклеотидов в опухолевые клетки»

Актуальность проблемы. Основными причинами недостаточной эффективности химиотерапевтического лечения онкозаболеваний является низкая биодоступность противоопухолевых агентов для опухоли, необходимость использовать высокие дозы препаратов и неселективный характер этих препаратов. Ограниченное проникновение лекарственных препаратов в биологически гетерогенные опухоли приводит к выживанию части опухолевых клеток, даже после длительного лечения с помощью цитотоксических агентов. Лечение высокими дозами, необходимое для полной ремиссии, является причиной тяжелейших системных побочных эффектов, что зачастую вынуждает прекратить лечение больных. Кроме того, длительное применение химиотерапевтических агентов чревато развитием множественной лекарственной устойчивости, что делает используемые препараты неэффективными. В основе феномена лекарственной устойчивости лежат различные по природе внутриклеточные механизмы, такие как снижение транспорта препаратов через плазматическую мембрану, нарушение уровня экспрессии онкогенов, повреждение систем сигнальной трансдукции и др. Для повышения эффективности терапии опухолей необходимо увеличение избирательности действия лекарственных препаратов. Здесь можно выделить 2 направления: разработка новых высокоселективных препаратов и создание новых систем регулируемого транспорта хорошо известных противоопухолевых соединений в клетки-мишени.

Избирательность действия лекарственного препарата может быть повышена за счет использования в системах доставки адресных агентов - молекул, способных связываться со специфическими детерминантами на поверхности клеток. Таким образом, использование адресного компонента определяет взаимодействие системы избирательной доставки со строго определенными клетками и тканями, в частности, опухолевыми. В качестве адресных агентов, или векторов, могут выступать физиологические лиганды рецепторов факторов роста или онкофетальных белков, т.е. сами факторы роста и онкофетальные белки. Противоопухолевый препарат может быть соединен с вектором ковалентно с образованием конъюгата, либо нековалентно, с образованием прочного комплекса. Связывание адресной молекулы со специфическим рецептором на поверхности клетки индуцирует процесс рецептор-опосредованного эндоцитоза, который обеспечивает аккумуляцию опухолевыми клетками лекарственного препарата, молекулярная мишень которого находится внутри клетки.

Необходимо отметить, что в некоторых случаях использование систем избирательной доставки является единственным способом, позволяющим использовать терапевтический потенциал некоторых высокотоксичных противоопухолевых антибиотиков, например, антибиотиков ендиинового ряда. В качестве примера можно привести препарат Милотарг, представляющий собой конъюгат калихемицина Xi с гуманизированными антителами к CD33. Кроме того, применение высокоэффективных систем доставки может существенно повысить терапевтический эффект антисмысловых олигонуклеотидов, которые, к сожалению, пока не нашли применения в клинической практике.

Успешное решение проблемы направленного транспорта лекарственных препаратов на основе рецептор-опосредованного эндоцитоза определяется, прежде всего, выбором векторной молекулы. Белковые векторы должны удовлетворять ряду основных требований, к числу которых относятся высокая афинность векторов к соответствующим рецепторам на поверхности опухолевых клеток-мишеней, высокая стабильность, возможность их химической модификации путем конъюгирования с химиопрепаратами без потери биологических свойств, доступность белков в препаративных количествах. Указанным требованиям наиболее близко соответствует онкофетальный белок альфа-фетопротеин. Важными факторами при конструировании систем избирательной доставки также являются выбор лекарственного препарата (цитостатика, фотосенсибилизатора, антисмыслового олигонуклеотида) и линкера, соединяющего адресный и цитотостатический компоненты. Скрининг созданных конструкций в системе in vitro и изучение их внутриклеточного поведения позволяет выявить наиболее оптимальные варианты систем доставки.

Целью настоящей работы являлась разработка принципов создания систем избирательной доставки противоопухолевых препаратов и терапевтических олигонуклеотидов в опухолевые клетки на основе природных и рекомбинантных белков и пептидов и выявление закономерностей, определяющих их эффективность. Задачи исследования:

Выбор белковых и пептидных векторных молекул для избирательной доставки противоопухолевых препаратов и антисмысловых олигонуклеотидов;

Создание конструкций для избирательной доставки противоопухолевых препаратов в клетки-мишени на основе альфа-фетопротеина и его пептидных фрагментов,

Исследование интернализации и внутриклеточного распределения препаратов в зависимости от типа конструкции для оптимизации систем доставки;

Разработка подходов к преодолению множественной лекарственной устойчивости с использованием систем направленной доставки; Разработка конструкций на основе альфа-фетопротеина и эпидермального фактора роста для избирательной доставки антисмысловых олигонуклеотидов и оценка их эффективности.

Научная новизна и практическая значимость.

Доказано наличие рецепторов АФП как на поверхности клеток опухолевых линий человека, так и на гистологических срезах злокачественных опухолей человека (яичника, молочной железы, печени, желудка, кишечника). На срезах доброкачественных опухолей и нормальных тканей, а также на поверхности покоящихся лимфоцитов, выделенных из крови здоровых добровольцев, рецептор АФП не обнаружен. Таким образом, рецептор АФП может быть использован в качестве опухолевого маркера для широкого спектра злокачественных опухолей, а антитела к рецептору - для диагностики опухолей.

Сформулирована и разработана концепция системы адресной доставки биологически активных соединений в клетки-мишени с использованием в качестве адресного мотива АФП и его пептидных фрагментов.

Разработаны методы, позволяющие в экспериментах in vitro в культурах клеток прогнозировать эффективность препаратов избирательного действия.

Впервые обнаружено, что рекомбинантный С-концевой фрагмент АФП (с 357 по 590 а.о.) специфически связывается с рецептором АФП, эндоцитируется опухолевыми клетками подобно АФП и аналогично АФП ингибирует эстрадиол-индуцированный рост гормонозависимых опухолевых клеток. Таким образом, данный рекомбинантный белок может быть использован в качестве векторной молекулы в системах адресной доставки.

Созданы генные конструкции для индуцированного биосинтеза С-концевых фрагментов АФП в E.coli. Разработаны высокоэффективные методы выделения рекомбинантных фрагментов АФП.

Впервые показана способность биологически активного фрагмента АФП -октапептида GIP8 (472-479 а.о.) избирательно связываться с поверхностью опухолевых клеток, с высокой эффективностью интернализоваться ими, что открывает возможность использования GIP8 в качестве вектора в системах адресной доставки.

Доказана эффективность и избирательность противоопухолевого действия конъюгатов АФП, АФП-ЗВС и GIP8 in vitro в отношении клеточных линий широкого спектра опухолей человека. Изучены закономерности их внутриклеточной транслокации, продемонстрирована зависимость эффективности действия конъюгатов от лабильности химической связи между белком и цитостатическим агентом.

При использовании систем адресной доставки на основе АФП обнаружена возможность преодоления множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток, обусловленной активностью Pgpl70

Впервые продемонстрирована высокая противоопухолевая эффективность конъюгата АФП с эсперамицином Aib in vivo.

Разработаны системы избирательной доставки терапевтических олигонуклеотидов и продемонстрирована принципиальная возможность и перспективность использования белковых векторов (АФП и эпидермального фактора роста) для их адресной доставки в опухолевые клетки.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Рецептор альфа-фетопротеина является уникальным опухолеспецифическим антигеном, который присутствует на поверхности опухолевых клеток и отсутствует у большинства нормальных клеток.

2. Рецептор альфа-фетопротеина может служить мишенью для избирательной противоопухолевой терапии. Связываясь специфически со своим рецептором, альфа-фетопротеин интернализуется опухолевыми клетками вместе с ковалентно присоединенными к нему молекулами лекарственных соединений, обеспечивая, таким образом, избирательную доставку препаратов в опухолевые клетки.

3. Использование систем адресной доставки на основе альфа-фетопротеина позволяет преодолеть множественную лекарственную устойчивость опухолевых клеток, обусловленную ABC-транспортерами плазматической мембраны.

4. Рекомбинантные фрагменты альфа-фетопротеина, содержащие рецептор-связывающий мотив, могут быть использованы в системах избирательной доставки вместо полноразмерного природного белка.

5. Применение белковых векторов (АФП и эпидермального фактора роста) позволяет значительно повысить эффективность внутриклеточной доставки антисмысловых олигонуклеотидов.

Личный вклад автора.

Личный вклад автора состоит в разработке идеи, организации и проведении экспериментальных исследований, анализе, обобщении и интерпретации полученных результатов. Все эксперименты с культурами клеток выполнены непосредственно автором. Апробация работы.

Основные результаты работы были доложены на V International Symposium on Biology and Clinical Usefulness of Tumor Markers (1995, Barcelona, Spain), XVI Intern.

Congress of Clinical Chemistry, (1996, London), The interdependence of Tumor Biology and Clinical Oncology (1996, Coronado, USA) , p. 121.Meeting of the International Society for Oncodevelopmental Biology and Medicine (ISOBM) (1996, 1997, 1998, 1999, 2000, 2001, 2005), The European cancer conference ECCO (1997, France), Российском Национальном конгрессе "Человек и лекарство" (2000, 2005, Москва), 37th Annual Scientific Meeting of the European Society for Clinical Investigation (2003, Verona, Italy), 1st EUFEPS Conference on Optimising Drug Delivery and Formulation: New Challenges in Drug Delivery (2003, Versailles, France), The 5th ISTC/Korea workshop on biotechnology (2004, Chungbuk, Korea), World Conference on Magic Bullets (2004, Nürnberg, Germany), международной конференции Молекулярная медицина и биобезопасность (2005, Москва), III Московском международном конгрессе "Биотехнология: состояние и перспективы развития" (2005, Москва), Московской международной конференции "Биотехнология и медицина" (2006, Москва), 19th Meeting of the European Association for Cancer Research (EACR), Budapest, Hungary, July 1 -4, 2006, конференции "Новая технологическая платформа биомедицинских исследований (биология, здравоохранение, фармация)" (2006, Ростов-на-Дону), I международной научно-практической конференции "Постгеномные методы анализа в биологии, лабораторной и клинической медицине" (2010, Москва).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 34 статьи, из них 30 в журналах, рекомендованных ВАК РФ, 4 патента, 42 публикации в материалах Российских и зарубежных конференций.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 256 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, изложения и обсуждения результатов, заключения, выводов и списка литературы, который включает 406 источников. Диссертация содержит 94 рисунка и 14 таблиц.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Посыпанова, Галина Ароновна

Выводы.

1. Разработана концепция системы адресной доставки биологически активных соединений в опухолевые клетки, в которой в качестве адресного мотива используется альфа-фетопротеин (АФП) и его фрагменты.

2. Установлено наличие рецепторов АФП как на поверхности клеток опухолевых линий человека, так и на клетках злокачественных опухолей человека (яичника, молочной железы, печени, желудка, кишечника). На срезах доброкачественных опухолей и нормальных тканей, а также на поверхности лимфоцитов здоровых добровольцев, рецептор АФП не обнаружен.

3. Показано, что не только АФП, но и его рекомбинантные С-концевые фрагменты специфически связываются с рецептором АФП и эндоцитируются опухолевыми клетками.

4. Обнаружено, что биологически активный фрагмент АФП - октапептид GIP8 избирательно связывается с неизвестным рецептором на поверхности опухолевых клеток, с высокой эффективностью интернализуется и может быть использован в качестве вектора в системах адресной доставки.

5. Установлено, что конъюгаты противоопухолевых препаратов с АФП избирательно аккумулируются клетками-мишенями, оказывают выраженное цитостатическое воздействие на опухолевые клетки и малотоксичны для нормальных клеток человека; при этом эффективность действия конъюгатов определяется лабильностью химической связи между белком и цитотоксическим агентом.

6. Использование систем адресной доставки на основе АФП позволяет преодолеть множественную лекарственную устойчивость опухолевых клеток, обусловленную активностью Pgpl70.

7. Эффективность транспорта доксорубицина в опухолевые клетки в составе конъюгатов с АФП значительно превосходит эффективность его транспорта в составе конъюгатов с трансферрином и сывороточным альбумином.

8. Показана высокая противоопухолевая активность конъюгата АФП с эсперамицином Aib in vivo, при использовании модели перевиваемой опухоли мышей (излечение -30%, увеличение продолжительности жизни - 163%).

9. Конъюгат фрагмента АФП GIP8 с доксорубицином избирательно накапливается в чувствительных и резистентных линиях опухолевых клеток, оказывает выраженное цитостатическое воздействие на опухолевые клетки и малотоксичен для мононуклеарных лейкоцитов человека.

Продемонстрирована перспективность использования белковых векторов на основе АФП и эпидермального фактора роста для адресной доставки антисмысловых олигонуклеотидов в клетки-мишени.

Заключение.

Настоящая работа посвящена исследованию закономерностей при конструировании систем направленной доставки лекарственных препаратов на основе белковых векторов. Исследование особенностей внутриклеточной транслокации исследуемых препаратов, сопоставление их с биологической активностью в отношении опухолевых и нормальных клеток in vitro помогает прогнозировать успех той или иной стратегии и, таким образом, оптимизировать процесс создания эффективных противоопухолевых препаратов избирательного действия.

Использование адресного компонента определяет взаимодействие САД со строго определенными клетками и тканями, обеспечивая, таким образом, избирательность действия препаратов. Механизм рецептор-опосредованного эндоцитоза способствует аккумуляции лекарственного препарата, молекулярная мишень которого находится внутри клетки.

Сравнение САД, представляющих собой конъюгаты (векторный белок)-линкер-(лекарственный препарат), где в качестве векторного белка использовали сывороточный альбумин, трансферрин и альфа-фетопротеин, показало преимущество последнего как по способности аккумулироваться опухолевыми клетками, так и по цитотоксической активности для этих клеток. В этих конъюгатах в качестве линкера использовали гидразид 3-малеимидобензойной кислоты, а в качестве лекарственного препарата - доксорубицин. Указанный линкер является кислотолабильным и может подвергаться гидролизу в таких клеточных компартментах, как эндосомы и лизосомы, высвобождая при этом лекарственный препарат из САД. Доксорубицин - антибиотик из группы антрациклинов, является эффективным и широко используемым терапевтическим агентом. Существует два основных механизма, согласно которым препарат вызывает клеточную гибель [397]: интеркаляция в ДНК, в результате которой ДОКС встраивается между двумя соседними нуклеотидами, обеспечивая прочное взаимодействие с ДНК и нарушая репликацию и транскрипцию; связывание и ингибирование топоизомеразы II. За счет наличия в структуре хиноновой группировки ДОКС участвует в окислительно-восстановительных процессах, что приводит к образованию свободных радикалов, индуцирующих повреждения ДНК и перекисное окисление липидов. Эффективность терапии ДОКС зависит от его внутриклеточного накопления.

Свободный ДОКС, благодаря своей гидрофобности, быстро проникает в клетки и клеточные ядра. Скорость захвата клетками ДОКС в составе конъюгата определяется количеством специфических рецепторов на поверхности клеток-мишеней и интенсивностью рецептор-опосредованного эндоцитоза.

В качестве векторных белков (адресных компонентов) кроме АФП мы использовали хорошо известные транспортные белки HSA и Trf, которые активно эндоцитируются опухолевыми клетками и с той или иной успешностью используются для внутриопухолевой доставки лекарственных препаратов (см. Обзор литературы, раздел 1.5). Однако, конъюгат АФП с ДОКС значительно превосходил аналогичные конъюгаты ДОКС с HSA и Trf как по эффективности накопления в опухолевых клетках, так и по цитотоксической активности в отношении этих клеток.

Исследование экспрессии рецептора АФП на поверхности клеток опухолевых линий человека и нормальных лимфоцитов периферической крови, а также на гистологических срезах раковых, доброкачественных и нормальных тканей с помощью моноклональных антител к АФПР выявило преимущественное присутствие указанного рецептора в клетках злокачественных опухолей. Позднее наши результаты были подтверждены исследованиями R. Moro [398]. Таким образом, АФПР может служить уникальной мишенью на поверхности опухолевых клеток, а системы доставки на основе его природного лиганда - АФП -обеспечивать избирательную доставку лекарственных препаратов в эти клетки. Анализ связывания и эндоцитоза флуоресцентно меченного АФП позволяет говорить о высокой эффективности и специфичности накопления АФП в активно пролиферирующих опухолевых клетках, и отсутствии накопления этого белка в непролиферирующих лимфоцитах.

Исследование in vitro противоопухолевой эффективности ряда конъюгатов на основе АФП, в которых в качестве цитотоксических компонентов использовали разнообразные цитостатики, противоопухолевые антибиотики, антиметаболиты, фотосенсибилизаторы (доксорубицин, дауномицин, калихеамицин, блеомицин, эсперамицин, цисплатин, карбоксифосфамид, винбластин, метотрексат, фталоцианины) продемонстрировало их высокую избирательную противоопухолевую активность. Конъюгат АФП с эсперамицином Aib проявлял значительную эффективность в модельных экспериментах in vivo при лечении мышей с экспериментальными опухолями, препятствуя развитию опухолей и увеличивая в несколько раз продолжительность жизни животных. Следует отметить, что указанный антибиотик, относящийся к ендиинам, является крайне токсичным соединением. Химическая структура ендииновых антибиотиков имеет общий элемент, часто называемый "боеголовкой", который представляет собой 10-членный ендииновый цикл, содержащий две ацетиленовые связи в a-положениях к двойной связи или оксирановому циклу. В физиологических условиях и при определенной активации такая «боеголовка» претерпевает перегруппировку в реакционноспособный бирадикал [399]. Цитотоксическое действие эсперамицина обусловлено индукцией одно- и двунитевых разрывов ДНК. Клинические испытания этого препарата закончились неудачей из-за его высокой системной токсичности. Пожалуй, единственная возможность использовать потенциал этого антибиотика - это повысить его селективность путем химического присоединения к векторным молекулам, обеспечив адресную доставку в опухоль, что и было нами сделано.

Необходимо отметить особую важность при конструировании САД выбора линкера, связывающего векторный белок с цитотоксическим агентом. Цитостатик может быть успешно доставлен в клетку-мишень, но если не обеспечить своевременное его отщепления от вектора, биологический эффект реализован либо не будет, либо будет слабо выражен. Анализ эффективности конъюгатов АФП с ДОКС, в которых были использованы линкеры, отличающиеся по своей лабильности, показал, что наиболее активными были конъюгаты, при синтезе которых использовали глутаровый альдегид и гидразид 3-малеимидобензойной кислоты. Цитотоксическая активность конъюгатов АФП с ДОКС коррелировала с накоплением ДОКС в ядрах клеток: чем быстрее это происходило, тем активней был конъюгат. При использовании в качестве линкера N-оксисукцинимидного эфира 3-(2-дитиопиридил)пропионовой кислоты, локализация в клетках ДОКС была преимущественно цитоплазматической, даже через сутки после применения конъюгата. При этом данный конъюгат проявлял очень низкую активность (в 25 раз ниже, чем свободный ДОКС). По-видимому, прочная дисульфидная связь препятствует быстрому отщеплению ДОКС в эндосомах. В клетках ферменты, способные восстанавливать дисульфидную связь (тиол-протеиндисульфидредуктаза, тиоредоксин, глутаредоксин, гамма-интерферон индуцибельная лизосомальная тиолредуктаза - GILT), локализованы в полости микросом, в структурах комплекса Гольджи [15, 16]; тиоредоксин и глутаредоксин катализируют восстановление дисульфидных связей в ядре и цитоплазме [373]; GILT - в поздних эндосомах/лизосомах (оптимум pH 4-5) [374]. Восстановление дисульфидных связей в белках происходит в поздних эндосомах/лизосомах после ограниченного протеолиза катепсинами [375]. Восстановление дисульфидной связи под действием тиол-протеиндисульфидредуктазы значительно замедляется при снижении pH [376]. Высвобождение ДОКС из конъюгатов, в которых антибиотик присоединен к белку с помощью дисульфидной связи, по всей видимости происходит достаточно медленно, чем и объясняется низкая цитотоксическая активность таких конъюгатов. Вторым фактором, который мог влиять на эффективность действия обсуждаемого конъюгата, является модификация по аминогруппе сахарного остатка ДОКС при введении тиольной группы с помощью SPDP. Хотя в ряде работ [400-402] было продемонстрировано получение активных конъюгатов ДОКС с антителами с использованием данной стратегии синтеза, в других исследованиях было показано, что модификация ДОКС по аминосахару снижает цитотоксическую активность данного антибиотика [381, 403] и приводит к потере цитотоксической активности антрациклина в составе конъюгата [404, 405].

Тем не менее, применение SPDP при синтезе конъюгатов АФП с EsA, оказалось весьма эффективным. Действительно, цитотоксичность конъюгата при тестировании in vitro была по большей части ниже токсичности свободного EsA. Однако, в результате повышения избирательности действия EsA в составе конъюгата, удалось добиться значительного успеха при испытании конъюгата in vivo.

Полученные результаты позволяют прогнозировать уровень эффективности препаратов направленного действия на основе белковых векторных молекул. Эффективность действия таких препаратов зависит не только от белка-вектора, но, в значительной степени, от типа химической связи между белком и противоопухолевым антибиотиком. Эта связь не должна быть слишком прочной, так как при этом теряются преимущества адресной доставки: невзирая на высокую внутриклеточную концентрацию антибиотика последний может не оказывать фармакологического воздействия, если не достигает своей мишени. Но связь не должна быть чересчур лабильной, так как препарат должен сохранять свою целостность до взаимодействия с клетками-мишенями. При этом при создании адресной конструкции, необходимо учитывать, что отщепление препарата (антибиотика, цитостатика и др.) от молекулы белка будет происходить, вероятнее всего, в эндосомах при значениях рН 5.5-6, то есть линкер, связывающий молекулу АФП с лекарством в идеале должен гидролизоваться при указанных значениях рН либо являться субстратом эндосомальных ферментов.

Важнейшим свойством синтезированных конъюгатов на основе АФП являлась их способность обращать множественную лекарственную устойчивость, обусловленную активностью АВС-транспортеров.

Полученные результаты позволяют заключить, что АФП можно эффективно применять в качестве адресного агента для доставки противоопухолевых лекарственных препаратов в опухолевые клетки различного происхождения.

Пожалуй, единственным значимым недостатком природного АФП человека является источник его выделения: в препаративных количествах АФП можно выделять только из абортивного материала. В пуповинной крови - использованном нами биоматериале, содержание АФП значительно ниже, и, собственно говоря, это тоже не лучший биологический источник. Поэтому мы поставили задачу получения рекомбинантного белкового вектора - фрагмента АФП, содержащего рецептор-связывающий участок, идентичный таковому в природной молекуле. Полученный рекомбинантный С-концевой фрагмент АФП (гАФП27) специфически связывался с рецептором АФП на опухолевых клетках и эндоцитировался ими аналогично полноразмерному АФП человека. гАФП27 сохранял также и некоторые другие биологические свойства полноразмерного белка. Использование гАФП27 в качестве вектора в САД открывает возможность практического использования потенциала белка как лиганда для АФПР.

Трансформированные клетки характеризуются изменениями генов, связанными с регуляцией клеточной пролиферации и апоптоза. Среди многочисленных исследований, посвященных разработке новых агентов избирательного действия для опухолевых клеток, особое место принадлежит антисмысловым олигонуклеотидам. ASON являются одним из классов новых агентов, способных ингибировать синтез специфических опухолеассоциированных белков путем связывания с кодирующей эти белки мРНК, тем самым блокируя синтез белка. Многие модифицированные (в частности, тиофосфатные) ASON in vitro демонстрировали убедительное снижение экспрессии целевого гена и предполагалось их успешное действие в отношении широкого спектра опухолей. Препятствием, снижающим избирательность действия ASON, является отсутствие в настоящее время адекватной и эффективной САД этих соединений в клетки-мишени, необходимой для реализации терапевтического потенциала ASON.

Трансформированные клетки характеризуются изменениями генов, связанными с регуляцией клеточной пролиферации и апоптоза. Среди многочисленных исследований, посвященных разработке новых агентов избирательного действия для опухолевых клеток, особое место принадлежит антисмысловым олигонуклеотидам. Антисмысловые олигонуклеотиды являются одним из таких классов новых агентов, способных ингибировать синтез специфических опухолеассоциированных белков путем связывания с кодирующей эти белки мРНК, тем самым блокируя синтез белка. В последние десятилетия некоторые антисенсы были разработаны и испытаны в доклинических и клинических исследованиях. Многие из них показали в системах in vitro убедительное снижение экспрессии целевого гена и предполагалось их успешное действие в отношении широкого спектра опухолей. Однако, из-за генетической неоднородности опухолей, использование антисенсов в качестве единственного лекарственного препарата, как представляется, не будут эффективны в лечении заболеваний. Антисенс-терапия, направленная на вмешательство в сигнальные пути, участвующие в клеточной пролиферации и апоптоза, являются особенно перспективными в сочетании с обычным противоопухолевым лечением [406].

Доставка тиофосфатных А8(Ж в опухолевые клетки в виде конъюгатов с АФП оказалась чрезвычайно эффективной, так как позволяла преодолевать барьер цитоплазматической мембраны, ограничивающей проникновение АБОИ в клетки. Эта эффективность проявлялась либо в виде прямого цитостатического действия, либо в виде сенсибилизации клеток-мишеней к действию других противоопухолевых препаратов. При этом было обнаружено, что неспецифическая токсичность некоторых последовательностей (Ж не являлась препятствием для применения этих (Ж, так как использование векторной молекулы в САД ограничивало их токсичность опухолевыми клетками. Однако синтез конъюгатов оказался весьма трудозатратным процессом, сопровождавшимся к тому же значительными потерями белка и АБОЫ. Альтернативные конструкции, представляющие собой нековалентные комплексы белков с АБОМ, возможно, являются более технологичными. ОЫ, в особенности их тиофосфатные аналоги, обладают высоким отрицательным зарядом и способны образовывать прочные комплексы с поликатионными молекулами. Для повышения эффективности образования таких комплексов в молекулы рекомбинантных белков (гАФП27 и ЕвР) была внесена положительно заряженная последовательность, обеспечивающая их прочное взаимодействие с ЛБОМ. Полученные конструкции проявили себя как удачные САД, не только многократно повышающие эффективность аккумуляции АБОК в клетках, характеризующихся повышенным содержанием рецепторов упомянутых белков, но и защищая природные фосфодиэфирные ОЫ от деградации. Однако, использование в качестве адресного компонента САД митогена, которым является ЕОР, ограничивает спектр применяемых АБОЫ, препятствуя в ряде случаев реализации биологического эффекта. Возможно, решению этой проблемы может помочь модификация рецептор-связывающего участка молекулы ЕвР, в результате которой будет утрачена способность рецептора активироваться (способность к аутофосфорилированию), но не влияющая на способность рецептора интернализоваться после связывания со своим лигандом.

Результаты экспериментальных исследований, представленные в данной работе, свидетельствуют о высокой эффективности и избирательности систем адресной доставки на основе альфа-фетопротеина, его фрагментов и модифицированного эпидермального фактора роста.

Прогресс в изучении молекулярных механизмов патогенеза заболеваний и появление новых методов в области молекулярной биологии и биотехнологии открывают возможности для разработки новых лекарств, которые избирательно влияют на различные сигнальные пути, характерные для в опухолевых клеток и, таким образом, появляется возможность целенаправленного индивидуального лечения на основе уникального комплекса молекулярных мишеней, продуцирующихся опухолью пациента. Лекарственные препараты могут достигать мишени самостоятельно (например, терапевтические антитела), либо в составе систем доставки, ориентированных на конкретные органы, пораженные опухолью, или непосредственно к поверхности или внутрь раковых клеток. Понимание клеточной биологии опухоли, изучение микроокружения опухолевых клеток позволит разработать эффективные варианты лекарственных препаратов направленного действия.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Посыпанова, Галина Ароновна, 2013 год

1. Jain R.K. Delivery of molecular and cellular medicine to solid tumors. // Adv Drug Deliv Rev. 2001. V. 46. №1-3. P. 149-168.

2. Jang S.H., Wientjes M.G., Lu D., Au J.L. Drug delivery and transport to solid tumors. // Pharm Res. 2003. V. 20. №9. P. 1337-1350.

3. Grillo-Lopez A.J., White C.A., Varns C., Shen D., Wei A., McClure A., Dallaire B.K. Overview of the clinical development of rituximab: first monoclonal antibody approved for the treatment of lymphoma. // Semin Oncol. 1999. V. 26. №5 Suppl 14. P. 66-73.

4. Huhn D., von Schilling C„ Wilhelm M„ Ho A.D., Hallek M., Kuse R, Knauf W„ Riedel U., Hinke A., Srock S., Serke S., Peschel C., Emmerich B. Rituximab therapy of patients with B-cell chronic lymphocytic leukemia. // Blood. 2001. V. 98. №5. P. 1326-1331.

5. Gribben J.G., Hallek M. Rediscovering alemtuzumab: current and emerging therapeutic roles. //Br J Haematol. 2009. V. 144. №6. P. 818-831.

6. Ravandi F., O'Brien S. Alemtuzumab in CLL and other lymphoid neoplasms. // Cancer Invest. 2006. V. 24. №7. P. 718-725.

7. Alinari L., Lapalombella R., Andritsos L., Baiocchi R.A., Lin T.S., Byrd J.C. Alemtuzumab (Campath-IH) in the treatment of chronic lymphocytic leukemia. // Oncogene. 2007. V. 26. №25. P. 3644-3653.

8. Baselga J. A review of EGFR targeted therapy. // Clin Adv Hematol Oncol. 2003. V. 1. №4. P. 218-219.

9. Fischgrabe J., Wulfing P. Targeted therapies in breast cancer: established drugs and recent developments. // Curr Clin Pharmacol. 2008. V. 3. №2. P. 85-98.

10. Goldenberg M.M. Trastuzumab, a recombinant DNA-derived humanized monoclonal antibody, a novel agent for the treatment of metastatic breast cancer. // Clin Ther. 1999. V. 21. №2. P. 309-318.

11. Slamon D.J., Clark G.M., Wong S.G., Levin W.J., Ullrich A., McGuire W.L. Human breast cancer: correlation of relapse and survival with amplification of the HER-2/neu oncogene. // Science. 1987. V. 235. №4785. P. 177-182.

12. Azim H., Azim H.A., Jr. Targeting Her-2/neu in breast cancer: as easy as this! // Oncology. 2008. V. 74. №3-4. P. 150-157.

13. Albanell J., Codony J., Rovira A., Mellado В., Gascon P. Mechanism of action of anti-HER2 monoclonal antibodies: scientific update on trastuzumab and 2C4. // Adv Exp Med Biol. 2003. V. 532. P.253-268.

14. Stern M., Herrmann R. Overview of monoclonal antibodies in cancer therapy: present and promise. // Crit Rev Oncol Hematol. 2005. V. 54. №1. P. 11-29.

15. Gutheil J. The promise of monoclonal antibodies for the therapy of cancer. // Crit Rev Oncol Hematol. 2001. V. 38. №1. P. 1-2.

16. Моисеенко B.M. Моноклональные антитела в лечении злокачественных опухолей. // Практическая онкология. 2003. V. 4. №3. Р. 148-156.

17. Guillemard V., Uri Saragovi Н. Prodrug chemotherapeutics bypass p-glycoprotein resistance and kill tumors in vivo with high efficacy and target-dependent selectivity. // Oncogene. 2004. V. 23. №20. P. 3613-3621.

18. Ricart A.D., Tolcher A.W. Technology Insight: cytotoxic drug immunoconjugates for cancer therapy. // Nat Clin Prac Oncol. 2007. V. 4. №4. P. 245-255.

19. Younes A., Bartlett N.L., Leonard J.P., Kennedy D.A., Lynch C.M., Sievers E.L., Forero-Torres A. Brentuximab Vedotin (SGN-35) for Relapsed CD30-Positive Lymphomas. // New England Journal of Medicine. V. 363. №19. P. 1812-1821.

20. Krop I.E., Beeram M., Modi S., Jones S.F., Holden S.N., Yu W., Girish S., Tibbitts J., Yi J.-H., Sliwkowski M.X., Jacobson F., Lutzker S.G., Burris H.A. Phase I Study of Trastuzumab

21. DM1, an HER2 Antibody-Drug Conjugate, Given Every 3 Weeks to Patients With HER2-Positive Metastatic Breast Cancer. // Journal of Clinical Oncology. V. 28. №16. P. 2698-2704.

22. Stasi R. Gemtuzumab ozogamicin: an anti-CD33 immunoconjugate for the treatment of acute myeloid leukaemia. // Expert Opin Biol Ther. 2008. V. 8. №4. P. 527-540.

23. Tsimberidou A.M., Giles F.J., Estey E., O'Brien S., Keating M.J., Kantarjian H.M. The role of gemtuzumab ozogamicin in acute leukaemia therapy. // Br J Haematol. 2006. V. 132. №4. P. 398-409.

24. Gao Z., McAlister V.C., Williams G.M. Repopulation of liver endothelium by bone-marrow-derived cells. // Lancet. 2001. V. 357. №9260. P. 932-933.

25. Zein N., Sinha A.M., McGahren W.J., Ellestad G.A. Calicheamicin gamma II: an antitumor antibiotic that cleaves double-stranded DNA site specifically. // Science. 1988. V. 240. №4856. P. 1198-1201.

26. Reiter Y. Recombinant immunotoxins in targeted cancer cell therapy. // Adv Cancer Res. 2001. V. 81. P. 93-124.

27. Goyal A., Batra J.K. Inclusion of a furin-sensitive spacer enhances the cytotoxicity of ribotoxin restrictocin containing recombinant single-chain immunotoxins. // Biochem J. 2000. V. 345 Pt 2. P. 247-254.

28. Kreitman R.J. Recombinant immunotoxins containing truncated bacterial toxins for the treatment of hematologic malignancies. // BioDrugs. 2009. V. 23. №1. P. 1-13.

29. Jain R.K., Baxter L.T. Mechanisms of heterogeneous distribution of monoclonal antibodies and other macromolecules in tumors: significance of elevated interstitial pressure. // Cancer Res. 1988. V. 48. №24 Pt 1. P. 7022-7032.

30. Green M.C., Murray J.L., Hortobagyi G.N. Monoclonal antibody therapy for solid tumors. // Cancer Treat Rev. 2000. V. 26. №4. P. 269-286.

31. Brada M. BCL2 gene: current relevance to clinical oncology. // Eur J Cancer. 1992. V. 28. №1. P. 270-272.

32. Yip K.W., Reed J.C. Bcl-2 family proteins and cancer. // Oncogene. 2008. V. 27. №50. P. 6398-6406.

33. Reed J.C. Bcl-2 family proteins: strategies for overcoming chemoresistance in cancer. // Adv Pharmacol. 1997. V. 41. P. 501-532.

34. Reed J.C. Bel-2 family proteins: regulators of chemoresistance in cancer. // Toxicol Lett. 1995. V. 82-83. P. 155-158.

35. Tarhini A.A., Kirkwood J.M. Oblimersen in the treatment of metastatic melanoma. // Future Oncol. 2007. V. 3. №3. P. 263-271.

36. Oblimersen: Augmerosen, BCL-2 antisense oligonucleotide Genta, G 3139, GC 3139, oblimersen sodium. // Drugs R D. 2007. V. 8. №5. P. 321-334.

37. Manoharan M. Oligonucleotide conjugates as potential antisense drugs with improved uptake, biodistribution, targeted delivery, and mechanism of action. /'/ Antisense Nucieic Acid Drug Dev. 2002. V. 12. №2. P. 103-128.

38. Abels C. Targeting of the vascular system of solid tumours by photodynamic therapy (PDT). // Photochem Photobiol Sci. 2004. V. 3. №8. P. 765-771.

39. Nowis D., Makowski M., Stoklosa T., Legat M., Issat T., Golab J. Direct tumor damage mechanisms of photodynamic therapy. // Acta Biochim Pol. 2005. V. 52. №2. P. 339-352.

40. Robertson C.A., Evans D.H., Abrahamse H. Photodynamic therapy (PDT): a short review on cellular mechanisms and cancer research applications for PDT. // J Photochem Photobiol B. 2009. V. 96. №1. P. 1-8.

41. Aveline B.M., Redmond R.W. Exclusive Free Radical Mechanisms of Cellular Photosensitization. // Photochemistry and Photobiology. 1998. V. 68. №3. P. 266-275.

42. Henderson B.W., Dougherty T.J. How does photodynamic therapy work? // Photochem Photobiol. 1992. V. 55. №1. P. 145-157.

43. Cahill M.T., Smith B.T., Fekrat S. Adverse reaction characterized by chest pain, shortness of breath, and syncope associated with verteporfin (visudyne). // Am J Ophthalmol. 2002. V. 134. №2. P. 281-282.

44. Cheng Y., A C.S., Meyers J.D., Panagopoulos I., Fei B., Burda C. Highly efficient drug delivery with gold nanoparticle vectors for in vivo photodynamic therapy of cancer. // J Am Chem Soc. 2008. V. 130. №32. P. 10643-10647.

45. Sharman W.M., van Lier J.E., Allen C.M. Targeted photodynamic therapy via receptor mediated delivery systems. // Adv Drug Deliv Rev. 2004. V. 56. №1. P. 53-76.

46. Oleinick N.L., Evans H.H. The photobiology of photodynamic therapy: cellular targets and mechanisms. // Radiat Res. 1998. V. 150. №5 Suppl. P. S146-156.

47. Rosenkranz A.A., Jans D.A., Sobolev A.S. Targeted intracellular delivery of photosensitizers to enhance photodynamic efficiency. // Immunol Cell Biol. 2000. V. 78. №4. P. 452-464.

48. Rozanova Torshina N., Zhang J.Z., Heck D.E. Catalytic therapy of cancer with porphyrins and ascorbate. // Cancer Lett. 2007. V. 252. №2. P. 216-224.

49. Хорошева Е.В., Герасимова Г.К., Калия O.J1. Изучение механизма транспорта терафтала в опухолевые клетки

50. Российский биотерапевтический журнал 2007. V. 6. №1. Р. 8.

51. Кульбачевская Н.Ю., Манзюк Л.В., Михайлова JI.M. Клинико-экспериментальное изучение токсичности противоопухолевой каталитической системы «терафтал+аскорбиновая кислота» («ТФ+АК»). // Российский биотерапевтический журнал. 2004. V. 3. №2. Р. 70.

52. Ravi Kumar M.N. Nano and microparticles as controlled drug delivery devices. // J Pharm Pharm Sci. 2000. V. 3. №2. P. 234-258.

53. Brannon-Peppas L., Blanchette J.O. Nanoparticle and targeted systems for cancer therapy. // Adv Drug Deliv Rev. 2012. V. P.

54. Fu Q., Sun J., Zhang W., Sui X., Yan Z., He Z. Nanoparticle Albumin bound (nab) Technology is a Promising Method for Anti-cancer Drug Delivery. // Recent Pat Anticancer Drim Dkrnv 9ПП9 V P

55. Karmali P.P., Kotamraju V.R., Kastantin M., Black M., Missirlis D., Tirrell M., Ruoslahti E. Targeting of albumin-embedded paclitaxel nanoparticles to tumors. //Nanomedicine. 2009. V, 5. №1. P. 73-82.

56. Henderson I.C., Bhatia V. Nab-paclitaxel for breast cancer: a new formulation with an improved safety profile and greater efficacy. // Expert Rev Anticancer Ther. 2007. V. 7. №7. P. 919-943.

57. Moreno-Aspitia A., Perez E.A. Nanoparticle albumin-bound paclitaxel (ABI-007): a newer taxane alternative in breast cancer. // Future Oncol. 2005. V. 1. №6. P. 755-762.

58. Bareford L.M., Swaan P.W. Endocytic mechanisms for targeted drug delivery. // Advanced drug delivery reviews. 2007. V. 59. №8. P. 748-758.

59. Mousavi S.A., Malerod L., Berg T., Kjeken R. Clathrin-dependent endocytosis. // Biochem J. 2004. V. 377. №Pt l.P. 1-16.

60. Rodemer C., Haucke V. Clathrin/AP-2-dependent endocytosis: a novel playground for the pharmacological toolbox? // Handb Exp Pharmacol. 2008. V. №186. P. 105-122.

61. Mousavi S.A., Malerod L., Berg T., Kjeken R. Clathrin-dependent endocytosis. // The Biochemical journal. 2004. V. 377. №Pt 1. P. 1-16.

62. Slepnev Y.I., De Camilli P. Accessory factors in clathrin-dependent synaptic vesicle endocytosis. //Nat Rev Neurosci. 2000. V. 1. №3. P. 161-172.

63. Marsh M., McMahon H.T. The structural era of endocytosis. // Science. 1999. V. 285. №5425. P. 215-220.

64. Bareford L.M., Swaan P.W. Endocytic mechanisms for targeted drug delivery. // Adv Drug Deliv Rev. 2007. V. 59. №8. P. 748-758.

65. Hinshaw J.E., Schmid S.L. Dynamin self-assembles into rings suggesting a mechanism for coated vesicle budding. //Nature. 1995. V. 374. №6518. P. 190-192.

66. Ferguson S.M., De Camilli P. Dynamin, a membrane-remodelling GTPase. // Nat Rev Mol Cell Biol. 2012. V. 13. №2. P. 75-88.

67. Aniento F., Emans N., Griffiths G., Gruenberg J. Cytoplasmic dynein-dependent vesicular transport from early to late endosomes. // The Journal of cell biology. 1993. V. 123. №6 Pt 1. P. 1373-1387.

68. Stahl P.D., Barbieri M.A. Multivesicular bodies and multivesicular endosomes: the "ins and outs" of endosomal traffic. // Science's STKE : signal transduction knowledge environment. 2002. V. 2002. №141. P. pe32.

69. Piper R.C., Luzio J.P. Late endosomes: sorting and partitioning in multivesicular bodies. // Traffic. 2001. V. 2. №9. P. 612-621.

70. Pillay C.S., Elliott E., Dennison C. Endolysosomal proteolysis and its regulation. // The Biochemical journal. 2002. V. 363. №Pt 3. P. 417-429.

71. Eskelinen E.-L. Roles of LAMP-1 and LAMP-2 in lysosome biogenesis and autophagy. // Molecular Aspects of Medicine. 2006. V. 27. №5-6. P. 495-502.

72. Smart E.J., Graf G.A., McNiven M.A., Sessa W.C., Engelman J.A., Scherer P.E., Okamoto T., Lisanti M.P. Caveolins, liquid-ordered domains, and signal transduction. // Mol Cell Biol. 1999. V. 19. №11. P. 7289-7304.

73. Khalil I.A., Kogure K., Akita H., Harashima H. Uptake pathways and subsequent intracellular trafficking in nonviral gene delivery. // Pharmacol Rev. 2006. V. 58. №1. P. 32-45.

74. Lajoie P., Nabi I.R. Chapter 3 Lipid Rafts, Caveolae, and Their Endocytosis. In: Kwang WJ, editor. International Review of Cell and Molecular Biology: Academic Press; 2010. p. 135163.

75. Damm E.M., Pelkmans L., Kartenbeck J., Mezzacasa A., Kurzchalia T., Helenius A. Clathrin- and caveolin-1-independent endocytosis: entry of simian virus 40 into cells devoid of caveolae. // J Cell Biol. 2005. V. 168. №3. P. 477-488.

76. Rawat A., Vaidya B., Khatri K., Goyal A.K., Gupta P.N., Mahor S., Paliwal R., Rai S., Vyas S.P. Targeted intracellular delivery of therapeutics: an overview. // Die Pharmazie. 2007. V. 62. №9. P. 643-658.

77. Fenton C., Perry C.M. Gemtuzumab ozogamicin: a review of its use in acute myeloid leukaemia. // Drugs. 2005. V. 65. №16. P. 2405-2427.

78. Cang S., Mukhi N., Wang K., Liu D. Novel CD20 monoclonal antibodies for lymphoma therapy. // Journal of Hematology & Oncology. 2012. V. 5. №1. P. 64.

79. Chari R.V.J. Targeted Cancer Therapy: Conferring Specificity to Cytotoxic Drugs. // Accounts of Chemical Research. 2007. V. 41. №1. P. 98-107.

80. Casi G., Neri D. Antibody-drug conjugates: basic concepts, examples and future perspectives. // Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 2012. V. 161. №2. P. 422-428.

81. Uckun F.M., Narla R.K., Jun X., Zeren Т., Venkatachalam Т., Waddick K.G., Rostostev A., Myers D.E. Cytotoxic activity of epidermal growth factor-genistein against breast cancer cells. // Clin Cancer Res. 1998. V. 4. №4. P. 901-912.

82. Rihova B. Targeting of Drugs to Cell Surface Receptors. // Critical Reviews in Biotechnology. 1997. V. 17. №2. P. 149-169.

83. Jaracz S., Chen J., Kuznetsova L.V., Ojima I. Recent advances in tumor-targeting anticancer drug conjugates. // Bioorganic & medicinal chemistry. 2005. V. 13. .№17. P. 50435054.

84. Bildstein L., Dubernet C., Couvreur P. Prodrug-based intracellular delivery of anticancer agents. // Advanced drug delivery reviews. 2011. V. 63. №1-2. P. 3-23.

85. Singh Y., Palombo M., Sinko P.J. Recent trends in targeted anticancer prodrug and conjugate design. // Current medicinal chemistry. 2008. V. 15. №18. P. 1802-1826.

86. Sanderson R.J., Hering M A., James S.F., Sun M.M., Doronina S.O., Siadak A.W., Senter P.D., Wahl A.F. In vivo drug-linker stability of an anti-CD30 dipeptide-linked auristatin immunoconjugate. // Clin Cancer Res. 2005. V. 11. №2 Pt 1. P. 843-852.

87. Krippendorff B.F., Kuester K., Kloft C., Huisinga W. Nonlinear pharmacokinetics of therapeutic proteins resulting from receptor mediated endocytosis. // J Pharmacokinet Pharmacodyn. 2009. V. 36. №3. P. 239-260.

88. Malyankar U.M. Tumor-associated antigens and biomarkers in cancer and immune therapy. // Int Rev Immunol. 2007. V. 26. №3-4. P. 223-247.

89. Тюряева И.И. Опухолевые антигены. // Цитология. 2008. V. 50. №3. Р. 189-209.

90. Duffour M.T., Chaux P., Lurquin C., Cornells G., Boon Т., van der Bruggen P. A MAGE-A4 peptide presented by HLA-A2 is recognized by cytolytic T lymphocytes. // Eur J Immunol. 1999. V. 29. №10. P. 3329-3337.

91. Houghton A.N. Cancer antigens: immune recognition of self and altered self. // J Exp Med. 1994. V. 180. №1. P. 1-4.

92. Carubia J.M., Yu R.K., Macala L.J., Kirkwood J.M., Varga J.M. Gangliosides of normal and neoplastic human melanocytes. // Biochem Biophys Res Commun. 1984. V. 120. №2. P. 500-504.

93. Tang C.K., Katsara M., Apostolopoulos V. Strategies used for MUC1 immunotherapy: human clinical studies. // Expert Rev Vaccines. 2008. V. 7. №7. P. 963-975.

94. Casalini P., Iorio M.V., Galmozzi E., Menard S. Role of HER receptors family in development and differentiation. //J Cell Physiol. 2004. V. 200. №3. P. 343-350.

95. Olayioye M.A., Neve R.M., Lane H.A., Hynes N.E. The ErbB signaling network: receptor heterodimerization in development and cancer. // EMBO J. 2000. V. 19. №13. P. 3159-3167.

96. Барышников А.Ю. Взаимоотношение опухоли и иммунной системы организма. // Практическая онкология. 2003. V. 4. №3. Р. 127-130.

97. Wang D., Rayani S., Marshall J.L. Carcinoembryonic antigen as a vaccine target. // Expert Rev Vaccines. 2008. V. 7. №7. P. 987-993.

98. Singer J.W., De Vries P., Bhatt R, Tulinsky J., Klein P., Li C., Milas L., Lewis R.A., Wallace S. Conjugation of camptothecins to poly-(L-glutamic acid). // Ann N Y Acad Sci. 2000. V. 922. P.136-150.

99. Nicolay K., Fok J.J., Voorhout W. Post LA,, de Kruijff B. Cytofluorescence detection of adriamycin-mitochondria interactions in isolated, perfused rat heart. // Biochim Biophys Acta. 1986. V. 887. №1. P. 35-41.

100. Evdokimova V.N., Butterfield L.H. Alpha-fetoprotein and other tumour-associated antigens for immunotherapy of hepatocellular cancer. // Expert Opin Biol Ther. 2008. V. 8. №3. P. 325336.

101. Abelev G.I., Eraiser T.L. Cellular aspects of alpha-fetoprotein reexpression in tumors. // Semin Cancer Biol. 1999. V. 9. №2. P. 95-107.

102. Mizejewski G.J. Alpha-fetoprotein structure and function: relevance to isoforms, epitopes, and conformational variants. // Exp Biol Med (Maywood). 2001. V. 226. №5. P. 377-408.

103. Castelli C., Rivoltini L., Andreola G., Carrabba M., Renkvist N., Parmiani G. T-cell recognition of melanoma-associated antigens. // J Cell Physiol. 2000. V. 182. №3. P. 323-331.

104. Van den Eynde B., Peeters O., De Backer O., Gaugier B., Lucas S., Boon T. A new family of genes coding for an antigen recognized by autologous cytolytic T lymphocytes on a human melanoma. // J Exp Med. 1995. V. 182. №3. P. 689-698.

105. Lewis J. J., Houghton A.N. Definition of tumor antigens suitable for vaccine construction. // Semin Cancer Biol. 1995. V. 6. №6. P. 321-327.

106. Deprez-de Campeneere D., Masquelier M., Baurain R., Trouet A. Drug targeting in cancer treatment: active daunorubicin-protein conjugates. // Prog Clin Biol Res. 1982. V. 102 pt A. P. 291-298.

107. Maeda H., Wu J., Sawa T., Matsumura Y., Hori K. Tumor vascular permeability and the EPR effect in macromolecular therapeutics: a review. // J Control Release. 2000. V. 65. №1-2. P. 271-284.

108. Noguchi Y., Wu J., Duncan R., Strohalm J., Ulbrich K., Akaike T., Maeda H. Early phase tumor accumulation of macromolecules: a great difference in clearance rate between tumor and normal tissues. // Jpn J Cancer Res. 1998. V. 89. №3. P. 307-314.

109. Kratz F., Beyer U. Serum proteins as drug carriers of anticancer agents: a review. // Drug Deliv. 1998. V. 5. №4. P. 281-299.

110. Kratz F., Beyer U., Collery P., Lechenault F., Cazabat A., Schumacher P., Falken U., Unger C. Preparation, characterization and in vitro efficacy of albumin conjugates of doxorubicin. // Biol Pharm Bull. 1998. V. 21. №1. P. 56-61.

111. Kratz F., Beyer U, Roth T., Schutte M.T., Unold A., Fiebig H.H., Unger C. Albumin conjugates of the anticancer drug chlorambucil: synthesis, characterization, and in vitro efficacy. // Arch Pharm (Weinheim). 1998. V. 331. №2. P. 47-53.

112. Association for Medical Oncology of the German Cancer Society. // Clin Cancer Res. 1999. V. 5. №4. P. 753-759.

113. Warnecke A., Fichtner I., Sass G., Kratz F. Synthesis, cleavage profile, and antitumor efficacy of an albumin-binding prodrug of methotrexate that is cleaved by plasmin and cathepsin B. // Arch Pharm (Weinheim). 2007. V. 340. №8. P. 389-395.

114. Kratz F., Drevs J., Bing G., Stockmar C., Scheuermann K., Lazar P., Unger C. Development and in vitro efficacy of novel MMP2 and MMP9 specific doxorubicin albumin conjugates. // Bioorg Med Chem Lett. 2001. V. 11. №15. P. 2001-2006.

115. Kratz F., Beyer U., Schutte M.T. Drug-polymer conjugates containing acid-cleavable bonds. // Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 1999. V. 16. №3. P. 245-288.

116. Kratz F., Warnecke A., Schmid B., Chung D.E., Gitzel M. Prodrugs of anthracyclines in cancer chemotherapy. // Curr Med Chem. 2006. V. 13. №5. P. 477-523.

117. Unger C., Haring B., Medinger M., Drevs J., Steinbild S., Kratz F., Mross K. Phase I and pharmacokinetic study of the (6-maleimidocaproyl)hydrazone derivative of doxorubicin. // Clin Cancer Res. 2007. V. 13. №16. P. 4858-4866.

118. Kratz F., Mansour A., Soltau J., Warnecke A., Fichtner I., Unger C., Drevs J. Development of albumin-binding doxorubicin prodrugs that are cleaved by prostate-specific antigen. // Arch Pharm (Weinheim). 2005. V. 338. №10. P. 462-472.

119. Abu Ajaj K., Graeser R., Fichtner I., Kratz F. In vitro and in vivo study of an albumin-binding prodrug of doxorubicin that is cleaved by cathepsin B. // Cancer Chemother Pharmacol. 2009. V. 64. №2. P. 413-418.

120. Ajaj K.A., Biniossek M.L., Kratz F. Development of protein-binding bifunctional linkers for a new generation of dual-acting prodrugs. // Bioconjug Chem. 2009. V. 20. №2. P. 390-396.

121. Abu Ajaj K., Kratz F. Development of dual-acting prodrugs for circumventing multidrug resistance. // Bioorg Med Chem Lett. 2009. V. 19. №3. P. 995-1000.

122. Dautry-Varsat A. Receptor-mediated endocytosis: the intracellular journey of transferrin and its receptor. // Biochimie. 1986. V. 68. №3. P. 375-381.

123. Daniels T.R., Delgado T., Rodriguez J.A., Helguera G., Penichet M.L. The transferrin receptor part I: Biology and targeting with cytotoxic antibodies for the treatment of cancer. // Clin Immunol. 2006. V. 121. №2. P. 144-158.

124. Gomme P.T., McCann K.B., Bertolini J. Transferrin: structure, function and potential therapeutic actions. // Drug Discov Today. 2005. V. 10. №4. P. 267-273.

125. Singh M., Atwal H., Micetich R. Transferrin directed delivery of adriamycin to human cells. // Anticancer Res. 1998. V. 18. №3A. P. 1423-1427.

126. Berczi A., Barabas K., Sizensky J.A., Faulk W.P. Adriamycin conjugates of human transferrin bind transferrin receptors and kill K562 and HL60 cells. // Arch Biochem Biophys. 1993. V. 300. №1. P. 356-363.

127. Sun I.L., Sun E.E., Crane F.L., Morre D.J., Faulk W.P. Inhibition of transplasma membrane electron transport by transferrin-adriamycin conjugates. // Biochim Biophys Acta. 1992. V. 1105. №1. P. 84-88.

128. Berczi A., Ruthner M., Szuts V., Fritzer M., Schweinzer E., Goldenberg H. Influence of conjugation of doxorubicin to transferrin on the iron uptake by K562 cells via receptor-mediated endocytosis. // Eur J Biochem. 1993. V. 213. №1. P. 427-436.

129. Lai B.T., Gao J.P., Lanks K.W. Mechanism of action and spectrum of cell lines sensitive to a doxorubicin-transferrin conjugate. // Cancer Chemother Pharmacol. 1998. V. 41. №2. P. 155160.

130. Daniels T.R., Delgado T., Helguera G., Penichet M.L. The transferrin receptor part II: targeted delivery of therapeutic agents into cancer cells. // Clin Immunol. 2006. V. 121. №2. P. 159-176.

131. Hoshino T., Misaki M., Yamamoto M., Shimizu H., Ogawa Y., Toguchi H. In vitro cytotoxicities and in vivo distribution of transferrin-platinum(II) complex. // J Pharm Sci. 1995. V. 84. №2. P. 216-221.

132. Elliott R.L., Stjernholm R., Elliott M.C. Preliminary evaluation of platinum transferrin (MPTC-63) as a potential nontoxic treatment for breast cancer. // Cancer Detect Prev. 1988. V. 12. №1-6. P. 469-480.

133. Head J.F., Wang F., Elliott R.L. Antineoplastic drugs thai interfere with iron metabolism in cancer cells. //Adv Enzyme Regul. 1997. V. 37. P. 147-169.

134. Beyer U., Roth T., Schumacher P., Maier G., Unold A., Frahm A.W., Fiebig H.H., Unger C., Kratz F. Synthesis and in vitro efficacy of transferrin conjugates of the anticancer drug chlorambucil. //J Med Chem. 1998. V. 41. №15. P. 2701-2708.

135. Tanaka T., Shiramoto S., Miyashita M., Fujishima Y., Kaneo Y. Tumor targeting based on the effect of enhanced permeability and retention (EPR) and the mechanism of receptor-mediated endocytosis (RME). // Int J Pharm. 2004. V. 277. №1-2. P. 39-61.

136. Frankel A.E. Increased sophistication of immunotoxins. // Clin Cancer Res. 2002. V. 8. №4. P. 942-944.

137. Frankel A.E., Neville D.M., Bugge T.A., Kreitman R.J., Leppla S.H. Immunotoxin therapy of hematologic malignancies. // Semin Oncol. 2003. V. 30. №4. P. 545-557.

138. Martell L.A., Agrawal A., Ross D.A., Muraszko K.M. Efficacy of transferrin receptor-targeted immunotoxins in brain tumor cell lines and pediatric brain tumors. // Cancer Res. 1993. V. 53. №6. P. 1348-1353.

139. Weaver M., Laske D.W. Transferrin receptor ligand-targeted toxin conjugate (Tf-CRM107) for therapy of malignant gliomas. // J Neurooncol. 2003. V. 65. №1. P. 3-13.

140. Hyer M.L., Sudarshan S., Kim Y., Reed J.C., Dong J.Y., Schwartz D.A., Norris J.S. Downregulation of c-FLIP sensitizes DU145 prostate cancer cells to Fas-mediated apoptosis. // Cancer Biol Ther. 2002. V. 1. №4. P. 401-406.

141. Gijsens A., Missiaen L., Merlevede W., de Witte P. Epidermal growth factor-mediated targeting of chlorin e6 selectively potentiates its photodynamic activity. // Cancer Res. 2000. V. 60. №8. P. 2197-2202.

142. Shimizu N., Shimizu Y., Miskimins W.K. EGF-ricin A conjugates: kinetic profiles of cytotoxic effects and resistant cell variants. // Cell Struct Funct. 1984. V. 9. №3. P. 203-212.

143. Drin G., Mazel M., Clair P., Mathieu D., Kaczorek M., Temsamani J. Physico-chemical requirements for cellular uptake of pAntp peptide. Role of lipid-binding affinity. // Eur J Biochem. 2001. V. 268. №5. P. 1304-1314.

144. Vives E., Richard J.P., Rispal C., Lebleu B. TAT peptide internalization: seeking the mechanism of entry. // Curr Protein Pept Sci. 2003. V. 4. №2. P. 125-132.

145. Krauss U., Kratz F., Beck-Sickinger A.G. Novel daunorubicin-carrier peptide conjugates derived from human calcitonin segments. // J Mol Recognit. 2003. V. 16. №5. P. 280-287.

146. Rezler E.M., Bearss D.J., Hurley L.H. Telomere inhibition and telomere disruption as processes for drug targeting. // Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2003. V. 43. P. 359-379.

147. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. // Analytical Biochemistry. 1987. V. 162. №1. P. 156159.

148. Nechushtan A., Yarkoni S., Marianovsky I., Lorberboum-Galski H. Adenocarcinoma cells are targeted by the new GnRH-PE66 chimeric toxin through specific gonadotropin-releasing hormone binding sites. // J Biol Chem. 1997. V. 272. №17. P. 11597-11603.

149. Liu T.F., Cohen K.A., Ramage J.G., Willingham M.C., Thorburn A.M., Frankel A.E. A diphtheria toxin-epidermal growth factor fusion protein is cytotoxic to human glioblastoma multiforme cells. // Cancer Res. 2003. V. 63. №8. P. 1834-1837.

150. Osborne C.K., Coronado-Heinsohn E. Targeting the epidermal growth factor receptor in breast cancer cell lines with a recombinant ligand fusion toxin (DAB389EGF). // Cancer J Sci Am. 1996. V. 2. №3. P. 175-180.

151. Turturro F. Denileukin diftitox: a biotherapeutic paradigm shift in the treatment of lymphoid-derived disorders. // Expert Rev Anticancer Ther. 2007. V. 7. №1. P. 11-17.

152. Wong B.Y., Gregory S.A., Dang N.H. Denileukin diftitox as novel targeted therapy for lymphoid malignancies. // Cancer Invest. 2007. V. 25. №6. P. 495-501.

153. Duvic M., Talpur R. Optimizing denileukin diftitox (Ontak) therapy. // Future Oncol. 2008. V. 4. №4. P. 457-469.

154. Foss F. Clinical experience with denileukin diftitox (ONTAK). // Semin Oncol. 2006. V. 33. №1 Suppl 3. P. SI 1-16.

155. Mavromatis B.H., Cheson B.D. Novel therapies for chronic lymphocytic leukemia. // Blood Rev. 2004. V. 18. №2. P. 137-148.

156. Walker P.L., Dang N.H. Denileukin diftitox as novel targeted therapy in non-Hodgkin's lymphoma. // Clin J Oncol Nurs. 2004. V. 8. №2. P. 169-174.

157. Eklund J.W., Kuzel T.M. Denileukin diftitox: a concise clinical review. // Expert Rev Anticancer Ther. 2005. V. 5. №1. P. 33-38.

158. Black J.H., McCubrey J.A., Willingham M.C., Ramage J., Hogge D.E., Frankel A.E. Diphtheria toxin-interleukin-3 fusion protein (DT(388)IL3) prolongs disease-free survival of leukemic immunocompromised mice. // Leukemia. 2003. V. 17. №1. P. 155-159.

159. Frankel A., Liu J.S., Rizzieri D., Hogge D. Phase I clinical study of diphtheria toxin-interleukin 3 fusion protein in patients with acute myeloid leukemia and myelodysplasia. // Leuk Lymphoma. 2008. V. 49. №3. P. 543-553.

160. Shimamura T., Husain S.R., Puri R.K. The IL-4 and IL-13 pseudomonas exotoxins: new hope for brain tumor therapy. // Neurosurg Focus. 2006. V. 20. №4. P. El 1.

161. Therapy with and without Temozolomide in Newly Diagnosed Malignant Gliomas: Phase 1 Study of Final Safety Results. //Neurosurgery. 2008. V. P.

162. Jarboe J.S., Johnson K.R., Choi Y., Lonser R.R., Park J.K. Expression of interleukin-13 receptor alpha2 in glioblastoma multiforme: implications for targeted therapies. // Cancer Res. 2007. V. 67. №17. P. 7983-7986.

163. Aqeilan R., Yarkoni S., Lorberboum-Galski H. Interleukin 2-Bax: a novel prototype of human chimeric proteins for targeted therapy. // FEBS Lett. 1999. V. 457. №2. P. 271-276.

164. Aqeilan R., Kedar R., Ben-Yehudah A., Lorberboum-Galski H. Mechanism of action of interleukin-2 (IL-2)-Bax, an apoptosis-inducing chimaeric protein targeted against cells expressing the IL-2 receptor. // Biochem J. 2003. V. 370. №Pt 1. P. 129-140.

165. Bergstrand C.G., Czar B. Demonstration of a new protein fraction in serum from the human fetus. // Scand J Clin Lab Invest. 1956. V. 8. №2. P. 174.

166. Абелев Г.И., Перова С.Д., Храмкова Н.И., Постникова З.А., С. И.И. Эмбриональный сывороточный а-глобулин и его синтез перевиваемыми гепатомами мышей. // Биохимия. 1963. V. 28. №4. Р. 625-634.

167. Татаринов Ю.С. Обнаружение эмбриоспецифического а-глобулина в сыворотке крови больного первичным раком печени. // Вопр. мед. химии. 1964. V. 10. Р. 90-91.

168. Абелев Г.И., Эльгорт Д.А. Альфа-фетопротеин как иммунологический маркер гепатоцеллюлярного рака и тератокарциномы яичка и яичников. // Онкология. 1978. V. 10. Р. 3-17.

169. Brock D.J., Bolton А.Е., Monaghan J.M. Prenatal diagnosis of anencephaly through maternal serum-alphafetoprotein measurement. // Lancet. 1973. V. 2. №7835. P. 923-924.

170. Aitken D.A., Crossley J.A. Neural tube defects/alpha-fetoprotein/Down's syndrome screening. // Curr Opin Obstet Gynecol. 1997. V. 9. №2. P. 113-120.

171. Deutsch H.F. Chemistry and biology of alpha-fetoprotein. // Adv Cancer Res. 1991. V. 56.т» t i nг. zjj-j1z.

172. Luft A.J., Lorscheider F.L. Structural analysis of human and bovine alpha-fetoprotein by electron microscopy, image processing, and circular dichroism. // Biochemistry. 1983. V. 22. №25. P. 5978-5981.

173. Johnson P.J., Poon T.C., Hjelm N.M., Ho C.S., Blake С., Ho S.K. Structures of disease-specific serum alpha-fetoprotein isoforms. // Br J Cancer. 2000. V. 83. №10. P. 1330-1337.

174. Parmelee D.C., Evenson M.A., Deutsch H.F. The presence of fatty acids in human alpha-fetoprotein. // J Biol Chem. 1978. V. 253. №7. P. 2114-2119.

175. Urano Y., Sakai M., Watanabe K., Tamaoki T. Tandem arrangement of the albumin and alpha-fetoprotein genes in the human genome. // Gene. 1984. V. 32. №3. P. 255-261.

176. Лазаревич Н.Л. Молекулярные механизмы регуляции экспрессии гена альфа-фетопротеина. // Биохимия. 2000. V. 65. №1. Р. 139-158.

177. Jose-Estanyol М., Danan J.L. A liver-specific factor and nuclear factor I bind to the rat alpha-fetoprotein promoter. // J Biol Chem. 1988. V. 263. №22. P. 10865-10871.

178. Crowe A.J., Sang L., Li K.K., Lee K.C., Spear B.T., Barton M.C. Hepatocyte nuclear factor 3 relieves chromatin-mediated repression of the alpha-fetoprotein gene. // J Biol Chem. 1999. V. 274. №35. P. 25113-25120.

179. Galarneau L., Pare J., Allard D., Hamel D., Levesque L., Tugwood J., Green S., Belanger L. The alpha 1-fetoprotein locus is activated by a nuclear receptor of the Drosophila FTZ-F1 family. // Mol. Cell. Biol. 1996. V. 16. №7. P. 3853-3865.

180. Shen H., Luan F., Liu H., Gao L., Liang X., Zhang L., Sun W., Ma C. ZHX2 is a repressor of a-fetoprotein expression in human hepatoma cell lines. // Journal of Cellular and Molecular Medicine. 2008. V. 12. №6b. P. 2772-2780.

181. Van Reeth Т., Gabant P., Szpirer C., Szpirer J. Stimulation of the alphaj-feioproiein promoter by unliganded thyroid hormone receptor in association with protein deacetylation. // Molecular and Cellular Endocrinology. 2002. V. 188. №1-2. P. 99-109.

182. Lienard P., De Mees C., Drnze P.L., Dieu M., Dierick J.F., Raes M., Szpirer J., Szpirer C. Regulation of the alpha-fetoprotein promoter: Ku binding and DNA spatial conformation. // Biochimie. 2006. V. 88. №10. P. 1409-1417.

183. Mizejewski G.J. Biological roles of alpha-fetoprotein during pregnancy and perinatal development. // Exp Biol Med (Maywood). 2004. V. 229. №6. P. 439-463.

184. Nishihira J., Koyama Y., Sakai M., Nishi S. The fatty acid binding site of human alpha-fetoprotein. // Biochem Biophys Res Commun. 1993. V. 196. №3. P. 1049-1057.

185. Iturralde M., Alava M.A., Gonzalez B., Anel A., Pineiro A. Effect of alpha-fetoprotein and albumin on the uptake of polyunsaturated fatty acids by rat hepatoma cells and fetal rat hepatocytes. // Biochim Biophys Acta. 1991. V. 1086. №1. P. 81-88.

186. Mizejewski G.J., Pass K.A. Fatty acids, alpha-fetoprotein, and cystic fibrosis. // Pediatrics. 2001. V. 108. №6. P. 1370-1373.

187. Mizejewski G.J., Antelman D.E., Keenan J.F., Preiss I.L. Effects of heavy metals on alpha-fetoprotein in maternal sera and amniotic fluid of pregnant mice. // Toxicology. 1990. V. 64. №1. P. 19-32.

188. Keel B.A., Eddy K.B., He Y., Gangrade B.K., May J.V. Purified human alpha-fetoprotein inhibits follicle-stimulating hormone-stimulated estradiol production by porcine granulosa cells in culture. // Mol Cell Endocrinol. 1993. V. 94. №1. P. 21-25.

189. Mizejewski G.J., Vonnegut M., Jacobson H.I. Estradiol-activated alpha-fetoprotein suppresses the uterotropic response to estrogens. // Proc Natl Acad Sci USA. 1983. V. 80. №9. P. 2733-2737.

190. Jacobson H.I., Bennett J.A., Mizejewski G.J. Inhibition of estrogen-dependent breast cancer growth by a reaction product of alpha-fetoprotein and estradiol. // Cancer Res. 1990. V. 50. №2. P. 415-420.

191. Mizejewski G.J., Warner A.S. Alpha-fetoprotein can regulate growth in the uterus of the immature and adult ovariectomized mouse. // J Reprod Fertil. 1989. V. 85. №1. P. 177-185.

192. Mizejewski G.J., Vonnegut M., Jacobson H.I. Studies of the intrinsic antiuterotropic activity of murine alpha-fetoprotein. // Tumour biology. 1986. V. 7. №1. P. 19-36.

193. Jacobson H.I., Lemanski N-, Narendran A., .Agarwal A., Bennett J.A., Andersen T.T. Hormones of pregnancy, alpha-feto protein, and reduction of breast cancer risk. // Adv Exp Med Biol. 2008. V. 617. P. 477-484.

194. Mizejewski G.J. Biological role of alpha-fetoprotein in cancer: prospects for anticancer therapy. // Expert Rev Anticancer Ther. 2002. V. 2. №6. P. 709-735.

195. Li M.S., Li P.F., He S.P., Du G.G., Li G. The promoting molecular mechanism of alpha-fetoprotein on the growth of human hepatoma Bel7402 cell line. // World J Gastroenterol. 2002. V. 8. №3. P. 469-475.

196. Li M.S., Li P.F., Yang F.Y., He S.P., Du G.G., Li G. The intracellular mechanism of alpha-fetoprotein promoting the proliferation of NIH 3T3 cells. // Cell Res. 2002. V. 12. №2. P. 151156.

197. Li M.S., Li P.F., Li G., Du G.G. Enhancement of proliferation of HeLa cells by the alpha-fetoprotein. // Sheng Wu Hua Xue Yu Sheng Wu Wu Li Xue Bao (Shanghai). 2002. V. 34. №6. P. 769-774.

198. Li M., Li H., Li C., Wang S., Jiang W., Liu Z., Zhou S., Liu X., McNutt M.A., Li G. Alpha-fetoprotein: A new member of intracellular signal molecules in regulation of the PI3K/AKT signaling in human hepatoma cell lines. // Int J Cancer. V. P.

199. Chakraborty M., Mandal C. Immuno-suppressive effect of human alphafetoprotein: a cross species study. // Immunol Invest. 1993. V. 22. №5. P. 329-339.

200. Um S.H., Mulhall C., Alisa A., Ives A.R., Karani J., Williams R., Bertoletti A., Behboudi S. {alpha}-Fetoprotein Impairs APC Function and Induces Their Apoptosis. // J Immunol. 2004. V. 173. №3. P. 1772-1778.

201. Irony-Tur-Sinai M., Grigoriadis N., Lourbopoulos A., Pinto-Maaravi F., Abramsky O., Brenner T. Amelioration of autoimmune neuroinflammation by recombinant human alpha-fetoprotein. // Exp Neurol. 2006. V. 198. №1. P. 136-144.

202. Черешнев B.A., Родионов С.Ю. Черкасов В А, Малютина Н.Н., Орлов О.А. Альфа-фетопротеин. Екатеринбург: УрО РАН; 2004.

203. Dudich Е. ММ-093, a recombinant human alpha-fetoprotein for the potential treatment of rheumatoid arthritis and other autoimmune diseases. // Curr Opin Mol Ther. 2007. V. 9. №6. P. 603-610.

204. Laderoute M.P., Pilarski L.M. The inhibition of apoptosis by alpha-fetoprotein (AFP) and the role of AFP receptors in anti-cellular senescence. // Anticancer Res. 1994. V. 14. №6B. P. 2429-2438.

205. Ohkawa K., Hatano T., Tsukada Y., Matsuda M. Chemotherapeutic efficacy of the protein-doxorubicin conjugates on multidrug resistant rat hepatoma cell line in vitro. // Br J Cancer. 1993. V. 67. №2. P. 274-278.

206. Lubgan D., Jozwiak Z., Grabenbauer G.G., Distel L.V. Doxorubicin-transferrin conjugate selectively overcomes multidrug resistance in leukaemia cells. // Cell Mol Biol Lett. 2009. V. 14. №1. P. 113-127.

207. Sarti D.A., Crandall B.F., Winter J., Robertson R.D., Kaback N.M., Karp L.E. Correlation of biparietal and fetal body diameters: 12—26 weeks gestation. // AJR. American journal of roentgenology. 1981. V. 137. №1. P. 87-91.

208. Dingemans A.C., van Ark-Otte J., Span S., Scagliotti G.V., van der Valk P., Postmus P.E., Giaccone G. Topoisomerase Ilalpha and other drug resistance markers in advanced non-small cell lung cancer. // Lung Cancer. 2001. V. 32. №2. P. 117-128.

209. Bass H.N., Sparkes R.S., Crandall B.F., Marcy S.M. Congenital contractural arachnodactyly, keratoconus, and probable Marfan syndrome in the same pedigree. // The Journal of pediatrics. 1981. V. 98. №4. P. 591-593.

210. Mohandas T., Crandall B.F., Sparkes R.S., Passage M.B., Sparkes M.C. Late replication studies in a human X/13 translocation: correlation with autosomal gene expression. // Cytogenetics and cell genetics. 1981. V. 29. №4. P. 215-220.

211. Uriel J., Villacampa M.J., Moro R., Naval J., Failly-Crepin C. Uptake of radiolabeled alpha-fetoprotein by mouse mammary carcinomas and its usefulness in tumor scintigraphy. // Cancer Res. 1984. V. 44. №11. P. 5314-5319.

212. Baba T., Damke H., Hinshaw J.E., Ikeda K., Schmid S.L., Warnock D.E. Role of dynamin in clathrin-coated vesicle formation. // Cold Spring Harbor symposia on quantitative biology. 1995. V. 60. P. 235-242.

213. Uriel J., Poupon M.F., Geuskens M. Alphafoetoprotein uptake by cloned cell lines derived from a nickel-induced rat rhabdomyosarcoma. // Br J Cancer. 1983. V. 48. №2. P. 261-269.

214. Hajeri-Germond M., Naval J., Trojan J., Uriel J. The uptake of alpha-foetoprotein by C-1300 mouse neuroblastoma cells. // Br J Cancer. 1985. V. 51. №6. P. 791-797.

215. Villacampa M.J., Moro R., Naval J., Failly-Crepin C., Lampreave F., Uriel J. Alpha-fetoprotein receptors in a human breast cancer cell line. // Biochem Biophys Res Commun. 1984. V. 122. №3. P. 1322-1327.

216. Naval J., Villacampa M.J., Goguel A.F., Uriel J. Cell-type-specific receptors for alpha-fetoprotein in a mouse T-lymphoma cell line. // Proc Natl Acad Sci USA. 1985. V. 82. №10. P. 3301-3305.

217. Suzuki Y., Zeng C.Q., Alpert E. Isolation and partial characterization of a specific alpha-fetoprotein receptor on human monocytes. // J Clin Invest. 1992. V. 90. №4. P. 1530-1536.

218. Esteban C., Geuskens M., Uriel J. Activation of an alpha-fetoprotein (AFP)/receptor autocrine loop in HT-29 human colon carcinoma cells. // Int J Cancer. 1991. V. 49. №3. P. 425430.

219. Torres J.M., Laborda J., Naval J., Darracq N., Calvo M., Mishal Z., Uriel J. Expression of alpha-fetoprotein receptors by human T-lymphocytes during blastic transformation. // Mol Immunol. 1989. V. 26. №9. P. 851-857.

220. Biddle W., Sarcione E.J. Specific cytoplasmic alpha-fetoprotein binding protein in MCF-7 human breast cancer cells and primary breast cancer tissue. // Breast Cancer Res Treat. 1987. V. 10. №3. P. 279-286.

221. Mizejewski G.J. Alpha-fetoprotein binding proteins: implications for transmembrane passage and subcellular localization. // Life Sci. 1995. V. 56. №1. P. 1-9.

222. Moro R., Tamaoki T., Wegmann T.G., Longenecker B.M., Laderoute M.P. Monoclonal antibodies directed against a widespread oncofetal antigen: the alpha-fetoprotein receptor. // Tumour Biol. 1993. V. 14. №2. P. 116-130.

223. Kanevsky V., Pozdnyakova L.P., Aksenova O.A., Severin S.E., Katukov V., Severin E.S. Isolation and characterization of AFP-binding proteins from tumor and fetal human tissues. // Biochem Mol Biol Int. 1997. V. 41. №6. P. 1143-1151.

224. Alava M.A., Iturralde M., Lampreave F., Pineiro A. Specific uptake of alpha-fetoprotein and albumin by rat Morris 7777 hepatoma cells. // Tumour Biol. 1999. V. 20. №1. P. 52-64.

225. Mizejewski G.J., MacColl R. Alpha-fetoprotein growth inhibitory peptides: potential leads for cancer therapeutics. // Mol Cancer Ther. 2003. V. 2. №11. P. 1243-1255.

226. Mizejewski G.J., Dias J.A., Hauer C.R., Henrikson K.P., Gierthy J. Alpha-fetoprotein derived synthetic peptides: assay of an estrogen-modifying regulatory segment. // Mol Cell Endocrinol. 1996. V. 118. №1-2. P. 15-23.

227. Butterstein G.M., Mizejewski G.J. Alpha-fetoprotein inhibits frog metamorphosis: implications for protein motif conservation. // Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 1999. V. 124. №1. P. 39-45.

228. Butterstein G., Morrison J., Mizejewski G.J. Effect of alpha-fetoprotein and derived peptides on insulin- and estrogen-induced fetotoxicity. // Fetal Diagn Ther. 2003. V. 18. №5. P. 360-369.

229. Eisele L.E., Mesfin F.B., Bennett J.A., Andersen T.T., Jacobson H.I., Soldwedel H., MacColl Pv., Mizejewski G.J. Studies on a growth-inhibitory peptide derived from alpha-fetoprotein and some analogs. // J Pept Res. 2001. V. 57. №1. P. 29-38.

230. Eisele L.E., Mesfin F.B., Bennett J.A., Andersen T.T., Jacobson H.I., Vakharia D.D., MacColl R., Mizejewski G.J. Studies on analogs of a peptide derived from alpha-fetoprotein having antigrowth properties. // J Pept Res. 2001. V. 57. №6. P. 539-546.

231. Mizejewski G.J., Butterstein G. Survey of functional activities of alpha-fetoprotein derived growth inhibitory peptides: review and prospects. // Curr Protein Pept Sci. 2006. V. 7. №1. P. 73-100.

232. Muehlemann M., Miller K.D., Dauphinee M., Mizejewski G.J. Review of Growth Inhibitory Peptide as a biotherapeutic agent for tumor growth, adhesion, and metastasis. // Cancer Metastasis Rev. 2005. V. 24. №3. P. 441-467.

233. Vakharia D., Mizejewski G.J. Human alpha-fetoprotein peptides bind estrogen receptor and estradiol, and suppress breast cancer. // Breast Cancer Res Treat. 2000. V. 63. №1. P. 41-52.

234. Maurin M., Garnuszek P., Karczmarczyk U., Mirowski M. Studies on 99mTc-labeling of the modified fragment of human alfa-fetoprotein (P149-QY). // Journal of Radioanalytical and Nuclear Chemistry. 2008. V. 275. №1. P. 101-107.

235. Linton K.J., Higgins C.F. The Escherichia coli ATP-binding cassette (ABC) proteins. // Mol Microbiol. 1998. V. 28. №1. P. 5-13.

236. Dean M., Rzhetsky A., Allikmets R. The human ATP-binding cassette (ABC) transporter superfamily. // Genome Res. 2001. V. 11. №7. P. 1156-1166.

237. Dean M., Annilo T. Evolution of the ATP-binding cassette (ABC) transporter superfamily in vertebrates. // Annu Rev Genomics Hum Genet. 2005. V. 6. P. 123-142.

238. Riordan J.R., Ling V. Purification of P-glycoprotein from plasma membrane vesicles of Chinese hamster ovary cell mutants with reduced colchicine permeability. // J Biol Chem. 1979. V. 254. №24. P. 12701-12705.

239. Rees D.C., Johnson E., Lewinson O. ABC transporters: the power to change. // Nat Rev Mol Cell Biol. 2009. V. 10. №3. P. 218-227.

240. Choi C.H. ABC transporters as multidrug resistance mechanisms and the development of chemosensitizers for their reversal. // Cancer Cell Int. 2005. V. 5. P. 30.

241. Deeley R.G., Westlake C., Cole S.P. Transmembrane transport of endo- and xenobiotics by mammalian ATP-binding cassette multidrug resistance proteins. // Physiol Rev. 2006. V. 86. №3. P. 849-899.

242. Baker E.K., El-Osta A. MDR1, chemotherapy and chromatin remodeling. // Cancer Biol Ther. 2004. V. 3. №9. P. 819-824.

243. Labialle S., Gayet L., Marthinet E., Rigal D., Baggetto L.G. Transcriptional regulators of the human multidrug resistance 1 gene: recent views. // Biochem Pharmacol. 2002. V. 64. №5-6. P. 943-948.

244. Breier A., Barancik M., Sulova Z., Uhrik B. P-glycoprotein—implications of metabolism of neoplastic cells and cancer therapy. // Curr Cancer Drug Targets. 2005. V. 5. №6. P. 457-468.

245. Doz F., Roosen N., Rosenblum M.L. Metallothionein and anticancer agents: the role of metallothionein in cancer chemotherapy. // J Neurooncol. 1993. V. 17. №2. P. 123-129.

246. Lazo J.S., Basu A. Metallothionein expression and transient resistance to electrophilic antineoplastic drugs. // Semin Cancer Biol. 1991. V. 2. №4. P. 267-271.

247. Chen A.Y., Liu L.F. DNA topoisomerases: essential enzymes and lethal targets. // Annu Rev Pharmacol Toxicol. 1994. V. 34. P. 191-218.

248. Makin G. Targeting apoptosis in cancer chemotherapy. // Expert Opin Ther Targets. 2002. V. 6. №1. P. 73-84.

249. Fan S., Smith M.L., Rivet D.J., 2nd, Duba D., Zhan Q., Kohn K.W., Fornace A.J., Jr.,

250. П'РАППАГ \/f nicrimti An nf fimptmn opnciti^ap Krooct ломлаг nolle +А Лionlnfmv/ X .1*1, i^iiJl U^/ЫЧ/И VI 1U11VUU11 JVllJiU^VJ l/l WUJl W14J.11/W1. X*A\/1 / WHO IU WlOUlUlill ШШpentoxifylline. // Cancer Res. 1995. V. 55. №8. P. 1649-1654.

251. Sarkar R., Jain R.K., Puri P. Melasma in Indian males. // Dermatol Surg. 2003. V. 29. №2. P. 204.

252. Smith D.J., Ng H., Kluck R.M., Nagley P. The mitochondrial gateway to cell death. // IUBMB Life. 2008. V. 60. №6. P. 383-389.

253. Schwarz M., Andrade-Navarro M.A., Gross A. Mitochondrial carriers and pores: key regulators of the mitochondrial apoptotic program? // Apoptosis. 2007. V. 12. №5. P. 869-876.

254. Sekine I., Shimizu C., Nishio K., Saijo N., Tamura T. A literature review of molecular markers predictive of clinical response to cytotoxic chemotherapy in patients with breast cancer. // Int J Clin Oncol. 2009. V. 14. №2. P. 112-119.

255. Kirkin V., Joos S., Zornig M. The role of Bcl-2 family members in tumorigenesis. // Biochim Biophys Acta. 2004. V. 1644. №2-3. P. 229-249.

256. Daidone M.G., Luisi A., Veneroni S., Benini E., Silvestrini R. Clinical studies of Bcl-2 and treatment benefit in breast cancer patients. // Endocr Relat Cancer. 1999. V. 6. №1. P. 61-68.

257. Adams J.M., Cory S. Bcl-2-regulated apoptosis: mechanism and therapeutic potential. // Curr Opin Immunol. 2007. V. 19. №5. P. 488-496.

258. Wilds C.J., Maier M.A., Tereshko V., Manoharan M., Egli M. Direct observation of a cytosine analogue that forms five hydrogen bonds to guanosine: guanidino G-clamp. // Angew Chem Int Ed Engl. 2002. V. 41. №1. P. 115-117.

259. Cowling V.H., Cole M.D. Mechanism of transcriptional activation by the Myc oncoproteins. // Semin Cancer Biol. 2006. V. 16. №4. P. 242-252.

260. Ponzielli R., Katz S., Barsyte-Lovejoy D., Penn L.Z. Cancer therapeutics: targeting the dark side of Myc. // Eur J Cancer. 2005. V. 41. №16. P. 2485-2501.

261. Dominguez-Sola D., Ying C.Y., Grandori C., Ruggiero L., Chen B., Li M., Galloway D.A., Gu W., Gautier J., Dalla-Favera R. Non-transcriptional control of DNA replication by c-Myc. // Nature. 2007. V. 448. №7152. P. 445-451.

262. Spencer C.A., Groudine M. Control of c-myc regulation in normal and neoplastic cells. // Adv Cancer Res. 1991. V. 56. P. 1-48.

263. Nesbit C.E., Tersak J.M., Prochownik E.V. MYC oncogenes and human neoplastic disease. //Oncogene. 1999. V. 18. №19. P. 3004-3016.

264. Fukumura D., Ushiyama A., Duda D.G., Xu L., Tarn J., Krishna V., Chatterjee K., Garkavtsev I., Jain R.K. Paracrine regulation of angiogenesis and adipocyte differentiation during in vivo adipogenesis. // Circ Res. 2003. V. 93. №9. P. e88-97.

265. Sears R.C. The life cycle of C-myc: from synthesis to degradation. // Cell Cycle. 2004. V. 3. №9. P. 1133-1137.

266. Izumi Y., di Tomaso E., Hooper A., Huang P., Huber J., Hicklin D.J., Fukumura D., Jain R.K., Suit H.D. Responses to antiangiogenesis treatment of spontaneous autochthonous tumors and their isografts. // Cancer Res. 2003. V. 63. №4. P. 747-751.

267. Rapp U.R., Korn C., Ceteci F., Karreman C., Luetkenhaus K., Serafin V., Zanucco E., Castro I., Potapenko T. Myc Is a Metastasis Gene for Non-Small-Cell Lung Cancer. // PLoS One. 2009. V. 4. №6. P. e6029.

268. Ahmed F.E. Molecular markers that predict response to colon cancer therapy. // Expert Rev Mol Diagn. 2005. V. 5. №3. P. 353-375.

269. Butt A.J., McNeil C.M., Musgrove E.A., Sutherland R.L. Downstream targets of growth factor and oestrogen signalling and endocrine resistance: the potential roles of c-Myc, cyclin Dl and cyclin E. // Endocr Relat Cancer. 2005. V. 12 Suppl 1. P. S47-59.

270. Blackburn E.H. Telomeres: structure and synthesis. // J Biol Chem. 1990. V. 265. №11. P. 5919-5921.

271. Olovnikov A.M. A theory of marginotomy. The incomplete copying of template margin in enzymic synthesis of polynucleotides and biological significance of the phenomenon. // J Theor Biol. 1973. V. 41. №1. P. 181-190.

272. Wright W.E., Shay J.W. The two-stage mechanism controlling cellular senescence and immortalization. // Exp Gerontol. 1992. V. 27. №4. P. 383-389.

273. Rhodes D., Fairall L., Simonsson T., Court R., Chapman L. Telomere architecture. // EMBO Rep. 2002. V. 3. №12. P. 1139-1145.

274. Liu J.P. Studies of the molecular mechanisms in the regulation of telomerase activity. // FASEB J. 1999. V. 13. №15. P. 2091-2104.

275. Wu K.J., Grandori C., Amacker M., Simon-Vermot N., Polack A., Lingner J., Dalla-Favera R. Direct activation of TERT transcription by c-MYC. // Nat Genet. 1999. V. 21. №2. P. 220224.

276. Tian X., Chen B., Liu X. Telomere and telomerase as targets for cancer therapy. // Appl Biochem Biotechnol. V. 160. №5. P. 1460-1472.

277. Kang D.I., Kang H.K., Gwak H.S., Han H.K., Lim S.J. Liposome composition is important for retention of liposomal rhodamine in P-glycoprotein-overexpressing cancer cells. // Drug Deliv. 2009. V. 16. №5. P. 261-267.

278. Michieli M., Damiani D., Ermacora A., Masolini P., Michelutti A., Michelutti T., Russo D., Pea F., Baccarani M. Liposome-encapsulated daunorubicin for PGP-related multidrug resistance. // Br J Haematol. 1999. V. 106. №1. P. 92-99.

279. Morinaga T., Sakai M., Wegmann T.G., Tamaoki T. Primary structures of human alpha-fetoprotein and its mRNA. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1983. V. 80. №15. P. 4604-4608.

280. Bogush T., Robert J. Comparative evaluation of the intracellular accumulation and DNA binding of idarubicin and daunorubicin in sensitive and multidrug-resistant human leukaemia K562 cells. // Anticancer Res. 1996. V. 16. №1. P. 365-368.

281. Cartier R., Reszka R. Utilization of synthetic peptides containing nuclear localization signals for nonviral gene transfer systems. // Gene Ther. 2002. V. 9. №3. P. 157-167.

282. Collas P., Alestrom P. Nuclear localization signals: a driving force for nuclear transport of plasmid DNA in zebrafish. // Biochem Cell Biol. 1997. V. 75. №5. P. 633-640.

283. Bremner K.H., Seymour L.W., Logan A., Read ML. Factors influencing the Ability of Nuclear Localization Sequence Peptides To Enhance Nonviral Gene Delivery. // Bioconjugate Chemistry. 2003. V. 15. №1. P. 152-161.

284. Prakash T.P., Kawasaki A.M., Fraser A.S., Vasquez G., Manoharan M. Synthesis of 2'-0-2-[(N,N-dimethylamino)oxy.ethyl] modified nucleosides and oligonucleotides. // J Org Chem. 2002. V. 67. №2. P. 357-369.

285. Fritzer M., Szekeres T., Szuts V., Jarayam H.N., Goldenberg H. Cytotoxic effects of a doxorubicin-transferrin conjugate in multidrug-resistant KB cells. // Biochem Pharmacol. 1996. V. 51. №4. P. 489-493.

286. Lemieux P., Page M. Sensitivity of multidrug-resistant MCF-7 cells to a transferrin-doxorubicin conjugate. // Anticancer Res. 1994. V. 14. №2A. P. 397-403.

287. Garmann D., Warnecke A., Kalayda G.V., Kratz F., Jaehde U. Cellular accumulation and cytotoxicity of macromolecular platinum complexes in cisplatin-resistant tumor cells. // J Control Release. 2008. V. 131. №2. P. 100-106.

288. Sheldon K., Marks A., Baumal R. Sensitivity of multidrug resistant KB-C1 cells to an antibody-dextran-adriamycin conjugate. // Anticancer Res. 1989. V. 9. №3. P. 637-641.

289. Chitambar C.R. Gallium compounds as antineoplastic agents. // Curr Opin Oncol. 2004. V. 16. №6. P. 547-552.

290. Ehrlich P. The partial function of cells. (Nobel Prize address given on 11 December 1908 at Stockholm).. // Int Arch Allergy Appl Immunol. 1954. V. 5. №2. P. 67-86.

291. Butcher E.C., Weissman I.L. Direct fluorescent labeling of cells with fluorescein or rhodamine isothiocyanate. I. Technical aspects. // J Immunol Methods. 1980. V. 37. №2. P. 97108.

292. Le Bouteiller P.P., Mishal Z., Lemonnier F.A., Kourilsky F.M. Quantification by flow cytofluorimetry of HLA class I molecules at the surface of murine cells transformed by cloned HLA genes. // J Immunol Methods. 1983. V. 61. №3. P. 301-315.

293. Fenton C., Perry C.M. Spotlight on gemtuzumab ozogamicin in acute myeloid leukaemia. // BioDrugs : clinical immunotherapeutics, biopharmaceuticals and gene therapy. 2006. V. 20. №2. P. 137-139.

294. Torres J.M., Geuskens M., Uriel J. Receptor-mediated endocytosis and recycling of alpha-fetoprotein in human B-lymphoma and T-leukemia cells. // Int J Cancer. 1991. V. 47. №1. P. 110-117.

295. Esteban C., Trojan J., Macho A., Mishal Z., Lafarge-Frayssinet C., Uriel J. Activation of an alpha-fetoprotein/receptor pathway in human normal and malignant peripheral blood mononuclear cells. // Leukemia. 1993. V. 7. №11. P. 1807-1816.

296. Biaglow J.E., Miller R.A. The thioredoxin reductase/thioredoxin system: novel redox targets for cancer therapy. // Cancer Biol Ther. 2005. V. 4. №1. P. 6-13.

297. Arunachalam В., Phan U.T., Geuze H.J., Cresswell P. Enzymatic reduction of disulfide bonds in lysosomes: characterization of a gamma-interferon-inducible lysosomal thiol reductase (GILT). // Proc Natl Acad Sci USA. 2000. V. 97. №2. P. 745-750.

298. Kooistra Т., Millard P.C., Lloyd J.B. Role of thiols in degradation of proteins by cathepsins. // Biochem J. 1982. V. 204. №2. P. 471-477.

299. Feener E.P., Shen W.C., Ryser H.J. Cleavage of disulfide bonds in endocytosed macromolecules. A processing not associated with lysosomes or endosomes. // J Biol Chem.1qqh v p 18780-1878sx у у V/ . т • ^ ■ v <-л. • л. » x w I vy v x v f w •

300. Bennett J.A., Semeniuk D.J., Jacobson H.I., Murgita R.A. Similarity between natural and recombinant human alpha-fetoprotein as inhibitors of estrogen-dependent breast cancer growth. // Breast Cancer Res Treat. 1997. V. 45. №2. P. 169-179.

301. DiMarco A. Adriamycin (NSC-123127): mode and mechanism of action. // Cancer Chemother. Rep. 1975. V. 6. P. 91-106.

302. Hamza A., Sarma M.H., Sarma R.H. Plausible interaction of an alpha-fetoprotein cyclopeptide with the G-protein-coupled receptor model GPR30: docking study by molecular dynamics simulated annealing. // J Biomol Struct Dyn. 2003. V. 20. №6. P. 751-758.

303. Tan W., Loke Y.H., Stein C.A., Miller P., Colombini M. Phosphorothioate oligonucleotides block the VDAC channel. // Biophys J. 2007. V. 93. №4. P. 1184-1191.

304. Lai J.C., Tan W., Benimetskaya L., Miller P., Colombini M., Stein C.A. A pharmacologic target of G3139 in melanoma cells may be the mitochondrial VDAC. // Proc Natl Acad Sci U S A. 2006. V. 103. №19. P. 7494-7499.

305. Tan W., Lai J.C., Miller P., Stein C.A., Colombini M. Phosphorothioate oligonucleotides reduce mitochondrial outer membrane permeability to ADP. // Am J Physiol Cell Physiol. 2007. V. 292. №4. P. C1388-1397.

306. Carpenter G., Cohen S. Epidermal growth factor. // Annu Rev Biochem. 1979. V. 48. P. 193-216.

307. Saeki Т., Takashima S., Tachibana М., Koga М., Hiyama Е., Salomon D.S., Holland J.F., Ohnuma Т. Inhibitory effect of telomere-mimic phosphorothioate oligodeoxy nucleotides (S-ODNS) on human tumor cell lines. // Oncology. 1999. V. 57 Suppl 2. P. 27-36.

308. Page T.J., Mata J.E., Bridge J.A., Siebler J.C., Neff J.R., Iversen P.L. The cytotoxic effects of single-stranded telomere mimics on OMA-BL1 cells. // Exp Cell Res. 1999. V. 252. №1. P. 41-49.

309. Berkers J.A., van Bergen en Henegouwen P.M., Boonstra J. Three classes of epidermal growth factor receptors on HeLa cells. // J Biol Chem. 1991. V. 266. №2. P. 922-927.

310. Kroning R., Jones J.A., Horn D.K., Chuang C.C., Sanga R., Los G., Howell S.B., Christen R.D. Enhancement of drug sensitivity of human malignancies by epidermal growth factor. // Br J Cancer. 1995. V. 72. №3. P. 615-619.

311. Blackburn E.H., Chan S., Chang J., Fulton T.B., Krauskopf A., McEachern M., Prescott J., Roy J., Smith C., Wang H. Molecular manifestations and molecular determinants of telomere capping. // Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 2000. V. 65. P. 253-263.

312. Collas P., Alestrom P. Nuclear localization signals enhance germline transmission of a transgene in zebrafish. // Transgenic Res. 1998. V. 7. №4. P. 303-309.

313. Morris M.C., Vidal P., Chaloin L., Heitz F., Divita G. A new peptide vector for efficient delivery of oligonucleotides into mammalian cells. // Nucleic Acids Res. 1997. V. 25. №14. P. 2730-2736.

314. Sinha B.K., Politi P.M. Anthracyclines. // Cancer Chemother Biol Response Modif. 1990. V. 11. P. 45-57.

315. Long B.H., Golik J., Forenza S., Ward B., Rehfuss R., Dabrowiak J.C., Catino J.J., Musial S.T., Brookshire K.W., Doyle T.W. Esperamicins, a class of potent antitumor antibiotics: mechanism of action. // Proc Natl Acad Sci USA. 1989. V. 86. №1. P. 2-6.

316. Kaneta Y., Tsukazaki K., Kubushiro K., Sakayori M., Ueda M., Nozawa S. Selective cytotoxicity of adriamycin immunoconjugate of monoclonal antibody MSN-1 to endometrial adenocarcinoma in vitro and in vivo. // Oncol Rep. 2000. V. 7. №5. P. 1099-1106.

317. Jinno H., Ueda M., Enomoto K., Ikeda T., Kyriakos P., Kitajima M. Effectiveness of an adriamycin immunoconjugate that recognizes the C-erbB-2 product on breast cancer cell lines. // Surg Today. 1996. V. 26. №7. P. 501-507.

318. Yamamoto K., Acton E.M., Henry D.W. Antitumor activity of some derivatives of daunorubicin at the amino and methyl ketone functions. // Journal of Medicinal Chemistry. 2002. V. 15. №8. P. 872-875.

319. Arnon R., Sela M. In vitro and in vivo efficacy of conjugates of daunomycin with antitumor antibodies. // Immunol Rev. 1982. V. 62. P. 5-27.

320. Hurwitz E., Levy R., Maron R., Wilchek M., Arnon R., Sela M. The covalent binding of daunomycin and adriamycin to antibodies, with retention of both drug and antibody activities. // Cancer Res. 1975. V. 35. №5. P. 1175-1181.

321. Biroccio A., Leonetti C., Zupi G. The future of antisense therapy: combination with anticancer treatments. // Oncogene. 2003. V. 22. №42. P. 6579-6588.