Изучение биосинтеза L-аргинина штаммами-продуцентами Brevibacterium Flavum тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Фаддеева, Светлана Евгеньевна

• Фаддеева, Светлана Евгеньевна
• кандидат биологических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Фаддеева, Светлана Евгеньевна

ВВЕДЕНИЕ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Функции аргинина в организме и области его применения.

1.2 Метаболизм аргинина в микроорганизмах.

1.3 Регуляция биосинтеза аргинина.

1.4 Штаммы-продуценты аргинина и методы их получения.

1.5 Селекция штаммов-продуцентов аргинина, исследуемых в данной работе.

1.6 Влияние условий культивирования продуцентов на биосинтез аргинина.

1.6.1 Влияние источника углерода.

1.6.2 Влияние источника азота.

1.6.3 Влияние остальных источников минерального питания.

1.6.4 Влияние витаминов и других факторов роста.

1.6.5 Влияние физико-химических условий ферментации.

2 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

2.1 Материалы и методы исследования.

2.1.1 Культуры бактерий.

2.1.2 Методы культивирования и среды.

2.1.3 Методы анализа.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1 ИССЛЕДОВАНИЕ УСЛОВИЙ БИОСИНТЕЗА АРГИНИНА МУТАНТНЫМИ ШТАММАМИ Br.flavum.

3.1.1 Сравнение штаммов Br.flavum - продуцентов аргинина.

3.1.2 Влияние различных аминокислот на развитие штаммов-продуцентов аргинина.

3.1.3 Влияние источников азота на развитие культуры и биосинтез аргинина.

3.1.3.1 Влияние содержания в среде сульфата аммония на биосинтез аргинина.

3.1.3.2 Влияние мочевины на развитие культуры и биосинтез аргинина.

3.1.4 Влияние некоторых органических кислот на рост культуры Br.flavum 194(Рго") и биосинтез ею аргинина.

3.1.5 Влияние витаминов - тиамина и дестиобиотина - на биосинтез аргинина.

3.1.6 Влияние температуры на биосинтез аргинина.

3.1.7 Изучение влияния комплексных ростовых факторов на развитие культуры Br.flavum 194(Рго") и биосинтез ею аргинина.

3.1.8 Влияние ионов кальция на биосинтез аргинина.

3.1.9 Влияние ионов калия на биосинтез аргинина.

3.1.10 Влияние фосфора на рост культуры и биосинтез аргинина.

3.2 ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ШТАММОВ-ПРОДУЦЕНТОВ АРГИНИНА В ЛАБОРАТОРНЫХ ФЕРМЕНТЕРАХ.

3.2.1 Влияние рН среды на биосинтез аргинина в условиях аэрации.

3.2.2 Изучение влияния пролина (ростового фактора) на рост культуры Br.flavum 194(Рго") и динамику биосинтеза аргинина в ферментере.

3.2.3 Использование различных источников азота для биосинтеза аргинина.

3.2.4 Проведение процесса биосинтеза аргинина в лимите по источнику углерода.

3.2.5 Влияние температуры на биосинтез аргинина продуцентами Br.flavum.

3.2.6 Изучение влияния дрожжевого экстракта на рост культуры и биосинтез аргинина.

3.3 ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ НА АКТИВНОСТЬ КЛЮЧЕВЫХ ФЕРМЕНТОВ БИОСИНТЕЗА АРГИНИНА.

3.3.1 Влияние пролина на уровень продукции аргинина у аналогорезистентных и ауксотрофных по пролину мутантов, на синтез и активность глутаматдегидрогеназы.

3.3.2 Влияние гистидина на уровень продукции аргинина, на синтез и активность орнитинкарбамоилтрансферазы.

3.4 ПРОВЕДЕНИЕ ПРОЦЕССА БИОСИНТЕЗА L-АРГИНИНА ПРОДУЦЕНТАМИ Br.flavum ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ ИХ В ОПТИМАЛЬНЫХ УСЛОВИЯХ ПРИ ИНТЕНСИВНОЙ АЭРАЦИИ В ФЕРМЕНТЕРАХ.

4 ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение биосинтеза L-аргинина штаммами-продуцентами Brevibacterium Flavum»

Актуальность проблемы. Аминокислоты являются основными веществами, из которых синтезируются белки. Кроме структурной, они выполняют в организме и ряд других важных функций. Производство аминокислот играет важную роль в мировой индустрии. Ежегодный выпуск аминокислот в мире оценивается в US$ 2109 и составляет более 650 ООО тонн, это главным образом глутаминовая кислота (в виде глутамата натрия), D, L-метионин и L-лизин [106]. Потребность в других аминокислотах меньше, однако она растет по мере совершенствования производственной технологии, снижения технологических расходов и расширения возможностей применения тех или иных аминокислот [30]. В большой степени это можно отнести к аргинину, производство которого освоено в Японии и США относительно недавно, технология находится в стадии активного усовершенствования. Мировой выпуск аргинина составляет 2000 тонн в год, из которых более 700 приходится на Японию.

К природным источникам аргинина относятся мясо и рыба, его наличием обусловлена высокая биологическая ценность молочного белка. Аргинин содержится также растительных продуктах: кедровых, грецких и кокосовых орехах, шоколаде, желатине, овсе, арахисе, соевых бобах, белой муке, пшенице и пшеничных зародышах.

Аргинин (2-амино-5-гуанидино-валериановая кислота) принадлежит к числу аминокислот, незаменимых для молодых, растущих животных и детей. Помимо чисто структурной функции компонента белков, он участвует также в цикле мочевины и является источником важного газообразного физиологического регулятора у млекопитающих - оксида азота. Аргинин широко используют в медицинской промышленности для изготовления различных тест-наборов, показывающих состояние белкового обмена в организме, иммуностимуляторов, кровезаменителей и препаратов для лечения гепатита. Он находит также применение в пищевой промышленности, сельском хозяйстве и в области тонкой химической технологии. В последнее время стремительно увеличилось число публикаций, посвященных новым возможностям использования аргинина, изучаются его возможности при лечении острых и хронических форм сердечной недостаточности, в последние годы в ряде развитых стран он включен в комплект обязательных лекарственных препаратов бригад «Скорой помощи», кроме того, является обязательным элементов анаболических и диетических препаратов, и используется в ряде других областей, в том числе кондитерской. Необходимо отметить, что весь аргинин, применяемый в нашей стране, импортного производства.

Существуют методы получения аргинина путем экстракции и гидролиза белков из растительного, животного или микробного сырья. Однако наиболее эффективным и рентабельным является способ производства аргинина, основанный на микробиологическом синтезе. Он позволяет получить продукт в биологически активной L-форме. Для производства аргинина в мировой практике используются регуляторные мутанты Bacillus subtilis, Brevibacterium flavum, Corynebacterium glutamicum, Serratia marcescens, Escherichia coli и ряд других продуцентов. Одними из самых перспективных считаются ауксотрофные мутанты группы глутаматпродуцирующих бактерий, резистентные к аналогам аргинина. Ряд штаммов Brevibacterium flavum - продуцентов аргинина получен в институте ФГУП ГосН И И генетика и депонирован в ВКПМ. Однако сравнению этих штаммов и проблемам их культивирования не уделяли должного внимания. Создание новых активных продуцентов аргинина, разработка методов их культивирования, опирающаяся на знание физиологии микроорганизмов, представляется в свете вышеизложенного актуальной задачей, решение которой позволило бы создать высокоэффективную отечественную технологию производства аргинина.

Цель и задачи исследования. Настоящая работа посвящена изучению физиологических и биохимических особенностей аргининпродуцирующих мутантов Brevibacterium flavum с различным генотипом и поиску путей интенсификации процесса биосинтеза этой аминокислоты. В процессе выполнения работы были поставлены и решены следующие задачи:

1. Сравнение физиологических характеристик штаммов-продуцентов аргинина.

2. Изучение регуляции некоторых ключевых ферментов биосинтеза аргинина.

3. Исследование влияния условий культивирования на развитие культуры и биосинтез аргинина.

4. Разработка процесса биосинтеза аргинина в лабораторных ферментерах.

Научная новизна. Впервые были исследованы физиологические и биохимические особенности пролинзависимых аналогорезистентных штаммов Br.flavum, продуцентов аргинина. Изучение указанных штаммов позволило выявить неизвестные ранее принципиальные особенности регуляции биосинтеза аргинина. Впервые было изучено влияние пролина на синтез и активность глутаматдегидрогеназы. Впервые было показано, что накопление предшественников аргинина вызвано недостаточной активностью орнитинкарбамоилтрансферазы, изучено влияние гистидина на синтез и активность этого фермента, что позволило рекомендовать создание штамма с двойной ауксотрофностью (по пролину и гистидину) для дальнейшего увеличения уровня биосинтеза аргинина.

Практическая значимость. Разработана и проверена в лабораторных условиях технология получения L-аргинина. На основании технологических параметров, полученных при культивировании продуцента L-аргинина в лабораторных ферментерах, можно разработать исходные данные для регламента промышленного производства этой аминокислоты. В процессе работы оптимизированы концентрации и режим подачи в ферментер источников углерода и азота, ростовых факторов, содержание в среде других питательных веществ (витаминов, источников фосфора, калия, кальция и др.) установлены оптимальные для максимального накопления аргинина значения температуры, кислотности среды, В результате проделанной работы уровень накопления аргинина приближается к мировым стандартам, что дает возможность считать разработанную технологию конкурентоспособной с технологиями зарубежных производств.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на конференциях в ФГУП ГосНИИгенетика 1996 и 1997 гг., а также межлабораторных семинарах 1995-1999 гг.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 работы.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 133 страницах и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, обсуждения результатов, выводов и списка литературы. Список литературы включает 138 работ отечественных и зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 20 таблицами и 38 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Фаддеева, Светлана Евгеньевна

4 Выводы.

1. Проведены исследования физиолого-биохимических особенностей нескольких генетически маркированных штаммов-продуцентов аргинина Brevibacterium flavum в стационарных условиях и в условиях интенсивного массообмена. Показано преимущество пролин-зависимых мутантов в активности биосинтеза аргинина по сравнению с прототрофными штаммами и штаммами, ауксотрофными по гистидину, гуанину и изолейцину.

2. Впервые установлена роль пролина в репрессии глутаматдегидрогеназы, что, в частности, объясняет высокую продуктивность пролин-зависимых штаммов.

3. Показано, что гистидин подавляет синтез орнитинкарбамоилтрансферазы, способствуя увеличению концентрации промежуточных продуктов пути биосинтеза аргинина и снижая его выход, это делает перспективным при дальнейшей селекционной работе получение штаммов с двойной ауксотрофностью - по пролину и гистидину.

4. Изучено влияние состава питательной среды (источников азота, калия, кальция, фосфора, витаминов, аминокислот, органических кислот) и ряда физико-химических факторов (температура, рН, аэрация) на рост культур и биосинтез ими аргинина.

5. Разработан процесс биосинтеза аргинина, предусматривающий дополнительное внесение в ферментер в ходе культивирования источников углерода и азота, ростовых факторов, что ведет к увеличению выхода аргинина, снижению накопления побочных аминокислот и повышению степени конверсии углеводов в целевой продукт.

6. В процессе исследования влияния различных факторов на рост продуцентов аргинина подобран штамм, обеспечивающий максимальный выход аргинина в условиях интенсивного массобмена. Этот штамм - Br. flavum 194(Рго").

7. Показано, что при подобранных оптимальных условиях культивирования в лабораторных ферментерах штамма-продуцента аргинина Br.flavum 194(Рго") возможно увеличение содержания аргинина в культуральной жидкости с 8 до 32,2 г/л и степени конверсии углеводов в конечный продукт с 5 до 19,8%.

8. Полученные результаты дают основания для создания промышленной технологии производства L-аргинина и разработки исходных данных для опытно-промышленного регламента.

5 Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Фаддеева С.Е., Ясиновский В.Г., Рыбаков Ю.А., Ивановская Л.В. Мутанты Brevibacterium flavum - продуценты L-аргинина. Влияние пролина на уровень продукции аргинина у аналогорезистентных и ауксотрофных по пролину мутантов, на синтез и активность глутаматдегидрогеназы. Биотехнология. -1999. -N.1. -стр.23-29

2. Фаддеева С.Е., Ясиновский В.Г., Рыбаков Ю.А. Мутанты Brevibacterium flavum - продуценты L-аргинина. Влияние гистидина на уровень продукции аргинина у мутантов, на синтез и активность орнитинкарбамоилтрансферазы. Биотехнология. -1999. - N.6 - стр.24-28

3. Фаддеева С.Е., Ясиновский В.Г. Влияние условий культивирования на биосинтез L-аргинина штаммами-продуцентами Brevibacterium flavum. Биотехнология. - 2002. -N.5-стр. 14-23

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Фаддеева, Светлана Евгеньевна, 2002 год

1. Албертс Б., Брей Д., Льюис Дж. и др. Молекулярная биология клетки: В 2-х т. М.: Мир. - 1994. - Т. 2. - 539 с.

2. Астаурова О.Б., Синеокая И.В., Мысловатая М.Л., Нейштадт-Абрамович С.Р., Кириллова Н.М., Зайцева З.М. Азотный контроль у продуцентов лизина // Биотехнология. - №1. - 1991. - С. 7-10.

3. Аузан С.И. Биохимические изменения состава кормового концентрата L-лизина в зависимости от условий культивирования Brevibacterium шт.22: Автореф. дисс. канд. биол. наук. Рига, 1970.- 28 с.

4. Балицкая P.M. Микробиологические способы получения глютаминовой кислоты на богатых биотином средах // Микробиологический и энзиматический синтез аминокислот: Тез. докл. Всесоюзной науч. конф.- Пущино, 1980. С. 34-35.

5. Безбородов A.M. Свободные внутриклеточные аминокислоты микроорганизмов II Микроб.промышленное^ 1971. - т.2. - №1. -С. 17-23.

6. Бекер М.Е., Саксе А.К., Калниня М.Ф., Виестур У.Э. Способ получения L-лизина. Авт свид. СССР №507634. 1973.

7. Белозерский А.Н., Спирин А. С. Химия нуклеиновых кислот микроорганизмов. В кн. Нуклеиновые кислоты под ред. Чаргаффа Э., Дэвидсона Дж.М. М.: Изд-во иностр. лит. - 1962. - 455 с.

8. Виестур У.Э., Аэрация и перемешивание в процессе культивирования микроорганизмов: Обзор. М.: Гл. упр. микроб, пром-ти. -1972.-68 с.

9. Виестур У.Э., Кузнецов А.И., Савенков В.В. Системы ферментации. Рига: Зинатне. - 1986. - 190 с.

10. Гершанович В.Н. Транспорт аминокислот, полипептидов и органических кислот у бактерий. М.: Медицина. - 1977. - 183 с.

11. Гривинь П.П. Биохимические и физиологические свойства мутантов Brevibacterum 22, продуцирующих лизин и аланин: Автореф. дисс. канд. биол. наук. Рига, 1967. -24 с.

12. Дудкина Н.М., Галынкин В.А., Яковлев В.И., Мухленова И.М., Листовенко Г.А. Об интенсификации получения лизина с использованием биостимуляторов // III Всесоюзное совещание по аминокислотам: Тез. докл. Ереван, 1984. - С. 21.

13. Егорова Л.А., Позмогова И.Н. О влиянии температуры и перемешивания на скорость растворения кислорода в жидких питательных средах // Микробиология. 1966. - т.35. - №1. -С.174 -179.

14. Жданова Н.И. Мутационные нарушения регуляции биосинтеза как основы селекции штаммов микроорганизмов продуцирующих аминокислоты: Дисс. докт. биол. наук. М., 1980. -262 с.

15. Жданова Н.И., Гусятинер М.М. Методы селекции и свойства штаммов микроорганизмов продуцентов аминокислот // Обзор. -М.: ВНИИСЭНТИ, 1985. - 64 с.

16. Журавлева И.А., Мелентьев И.А., Виноградов Н.А. Роль окиси азота в кардиологии и гастроэнтерологии // Клин.мед. -1997. т.75. -№4. - С. 18-21.

17. Зайцева Г.Н., Белозерский А.Н., Быховский В.Я. Химия Azotobacter'a. Изучение свободных аминокислот и мононуклетидов у Az.agile 22-D в зависимости от возраста культуры и источника азотистого питания // Микробиология. -1959. т.28. - №5. - С.675-681.

18. Зайцева Г.Н., Белозерский А.Н. Химия Azotobacter'a. Изучение фосфорных соединений Azotobacter agile в зависимости от возраста культуры и источника азотного питания // Микробиология. 1958. -т.27. - №3.-С.308-312.

19. Зайцева З.М. Влияние условий культивирования на биосинтез лизина культурой Micrococcus glutamicus 95 продуцента лизина // Приклад, биохим. и микробиол. 1966. -т.2. - №5. - С.519-525.

20. Зайцева Г.Н., Михайлова Г.Р. Влияние фосфора на рост и развитие Actinomyces rimosus // Микробиология. 1959. - т.28. -№6. - С.863-869.

21. Зайцева З.М., Туровцева В.В., Ашомко Т.В. Влияние различных гидролизатов на биосинтез лизина у мутантов Micrococcus glutamicus // Микробиол. промышленность. 1976. - №1А(32А). -С.26-41.

22. Зайцева З.М. Физиологические и биохимические аспекты биосинтеза лизина II Микробиологический и энзиматический синтез аминокислот: Тез. докл. Всесоюзной науч. конф. Пущино, 1980. -С.10-11.

23. Зайцева Г.Н. Изучение условий образования окситетациклина (тетрамицина) культурой Act.rimosus ЛС-Т-118 // Микробиология. -1959. т.28. - №2. - С.216-222.

24. Калашников С.П., Маянский А.Н., Загоскин П.П, Маянский Н.А. Оксид азота новый биологический модулятор // Нижегородский медицинский журнал. - 1999. - № 1. - С. 69-82.

25. Карасевич Ю.Н. О механизмах регуляции клеточного метаболизма у микроорганизмов в связи с задачами селекции: Сб. «Генетические основы селекции у микроорганизмов». М.: Изд-во АН СССР. - 1969. - С. 20-40.

26. Кершулис А.С. Исследование обмена некоторых фосфорных соединений у микроорганизмов: Автореф. дисс. канд. биол. наук. -Вильнюс, 1971.-23 с.

27. Котова Г.А., Волкова М.В. Успехи в области производства аминокислот II III Всесоюзное совещание по аминокислотам: Тез. докл. Ереван, 1984. - С.3-4.

28. Красильников Н.А. Аминокислоты из микроорганизмов II Усп. совр. биол. 1961. - т.2. - №2. - С. 149-163.

29. Кретович В.Л. Биохимия растений: Учеб. для биол. спец. ун-тов. -М.: Высш.школа, 1986. -502 с.

30. Куцева Л. С. Биосинтез лизина культурой Brevibacterium sp.22: Автореф. дисс. канд. биол. наук. М., 1971. - 26 с.

31. Куцева Л.С., Клюева Н.М. О потребности культуры Brevibacterium 22 в тиамине // Прикладная биохимия и микробиология. 1970. -т.6. -№2. - С. 158-162.

32. Леване В.А., Удровский Г.А. Источник ростовых факторов для биосинтеза лизина ауксотрофными продуцентами // Микробиологический синтез, биотехнология и биоинженерия: Тез. докл. VI съезда В.М.О. Рига, 1980. -С.118.

33. Лейте М.П., Руклиш М.П., Марауска Д.Ф. Роль лизина и треонина в регуляции синтеза лизина у продуцентов рода Brevibacterium аминокислот II Микробиологический и энзиматический синтез аминокислот: Тез. докл. Всесоюзной науч. конф. Пущино, 1980. -С. 74-75.

34. Лиепиньш Г. К. Использование картофельного сока для биосинтеза биологически активных веществ: Автореф.канд.дисс. -Рига, 1969.-24 с.

35. Лупова Л.М., Рыбакова В.А., Белова В.В., Хохлова В.К., Завьялова Л.А. Влияние биотина на биосинтез лизина II Микроб.синтез. 1967. -т.15. - №10. - С.10-11.

36. Макарова И.П., Левитов М.М., Мешков А.Н., Содержание фосфора, нуклеиновых кислот и пентоз в мицелии Actinnomyces fradiae 129II Микробиология. 1969. -т.38. - №1. - С.52-57.

37. Машковский М.Д. Лекарственные средства: В 2-х т. М.: Новая Волна, 2001,- Изд. 14-е. - Т.1.-539 с.

38. Межиня Г.Р. Продуктивность проточной культуры Brevibacterum 22 // Научная конференция по биосинтезу лизина и глутаминовой кислоты: Тез. докл. Ереван, 1969. - С.7.

39. Меркулова Ю.В., Гомон О.Н., Чайка Л.А., Белостоцкая Л.И. Влияние оксида азота на антитоксические свойства аргинина глутамата при гипераммониемии II Человек и лекарство: Тез.докл. IV Российского национального конгресса. -М., 1997. -С. 522-523.

40. Музыченко Л.А., Соколов А.К., Стеркин В.Э., Валуев В.И. Управляемый биосинтез аминокислот // Микробиологический и энзиматический синтез аминокислот: Тез. докл. Всесоюзной науч. конф. Пущино, 1980. - С. 14-15.

41. Мургов И. Д. Получение мутантов Brevibacterium flavum и исследование физиологических особенностей продуцентов лизина и гомосерина: Автореф. дисс. канд. биол. наук. М., 1973. - 20 с.

42. Надинская М.Ю. Печеночная энцефалопатия: Обзор // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. -1998. № 2. - С. 25-32.

43. Невзорова В.А., Зуга М.В., Гельцер Б.И. Роль окиси азота в регуляции легочных функций // Тер.архив. -1997. т.69. - № 3. -С.68-73.

44. Нейштадт-Абрамович С. Р., Зайцева З.М., Астаурова О. Б., Кириллова Н.М. Аммонийный азот как фактор регуляции процесса биосинтеза лизина // Лимитирование и ингибирование роста микроорганизмов: Тез. докл. Всесоюзной конференции. Пущино,1989. -С.119.

45. Нейштадт-Абрамович С.Р., Синеокая И.В., Кириллова Н.М., Зайцева З.М., Астаурова О.Б. Ассимиляция аммония у Brevibacterium species, продуцирующего лизин // Биотехнология.1990.-№6.-С.28-33.

46. Рубан Е.Л., Вербина Н.М., Бутенко С.А., Озолинь Р.К., Заринь Д. Г. Биосинтез аминокислот микроорганизмами. М.: Наука. - 1968. - 296 с.

47. Руклиш М.П. Физиолого-биохимическая характеристика продуцентов лизина Brevibacterium эр.22Л в периодическом и непрерывном процессе культивирования: Дисс. канд. биол. наук. -Рига, 1974.-172 с.

48. Руклиш М.П., Щаника Ю.Э., Бабурин Л.А., Галынина Н.И., Тома М.К. Одновременное использование двух углеродных субстратов при биосинтезе лизина // III Всесоюзное совещание по аминокислотам: Тез. докл. Ереван, 1984. - С.25-26.

49. Саканян В.А. Молекулярно-генетические подходы к изучению гетерологичной экспрессии бактериальных генов: Дисс.докт.биол.наук М., 1987. - 405 с.

50. Саксе А.К., Лиепиньш Г.К., Дунце М.Э., Трусле Э.Б., Еремеева С.К. Некоторые источники дефицитных факторов при микробном синтезе L-лизина. В кн.: Микробиологические препараты. - Рига: Зинатне. - 1976. - С.27-33.

51. Селга С.Э., Саксе А. К. Оптимизация процесса биосинтеза L-лизина балансированием кислорода и ростовых факторов. В кн.: Влияние условий культивирования на активность продуцентов. -Рига: Зинатне. - 1980. - С.56-60.

52. Ткаченко М.Н., Зозуля И.С., М.В. Шаповал, Сагач В.Ф. Паркинсонизм: современные представления о патогенезе и возможные пути коррекции II Часопис. 2000. - №3. - С.28-35.

53. Файбич М.М., Питательная среда для выращивания микроорганизмов. Авт.свид. СССР №362048. «Открытия. Изобретения. Промышленные образцы. Товарные знаки»,- 1973,-№2.

54. Фармакологический справочник. М.: Практика. - 2000. - 728 с.

55. Хмель И.А., Коршунов И.С. Влияние аэрации на жизнедеятельность микроорганизмов // Прикладная биохимия и микробиология. 1966. -т.2. - №6. - С.814-819.

56. Шильникова И.И. Изучение условий биосинтеза и утилизации гомосерина глутаматпродуцирующими коринеформными бактериями: Дисс. канд. биол. наук. М., 1984. -224 с.

57. Шлегель Г. Общая микробиология. М.: Мир. - 1998. - 566с.

58. Abdelal A., Ingraham J. Control of the carbomoylophosphate synthesis in Salmonella typhimurium // J. Biol. Chem. 1969. - v.244. -№3. - P.4033-4038.

59. Berberich M. Catabolism and Nitrogen Control in Escherichia coli // Curr. Top. Cell. Regul. 1985. - v.26. - P.491-502.

60. Bradfort M. A rapid and sensitive method for the guantitation of microgram guantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding //Anal. Biochem. 1976. - v.12. - P.248-254.

61. Brown C. Ammonia assimilation by rhizobium cultures and bacteroids // J. Gen. Microbiol. 1975. - v.86. - №1. - P.39-48.

62. Celis R., Rosenfeld H., Mass W. Mutants of Escherichia coli. K-12 defective in the transport of basic amino acids II J. Bacteriol. 1973. -№ 116. -P.619-626.

63. Cooper C.M., Fernstorm G.A., Miller S.A. Performance of agitated gas liquid concactors // Ind.Eng.Chem. - 1944. - v.36. - №6. - P.504-509.

64. Cunin R. Production of aminoacids, regulation of arginine biosynthesis in prokaryotes // Microbiol. Reviews. 1986. - v. 10. -P.250-258.

65. Cunin R., Glandsdorff N. Biosynthesis and metabolism of Arginine in Bacteria // Microbiol. Reviews. 1986. - v.50. - №3. - P.314-352.

66. Dakhno I. The influence of vemitan and L-arginine on immunobiological blood index of cows under fasciolosis and dicrocaeliosis invasion // News of the Poltava State Agricultural Institute. 2000. - № 2. - P.26-28.

67. Davis R. Compartmental and regulatory mechanisms in the Arginine pathways of Neuroposa crassa and Saccharomyces cerevisiae // Microbiol. Review. 1986. - v.50. - P.280-313.

68. Dilworth M.J. Oxygen inhibition in Azotobacter vinelandii piruvate oxidation // Biochem.Biophys.Acta. 1961. - v.56. - №1. -P. 127-134.

69. Enei H. Recent progress in Microbial Production of Amino Acids. -Amsterdam: Gordon and Breach Science Publishers- 1989. 137 p.

70. EP # 1.154.020 A2. Arginine repressor deficient strain of coryneform bacterium and method for producing L-arginine I Asakura Y. et al. -2001.

71. EP # 336.378. Process for producing L-arginine / Azuma T. et al. -1989.

72. Friedman A., Brewer Т., Feld L. et al. Nitric oxide: from molecular biology to clinical nephrology // Pediatr.Nephrol. 1998. - v. 12. - №6. -P.504-511.

73. Glansdorff N. Biosynthesis of Arginine and Polyamines // Microbiol. Review. 1996. - P.408^33.

74. Glansdorff N. Biosynthesis of Arginine and Polyamines by E.coli and S.tiphimirium // Cell. Molec. Biology. 1987. -v.1. - P.321-344.

75. Harwood C., Baumberg S. Arginine hydroxamate-resistant mutants of Bacillus subtilis with altered control of arginine metabolism II J. Gen. Microbiol. 1977. - v. 100. - P. 177-188.

76. Hitoshi E. Recent progress in microbial production of amino acids // Japanese Reviews. 1989. - v.5. - P.287-312.

77. Japanese Patent #58-9692. Process for producing L-arginine / Chibata I., Kisumi M.,Tagaki T. 1983.

78. Kato J., Kisumi M., Tagaki T. Chibata I. Increase in arginine and citrulline production by 6-azauracil-resistant mutants of Bacillus subtilis II Appl. Enviromn. Microbial. 1977. - v.34. - №6. - P.689-694.

79. Kimura K. The effect of biotin in the amino acid biosynthesis by Micrococcus glutamicus // J.Gen.Appl.Microbiol. 1963. - v.9. - №2. -P.205-211.

80. Kinoshita S. Studies on the amine acid fermentation. Production of L-glutamic acid by various microorganisms // J.Gen. Appl. Microbiol. -1957. v.3. - P.384-387.

81. Kinoshita S. The production of amino acids by fermentation // Adv. Appl. Microbiol. 1959. - v.1. - P.201-205.

82. Kinoshita S., Samejima H., Nara Т., Fujita C. Homoserine fermentation //Amino Acids. 1960. - №2. - P. 125-132.

83. Kinoshita S., Nakayma K, Kitada S. L-lysine production using microbial auxotroph // J.Gen. Appl. Microbiol. 1958. - №4. - P. 128129.

84. Kubota K. and al. Microbial production of L-arginine // J.Gen. Appl. Microbiol. 1973. - v.19. - P. 339-352.

85. Kubota K. Production of L-arginine by mutants of glutamic acidoproducting bacteria II Microbiol. Reviews. 1973. - v. 19. - P. 339-352.

86. Kunihiko A., Hiroshiro S., Yoshio H. Effect of Oxygen Supply on L-Phenylalanine, L-Proline, L-glutamine and L-Arginine Fermentations // J.Ferment. Technol. 1979. - v.57. - №4. - P.321-327.

87. Kustu S., Amens G. The hisP protein, a known histidine transport component in Salmonella typhimurium, is also an arginine transport component // J. Bacteriol. 1973. - v. 116. - P. 107-113.

88. Luisa Ventura, Jose-Antonio Perez-Gonzales, Daniel Ramon. Cloning and molecular analisis of the Aspergillis terreus argl gene coding for an ornitine carbamoyltransferase II FEMS Microbiology Letters. -1997.-v.149.-P. 207-212.

89. Magasanik B. Genetic control of nitrogen assimilation in bacteria II Ann. Rev. Genet.-1982.-v. 16.-P. 135-168.

90. Mori M., Shiio I. Glutamatate Transport and Production in Brevibacterium flavum II Agric. Biol. Chem. 1983. - v.47. - №5. -P.983-990.

91. Morris D., Pardee A. A biosynthetic ornithine decarboxylase in Escherichia coli // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1965. - v.20. -P.697-702.

92. Morris D., Pardee A. Multiple pathways of putrescine biosynthesis in Escherichia coli // J. Biol. Chem. 1966. - v.241. - P.3129-3135.

93. N.Tanaka, Hanson R. Regulation of the tricarboxylic acid cycle gram-positive facultativity anaerobic bacilli // J.Bacteriol. 1975. - v. 122. -№1. -P.215-221.

94. Nakayama K., Amino-acid production using microbial auxotrophic mutants: Genetics of industrial microorganisms. Prague: Academia. -1973.-P. 219-248.

95. Nakayama K., Yoshida H. Biosynthes of L-arginine by auxotrophic mutants glutamate-producing bacteria // Agric. Biol. Chem. 1972. -v.36. -№10. - P. 1675-1684.

96. Nara T. The microbial production of amino acids. J.Antibiot. (Tokyo). -1972.-P.417-434.

97. Nikaido M., Glazer A. Microbial Biotechnology. New York: W. M. Freeman and Company. - 1997. - 387 p.

98. Parker J. // Journal of the American College of Cardiology. 2002. -№4. - P.78-81.

99. Piatti P., Monti L., Valsecchi G. et al. Long-term oral L-arginine administration improves peripheral and hepatic insulin sensitivity in type 2 diabetic patients // Diabetes Care. 2001. - №24. - P.875-880.

100. Pierard A., Glansdorff N., Mergeay M., Wiame J. Control of the biosynthesis of carbomoylophosphate in Escherichia coli // J. Mol. Biology. 1965. - v. 14. - P.23-36.

101. Rector Т., Bank A., Mullen K. et al. Randomized, double-blind, placebo-controlled study of supplemental oral L-arginine in patients with heart failure // Circulation. 1996. -№93. - P.2135 -2141.

102. Reitzer L. E.coli and S.typhimurium. Cellular and molecular biology./ Eds. F.C. Neidhardt etal. Washington: ASM. - 1996. - P.391 -407.

103. Shegoleva T.Y., Kolesnikov V.G., Begma L.A., Dakhno I.S. Influence of immunostimuluses of L-arginin and RNK on immune status of cows under fascioliasis // News of the Poltava State Agricultural Institute. -2000. № 5. - P. 32-34.

104. Shibukawa M., Kurima M., Ohsawa T. L-glutamic acid fermentation with molasses. Part VIII. L-glutamic acid accumulation by protoplast-like bodies //Agr.Biol.Chem. 1967. - v.31. - №7. - P.782-788.

105. Shiio I. et al. Glutamate metabolism in a glutamate-producing Bacterium // Agric. Biol. Chem. 1982. - v.46. - №2. - P.493-500.

106. Shiio I., Otsuka S., Katsuya N. Cellular permeability and extracellular formation of glutamic acid in Brevibacterium flavum // J. Biochem. -1963. v.53. - №5. - P.333-340.

107. Shiio I., Otsuka S., Takahashi M. Effect of biotin on the bacterial formation of glutamic acid. Glutamate formation and cellular permeability of amino acids // J. Biochem. 1962. - v.51. - №1. - P.56-62.

108. Shiio I., Ujigama K. Enzymes of the glutamate and aspartate synthetic pathways in a glutamate-producing bacterium, Brevibacterium flavum // J. Biochem. 1978. - v.84. - P.647-657.

109. Sugimoto Т., Shiio I. Regulation of Glucose-6-Phosphate dehydrogenase in Brevibacterium flavum // Agric. Biol. Chem. 1987. -v.51. -№1. - P.101-108.

110. Tanaka H., Nakayama K. L-homoserine accumulation by a threonine-auxotroph of Escherichia coli // Amino Acids. 1967. - v.41. - №.12. -P.680-685.

111. Tochikura Т., Sung H., Tachiki T. et al. Glutamate dehydrogenase activity in glutamate-producing bacteria.// Agric. Biol. Chem. 1984. -v.48. -№8. - P.2149-2153.

112. Tomoki Azuma. Factors Affecting L-Arginine Production in the Continuous Culture of an L-Arginine Producer of Cornybacterium acetoacidophilum // J. Ferment. Technol. 1988. - v.66. - №3. - P.285-290.

113. Tomoki Azuma, Toshishide Nananishi, Masahiro Sugimoto, Isolation and Characterization of a Stable L-Arginine Producer from Continuous Culture Broth of Corynebacterium acetoacidophilum // J. Ferment. Technol. 1988. - v.66. - №3. - P.279-284.

114. Touitou Y. Effects of Aging on Endocrine and Neuroendocrine Rhythms in Humans // Hormone Res. 1997. - №43. - v. 12. - P. 134139.

115. Tsuchida Т., Kubota K., Yoshihara Y., Kikuchi K., Yoshinaga F. II Agric. Biol.Chem. 1987. - v.51. - №8. - P.2089-2094.

116. Tuchman M., Rajagopal В., McCann M., Malamy M. Enhanced production of arginine and urea by genetically engineered Escherichia coli K-12 strains II Appl. Environ Microbiol. 1997. - v.63. - №.1. -P. 33-38.

117. US Patent #4.346.169. Method for production of L-arginine by fermentation / Akashi K., et al. 1982

118. US Patent #4.430.430. Method for producing L-arginine by fermentation / Momose M. et al. -1984.

119. US Patent #4.775.623. Process for producing L-arginine /1. Katsumata et al.-1988.

120. US Patent #5.017.482. Process for producing L-arginine / Katsumata et al. -1991.

121. US Patent #5.034.319. Process for producing L-arginine / Azuma T. et al. -1991.

122. US Patent #5.284.757. Process for producing L-arginine by fermentation with Brevibacterium or Corynebacterium /Tsuchida T. et al. 1994.

123. Vogel H. Arginine Biosynthetic system in Escherichia coli // Methods Enzymol. 1970. - №17A. - P.249-251.

124. Schneider В., Kiupakis A., Reitzer L. Arginine catabolism and the arginine succinyltransferase pathway in Escherichia coli // J. Bacteriol. -1998. v. 180. - №16. - P.4278 - 4286.

125. Yoshida H., Araki K, Nakayama K. Mechanism of L-Arginin Production by L-Arginin-producing Mutant Corinebacteriumts of glutamicum//Agric. Biol. Chem. -1979. v. 43. - №1. - P. 105 -111.

126. Yoshinaga F. et al. Glutamate kinase activity in Brevibacterium flavum // Agric. Biol. Chem. 1975. - v.39. - № 6. - P. 1269-1274.

127. Yoshio Hirose, Hiroshiro Shibai. Amino acid fermentation // J. Biotechnology and Bioengineering. 1980. - v.22. - №1. - P.111-125.1. УТВЕРЖДАЮ»

128. Проверка предусматривала: оценку продуктивности культуры продуцента аргинина в колбах на среде оптимизированного состава и ведение процесса осинтеза аргинина в лабораторных ферментерах "Anglicon".

129. Ферментация в лабораторных ферментерах.

130. Опыт проводили в 3-х повторностях. результаты представлены в таблице.

131. М.н.с. лаб. № 8 ФГУП ГосНИИгенетика

132. Зав.лаб. № 8 ФГУП ГосНИИгенетика к.б.н.

133. Ведущий научный сотрудник Лаб. № 14 ФГУП ГосНИИгенетика к.т.н.g^/^фаддеева С.Е.1. Ясиновский В.Г.1. Лукина Г.П.

134. Министерство промышленности, науки и технологий ^ Российской Федерациищг Федеральное Государственное Унитарное Предприятие

135. Государственный научно-исследовательский институт1 генетики и селекции промышленных микроорганизмов1. Щ ФГУП ГосНИИгенетика

136. Государственный научный центр Российской Федерацииква 113545, [phone]-телефон

137. Дорожный проезд, 1 [phone] факссия [e-mail] E-mailот 200 г.1. СПРАВКА1ДАНА Фаддеевой С.Е.

138. РОССИЙСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННА^ БИБЛИОТЕКАev^s ~ I Q>vb