Использование контейнеров и упаковочного материала с углеродсодержащим покрытием для хранения аллогенных трансплантатов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.27, кандидат медицинских наук Мусина, Альвина Давлетбаевна

• Мусина, Альвина Давлетбаевна
• кандидат медицинских наук
• 0

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Мусина, Альвина Давлетбаевна

Введение.

Глава 1. Литературный обзор.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Методы физико-химических исследований характеристик асептических биосовместимых углеродсодержащих покрытий на поверхности полимерных материалов.

2.2. Методы исследования антимикробной активности углеродсодержащих пленок и токсикология карбиновых пленок.

2.3. Методы исследования адгезивных свойств углеродсодержащих покрытий.

2.4. Биомикроскопические и бактериологические методы исследований аллотрансплантатов на примере донорской роговицы, хранившейся в специальном контейнере с наноструктурированным углеродсодержащим покрытием

Глава 3. Результаты собственных исследований

3.1. Результаты физико-химических исследований характеристик асептических биосовместимых углеродсодержащих покрытий на поверхности полимерных материалов. Характеристика контейнеров разработанных для хранения нативных аллотрансплантатов и донорской роговицы.

3.2. Результаты исследования антимикробной активности и токсикологии углеродсодержащих пленок. Характеристика наноструктурированных пленок для длительного хранения биологических материалов.

3.3. Результаты исследований адгезивных свойств углеродсодержащих пленок

3.4. Морфологические и бактериологические исследования аллотрансплантата роговицы, подвергнутой длительному хранению в специальном контейнере с наноструктурированным углеродсодержащим покрытием.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Использование контейнеров и упаковочного материала с углеродсодержащим покрытием для хранения аллогенных трансплантатов»

Идеальными материалами для замены тканей и органов, утративших по какой-либо причине свои функции, могут быть точно такие же донорские ткани или целые органы. Первые и впечатляющие успехи на этом пути были достигнуты 100 лет тому назад с первой пересадкой роговицы человеку, выполненной Dr. Eduard Zirm в 1905 году.

Широкое применение в клинической практике кадаверных тканей и органов составляет неоспоримый приоритет отечественной медицины. Советские ученые проводили многочисленные исследования по трансплантации кадаверных тканей и органов. В 1936г. академик В.П. Филатов впервые в мире предложил способ криоконсервации кадаверной роговицы, после чего трансплантация ее стала довольно обыденной операцией. Филатов В.П. также успешно занимался трансплантацией и других кадаверных тканей — слизистой оболочки (1935) и кожи (1937). Михельсон Н. М. (1935) первым в мире использовал в клинической практике трансплантацию кадаверного хряща. Арапов Д. А. (1931-1934) осуществлял в эксперименте и клинике пересадки кадаверных эндокринных желез, Ю.Ю. Вороной еще в 1933г. впервые в мире произвел в клинике пересадку кадаверной почки. То есть, в начале 30-х годов прошлого столетия советская медицина уже уверенно вступила в эру трансплантации, успехи которой способствовали ее плодотворному развитию и прогрессу отечественной клинической трансплантологии.

В современных условиях развитие трансплантологии невозможно без работы Банков Донорских Тканей. Такие черты современности, как урбанизация, возникновение новых мегаполисов, повышенная опасность и вероятность техногенных катастроф, требуют модернизации служб здравоохранения. Одним из направлений деятельности является создание сети Тканевых Банков располагающих современными технологиями длительной консервации донорского материала. Продукция таких банков востребована как в общей хирургической практике (травматология, абдоминальная хирургия, пластическая хирургия), так и в специализированных областях медицины и, в частности, в офтальмологии. Не случайно, что первые Тканевые Банки донорского материала были созданы именно при офтальмологических учреждениях (Филатов В.П., 1936), для их обеспечения запасами донорских глазных тканей. В настоящее время ухудшение экологии, в том числе повышенное воздействие ультрафиолетовых лучей, способствует возникновению атипичных, не встречавшихся до этого, нарушений со стороны глаз. Увеличение частоты ранее относившихся к редким глазным заболеваниям, как «Синдром сухого глаза», симптомы которого теперь можно обнаружить почти у каждого второго жителя большого мегаполиса старше 40- летнего возраста, значительный рост в последнее десятилетие заболеваемости кератоконусом, ранее считавшимся довольно редким заболеванием, - все это диктует необходимость в банках для постоянного- наличия трансплантационного материала в случаях ургентных и массовых операций. И потребность в донорском материале постоянно возрастает во всем мире.

Полноценное сохранение тканей и органов для успешной дальнейшей пересадки является актуальной проблемой современной трансплантологии. Консервация донорских тканей и органов, обеспечивающая снижение метаболических, ферментативных аутолитических процессов и сохранение изолированных тканей и органов в состоянии структурной целостности и жизнеспособности — достаточно трудная задача. Поиск более совершенного метода консервации жизнеспособной донорской ткани продолжается. При этом остается актуальным существование методов как краткосрочного, так и долгосрочного хранения трансплантатов.

Дальнейшее разрешение проблемы консервации донорских тканей возможно путем всестороннего изучения существующих методов и рационального их использования для создания на основе старых, испытанных и изученных разработок, новых, более совершенных способов длительной консервации.

Создание запасов консервированных донорских тканей в многопрофильных тканевых банках, которые бы сохраняли жизнеспособность при длительном хранении, и донорских тканей без сохранения жизнеспособности, но с высокими трансплантационными свойствами является необходимым в службе трансплантации.

Совершенствование операционной техники, усложнение задач реконструктивной и восстановительной хирургии, расширение показаний к операциям трансплантации в настоящее время испытывают потребность в новых, улучшенных методах консервации донорских тканей, которые позволили бы, в частности, поддерживать жизнеспособность тканей как можно на более длительный срок.

Применяемые в настоящее время способы консервации донорских тканей развиваются по трем направлениям и имеют свои преимущества и недостатки в отношении сохранности структуры и биопластических свойств трансплантатов — главного критерия качества донорского материала: ^

1. Методы краткосрочной консервации (по Филатову В. П. и др.) в финансовом отношении наиболее экономичны, но ограничены максимальным сроком консервации роговиц, трансплантатов дермы, слизистых оболочек до 5-х суток, и, практически, трудно применимы в условиях современной трансплантологии. Увеличение времени хранения донорской ткани удобно не только для пациента и хирурга, оно дает возможность проведения необходимых биомикроскопических исследований донорских тканей, а также ее иммунологических и вирусологических исследований.

2. Методы долгосрочного консервирования в различных жидких средах, содержащих вещества, необходимые для поддержания жизнеспособности и размножения клетки вне организма, позволяют заметно удлинять срок хранения донорских материалов. Для поддержания жизнеспособности необходимо добавление в среду аминокислот, углеводов, витаминов в такой же концентрации, как в сыворотке крови; рН среды также должен быть близким к рН крови (7,2 — 7,4); солевой состав питательных сред должен быть близким к концентрации солей в организме. С целью предупреждения роста микробов в консервирующую среду добавляются антибиотики. Среда, предназначенная не: только для поддержания; метаболических процессов и стабилизирующих процессы аутолиза в донорской ткани, но и для размножения клеток, должна содержать сыворотку. Так,: например, органная, культура для хранения донорских роговиц была предложена еще в 1973 г. Summerlin W. Т., Miller G. Е., Harris J. Е., Good R. А. Большинство Европейских Тканевых Банков пользуются; способом хранения^ донорских роговиц в органных культурах; в Великобритании он используется с 1986 г. У этого способа хранения тоже есть свои недостатки: при консервации, со временем, органная культура меняется в результате клеточных метаболических процессов: утилизации ингредиентов питательной среды и выхода отработанных катаболитов. Поэтому для поддержания стабильности питательной; среды необходимо проводить, ее замену каждые 5-15 дней, в зависимости: от композиции среды и ее объема. Смена питательной среды опасна также возможностью инфицирования: донорского материала и возможностью травмы самого донорского материала, что является существенным недостатком такой консервации.

3. Метод низкотемпературного консервирования широко распространен в, США и Японии, входит в номенклатуру методов тканевых банков и позволяет хранить донорские ткани до 5-ти лет. К недостаткам этого метода следует отнести его дороговизну, длительность подготовки материала к замораживанию, необходимость тщательного отмывания деконсервированной ткани от криопротектора, повышенную хрупкость: клеток, например, заднего эпителия роговицы после отогрева, с потерей их во время последующей кератопластики.

Каждый из многообразия способов консервации донорского материала, более или менее успешно применяемый в хирургии, имеет право на существование и является предметом выбора.

Критериями успешного хранения донорского материала являются сохранение его жизнеспособности, структурности при относительно длительном его хранении, с последующим приживлением и биологическим эффектом; поэтому главным в консервации донорских тканей должно быть создание условий, максимально приближенных к физиологическим.

Решать проблему длительного сохранения донорских тканей, совершенствуя только гипотермические методы консервации, не представляется перспективным. Длительное воздействие низкой температуры среды на донорскую ткань вызывает метаболический дисбаланс, который лежит в основе постепенного накопления клетками критической величины «энергетического долга» (Шумаков В. И. и др., 1983). Анализ патофизиологических механизмов пролонгирования клеточного; гомеостаза позволяет считать наиболее оптимальным температурный режим консервации донорской ткани и сохранения ее жизнеспособности в режиме гипобиоза — при температуре 27С (Мороз 3. И., Борзенок С. А., 1988). При таком температурном режиме донорская роговица, например, теоретически может храниться только в питательной среде, поэтому необходимо также создание условий адекватной оксигенации, снабжения субстратами и удаления продуктов катаболизма для протекания клеточных реакций, что поддержало бы изолированные ткани и органы в жизнеспособном состоянии длительное время. В Европейских Тканевых Банках, где реализация, например, донорских роговиц, консервируемых в органных культурах, достигает 2500 в год и более, исследования, направленные на улучшение качества и времени хранения донорских роговиц, продолжаются.

Главная цель в оценке донорского материала, как известно, - состояние клеточных компонентов, волокнистых структур и аморфного матрикса,

• '. 9 морфологические изменения которых указывают не только на качество трансплантата, но и на его функциональный резерв. Отдельно следует остановиться на специфических требованиях предъявляемых к донорскому материалу в офтальмохирургической практике, широко использующей донорскую роговицу. Известно, что гибель клеток происходит вследствие апоптоза или некроза. В результате исследований, проведенных Julie Albon , Andrew В. Tullo, 2000, было установлено, что потеря эндотелиальных клеток донорской роговицы в течение хранения происходит в результате апоптоза клеток и количество апоптически измененных клеток и их скопление в эндотелиальном слое соответствует складчатости донорской роговицы. Степень апоптоза зависит от возраста донора и в меньшей мере - от времени хранения-донорской роговицы. Деформация роговицы и нарастающее натяжение ее структур стимулирует механические разрывы между клетками и отрывы клеток от клеточной матрицы. Результаты исследований, проведенных в. Российском онкологическом центре им. Hi H. Блохина, выявили, что живые клетки обладают способностью ощущать кривизну поверхности; причем величина микронеровностей, на которые реагирует клетка, может быть ничтожна по сравнению с размерами самой клетки; более того, форма и функциональная активность клетки определяется рельефом поверхности,, то есть, состоянием внеклеточного матрикса (Ровенский Ю. А., 2001). При утрате клеткой контактов с внеклеточным матриксом прерывается цепь передачи сигналов внутрь клетки, и такие клетки могут подвергаться генетически запрограммированному самоубийству - апоптозу (Агол В; И., 1996)

Может быть, поэтому в результате многолетнего опыта многие: хирурги до сегодняшнего дня предпочитают использовать для кератопластики донорские роговицы свежеэнуклеированных глаз или донорские роговицы, иссеченные из консервированного цельного глазного яблока непосредственно перед трансплантацией, что исключает деформацию донорской роговицы. Последние данные морфологических исследований указывают на тот факт, что качество донорской роговицы определяется не только возрастом донора, условиями забора донорского материала, среды консервации, а. также сохранением изначальной формы роговицы. .То есть, донорская роговица требует бандажа после ее иссечения; Это может быть достигнуто помещением донорской роговицы в специальный контейнер, изготовленный из полимера, поверхность которого модифицирована. Форма такого контейнера, для донорской роговицы имитирует форму роговицы и имеет вид корнеосклеральной контактной линзы.

Как известно, различные полимеры очень широко применяются в медицине, что также связано с тенденцией использования средств разового применения. Однако проблема заболеваемости инфекциями, вызванными микробами, происходящими из биопленок, непременно образующихся на поверхности любых полимеров, стала настолько угрожающей, что выделен; класс заболеваний «вызванных микробами биопленки». Для обеспечения биосовместимости различных изделий из полимерных материалов с живыми тканями, а также с целью предупреждения образования; биопленки на них, в . конце 90-х годов в медицине начали применяться различные способы, модификации поверхности полимеров, в частности - наномодифицирование поверхностей с помощью нанесения. углеродсодержащих покрытий:: алмазоподобных, нанотрубы, фуллеренсодержащих, карбиновых. В Институте Склифосовского для парентерального питания пациентов применяются зонды, обработанные углеродными пленками. В Институте урологии успешно проводятся, операции протезирования мочеточников с применением пластиковых протезов, обработанных углеродными пленками. В Институте Бакулева используются протезы сосудов и клапанов сердца, обработанные также углеродными пленками.

Важную роль в биологии; медицине играют упаковочные материалы и системы, изготовленные из синтетических полимерных материалов; Такие материалы должны обладать определенным комплексом свойств, в: том числе: биосовместимостью, гемосовместимостью,. асептическими свойствами, антимикробной активностью, при необходимости обеспечивающими феномен биоэпитаксии. Эти качества могут быть обеспечены путем наноструктурирования и модифицирования поверхности материалов.

В 1998 г., в результате совместной работы с кафедрами наукоемких технологий МАТИ и радиоэлектроники МГУ, был предложен способ асептического хранения и транспортировки контактных и интраокулярных линз в контейнерах с углеродсодержащим покрытием (Российский Патент № 2120807 от 27.10.1998г Мусина А.Д.)- В ходе экспериментальных и клинических исследований, проведенных в этой работе, помимо антимикробных свойств, обнаружены были и другие свойства поверхности модифицированной с помощью применения нанотехнологий. Это позволило приступить к разработке способа консервации различных видов донорского материала и, в том числе, жизнеспособной донорской роговицы длительного хранения, созданием условий, максимально приближенных к физиологическим (Мусина А.Д., 2000).

Слежение, исправление, конструирование и контроль над> биологическими системами человека на молекулярном уровне с использованием разрабатываемых наноустройств и наноструктур - это задачи наномедицины. Нанометровый диапазон измерений открывает мир новых свойств вещества.

Биология и медицина представляют собой перспективные области для использования синтетических наноструктурных материалов. Все природные материалы и системы построены из нанообъектов. Именно в интервале наноразмеров, на молекулярном уровне, природа определяет основные характеристики веществ, явлений и процессов. Особенности свойств веществ и материалов в нанометровом диапазоне определяются не только уменьшением размеров структурных элементов, но и проявлением квантовомеханических эффектов, волновой природой процессов переноса и доминирующей ролью поверхностей раздела. Управляя размерами и формой наноструктур,. можно придавать материалам совершенно новые функциональные характеристики, резко отличающиеся от характеристик массивных материалов.

Материалы с наноструктурированными поверхностями (НСП) являются отдельным классом синтетических наноматериалов. Формирование НСП необходимо на поверхности имплантатов и матриц для культивирования клеток, особенно при внедрении в костную систему; для создания медицинских препаратов и лечебных систем наружного применения, в частности, трансдермальных форм, обеспечивающих подачу лекарств через кожу; для формирования; матриц для внутренней адресной доставки лекарств; (Штильман М., 2002; Севастьянов В.И., 1999).

Современные терапевтические клеточные технологии представляют собой новую, интенсивно развивающуюся область медицины. Они • связаны, сг имплантацией в органы и ткани соответствующих клеточных культур. Адресная , доставка клеточных культур возможна на соответствующих: подложках, в том числе на двумерных и трехмерных матрицах. Матрицы и подложки для клеточных культур in vitro должны быть пригодны для качественной адгезии клеток: их распластывания, локомоции-и пролиферации, а также для имплантации in: vivo - в организме человека. Поэтому обязательными свойствами матриц и подложек являются: отсутствие токсичности, биосовместимость, развитая поверхность, хорошие: адгезивные свойства для клеток. Кроме того, в ряде специальных случаев они должны обладать особыми: физико-химическими или химическими: свойствами, например биодеградируемостью, либо особой прочностью, либо гибкостью, либо иметь пористую структуру для формирования межклеточного вещества (Афиногенов Г.Е., Панарин Е.Ф., 1993; Sergeeva N.S., Sviridova I.K., Kirsanova V.A., Chissov V.l., Novikova E.G., 1995).

В качестве исходных материалов, наиболее широко используются в медицине полимерные материалы: полиэтилентерефталат (ПЭТФ), политетрафторэтилен (ПТФЭ) и поливинилиденфлюорид (ПВДФ). Такой выбор определяется как широким использованием указанных полимерных материалов, так и возможностью обеспечения большого диапазона свойств при модифицировании образованных поверхностей: так ГТЭТФ обладает высокоэнергетической полярной поверхностью, а ПТФЭ обладает малыми значениями диэлектрической проницаемости и диэлектрических потерь, низкоэнергетической неполярной поверхностью, а также широким рабочим температурным диапазоном.

Наноструктурированная поверхность (НСП) на основе ГТЭТФ и ПТФЭ могут формироваться обработкой исходной поверхности потоками ионов химически активных и инертных газов и их смесей (CF4* Ar, 02) (В.М. Елинсон, 2001; В.М. Елинсон, В.В.Слепцов, С.Н.Дмитриев, 1998). Модифицирование сформированных НСП может производиться двумя путями: ; нанесением пленок углерода из направленных ионно-плазменных потоков паров углеводородов (Elinson V.M., Sleptsov V.V., Laymin A.N. , Potraysay V.V., Kostuychenko L.N., Moussina A.D.,1999; Sleptsov V.V., Elinson V.M., Simakina N.V., Laymin A.N., Tsygankov I.V., Kivaev A.A., Moussina A.D.',,,. 1996) и магнетронным нанесением высокопористых пленок (Гринченко В.Т., Слепцов В.В., Федоров С.А., 1988). Исследование образцов ПЭТФ, ПТФЭ и ПВДФ после предварительной обработки и после нанесения покрытий показывает, что наноструктурирование (НС) приводит к сглаживанию микронеровностей поверхности (шероховатость уменьшается), а далее, с ростом толщины пленки, высота неровностей начинает увеличиваться, причем диаметр конгломератов почти не изменяется, однако при достижении некоторой толщины покрытия размер характерных особенностей рельефа увеличивается. Предварительная обработка поверхности подложки с помощью, например CF4, приводит к развитию рельефа. Поверхность после достаточно длительной обработки и нанесения покрытия имеет большую шероховатость, чем без предварительной обработки. Увеличение длительности предварительной обработки способствует увеличению шероховатости поверхности, получаемой уже после осаждения покрытия. Шероховатость поверхности при этом увеличивается почти в 100 раз по сравнению с пленкой, наносимой без предварительной обработки. Все эти изменения в структуре поверхности вызывают однозначное изменение фрактальной размерности.

Исследование заряда на НСП и возможность ре1улирования его величины и направления дают возможность предполагать о перспективности применения модифицированных поверхностей в медицине будущего (Moussina A.D., 2005).

Предварительная обработка поверхности полимеров, толщина покрытия, энергия частиц влияют на изменение заряда поверхности полимеров. Это свойство было использовано при изготовлении пластмассовых контейнеров для асептического хранения контактных и интраокулярных линз, а также при изготовлении специальных контейнеров для хранения жизнеспособной донорской роговицы.

Исследование заряда на поверхности полимеров после обработки и последующего нанесения углеродных пленок свидетельствует о некоторых особенностях образования и роста пленок на поверхности, полимеров с различной структурой поверхности. То есть, существует возможность влияния на электростатические свойства полимеров путем наноструктурирования их поверхности (Елинсон В.М., Слепцов В.В., Лямин А.Н., Потрясай В.В., 2002).

Состав и физико-химические свойства поверхности являются важным моментом при формировании НСП и зависят от поставленных исследователями и технологами задач. Так, например, предварительная обработка поверхности пленки ПЭТФ пучком ионов азота и кислорода приводит к разрушению карбонильных связей в поверхностном слое полимера и образованию поперечных С-О-О-С связей между цепями макромолекул. При этом поверхность пленки ПЭТФ становится неполярной и гидрофобной с высокими значениями контактных углов смачивания, что в практике применения изделия с такими характеристиками поверхности обеспечивает асептические свойства и биосовместимость такой пленки.

Исследование антимикробной активности НСП были нашими^ первыми исследованиями на пути преодоления формирования биопленки на поверхности полимера и достижения биосовместимости с окружающими живыми тканями (Elinson V. M., Sleptsov V. V., Laymin A. N., Potrasay V. V., Kostuychenko L. N., Moussina A. D., 1996).

Экспериментальные исследования, проведенные на ПЭТФ, ПТФЭ? и ПВДФ с НСП, сформированной методами ионно-плазменной технологии, указывают, что степень дисперсности поверхности , и способ ее модифицирования определяет возможности и эффективность применения полимеров с модифицированной поверхностью в медицинских целях (Elinson; V. M., Sleptsov V. V., Laymin A. N., Potrasay V. V., Kostuychenko L. N.,. Moussina A. D, 1999). Биосовместимая: НСП предполагает определенный: химический составу атомную? структуру, заряд на-поверхности и способна обеспечивать эффект поляризации ; клеточных мембран, форму и функционирование клеток живых тканей, когда они находятся в контакте с НСП — interface взаимодействие -(например: бессосудистая структура роговичной ткани - НСП).

Наноструктурирование поверхности материалов открывает новые технологические подходы к созданию биологически активных систем. Создание детального механизма воздействия НСП на микроорганизмы; клетки, клеточные структуры, влияние: степени ее дисперсности (фрактальной размернрсти), способов модифицирования требует дальнейших комплексных исследований для более широкого применения в медицине.

Описанные свойства НСП открывают новые, перспективы их применения в области трансплантации тканей и, в. частности, для разработки методов длительного хранения жизнеспособных донорских тканей. Специальных работ ' ' 16 ■ по данной, проблеме до настоящего; времени не выполнялось. Учитывая изложенное, нами сформулирована цель настоящей работы;

Цель работы:

Совершенствование способа длительной консервации аллогенных; трансплантатов путем создания специальных контейнеров и пленочных упаковочных материалов с наноструктурированным углеродсодержащим покрытием для их хранения.

Задачи исследования:

Изучить основные физико-химические характеристики асептических углеродсодержащих покрытий с целью создания специального контейнера' и упаковочного материала для хранения донорских тканей. ^

2.Изучить бактериостатические и адгезивные свойства наноструктурированных покрытий и провести тесты на их токсичность.

3.Разработать специальные контейнеры, и упаковочные пленки: с наноструктурированным покрытием для хранения донорских тканей.

4-Провести сравнительный морфологический анализ нативных трансплантатов на примере донорской роговицы при различных способах консервации.

5.Оптимизировать параметры системы донорская роговица - НСП-питательная среда.

Научная новизна

1. Установлены, подробно исследованы и объяснены эффекты, возникающие на НСП полимеров при их обработке1 потоками энергетических частиц инертных и химически активных газов и их смесей, а также при нанесении углеродсодержащих пленок; исследовано влияние НСП на подлежащие биологические ткани, в том числе различные: аллотрансплантаты и донорскую роговицу. ' 17 '• .■■'

2. Экспериментальные исследования, проведенные на полимерных материалах: полиэтилентерефталат (ПЭТФ), политетрафторэтилен (ПТФЭ) и поливинилиденфлюорид (ПВДФ) с НСП, сформированной методами ионно-плазменной технологии, показали, что химический состав, заряд на поверхности, степень ее дисперсности; и способ ее модифицирования определяют наличие и эффективность антибактериальной активности, биосовместимости и адгезивности НСП.

3. Установлена возможность управления в широких диапазонах зарядовыми характеристиками поверхности полимеров покрытых углеродсожержащими пленками и используемых для изготовления контейнеров, с целью длительного хранения аллотрансплантатов. Показано, что биосовместимость углеродных пленок прямо пропорциональна величине электростатического потенциала, а антибактериальная активность определяется . структурой и рельефом поверхности.

4. Впервые разработана система донорская -ткань -наномодифицированная, биосовместимая, асептическая поверхность питательная среда, которая по результатам проведенных исследований является более совершенной динамической моделью для" хранения жизнеспособного донорского материала.

Практическая значимость

1. Разработанные упаковочные материалы для хранения аллотрансплантатов и специальный контейнер для хранения донорской роговицы с биосовместимой асептической наноструктурированной поверхностью могут использоваться в работе тканевых банков. Углеродсодержащее покрытие, модифицирующее поверхность обрабатываемого полимера, обеспечивает асептические условия хранения аллоплантов, а также донорской роговицы и поддерживает метаболические процессы в донорских тканях. Возможность длительного хранения* жизнеспособных , донорских тканей, в том числе донорской роговицы в асептических пленках и контейнерах с биосовместимой поверхностью, а также безопасная их транспортировка позволят иметь запасы донорского материала.

2. Использование для; трансплантации сохранившего жизнеспособность ' качественного донорского материала обеспечивает благополучный исход операции, уменьшает риск послеоперационных осложнений, гарантирует успешное приживление трансплантата. ,

Основные положения^ выносимые на защиту

1., Биосовместимая НСП, имея: физико-химические характеристики широкого диапазона, предполагает заданный химический; состав, атомную структуру, заряд на поверхности и способна обеспечивать эффект поляризации клеточных мембран, форму и функционирование, клеток живых тканей когда они находятся в контакте с ней.

2. Асептическая; НСП специального контейнера, создавая: в консервирующем растворе слабую катионическую среду, исключает существование каких-либо контаминации в ней, способствует поляризации клеточных структур донорского материала, восстанавливая тем самым потенциалы ее клеточных мембран, что, например, задерживает потерю эндотермальных клеток (ЭК) и обеспечивает длительное хранение жизнеспособной роговицы.

3. Бактерицидная активность НСП определяется её физико-химическими свойствами и степенью рельефа, то есть взаимодействие НСП с микроорганизмами протекает по .двум механизмам: первый связан; с электростатическим свойствами НСП, второй - со степенью дисперсности НСП.

4. Адгезивные свойства НСП позволяют обеспечить оптимальное взаимодействие.в системе донорская ткань - НСП углеродсодержащей плёнки.

Апробация работы

Основные положения работы доложены на следующих научных форумах: на Европейских конференциях «Diamond, Diamond-like and Related Materials» по алмазным и алмазоподобным пленкам и родственным им материалам: Барселона, Испания, 1995; Альбуфейра, Тур, Франция, 1996; Эдинбург,. Шотландия, 1997; Крит, Греция, 1998; Прага, Чехия, 1999; Порто, Португалия, 2000; Зальцбург, Австрия, 2003; "XIII International Congress of Eye Research», международном конгрессе по теоретическим и фундаментальным исследованиям. в: офтальмологии, Париж, Франция, 1998; "9-th International Conference on Modern Materials & Technologies", конференции по современным материалам и технологиям; Флоренция, Италия, 1998; « 5th International Conference on the Applications of Diamond Films and Related Materials», «1st International; Conference: on Frontier Carbon Technology»; международной; конференции по применению алмазоподобных пленок и родственных им материалов, Цукуба, Япония, 1999; международной научно-технической: конференции "Вакуумная наука и техника'1, Москва, 2002; " The First UAE;-International Conference: on Biological and' Medical Physics", международной конференции по биологической и медицинской физике, {Аль-Айн ,. Объединенные Арабские Эмираты, 2005; "XXX. International; World-Ophthalmology Congress, Sao Paulo, Brasil", всемирный офтальмологический/ конгресс, Сан -Пауло; Бразилия, 2006; " Ее 112 Congres De La SFO", конгрессе ассоциации французских офтальмологов, Париж, Франция; 2006; «1st International Conference for Ocular Cell Biology», международной конференции по клеточной биологии в офтальмологии, Кембридж, Великобритания, 2006.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 10 работ в международной и центральной; печати. Получен. 1 патент на изобретение и подана 1 международная.заявка на изобретение.

Заключение диссертации по теме «Хирургия», Мусина, Альвина Давлетбаевна

Выводы

1. Применение полимерных пленок с углеродсодержащими покрытиями на основе НСП и имеющих заданные физико-химические свойства, позволяет пролонгировать жизнеспособность консервируемых донорских материалов при сохранении их биопластических свойств.

2. Биосовместимость углеродных пленок пропорциональна величине их электростатического потенциала. На данном принципе разработаны покрытия с НСП, которые могут использоваться для обработки специальных контейнеров и упаковочных пленок с целью длительного хранения различных видов донорского материала.

3. Углеродсодержащие покрытия обладают антибактериальными свойствами. НСП специального контейнера, создавая в физиологическом буферном растворе слабую катионическую среду, исключает существование каких-либо контаминаций в ней; способствует поляризации клеточных структур, восстанавливая потенциалы клеточных мембран, тем самым сохраняет форму и структуру донорской ткани.

4. Адгезивные свойства предлагаемых покрытий определяются электростатическими свойства НСП и могут способствовать либо адгезии на поверхности химических соединений, белковых структур, клеток, клеточных структур, либо НСП может проявлять себя интактной в отношении биологического материала.

5. Применение асептических специальных контейнеров и упаковочных пленок с биосовместимой поверхностью позволяет увеличивать сроки консервации и запаса донорского материала. Использование для трансплантации сохранившего жизнеспособность качественного донорского материала обеспечивает благополучный исход операции, уменьшает риск послеоперационных осложнений.

6. Создание биологически активной системы с помощью формирования НСП - это решение проблемы длительного хранения жизнеспособных донорских тканей. Практические рекомендации

Для асептического хранения и транспортировки донорского материала, используемого в общей хирургии, впервые разработаны специальный контейнер и упаковочные пленки с биосовместимой асептической НСП. Разработанные для обработки поверхности контейнеров и пленок углеродсодержащие покрытия с НСП способствуют поддерживанию метаболических процессов донорских тканей, обеспечивая тем самым увеличение сроков их жизнеспособности во время консервации. Изготовленные таким образом контейнеры и пленки могут быть использованы для длительного хранения жизнеспособных донорских тканей в условиях многопрофильных тканевых банков, а также при необходимости для безопасной транспортировки донорского материала.

Для консервации донорской роговицы предлагаемый способ консервации обеспечивает:

1. Бандажную функцию для донорской роговицы, которая защищает ее от деформации и возможных механических повреждений.

2. Физико-химические свойства НСП обеспечивают асептическое хранение донорской роговицы, поляризацию клеточных мембран, а также способствуют поддержанию метаболических процессов.

3. Хранение донорской роговицы в специальном контейнере не требует периодической замены питательной среды, тем самым избавляет клетки донорской роговицы от возможных стрессов и исключает возможность инфицирования питательной среды.

4. Увеличение срока хранения донорской роговицы до 30 дней и более.

5. Возможность транспортировки донорских роговиц в контейнерах.

6. Многократное использование контейнеров.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Мусина, Альвина Давлетбаевна, 0 год

1. Абрамов В.Г. Влияние способов консервации на характер приживления говичного трансплантата. В кн. Вопросы восстановительной хирургии. Труды BMA им. С.М.Кирова, 1972, с. 19-23.

2. Абрамов В.Г. Болезнь трансплантата роговицы. Ярославль, 1972

3. Агол В. И., Клетка как архитектурное чудо. 4.2: Цитоскелет, способныйчувствовать и помнить. Соровский образовательный журнал, №4, стр.410; 1996

4. Афиногенов Г.Е., Панарин Е.Ф., Антимикробные полимеры, СПб, Гиппократ, 1993.

5. Бархаш С.А. Трансплантационный материал. В кн. Основы пересадки роговой оболочки. Под ред.Пучковской H.A., Киев, Здоровье, 1971,с.34.

6. Беляев B.C. Использование роговицы плодов и новорожденных для кератопластики в эксперименте и клинике. Автореф.дисс. д.м.н.,М.,1965.

7. Бордюгова Г.Г., Травкин А.Г. Использование антиоксидантов и криопротекторов для консервации роговой оболочки. Применение холода в офтальмологии. Сб.Научн.Трудов, М.,1976, с. 118-120.

8. Бордюгова Г.Г. Различные способы консервации роговицы для послойной кератопластики при послеожоговых бельмах. Повреждение органа зрения продуктами нефтехимии и другими факторами. Сб.Научн.Трудов. Уфа, 1975, с.119-122.

9. Бордюгова Г.Г. Современные вопросы консервации роговой оболочки. Актуальные вопросы кератопластики. М.,1976, с. 10-29.

10. Бушмич Д.Г., Георгиладзе Т.У. Влияние роговичного экстракта надинамику и характер приживления трансплантата при кератопластике. В кн., Проблема пересадки роговой оболочки. Киев, 1966, с.330-334.

11. З.Вассерман И.А.Эксперименты по пересадке консервированной трупной роговицы. В кн. Сб. трудов посвященный 40-летию деятельности акад. В.П.Филатова, Киев, 1938, с. 117-123.

12. Вассерман И.А. Пересадка консервированной трупной роговицы. Вестн. Офтальмологии, 1939, т. 14, вып.2-3, с. 10-24.

13. Вассерман И.А. Пересадка консервированной трупной роговицы при трахоме. Ашхабад, 1947.

14. Вельтер С,Л. Экспериментальное изучение пригодности консервированной роговицы для целей трансплантации. Экспериментальная медицина, 1936, №7,с.93-101.

15. Вельтер С.Л. Экспериментальное изучение пригодности консервированной трупной роговицы для целей трансплантации. В кн. Сб. посвященный 40-летию деятельности В.П.Филатова, Киев,1938, с.44-48.

16. Вельтер С.Л. Экспериментальное изучение пригодности консервированной роговицы для целей трансплантации. Труды 2-го Всесоюзного съезда глазных врачей, М., 1940,с.232.

17. Винникова Д.В., Черкасов В.К. Метод консервации донорских роговиц в условиях гипотермии и гипербарической оксигенации. В кн. Актуальные вопросы офтальмологии, Куйбышев, 1972,с.162-167.

18. Войно-ЯсенецкийВ.В. Труды юбилейной научной конференции посвященной 80-летию акад. В.П.Филатова. М.,1956.

19. Войно-ЯсенецкийВ.В. Ауто- и гомопластическая пересадка кожи и хряща уха, фиксированного в спирте и формалине. Тез.докл.2-ой Всесоюзной конференции.Одесса. 1961., с.76-77.

20. Войно-ЯсенецкийВ. Тканевая несовместимость и пути ее преодоления. М., Медицина. 1965.

21. Войно-ЯсенецкийВ.В. О гистогенезе и структуре ретрокорнеальных пленок. Тез.Докл. Междунар. конфер. по кератопластике и кератопротезированию. Одесса. 1978.,с.115-116.

22. Волков В. В., Шиляев В. Г. Комбинированные повреждения глаз, Л., Медицина, 1976, 160 с.

23. Винецкая М.И. Биохимические показатели ткани роговой оболочки консервированной различными методами. Тез.Докл.Междунар.конф. по кератопластике и кератопротезированию. Одесса. 1978.,с.65-68.

24. Гегелович Е.И., Шестерикова Т.П. Динамика биохимических процессов в роговице при ее консервации. Науч. Материалы Украинского института экспериментальной офтальмологии, Одесса, 1939, с.62-63.

25. Глазко Н.С. Оценка лечебных свойств роговицы консервированной при различных условиях. В кн. Сб. рефератов научных работ, Ставрополь, 1955, вып.1, с.150-151.

26. Глазко Н.С.Структурные изменения в глазном яблоке в условиях различной консервации. Мат.научн.конф. офтальмологов Северной Осетии, Орджоникидзе, 1955, с.82-85.

27. Глазко Н.С.Заживление экспериментального кератита под действием имплантированной роговичной ткани консервированной в экстракте Тамбуканской грязи. Ученые записки Ставропольского мединститута, 1957, вып.1, с.347-352.

28. Горгиладзе Т.У., Шульгина Н.С. Цитотоксические антитела HLA специфичность при пересадке роговицы. Офталь.журн.1985, №6,с.351-353.

29. Горгиладзе Т.У., Шульгина Н.С., Веселовская Э.Ф. Результаты применения криоконсервированной роговицы для сквозной кератопластики в эксперименте. Офталь.журн.1978.№5, с.54-57.

30. Горгиладзе Т.У. Восстановление эндетелия и десцеметовой оболочки после кератопластики. Офталь.журн. 1974, №3, с.229-232.

31. Горгиладзе Т.У.Эффективность частичной сквозной пересадки роговицы по методу Филатова. Тез.Докл.Науч.конф. посвященной 100-летию со дня рождения акад.В.П.Филатова. Одесса,1975, с.110.

32. Гольфельд Н. Г. Послойная пересадка обезвоженной роговицы с укреплением трансплантата клеем, М., Медицина, 1976, 119с.

33. Груша О.В. Некоторые технические особенности операций кератомилеза кератофакии. Тез.Докл.Конгресса Офталь. Огославше,1973,с.8.

34. Гундорова P.A., Полякова Л.Я., Экстренная аутокератопластика с перфорацией роговицы. Актуаль.вопросы Офтальмологии. Куйбышев, 1973,с.112-114.

35. Гундорова P.A., Бордюгова Г.Г., Травкин А.Г. Реконструктивные операции на глазном яблоке. М., Медицина, 1983, с.208.

36. Гундорова P.A., Бордюгова Г.Г., Травкин А.Г.Банк глазных тканей приМосковском НИИ глазных болезней им.Гельмгольца. Вестн.Офтальмологии, 1984, №1, с.51-54.

37. Гундорова P.A., Бордюгова Г.Г., Травкин А.Г., Илатовская JI.B. Сохранность структур роговой оболочки при различных способах консервирования. Тез.Докл. Междунар.конференции по кератопластике и кератопротезированию. Одесса, 1978, с.70-71.

38. Джалиашвили O.A. Сравнительная оценка некоторых методов консервирования роговой оболочки. Вестн. Офтал. 1966, №5, с.№31-34.

39. Дронов М. М. Криоконсервация и трансплантация роговицы, создание низкотемпературных (-196° С) роговичных банков в ВС СССР: Дисс. . д-ра мед. наук., Л., 1987, 324 с.

40. Дронов М. М. Руководство по кератопластике., СПб., Изд-во Полиформ "Влазипресс", 1997, 130 с.

41. Дронов М. М., Матвеев В. П., Кулагин А. М. Низкотемпературный банк роговиц, Кабул., 1985, 16 с.

42. Дронов М. М. Послойная кератопластика в лечении заболеваний и повреждений глаз, М., ЦВМУ МО СССР, 1984, 26с.

43. Ерошевский Т.И.Яхина М.Н. О глазных банках для целей кератопластики. Вестн.Офтал. 1973.№6, с.3-5.

44. Ерошевский Т.И., Затулина H.H., Яхина М.Н. Консервация роговицы в свете цитологических исследований. Офтал. Журн., 1975, №6, с.416-419.

45. Ерошевский Т.Н. О консервации донорской роговицы.

46. Вестн.Офтальмологии, 1977, №1, с.35-38.

47. Ерошевский Т.И. Значение консервации по методу академика В.П.Филатова для организации глазного банка. Тез.Докл. Междунар.конференции по кератопластике и кератопротезированию. Одесса, 1978,с. 72-74.

48. Илатовская JI.B. Ультраструктурные изменения роговицы глаза человека при различных способах консервации. Дисс.к.м.н., М., 1980, 175с.

49. Илатовская JI.B. Роль остаточной влажности при консервации роговицы пособом лиофилизации: электронно-микроскопическое исследование. Морфологические аспекты офтальмологии. Сб.науч.работ., М., 1983, с.68-70.

50. Илатовская JI.B., Хорошилова-Маслова И.П., КулагинИ.Н. Ультраструктурные изменения роговой оболочки глаз человека придлитительной консервации методом замораживания и лиофилизации. Вестн.Офтальмологии, 1981, №2,с.27-32.

51. Коваленко П. П. Основы трансплантологии. — Изд-во. Ростовского университета, 1975. — 185с.

52. Копаева В.Г. Современные аспекты сквозной субтотальной кератопластики. Дисс.д.м.н., М., 1982, 435с.

53. Копаева В.Г., Сухарева Н.И. Применение формалинизированной донорской роговицы в клинике. Тез.Докл.научно-практич.конферен. офтальмологов. Туркм.ССР,Ашхабад,1982, с. 16.

54. Копаева В.Г. Новый способ длительной консервации роговицы для послойной кератопластики. Офтальмохирургия, 1989, №3-4, с.40.

55. Копаева В.Г. Жизнеспособность роговичного эпителия и пересадка роговицы. Матер.1У Съезда офтальмологов СССР, М., 1973,Т.1, с.465-469.

56. Копаева В.Г. Гистохимия окислительных ферментов как метод определения жизнеспособности эндотелия донорской роговицы. В кн. Оптикореконструктивные операции и аллопластика в офтальмологии. М., 1974,с.9-14.

57. Каспаров A.A., Розинова В.Н. Отбор методов стерилизации и консервации донорского материала для сквозной кератопластики. МРЖ.1. Сер.8,1990,№ 10,с.4-7.

58. Логай И.М. Особенности двухсторонней частичной сквозной кератопластики. Автореф.дисс.к.м.н. Одесса, 1967, 285с.

59. Мороз З.И., Борзенок С.А. Медикосоциальная значимость разработки новых способов консервации донорской роговицы для сквознойкератопластики. Медицинская и социальная реабилитация больных при повреждениях органа зрения. Краснодар, 1988, с.20-22.

60. Мамур Р.К. Биохимическое изучение нуклеиновых кислот аминогрупп белков и полисахаридов. В кн.Трансплантация органов и тканей. М.,1966, с.260-261.

61. Мачехин В.А. Экспериментальные исследования по гомопластической пересадке склеры. Автореф. дисс.к.м.н., Одесса, 1963.

62. Мучник С.А.Цитологические исследования консервированной роговицы при пониженной температуре. Архив ангист. и эмбр., 1957, №34,B.3,c.74-132.

63. Миронова Г.Д. Отношение пероксидазных систем к фосфорилирующему окислению. В кн. Митохондрии. Молекулярные механизмы ферментативных реакций. Изд.Наука. М.,1972,с.81-85.

64. Петросянц Е.А. Биомикроскопия трупных консервированных глаз. Вестн. Офтальмологии, 1940,т. 16,вып.1,с.57-60.

65. Петросянц Е.А. Экспериментальное изучение пригодности гетерогенной консервированной ткани при трансплантации. В кн. Сб. трудов Украинского Института экспериментальной офтальмологии. Одесса, 1940, т.1,с.121-126.

66. Пупенко Д.О. Патологическая анатомия консервированных при низкой температуре роговиц глаза. В кн. Сб.научн. работ глазной клиники Одесского мединститута, 1936, вып.2, №1, с.91-103.

67. Пучковская H.A. Пересадка роговицы при стафиломах, выпяченных бельмах и других видах осложненных бельм. Автореф.дисс.д.м.н., 1953.

68. Пучковская H.A. Операции почти полной (субтотальной) пересадки роговицы. Вестн.Офтальмологии, 1950,№29,вып.2,с.31-36.

69. Пучковская Н.А.мелиоративная и оптическая послойная пересадка роговицы. Офтальмол.журн.,1957, №6,с.327-332.

70. Пучковская Н.А.Послойная пересадка роговицы. Материалы III Съезда глазных врачей УССР, Киев, 1959,с.224-228.

71. Пучковская H.A. Основы пересадки роговой оболочки. Под редакцией Пучковской H.A., Киев, Изд.Здоровье, 1971, с.277.

72. Пучковская Н.А.Вопросы технического оснащения операций кератомилеза и кератофакии. Офтальмол.журн., 1973, №3,с.163-166.

73. Пучковская H.A., Шульгина Н.С. Иммунология глазной патологии. М., Медицина, 1983.

74. Пучковская H.A. Лечебная кератопластика и возможности стимуляции регенеративной способности роговой оболочки. Офтальмол.журн., 1983, №2Б,с.69-71.

75. Перелыгин Н.И.Пересадка замороженной роговой оболочки. Тез.докл.П Всесоюзн.конф.по проблеме тканевой несовместимости, консервации и трансплантации органов и тканей. Одесса, 1961, с.43-44.

76. Протасов А.И. Организация длительного хранения донорского материала для целевой кератопластики. Тр.Куйбышевской мед.института, Куйбышев, 1967, Т.42,с.142-146.

77. Ровенский Ю. А., Как клетки ориентируются на местности. Соровскийобразовательный журнал, т.7, № 3, стр.1-8; 2001

78. Савушкина Н.М.Пересадка роговой оболочки, сохраненной при низких температурах. Вестн. Офтальмологии, 1962, №5, с.№35-42.

79. Савушкина Н.М. Зависимость результатов приживления послойных трансплантатов от содержания в них гексозаминов и оксипролина. Вестн. Офтальмологии, 1978, №5,с.55-57.

80. Савчук JI.H. Влияние консервации на иммунологические и трансплантационные свойства некоторых тканей. Дисс.к.м.н., Одесса, 1964.

81. Савчук JI.H.Антигенные и трансплантационные свойства консервированной роговицы. В кн. Проблемы пересадки роговой оболочки. Киев, 1966, с.ЗЗ 8-342.

82. Самалонис JI. Отбор донорской роговичной ткани//Еуе World, 2001, № 2, с. 46.

83. Севастьянов В.И., Биосовместимость. Под ред. Севастьянова В.И., М., 1999.

84. Стукалов С.Е. Иммунологические реакции в лимфатических узлах при кератопластики. Офтал. журн., 1965, №5, 355-359.

85. Стукалов С.Е. Иммунологические исследования в офтальмологии. Воронеж, Изд.Воронежского Университета, 1975, с.45.

86. Стукалов С.Е. Вопросы тканевой несовместимости при кератопластике. В кн. Проблемы гомопластики и аллопластики. Киев, Здоровье, 1967,с.281-285.

87. Темиров Н.Э. Разработка и изучение методов длительной консервации эмбриональных человеческих роговиц. Дисс.к.м.н., Ростов-на-Дону, 1976, 208с.

88. Травкин А.Г. Оценка жизнедеятельности и некоторых механизмов аутолиза роговицы в процессе ее приживления и консервации. Дисс.к.м.н., М., 1974, 146с.

89. Травкин А.Г., Бордюгова Г.Г. Изучение надмолекулярного механизма посмертных изменений роговицы при консервации охлаждением. Применение холода в офтальмологии. Сб. науч.работ, М., 1976,с.116-118.

90. Травкин А.Г., Гундорова P.A., Бордюгова Г.Г. Изменение хемолюминисценции роговицы и активности каталазы при химических ожогах глаз. Проблемы офтальмологии. Одесса., 1975, с.29-31.

91. Травкин А.Г., Деревянко В.П., Цыпин А.Б. Надмолекулярные изменения в консервируемых тканях роговицы при воздействии на нее токоферола. Бюл.экспер.исслед. и медицины. М., 1975, 38с.

92. Травкин А.Г. Способ длительной консервации роговицы. Офтальмол.журн., 1976,с.305-306.

93. Травкин А.Г., Деревянко В.П. Клеточные структуры и некоторые физико-химические процессы в консервируемой роговице. Вестн.офтальмологии, 1977, №1,с.38-40.

94. Травкин А.Г., Гундорова P.A., Донскова Л.П. Способ определения электрических характеристик в консервируемой роговице. В кн. Изобретательство и Рационализация в Медицине. Республ. Сб.научн. тр. 2 МОЛГМИ им. Пирогова, 1983, Вып.12,с.48-49.

95. Травкин А.Г. Сравнительное изучение воздействия а-токоферола, хондроитинсульфата —А на сохранение жизнеспособности роговичной ткани консервированных цельных глазных яблок в различных условиях. Вестн. Офтальмологии, 1974, №5, с.61-62.

96. Филатов В.П. К вопросу о пересадке роговицы. Тр.1 Всесоюзн. Съезда глазных врачей. М., 1927, с.212-214.

97. Филатов В.П. Роговица трупа как материал для пересадки. Вестн. Офтальмологии, 1934, вып.4, №2,с.222-224.

98. Филатов В.П. Современное состояние проблемы пересадки роговой оболочки в СССР. Труды науч.сессии посвященной 75-летию

99. В.П.Филатова, Киев, 1954, с.9-30.

100. Филатов В.П., Баженова М.А. Тканевые культуры высушенной роговицы. Труды Одесского мединститута, Одесса, 1936, Т.1,вып.2,с.85-89.

101. Филатов В.П., Баженова М.А. Экспериментальная пересадка сушеной и замороженной роговицы. Вестн. Офтальмологии, 1940,вып.17,№5,с.536-542.

102. Филатов В.П., Пучковская H.A. К вопросу о полной( тотальной ) пересадке роговицы. Уч.зап.УЭИГБ, 1949,№1,с.З-8.

103. Филатов В.П., Мучник С.Р., Ковалев И.Ф. О жизнеспособности и реактивных свойствах изолированной кожи теплокровных, сохраняемой при пониженной температуре. Бюл.экспер.биол. и мед., 1951, №10, с.309-313.

104. Фукс Б.Б. О строении и жизнеспособности эндотелия консервированной роговицы. Офтал. журнал, 1956, №4, с.240-242.

105. Чередниченко Л.П. Опыт пересадки роговицы обезвоженной силикогелем. Офтал.журн., 1967,№5,с.385-386.

106. Шпак Н.И. Зависимость результатов частичной сквозной кератопластики от некоторых особенностей донорского материала и рецепиента. В кн.Проблемы пересадки роговой оболочки. Киев, 1966, с.350-353.

107. Штильман М. Полимеры медико-биологического назначения и полимерные биоматериалы, Наука и технология в промышленности (Экология, биотехнология, медицина), 3(10)-4(11), 2002

108. П.Шульгина Н.С. Трансплантационный иммунитет при пересадке роговой оболочки. Тез.докл.Междунар.конференции по кератопластике и кератопротезированию. Одесса, 1978, с.55-56.

109. ШумаковВ.И., Штенгальд Е.Ш. Консервация органов. Медицина, 1975, 250 с.

110. Юшко Н.А. Послойно-сквозная пересадка роговой оболочки и применение роговиц мертворожденных в качестве трансплантационного материала при кератопластике (клинические, экспериментальные, морфологические исследования), дисс. д.м.н., Краснодар, 1969.

111. Ablashi D.V., Palestine A.G., Presence of HTLV-III in tears and cells from the eyes of AIDS patients. J.Exper.pathology, 1987, V.3,№4, p.693-703.

112. Allansmith M.R. The eye and immunology. St.Luis, The C.V. Mosby Company, 1982.

113. Ainslie D. Keratoplastique refractif. Bull. Mem.Sos.Frans.Ophthalm, 1972, №84, p.175-185.

114. Anderson C. Corneal transplantation using long term cultured material. Acta Ophthalmol, 1986, v.64, №1, p.93.

115. Aquavella J.,Van Horn D., Hagetty C. Corneal preservation. Am.J.Ophthalmol., 1975, V.80,№5,p.791-800.

116. Aquavella J. Keratoprothesis results. Complications and management. Trans.Amer.Acad.ophthalmol. Otolaryngol., 1982, V.89, №6,p.665-660.

117. Antonios S.R. Contamination of donor cornea post penetrating keratoplasty endophthalmitis. Cornea, 1991, May 10 (3), p.217-220.

118. Ayoubi M.G., Armitage W.J., Easty D.L., Corneal Organ Culture: Effects of Serum and a Stabilised Form of L-glutamine, Br.J.Ophthalmol.,1996; 80:740744.

119. Bourne W.B.M. The cornea, 1988, 940p.

120. Basu P.,Ormsby H. Interlamellar froze-stored corneal homograft in rabbits. AmerJ.Ophthalmol., 1956, p.4271.

121. Basu P.,Ormsby H. Studies of immunity with intra lamellar corneal homografts in rabbits. Amer.J.Ophthalmol., 1956, p.596-601.

122. Bier O.G., Dias da Silva W., Gotze D. Fundamental of immunology. Berlin, Heidelberg, 1986.

123. BisharaS.A., Brautbar C., Zonal variation of HLA expression of human cornea epithelium. Cornea, 1988, V.7,№4, p.252-256.

124. Biswas S.,Suresh P., Bonshek R.E., Corbitt G., Tullo A.B., Ridgway A.E.A., Graft Failure in Human Donor Corneas Due to Transmission of Herpes Simplex Virus, Br.J.Ophthalmol., 2000;84:701-705.

125. Bohnke M. Spendergewebe fur die Keratoplastik//Klin. Mo-natsbl. Augenheikd. — 1991. — Vol. 198. — P. 562-571.

126. Braude L.S., Chandler J.W. Corneal allograft rejection. The role of the major histocompatibility complex. Surv.ophthalmol., 1988,V.27, №5, p.290-305.

127. Chen L., Jin Tang X. Experimental Studies on Heterotransplantation of the Cornea. Folia Ophthalmol., Japan, 1987,V.38, №11,p. 1652-1659.

128. Doughman D.J. Corneal tissue preservation. Int.Ophthalmol.Clin., 1988, V.28, №1, p.50-56.

129. David B. Glasser, Serologic Testing of Cornea Donors, Cornea, 1998, 17(2); 123-128.

130. Durand L. Correction of severe myopia by refractive lamellar keratoplasty with out freezing. J. Fr.D.Ophthalmologie., 1991, V.14, №3, p. 167-175.

131. Easty D.L. Eye banking. Transplantation proceedings, 1989, V.21, №1, p.3120-3121.

132. Edidin M. The tissue distribution and cellular localization of transplantation antigens. Transplantation antigens markers of biological individuality. Ed.by Kohan B.D., Reisfeld R.A., New-York, Academic Press, 1972,p. 125.

133. Epstien R.J., StultingR.D. Corneal neovascularisation. Pathogenesis and inhabitation. Cornea, 1987, V.6,№4, p.250-257.

134. Eastcott H.G. Preservation of corneal graft by freezing. Lancet, 1954, №l,p.237-240.

135. Fischbarg J., Mechanism of fluid transport across corneal endothelium and other epithelial layers: a possible explanation based on cyclic cell volume regulatory changes. British J. Ophthalm., 1997; 81; 85-89.

136. Forester R.,Fine M. Relation of donor age to success in penetrating keratoplasty. Arch.Ophthalmol., 1971, V.l, №85, p.42-48.

137. Foulks G.N., Sanfillipo F.P. Histocompatibility listing for keratoplasty in high risk patient., Ophthalmol., 1983, V.90,№3, p.239-244.

138. Hall J.M.,Smolin G. Changes in the antigenic composition of cultured bovine corneas. Invest.Ophthalmol., 1975,V.14,№4, 295-299.

139. Hanna C. Fate of stromal cell in rabbit lamellar corneal graft, Amer J.Ophthalmol., 1965, V.60,№1, 39-40.

140. Hassany S.M.,Basu P.K. Cytotoxicity of gentamycin on corneal endothelium stored in vitro, Lens Eye Res.,1989, 6(1-2), p.93-107.

141. Herold W. Determination of blood group antigens A and B in the human cornea using the fluorescent antibody technique, Klin.Monatsbl.Augenheilkd., 1972, V.161, №6, p.658-662.

142. Hoffmann F., Pahlitzsch T. Predisposing factors in corneal graft rejection. Cornea, 1989, V.8,№3,p.215-219.

143. Horn D., Shultz R.O. Endotelial survival in cryopreserved human corneas, a scanning electron microscopic study, Amer.J.Ophthalmol.,1974, V.13, №7, p.7-16.

144. Itoi m., Sakimoto T. medium term preservation of the cornea preservation chamber and punch, Acta. Soc. Ophthalmol.Japan,1973, V.77, №11, p. 19641966.

145. Julie Albon , Andrew B. Tullo, Apoptosis in the Endothelium of Human Corneas for Transplantation. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 2000;41:2887- 2893.

146. Jun Shemazaki, Masakazu, Yamada, Corneal Transplantation With Donor Corneas Stored in Moist Chamber and Chondroitin Sulfate-Contaning Medium, Cornea, 1993, 12(2), p. 104-108.

147. Jurgen Bednarz, Vladimir Doubilei, Patricia C.M.Wollnik, Katrin Engelmann, Effect of Three Different Media on Serum Free Culture of Donor Corneas and Isolated Human Corneal Endothelial Cells, BrJ.Ophthalmol., 2001 ;85:1416-1420.

148. Kaufmann H.E., Preserving corneas by freezing, Arch.Ophthalmol., 1965,V.73, p.907-908.

149. Kaufmann H.E., Beuerman R.W. Optisol corneal storage medium, Arch.Ophthalmol., 1991,V. 109, №6, p.864.

150. Kaufmann H.E., Escapin H., Living preserved corneal tissue for penetrating keratoplasty, Arch.Ophthalmol., 1966,V.76, p.471-480.

151. Kaufman H. E., Varnall E. D., Kaufman S. Chondroitin sulfa-te in a new cornea preservation medium//Amer. J. Ophthalmol., 1984, V. 98,p. 112-114.

152. Kaufmann H.E. et al., The cornea, 1988, 940p.

153. King I.H., Glavan S.B. The preservation of eye tissue, Amer.J.Ophthalmol., 1959,V.47, №3, p.303-307.

154. King I.H. Current methods of corneal preservation, Surv.0phthalmol.,1960,№5, p.253-260.

155. Khodadovst A. A., Silversteen A.W. Transplantation immunology of the cornea. Corneal graft failure, Amsterdam, 1973 ,p. 104-105.

156. Kervick G.N. et al., The pattern og corneal graft rejection,Cornea, 1990,V.9,№3,p.234-237.

157. Klima A., Antigenic properties of corneal protein, Sbornik Lekarsky, 1950, №4, p.280.

158. Kuwabara I., Studies on heterotransplantation of cornea, Amer.J.Ophthalmol., 1967, V.53, №6, p.911-917.

159. Lass J.H.,Reinhart W.J. et al., An in vitro and clinical comparison of corneal storage with and without Dextran, Ophthalmology, 1990, N.91, №1, p.96-103.

160. Laflamme M., Valeur comparée des 2 techniques des conserves cornees par graffes des cornee chez le lapin, Canad.J.Ophthalmol.,1977, V.12,№2, p.128-132.

161. Laflamme M., Gadgos-Treuss A., Etude experimentale des keratoplasties transparencies realizes avec discreffons cornees a basis temperature, Ann.Oculist., Paris, 1972, V.205, №8, p.887-902.

162. Lindstrom R. L. Advances in corneal preservation//Trans Am. Ophthalmol. Soc., 1990, Vol. 87,p. 555-648.

163. Moore M.B.,Gebhardt B.M. Fate of lyophilized xenogenic corneal lenticules in intrastromal implantation and epikeratophakia,1.ves.Ophthalmol.Vis.Scien ,1987, V.28№3,p.555-559.

164. Magitot A., Transplantation of human cornea previously preserved in an antiseptic fluid, Klin.Mbl.Augenheilk., 1912, V.59, p. 18-21.

165. McCarey B. E., Kaufman H. E. Improved corneal storage,Invest Ophthalmol Vis Sci., 1974, V. 13,p. 165-173.

166. Mc Dermott et al., Effect of intraocular irregants on the preserved human corneal endothelium, Cornea, 1991, V. 10, №5,p.402-407.

167. Medin W.,Davanger M., The swelling of cornea in bank preservation. The role of barriers and peripheral edge, Acta. Ophthalmol., 1991, Dec., 69(6), p.731-736.

168. Merymah H.T. Cryoprotective agents, cryobiology, 1971, V.8, №2, p.173-183.

169. T.Moller-Pedersen, U.Hartmann, H.J.Moller, N.Ehlers, K.Engelmann, Evalution of Potential Organ Culture Media for Eye Banking Using Human Donor Corneas, Br.J.Opthalmol, 2001; 85:1075-1079.

170. Newsome D.A., Takasugi M., Immunological investigation on patients with transplanted cornea. The role of tissue antigens in keratoplasty, Invest.Ophthalmol. Vis.Scien.,1974,V.13,№23, p.66-71.

171. Nelken E.,Michaelson I.C. Determination of blood group antigens A and B in the human cornea using the fluorescent antibody technique,

172. Nature, 1956,V.l 77,p.840.

173. Nisetic L., Weiteres zurtechnik der hornh aut transplantation, Klin.Augenheilk., 1935, Bd.94, s.801-802.

174. Nartey I.N., Sherravd E.S., Manipulative damage to the endothelium of infant and adult donor corneas, British J. Ophthalmol., 1190, May, 74(5), p.261-264.

175. Pepose Jay S., Transfer of infection via corneal transplantation, transplantation Proceedings, 1989, V.21, №l, p.3130-3132.

176. Pakarinen p., Preservation of cornea for penetrating keratoplasty, an experimental study, Acta ophthalmol., 1969, V.106, №1, p. 17-20.

177. Polack F.M., Cryopreservation of corneas for penetrating keratoplasty, Amer.J.Ophthalmol., 1971, V.71, №2, p.505-515.

178. Payrau P., Experimental and clinical use of uncommon greet material in keratoplasty, The problem of cornea transplantation, Kiev, 1966, p.327-330.

179. Piquot X., Delbose B., Preservation of human cornea in organ culture results of a feasibility clinical protocol, 1990, Bull.Soc.Ophthalmol. Franc.,1. Apr.,90(4),p.429-432.

180. Rycroft P. V., Method for the preservation and sterilization of fresh donor material for full thickness keratoplasty by framycetin, British J.Ophthalmol., 1965, V.49,p.251-258.

181. Romanes G., Case of corneal autotransplantation, British J.Ophthalmol., 1966, V.50, №3, p.156-158.

182. Rich S.J.,Armitage W.J., Propane l-2diol as a potential component of verification solution for corneas, Cryobiology, 1990, Feb. 27(1), p.42-54.

183. Scott M.Whitcup, Robert B.Nussenblatt, Francis W.Price, Chi-Chao Chan, Expression of Cell Adhesion Molecules in Corneal Graft Failure, Cornea, 1993, 12(6):475-480.

184. Simpson E., MHC antigens and the genetic control of immune response transplantation, Proceedings, 1983, V.15, p.186-188.

185. Sollner F., Hockwin O., Ober der gehalt frischer und kauservierter hornhaute an saurelos-lichen, Phosphatverbindungen (nucleotide) Albrecht.V.Graefes Arch.Ophthalmol, 1964, Bd.l67,H.5,s.467-473.

186. Stark W.,Maumence E., Intermediated term. Corneal storage for penetrating keratoplasty, Amer.J.Ophthalmol.,1975, V.795-802.

187. Stocker F.,Eiring A., A tissue culture technique for growing corneal epithelial, stromal and endothelial tissue separately, Amer.J.Ophthalmol.,1958,V.46,p.294-298.

188. Stocker F., Matón M., Long temí preservation of donor tissue for corneal grafting, Amer.j.0phthalmol.,1960,v.49, №4,p.729-740.

189. Scharf J., Nahir A.M., Endothelial cells of rabbit cornea in different storage condition. A quantitative cytochemical study, Ophthalmicres.,1991,23(2),p.9810-9813.

190. Treeseler P.A., Foulks G.N., Thefexpression of HLA antigens by cells in human corneas, Amer.J.Ophthalmol.,1984, V.98, p.763.

191. Tamaki K., Histological study of corneas preserved in two medias, British J.Ophthalmol., 1987,V.71, №8, p.570-577.

192. Vancent M.Borderie, Visnja Sabolic, Oliver Touzeau, Sarah Scheer, Screening Human Donor Corneas During Organ Culture for the Presence of Guttae,

193. Br J.Ophthalmol., 2001; 85: 272-276.

194. Vannas S.,Tiilikainen A., HLA-B12 and HLA-B27 antigens and susceptibility to the corneal allograft reaction, Acta Ophthalmol., 1978, V.56, №5, p.689-696.

195. Volker Dieben H.J. et al., Different influences on corneal graft survival in 539 transplants, Acta Opthalmol., 1982, V.60, №2,p. 190-202.

196. Volker Dieben H.J., Corneal transplantation of the artificial transplant, Proceedings, 1989, V.21, № 1 ,p.3116-3119.

197. Von Horn D., Reversibility of ultrastructural frozotrotion in the endothelium of cryopreserved, Corneal Tissue,Arch.Ophthalmol., 1972,V.87,№4,p.422-425.

198. Weekers R. et al., Keratoplasty, Urgent treatment of the corneal perforation, J.Franc.Ophthalmol., 1979, V.2, №6-7,p. 387-392.

199. Williams K.A. et al., Report from the Australian corneal graft registry, Transplantation, Proceedings, 1989, V.2 l,№l,p.3142-3144.

200. Walkenback R.J.,Corwin J.G., Corneal function after storage in commercial eye bank media, Invest.Ophthalmol.Vis.Scien., 1991,Apr.,32(5),p.1551-1557.