Исследование молекулярных механизмов антираковой активности белка человека SLURP-1 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Шлепова Ольга Викторовна

• Шлепова Ольга Викторовна
• кандидат наук
• 2025

Оглавление диссертации кандидат наук Шлепова Ольга Викторовна

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Степень разработанности темы исследования

Цели и задачи исследования

Научная новизна

Теоретическая и практическая значимость работы

Методология и методы исследования

Положения, выносимые на защиту

Степень достоверности и апробация работы

Личный вклад автора

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ацетилхолиновые рецепторы

1.1.1. Строение никотиновых ацетилхолиновых рецепторов (nAChR)

1.1.1.1. Субъединичный состав nAChR

1.1.1.2. Строение субъединицы nAChR

1.1.1.3. Структура а7-nAChR

1.1.2. Механизм передачи сигнала через nAChR

1.1.3. Фармакология nAChR

1.1.4. Роль nAChR в развитии и прогрессии опухолевых заболеваний

1.1.5. Сигнальные пути, запускаемые активацией а7-nAChR

1.2. Трехпетельные белки - лиганды nAChR - в качестве прототипов противопухолевых препаратов

1.3. Трехпетельный белок SLURP-1: строение и функции

1.3.1. Особенности структуры белка SLURP-1

1.3.2. Функциональная и биологическая активность SLURP-1

1.3.3. Противоопухолевые свойства SLURP-1

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы

2.1.1. Реактивы

2.1.2. Среды и растворы для клеточных культур

2.1.3. Рекомбинантные белки

2.1.4. С интетические пептиды

2.1.5. Олигонуклеотиды

2.1.6. Антитела

2.2. Методы

2.2.1. Культивирование клеток

2.2.2. Анализ жизнеспособности клеток

2.2.3. Анализ миграции клеток

2.2.4. ПЦР в реальном времени

2.2.5. Конфокальная флуоресцентная микроскопия

2.2.6. Нокдаун генов СНША 7 и ЕОГЯ в клетках А549

2.2.7. Проточная цитометрия

2.2.8. Анализ фосфорилирования белков

2.2.9. Анализ клеточного цикла в клетках А549

2.2.10. Анализ апоптоза в клетках А549

2.2.11. Аффинная экстракция

2.2.12. Вестерн-блоттинг

2.2.13. Электрофизиологические записи ооцитов Хепорж \aevis

2.2.14. Модель ксенотрансплантации опухоли, стратегия лечения и прижизненная биолюминесцентная визуализация

2.2.15. Анализ иммуногенности и Oncotag

2.2.16. Исследование острой токсичности

2.2.17. Гистохимия

2.2.18. Клеточный иммуноферментный анализ

2.2.19. Статистический анализ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Изучение влияния на индуцированные никотином онкогенные события в клетках аденокарциномы легкого А549

3.1.1. гБЬиКР-1 отменяет повышение жизнеспособности клеток А549, индуцированное никотином

3.1.2. г8ШКР-1 отменяет индуцированное никотином снижение экспрессии РТЕЫ и повышение экспрессии a7-nAChR в клетках А549

3.2. Определение ключевых сигнальных путей, вовлеченных в действие г8ЬШР-1 в клетках А549

3.2.1. г8ШКР-1 снижает жизнеспособность клеток А549, но не влияет на жизнеспособность нормальных фибробластов легкого '1-38

3.2.2. rSLURP-1 ингибирует миграцию клеток A549, но не нормальных фибробластов легкого

3.2.3. rSLURP-1 не влияет на экспрессию миРНК в клетках A549

3.2.4. rSLURP-1 снижает фосфорилирование PTEN, mTOR и PDGFRP в клетках аденокарциномы легкого A549

3.2.5. rSLURP-1 вызывает остановку клеточного цикла, но не апоптоз в клетках аденокарциномы A549

3.3. Определение ключевого участка молекулы SLURP-1, отвечающего за его антираковую активность

3.3.1. Петля I является основным участком SLURP-1, ответственным за его антипролиферативное действие

3.3.2. Синтетический пептид, имитирующий петлю I белка SLURP-1, ингибирует a7-nAChR, экспрессируемые в ооцитах X. laevis

3.3.3. Пептид Oncotag подавляет рост и миграцию клеток A549, но не нормальных фибробластов

3.3.4. rSLURP-1 образует комплексы с а7-nAChR и EGFR

3.3.5. Влияние rSLURP-1 и Oncotag на жизнеспособность клеток A549 опосредовано только a7-nAChR, а влияние на миграцию - и a7-nAChR, и EGFR

3.4. Исследование влияния rSLURP-1 и Oncotag на рост опухоли в ксенографтной модели карциномы кожи in vivo

3.4.1. rSLURP-1 и его пептидный миметик Oncotag подавляют рост опухоли в ксенотрансплантационной модели

3.4.2. rSLURP-1 и Oncotag обладают низкой иммуногенностью и не проявляют острой токсичности

3.4.3. rSLURP-1 и Oncotag увеличивают экспрессию CHRNA7, CERK, KLF4 и SLURP1 в опухолях A431 у мышей

3.4.4. Oncotag, но не rSLURP-1, устойчиво снижает фосфорилирование проонкогенных мессенджеров в опухолях

3.4.5. Лечение rSLURP1 снижает экспрессию миРНК-31, миРНК-203 и миРНК -221, тогда как Oncotag увеличивает экспрессию миРНК-203

3.4.6. Oncotag связывает только a7-nAChR в опухолях A431/NanoLuc, тогда как rSLURP-1 также взаимодействует с EGFR

3.5. Изучение совместного действия rSLURP-1 и доксорубицина

3.5.1. Повышение дозировки rSLURP-1 не приводит к усилению его противоопухолевого действия in vivo

3.5.2. Совместное применение rSLURP-1 и доксорубицина в уменьшенных концентрациях приводит к аддитивному подавлению миграции клеток А431 в экспериментах in vitro

3.5.3. Комбинация с доксорубицином в низкой дозе повышает противоопухолевую активность rSLURP-1 in vivo

3.5.4. Комбинация rSLURP-1 с доксорубицином в низкой дозе не проявляет токсичности in vivo

3.5.5. Комбинация rSLURP-1 с низкой дозой доксорубицина подавляет экспрессию EGFR в опухолях in vivo

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

БЛАГОДАРНОСТИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование молекулярных механизмов антираковой активности белка человека SLURP-1»

Актуальность темы исследования

В настоящее время онкологические заболевания входят в число наиболее распространенных болезней как в России, так и во всем мире, а также являются второй ведущей причиной смертности населения. Традиционные способы лечения онкологических заболеваний, включающие в себя хирургическое вмешательство, лучевую и химиотерапию, имеют ограниченную эффективность. Поэтому поиск и разработка новых эффективных стратегий лечения злокачественных образований - одна из приоритетных задач современной медицины.

Курение является доказанным фактором развития онкологических заболеваний, включая рак молочной железы, легких, поджелудочной железы, толстой кишки, желудка, мочевого пузыря и других органов [1-3]. Согласно научным данным, никотин и его производные способны активировать никотиновый рецептор а7 типа (a7-nAChR), присутствующий в злокачественных клетках. Активация a7-nAChR, в свою очередь, приводит к стимуляции пролиферации и миграции раковых клеток, что способствует росту опухоли [4,5]. Поэтому nAChR -привлекательная мишень для таргетной терапии опухолей. В качестве одного из перспективных путей в лечении злокачественных неоплазий, связанных с активацией nAChR, предлагается применение высокоаффинных селективных ингибиторов этого рецептора. Известно, что ингибиторы nAChR подавляют рост опухоли in vivo, поэтому они рассматриваются в качестве потенциальных противоопухолевых препаратов [6]. Однако, из-за высокой токсичности таких ингибиторов их применение в терапии опухоли может быть существенно ограничено.

Секретируемый белок человека SLURP-1, антагонист a7-nAChR [7], экспрессируется клетками эпителия, регулирует гомеостаз эпителия и защищает клетки от злокачественной трансформации [8]. SLURP-1 - перспективная основа для создания новых противоопухолевых препаратов. Однако, для этого необходимо получение информации о молекулярных механизмах действия SLURP-1 как в раковых клетках in vitro, так и в опухоли in vivo. На это и была направлена данная работа. Кроме того, в ходе исследований были получены данные об отсутствии иммуногенности и токсичности белка, что увеличивает потенциал SLURP-1 в качестве противоопухолевого агента.

Степень разработанности темы исследования

На сегодняшний день собрано большое количество данных о проонкогенных свойствах a7-nAChR [2,3]. Исследования показывают, что активация a7-nAChR усиливает пролиферацию и инвазивный потенциал злокачественных клеток. Также установлено, что стимуляция данного рецептора снижает эффективность химиотерапии при лечении карцином легкого, полости рта, молочной железы и желудка [9-11]. С другой стороны, ингибирование a7-nAChR приводит к подавлению пролиферации, миграции и ангиогенеза опухолевых клеток in vitro и in vivo [6,1214].

Одними из наиболее изученных ингибиторов a7-nAChR являются трехпетельные а-нейротоксины змей [15,16]. Их эффективность в ингибировании роста опухолей in vivo была продемонстрирована на примере а-кобратоксина [6], однако такие токсины ингибируют а7-nAChR необратимо и с высоким сродством, что может приводить к высокой системной токсичности.

Напротив, некоторые эндогенные белки человека, которые имеют трехпетельную структуру, обратимо модулируют a7-nAChR и могут служить прототипами для специфических и нетоксичных препаратов, нацеленных на a7-nAChR. Например, белок человека SLURP-1, селективный отрицательный аллостерический модулятор a7-nAChR [7], ингибирует рост различных клеток карциномы и глиомы in vitro [17]. Клиническая статистика свидетельствует о прямой зависимости между высокими показателями количества белка SLURP-1 в плазме и благоприятным прогнозом при карциноме поджелудочной железы [18]. С другой стороны, в меланомах экспрессия SLURP1 снижена по сравнению с нормальными клетками [19,20]. Таким образом, повышение уровня SLURP-1 в крови или других тканях организма - потенциальная стратегия терапии рака. На изучение перспективности такой стратегии и возможности ее применения и была направлена данная работа.

Цели и задачи исследования

Целью работы является изучение молекулярных механизмов антираковой активности белка человека SLURP-1. Для достижения заявленной цели были поставлены следующие экспериментальные задачи:

1. Изучить влияние rSLURP-1 на индуцированный никотином рост клеток карциномы легкого. Определить молекулярные механизмы этого влияния.

2. Определить молекулярные механизмы антипролиферативного действия rSLURP-1 in vitro.

3. Определить ключевой участок молекулы rSLURP-1, отвечающий за его антираковую активность.

4. Изучить противоопухолевое действие rSLURP-1 и его пептидного миметика в ксенографтной модели опухоли из клеток карциномы кожи. Определить молекулярные механизмы действия in vivo.

5. Изучить иммуногенность и острую токсичность rSLURP-1 и его пептидного миметика.

6. Изучить эффективность комбинированной терапии rSLURP-1 с химиотерапевтическими препаратами.

Научная новизна

1. Впервые продемонстрирована способность rSLURP-1 блокировать онкогенные эффекты никотина в клеточной линии аденокарциномы легкого A549, а именно предотвращать увеличение жизнеспособности клеток, снижать индуцированную никотином экспрессию а7-nAChR, восстанавливать уровень экспрессии PTEN.

2. Определен ключевой участок молекулы rSLURP-1, отвечающий за его антираковую активность. Показано, что петля I является основным сайтом rSLURP-1, ответственным за его антипролиферативную активность и связывание с a7-nAChR.

3. Показано, что пептидный миметик rSLURP-1, имитирующий петлю I, - Oncotag, имитирует противоопухолевое действие rSLURP-1 in vitro.

4. Впервые показано, что rSLURP-1 связывает рецептор эпидермального фактора роста (EGFR). В то же время Oncotag не связывает EGFR и взаимодействует только с а7-nAChR.

5. Впервые проведено исследование влияния rSLURP-1 и Oncotag на рост и метастазирование опухоли in vivo. Установлено, что оба соединения подавляют опухолевый рост и метастазирование, причем Oncotag, благодаря селективному действию на a7-nAChR, дополнительно снижает агрессивность опухоли в условиях in vivo.

6. Доказано отсутствие острой токсичности и иммуногенности rSLURP-1 и Oncotag.

7. Впервые показано аддитивное противоопухолевое действие rSLURP-1 и доксорубицина in vivo.

Теоретическая и практическая значимость работы

Теоретическая значимость работы обусловлена, во-первых, получением информации о роли белка человека SLURP-1 в отмене проонкогенного действия никотина, во-вторых, установлением рецепторов, которые обуславливают антипролиферативный эффект rSLURP-1 в опухолевых клетках, в-третьих, определением ключевого участка молекулы rSLURP-1, который отвечает за его антираковую активность.

Практическая значимость работы обусловлена, во-первых, получением синтетического пептидного миметика rSLURP-1, содержащего петлю I, - Oncotag. Во-вторых, исследование подтвердило перспективность использования rSLURP-1 и Oncotag как в виде монотерапии злокачественных новообразований, так и в комбинации с химиотерапевтическими препаратами. В-третьих, были получены данные о низкой иммуногенности и отсутствии острой токсичности у обоих исследуемых соединений (rSLURP-1 и Oncotag), что подчеркивает их потенциальную безопасность для клинического применения.

Методология и методы исследования

В работе использовались современные методы молекулярной и клеточной биологии, включая ПЦР в реальном времени, вестерн-блоттинг, конфокальную микроскопию, проточную цитофлюориметрию, электрофизиологию, иммуноферментный анализ, ксенографтную модель опухоли, 3D оптическую томографию для биолюминесценции.

Положения, выносимые на защиту

1. Рекомбинантный SLURP-1 (rSLURP-1) ингибирует проонкогенные эффекты никотина в клеточной линии аденокарциномы легкого A549, а именно: стимуляцию роста клеток, увеличение экспрессии a7-nAChR и подавление экспрессии опухолевого супрессора PTEN.

2. Петля I белка SLURP-1 является основным сайтом, ответственным за его антираковую активность. rSLURP-1 и его пептидный миметик, имитирующий петлю I, Oncotag, снижают жизнеспособность и подавляют миграцию клеток А549.

3. Эффект rSLURP-1 обусловлен взаимодействием с a7-nAChR и EGFR, в то время как Oncotag взаимодействует только с a7-nAChR.

4. rSLURP-1 и Oncotag подавляют рост опухолей из клеток карциномы кожи A431 в ксенографтной модели опухолей. Селективное действие Oncotag на a7-nAChR снижает агрессивность опухоли in vivo.

5. rSLURP-1 и Oncotag обладают низкой токсичностью и иммуногенностью.

6. Доксорубицин в сниженной дозе усиливает противоопухолевое действие rSLURP-1 in vitro и in vivo. Комбинация rSLURP-1 и доксорубицина менее токсична, чем высокая доза доксорубицина.

Степень достоверности и апробация работы

По материалам диссертации опубликовано 5 статей в рецензируемых научных журналх, индексируемых в международных базах данных Web of Science и Scopus, входящих в список ВАК. Результаты диссертации получили квалифицированную апробацию и докладывались на 11 научных конференциях, включая 19-й и 22-й Всемирные конгрессы международного общества токсинологии (Ереван, 2018 и Сингапур, 2024), 16-й Международный симпозиум по холинергическим механизмам (Реховот, 2019), Международную конференцию «Молекулярные механизмы аутофагии при заболеваниях» (Санкт-Петербург, 2021), XXXI и XXXVI Зимние молодёжные научные школы «Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии» (Москва, 2019 и Москва, 2024). Результаты работы обсуждались на межлабораторном семинаре отдела биоинженерии ГНЦ ИБХ РАН (Москва, 2024) и на заседании кафедры физико-химической биологии и биотехнологии физтех-школы биологической и медицинской физики Московского физико-технического института (научно-исследовательского университета).

Личный вклад автора

Все экспериментальные данные, полученные в настоящей работе, были получены соискателем лично или при его определяющем участии за исключением экспериментов, перечисленных ниже. Эксперименты in vivo были выполнены в лаборатории иммунологии ГНЦ ИБХ РАН. Пептиды были синтезированы в лаборатории химии пептидов ФИБХ РАН. Исследование токсичности rSLURP-1 и пептида Oncotag было выполнено сотрудниками лаборатории биологических испытаний ФИБХ РАН. Получение и очистка rSLURP-1 и Oncotag, а также электрофизиологические записи были выполнены сотрудниками лаборатории биоинженерии нейромодуляторов и нейрорецепторов. Автор участвовала в подготовке к

публикации пяти работ, содержащих результаты исследований. Работа была выполнена в лаборатории биоинженерии нейромодуляторов и нейрорецепторов ИБХ РАН в период с 2017 по 2025 год.

Работа выполнена при поддержке Министерства науки и высшего образования РФ

(проект № 075-15-2024-536).

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ацетилхолиновые рецепторы

Традиционно под ацетилхолиновыми рецепторами понимают все мембранные рецепторы, способные связывать ацетилхолин. Исторически их классифицировали на две группы: никотиновые (nAChR) - чувствительные к никотину и мускариновые (mAChR) - активируемые мускарином. Последующие достижения в области структурной и молекулярной биологии продемонстрировали, что эти рецепторы принадлежат к принципиально разным структурным классам.

Группа мускариновых рецепторов включает в себя 5 рецепторов, экспрессирующихся в организме человека. Рецепторы этого семейства демонстрируют широкую тканевую распространенность и экспрессируются в мышечной ткани (кардиомиоцитах и клетках скелетной мускулатуры), нервных ганглиях и нейронах центральной нервной системы, клетках эпителия и иммунной системы. Мускариновые рецепторы относятся к классу GPCR ^-белок-сопряженных рецепторов) и характеризуются канонической структурой с семью трансмембранными а-спиралями, а также внеклеточным ^концевым доменом и внутриклеточным С-концевым фрагментом [21].

nAChR входят в эволюционно консервативное суперсемейство лиганд-зависимых ионных каналов, характеризующихся наличием характерной цистеиновой петли (Cys-loop). К этому же структурному классу относятся: отдельные подтипы серотониновых (5-НТз) рецепторов, рецепторы гамма-аминомасляной кислоты типа А (ОАБАаЯ)) и глициновые рецепторы (ИуЯ). Члены этого суперсемейства представляют собой комплексы, состоящие из пяти субъединиц, локализованные в мембране клетки, формирующие ионный канал. Отличительной особенностью субъединиц этого суперсемейства является наличие внеклеточной цистеиновой петли (СуБпетли), формируемой двумя цистеинами (Cys), которые в субъединицах млекопитающих разделены 13 аминокислотами [22]. Никотиновые рецепторы экспрессируются в нейронах и глиальных клетках центральной и периферической нервной системы, клетках мускулатуры (скелетной и сердечной), эпителия (дыхательных путей, кишечника, кожи и др.) и иммунной системы [23].

Известно, что nAChR играют ключевую роль в нейротрансмиссии, когнитивных функциях (обучении и памяти) и регуляции воспаления. Их дисфункция связана с нейродегенеративными заболеваниями (болезнью Альцгеймера и Паркинсона), шизофренией, эпилепсией, а также с онкологическими заболеваниями и никотиновой зависимостью [3,24,25].

Данная работа сосредоточена на исследовании сигнальных каскадов, ассоциированных с функционированием никотиновых ацетилхолиновых рецепторов.

1.1.1. Строение никотиновых ацетилхолиновых рецепторов (пАСИК) 1.1.1.1. Субъединичный состав пАСИЯ

Никотиновые ацетилхолиновые рецепторы состоят из пяти субъединиц, образующих пентамерную структуру (рис. 1 А). Субъединичный состав пАСЬЯ зависит от их типа и локализации в организме [22]. Известно пять типов субъединиц:

а (альфа) — существует 10 изоформ (а1-а10), которые определяют специфичность рецептора к лигандам.

в (бета) — существует 4 изоформы (Р1-Р4).

у (гамма), 5 (дельта) и 8 (эпсилон) — дополнительные субъединицы, которые могут входить в состав рецептора.

Нейрональные гетеропентамерные пАСИР

02

а4 ф

02

а4, 02, а5 02, аЗ, а5 а9, аЮ

Рисунок 1. Схематичное строение nAChR, адаптировано из [3]. (А) Субъединичный состав мышечных и нейрональных nAChR. Сайты связывания лиганда обозначены желтыми кругами. (Б) Мембранная топология а субъединицы пА^Я. Четыре гидрофобных трансмембранных (ТМ) домена обозначены М1-М4. Лиганд-связывающий сайт расположен на Ы-конце и обозначен желтым кругом. Сайты фосфорилирования киназ семейства Src обозначены «Р». (В) Пентамерная структура пА^Я, сечение сверху. ТМ-домены обозначены 1-4. Вторая ТМ-спираль каждой субъединицы формирует пору ионного канала.

В зависимости от субъединичного состава рецептора выделяют мышечные и нейрональные пАСЬЯ (рис. 1 А). Мышечные пАСЬЯ состоят из двух субъединиц а1, и субъединиц Р1, 5 и у (во взрослой форме рецептора или 8 в эмбриональной форме). Мышечные пАСЬЯ локализованы в нервно-мышечных синапсах. Нейрональные в свою очередь делятся на гомомерные и гетеромерные пАСЬЯ. Гомомерные пАСЬЯ состоят из пяти одинаковых

субъединиц альфа (а7, а9 или а10), гетеромерные nAChR состоят из комбинаций субъединиц альфа (а2-а6) и субъединиц бета (ß2-ß4) [25] (рис. 1 А). Нейрональные nAChR локализованы на пре- и постсинаптической мембранах нейронов в центральной и периферической нервной системах [25].

1.1.1.2. Строение субъединицы nAChR

В структуре всех субъединиц nAChR от альфа до эпсилон можно выделить следующие общие структурные элементы: внеклеточную N-концевую часть, формирующую внеклеточный домен рецептора (ECD), 4 трансмембранных домена (M1-M4), закрепляющих рецептор в мембране клетки и формирующих канал через плазматическую мембрану, а также внутриклеточный домен (ICD) рецептора, состоящий из альфа-спирали и подвижной неструктурированной петли [26,27] (рис. 1 Б). Рассмотрим строение субъединицы подробнее на примере структуры а7 субъединицы nAChR (рис. 2).

Основная (+) субъединица Комплементарная (-) субъединица

Рисунок 2. Строение субъединицы a7-nAChR (PDB: 7KOO), адаптировано из [27]. Показаны структуры основной и комплементарной субъединиц. Указаны петли и спирали внеклеточного (ECD), внутриклеточного (ICD) и трансмембранных доменов (M1-M4).

ECD - внеклеточный N-концевой домен, состоящий из 206 аминокислот (для а7 субъединицы), имеет характерный "иммуноглобулиноподобный фолд". Он состоит из 10 бета-тяжей, формирующих два бета-слоя, внутренний и внешний, стабилизированных гидрофобными взаимодействиями. Между ß-тяжами расположены петли, которые играют важную роль в связывании ацетилхолина (и других лигандов): петли A, B и С основной субъединицы и петли E, D, G, F комплементарной субъединицы формируют сайт связывания ACh (рис. 2). Также в N-концевом домене присутствует консервативная характерная для рецепторов суперсемейства петля, формируемая дисульфидной связью между двумя остатками цистеина С127 и С141 (Cys-петля). Cys-петля стабилизирует структуру домена (рис. 2), формируя связи с петлями между ТМ-доменами и С-концевой спиралью.

Каждая субъединица рецептора содержит четыре трансмембранных домена (TMD), представляющие собой 4 альфа-спирали (M1-M4), пронизывающие клеточную мембрану (рис. 2). ТМ-спирали М2 всех пяти субъединиц формируют внутреннюю стенку ионного канала (рис. 1 В). Кроме того, именно М2 содержит гидрофобные и заряженные аминокислотные остатки, определяющие ионную избирательность канала. В области контакта между М1 и М3 спиралями a7-nAChR находится аллостерический сайт, связывание лигандов с которым модулирует вероятность открытия ионного канала, не вызывая непосредственно активации рецептора [26]. Гидрофобные остатки М4 определяют специфическое взаимодействие с холестерином и сфинголипидами мембраны, что влияет на чувствительность рецептора к агонистам [28]. Также важную роль играют гибкие линкеры, соединяющие ТМ-домены. Линкер, соединяющий спирали М2 и М3, опосредует взаимодействие с внеклеточным доменом, что обеспечивает передачу конформационных изменений от ECD к трансмембранным доменам при связывании лиганда. [27].

ICD - внутриклеточный домен, расположен между М3 и М4 доменами и состоит из двух структурированных альфа-спиралей МА и МХ, и длинной петли (~80 а.к.) между ними с гибкой и неупорядоченной структурой. Спираль МА формирует выход из канала рецептора во внутриклеточное пространство (рис. 2). Внутриклеточный домен играет важную роль в регуляции функции рецептора, так как здесь расположены сайты фосфорилирования [29] и консервативные аминокислотные последовательности, которые важны для взаимодействия с различными внутриклеточными белками [30]. Например, цитоплазматическая петля субъединиц а4 и ß2 содержит консервативные лейцины, замена которых на аланин препятствует транспорту рецептора на плазматическую мембрану [31]. Внутриклеточная петля а7-nAChR содержит последовательность важную для взаимодействия с G-белками [32]. Это взаимодействие позволяет рецептору активировать дополнительные сигнальные пути (например, через

вторичные мессенджеры, такие как cAMP или Ca2+). Также внутриклеточная петля a7-nAChR может взаимодействовать с киназой JAK2 [33], а взаимодействие внутриклеточной петли с белком Rapsyn регулирует кластеризацию nAChR в нервно-мышечных синапсах [34,35].

С-конец рецептора находится на внеклеточной стороне мембраны и формирует короткую альфа-спираль С-latch, называемую "защелка", которая лежит на мембране. Эта спираль важна для формирования пентамера рецептора и выхода его на поверхность мембраны [27].

1.1.1.3. Структура a7-nAChR

Благодаря развитию криоэлектронной микроскопии в последнее десятилетие был совершен прорыв в понимании работы каналов Cys-loop суперсемейства. На сегодняшний день получены структуры с высоким разрешением в различных состояниях человеческих катионных никотиновых и серотониновых рецепторов, анионного глицинового рецептора и рецепторов ГАМК-семейства.

В 2021 году были охарактеризованы структуры полноразмерного a7-nAChR в трех основных конформациях цикла работы рецептора: состоянии покоя (закрытом), активированном (открытом) и десенситизированном состояниях [27]. Для стабилизации рецептора в разных состояниях использовались высокоаффинные лиганды: ортостерический антагонист а-бнгаротоксин (а-bgtx) - для стабилизации рецептора с закрытым каналом в состоянии покоя, комбинация ортостерического агониста эпибатидина с положительным аллостерическим модулятором PNU-120596 - для получения структуры активированного состояния с открытым каналом, и эпибатидин в отдельности - для стабилизации десенситизированного состояния с закрытым каналом (рис. 3).

Общая структура a7-nAChR подобна структурам других рецепторов Cys-loop суперсемейства и во всех трех состояниях представляет собой цилиндр (ECD и TMD) и усеченный конус (IMD). Канал пронизывает рецептор, в формировании канала участвуют ECD, TMD и ICD. На стыке двух субъединиц расположен сайт связывания ортостерического лиганда. Лиганд может быть стабилизирован в сайте связывания обширной сетью водородных связей, а также пи-катионными взаимодействиями.

а-бунгаротоксин Эпибатидин + РМ11 Эпибатидин

(состояние покоя) (активированное) (десенситизированное)

Рисунок 3. Структура a7-nAChR в трех состояниях работы рецептора: закрытом (зеленый, PDB: 7KOO, в комплексе с а-бунгаротоксином), активированном (красный, PDB: 7KOX, в комплексе с эпибатидином и PNU-120596) и десенситизированном (фиолетовый, PDB: 7KOQ, в комплексе с эпибатидином). Точки сужения ионного канала обозначены расстояниями в А. Адаптировано из [27].

Конформационный переход рецептора из состояния покоя в активированное состояние включает скручивание ß-тяжей, формирующих ECD. Скручивание происходит против часовой стрелки вокруг оси, перпендикулярной мембране. Эта конформационная перестройка способствует закрытию петли C основной субъединицы в направлении комплементарной субъединицы. Конформационный переход рецептора из активированного в десенситизированное состояние не приводит к глобальным перестройкам ECD.

Движение ECD, в ответ на связывание лиганда, приводит к реорганизации электростатических и гидрофобных взаимодействий в области сопряжения ECD-TMD и передаче конформационных изменений на TMD. Главную роль в распространении играет Cys-петля, формируя контакты с петлями вестибюля ECD, петлями TMD и периферической С-концевой «защелкой». Расположенный на периферии рецептора гибкий линкер между ß-тяжем ß10 и ТМ-спиралью M1 также участвует в формировании контактов ECD-TMD. В состоянии покоя Cys-петля формирует сильные гидрофобные взаимодействия с С-концевой «защелкой», которые разрушаются во время активации и вновь восстанавливаются при переходе рецептора в десенситизированное состояние.

Спирали TMD M1, M3 и M4 во время активации выполняют согласованное движение. Как упоминалось ранее, движение спирали M1 происходит за счет перемещения линкера, соединяющего ее с ECD. В то же время движение спирали M4 регулируется взаимодействием Cys-петли с С-концевой «защелкой». В результате во время активации спираль M2 двигается наружу от центральной оси, открывая пору. Во время десенситизации внутриклеточный конец M2 движется внутрь, возвращаясь к более похожей на состояние покоя конформации. Взаимодействие M2 с петлей ß1-ß2 предотвращает полное закрытие до тех пор, пока не произойдет диссоциация агониста из связывающего кармана, позволяя ECD вернуться в положение покоя.

Движение ионов в рецепторах Cys-loop проходит от вестибюля ECD до внутреннего мембранного канала TMD, образованного спиралями M2, и через портал ICD. Структура а7, связанная с а-bgtx, характеризуется широко открытым вестибюлем ECD, диаметром 11,2 Ä в самой узкой точке. Гидрофобные остатки M2 (16' лейцин, 13' валин и 9' лейцин) формируют сужение канала, достаточное для предотвращения потока ионов. В активированной конформации рецептора диаметр трансмембранной поры около L9' увеличивается до 7,2 Ä. В то же время в ECD наблюдается сужение в позиции E97 (6,4 Ä). Предполагется, что E97 играет роль в высокой проницаемости a7-nAChR к кальцию по сравнению с другими nAChR. В десенситизированном состоянии пора TMD имеет воронкообразную форму с сужением в позиции -1' на внутриклеточном конце (рис. 3).

1.1.2. Механизм передачи сигнала через nAChR

Как было сказано выше, никотиновые рецепторы - это катионные каналы, пропускающие ионы Na+, K+ и Ca2+. Лиганд (например, ацетилхолин или никотин) связывается с лиганд-связывающим сайтом на внеклеточном домене рецептора, находящимся на стыке двух субъединиц (например, а и ß или а и y/s). Для активации рецептора необходимо связывание двух молекул лиганда (по одной в каждом из двух сайтов). Связывание лиганда вызывает конформационные изменения в рецепторе. Эти изменения передаются на трансмембранные домены, в частности, на М2-домены, формирующие стенку ионного канала. В результате перехода рецептора в активное состояние М2-домены поворачиваются, что приводит к открытию ионного канала. Открытый ионный канал пропускает катионы (Na+, K+, Ca2+) через мембрану. После диссоциации лиганда ECD изменяет свою конформацию, что в свою очередь приводит к повороту М2-доменов и закрытию ионного канала, таким образом, рецептор переходит в закрытое состояние.

Кроме того, длительная аппликация лиганда в высокой концентрации может приводить к переходу рецептора в десенситизированное состояние - состояние, в котором ионный канал закрыт, при наличии связанного с рецептором лиганда (рис. 4 А). Конформация М2 доменов в десенситизированном состоянии отличается от конформации в закрытом состоянии, и структура канала в закрытом состоянии не повторяет структуру в состоянии десенситизации.

Механизм активации nAChR предполагает обязательное связывание двух молекул агониста, что объясняет существование переходного состояния («прайминг»), характеризующегося: наличием одной молекулы агониста, связанного с рецептором, закрытым ионным каналом и конформационными изменениями, повышающими аффинность ко второму лиганду (рис. 4 А).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Шлепова Ольга Викторовна, 2025 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Russo P., Cardinale A., Margaritora S., et al. Nicotinic receptor and tobacco-related cancer // Life Sciences. 2012. Vol. 91, № 21-22. P. 1087-1092. https://doi.org/10.1016/j.lfs.2012.05.003.

2. Schaal C., Chellappan S.P. Nicotine-Mediated Cell Proliferation and Tumor Progression in Smoking-Related Cancers // Molecular Cancer Research. 2014. Vol. 12, № 1. P. 14-23. https://doi.org/10.1158/1541-7786.MCR-13-0541.

3. Grando S.A. Connections of nicotine to cancer // Nat Rev Cancer. 2014. Vol. 14, № 6. P. 419-429. https://doi.org/10.1038/nrc3725.

4. Hecht S.S., Carmella S.G., Chen M., et al. Quantitation of urinary metabolites of a tobacco-specific lung carcinogen after smoking cessation // Cancer Res. 1999. Vol. 59, № 3. P. 590-596.

5. Hecht S.S. Tobacco carcinogens, their biomarkers and tobacco-induced cancer // Nat. Rev. Cancer. 2003. Vol. 3, № 10. P. 733-744. https://doi.org/10.1038/nrc1190.

6. Grozio A., Paleari L., Catassi A., et al. Natural agents targeting the alpha7-nicotinic-receptor in NSCLC: a promising prospective in anti-cancer drug development // Int. J. Cancer. 2008. Vol. 122, № 8. P. 1911-1915. https://doi.org/10.1002/ijc.23298.

7. Lyukmanova E.N., Shulepko M.A., Kudryavtsev D., et al. Human Secreted Ly-6/uPAR Related Protein-1 (SLURP-1) Is a Selective Allosteric Antagonist of a7 Nicotinic Acetylcholine Receptor: 2 // PLoS ONE / ed. Ulrich H. 2016. Vol. 11, № 2. P. e0149733. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0149733.

8. Chernyavsky A.I., Shchepotin I.B., Grando S.A. Mechanisms of growth-promoting and tumor-protecting effects of epithelial nicotinic acetylcholine receptors // International Immunopharmacology. 2015. Vol. 29, № 1. P. 36-44. https://doi.org/10.1016/j.intimp.2015.05.033.

9. Tu C.-C., Huang C.-Y., Cheng W.-L., et al. The a7-nicotinic acetylcholine receptor mediates the sensitivity of gastric cancer cells to taxanes // Tumor Biol. 2016. Vol. 37, № 4. P. 4421-4428. https://doi.org/10.1007/s13277-015-4260-y.

10. Cheng W.-L., Chen K.-Y., Lee K.-Y., et al. Nicotinic-nAChR signaling mediates drug resistance in lung cancer // J Cancer. 2020. Vol. 11, № 5. P. 1125-1140. https://doi.org/10.7150/jca.36359.

11. Afrashteh Nour M., Hajiasgharzadeh K., Kheradmand F., et al. Nicotinic acetylcholine receptors in chemotherapeutic drugs resistance: An emerging targeting candidate // Life Sci. 2021. Vol. 278. P. 119557. https://doi.org/10.1016/j.lfs.2021.119557.

12. Yan Y., Su C., Hang M., et al. Recombinant Newcastle disease virus rL-RVG enhances the apoptosis and inhibits the migration of A549 lung adenocarcinoma cells via regulating alpha 7 nicotinic acetylcholine receptors in vitro // Virol J. 2017. Vol. 14, № 1. P. 190. https://doi.org/10.1186/s12985-017-0852-z.

13. Bu X., Zhang A., Chen Z., et al. Migration of gastric cancer is suppressed by recombinant Newcastle disease virus (rL-RVG) via regulating a7-nicotinic acetylcholine receptors/ERK- EMT // BMC Cancer. 2019. Vol. 19, № 1. P. 976. https://doi.org/10.1186/s12885-019-6225-9.

14. Brown K.C., Lau J.K., Dom A.M., et al. MG624, an a7-nAChR antagonist, inhibits angiogenesis via the Egr-1/FGF2 pathway // Angiogenesis. 2012. Vol. 15, № 1. P. 99-114. https://doi.org/10.1007/s10456-011-9246-9.

15. Kulbatskii D.S., Bychkov M.L., Lyukmanova E.N. Human Nicotinic Acetylcholine Receptors: Part I. Structure, Function, and Role in Neuromuscular Transmission and CNS Functioning // Russ. J. Bioorg. Chem. 2018. Vol. 44, № 6. P. 595-607. https://doi.org/10.1134/S1068162018060043.

16. Vasilyeva N.A., Loktyushov E.V., Bychkov M.L., et al. Three-finger proteins from the Ly6/uPAR family: Functional diversity within one structural motif // Biochemistry (Moscow). 2017. Vol. 82, № 13. P. 1702-1715. https://doi.org/10.1134/S0006297917130090.

17. Lyukmanova E.N., Bychkov M.L., Sharonov G.V., et al. Human secreted proteins SLURP-1 and SLURP-2 control the growth of epithelial cancer cells via interactions with nicotinic acetylcholine receptors: Actions of human SLURP proteins on cancer cells: 11 // British Journal of Pharmacology. 2018. Vol. 175, № 11. P. 1973-1986. https://doi.org/10.1111/bph.14194.

18. Throm V.M., Mannle D., Giese T., et al. Endogenous CHRNA7-ligand SLURP1 as a potential tumor suppressor and anti-nicotinic factor in pancreatic cancer // Oncotarget. 2018. Vol. 9, № 14. https://doi.org/10.18632/oncotarget.24312.

19. Bergqvist C., Kadara H., Hamie L., et al. SLURP-1 is mutated in Mal de Meleda, a potential molecular signature for melanoma and a putative squamous lineage tumor suppressor gene // International Journal of Dermatology. 2018. Vol. 57, № 2. P. 162-170. https://doi.org/10.1111/ijd.13850.

20. Arousse A., Mokni S., H'mida Ben Brahim D., et al. Amelanotic melanoma arising in an area of SLURP-1 mutated Mal de Meleda // Int. J. Dermatol. 2019. Vol. 58, № 8. P. 966-968. https://doi.org/10.1111/ijd.14231.

21. Wolfe B.B. Subtypes of Muscarinic Cholinergic Receptors // The Muscarinic Receptors / ed. Brown J.H. Totowa, NJ: Humana Press, 1989. P. 125-150. https://doi.org/10.1007/978-1-4612-4498-1_4.

22. Gotti C., Clementi F., Fornari A., et al. Structural and functional diversity of native brain neuronal nicotinic receptors // Biochemical Pharmacology. 2009. Vol. 78, № 7. P. 703-711. https://doi.org/10.1016Zj.bcp.2009.05.024.

23. Kulbatskii D.S., Bychkov M.L., Lyukmanova E.N. Human Nicotinic Acetylcholine Receptors: Part I—Structure, Function, and Role in Neuromuscular Transmission and CNS Functioning // Russ J Bioorg Chem. 2018. Vol. 44, № 6. P. 595-607. https://doi.org/10.1134/S1068162018060043.

24. Changeux J.-P. Climbing Brain Levels of Organisation from Genes to Consciousness // Trends in Cognitive Sciences. 2017. Vol. 21, № 3. P. 168-181. https://doi.org/10.1016/j.tics.2017.01.004.

25. Albuquerque E.X., Pereira E.F.R., Alkondon M., et al. Mammalian Nicotinic Acetylcholine Receptors: From Structure to Function // Physiological Reviews. 2009. Vol. 89, № 1. P. 73-120. https://doi.org/10.1152/physrev.00015.2008.

26. Unwin N. Nicotinic acetylcholine receptor and the structural basis of neuromuscular transmission: insights from Torpedo postsynaptic membranes // Quarterly Reviews of Biophysics. 2013. Vol. 46, № 04. P. 283-322. https://doi.org/10.1017/S0033583513000061.

27. Noviello C.M., Gharpure A., Mukhtasimova N., et al. Structure and gating mechanism of the a7 nicotinic acetylcholine receptor // Cell. 2021. Vol. 184, № 8. P. 2121-2134.e13. https://doi.org/10.1016/j.cell.2021.02.049.

28. Bouzat C., Sine S.M. Nicotinic acetylcholine receptors at the single-channel level: nACh receptor channels // British Journal of Pharmacology. 2018. Vol. 175, № 11. P. 1789-1804. https://doi.org/10.1111/bph.13770.

29. Chrestia J.F., Turani O., Araujo N.R., et al. Regulation of nicotinic acetylcholine receptors by post-translational modifications // Pharmacological Research. 2023. Vol. 190. P. 106712. https://doi.org/10.1016/j.phrs.2023.106712.

30. St John, A P. Cellular trafficking of nicotinic acetylcholine receptors // Acta Pharmacol Sin. Nature Publishing Group, 2009. Vol. 30, № 6. P. 656-662. https://doi.org/10.1038/aps.2009.76.

31. Ren X.-Q., Cheng S.-B., Treuil M.W., et al. Structural Determinants of a4p2 Nicotinic Acetylcholine Receptor Trafficking // J. Neurosci. Society for Neuroscience, 2005. Vol. 25, № 28. P. 6676-6686. https://doi.org/10.1523/JNEUR0SCI.1079-05.2005.

32. King J.R., Gillevet T.C., Kabbani N. A G protein-coupled a7 nicotinic receptor regulates signaling and TNF-a release in microglia // FEBS Open Bio. 2017. Vol. 7, № 9. P. 1350-1361. https://doi.org/10.1002/2211-5463.12270.

33. Shaw S., Bencherif M., Marrero M.B. Janus Kinase 2, an Early Target of a7 Nicotinic Acetylcholine Receptor-mediated Neuroprotection against Ap-(1-42) Amyloid * // Journal of Biological Chemistry. Elsevier, 2002. Vol. 277, № 47. P. 44920-44924. https://doi.org/10.1074/jbc.M204610200.

34. Zuber B., Unwin N. Structure and superorganization of acetylcholine receptor-rapsyn complexes // Proceedings of the National Academy of Sciences. 2013. Vol. 110, № 26. P. 10622-10627. https://doi.org/10.1073/pnas.1301277110.

35. Borges L.S., Yechikhov S., Lee Y.I., et al. Identification of a Motif in the Acetylcholine Receptor Subunit Whose Phosphorylation Regulates Rapsyn Association and Postsynaptic Receptor Localization // Journal of Neuroscience. 2008. Vol. 28, № 45. P. 11468-11476. https://doi.org/10.1523/JNEUROSCI.2508-08.2008.

36. Mukhtasimova N., daCosta C.J.B., Sine S.M. Improved resolution of single channel dwell times reveals mechanisms of binding, priming, and gating in muscle AChR // The Journal of General Physiology. 2016. Vol. 148, № 1. P. 43-63. https://doi.org/10.1085/jgp.201611584.

37. Gotti C., Clementi F., Fornari A., et al. Structural and functional diversity of native brain neuronal nicotinic receptors: 7 // Biochemical Pharmacology. 2009. Vol. 78, № 7. P. 703-711. https://doi.org/10.1016Zj.bcp.2009.05.024.

38. Taly A., Corringer P.-J., Guedin D., et al. Nicotinic receptors: allosteric transitions and therapeutic targets in the nervous system // Nature Reviews Drug Discovery. 2009. Vol. 8, № 9. P. 733-750. https://doi .org/10.1038/nrd2927.

39. Jull B.A., Plummer H.K., Schuller H.M. Nicotinic receptor-mediated activation by the tobacco-specific nitrosamine NNK of a Raf-1/MAP kinase pathway, resulting in phosphorylation of c-myc in human small cell lung carcinoma cells and pulmonary neuroendocrine cells // J. Cancer Res. Clin. Oncol. 2001. Vol. 127, № 12. P. 707-717.

40. Schuller H.M. Nitrosamines as nicotinic receptor ligands // Life Sci. 2007. Vol. 80, № 24-25. P. 2274-2280. https://doi.org/10.1016/j.lfs.2007.03.006.

41. Yogeeswari P., Sriram D., Bal T.R., et al. Epibatidine and its analogues as nicotinic acetylcholine receptor agonist: an update // Natural Product Research. Taylor & Francis, 2006. Vol. 20, № 5. P. 497-505. https://doi.org/10.1080/14786410600604583.

42. Jordan C.J., Xi Z.-X. Discovery and development of varenicline for smoking cessation // Expert Opin Drug Discov. 2018. Vol. 13, № 7. P. 671-683. https://doi.org/10.1080/17460441.2018.1458090.

43. Chiara D.C., Cohen J.B. Identification of Amino Acids Contributing to High and Low Affinity d -Tubocurarine Sites in the Torpedo Nicotinic Acetylcholine Receptor // Journal of Biological Chemistry. 1997. Vol. 272, № 52. P. 32940-32950. https://doi.org/10.1074/jbc.272.52.32940.

44. Dellisanti C.D., Yao Y., Stroud J.C., et al. Crystal structure of the extracellular domain of nAChR alpha1 bound to alpha-bungarotoxin at 1.94 A resolution // Nat. Neurosci. 2007. Vol. 10, № 8. P. 953-962. https://doi.org/10.1038/nn1942.

45. Bacher I., Wu B., Shytle D.R., et al. Mecamylamine - a nicotinic acetylcholine receptor antagonist with potential for the treatment of neuropsychiatric disorders // Expert Opin Pharmacother. 2009. Vol. 10, № 16. P. 2709-2721. https://doi.org/10.1517/14656560903329102.

46. Bondarenko V., Targowska-Duda K.M., Jozwiak K., et al. Molecular interactions between mecamylamine enantiomers and the transmembrane domain of the human a4p2 nicotinic receptor // Biochemistry. 2014. Vol. 53, № 5. P. 908-918. https://doi.org/10.1021/bi400969x.

47. Bouzat C., Lasala M., Nielsen B.E., et al. Molecular function of a7 nicotinic receptors as drug targets: a7 nicotinic receptor // The Journal of Physiology. 2018. Vol. 596, № 10. P. 1847-1861. https://doi.org/10.1113/JP275101.

48. Thomsen M.S., Mikkelsen J.D. Type I and II positive allosteric modulators differentially modulate agonist-induced up-regulation of a7 nicotinic acetylcholine receptors: a7 receptor regulation // Journal of Neurochemistry. 2012. Vol. 123, № 1. P. 73-83. https://doi.org/10.1111/j.1471-4159.2012.07876.x.

49. Halvard Granlien J., Hakerud M., Ween H., et al. Distinct Profiles of a7 nAChR Positive Allosteric Modulation Revealed by Structurally Diverse Chemotypes // Molecular Pharmacology. 2007. Vol. 72, № 3. P. 715-724. https://doi.org/10.1124/mol.107.035410.

50. Andersen N.D., Nielsen B.E., Corradi J., et al. Exploring the positive allosteric modulation of human a7 nicotinic receptors from a single-channel perspective // Neuropharmacology. 2016. Vol. 107. P. 189-200. https://doi.org/10.1016/j.neuropharm.2016.02.032.

51. Chatzidaki A., Millar N.S. Allosteric modulation of nicotinic acetylcholine receptors // Biochemical Pharmacology. 2015. Vol. 97, № 4. P. 408-417. https://doi.org/10.1016/j.bcp.2015.07.028.

52. Manetti D., Dei S., Arias H.R., et al. Recent Advances in the Discovery of Nicotinic Acetylcholine Receptor Allosteric Modulators // Molecules. 2023. Vol. 28, № 3. P. 1270. https://doi.org/10.3390/molecules28031270.

53. Egleton R.D., Brown K.C., Dasgupta P. Nicotinic acetylcholine receptors in cancer: multiple roles in proliferation and inhibition of apoptosis // Trends in Pharmacological Sciences. 2008. Vol. 29, № 3. P. 151-158. https://doi.org/10.1016/j.tips.2007.12.006.

54. Jonge W.J., Ulloa L. The alpha7 nicotinic acetylcholine receptor as a pharmacological target for inflammation: a7 as a pharmacological target for inflammation // British Journal of Pharmacology. 2009. Vol. 151, № 7. P. 915-929. https://doi.org/10.1038/sj.bjp.0707264.

55. Arredondo J., Chernyavsky A.I., Grando S.A. Nicotinic receptors mediate tumorigenic action of tobacco-derived nitrosamines on immortalized oral epithelial cells // Cancer Biology & Therapy. 2006. Vol. 5, № 5. P. 511-517. https://doi.org/10.4161/cbt.5.5.2601.

56. Kabbani N., Nordman J.C., Corgiat B.A., et al. Are nicotinic acetylcholine receptors coupled to G proteins?: Insights & Perspectives // BioEssays. 2013. Vol. 35, № 12. P. 1025-1034. https://doi.org/10.1002/bies.201300082.

57. King J.R., Nordman J.C., Bridges S.P., et al. Identification and Characterization of a G Protein-binding Cluster in a7 Nicotinic Acetylcholine Receptors // Journal of Biological Chemistry. 2015. Vol. 290, № 33. P. 20060-20070. https://doi.org/10.1074/jbc.M115.647040.

58. Papke R.L. Merging old and new perspectives on nicotinic acetylcholine receptors // Biochemical Pharmacology. 2014. Vol. 89, № 1. P. 1-11. https://doi.org/10.1016Zj.bcp.2014.01.029.

59. Schuller H.M. Is cancer triggered by altered signalling of nicotinic acetylcholine receptors? // Nature Reviews Cancer. 2009. Vol. 9, № 3. P. 195-205. https://doi.org/10.1038/nrc2590.

60. Wessler I., Kirkpatrick C.J. Acetylcholine beyond neurons: the non-neuronal cholinergic system in humans: Non-neuronal cholinergic system in humans // British Journal of Pharmacology. 2009. Vol. 154, № 8. P. 1558-1571. https://doi.org/10.1038/bjp.2008.185.

61. Hagiwara M., Kikuchi E., Tanaka N., et al. Impact of Smoking Status on Bladder Tumor Recurrence After Radical Nephroureterectomy for Upper Tract Urothelial Carcinoma // Journal of Urology. 2013. Vol. 189, № 6. P. 2062-2068. https://doi.org/10.1016/jjuro.2013.01.024.

62. Smyth E.C., Capanu M., Janjigian Y.Y., et al. Tobacco Use Is Associated with Increased Recurrence and Death from Gastric Cancer // Ann Surg Oncol. 2012. Vol. 19, № 7. P. 2088-2094. https://doi.org/10.1245/s10434-012-2230-9.

63. Phipps A.I., Shi Q., Newcomb P.A., et al. Associations Between Cigarette Smoking Status and Colon Cancer Prognosis Among Participants in North Central Cancer Treatment Group Phase III Trial N0147 // JCO. 2013. Vol. 31, № 16. P. 2016-2023. https://doi.org/10.1200/JC0.2012.46.2457.

64. Schuller H.M., Orloff M. Tobacco-Specific Carcinogenic Nitrosamines // Biochemical Pharmacology. 1998. Vol. 55, № 9. P. 1377-1384. https://doi.org/10.1016/S0006-2952(97)00651-5.

65. Schuller H.M. Is cancer triggered by altered signalling of nicotinic acetylcholine receptors? // Nat Rev Cancer. 2009. Vol. 9, № 3. P. 195-205. https://doi.org/10.1038/nrc2590.

66. Arredondo J., Chernyavsky A.I., Grando S.A. Nicotinic receptors mediate tumorigenic action of tobacco-derived nitrosamines on immortalized oral epithelial cells: 5 // Cancer Biology & Therapy. 2006. Vol. 5, № 5. P. 511-517. https://doi.org/10.4161/cbt.5.5.2601.

67. Dasgupta P., Rizwani W., Pillai S., et al. Nicotine induces cell proliferation, invasion and epithelial-mesenchymal transition in a variety of human cancer cell lines // International Journal of Cancer. 2009. Vol. 124, № 1. P. 36-45. https://doi.org/10.1002/ijc.23894.

68. Cucina A., Dinicola S., Coluccia P., et al. Nicotine stimulates proliferation and inhibits apoptosis in colon cancer cell lines through activation of survival pathways // J Surg Res. 2012. Vol. 178, № 1. P. 233-241. https://doi.org/10.1016/jjss.2011.12.029.

69. Aali N., Motalleb G. The effect of nicotine on the expressions of the a7 nicotinic receptor gene and Bax and Bcl-2 proteins in the mammary gland epithelial-7 breast cancer cell line and its relationship to drug resistance // Cellular and Molecular Biology Letters. De Gruyter, 2015. Vol. 20, № 5. P. 948-964. https://doi.org/10.1515/cmble-2015-0056.

70. Nakada T., Kiyotani K., Iwano S., et al. Lung tumorigenesis promoted by anti-apoptotic effects of cotinine, a nicotine metabolite through activation of PI3K/Akt pathway // The Journal of Toxicological Sciences. 2012. Vol. 37, № 3. P. 555-563. https://doi.org/10.2131/jts.37.555.

71. Li, Lin, Chen, et al. Smoking as an Independent Risk Factor for Hepatocellular Carcinoma Due to the a7-Nachr Modulating the JAK2/STAT3 Signaling Axis // JCM. 2019. Vol. 8, № 9. P. 1391. https://doi.org/10.3390/jcm8091391.

72. Bordas A., Cedillo J.L., Arnalich F., et al. Expression patterns for nicotinic acetylcholine receptor subunit genes in smoking-related lung cancers // Oncotarget. 2017. Vol. 8, № 40. https://doi.org/10.18632/oncotarget.18948.

73. Bychkov M.L., Kirichenko A.V., Mikhaylova I.N., et al. Extracellular Vesicles Derived from Metastatic Melanoma Cells Transfer a7-nAChR mRNA, Thus Increasing the Surface Expression of the Receptor and Stimulating the Growth of Normal Keratinocytes // Acta Naturae. 2022. Vol. 14, № 3. P. 95-99. https://doi.org/10.32607/actanaturae.11734.

74. Wang S., Hu Y. a7 nicotinic acetylcholine receptors in lung cancer (Review) // Oncol Lett. 2018. https://doi.org/10.3892/ol.2018.8841.

75. Fucile S. Ca2+ permeability of nicotinic acetylcholine receptors // Cell Calcium. 2004. Vol. 35, № 1. P. 1-8. https://doi.org/10.1016/jxeca.2003.08.006.

76. Carlisle D.L., Liu X., Hopkins T.M., et al. Nicotine activates cell-signaling pathways through muscle-type and neuronal nicotinic acetylcholine receptors in non-small cell lung cancer cells // Pulm Pharmacol Ther. 2007. Vol. 20, № 6. P. 629-641. https://doi.org/10.1016/j.pupt.2006.07.001.

77. Arredondo J., Chernyavsky A.I., Marubio L.M., et al. Receptor-Mediated Tobacco Toxicity: 2 // The American Journal of Pathology. 2005. Vol. 166, № 2. P. 597-613. https://doi.org/10.1016/S0002-9440(10)62281 -X.

78. Arredondo J., Chernyavsky A.I., Jolkovsky D.L., et al. Receptor-mediated tobacco toxicity: cooperation of the Ras/Raf-1/MEK1/ERK and JAK-2/STAT-3 pathways downstream of a7 nicotinic receptor in oral keratinocytes: 12 // FASEB j. 2006. Vol. 20, № 12. P. 2093-2101. https://doi.org/10.1096/fj.06-6191com.

79. Schuller H.M. Regulatory role of the a7nAChR in cancer // Curr Drug Targets. 2012. Vol. 13, № 5. P. 680-687.

80. Kihara T., Shimohama S., Sawada H., et al. alpha 7 nicotinic receptor transduces signals to phosphatidylinositol 3-kinase to block A beta-amyloid-induced neurotoxicity // J. Biol. Chem. 2001. Vol. 276, № 17. P. 13541-13546. https://doi.org/10.1074/jbc.M008035200.

81. de Jonge W.J., van der Zanden E.P., The F.O., et al. Stimulation of the vagus nerve attenuates macrophage activation by activating the Jak2-STAT3 signaling pathway // Nat. Immunol. 2005. Vol. 6, № 8. P. 844-851. https://doi.org/10.1038/ni1229.

82. Dasgupta P. Nicotine induces cell proliferation by -arrestin-mediated activation of Src and Rb-Raf-1 pathways // Journal of Clinical Investigation. 2006. Vol. 116, № 8. P. 2208-2217. https://doi.org/10.1172/JCI28164.

83. Chernyavsky A.I., Arredondo J., Qian J., et al. Coupling of ionic events to protein kinase signaling cascades upon activation of alpha7 nicotinic receptor: cooperative regulation of alpha2-integrin expression and Rho kinase activity // J Biol Chem. 2009. Vol. 284, № 33. P. 22140-22148. https://doi.org/10.1074/jbc.M109.011395.

84. Dunckley T., Lukas R.J. Nicotine Modulates the Expression of a Diverse Set of Genes in the Neuronal SH-SY5Y Cell Line * // Journal of Biological Chemistry. Elsevier, 2003. Vol. 278, № 18. P. 15633-15640. https://doi.org/10.1074/jbc.M210389200.

85. Grando S.A., Pittelkow M.R., Schallreuter K.U. Adrenergic and cholinergic control in the biology of epidermis: physiological and clinical significance // Journal of Investigative Dermatology. 2006. Vol. 126, № 9. P. 1948-1965. https://doi.org/10.1038/sj.jid.5700151.

86. Arredondo J., Chernyavsky A.I., Jolkovsky D.L., et al. Receptor-mediated tobacco toxicity: acceleration of sequential expression of 5 and 7 nicotinic receptor subunits in oral keratinocytes exposed to cigarette smoke // The FASEB Journal. 2007. https://doi.org/10.1096/fj.07-9965com.

87. Nishioka T., Kim H.-S., Luo L.-Y., et al. Sensitization of epithelial growth factor receptors by nicotine exposure to promote breast cancer cell growth // Breast Cancer Res. 2011. Vol. 13, № 6. P. R113. https://doi.org/10.1186/bcr3055.

88. Liu D., Pan F., Li B., et al. Intervention of nicotine on MNU-induced bladder cancer in rats // J. Huazhong Univ. Sci. Technol. [Med. Sci.]. 2011. Vol. 31, № 1. P. 103-106. https://doi.org/10.1007/s11596-011-0159-z.

89. Iskandar A.R., Miao B., Li X., et al. ß-Cryptoxanthin Reduced Lung Tumor Multiplicity and Inhibited Lung Cancer Cell Motility by Downregulating Nicotinic Acetylcholine Receptor a7 Signaling // Cancer Prevention Research. 2016. Vol. 9, № 11. P. 875-886. https://doi.org/10.1158/1940-6207.CAPR-16-0161.

90. Lau J.K., Brown K.C., Thornhill B.A., et al. Inhibition of cholinergic signaling causes apoptosis in human bronchioalveolar carcinoma // Cancer Res. 2013. Vol. 73, № 4. P. 1328-1339. https://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-12-3190.

91. Andriambeloson E., Huyard B., Poiraud E., et al. Methyllycaconitine- and scopolamine-induced cognitive dysfunction: differential reversal effect by cognition-enhancing drugs // Pharmacology Research & Perspectives. 2014. Vol. 2, № 4. P. e00048. https://doi.org/10.1002/prp2.48.

92. Lyukmanova E.N., Shulepko M.A., Buldakova S.L., et al. Water-soluble LYNX1 Residues Important for Interaction with Muscle-type and/or Neuronal Nicotinic Receptors // Journal of Biological Chemistry. 2013. Vol. 288, № 22. P. 15888-15899. https://doi.org/10.1074/jbc.M112.436576.

93. Lyukmanova E.N., Shulepko M.A., Shenkarev Z.O., et al. Secreted Isoform of Human Lynx1 (SLURP-2): Spatial Structure and Pharmacology of Interactions with Different Types of Acetylcholine Receptors: 1 // Sci Rep. 2016. Vol. 6, № 1. P. 30698. https://doi.org/10.1038/srep30698.

94. Hruska M., Keefe J., Wert D., et al. Prostate stem cell antigen is an endogenous lynx1-like prototoxin that antagonizes alpha7-containing nicotinic receptors and prevents programmed cell death of parasympathetic neurons // J. Neurosci. 2009. Vol. 29, № 47. P. 14847-14854. https://doi.org/10.1523/JNEUR0SCI.2271-09.2009.

95. Puddifoot C.A., Wu M., Sung R.-J., et al. Ly6h regulates trafficking of alpha7 nicotinic acetylcholine receptors and nicotine-induced potentiation of glutamatergic signaling // J. Neurosci. 2015. Vol. 35, № 8. P. 3420-3430. https://doi.org/10.1523/JNEUR0SCI.3630-14.2015.

96. Sekhon H.S., Song P., Jia Y., et al. Expression of lynx1 in developing lung and its modulation by prenatal nicotine exposure // Cell and Tissue Research. 2005. Vol. 320, № 2. P. 287-297. https://doi.org/10.1007/s00441-005-1077-9.

97. Song P., Sekhon H.S., Fu X.W., et al. Activated cholinergic signaling provides a target in squamous cell lung carcinoma // Cancer Res. 2008. Vol. 68, № 12. P. 4693-4700. https://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-08-0183.

98. Thomsen M.S., Cinar B., Jensen M.M., et al. Expression of the Ly-6 family proteins Lynx1 and Ly6H in the rat brain is compartmentalized, cell-type specific, and developmentally regulated // Brain Structure and Function. 2014. Vol. 219, № 6. P. 1923-1934. https://doi.org/10.1007/s00429-013-0611-x.

99. Fu X.W., Song P.F., Spindel E.R. Role of Lynxl and related Ly6 proteins as modulators of cholinergic signaling in normal and neoplastic bronchial epithelium // International Immunopharmacology. 2015. Vol. 29, № 1. P. 93-98. https://doi.org/10.1016/j.intimp.2015.05.022.

100. Fu X.W., Rekow S.S., Spindel E.R. The ly-6 protein, lynx1, is an endogenous inhibitor of nicotinic signaling in airway epithelium: 8 // American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. American Physiological Society, 2012. Vol. 303, № 8. P. L661-L668. https://doi.org/10.1152/ajplung.00075.2012.

101. Bychkov M., Shenkarev Z., Shulepko M., et al. Water-soluble variant of human Lynx1 induces cell cycle arrest and apoptosis in lung cancer cells via modulation of a7 nicotinic acetylcholine receptors // PLOS ONE / ed. Najbauer J. 2019. Vol. 14, № 5. P. e0217339. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0217339.

102. Horiguchi K., Horiguchi S., Yamashita N., et al. Expression of SLURP-1, an endogenous alpha7 nicotinic acetylcholine receptor allosteric ligand, in murine bronchial epithelial cells // J. Neurosci. Res. 2009. Vol. 87, № 12. P. 2740-2747. https://doi.org/10.1002/jnr.22102.

103. Adermann K., Wattler F., Wattler S., et al. Structural and phylogenetic characterization of human SLURP-1, the first secreted mammalian member of the Ly-6/uPAR protein superfamily // Protein Sci. 1999. Vol. 8, № 4. P. 810-819. https://doi.org/10.1110/ps.8.4.810.

104. Chimienti F. Identification of SLURP-1 as an epidermal neuromodulator explains the clinical phenotype of Mal de Meleda // Human Molecular Genetics. 2003. Vol. 12, № 22. P. 3017-3024. https://doi.org/10.1093/hmg/ddg320.

105. Paramonov A.S., Kocharovskaya M.V., Tsarev A.V., et al. Structural Diversity and Dynamics of Human Three-Finger Proteins Acting on Nicotinic Acetylcholine Receptors // Int J Mol Sci. 2020. Vol. 21, № 19. https://doi.org/10.3390/ijms21197280.

106. Arredondo J., Chernyavsky A.I., Webber R.J., et al. Biological Effects of SLURP-1 on Human Keratinocytes // Journal of Investigative Dermatology. 2005. Vol. 125, № 6. P. 1236-1241. https://doi.org/10.1111/j.0022-202X.2005.23973.x.

107. Perez C., Khachemoune A. Mal de Meleda: A Focused Review // American Journal of Clinical Dermatology. 2016. Vol. 17, № 1. P. 63-70. https://doi.org/10.1007/s40257-015-0157-1.

108. Shulepko M.A., Bychkov M.L., Shenkarev Z.O., et al. Biochemical Basis of Skin Disease Mal de Meleda: SLURP-1 Mutants Differently Affect Keratinocyte Proliferation and Apoptosis // J Invest Dermatol. 2021. Vol. 141, № 9. P. 2229-2237. https://doi.org/10.1016/jjid.2021.01.035.

109. Adeyo O., Allan B.B., Barnes R.H., et al. Palmoplantar keratoderma along with neuromuscular and metabolic phenotypes in Slurp1-deficient mice // J. Invest. Dermatol. 2014. Vol. 134, № 6. P. 15891598. https://doi.org/10.1038/jid.2014.19.

110. Weinberg R.L., Kim S., Pang Z., et al. Pain Hypersensitivity in SLURP1 and SLURP2 Knock-out Mouse Models of Hereditary Palmoplantar Keratoderma // J Neurosci. 2024. Vol. 44, № 28. P. e0260232024. https://doi.org/10.1523/JNEUR0SCI.0260-23.2024.

111. Arredondo J., Chernyavsky A.I., Grando S.A. SLURP-1 and -2 in normal, immortalized and malignant oral keratinocytes // Life Sci. 2007. Vol. 80, № 24-25. P. 2243-2247. https://doi.org/10.1016/jjfs.2007.01.003.

112. Chernyavsky A.I., Arredondo J., Galitovskiy V., et al. Upregulation of nuclear factor-KB expression by SLURP-1 is mediated by a 7 -nicotinic acetylcholine receptor and involves both ionic events and activation of protein kinases // American Journal of Physiology-Cell Physiology. 2010. Vol. 299, № 5. P. C903-C911. https://doi.org/10.1152/ajpcell.00216.2010.

113. Chernyavsky A.I., Galitovskiy V., Shchepotin I.B., et al. Anti-Inflammatory Effects of the Nicotinergic Peptides SLURP-1 and SLURP-2 on Human Intestinal Epithelial Cells and Immunocytes // Biomed Res Int. 2014. Vol. 2014. https://doi.org/10.1155/2014/609086.

114. Pettersson A., Nordlander S., Nylund G., et al. Expression of the endogenous, nicotinic acetylcholine receptor ligand, SLURP-1, in human colon cancer // Autonomic and Autacoid

Pharmacology. 2008. Vol. 28, № 4. P. 109-116. https://doi.org/10.1111/j.1474-8673.2008.00424.x.

115. Kalantari-Dehaghi M., Bernard H.-U., Grando S.A. Reciprocal effects of NNK and SLURP-1 on oncogene expression in target epithelial cells // Life Sciences. 2012. Vol. 91, № 21-22. P. 11221125. https://doi.org/10.1016/jjfs.2012.02.004.

116. Shulepko M.A., Bychkov M.L., Kirpichnikov M.P., et al. Recombinant SLURP-1 Inhibits Growth and Migration of U251 MG Glioma by Cell Cycle Arrest and Modulation of MAPK and AKT Signaling Pathways: 4 // Russ J Bioorg Chem. 2023. Vol. 49, № 4. P. 403-410. https://doi.org/10.31857/S0132342323040401.

117. Shulepko M., Lyukmanova E., Paramonov A., et al. Human neuromodulator SLURP-1: Bacterial expression, binding to muscle-type nicotinic acetylcholine receptor, secondary structure, and conformational heterogeneity in solution // Biochemistry (Moscow). 2013. Vol. 78, № 2. P. 204211. https://doi.org/10.1134/S0006297913020090.

118. Lyukmanova E.N., Shenkarev Z.O., Schulga A.A., et al. Bacterial Expression, NMR, and Electrophysiology Analysis of Chimeric Short/Long-chain a-Neurotoxins Acting on Neuronal Nicotinic Receptors* // Journal of Biological Chemistry. 2007. Vol. 282, № 34. P. 24784-24791. https://doi.org/10.1074/jbc.M611263200.

119. Bychkov M L., Shulepko M.A., Shlepova O.V., et al. SLURP-1 Controls Growth and Migration of Lung Adenocarcinoma Cells, Forming a Complex With a7-nAChR and PDGFR/EGFR Heterodimer // Frontiers in Cell and Developmental Biology. 2021. Vol. 9. P. 2486. https://doi.org/10.3389/fcell.2021.739391.

120. Edelman B.L., Redente E.F. Isolation and Characterization of Mouse Fibroblasts // Methods Mol Biol. 2018. Vol. 1809. P. 59-67. https://doi.org/10.1007/978-1-4939-8570-8_5.

121. Varankar S.S., Bapat S.A. Migratory Metrics of Wound Healing: A Quantification Approach for in vitro Scratch Assays // Front. Oncol. Frontiers, 2018. Vol. 8. https://doi.org/10.3389/fonc.2018.00633.

122. Livak K.J., Schmittgen T.D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method // Methods. 2001. Vol. 25, № 4. P. 402-408. https://doi.org/10.1006/meth.2001.1262.

123. Gallolu Kankanamalage S., Karra A.S., Cobb M.H. WNK pathways in cancer signaling networks // Cell Commun Signal. 2018. Vol. 16. https://doi.org/10.1186/s12964-018-0287-1.

124. Shipunova V.O., Komedchikova E.N., Kotelnikova P.A., et al. Dual Regioselective Targeting the Same Receptor in Nanoparticle-Mediated Combination Immuno/Chemotherapy for Enhanced Image-Guided Cancer Treatment // ACS Nano. 2020. Vol. 14, № 10. P. 12781-12795. https://doi .org/10.1021/ acsnano.0c03421.

125. Buryakina A., Merkulova N. Nonclinical studies in the Russian Federation — Problems, regulatory norms, and harmonisation with international standards // MEW. European Medical Writers Association (EMWA), 2017. Vol. 26. P. 33-37.

126. OECD. Test No. 423: Acute Oral toxicity - Acute Toxic Class Method. Paris: Organisation for Economic Co-operation and Development, 2002. https://www.oecd-ilibrary.org/environment/test-no-423 -acute-oral-toxicity-acute-toxic-class-method_9789264071001 -en.

127. Mucchietto V., Fasoli F., Pucci S., et al. a9- and a7-containing receptors mediate the proproliferative effects of nicotine in the A549 adenocarcinoma cell line: 11 // Br J Pharmacol. 2018. Vol. 175, № 11. P. 1957-1972. https://doi.org/10.1111/bph.13954.

128. Arredondo J., Chernyavsky A.I., Grando S.A. Overexpression of SLURP-1 and -2 alleviates the tumorigenic action of tobacco-derived nitrosamine on immortalized oral epithelial cells // Biochemical Pharmacology. 2007. Vol. 74, № 8. P. 1315-1319. https://doi.org/10.1016Zj.bcp.2007.06.026.

129. Meng J., Zhang X.-T., Liu X.-L., et al. WSTF promotes proliferation and invasion of lung cancer cells by inducing EMT via PI3K/Akt and IL-6/STAT3 signaling pathways // Cell. Signal. 2016. Vol. 28, № 11. P. 1673-1682. https://doi.org/10.1016/j.cellsig.2016.07.008.

130. Chalhoub N., Baker S.J. PTEN and the PI3-kinase pathway in cancer // Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. 2009. Vol. 4. P. 127-150. https://doi.org/10.1146/annurev.pathoL4.110807.092311.

131. Bian C., Liu Z., Li D., et al. PI3K/AKT inhibition induces compensatory activation of the MET/STAT3 pathway in non-small cell lung cancer // Oncol Lett. 2018. Vol. 15, № 6. P. 96559662. https://doi.org/10.3892/ol.2018.8587.

132. Shulepko M.A., Bychkov M.L., Shlepova O.V., et al. Human secreted protein SLURP-1 abolishes nicotine-induced proliferation, PTEN down-regulation and a7-nAChR expression up-regulation in lung cancer cells // Int. Immunopharmacol. 2020. Vol. 82. P. 106303. https://doi.org/10.1016/j.intimp.2020.106303.

133. Brown K.C., Perry H.E., Lau J.K., et al. Nicotine induces the up-regulation of the a7-nicotinic receptor (a7-nAChR) in human squamous cell lung cancer cells via the Sp1/GATA protein pathway // J. Biol. Chem. 2013. Vol. 288, № 46. P. 33049-33059. https://doi.org/10.1074/jbc.M113.501601.

134. Lupacchini L., Maggi F., Tomino C., et al. Nicotine Changes Airway Epithelial Phenotype and May Increase the SARS-COV-2 Infection Severity // Molecules. 2020. Vol. 26. P. 101. https://doi.org/10.3390/molecules26010101.

135. Catalanotto C., Cogoni C., Zardo G. MicroRNA in Control of Gene Expression: An Overview of Nuclear Functions // Int J Mol Sci. 2016. Vol. 17, № 10. https://doi.org/10.3390/ijms17101712.

136. Xu X.M., Qian J.C., Deng Z.L., et al. Expression of miR-21, miR-31, miR-96 and miR-135b is correlated with the clinical parameters of colorectal cancer // Oncol Lett. 2012. Vol. 4, № 2. P. 339-345. https://doi.org/10.3892/ol.2012.714.

137. Othman N., Nagoor N.H. The Role of microRNAs in the Regulation of Apoptosis in Lung Cancer and Its Application in Cancer Treatment // Biomed Res Int. 2014. Vol. 2014. https://doi.org/10.1155/2014/318030.

138. Smolarz M., Widlak P. Serum Exosomes and Their miRNA Load-A Potential Biomarker of Lung Cancer // Cancers (Basel). 2021. Vol. 13, № 6. https://doi.org/10.3390/cancers13061373.

139. Misiura M., Baszanowska W., Oscilowska I., et al. Prolidase Stimulates Proliferation and Migration through Activation of the PI3K/Akt/mTOR Signaling Pathway in Human Keratinocytes: 23 // International Journal of Molecular Sciences. Multidisciplinary Digital Publishing Institute, 2020. Vol. 21, № 23. P. 9243. https://doi.org/10.3390/ijms21239243.

140. Witayateeraporn W., Arunrungvichian K., Pothongsrisit S., et al. a7-Nicotinic acetylcholine receptor antagonist QND7 suppresses non-small cell lung cancer cell proliferation and migration via inhibition of Akt/mTOR signaling // Biochem Biophys Res Commun. 2020. Vol. 521, № 4. P. 977-983. https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2019.11.018.

141. Cochard L.M., Levros L.-C.J., Joppe S.E., et al. Manipulation of EGFR-Induced Signaling for the Recruitment of Quiescent Neural Stem Cells in the Adult Mouse Forebrain // Front. Neurosci. Frontiers, 2021. Vol. 15. https://doi.org/10.3389/fnins.2021.621076.

142. Scully M.M., Palacios-Helgeson L.K., Wah L.S., et al. Rapid estrogen signaling negatively regulates PTEN activity through phosphorylation in endometrial cancer cells // Horm Cancer. 2014. Vol. 5, № 4. P. 218-231. https://doi.org/10.1007/s12672-014-0184-z.

143. Kazlauskas A., Cooper J.A. Phosphorylation of the PDGF receptor beta subunit creates a tight binding site for phosphatidylinositol 3 kinase // EMBO J. 1990. Vol. 9, № 10. P. 3279-3286.

144. Zhang J., Chen T., Mao Q., et al. PDGFR-ß-activated ACK1-AKT signaling promotes glioma tumorigenesis // Int J Cancer. 2015. Vol. 136, № 8. P. 1769-1780. https://doi.org/10.1002/ijc.29234.

145. Wang N., Feng T., Liu X., et al. Curcumin inhibits migration and invasion of non-small cell lung cancer cells through up-regulation of miR-206 and suppression of PI3K/AKT/mTOR signaling pathway // Acta Pharm. 2020. Vol. 70, № 3. P. 399-409. https://doi.org/10.2478/acph-2020-0029.

146. Morelli A.P., Tortelli Jr T.C., Pavan I.C.B., et al. Metformin impairs cisplatin resistance effects in A549 lung cancer cells through mTOR signaling and other metabolic pathways // International

Journal of Oncology. Spandidos Publications, 2021. Vol. 58, № 6. P. 1-15. https://doi.org/10.3892/ijo.2021.5208.

147. Heldin C.-H., Östman A., Rönnstrand L. Signal transduction via platelet-derived growth factor receptors // Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Reviews on Cancer. 1998. Vol. 1378, № 1. P. F79-F113. https://doi.org/10.1016/S0304-419X(98)00015-8.

148. Zhou H., Huang S. Role of mTOR Signaling in Tumor Cell Motility, Invasion and Metastasis // Curr Protein Pept Sci. 2011. Vol. 12, № 1. P. 30-42.

149. Irtegun S., Wood R.J., Ormsby A.R., et al. Tyrosine 416 is phosphorylated in the closed, repressed conformation of c-Src // PLoS One. 2013. Vol. 8, № 7. P. e71035. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0071035.

150. Takikita-Suzuki M., Haneda M., Sasahara M., et al. Activation of Src Kinase in Platelet-Derived Growth Factor-B-Dependent Tubular Regeneration after Acute Ischemic Renal Injury // Am J Pathol. 2003. Vol. 163, № 1. P. 277-286.

151. Furcht C.M., Buonato J.M., Lazzara M.J. EGFR-activated Src family kinases maintain GAB1-SHP2 complexes distal from EGFR // Sci Signal. 2015. Vol. 8, № 376. P. ra46. https://doi.org/10.1126/scisignal.2005697.

152. Byers L.A., Sen B., Saigal B., et al. Reciprocal regulation of c-Src and STAT3 in non-small cell lung cancer // Clin Cancer Res. 2009. Vol. 15, № 22. P. 6852-6861. https://doi.org/10.1158/1078-0432.CCR-09-0767.

153. Beadnell T.C., Nassar K.W., Rose M.M., et al. Src-mediated regulation of the PI3K pathway in advanced papillary and anaplastic thyroid cancer // Oncogenesis. 2018. Vol. 7, № 2. P. 1-14. https://doi.org/10.1038/s41389-017-0015-5.

154. Porta C., Paglino C., Mosca A. Targeting PI3K/Akt/mTOR Signaling in Cancer // Front Oncol. 2014. Vol. 4. P. 64. https://doi.org/10.3389/fonc.2014.00064.

155. Chernyavsky A.I., Shchepotin I.B., Grando S.A. Mechanisms of growth-promoting and tumor-protecting effects of epithelial nicotinic acetylcholine receptors // International Immunopharmacology. 2015. Vol. 29, № 1. P. 36-44. https://doi.org/10.1016/j.intimp.2015.05.033.

156. Valius M., Bazenet C., Kazlauskas A. Tyrosine-1021 and Tyrosine-1009 Are Phosphorylation Sites in the Carboxy Terminus of the Platelet-Derived Growth-Factor Receptor-Beta Subunit and Are Required for Binding of Phospholipase C-Gamma and a 64-Kilodalton Protein, Respectively // Mol. Cell. Biol. Washington: Amer Soc Microbiology, 1993. Vol. 13, № 1. P. 133-143. https://doi.org/10.1128/MCB.13.L133.

157. Klinghoffer R.A., Duckworth B., Valius M., et al. Platelet-derived growth factor-dependent activation of phosphatidylinositol 3-kinase is regulated by receptor binding of SH2-domain-containing proteins which influence Ras activity // Mol. Cell. Biol. Washington: Amer Soc Microbiology, 1996. Vol. 16, № 10. P. 5905-5914.

158. Kharbanda A., Walter D.M., Gudiel A.A., et al. Blocking EGFR palmitoylation suppresses PI3K signaling and mutant KRAS lung tumorigenesis // Sci. Signal. American Association for the Advancement of Science, 2020. Vol. 13, № 621. https://doi.org/10.1126/scisignal.aax2364.

159. Kandel E.S., Skeen J., Majewski N., et al. Activation of Akt/Protein Kinase B Overcomes a G2/M Cell Cycle Checkpoint Induced by DNA Damage // Mol Cell Biol. 2002. Vol. 22, № 22. P. 78317841. https://doi.org/10.1128/MCB.22.22.7831-7841.2002.

160. Hsieh H.-J., Zhang W., Lin S.-H., et al. Systems biology approach reveals a link between mTORC1 and G2/M DNA damage checkpoint recovery // Nat Commun. 2018. Vol. 9, № 1. P. 3982. https://doi.org/10.1038/s41467-018-05639-x.

161. Shaheen M., Cheema Y., Shahbaz A.U., et al. Intracellular calcium overloading and oxidative stress in cardiomyocyte necrosis via a mitochondriocentric signal-transducer-effector pathway // Exp Clin Cardiol. 2011. Vol. 16, № 4. P. 109-115.

162. Law R.J., Henchman R.H., McCammon J.A. A gating mechanism proposed from a simulation of a human a7 nicotinic acetylcholine receptor // Proceedings of the National Academy of Sciences.

Proceedings of the National Academy of Sciences, 2005. Vol. 102, № 19. P. 6813-6818. https://doi.org/10.1073/pnas.0407739102.

163. Gulsevin A. Nicotinic receptor pharmacology in silico: Insights and challenges // Neuropharmacology. 2020. Vol. 177. P. 108257. https://doi.org/10.1016/j.neuropharm.2020.108257.

164. Salinas M., Kessler P., Douguet D., et al. Mambalgin-1 pain-relieving peptide locks the hinge between a4 and a5 helices to inhibit rat acid-sensing ion channel 1a // Neuropharmacology. 2021. Vol. 185. P. 108453. https://doi.org/10.1016/j.neuropharm.2021.108453.

165. Falkenstein R.J., Pena C. Synthetic peptides derived from the central loop of fasciculin: Structural analysis and evaluation as inhibitors of acetylcholinesterase // Biochim. Biophys. Acta-Protein Struct. Molec. Enzym. Amsterdam: Elsevier Science Bv, 1997. Vol. 1340, № 1. P. 143-151. https://doi.org/10.1016/S0167-4838(97)00040-X.

166. Kudryavtsev D.S., Shelukhina I.V., Son L.V., et al. Neurotoxins from snake venoms and a-conotoxin ImI inhibit functionally active ionotropic y-aminobutyric acid (GABA) receptors // J. Biol. Chem. 2015. Vol. 290, № 37. P. 22747-22758. https://doi.org/10.1074/jbc.M115.648824.

167. Lyukmanova E.N., Shulepko M.A., Shenkarev Z.O., et al. Central loop of non-conventional toxin WTX from Naja kaouthia is important for interaction with nicotinic acetylcholine receptors // Toxicon. 2016. Vol. 119. P. 274-279. https://doi.org/10.1016/j.toxicon.2016.06.012.

168. Rahman Md.M., Teng J., Worrell B.T., et al. Structure of the Native Muscle-type Nicotinic Receptor and Inhibition by Snake Venom Toxins // Neuron. 2020. P. S0896627320302191. https://doi.org/10.1016/j.neuron.2020.03.012.

169. Ertle C.M., Rommel F.R., Tumala S., et al. New Pathways for the Skin's Stress Response: The Cholinergic Neuropeptide SLURP-1 Can Activate Mast Cells and Alter Cytokine Production in Mice // Front. Immunol. Frontiers, 2021. Vol. 12. https://doi.org/10.3389/fimmu.2021.631881.

170. Morozevich G.E., Kozlova N.I., Ushakova N.A., et al. Integrin a5p1 simultaneously controls EGFR-dependent proliferation and Akt-dependent pro-survival signaling in epidermoid carcinoma cells // Aging. 2012. Vol. 4, № 5. P. 368-374. https://doi.org/10.18632/aging.100457.

171. Camacho L., Ouro A., Gomez-Larrauri A., et al. Implication of Ceramide Kinase/C1P in Cancer Development and Progression // Cancers (Basel). 2022. Vol. 14, № 1. P. 227. https://doi .org/10.3390/cancers14010227.

172. Vangapandu H., Ai W. Kruppel like factor 4 (KLF4): A transcription factor with diverse context-dependent functions // Gene Therapy and Molecular Biology. 2009. Vol. 13.

173. Swamynathan S., Buela K.-A., Kinchington P., et al. Klf4 Regulates the Expression of Slurp1, Which Functions as an Immunomodulatory Peptide in the Mouse Cornea // Investigative Ophthalmology & Visual Science. 2012. Vol. 53, № 13. P. 8433-8446. https://doi.org/10.1167/iovs.12-10759.

174. Yang L., Lu X., Qiu F., et al. Duplicated copy of CHRNA7 increases risk and worsens prognosis of COPD and lung cancer // Eur J Hum Genet. 2015. Vol. 23, № 8. P. 1019-1024. https://doi.org/10.1038/ejhg.2014.229.

175. Wang L., Du L., Xiong X., et al. Repurposing dextromethorphan and metformin for treating nicotine-induced cancer by directly targeting CHRNA7 to inhibit JAK2/STAT3/SOX2 signaling // Oncogene. 2021. Vol. 40, № 11. P. 1974-1987. https://doi.org/10.1038/s41388-021-01682-z.

176. Hou J., Yan D., Liu Y., et al. The Roles of Integrin a5p1 in Human Cancer // Onco Targets Ther. 2020. Vol. 13. P. 13329-13344. https://doi.org/10.2147/OTT.S273803.

177. Payne A.W., Pant D.K., Pan T.-C., et al. Ceramide kinase promotes tumor cell survival and mammary tumor recurrence // Cancer Res. 2014. Vol. 74, № 21. P. 6352-6363. https://doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-14-1292.

178. Neagu M., Constantin C., Cretoiu S.M., et al. miRNAs in the Diagnosis and Prognosis of Skin Cancer // Front Cell Dev Biol. 2020. Vol. 8. P. 71. https://doi.org/10.3389/fcell.2020.00071.

179. Horsham J.L., Ganda C., Kalinowski F.C., et al. MicroRNA-7: A miRNA with expanding roles in development and disease // The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 2015. Vol. 69. P. 215-224. https://doi.org/10.1016Zj.biocel.2015.11.001.

180. Sonkoly E., Lovén J., Xu N., et al. MicroRNA-203 functions as a tumor suppressor in basal cell carcinoma: 3 // Oncogenesis. Nature Publishing Group, 2012. Vol. 1, № 3. P. e3-e3. https://doi.org/10.1038/oncsis.2012.3.

181. Yang C.H., Yue J., Pfeffer S.R., et al. MicroRNA miR-21 regulates the metastatic behavior of B16 melanoma cells // J Biol Chem. 2011. Vol. 286, № 45. P. 39172-39178. https://doi.org/10.1074/jbc.M111.285098.

182. Hu Y., Wang Q., Zhu X.-H. MiR-135b is a novel oncogenic factor in cutaneous melanoma by targeting LATS2 // Melanoma Res. 2019. Vol. 29, № 2. P. 119-125. https://doi.org/10.1097/CMR.0000000000000524.

183. Garofalo M., Quintavalle C., Romano G., et al. miR221/222 in Cancer: Their Role in Tumor Progression and Response to Therapy // Curr Mol Med. 2012. Vol. 12, № 1. P. 27-33.

184. Wang A., Landén N.X., Meisgen F., et al. MicroRNA-31 Is Overexpressed in Cutaneous Squamous Cell Carcinoma and Regulates Cell Motility and Colony Formation Ability of Tumor Cells // PLOS ONE. Public Library of Science, 2014. Vol. 9, № 7. P. e103206. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0103206.

185. Yu T., Ma P., Wu D., et al. Functions and mechanisms of microRNA-31 in human cancers // Biomedicine & Pharmacotherapy. 2018. Vol. 108. P. 1162-1169. https://doi.org/10.1016/j.biopha.2018.09.132.

186. Bai H., Wu S. miR-451: A Novel Biomarker and Potential Therapeutic Target for Cancer // Onco Targets Ther. 2019. Vol. 12. P. 11069-11082. https://doi.org/10.2147/0TT.S230963.

187. Wang K., Zhang Z.-W. Expression of miR-203 is decreased and associated with the prognosis of melanoma patients: 10 // Int J Clin Exp Pathol. 2015. Vol. 8, № 10. P. 13249-13254.

188. Cañueto J., Cardeñoso-Álvarez E., García-Hernández J.L., et al. MicroRNA (miR)-203 and miR-205 expression patterns identify subgroups of prognosis in cutaneous squamous cell carcinoma // British Journal of Dermatology. 2017. Vol. 177, № 1. P. 168-178. https://doi.org/10.1111/bjd.15236.

189. Li J., Zheng H., Yu F., et al. Deficiency of the Kruppel-like factor KLF4 correlates with increased cell proliferation and enhanced skin tumorigenesis // Carcinogenesis. 2012. Vol. 33, № 6. P. 12391246. https://doi.org/10.1093/carcin/bgs143.

190. Chew Y.C., Adhikary G., Wilson G.M., et al. Protein kinase C (PKC) delta suppresses keratinocyte proliferation by increasing p21(Cip1) level by a KLF4 transcription factor-dependent mechanism // J Biol Chem. 2011. Vol. 286, № 33. P. 28772-28782. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.205245.

191. Shlepova O.V., Shulepko M.A., Shipunova V.O., et al. Selective targeting of a7 nicotinic acetylcholine receptor by synthetic peptide mimicking loop I of human SLURP-1 provides efficient and prolonged therapy of epidermoid carcinoma in vivo // Front Cell Dev Biol. 2023. Vol. 11. P. 1256716. https://doi.org/10.3389/fcell.2023.1256716.

192. Xu Q., Liu M., Zhang J., et al. Overexpression of KLF4 promotes cell senescence through microRNA-203-survivin-p21 pathway // Oncotarget. 2016. Vol. 7, № 37. P. 60290-60302. https://doi.org/10.18632/oncotarget.11200.

193. Gong Z.-H., Zhou F., Shi C., et al. miRNA-221 promotes cutaneous squamous cell carcinoma progression by targeting PTEN // Cellular & Molecular Biology Letters. 2019. Vol. 24, № 1. P. 9. https://doi.org/10.1186/s11658-018-0131-z.

194. Xu T., Qin L., Zhu Z., et al. MicroRNA-31 functions as a tumor suppressor and increases sensitivity to mitomycin-C in urothelial bladder cancer by targeting integrin a5 // Oncotarget. 2016. Vol. 7, № 19. P. 27445-27457. https://doi.org/10.18632/oncotarget.8479.

195. Liang M., Shi B., Liu J., et al. Downregulation of miR203 induces overexpression of PIK3CA and predicts poor prognosis of gastric cancer patients // Drug Des Devel Ther. 2015. Vol. 9. P. 36073616. https://doi.org/10.2147/DDDT.S85525.

196. Han N., Li H., Wang H. MicroRNA-203 inhibits epithelial-mesenchymal transition, migration, and invasion of renal cell carcinoma cells via the inactivation of the PI3K/AKT signaling pathway by inhibiting CAV1 // Cell Adhesion & Migration. Taylor & Francis, 2020. Vol. 14, № 1. P. 227-241. https://doi.org/10.1080/19336918.2020.1827665.

197. Gangoiti P., Granado M.H., Wang S.W., et al. Ceramide 1-phosphate stimulates macrophage proliferation through activation of the PI3-kinase/PKB, JNK and ERK1/2 pathways // Cellular Signalling. 2008. Vol. 20, № 4. P. 726-736. https://doi.org/10.1016/j.cellsig.2007.12.008.

198. Lyukmanova E.N., Shulepko M.A., Bychkov M.L., et al. Human SLURP-1 and SLURP-2 Proteins Acting on Nicotinic Acetylcholine Receptors Reduce Proliferation of Human Colorectal Adenocarcinoma HT-29 Cells // Acta Naturae. 2014. Vol. 6, № 4. P. 60-66.

199. Bychkov M.L., Shulepko M.A., Shlepova O.V., et al. Recombinant Analogue of the Human Protein SLURP-1 Inhibits the Growth of Multicellular Spheroids Reconstructed from Carcinoma Cells // Dokl Biochem Biophys. 2019. Vol. 489, № 1. P. 392-395. https://doi.org/10.1134/S1607672919060103.

200. Shulepko M.A., Bychkov M.L., Lyukmanova E.N., et al. Recombinant Analogue of the Human Protein SLURP-1 Inhibits the Growth of U251 MG and A172 Glioma Cells // Dokl Biochem Biophys. 2020. Vol. 493, № 1. P. 211-214. https://doi.org/10.1134/S1607672920040134.

201. Shulepko M.A., Bychkov M.L., Kirpichnikov M.P., et al. Recombinant SLURP-1 Inhibits Growth and Migration of U251 MG Glioma by Cell Cycle Arrest and Modulation of MAPK and AKT Signaling Pathways // Russ J Bioorg Chem. 2023. Vol. 49, № 4. P. 403-410. https://doi.org/10.31857/S0132342323040401.

202. Miller K.D., Nogueira L., Devasia T., et al. Cancer treatment and survivorship statistics, 2022 // CA: A Cancer Journal for Clinicians. 2022. Vol. 72, № 5. P. 409-436. https://doi.org/10.3322/caac.21731.

203. van der Zanden S.Y., Qiao X., Neefjes J. New insights into the activities and toxicities of the old anticancer drug doxorubicin // FEBS J. 2021. Vol. 288, № 21. P. 6095-6111. https://doi.org/10.1111/febs.15583.

204. Kaminska K., Cudnoch-J^drzejewska A. A Review on the Neurotoxic Effects of Doxorubicin // Neurotox Res. 2023. Vol. 41, № 5. P. 383-397. https://doi.org/10.1007/s12640-023-00652-5.

205. Swain S.M., Whaley F.S., Ewer M.S. Congestive heart failure in patients treated with doxorubicin: a retrospective analysis of three trials // Cancer. 2003. Vol. 97, № 11. P. 2869-2879. https://doi .org/10.1002/cncr.11407.

206. Tian Z., Yang Y., Yang Y., et al. High cumulative doxorubicin dose for advanced soft tissue sarcoma // BMC Cancer. 2020. Vol. 20, № 1. P. 1139. https://doi.org/10.1186/s12885-020-07663-x.

207. Upshaw J.N. Cardioprotective Strategies to Prevent Cancer Treatment-Related Cardiovascular Toxicity: a Review // Curr Oncol Rep. 2020. Vol. 22, № 7. P. 72. https://doi.org/10.1007/s11912-020-00923-w.

208. El-Agamy S.E., Abdel-Aziz A.K., Esmat A., et al. Chemotherapy and cognition: comprehensive review on doxorubicin-induced chemobrain // Cancer Chemother Pharmacol. 2019. Vol. 84, № 1. P. 1-14. https://doi.org/10.1007/s00280-019-03827-0.

209. Du J., Zhang A., Li J., et al. Doxorubicin-Induced Cognitive Impairment: The Mechanistic Insights // Frontiers in Oncology. 2021. Vol. 11. https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fonc.2021.673340.

210. Qin S.-Y., Cheng Y.-J., Lei Q., et al. Combinational strategy for high-performance cancer chemotherapy // Biomaterials. 2018. Vol. 171. P. 178-197. https://doi.org/10.1016/j.biomaterials.2018.04.027.

211. Bello L., Carrabba G., Giussani C., et al. Low-dose Chemotherapy Combined with an Antiangiogenic Drug Reduces Human Glioma Growth in Vivo1 // Cancer Research. 2001. Vol. 61, № 20. P. 7501-7506.

212. Shulepko M.A., Kulbatskii D.S., Bychkov M.L., et al. Human Nicotinic Acetylcholine Receptors: Part II. Non-Neuronal Cholinergic System // Russ. J. Bioorg. Chem. 2019. Vol. 45, № 2. P. 66-75. https://doi.org/10.1134/S1068162019020122.

213. Sritharan S., Sivalingam N. A comprehensive review on time-tested anticancer drug doxorubicin // Life Sciences. 2021. Vol. 278. P. 119527. https://doi.org/10.1016/j.lfs.2021.119527.

214. Johnson-Arbor K., Dubey R. Doxorubicin // StatPearls. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing, 2023. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK459232/.

215. Sigismund S., Avanzato D., Lanzetti L. Emerging functions of the EGFR in cancer // Mol Oncol. 2018. Vol. 12, № 1. P. 3-20. https://doi.org/10.1002/1878-0261.12155.

216. Cuan X., Yang X., Zhu W., et al. Antitumor effects of erlotinib in combination with berberine in A431 cells // BMC Pharmacol Toxicol. 2023. Vol. 24, № 1. P. 29. https://doi.org/10.1186/s40360-023-00661-2.

217. Xu Y.H., Richert N., Ito S., et al. Characterization of epidermal growth factor receptor gene expression in malignant and normal human cell lines // Proc Natl Acad Sci U S A. 1984. Vol. 81, № 23. P. 7308-7312. https://doi.org/10.1073/pnas.81.23.7308.

218. Uribe M.L., Marrocco I., Yarden Y. EGFR in Cancer: Signaling Mechanisms, Drugs, and Acquired Resistance // Cancers (Basel). 2021. Vol. 13, № 11. P. 2748. https://doi.org/10.3390/cancers13112748.

219. Yun U.-J., Lee J.-H., Shim J., et al. Anti-cancer effect of doxorubicin is mediated by downregulation of HMG-Co A reductase via inhibition of EGFR/Src pathway: 8 // Lab Invest. Nature Publishing Group, 2019. Vol. 99, № 8. P. 1157-1172. https://doi.org/10.1038/s41374-019-0193-1.

220. Bao J., Gur G., Yarden Y. Src promotes destruction of c-Cbl: implications for oncogenic synergy between Src and growth factor receptors // Proc Natl Acad Sci U S A. 2003. Vol. 100, № 5. P. 2438-2443. https://doi.org/10.1073/pnas.0437945100.

221. Zhao C., Yang L., Zhou F., et al. Feedback activation of EGFR is the main cause for STAT3 inhibition-irresponsiveness in pancreatic cancer cells // Oncogene. 2020. Vol. 39, № 20. P. 39974013. https://doi.org/10.1038/s41388-020-1271-y.

222. Wang D., Su L., Huang D., et al. Downregulation of E-Cadherin enhances proliferation of head and neck cancer through transcriptional regulation of EGFR // Mol Cancer. 2011. Vol. 10. P. 116. https://doi.org/10.1186/1476-4598-10-116.