Исследование транскрипции и репликации вируса Марбург с использованием минирепликонной системы, сконструированной на основе фрагментов его генома тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Качко, Алла Васильевна

  • Качко, Алла Васильевна
  • кандидат биологических науккандидат биологических наук
  • 2002, Кольцово
  • Специальность ВАК РФ03.00.03
  • Количество страниц 109
Качко, Алла Васильевна. Исследование транскрипции и репликации вируса Марбург с использованием минирепликонной системы, сконструированной на основе фрагментов его генома: дис. кандидат биологических наук: 03.00.03 - Молекулярная биология. Кольцово. 2002. 109 с.

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Качко, Алла Васильевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИИ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Цикл репликации вирусов класса Mononegavirales

1.1.1 .Транскрипция и репликация вирусов сем. Paramyxoviridae

1.1.2.Цикл репликации вирусов сем. Rhabdoviridae.

1.1.3.Цикл репликации вирусов сем. Filoviridae

1.2. Разработка методов "обратной генетики" для исследования механизмов репликации вирусов сНГНП геномом.

1.2.1. Создание минигеномных систем, несущих некодирующие концевые районы генома вируса и репортёрный ген (САТ, LUC, GFP), на основе геномов НГНП вирусов.

1.2.2. Характеристика цис- и /иряне-действующих элементов транскрипции и репликации с использованием минигеномных систем на основе геномов НГНП вирусов.

1.2.3. Создание ди - и трицистронных систем для исследования роли вирусных белков и влияния межгенных областей на процессы репликации синтетических минигеномных РНК.

1.2.4. Минигеномные системы, сконструированные на основе генома филовирусов.

1.3. Конструирование полноразмерных кДНК-копий вирусов с негативным несегментированным РНК-геномом и оживление рекомбинантных вирусов при комплементации плазмидами-помощниками.

1.3.1. Оживление рекомбинантных рабдовирусов из ДНК-копий их геномов.

1.3.2. Оживление изменённых рекомбинантных вариантов парамиксовирусов из кДНК клонов, несущих делении отдельных вирусных генов, а также вставки чужеродных генов.

1.3.3. Воссоздание инфекционного вируса Эбола из его комплементарной кДНК-копии.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.2. Основные методы

2.2.1. Генно-инженерные методы конструирования полноразмерных копий вирусных генов.

2.2.2. Секвенирование

2.2.3. Транзиентная трансфекция плазмид в клеточную линию 293.

2.2.4 Вестерн-блот анализ рекомбинантных белков УР35, ОТ.

2.2.5 Радиоиммунопреципитация и электрофоретигческий анализ рекомбинантного белка Ь. 44 2.2.6. Иммуноферментный анализ белка УРЗО и ЯТ-РСЯ анализ синтеза мРНК УР30. 45 2.2.7 Совместная РНК-ДНК трансфекция.

2.2.8. САТ-анализ.

2.2.9. Выделение суммарной РНК из трансфецированных клеток.

2.2.10. 87-нуклеазный анализ

2.2.11. Нозерн-блот.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Исследование свойств рекомбинантных белков нуклеокапсида вируса Марбург, экспрессированных в эукариотической системе

3.1.1 Конструирование плазмид, несущих полноразмерные копии генов NP, VP35 под транскрипционным промотором Т7-РНК полимеразы. 48 3.1.2. Антигенные и функциональные характеристики рекомбинантных белков нуклеокапсида вируса Марбург.

3.2. Минирепликонная система, сконструированная на основе генома вируса Марбург.

3.2.1. Минигеномная плазмида pMG

3.2.2 Экспрессия и репликация минигеномного аналога РНК, синтезированного с минигеномной плазмиды pMG5 при комплементации вирусом- помощником Марбург.

3.2.3 Экспрессия чужеродного бактериального гена с минигеномной РНК и репликация миниантигенома рекомбинантным полимеразным комплексом вируса Марбург.

3.3. Исследование ^ис-действующих элементов лидерной и трейлерной областей в процессах транскрипции и репликации вируса Марбург

3.3.1. Конструирование вариантов минигеномной плазмиды с изменёнными трейлерными и лидерными последовательностями

3.3.2. Изучение эффекта мутаций в лидерной и трейлерной области на экспрессию репортёрного гена CAT при комплементации вирусом-помощником Марбург.

3.3.3. Изучение эффекта мутаций в лидерной области на инкапсидацию Т7 РНК транскрипта при комплементации плазмидами-помощниками.

3.3.4. Изучение эффекта мутаций в лидерной области на синтез вирусспецифических матричной и антигеномной РНК 85 3.3.5 Изучение эффекта делеций в трейлерной области на синтез вирусспецифичной РНК.

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Молекулярная биология», 03.00.03 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование транскрипции и репликации вируса Марбург с использованием минирепликонной системы, сконструированной на основе фрагментов его генома»

Методы обратной генетики в отличие от классической предполагают внесение мутаций в геном и последующие исследования влияния этих мутаций на функционирование генома. Первыми были разработаны методы генно-инженерных манипуляций с вирусами, содержащими ДНК геномы; здесь использовали методы трансфекции плазмид, кодирующих полный геном, или гетерологичной рекомбинации плазмид, несущих вирусспецифические последовательности (Mackett М., et al 1982). Далее были разработаны методы манипуляций с вирусными РНК-геномами позитивной полярности. Так как РНК этих вирусов является матричной, то оживление рекомбинантного вируса включает просто трансфекцию плазмиды, содержащей полную копию генома, или синтезированную с этой плазмиды РНК (Racaniello V.R., and D. Baltimore. 1981, Post L.E. et al. 1981, Panicali D. et al.,1982). Это дало возможность получать рекомбинантные вирусы с измененными свойствами и исследовать функции отдельных вирусных генов и их частей. В то же время прямые генно-инженерные манипуляции с вирусами с несегментированным одноцепочечным РНК-геномом негативной полярности (НГНП) затруднены, так как вирусная РНК не является матричной, и для транскрипции и репликации вирусной РНК полимеразой должна быть связана с белками нуклеокапсида вируса (Roberts A. et al., 1998). Таким образом, основной задачей в исследовании молекулярной биологии НГНП вирусов являлась разработка системы методов обратной генетики, позволяющих воссоздавать рекомбинантные вирусы с кДНК плазмид (Pekozs А., 1999).

НГНП вирусы включают ряд патогенов, вызывающих болезни человека и животных, таких как вирусы парагриппа, вирусы бешенства, вирусы Марбург и Эбола, вирус кори, респираторно-синцитиальный вирус и ряд других. Методы обратной генетики, разработанные в последнее десятилетие для данного типа вирусов, позволили исследовать процессы транскрипции и репликации, картировать z/ис-активные сигналы и транс-действующие факторы (Conzelmann К.К. et al, 1994; Yu Q., et al. 1995).С их помощью также были разработаны и подходы к конструированию генно-инженерных рекомбинантных живых аттенуированных вариантов вакцин (Whitehead S.S. et al., 1999).

Геномы филовирусов Марбург и Эбола в виде одноцепочечной РНК негативной полярности являются самыми большими среди вирусов класса Mononegavirales, и их структура в общих чертах соответствует структуре геномов парамиксовирусов и рабдовирусов (Feldmann Н. and Klenk H.-D.,1996). Из-за высокой патогенности и контагиозности, а также отсутствия надежных средств профилактики работа с данными 4 вирусами требует максимальных условий биозащиты. В настоящее время во многих лабораториях (Muhlberger E.et al 1998; Volchkov V.E, et al. 2001) ведётся активная работа по созданию систем, позволяющих проводить генно-инженерные манипуляции с геномом данных вирусов с целью изучения молекулярных основ их экстремальной патогенности и разработки средств лечения и профилактики (Muhlberger E.et al 1998; Volchkov V.E, et al. 2001)

Целью настоящей работы являлось создание минирепликонной системы на основе генома вируса Марбург и проведение с ее помощью исследований трансдействующих вирусных белков и г/мс-активных элементов генома в процессах транскрипции и репликации. С использованием минирепликонной системы такие исследования можно проводить без использования инфекционного вируса, относящегося к 1 -й группе патогенности.

В вирионах или внутри клетки РНК филовирусов постоянно связана с белками нуклеокапсида (Becker S.et al., 1998), которые необходимы для процессов транскрипции и репликации. Наличие этих белков в клетке может быть обеспечено с помощью инфекционного вируса или плазмид-помощников, кодирующих рекомбинантные белки нуклеокапсида. Таким образом, в ходе исследования решалось несколько задач:

Первая: сконструировать плазмиды-помощники, кодирующие белки нуклеокапсида вируса Марбург и показать, что рекомбинантные белки, которые экспрессируются с этих плазмид по своим антигенным и функциональным характеристикам близки природным белкам вируса Марбург.

Вторая: создать минигеномную плазмиду, включающую некодирующие районы лидера и трейлера генома вируса Марбург и маркерный ген хлорамфениколацетилтрансферразы (CAT). Исследовать, содержатся ли в минигеноме все необходимые г/мс-действующие регуляторные сигналы транскрипции и репликации, которые распознаются полимеразным комплексом вируса Марбург.

Третья: продемонстрировать возможность исследования с помощью данной минирепликонной системы транс-действующих белков и г/мс-активных элементов, важных для процессов репликации, транскрипции и инкапсидации.

Представляемая работа описывает систему обратной генетики для вируса Марбург, позволяющую воссоздавать минигеномный аналог вируса из его кДНК клонов.

Похожие диссертационные работы по специальности «Молекулярная биология», 03.00.03 шифр ВАК

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Качко, Алла Васильевна

Выводы

1. Созданы плазмиды с полноразмерными копиями генов нуклеокапсида вируса Марбург - ЫР, УР35, Ь, УРЗО - под транскрипциооным контролем промоторома Т7 РНК полимеразы. Они обеспечивают эффективный синтез рекомбинантных белков УР35, Ь, УРЗО. Показано, что рекомбинантные белки по своим антигенным и функциональным характеристикам близки к природным белкам вируса Марбург.

2. Сконструирована оригинальная минигеномная плазмида, кодирующая: (1) лидерную область генома, включающую геномный промотор и сайт инициации транскрипции; (2) ген маркерного белка САТ; (3) трейлерную область генома, включающую сайт терминации транскрипции и предполагаемый антигеномный промотор, под транскрипционным контролем промотора Т7 РНК полимеразы. Минигеном включает все необходимые г/ис-действующие регуляторные сигналы транскрипции и репликации, которые распознаются полимеразным комплексом вируса Марбург.

3. Показано, что при ко-трансфекции эукариотических клеток, инфицированных рекомбинантным вирусом осповакцины уТР7-3, плазмидой, кодирующей минигеном и плазмидами-помощниками, кодирующими гены белков ОТ, УР35 и Ь, происходит транскрипция, репликация и инкапсидация минигеномной РНК.

4. Впервые произведено функциональное картирование участка лидерной последовательности между предполагаемым геномным промотором и сайтом инициации транскрипции гена № (положение 14-47). Выявлено, что район лидерной области в положениях 14-47 не вовлечен в процесс репликации вирусного генома, а районы 19-25, 34-41 и 42-47 необходимы для эффективной транскрипции.

5. Впервые выполнено картирование участка трейлерной области генома (положения 19036-19066), не имеющей аналога у представителей других семейств порядка Мопопе§аУпа1е8. Показано, что делеции этого участка длиной 20 и 30 нуклеотидов вызывают снижение транскрипции минигенома.

6. На основе вновь полученных данных предложена структура промотора транскрипции лидерной области. Она включает сайт связывания вирусной РНК-полимеразы, модулирующие районы транскрипции (энхансеры) и сайт инициации транскрипции первого гена!ЧР.

Заключение

В настоящей работе представлена система обратной генетики, позволяющая проводить прямые генно-инженерные манипуляции с некодирующими областями генома вируса Марбург. Полученная система позволяет исследовать влияние внесенных мутаций в некодирующие области генома на процессы транскрипции и репликации без использования инфекционного вируса.

В состав минирепликонной системы входят плазмиды-помощники, кодирующие гены нуклеокапсида вируса Марбург под контролем Т7 РНК полимеразы. При трансфекции плазмид-помощников в клеточную линию 293, инфицированную рекомбинантным вирусом осповакцины уТР7-3, кодирующим Т7 РНК полимеразу, экспрессируются белки нуклеокапсида вируса. Следующим компонентом системы является минигеномная плазмида, кодирующая минигеномный РНК аналог, несущая лидерную и трейлерную области вируса Марбург, которые фланкируют репортёрный бактериальный ген САТ.

Показано, что регуляторные элементы транскрипции и репликации, расположенные в лидере и трейлере минигенома распознаются вирусом-помощником Марбург. Такая РНК инкапсидируется, транскрибируется и реплицируется.

Таким образом, по отдельности были проверены все компоненты минирепликонной системы.

Кроме того, данная система может работать также и при комплементации плазмидами-помощниками, кодирующими гены полимеразного комплекса. При одновременной трансфекции плазмид-помощников и минигенома, минигеномная РНК

90 инкапсидировалась, а затем использовалась, как матрица для транскрипции мРНК CAT и репликации миниантигенома.

С помощью минирепликонной системы на основе фрагментов генома вируса Марбург нами было проведено исследование регуляторных сигналов транскрипции и репликации геномного и антигеномного промотора, в результате чего получены первые данные по локализации сигналов, влияющих на эти процессы. Уникальные последовательности в лидере 19-25(FA2), 34-41(FA4) и 42-47(FA5), не имеющие комплемента в трейлере, задействованы в процессе транскрипции мРНК CAT. Последовательность в трейлере, расположенная за сайтом терминации транскрипции L гена (в позиции 19036-19066) влияет на эффективность синтеза мРНК CAT .

Дальнейшие работы по картированию ^мс-активпых элементов геномного и антигеномного промотора могут быть направлены на исследование влияния индивидуальных нуклеотидов первых комплементарных 18 н. лидерной и трейлерной области, а также роли последовательностей сигналов инициации и терминации транскрипции генов на синтез мРНК и антигенома. На основе данной минирепликонной системы возможно конструирование ди- и три-цистронных моделей, которые позволят исследовать роль межгенных районов, которые у филовирусов имеют необычайно большую длину (рис.1).

Полученная минирепликонная система на основе генома вируса Марбург позволит в дальнейшем проводить также и мутационный анализ транс-действующих белков полимеразного комплекса вируса.

Наконец, на основе данной минирепликонной системы возможно конструирование полноразмерной копии генома МБГ и оживление рекомбинантного вируса в системе с плазмидами-помощниками. Как отмечает большинство авторов систем «оживления» НГНП вирусов, оптимизация минирепликонных систем с маркерным геном на основе вирусного генома является первым и очень ответственным этапом на пути создания рекомбинантных вирусов. Рекомбинантный полимеразный комплекс, синтезированный при определенных концентрациях плазмид-помощников, должен обладать как транскрипционной, так и репликативной активностью. Конструирование полноразмерных антигеномных копий вируса и «оживление» их с плазмидами-помощниками позволит в свою очередь получать рекомбинантные атеннуированые варианты вируса и исследовать их потенциал применения в качестве кандидатной живой генно-инженерной вакцины. Кроме того, подобные системы позволят исследовать молекулярно-биологические причины высокой патогенности филовирусов. Подобные эксперименты по оживлению вируса Эбола были недавно успешно проведены Волчковым В.В (Volchkov V.E, et al. 2001) и Neumann К. (Neumann G. et.al. 2001).

Дальнейшее развитие работ с рекомбинантными минирепликонными системами на основе генома вируса Марбург позволит получить новые данные о молекулярных механизмах репликации филовирусов. Кроме того, подобные системы могут быть использованы в экспериментах по исследованию роли клеточных факторов в процессах транскрипции и репликации.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Качко, Алла Васильевна, 2002 год

1. Abraham G., and A.K.Banerjee.1976. Sequential transcription of the genes of vesicular stomatitis virus. Proc.Natl.Acad.Sci.USA. Vol.73.p. 1504-1508

2. Arnheiter H., N.L.Davis, G.Wertz, M. Schubert, and R.A.Lazzarini.1985. Role of the nucleocapsid protein in regulating vesicular stomatitis virus RNA synthesis. Cell. Vol. 41. p. 259-267.

3. Ausubel F.M, Brent R., Moore D.D., Seidman J.G., Smith J.A.,Struhl K. 1993. Current Protocol in molecular biology. Published by Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience. NewYork.

4. Ball L.A., Pringle C.R., Flanagan B., Perepelitsa V.P., and Wertz G.W.I999. Phenotypic consequences of rearranging the P, M, and G genes of vesicular stomatitis virus. J. Virol. Vol.73. N. 6. p.4705-4712.

5. Barr J.N., S.P.Whelan, and G.W.Wertz . 1997. Cis-acting signals involved in termination of vesicular stoatitis virus mRNA synthesis include the conserved AUAC and the U7 signal for polyadenilation. Journal of Virology, vol. 71. P.8718-8725

6. Becker S., Huppertz S., Klenk H.-D., and Muhlberger E. 1994. The nucleorotein of Marburg virus is phosphorylated. J.Gen.Virol. Vol.75 p.809-818

7. Becker S., Klenk H-D., Muhlberger E. 1996. Intracellular transport and processing of the Marburg virus surface protein in vertebrate and insect cells. Virology.vol.225.p.145-155

8. Becker S., Rhine C., Hofsab U., Klenk H.-D. and Muhlberger E. 1998. Interactions of Marburg virus nucleocapsid proteins. Virology. V.249.p.406-417

9. Blumberg B.M., Giorgi C., and D.Kolakofsky.1983. N protein of vesicular stomatitis virus selectively encapsidates leader RNA in vitro. Cell, vol.32, p.559-567

10. Bowen ETW, Lloyd G, Harris WJ.1976. Viral haemorrhagic fever in southern Sudan and northernZair. Lancet. V.1977. n.l.p.571-573.

11. Bukreyev A.A., E.F. Belanov, V.M.Blinov, S.V.Netesov. 1995a. Complete nucleotide sequences of Marburg virus genes 5 and 6 encoding VP30 and VP24 proteins . Biochemistry and Molecular Biology International. Vol.35. No.3. p.605-613

12. Bukreyev A.A., Volchkov V.E., Blinov V.M., Dryga S.A., and S.V.Netesov. 1995b. The complete nucleotide sequence of the Popp (1967) strain of Marburg virus: a comparison with the musoke (1980) strain. Arch.virol. N.140. p.1589-1600

13. Bukreyev A., E. Camargo, and P.L. Collins. 1996. Recovery of infectious respiratory syncytial virus expression an additional, forein gene. Journal of Virology.vol.70. p. 6634-6641.96

14. Calain P., and L.Roux.1995. Functional characterization of the genomic and antigenomic promoters of Sendai virus. Virology. V.73.p.251-259

15. Canter D.M., and J.Perrault. 1996. Stabilization of vesicular stomatitis virus L polymerase protein by P protein binding: a small deletion in c-terminal domein of L abrogate binding. Virology. Vol. 219. p.376-386

16. Collins P.L., R.A.Olmsted, M.K. Spriggs, P.R.Johnson, and A.Buckler-White.1987. Gene overlap and attenuation of transcription of the viral polymerase L gene of human respiratory syncytial virus. Proc.Natl.Acad. Sci.USA.vol84.p.5134-5138.

17. Collins P.L., Mink M.A., and D.S.Stec. 1991. Rescue of synthetic analogs of respiratory syncytial virus genomic RNA and effect of truncations and mutations on expression of a forein reporter gene. Proc. Natl. Acad. Sci USA. Vol.88.p.9663-9667

18. Collins P.L., Mink M.A., Stec D.S. 1994. Rescue of synthetic analogs of respiratory syncytial virus genomic RNA and effect of truncations and mutations on the expression of a forein reporter gene. Proc.Natl.sci USA. Vol.88. N21.p.9663-9667.

19. Collins P.L., K.Mcintosh, and r.M.Chanock. 19956. Respiratory syncytial virus . p.1313-1351. In B.N.Fields et al (ed.), Fields virology. Raven Press,New.York.N.Y.

20. Collins PL., Hill MG., Cristina J., Crosfeld H. 1996. Transcription elongation factor of respiratory syncytial virus, a nonsegmented negative-strand RNA virus. Proc. Natl.Acad.USA . v.93.Nl.p.81-85

21. Colonno R. J., and A.K. Banerjee. 1978. Complete nucleotide sequence of the leader RNA synthesized in vitro by vesicular stoMatitis virus. Cell.vol.8. p. 197-204

22. Conzelmann K.K. and G. Meyers. 1996. Genetic engineering of animal RNA viruses. Trends Microbiol. Vol.4, p.386-393

23. Conzelmann K.K.and Schnell M. 1994. Rescue of Synthetic Genomic RNA Analogs of Rabies Virus by Plasmid-Encoded Proteins. Vol.68.No.2. p.713-719

24. Dickens L., P.L.Collins and G.W.Wertz.l984.Transcriptional mapping of human respiratory syncytial virus.J.Virol.Vol.52p.364-369

25. Fearns R., M.E. Peeples, and P.L.Collins. 1997. Increased expression of N protein of respiratory syncytial virus stimulates minigenome replication but does not alter the balans between the synthesis of mRNA and antigenome. Virology. Vol. 236.p.188-201

26. Fearns R. and Peter L.Collins. 1999. Role of M2-1 Transcription Anyitermination Protein of Respiratory Syncytial Virus in Sequntial Transcription. Journal of Virology. Vol.73. No.7.p.5852-5864

27. Fearns R., Peter L.Collins and Mark E.Peeples. 2000. Functional Analisis of the Genomic and Antigenomic Promoters of Human Respiratory Syncytial virus. Journal of Virology, vol.74.N. 13.p.6006-6014.

28. Fearns R., P.L. Collins. 1999.Model for Polimerase Access to the overlapped L Gene of Respiratory Syncytial Virus. Journal of Virology.vol.73.N.lp.388-397

29. Feldmann H., Will C., Schikore M., Slenczka W., Klenk H.-D. 1991 .Glicosylation and oligomerization of the spike protein of Marburg virus. Virology. Vol.182, p.353-356

30. Feldmann H., Muhlberger E., Randolf A., Will C., Kiley M.P., Sanchez A., and Klenk H.-D. 1992. Marburg virus, a filovirus: messenger RNAs, gene order, and regulatory elements of the replication cycle. Virus Research. v.24.p.l-19

31. Feldmann PI., and Klenk H.D.I996.Marburg and Ebola viruses. Advances in Virus Research, vol.47.p. 1 -52.

32. Feldmann H., Volchkov V.E., Volchkova V.A., Stroher U., and H.D.Klenk. Biosynthesis and role of filo viral glycoproteins. 2001. Journal of General Virology. Vol.82.p.2839-2848

33. Feldmann H. and Klenk H.-D. 1996. Marburg and Ebola viruses. Advances in virus. Research. Vol. 47. p. 1-52

34. Finke S., and Conzelmann K.K.I997. Ambisense gene expression from recombinant rabies virus: random packaging of positive- and negative-strand ribonucleoprotein complexes into rabies virions. Journal of Virology, vol.71.p.7281-7288

35. Finke S., and Conzelmann K.K.I999. Virus Promoter Determine Interference By Defective RNAs: Selective Amplification of Mini-RNA Vectors and Resque from cDNA by a 3' Copy-Back Ambisense Rabies Virus. Journal of Virology . v.73.n.5.p.3818-3825.

36. Flanagan E.B., Ball L.A., and Wertz G.W. 2000. moving the glicoprotein gene of vesicular stomatitis virus to promoter- proximal positions accelerates and enhances the protective immune response. Journal of Virology. Vol.74. N.17.p.7895-7902.

37. Fuerst T.R., Niles E.G., Studier F.W., Moss B. 1986. Eukaryotic transient-expression system based on recombinant vaccinia virus that synthesizes bacteriophage T7 RNA polymerase. Proc.Natl.Acad.Sci.USA. vol.83.pp.8122-8126

38. Gao Y., and J.Lenard. 1995. Multimerization and transcriptional activation of the phosphoprotein (P) of vesicular stomatitis virus by casein kinase IP EMBO J. vol.14, p. 12401247

39. Gupta A.K. and A.K.Banerjee.1997. Expression and Purification of vesicular stomatitis virus N-P complex from Esherihia coli : role in genome RNA transcription and replication in vitro. Journal of Virology. Vol.71.p.4264-4271

40. Hardy R.V., Harmon S.B., Wertz G.W. 1999. Diverse gene junctions of respiratory syncytial virus modulate the efficiency of transcription termination and respond differently to M2-mediated antitermination. Journal of Virology. Vol.73, p. 170-176.

41. Hasan M.K., Kato A., Shioda T., Sakai Y., Yu.D. and Nagai Y. 1997. Creation of an infectious recombinant Sendai virus expressing the firely luciferase gene from the 3' proximal first locus. J.Cen.Virol. vol.78.N ll.p 2813-1820

42. He. B., Paterson R.G., Ward, C.D., and Lamb R.A. 1997. Recovery of infectious SV5 from cloned DNA and expression of a forein gene. Virology. Vol. 237.N.2. p. 249-260

43. Hercyk N., S.M. Horikami, and S.A.Moyer.1988. The vesicular stomatitis virus L protein possesses the mPNA methyltransferase activities. Virology. Vol.163 p.222-225

44. Hunt D.M., E.G.Smith and D.W. Buckley. 1984. Abberant polyadenilation by vesicular stomatitis virus mutant is due to an altered 1 protein. Journal of Virology. Vol. 52. p.515-521

45. Huang Y.T., Collins P.L., and Wertz G.W.1985. Characterization of the 10 proteins of human respiratory syncytial virus: identification of a fourth envelope-associated protein. Virus Research. V.2. p.157-173.

46. Jin H., Helen Zhou, Xing Cheng, Roderick Tang, Mary Munoz, and Nghia Nguyen. 2000. Recombinant Respiratory Syncytial Viruses with Deletion in the NS1, NS2, SH, and M2-2 Genes Are Attenuated in Vitro and in Vivo. Virology 273, p.210-218

47. Jourdan I., Lipkin W.I. 2001. Borna disease virus. Rev.Medical.Virol.2001.v.l l.p. 3757

48. Kiley MP., Bowen ETW., Eddy GA. 1982. Filoviridae: taxonomic home for Marburg and and Ebola viruses? Intervirology. V.18. p.24-32

49. Keene J.D., B.D.Tornton., and S.U.Emerson. 1981. Sequence-spesific contacs between the RNA polymerase of vesicular stomatitis virus and the leader RNA gene. Proc.Natl.Acad.Sci. USA. V.78.p.61-91-6195.

50. Kissling RE., Robinson RQ, Murphy FA., Whitfield SG. 1968. Agent of disease contracted from green monkeys. Sience.v. 160.p.888-890.

51. Kuo L., Fearns R., Collins P.L 1996. The Structurally Diverse Intergenic Regions of Respiratory Syncytial Virus Do Not Modulate Sequetial Transcription by a Dicistronic Minigenome. Journal of Virology.V.70.N.9.p.6143-6150

52. Kuo L., Rachel Fearns and Peter Collins. 1997. Analysis of the Gene Start and Gene End Signals of Human Respiratory Syncytial Virus: Quasi-Templated Initiation at position lof the Encoded mRNA., Journal of Virology, v.71. N7. p4944-4953

53. T., and A.K. Pattnaik.1997. Replication signals in the genome of vesicular stomatitis virus and its defectiv interfering particles: identification of a sequence element that enhances DI RNA replication.Virology.V.232.p.248-259

54. Mackett m., Smith G.L. and Moss B. 1982.Proc.Natl.Acad.Sci USA v.79.p.7415-7419

55. Mebatsion T., Schnell M.J., Cox, J.H., Finke S., and Conzelmann K.K. 1996. Highly stable expression of a forein gene from rabies virus vector. Proc.Natl.Acad.Sci. £/&4.vol.93.n. 14.p.7310-7314.

56. Modrof J., C.Moritz, L.Kolesnikova, T.Konakova, B.Hartlieb, A.Randolf, E. Muhlberger and S.Becker. 2001. Phosphorylation of Marburg Virus VP30 at Serines 40 and 42 is Critical for Its Interactuion with NP inclusions. Virology. Vol. 287. p.171-182

57. Moyer S.A., S.Smallwood-Kentro, A.Haddad, and Prevec. 1991.Assembly and transcription of synthetic vesicular stomatitis virus nucleocapsids. Journal of Virology, vol.65.p.2170-2178

58. Muhlberger E., S.Trommer., C.Funke., V.Volchkov, H.-D. Klenk, and S.Becker. 1996. Termini of all mRNA species of Marburg virus sequence and secondary structure. Virology. Vol.223 p.376-380

59. Muhlberger E., Sanchez A., Randolf A., Will C., Kiley M.P., Klenk M.P., and Feldmann H. 1992. The nucleotide sequence of the L gene of Marburg virus, a filovirus:homologies with paramixoviruses and rhabdoviruses. Virology . V. 187.p.534-547

60. Neumann G., Feldmann H., Watanabe S., Lukashevich I., Y.Kawaoka 2001. Generation of Ebola virus entirely from cloned cDNA. American Society for Virology. July21-25.p.l27.

61. Panicali D. and Paoletti E. 1982. Proc.Natl.Acad.sci.USA v.79.p.4927-4931 Park K.H., Huang T., Correia F.F., and M.Krystal. 1991. Rescue of a foreing gene by sendai virus. Proc.Natl.Acad.Sci.USA vol.88.p.5537-5541

62. Parks Ch.L., Lerch R.A., P.Walpita, M.S.Sidhu, and S.A.Udem.1999. Enhanced Measles Virus cDNA Rescue and Gene Expression after Heat Shock. Journal of Virology. Vol.73.N. 5.p.3560-3566

63. Pattnaik A.K., A.B.Ball., A.W. LeGrone, and G.W.Wertz.1992. Infectious defective interfering particles of VSV from transcripts of a cDNA clone.Cell.vol.69.p. 1011-1020

64. Pattnaik A.K., Ball L.A., LeGrone A.W., and G.Wertz. 1992. Infectious defective interfering particles of VSV from transcripts of a cDNA clone. Cell, vol.69, p.1011-1020

65. Pattnaik A.K., L.A.Bali, A.LeGrone, and G.W.Wertz.1995. The termini of VSV DI particle RNAs are sufficient to signal RNA encapsidation, replication and budding to generate infectious particles. Virology. Vol. 206 p.760-764

66. Patton J.T., N.L.Davis, and G.W.Wertz.1984. N protein alone satisfies the requirement for protein synthesis during RNA replication of vesicular stomatitis virus. Journal of Virology, vol. 49. p.303-309

67. Peeples M. E., Peter L. Collins. 2000. Mutations in the 5'Trailer Region of a Respiratory Syncytial Virus Minigenome Which Limit RNA Replication to One Step. Journal of Virology . vol.74 .N.1.p.146-155

68. Perrault J. 1981.Origin and replication of defective interfering particles. Curr.Top. Microbiol. Immunol. V.93.p.l51-20

69. Polack, F.P. et al. Production of atypical measles in rhesus macaques: evidence for disease mediated by immune complex formation and eosinophils in the presence of fusion-inhibiting antibody. Nat Med 5, 629-34. (1999).

70. Post L.E., and Roizman B.(1981)Cell v.9. p. 695-705

71. Pringle C.R.I991. The order Mononegavirales. Paramixovirus Study Group of the Vertebrate Subcommittee. Virology Division News. Archives of Virology. 117. 137-140.

72. Radecke F., Spielhofer P., Kaelin K., Huber M, Dotsch C., Christiansen G., and Billeter M.A. 1995. Rescue of measles viruses from cloned DNA. EMBO J. vol.14. N.23.p.5773-5784.

73. Racaniello V.R., and D. Baltimore. 1981. Cloned poliovirus complementary DNA is infectious in mammalian cells. Science 214. p.916-918

74. Rassa JC, Wilson GM, Brewer GA, Parks GD. 2000. Spacing constraints on reinitiation of paramyxovirus transcription: the gene end U tract acts as a spacer to separate gene end from gene start sites. Virology. V.l. N.274(2). p.438-449.

75. Roberts A. and J.K. Rose. 1998. Recovery of Negative-Strand RNA Viruses from Plasmid DNAs:A Positive Approach Revitalizes a Negative Field.Virology.v.247.p.l-6.

76. Sanchez A., Khan A., Zaki Sh., Nabel G.J., Ksiazek., Peters CI. 2001. Filoviridae: Marburg and Ebola Viruses. P. 1279-1303. In B.N.Fields et al (ed.), Fields virology. Raven Press, New.York.N.Y

77. Sanger C., Muhlberger E., Ryabchikova E., Kolesnikova L., Hans-Dieter Klenk and S. Becker. 2001. Sorting of Marburg Virus Surface Protein and Virus Release Take Place at

78. Opposite Surfaces of Infected Polarized Epithelial Cells. Journal of Virology. vol.75.N.3.p.l274-1283

79. Sanchez A.M., Kiley M.P., Holloway B.P., and D.D. Auperin. 1993. Sequence analysis of the Ebola virus genome: organization, genetic elements, and comparison with the genome of Marburg virus. Virus research. Vol.29, p.215-240

80. Sambrook J., Fritisch E.F. and Maniatis T. 1989. Molecular cloning: a laboratory manual. 2nd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor. N.Y.

81. Schell M.J., Johnson J.E., Buonocore L., and Rose J.K. 1997. Construction of a novel virus that targets HIV-1-infected cells and control HIV-1 infection. Cell. Vol. 90. N.5. P.849-857

82. Schnell M.J., Buonocore L., Whitt M.A., and Rose J.K, 1996. The minimal conserved transcription stop-start signal promoters stable expression of a forein gene in vesicular stomatitis virus. Journal of Virology. Vol.70.N.4.p.2318-2323

83. Schnell M.J., Mebatsion T., and Conzelmann K.K.I994. Infectious rabies viruses from cloned cDNA. EMBO J. vol.13, p.4195-4203

84. Sleat D., and A.K.Banerjee.1993. Transcriptional activity and mutational analysis of recombinant vesicular stomatitis virus RNA polymerase. Journal of Virology, vol. 67. p. 13341339

85. Smallwood S., and S.A. Moyer.1993. Promoter analysis of the vesicular stomatitis virus RNA polimerase. Virology. Vol.192, p.254-263

86. Sorokin A.V., Kazachinskaya E.I., Ivanova A.V., Kachko A.V., Netesov S.V., Bukreyev A.A., Loktev V.B., Razumov I.A. 2002, vol 15., N3 (in print)

87. Takada A. et al.2000. Downregulation of pi integrins by Ebola virus glycoprotein:implication for virus entry. Virology.278.p.20-26.

88. Takada A., Robinson C., Goto H., Sanchez A., Murti K.G., Whitt M.A., and Kawaoka Y. 1997. A system for functional analysis of Ebola virus glycoprotein. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. vol. 94. No.26.p. 14764-14769

89. Testa D., P.K.Chanda and A.K.Banerjee.1980. Unique mode of transcription in vitro by vesicular stomatitis virus. Cell.vol.21.p.267-275

90. Teng M. N. and Peter L. Collins . 1998. Identification of the Respiratory Syncytial Virus Proteins Required for Formation and Passage of Helper-Dependent Infectious Particles. Journal of Virology. Vol. 72, No. 7. p. 5707-5716

91. Tong Li and Asit K.Pattnaik. 1999. Overlapping signals for Transcription and Replication at 3' terminus of the Vesicular Stomatitis Virus Genome. Journal of Virology. Vol.73.N.lp. 444-452

92. Volchkov V.E., Becker S., Volchkova V.A., Ternovoi V.A., Kotov A.N., Netesov. S.V., ans Klenk H.-D.1995. GP mRNA of Ebola virus is edited by the Ebola virus polymerase and by T7 and vaccinia virus polymerases. Virology. Vol. 214. p.421-430

93. Volchkov V.E., Volchkova V.A., Slenczka W., Klenk H.-D., Feldmann H. 1998. Release of viral glycoproteins during Ebola virus infection. Virology. Vol.245.p.110-119

94. Volchkov V.E, V.A. Volchkova, Elke Muhlberger, L.V.Kolesnikova, M.Weik, O.Dolnik, H.-D. Klenk. 2001. Recovery of Infectious Ebola Virus from Complementary DNA: RNA Editing of the GP Gene and Viral Cytotoxicity. Science. V.291 p. 1965-1969

95. Villareal L.P., M. Breindland, J.J.Holland. 1976. Determination of molar ratios of vesicular stomatitis virus induced RNA species in BHK21 cells. Biochemistry. Vol.15, p.1663-1667

96. Wagner R.R., and J.K.Rose. 1996.Rabdoviridae: the viruses and their replication, p.1121-1135. In B.N.Fields et al. (ed.), Fields virology. Raven Press,New.York.N.Y.

97. Warnes A., Fooks A.R., Dowsett A.B., Wilkinson G.W.G., Stephenson J.R. 1995. Gene. V.160. P.173-178.

98. Wertz G.W., Whelan A and L.A.Bali. 1994. Extent of terminal complimentarity modulate the balance between transcription and replication of vesicular stomatitis virus RNA. Proc.Natl.Acad.Sci.USA vol.91 .p.8587-8591

99. Wertz G. W., V. P. Perepelitsa and L.A. Ball. 1998. Gene rearrangement attenuates expression and lethality of a nonsegmented negative strand RNA virus. Proc.Natl.Acad.Sci. USA. vol. 95. p.3501-3506

100. Whelan S.P.J, and G.Wertz. 1999. The 5'-Terminal Trailer Region of Vesicular Stomatitis Virus Contains a Position-Dependent cw-Acting Sinai for assembly of RNA into Infectious Particles. Journal of Virology.vol.73. p.307-315

101. Whelean S.P., Ball L.A., Barr J.N., and Wertz G.T. 1995. Efficiant recovery of infectious vesicular stomatitus virus entirely from cDNA clones. Proc.Natl.Acad.Sci. USA. Vol.92. N.18. p.8388-8392.

102. Whelan S. P.J., Gail W.Wertz. 1999. Regulation of RNA Synthesis by the Genomic Termini of Vesicular Stomatitis Virus: Identification of Distinct Sequences Essential for Transcription but Not Replication. V.73. N1. p.297-306

103. Букреев A.A., Скрипченко A.A., Еусев Ю.М., Фролов В.Г., Кандрушин Е.В., Краснитская И.М., Шестопалов A.M. Вопросы вирусологии. 1995. Т.4. С.161-165.

104. Разумов И.А., Беланов Е.Ф., Букреев A.A., Казачинская Е.И. 1998. Моноклональные антитела к белкам вируса Марбург и их иммунохимическая характеристика. Вопросы Вирусологии. Т. 43. С. 274-279

105. Сорокин A.B., Казачинская Е.И., Качко A.B., Иванова A.B., Букреев A.A., Разумов И.А. 1999. Вопросы Вирусологии. Сравнительное исследование антигенных иимуногенных свойств природного и рекомбинантного белков УР35 вируса Марбург. №5. С.206-213.

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.