Изучение влияния физико-химических свойств на гемостатическую активность хитозана и местных гемостатических средств на его основе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Кадысева Оксана Владимировна

• Кадысева Оксана Владимировна
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Кадысева Оксана Владимировна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1. 1 Хитин и хитозан. Общая характеристика

1.2 Основные особенности хитозана как биополимера, определяющие его биологическую активность

1.3 Современные подходы к разработке и применению местных гемостатических средств

1.3.1 Обзор современных кровоостанавливающих материалов

1.3.2 Местные гемостатические средства на основе хитозана

1.3.3 Гемостатический эффект хитозана

1.3.4 Контролируемые физико-химические показатели хитозана и местных

гемостатических средств на его основе

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ

ГЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объекты исследования

2.2 Материалы и методы исследования

2.3 Методы математической статистики

2.4 Предварительная оценка гемостатической активности образцов хитозана и местных гемостатических средств в экспериментах in vitro

2.4.1 Определение времени коагуляции

2.4.2 Определение динамического времени коагуляции

2.5 Предварительная оценка гемостатической активности образцов местных гемостатических средств в эксперименте in vivo

2.6 Определение основных физико-химических показателей исследуемых

образцов согласно спецификациям на сырье хитозана

2.6.1 Определение степени деацетилирования образцов хитозана и местных гемостатических средств методом ЯМР спектроскопии

2.6.2 Определение средневязкостной молекулярной массы образцов хитозана методом вискозиметрии

2.6.3 Определение содержания общей золы в образцах хитозана методом гравиметрии/озоления в муфельной печи

2.6.4 Определение потери в массе при высушивании (влажности) образцов хитозана методом гравиметрии/воздушно-тепловой сушки

2.6.5 Определение элементного состава образцов хитозана методом масс-

спектрометрии с индуктивно связанной плазмой

2.7 Определение дополнительных физико-химических показателей исследуемых образцов, способных оказывать влияние на их гемостатическую активность

2.7.1 Определение индекса полидисперсности образцов хитозана методом ЯМР спектроскопии

2.7.2 Определение светопропускания растворов образцов в зависимости от рН среды

2.7.3 Определение сорбционной способности образцов по красителю метиленовому синему

2.7.4 Определение способности к смачиванию для хитозана и местных

гемостатических средств

А Определение способности к смачиванию для хитозана и местных

гемостатических средств в форме гранул

Б Определение вертикальной впитывающей способности по воде для местных

гемостатических средств в форме бинтов

В Определение впитывающей способности по крови для местных

гемостатических средств в форме бинтов

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ

ГЛАВА 3 ПРОЕКТ СПЕЦИФИКАЦИИ И АЛГОРИТМ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ХИТОЗАНА И МЕСТНЫХ ГЕМОСТАТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ НА ЕГО ОСНОВЕ

3.1 Проект спецификации и алгоритм для контроля качества хитозана и

местных гемостатических средств в форме гранул (порошка)

3.2 Контроль качества образцов местных гемостатических средств согласно разработанному алгоритму

3.3 Разработка местного гемостатического средства на основе хитозана в форме бинта с применением проекта спецификации и алгоритма

3.4 Результаты испытаний экспериментального образца местного

гемостатического средства in vivo

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ А

ПРИЛОЖЕНИЕ Б

ПРИЛОЖЕНИЕ В

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение влияния физико-химических свойств на гемостатическую активность хитозана и местных гемостатических средств на его основе»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Благодаря наличию функциональных групп и специфике структуры хитозан имеет ряд свойств (биоактивность, биоразлагаемость, комплексообразование, сорбционные свойства и т.д.), за счет которых он находит широкое применение в различных сферах науки и промышленности. В фармации и медицине хитозан всё чаще используется из-за своей способности ускорять свертывание крови при местном применении, поскольку обеспечение эффективного гемостаза - одна из первостепенных задач экстренной медицинской помощи при травмах и ранениях [1]. Кровоостанавливающие свойства хитозана обусловлены сочетанием различных механизмов [2], основным из которых является взаимодействие его положительно заряженных аминогрупп с отрицательно заряженными форменными элементами крови [3, 4]. Известно, что в зависимости от показателей сырья, характеристики полимера могут существенно изменяться. Основными параметрами считаются [5] молекулярная масса (ММ) и степень деацетилирования (ДА). При этом, на данном этапе изучения свойств хитозана нет единого мнения о том, какие показатели и в каких значениях являются ключевыми в обеспечении гемостатического эффекта.

В России отсутствует единый стандарт, унифицирующий свойства хитозана - его вырабатывают согласно ТУ производителей с указанием таких характеристик, как степень ДА, вязкость, содержание тяжелых металлов. К образцам, предназначенным для применения в области фармации, медицины, пищевой технологии дополнительно предъявляются требования по чистоте (зольности), потере в массе при высушивании, а также присутствию биопатогенов (ТР ТС 021/2011, СанПиН 2.3.2.1078-01, СанПиН 2.3.2.1290-03 V, VI). Параметры, контролируемые нормативной документацией других стран (Фармакопея США ШР 34-КР 29 «Хитозан», Европейская фармакопея 6.0 «Хитозана гидрохлорид») аналогичны таковым

в России и являются недостаточными для контроля качества и прогнозирования биологической активности полимера. Также отсутствует единый стандарт оценки показателей качества местных гемостатических средств (МГС) на основе хитозана. Средства в части биологической безопасности должны соответствовать требованиям стандартов ГОСТ ИСО 10993-1-2011 [6], ГОСТ Р 52770-2016 [7], ГОСТ 31508-2012 [8], т.е. регламентируется главным образом только оценка их токсичности и общего воздействия на организм.

Степень разработанности темы исследования. Изучению физико-химических свойств природных соединений и разработке новых изделий на их основе посвящены работы отечественных и зарубежных ученых, таких как B.S. Kheirabadi (2009, 2010), J. Yang (2007), А.И. Сливкин (2013, 2014), Е.В. Вихарева (2020, 2021), Н.Б. Мельникова (2019, 2020), H. Hattori (2015), М.Г. Холявка (2020, 2021), Zh. Hu (2018) и др.

Цель работы. Выявить закономерности между гемостатической активностью хитозана как активной фармацевтической субстанции (АФС) и его физико-химическими свойствами для расширения регламентируемых в нормативной документации показателей качества на сырье хитозана и МГС.

Задачи исследования. Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. С целью дальнейшего изучения взаимосвязи физико-химических свойств и гемостатической активности образцов оценить их способность инициировать гемостаз в экспериментах in vitro и in vivo.

2. Определить значение основных регламентируемых (средневязкостной ММ, степени ДА, содержания влаги, общей золы и тяжелых металлов) и дополнительных (светопропускание растворов в зависимости от рН среды, индекс полидисперсности) физико-химических показателей и оценить сорбционные характеристики образцов хитозана и МГС с применением различных аналитических методов.

3. Среди изученных основных и дополнительных физико-химических показателей выявить имеющие прогностическое значение для установления гемостатической активности хитозана и МГС на его основе.

4. Разработать проект спецификации на хитозан и алгоритм оценки качества хитозанового сырья и МГС на его основе.

Научная новизна работы. Впервые показано, что предварительная оценка кровоостанавливающих свойств хитозана и МГС в форме гранул может быть выполнена путем определения светопропускания растворов хитозана и МГС при изменении рН среды методом спектрофотомерии.

Доказано, что гемостатическая активность (ГА) хитозана наиболее выражена для тех образцов, у которых светопропускание 0,3 % (масса/объем) растворов при физиологическом значении рН составляет не более 85 %, т.е. в процессе анализа при понижении уровня рН большая часть макромолекул перешла в состояние «глобула». Таким образом, впервые установлена связь конформационного состояния макромолекул хитозана в растворе с гемоактивностью.

Теоретическая и практическая значимость работы. На основании полученных данных проведено уточнение зависимости ГА хитозана от ММ и степени ДА и установлено, что для полимеров в изученном диапазоне молекулярных масс 120-285 кДа характерно увеличение ГА при повышении молекулярной массы и степени ДА. При значениях ММ в интервале 364-658 кДа возникает обратный эффект, и способность инициировать гемостаз будет возрастать при снижении степени ДА и повышении ММ.

Определено, что способность к смачиванию для МГС в виде бинтов должна рассматриваться только как дополнительный показатель при контроле качества (КК), т.к. не может напрямую характеризовать их гемостатические свойства.

В ходе проведенных исследований взаимосвязи между индексом полидисперсности исследованных образцов хитозана и их кровоостанавливающими свойствами не установлено.

Дополнен перечень характеристик сырья хитозана, подлежащих контролю при производстве МГС. Разработаны проект спецификации и алгоритм контроля качества хитозана и МГС, позволяющий дать прогноз их ГА без проведения биологического эксперимента на животных. Результаты работы внедрены в учебный процесс в рамках программы ординатуры по направлению 33.08.03 «Фармацевтическая химия, фармакогнозия» (акт о внедрении от 12 марта 2021 г.) ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный химико-фармацевтический университет» Минздрава России, а также специалитета по направлению 33.05.01 «Фармация» (акт от 13 октября 2021 г.) Института фармации ФГБОУ ВО «Самарский государственный медицинский университет» Минздрава России. Согласно предложенному алгоритму контроля качества хитозанового сырья ФГУП НПЦ «Фармзащита» ФМБА России и РХТУ им. Д.И. Менделеева разработан и изготовлен образец МГС в форме бинта, эффективность которого подтверждена in vivo (акт от 21 сентября 2021 г.).

Методология и методы исследования. Исследование проводилось в период с 2018 по 2021 гг. с использованием физико-химических методов анализа, соответствующих отечественным ГОСТам и международным фармакопейным стандартам: спектрофотометрии, ЯМР-спектроскопии, вискозиметрии, масс-спектрометрии, а также с применением методов in vitro и in vivo, и последующей статистической обработкой полученных результатов. Теоретическую основу исследования составляли труды зарубежных и отечественных ученых по исследованию свойств хитозана и методикам оценки гемостатических свойств изделий на его основе. Методология исследования заключалась в установлении закономерности

между гемостатической активностью хитозана и его физико-химическими показателями.

Положения, выносимые на защиту:

1. Результаты предварительной оценки гемостатической активности образцов, полученные методами in vitro и in vivo.

2. Результаты определения основных и дополнительных физико-химических показателей объектов исследования.

3. Результаты исследования по выявлению зависимости гемостатических свойств образцов хитозана от их физико-химических характеристик (ММ, степени ДА, индекса полидисперсности, светопропускания растворов в зависимости от рН среды, сорбционных свойств).

4. Проект спецификации, алгоритм и их апробация для контроля качества хитозанового сырья и МГС на основе хитозана.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность экспериментальных результатов и сделанных на их основе выводов определяется комплексным характером работы, использованием современных инструментальных методов, широким перечнем привлеченных источников. Сформулированные в работе выводы обоснованы и вытекают из полученных экспериментальных данных.

Основные результаты работы представлены на X и XI Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего» (г. Санкт-Петербург, 2020, 2021); Российско-Швейцарском онлайн-семинаре «Вызовы времени: инновационные технологии и оборудование для фармацевтической промышленности» (г. Москва, 2020); Второй научной конференции молодых ученых «Актуальные исследования в фармакологии» (г. Москва, 2021); IX Международной конференции «Radiation in various fields of Research» (Черногория, 2021).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, входящих в перечень рецензируемых научных журналов, в том числе 2 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки России для опубликования основных научных результатов диссертаций, и 2 статьи в иностранных журналах, реферируемых в наукометрических базах Scopus и Web of Science.

Связь задач исследования с планом фармацевтических наук.

Исследование выполнено в соответствии с планом исследовательских работ ФГБОУ ВО СПХФУ Минздрава России в рамках инициативной темы «Инновационные подходы в стандартизации лекарственных средств синтетического и природного происхождения» (номер гос. регистрации АААА-А19-119030590044-6, зарегистрирована 05.03.2019 г.).

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Диссертация соответствует паспорту научной специальности 3.4.2. Фармацевтическая химия, фармакогнозия, а именно пункту 1 «Исследование и получение биологически активных веществ на основе направленного изменения структуры синтетического и природного происхождения и выявление связей и закономерностей между строением и свойствами веществ» и пункту 3 «Разработка новых, совершенствование, унификация и валидация существующих методов контроля качества лекарственных средств на этапах их разработки, производства и потребления».

Личный вклад автора в проведенное исследование и получение научных результатов. Автором лично проведены поиск, систематизация, обобщение и анализ литературных данных по теме исследования; определены физико-химические свойства образцов; изучена гемостатическая активность образцов хитозана и МГС в экспериментах in vitro. При участии автора сотрудниками ФГБНУ «Научно-исследовательский институт медицины труда им. академика Н.Ф. Измерова»

выполнены исследования по определению ГА образцов МГС in vivo на крупных животных. Автор совместно с сотрудниками РХТУ им. Д.И. Менделеева участвовала в разработке нового образца МГС на основе хитозана в виде бинта. Выбор тематики, постановка цели и определение задач исследования проведены совместно с научным руководителем. Основные публикации по результатам проведенных исследований подготовлены автором в результате совместной работы с соавторами и перечислены в списке публикаций по теме диссертации.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 157 страницах компьютерного набора, иллюстрирована 28 рисунками и 23 таблицами, состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части (2 глав), заключения, списка сокращений и условных обозначений, списка литературы и приложений. Библиография включает 205 ссылок на литературные источники, в том числе 109 ссылок на иностранных языках.

ГЛАВА 1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 1.1 Хитин и хитозан. Общая характеристика

Хитин - аминополисахарид природного происхождения, занимающий второе место по распространению в природе после целлюлозы (рисунок 1) [9]. В организмах членистоногих (крабов, омаров, раков, криля и т.п.), насекомых (пчел, жуков и т.п.), клетках грибов и дрожжей, диатомовых водорослях хитин в комплексе с минеральными веществами, белками и меланинами образует внешний скелет и внутренние опорные структуры. В панцире ракообразных он представлен хитин-белковым комплексом, в кутикуле насекомых - хитин-меланиновым, в клеточной стенке грибов -хитин-глюкановым.

Поскольку хитин не растворим в воде, то он не поддается выделению из панциря напрямую. Для его получения необходимо последовательно отделить белковую (стадия депротеинирования) и минеральную (стадия деминерализации) составляющие панциря, перевести данные компоненты в растворимое состояние и удалить [9].

с' Н з

Рисунок 1 - Структурная формула хитина [10] Наиболее известным и изученным производным хитина является хитозан. Это высокомолекулярный полимер, глюкозамин, получаемый в результате реакции деацетилирования хитина (рисунок 2) [10, 11, 12].

Рисунок 2 - Превращение хитина в хитозан при К-деацетилировании [10]

Транс-расположение заместителей в элементарном звене макромолекулы хитина (ацетамидной и гидроксильной групп) у С(2) и С(3) обусловливает значительную гидролитическую устойчивость ацетамидных групп, в том числе и в условиях щелочного гидролиза. Поэтому их отщепление удается осуществить лишь в сравнительно жестких условиях -реакция быстро проходит в течение первого часа щелочной обработки. За это время при обработке 50 % раствором натрия гидроксида при 100 °С происходит отщепление 70 % ацетильных групп, и далее процесс замедляется. Достижение больших значений величины степени деацетилирования (доли отщепившихся ацетамидных групп в расчете на одно элементарное звено) требует дополнительных более жестких воздействий - не менее, чем десятикратный мольный избыток раствора натрия гидроксида. В большинстве традиционных методик используются концентрированные растворы натрия гидроксида в широком диапазоне концентраций (от 35 до 50 %о ), нагрев до 140 °С и время обработки от 12 ч до 10 сут. Важно отметить, что температура является решающим фактором, влияющим на глубину деацилирования хитина, но при её увеличении резко возрастает степень деструкции полимера [13] - снижается молекулярная масса и образуется полидисперсный по молекулярной массе хитозан [14, 15, 16].

Основным сырьём для получения хитозана является панцирь ракообразных, содержащий 20-25 хитина и около 70 карбоната кальция. Также наблюдается возрастающий интерес к альтернативным методам получения биополимера - уже доказано, что клеточная ткань

грибов и водорослей, подмор пчёл, оболочка членистоногих червей также могут являться сырьевыми источниками. Преимуществом этих объектов является высокая доступность и минимальное содержание минеральных веществ и, таким образом, отсутствие стадии деминерализации в технологии получения хитина. Отмечено, что полученные из альтернативных источников образцы биополимера являются более однородными по своим физико-химическим показателям, чем хитозан из ракообразных [17, 18]. Однако, практических результатов в данном направлении пока недостаточно чтобы сделать однозначные выводы о преимуществах и/или недостатках тех или иных источников получения хитина и хитозана.

Наличие функциональных групп, а также специфика структуры определяют ряд уникальных свойств хитозана - биоактивность, биоразлагаемость, биосовместимость, растворимость в водных растворах кислот [90], высокая комплексообразующая и сорбционная активность по отношению к ионам металлов и органическим молекулам, коагулирующие свойства, возможность использования для получения пленок, волокон, гидрогелей, губок, пластырей и др. [19, 20, 21, 22]. Образование водородных связей между функциональными группами макромолекул приводит к его плохой растворимости в воде - из-за низкой энергии связи молекул хитозана и воды, которая слабее водородных. Катионная природа хитозана обусловливает способность взаимодействовать с синтетическими или природными соединениями, несущими отрицательные заряды [23]. Это свойство также делает хитозан муко- и биоадгезивным и позволяет ему легко связываться с внешней поверхностью клеточных мембран организмов (отрицательно заряженными фосфолипидами [90], белками, гликопротеинами), вследствие чего он находит применение в системах доставки лекарств как носитель для биоактивных агентов [24, 25]. Низкая токсичность, особенности химической структуры (наличие в элементарных звеньях макромолекулы групп -ОН, -ЫН2 и -ЫНСОСН3), возможность

варьирования содержания аминогрупп и степени протонирования, широкий диапазон молекулярной массы и др. обеспечивают широкий ассортимент образцов хитозана и материалов на его основе для решения целого ряда проблем в разных сферах жизни [26, 27, 28, 29, 30].

Сегодня интерес к этим биополимерам небывало возрос, и сфера их практического использования постоянно расширяется [31]. Благодаря своим свойствам, а также возобновляемости сырьевых источников, в настоящее время хитозан становится все более привлекательным для различных областей науки и для многих сфер промышленности [20, 32, 33, 34]. В фармации и медицине хитозан применяется в следующих направлениях (таблица 1):

Таблица 1 - Основные направления применения хитозана в фармации и медицине

Область применения Основные особенности Ссылка

Системы доставки и замедленного высвобождения ЛС, в т.ч. вакцин и противоопухолевых препаратов Биодеградируемость, Биоадгезивность, Мукоадгезивность, Наличие функциональных групп, Низкая токсичность [35], [21], [26], [36], [37], [38]

Вспомогательный компонент при производстве ЛС, в т.ч. улучшающий абсорбцию ЛС Мукоадгезивность, Биодеградируемость, Биосовместимость [39], [40], [41], [42]

Разработка антибактериальных средств с хитозаном в составе Антимикробная активность, Биосовместимость, Наличие функциональных групп [43], [44], [45]

Восстановление тканей после ран и ожогов Биодеградируемость, Биосовместимость, Способность к волокно- и пленкообразованию, Антимикробная активность [46], [47], [48], [49], [50]

Местные гемостатические средства Биодеградируемость, Биосовместимость, Наличие аминогрупп, Сорбционные свойства [3], [51], [52], [53], [54]

Антикоагулянты Наличие функциональных групп, Низкая токсичность [55], [56], [57]

Шовный материал, Протезирование суставов и сосудов, Изготовление контактных линз Биосовместимость, Способность к волокно- и пленкообразованию [58], [59], [60], [61], [62]

Разработка БАД для снижения уровня холестерина Наличие функциональных групп, Способность к комплексообразованию, Низкая токсичность [63], [64], [65]

1.2 Основные особенности хитозана как биополимера, определяющие

его биологическую активность

Остановимся подробнее на тех свойствах хитозана и его модифицированных производных, благодаря которым они обладают значительным спектром биологической активности - антибактериальной, противовирусной, гемостатической, радиопротекторной,

иммуномодулирующей, антиоксидантной, гепатопротекторной и др. и находят столь широкое применение в фармации [66]. Высокомолекулярные соединения, биополимеры (в том числе хитозан) характеризуются такими физико-химическими показателями, как молекулярная масса, параметры молекулярно-массового распределения, растворимость, конформационные состояния, степень разветвленности, степень кристалличности, оптическая активность и т.д.

Молекулярная масса (ММ), которая считается одной из основных характеристик любого химического вещества, приобретает в случае высокомолекулярных соединений особую роль, так как служит мерой длины цепи полимера. ММ хитозана, которая зависит от вида используемого природного сырья, сезона отлова ракообразных (основного источника сырья), способа получения хитина, сроков хранения и метода деацетилирования, колеблется в пределах 10-1000 кДа. Для снижения вязкости, улучшения растворимости и получения конечного продукта с определенной биологической активностью, высокомолекулярный хитозан может быть подвергнут химической, физической или ферментативной деполимеризации, вплоть до получения низкомолекулярного хитозана с массой менее 20 кДа. Молекулярно-массовое распределение (ММР) оказывает существенное влияние на свойства полимеров и характеризуется величинами средневесовой, среднечисловой молекулярных масс и индексом полидисперсности (ИП). Для их определения используют различные экспериментальные методы - фракционирования, скоростной седиментации,

гельпроникающей хроматографии (ГПХ), ядерного магнитного резонанса (ЯМР).

Производителями хитозанового сырья, как правило, определяется средневязкостная ММ или вязкость растворов хитозана. При этом, в спецификациях на поставляемое сырье не указываются условия проведения анализа, что затрудняет интерпретацию результатов и не позволяет потребителю сделать полноценный вывод о значении ММ.

В отношении гемостатической активности хитозана рассматривают образцы с ММ в диапазоне 20-1000 кДа. Низкомолекулярный хитозан с ММ ~10 кДа, несмотря на высокую биологическую активность [67] и хорошую растворимость, не обладает способностью инициировать гемостаз [68]. Применение высокомолекулярного хитозана при остановке кровотечений ограничено в связи с неудовлетворительными потребительскими свойствами (низкая растворимость, низкая биосовместимость и др.) [69].

Степень деацетилирования (ДА) является второй важной характеристикой хитина/хитозана, отражающей процентное содержание Б-глюкозамина в молекуле, т.е. долю гидролизованных ацетамидных групп в расчете на одно элементарное звено. Показатель ДА определяют химическими и спектрофотометрическими методами. Крайние состояния полимера представляют собой полностью ацетилированные и полностью деацетилированные полисахариды, которые считают идеальным хитином и хитозаном соответственно [13, 70, 71]. Наличие положительно заряженных аминогрупп в молекуле хитозана рассматривают как основной фактор, благодаря которому биополимер проявляет разнообразную биологическую активность (способность к комплексообразованию, сродство к отрицательно заряженным клеточным мембранам, мукоадгезивность и т.д.) и находит широкое применение в фармации и медицине [72]. В тандеме с ММ эти характеристики считаются ключевыми при рассмотрении хитозана в

качестве сырья для разработки и производства местных гемостатических средств (МГС). Однако ввиду того, что хитозан - полимер биологического происхождения, данные показатели зачастую имеют широкий интервал значений и сильно зависят от происхождения хитинового сырья, времени его сбора, способов обработки и т.д.

Помимо ММ и степени ДА при изучении хитозана в качестве биологически активного вещества, учеными рассматривается влияние различных дополнительных физико-химических показателей на его биологическую активность. S. Aiba (1992 г) установлено [73], что гомогенное распределение ацильных групп вдоль цепи или высокая степень кристалличности приводит к низкому уровню ферментной деградации (биодеградации). На этот процесс также оказывают влияние ММ и степень ДА: низкомолекулярные образцы и полимеры с низкой степенью ДА быстрее подвергаются распаду в результате деятельности организма [74]. Следует принимать во внимание, что быстрое разложение полисахарида приводит к накоплению в тканях аминосахаров, что провоцирует воспалительную реакцию. Таким образом, хитозан с низким ДА может вызвать острое воспаление, в то время как для хитозана с высоким ДА такой риск минимален.

Согласно литературным данным, токсичность хитозана сравнима с поваренной солью и сахаром. В работах по изучению токсичности [36, 75] сообщается, что его LD50 перорально для мышей составила 16 г/кг веса. ММ оказывала минимальное влияние на жизнеспособность клеток, в то время как степень ДА полимера значительно влияла на его токсичность. Хитозан со степенью ДА менее 35 % характеризуется дозозависимой токсичностью. В случае изучения цитотоксичности производных хитозана данные противоречивы, главным образом по причине многообразия исследуемых производных и клеточных линий, которые отбирают для проведения исследований.

Согласно данным Свирщевской Е.В., Зубаревой А.А. и др. [76], токсичность хитозана и его производных при нейтральном pH среды определяется растворимостью и зарядом заместителя. При анализе образцов с ММ от 20 до 200 кДа, степенью ДА от 56 до 90 %, включая содержащие кватернизированные, гексаноильные и сукцинильные группы, был сделан вывод о том, что все положительно заряженные производные хитозана оказывали слабый цитотоксический эффект независимо от ММ, ДА и наличия гидрофобных заместителей. Такие соединения локализовались на клеточной мембране и не проникали внутрь клеток. Единственным исключением являются кватернизированные производные с высокой степенью замещения, которые проникают в клетки, что приводит к проявлению цитотоксичности и остановке клеточного цикла [77].

В отличие от положительно заряженных производных, N-сукцинилхитозан взаимодействовал с мембранами по другому механизму, что приводило к его проникновению в клетки. Увеличение степени замещения аминогрупп на четвертичные аммониевые (до 98 %) значительно усиливало цитотоксическое действие солей хитозана. Отрицательно заряженные соединения не обладали токсичностью, быстро аккумулировались в клетке, не индуцируя апоптоз [76]. Эксперименты in vivo [78] показывают, что LD50 для карбоксиметилхитозана (степень ДА 78 %) в отношении мышей перорально составила 3,5725 г/кг веса, т.е. существенно меньше, чем для незамещенного хитозана.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Кадысева Оксана Владимировна, 2022 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1 Kelly, J.F. Injury Severity and Causes of Death From Operation Iraqi Freedom and Operation Enduring Freedom: 2003-2004 / J.F. Kelly,

A.E. Ritenour, D.F. McLaughlin, K.A. Bagg, A.N. Apodaca et al. // The Journal of TRAUMA® Injury, Infection, and Critical Care. - 2008. - Vol. 64. № 2. -P. S21-S27.

2 Janvikul, W. In vitro Comparative Hemostatic Studies of Chitin, Chitosan, and Their Derivatives / W. Janvikul, P. Uppanan, B. Thavornyutikarn, J. Krewraing // Journal of Applied Polymer Science. - 2006. - Vol. 102. -P. 445-451.

3 Pogorielov, M.V. Chitosan as a Hemostatic Agent: Current State / M.V. Pogorielov, V.Z. Sikora // European Journal of Medicine, Series B 2. -2015. - P. 24-33.

4 Yang, J. Effect of chitosan molecular weight and deacetylation degree on Hemostasis / J. Yang, F. Tian, Z. Wang // J Biomed Mater Res B Appl Biomater.

- 2007. - Vol. 84. № 1. - P. 131-37.

5 Кадысева, О.В. Влияние физико-химических свойств местных гемостатических средств на основе хитозана на их гемостатическую эффективность в экспериментах in vitro и in vivo / О.В. Кадысева,

B.Н. Быков, О.Ю. Стрелова, А.Н. Гребенюк // Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия. Биология. Фармация. - 2020.

- № 3. - С. 72-80.

6 ГОСТ Р ИСО 10993-1-2011 «Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Ч. 1 Оценка и исследования.

7 ГОСТ Р 52770 «Изделия медицинские. Требования безопасности. Методы санитарно-химических и токсикологических испытаний».

8 ГОСТ 31508-2012 «Изделия медицинские. Классификация в зависимости от потенциального риска применения».

9 Гальбрайх, Л.С. Хитин и хитозан: строение, свойства, применение / Л.С. Гальбрайх // Соросовский образовательный журнал. - 2001. - Том 7. № 1. - С. 51-56.

10 Кубенко, Е.Г. Разработка технологии получения хитозана из гаммаруса азовского и его использование при производстве растительно-рыбных пищевых продутов: дисс. ... канд. техн. наук: 05.18.01, 05.18.04 / Е.Г. Кубенко. - Краснодар, 2014. - 143 с.

11 Солдатова, С.Ю. Разработка технологии получения хитозана из панцырьсодержащего сырья / С.Ю. Солдатова // Вестник НВГУ. Химия и химические технологии. - 2015. - № 1. - С. 48-55.

12 Касьянов, Г.И. Современные способы получения и применения биополимера хитозана / Г.И. Касьянов, Е.Г. Кубенко // Наука. Техника. Технологии (политехнический вестник). Технологические разработки. -2016. - № 4. - С. 91-103.

13 Рипачева, Е.Н. Разработка технологии получения хитозана с использованием физико-химических закономерностей щелочного гидролиза хитинсодержащего сырья: дисс. ... канд. техн. наук: 15.18.04/ Е.Н. Рипачева. - Мурманск, 2007. - 240 с.

14 Maddaloni, M. Green Routes for the Development of Chitin/Chitosan Sustainable Hydrogels / M. Maddaloni, I. Vassalini, I. Alessandri // Sustainable Chemistry. - 2020. - Vol. 1. - P. 325-344.

15 Левитин, С.В. Разработка методов получения и исследования структуры и свойств наночастиц хитозана: дисс. ... канд. техн. наук: 05.17.06/ С.В. Левитин. - М., 2015. - 131 с.

16 Гамзазаде, А.И. Некоторые особенности получения хитозана / А.И. Гамзазаде, А.М. Скляр, С.В. Рогожин // Высокомолекулярные соединения. - 1985. - Т. (А) XXVII. № 6. - С. 1179-1184.

17 M. Abo Elsoud, M. Current trends in fungal biosynthesis of chitin and chitosan / M. M. Abo Elsoud, E.M. El Kady // Bulletin of the National Research Centre. - 2019. - Vol. 43. I. 59. - 12 p.

18 Akila, R.M. Fermentative production of fungal Chitosan, a versatile biopolymer (perspectives and its applications) / R.M. Akila // Advances in Applied Science Research. - 2014. - Vol. 5. I. 4. - P. 157-170.

19 Yadu, N.VK. Chitosan as Promising Materials for Biomedical Application: Review / N.VK. Yadu, K.M. Raghvendra, V. Aswathy, et. al. // Research & Development in Material Science. - 2017. - Vol. 2(4). - P. 1-16.

20 Mustafa, A. Pharmaceutical Uses of Chitosan in the Medical Field / A. Mustafa, E. Cadar, R. Sirbu // European Journal of Interdisciplinary Studies. -2015. - Vol. 1. I. 3. - P. 35-40.

21 Moran, H.B.T. Immunomodulatory properties of chitosan polymers / H.B.T. Moran, J.L. Turley, M. Andersson, Ed.C. Lavelle // Biomaterials. - 2018.

- 184. - P. 1-9.

22 Pella, M.C.G. Chitosan-based hydrogels: From preparation to biomedical applications / M.C.G. Pella, M.K. Lima-Tenorio, E.T. Tenorio-Neto, M.R. Guilherme, E.C. Muniz, A.F. Rubira // Carbohydrate Polymers. - 2018. -Vol. 196. - P. 233-245.

23 Alves, N.M. Chitosan derivatives obtained by chemical modifications for biomedical and environmental applications / N.M. Alves, J.F. Mano // Int J of Biol Macromol. - 2008. - Vol. 43. - P. 401-414.

24 Shariatinia, Z. Chitosan-based hydrogels: Preparation, properties and applications / Z. Shariatinia, A.M. Jalali // International Journal of Biological Macromolecules. - 2018. - Vol. 115. - P. 194-220.

25 Ali, A. A review on chitosan and its nanocomposites in drug delivery / A. Ali, Sh. Ahmed // International Journal of Biological Macromolecules. - 2018.

- Vol. 109. - P. 273-286.

26 Пат. RU 2535141 C1 Российская Федерация, МПК А61К 9/08, 31/722, 31/19, A61P17/00. Гелеобразная композиция широкого спектра биологического действия / Зудина И.В., Фомина В.И., Шиповская А.Б; заявитель и патентообладатель ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный университет им. Н.Г. Чернышевского. - № 2013115355/15; заявл. 08.04.13; опубл. 10.12.14, Бюл. № 34. - 13 с.

27 Choi, Ch. Application of chitosan and chitosan derivatives as biomaterials / Ch. Choi, J.-P. Nam, J.-W. Nah // Journal of Industrial and Engineering Chemistry. - 2016. - Vol. 33. - P. 1-10.

28 Сливкин, Д.А. Хитозан для фармации и медицины / Д.А. Сливкин, В.Л. Лапенко, О.А. Сафонова, С.Н. Суслина, А.С. Беленова // Вестник ВГУ, серия: Химия. Биология. Фармация. - 2011. - № 23. - С. 214-232.

29 Хитозан / Под ред. Р.А.А. Муццарелли; пер. с англ. Л.С. Пачковской. - Н. Новгород: Изд-во «Вектор-ТиС», 2001. - 372 с.

30 Немцев, С.В. Комплексная технология хитина и хитозана из панциря ракообразных / С.В. Немцев - М.: Изд-во ВНИРО, 2006. - 134 с.

31 Jain, A. A New Horizon in Modifications of Chitosan: Syntheses and Applications / A. Jain, A. Gulbake, S. Shilpi, Ash. Jain // Critical Reviewes in Therapeutic Drug Carrier Systems. - 2013. - Vol. 30. I. 2. - P. 91-181.

32 Baranwal, A. Chitosan: An undisputed bio-fabrication material for tissue engineering and bio-sensing applications / A. Baranwal, A. Kumar, A. Priyadharshini., G. S. Oggu // Int. J. Biol. Macromol. - 2018. - Vol. 110. - P. 110-123.

33 Latanska, I. Modulating the Physicochemical Properties of Chitin and Chitosan as a Method of Obtaining New Biological Properties of Biodegradable Materials / I. Latanska, P. Rosiak, P. Paul, W. Sujka, B. Kolesinska // Chitin and Chitosan - Physicochemical Properties and Industrial Applications. - 2021.

34 Muxika, A. Chitosan as a bioactive polymer: Processing, properties and applications / A. Muxika, A. Etxabide, J. Uranga, P. Guerrero et al. //

International Journal of Biological Macromolecules. - 2017. - Vol. 105. -P. 1358-1368.

35 Хантимирова, Л.М. Сравнительная оценка иммуногенности охарактеризованных препаратов на основе хитозана и других адьювантов в составе инактивированных вакцин против гриппа / Л.М. Хантимирова, О.С. Кашина, М.И. Черникова, Ю.М. Васильев // Эпидемиология и Вакцинопрофилактика. - 2016. - № 1(86). - С. 86-92.

36 Kedjarune-Leggat, U. Chitosan and Its Modifications: Are They Possible Vehicles for Gene Therapy / U. Kedjarune-Leggat, P.A. Leggat. -Rijeka, Croatia: In: Yuan, Xu-bo, (ed.) Non-Viral Gene Therapy. InTech, 2011. -P. 439-454.

37 Лозбина, Н.В. Свойства хитозана и его применение в офтальмологии / Н.В. Лозбина, И.Н. Большаков, В.И. Лазаренко // Сибирское медицинское образование. - 2015. - № 5. - С. 5-12.

38 Kritchenkov, A.S. Chitosan and its derivatives: vectors in gene therapy / A.S. Kritchenkov, S. Andranovits, Y. Skorik // Russ. Chem. Rev. - 2017. -Vol. 86. I. 3. - P. 231-239.

39 Бочков, П.О. Влияние высокомолекулярных вспомогательных веществ на оптимизацию фармакокинетических свойств лекарственных препаратов / П.О. Бочков, Г.Б. Колыванов, А.А. Литвин, В.П. Жердев, Р.В. Шевченко // Фармакокинетика и Фармакодинамика. - 2016. - № 1. -С. 3-11

40 Хвостов, М.В. Применение природных полисахаридов в фармацевтике / М.В. Хвостов, Т.Г. Толстикова, С.А. Борисов, А.В. Душкин // Биоорганическая химия. - 2019. - Т. 45. № 6. - C. 563-575.

41 Marczynski, Z. The effect of chitosan on the stability and morphological parameters of tablets with Epilobium parviflorum Schreb. extract / Z. Marczynski, K.H. Bodek // Polimery w Medycynie. - 2007. - Vol. 37. I. 3. - P. 3-11.

42 Olshannikova, S. Immobilization of bromelain on chitosan with different molecular weights / S. Olshannikova, V. Koroleva, S. Pankova, F. Sakibaev, M. Holyavka, V. Artyukhov // European Journal of Clinical Investigation, Supplement. - 2021/ - Vol. 51. No. S1. - P. 147.

43 Куликов, С.Н. Антибактериальная активность хитозана в отношении энтеробактерий и стафилококков, выделенных у пациентов с дисбактериозом кишечника / С.Н. Куликов, Ю.А. Тюрин, Р.З. Хайруллин // Казанский медицинский журнал. - 2010. - Т. 91. № 5. - С. 656-660.

44 Иванушко, Л.А. Антибактериальные и антитоксические свойства хитозана и его производных / Л.А. Иванушко, Т.Ф. Соловьева, Т.С. Запорожец, Л.М. Сомова, В.И. Горбач // Тихоокеанский медицинский журнал. - 2009. - № 3. - С. 82-85.

45 Moon, J.-S. The antibacterial and immunostimulative effect of Chitosan-oligosaccharides against infection by Staphylococcus aureus isolated from bovine mastitis / J.-S. Moon, H.-K. Kim, H.Ch. Koo, Y.-S. Joo, H.-m. Nam et al. // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 2007 - Vol. 75. - P. 989-998.

46 Escarcega-Galaz, A.A. Mechanical, structural and physical aspects of chitosan-based films as antimicrobial dressings / A.A. Escarcega-Galaz, D.I. Sanchez-Machado, J. Lopez-Cervantes, A. Sanches-Silva, T.J. MaderaSantana, P. Paseiro-Losada // Int. J. of Biol. Macromol. - 2018. - Vol. 3 (21). -P. 473-479.

47 Kuroyanagi, Y. Development of a new wound dressing with antimicrobial delivery capability / Y. Kuroyanagi, A. Shiraishi, Y. Shirasaki, N. Nakakita, Y. Yasutomi et al. // Wound repair and regeneration. - 1994. -Vol. 2. - P. 122-129.

48 Mehrabani, M.G. Chitin/silk fibroin/TiO2 bio-nanocomposite as a biocompatible wound dressing bandage with strong antimicrobial activity / M.G. Mehrabani, R. Karimian, R. Rakhshaei, F. Pakdel, H. Eslami et al. // Int. J. Of Biol. Macromol. - 2018. - Vol. 116. - P. 966-976.

49 Байдамшина, Д.Р. Оценка генотоксичности и цитотоксичности препаратов иммобилизированного на матрице хитозана трипсина / Д.Р. Байдамшина, Е.Ю. Тризна, М.Г. Холявка, О.О. Логинова, С.М. Сазыкина, В.Г. Артюхов // Вестник ВГУ, серия: Химия. Биология. Фармация. - 2016. - № 3. - С. 53-57.

50 Байдамшина, Д.Р. Антимикробная и ранозаживляющая активность хитозан-иммобилизированного фицина / Д.Р. Байдамшина, Е.Ю. Тризна, М.Г. Холявка, А.Р. Каюмов // Актуальная биотехнология. - 2020. - № 3. Вып. 34. - С. 282-284.

51 Hu, Zh. Chitosan-Based Composite Materials for Prospective Hemostatic Applications / Zh. Hu, D.-Y. Zhang, Si-T. Lu, Pu-W. Li // Marine Drugs. - 2018. - Vol. 16. I. 8 (273).

52 Yan, D. Different chemical groups modification on the surface of chitosan nonwoven dressing and the hemostatic properties / D. Yan, Sh. Hu, Zh. Zhou, Sh. Zeenat // Int. J. Biol. Macromol. - 2018. - Vol. 107. - P. 463-469.

53 Wang, Y. Multifunctional chitosan/dopamine/diatom-biosilica composite beads for rapid blood coagulation / Y. Wang, Y. Fu, J. Li, Y. Mu // Carbohydrate Polymers. - 2018. - Vol. 200. - P. 6-14.

54 Stricker-Krongrad, A.-H. Efficacy of Chitosan-Based Dressing for Control of Bleeding in Excisional Wounds / A.-H. Stricker-Krongrad, Z. Alikhassy, N. Matsangos, R. Sebastian // Eplasty. - 2018. - Vol. 18. e14. -P. 122-130.

55 Kaminski, K. Chitosan Derivatives as Novel Potential Heparin Reversal Agents / K. Kaminski, K. Szczubialka, K. Zazakowny, R. Lach et al. // Journal of Medicinal Chemistry. - 2010. - Vol. 53. - P. 4141-4147.

56 Imran, M. Synthesis, characterisation and anticoagulant activity of chitosan derivatives / M. Imran, M. Sajwan, B. Alsuwayt, M. Asif // Saudi Pharmaceutical Journal. - 2020. - Vol. 28. I. 1. - P. 25-32.

57 Subhapradha, N. Anticoagulant and antioxidant activity of sulfated chitosan from the shell of donacid clam Donax scortum / N. Subhapradha, Sh. Suman, P. Ramasamy, R. Saravanan et al. // Int. J. of Nutrition, Pharmacology, Neurological Diseases. - 2013. - Vol. 3. I. 1. - P. 39-45.

58 Nakajima, M. Chitin is an effective material for sutures / M. Nakajima, K. Atsumi, K. Kifune, K. Miura et al. // The Japanese journal of surgery. - 1986. - Vol. 16. - P. 418-424.

59 Huaixan, L.N Macroscopic, histochemical, and immunohistochemical comparison of hysterorrhaphy using catgut and chitosan suture wires / L.N. Huaixan, S.S.B. Arruda, A.S. Leonardo, J.C. Viana et al. // J. Biomed. Mater. Res. B Appl. Biomater. - 2016. - Vol. 104. I. 1. - P. 50-57.

60 Цветкова, Е.А. Материал для эндопротеза кровеносного сосуда на основе высокомолекулярных соединений / Е.А. Цветкова, И.Ю. Ухарцева, С.В. Зотов, К.В. Овчинникова, В.А. Гольдаде и др. // Вестник технологического университета. - 2016. - Т. 19. № 20. - С. 57-62.

61 Xin-Yuan, S. New Contact Lens Based on Chitosan/Gelatin Composites / S. Xin-Yuan, T. Tian-Wei // Journal of Bioactive and Compatible Polymers. -2004. - Vol. 19(6). - P. 467-479.

62 Гегель, Н.О. Комплексное моделирование сосудистого протеза из хитозана / Н.О. Гегель, Т.С. Бабичева, А.Б. Шиповская, А.А. Голядкина и др. // Практическая биомеханика: матер. Докл. Всероссийской конф. Мол. Уч. С международ. Уч. - Саратов: Изд-во Буква, 2015. - С. 117-118.

63 Ylitalo, R. Cholesterol-lowering properties and safety of chitosan / R. Ylitalo, S. Lehtinen, E. Wuolijoki et al. // Arzneimittelforschung. - 2002. -Vol. 52(1). - P. 1-7.

64 Bokura, H. Chitosan decreases total cholesterol in women: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial / H. Bokura, S. Kobayashi // European journal of clinical nutrition. - 2003. - Vol. 57. I. 5. - P. 721-725.

65 Gallaher, D.D. Chitosan, cholesterol lowering, and caloric loss / D.D. Gallaher // Agro Food Industry Hi Tech. - 2003. - Vol. 14. I. 5. - P. 32-35.

66 Варламов, В.П. Хитин/хитозан и его производные: фундаментальные и прикладные аспекты / В.П. Варламов, А.В. Ильина, Б.Ц. Шагдарова, А.П. Луньков, И.С. Мысякина // Успехи биологической химии. - 2020. - Т. 60. - С. 317-368.

67 Minh, N.C. Preparation, properties, and application of low-molecular-weight chitosan / N.C. Minh, N.V. Hoa, T.S. Trung // Handbook of Chitin and Chitosan. - 2020. - Chapter 15. - P. 453-471.

68 Hattori, H. Changes in blood aggregation with differences in molecular weight and degree of deacetylation of chitosan / H. Hattori, M. Ishihara // Biomed Mater. - 2015. - Vol. 22. I. 10(1). - P. 015014.

69 Aranaz, I. Functional characterization of chitin and chitosan / I. Aranaz, M. Mengibar, R. Harris // Curr Chem Biol. - 2009. - Vol. 3. № 2. - P. 203-230.

70 Кучина, Ю.А. Инструментальные методы определения степени деацетилирования хитина / Ю.А. Кучина, Н.В. Долгопятова, В.Ю. Новиков и др. // Вестник МГТУ. - 2012. - Т. 15. № 1. - С. 107-113.

71 Kumirska, J. Application of Spectroscopic Methods for Structural Analysis of Chitin and Chitosan / Czerwicka M., Kaczynski Z. et al. // Marine Drugs. - 2010. - Vol. 8. - P. 1567-1636.

72 Bano, I. Chitosan: A potential biopolymer for wound management / I. Bano, M. Arshad, T. Yasin, M.A. Ghauri et al. // International Journal of Biolpgical Macromolecules. - 2017. - Vol. 102. - P. 380-383.

73 Aiba, S. Studies on chitosan: 4. Lysozymic hydrolysis of partially N-acetylated chitosans / S. Aiba // I. J. Biol. Macromol. - 1992. - Vol. 14. N 4. -P. 225-228.

74 Huang, M. Uptake and cytotoxicity of chitosan molecules and nanoparticles: effects of molecular weight and degree of deacetylation / M. Huang, E. Khor, L. Lim // Pharm Res. - 2004. - Vol. 21. № 2. - P. 344-353.

75 Shipkowski, K.A. NTP Technical Report on the Toxicity Study of Chitosan: National Toxicology Program, Toxicity Report Series / K.A. Shipkowski, B.C. Sayers // National Institutes of Health Public Health Service: U.S. Department of Health and Human Services. - 2017. - № 93. -P. 50.

76 Свирщевская, Е.В. Анализ токсичности и биосовместимости производных хитозана с различными физико-химическими свойствами / Е.В. Свирщевская, А.А. Зубарева, А.А. Бойко, О.А. Шустова // Прикладная биохимия и микробиология. - 2016. - Том. 52. № 5. - С. 467-475.

77 Zubareva, A. Penetration and toxicity of chitosan and its derivates / A. Zubareva, B. Shagdarova, V. Varlamov, E. Kashirina // Eur. Polym. J. - 2017.

- Vol. 93. - P. 743-749.

78 Ibrahim, H.M. Preparation, characterization and median lethal dose (LD50) of carboxymethyl chitosan as target Drug Delivery / H.M. Ibrahim, E.M.R. El-Zairy, R.M. Mosaad // International Journal of Advanced Research. -2015. - Vol. 3. I. 1. - P. 865-873.

79 Tayel, A.A. Skin protectant textiles loaded with fish collagen, chitosan and oak galls extract composite / A.A. Tayel, R.A. Ghanem, Sh.H. Moussa, M. Fahmi // International Journal of Biological Macromolecules. - 2018. -Vol. 117. - P. 25-29.

80 Hafsa, J. Antioxidant and antimicrobial properties of chitin and chitosan extracted from Parapenaeus Longirostris shrimp shell waste / J. Hafsa, M.A. Smach, B. Charfeddine, K. Limem // Annales Pharmaceutiques Francaises.

- 2016. - Vol. 74. - P. 27-33.

81 Полякова, А.М. Влияние хитозана на биологические свойства эндотоксинов грамотрицательных бактерий / А.М. Полякова, А.В. Кравченко, И.М. Ермак // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1995. - № 8. - С. 169-172.

82 Ермак, И.М. Комплексы хитозана с бактериальными эндотоксинами и их биологическая активность / И.М. Ермак, В.И. Горбач, В.Н. Давыдова, А.М. Полякова // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Материалы восьмой международной конференции. - М.: Изд-во ВНИРО, 2006. - С. 193-197.

83 Куликов, С.Н. Антибактериальная активность хитозана в отношении энтеробактерий и стафилококков, выделенных у пациентов с дисбактериозом кишечника / С.Н. Куликов, Ю.А. Тюрин. Р.З. Хайруллин // Казанский медицинский журнал. - 2010. - Том 91. № 5. - С. 656-660.

84 Куликов, С.Н. Антибактериальное действие низкомолекулярного хитозана в отношении Escherichia coli / С.Н. Куликов, Д.Р. Оберемок, Е.А. Безродных, В.Е. Тихонов // Ученые записки Казанского университета. Естественные науки. - 2013. - Том 155. Книга 3. - С. 27-39.

85 Liu, X.F. Antibacterial action of chitosan and carboxymethylated chitosan / X.F. Liu, Y.L. Guan, D.Z. Yang, Z. Li // J. Appl. Polym. Sci. - 2001. -Vol. 79. - P. 1324-1335.

86 Chang, Sh.-H. pH Effect on solubility, zeta potential, and correlation between antibacterial activity and molecular weight of chitosan / Sh.-H. Chang, H.T. Lin, G.J. Wu, G.J. Tsai // Carbohydr. Polym. - 2015. - Vol. 134. - P. 74-81.

87 Сливкин, А.И. Изучение свойств растворов хитозана / А.И. Сливкин, А.С. Беленова, Г.В. Шаталов // Вестник ВГУ, серия: Химия. Биология. Фармация. - 2014. - № 1. - С. 134-137.

88 Давыдова, В.Н. Конформация молекул хитозана в водных растворах / В.Н. Давыдова, И.М. Ермак // Биофизика. - 2018. - Т. 63. Вып. 4. - P. 648-660.

89 Федосеева, Е.Н. Вязкостные свойства растворов хитозана и его реакционная способность / Е.Н. Федосеева, Л.А. Смирнова, В.Б. Федосеев // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского, серия: Химия. - 2008. - № 4. - С. 59-64.

90 Апрятина, К.В. Полимерные композиции на основе хитозана медико-биологического назначения: дисс. ... канд. хим. наук: 02.00.06 / К.В. Апрятина. - Нижний Новгород, 2018. - 147 с.

91 Леваньков, С.В. Ионообменные свойства хитозана в зависимости от величины его удельной поверхности / С.В. Леваньков, Е.В. Якуш // Известия Тихоокеанского научно-исследовательского рыбохозяйственного центра. -2001. - Т. 129. - 116-120.

92 Ivshina, I. Biodegradation of emerging pollutants: Focus on pharmaceuticals / I. Ivshina, E. Tyumina, E. Vikhareva // Microbiology Australia. - 2018. - Vol. 39 (3). - P. 117-122.

93 Королева, В.А. Исследование сорбционной емкости кислоторастворимых хитозанов по отношению к бычьему сывороточному альбумину / В.А. Королева, М.Г. Холявка, С.М. Сазыкина, С.С. Ольшанникова, В.Г. Артюхов // Вестник ВГУ, серия: Химия. Биология. Фармация. - 2015. - № 4. - С. 85-89.

94 Alef, M. Pharmaceutical Uses of Chitosan in the Medical Field / M. Alef, C. Emin, S. Rodica // European Journal of Interdisciplinary Studies. -2015. - Vol. 1. I. 3. - P. 35-40.

95 Jenkins, D.H. Trauma Hemostasis and Oxigenation Research Position Paper on Remote Damage Control Resuscitation: Definitions, Current Practice, and Knowledge Gaps / D.H. Jenkins, J.F. Rappold, J.F. Badloe et al // SHOCK. -2014. - Vol. 41. Supp. 1. - P. 3-12.

96 Zideman, D.A. European Resuscitation Council Guidelines for Resuscitation 2015 Section 9. First aid / D.A. Zideman, E.D.J. De Buck, E.M. Singletary, P. Cassan // Resuscitation. - 2015. - Vol. 95. - P. 278-287.

97 John, A.E. Effects of rapid wound sealing on survival and blood loss in a swine model of lethal junctional arterial hemorrhage / A.E. John, X. Wang, E.B. Lim, D. Chien // Journal of Trauma and Acute Care Surgery. - 2015. -Vol. 79. № 2. - P. 256-262.

98 Baylis, J.R. Self-Propelled Dressings Containing Thrombin and Tranexamic Acid Improve Short-Term Survival in a Swine Model of Lethal Junctional Hemorrhage / J.R. Baylis, A.E. St. John, X. Wang, E.B. Lim // SHOCK. - 2016. - Vol. 46. I. 3S. - P. 123-128.

99 King, D.R. Thirty Consecutive Uses of a Hemostatic Bandage at a US Army Combat Support Hospital and Forward Surgical Team in Operation Iraqi Freedom / D.R. King // The Journal of TRAUMA® Injury, Infection, and Critical Care. - 2011. - Vol. 71. № 6. - P. 1775-1778.

100 Shina, A. Prehospital use of hemostatic dressings by the Israel Defense Forces Medical Corps: A case series of 122 patients / A. Shina, A.M. Lipsky, R. Nadler, M. Levi // Journal of Trauma and Acute Care Surgery. - 2015. -Vol. 79. № 4. S. 1. - P. S204-S209.

101 Будко, Е.В. Местные гемостатические средства и пути их совершенствования / Е.В. Будко, Д.А. Черникова, Л.М. Ямпольский, В.Я. Яцюк // Российский медико-биологический вестник им. Академика И.П. Павлова. - 2019. - Т. 27б № 2. - С. 274-285.

102 Karia, R.A. Hemostasis and Tourniquet / R.A. Karia // Operative Techniques in Sports Medicine. - 2011. - Vol. 19. I. 4. - P. 224-230.

103 Snyder, D. Efficacy of Prehospital Application of Tourniquets and Hemostatic Dressings to Control Traumatic External Hemorrhage / D. Snyder, A. Tsou, K. Schoelles. DOT HS 811 999b. Washington, DC: National Highway Traffic Safety Administration, 2014. - 147 p.

104 Чепур, С.В. О выборе модели наружного кровотечения для доклинической оценки эффективности местных гемостатических средств (обзор литературы) / С.В. Чепур, А.Б. Юдин, И.А. Шперлинг, Л.И. Махновский и др. // Военно-медицинский журнал. - 2016. - № 7. - С. 25-33.

А.А. Пронченко, А.Б. Юдин, А.В. Денисов // Политравма. Реабилитация. -2013. - № 1. - С. 80-86.

106 Watters, J.M. Advanced Hemostatic Dressings Are Not Superior to Gauze for Care Under Fire Scenarios / J.M. Watters, Ph.Y. Van, G.J. Hamilton, Ch. Sambasivan // The Journal of TRAUMA® Injury, Infection, and Critical Care. - 2011. - Vol. 70. № 6. - P. 1413-1419.

107 Пат. US 2009/0186851 A1 United States, МПК A61K 31/722, A61P 7/04, 14/02. Hemostatic material / Hardy C., Johnson E.L., Luksch P.; Medtrade Products Limited. - 12/159,623; заявл. 20.11.2008; опубл. 23.07.2009.

108 Пат. RU 2487701 C2 Российская Федерация, МПК А61К 9/08, 31/722, A61L 15/28, A61P 7/04, B28B 1/00. Раствор для получения материала на основе хитозана, способ получения гемостатического материала из этого раствора (варианты) и медицинское изделие с использованием волокон на основе хитозана / Внучкин А.В., Насибулина Е.Р., Забивалова Н.М.; заявитель и патентообладатель ООО «Инмед» - № 2011131959/15; заявл. 26.07.11; опубл. 20.07.13, Бюл. № 20. - 42 с.

109 Domb, A.J. Biodegradable polymers in clinical use and clinical development / edited by A.J. Domb, N. Kumar, A. Ezra. - New Jersey: John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, 2011. - 734 p.

110 Пат. RU 2635465 C1 Российская Федерация, МПК A61K 31/722, 9/08, 9/14, 47/30, A61F 13/00, A61P 17/02, 7/04, A61L 15/28. Гемостатический материал, гемостатическое средство и перевязочный материал на его основе / Федотов И.А., Федотов А.Е., Калацкий Ю.М., Жуйкова М.В. и др.; заявитель и патентообладатель Федотов А.Е. - № 2016133016; заявл. 10.08.2016; опубл. 13.11.2017, Бюл. № 32.

111 Пат. RU 2414225 Российская Федерация, МПК A61K 33/06, A61P 7/04. Местное гемостатическое средство / Бояринцев В.В., Самойлов А.С., Коваленко Р.А., Назаров В.Б., Дружков А.В., Фрончек Э.В.,

Глухов В.А.; заявитель и патентообладатель Бояринцев В.В. -№ 2009145652/15; заявл. 10.12.2009; опубл. 20.03.2011, Бюл. № 8.

112 Пат. RU 2522206 C1 Российская Федерация, МПК A61K 33/06, A61P 7/04. Местное гемостатическое средство / Назаров В.Б., Дружков А.В., Бояринцев В.В., Самойлов А.С., Фрончек Э.В., Гришин В.В., Вашурина А.О., Борцов Д.В.; заявитель и патентообладатель Дружков А.В. - № 2012154430/15; заявл. 17.12.2012; опубл. 10.07.2014; Бюл. № 19.

113 Пат. RU 2526183 C1 Российская Федерация, МПК А61К 47/36, 9/06, 31/722, A61F 13/02. Гемостатическая противоожоговая ранозаживляющая композиция / Назаров В.Б., Дружков А.В., Самойлов А.С., Куропаткин В.А.; заявитель и патентообладатель ФГУП НПЦ «Фармзащита» ФМБА России. - № 2013109010/15; заявл. 28.02.13; опубл. 20.08.14, Бюл. № 23. - 7 с.

114 Sinha, N. Chitosan based Axiostat Dental Dresing following Extraction in Cardiac Patients under Antiplatelet Therapy / N. Sinha, A. Mazumdar, J. Mitra, G. Sinha // Int. J. of Oral Health and Medical Research. - 2017. - Vol. 3. I. 5. -P. 65-67.

115 Englehart, M.S. A Novel Highly Porous Silica and Chitosan-Based Hemostatic Dressing Is Superior to HemCon and Gauze Sponges / M.S. Englehart, S.D. Cho, B.H. Tieu, M.S. Morris // The Journal of Trauma. Injury, Infection, and Critical Care. - 2008. - Vol. 65. - P. 884-892.

116 Patrulea, V. Chitosan as a starting material for wound healing applications / V. Patrulea, V. Ostafe, G. Borchard, O. Jordan // European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. - 2015. - Vol. 97. - P. 417-426.

117 Chen, C.L. The effect of water-soluble chitosan on macrophage activation and the attenuation of mite allergen-induced airway inflammation / C.L. Chen, Y.M. Wang, C.F. Liu, J.Y. Wang // Biomaterials. - 2008. - Vol. 29. -P. 2173-2182.

118 Sun, X. Chitosan/kaolin composite porous microspheres with high hemostatic efficacy / X. Sun, Z. Tang, M. Pan, Zh. Wang // Carbohydrate Polymers. - 2017. - Vol. 177. - P. 135-143.

119 Пат. RU 2471477 C1 Российская Федерация, МПК A61K 9/00, 31/722, 31/498, A61P 17/02, 31/04. Композиция комплекса сукцината хитозана и диоксидина с хлоргексидином, обладающая антибактериальным и ранозаживляющим эффектом / Лапенко В.Л., Павлюченко С.В., Попов В.Н., Пархисенко Ю.А. и др.; заявитель и патентообладатель ФГБОУ ВПО «ВГУ», ООО «Фармацевтические инновации». - № 2011142928/15; завл. 24.10.2011; опубл. 10.01.2013, Бюл. № 1.

120 Пат. RU 2481121 C2 Российская федерация, МПК A61K 38/14, 31/19, 31/722, 35/16, A61P 17/02. Противоожоговый гель / Ямсков И.А., Ямскова В.И., Шайхалиев А.И., Полякова А.Г. и др.; заявитель и патентообладатель ФГБУН ИНЭОС РАН, ФГБУН ИБР РАН. -№ 2011114719/15; заявл. 15.04.2011; опубл. 10.05.2013, Бюл. № 13.

121 Пат. GB W02007074326 United Kingdom, МПК A61K 31/722, A61L 15/22, A61L 26/00. Hemostatic material / Hardy C., Johnson E.L., Luksch P.; заявитель и патентообладатель Medtrade Products Limited. - № PCT/GB2006/004775; заявл. 19.12.2006; опубл. 05.07.2007.

122 Rall, J.M. Comparison of novel hemostatic dressings with QuickClot combat gauze in a standardized swine model of uncontrolled hemorrhage / J.M. Rall, J.M. Cox, A.G. Songer, R.F. Cestero // Journal of Trauma and Acute Care Surgery. - 2013. - Vol. 75. № 2. S. 2. - P. S150-S156.

123 Kunio, N.R. Chitosan based advanced hemostatic dressing is associated with decreased blood loss in a swine uncontrolled hemorrhage model / N.R. Kunio, G.M. Riha, K.M. Watson, J.A. Differding // The American Journal of Surgery. - 2013. - Vol. 205. - P. 505-510.

124 Самохвалов, И.М. Применение местного гемостатического средства «Celox» в экспериментальной модели массивного смешанного

наружного кровотечения / И.М. Самохвалов, К.П. Головко, В.А. Рева и др. // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2013. - Т. 44. № 4. -С. 187-191.

125 Пат. Яи 2519220 С1 Российская Федерация, МПК А61К 31/722, 31/155, Л61Ь 15/22, 26/00, А61Р 7/04. Местное гемостатическое средство / Шафалинов В.А., Бояринцев В.В., Фрончек Э.В., Трофименко А.В., Иващенко А.А.; заявитель и патентообладатель Шафалинов В.А. -№ 2013108191/15; заявл. 26.02.2013; опубл. 10.06.2014, Бюл. № 16.

126 Денисов, А.В. Экспериментальная оценка эффективности нового отечественного местного гемостатического средства на основе хитозана /

A.В. Денисов, А.М. Носов, С.Ю. Телицкий, К.Н. Демченко, А.Б. Юдин и др. // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2018. - № 3. Вып. 63. - С. 159-163.

127 Денисов, А.В. Оценка эффективности местных гемостатических средств на основе хитозана в эксперименте / А.В. Денисов, А.М. Носов, С.Ю. Телицкий, К.Н. Демченко // Медико-биологические и социально-психологические проблемы безопасности в чрезвычайных ситуациях. -2018. - № 3. - С. 65-72.

128 Давыденко, В.В. Эффективность гемостатического средства «Гемофлекс Комбат» на модели экспериментального наружного артериального и венозного кровотечения / В.В. Давыденко, А.Ю. Нечаев, Е.Н. Бражникова и др. // Медицина катастроф. - 2014. - № 4. Т. 88. - С. 4245.

129 Давыденко, В.В. Сравнительная эффективность аппликационных гемостатических средств местного действия при остановке экспериментального паренхиматозного и артериального кровотечения /

B.В. Давыденко, Т.Д. Власов, И.Н. Доброскок, Е.Н. Бражникова и др. // Вестник экспериментальной и клинической хирургии. - 2015. - Т. VIII. № 2. - С. 186-194.

130 Wang, Yi-W. Biological Effects of Chitosan-Based Dressing on Hemostasis Mechanism / Yi-W. Wang, Ch.-Ch. Liu, J-H. Cherng, Ch.-S. Lin et al. // Polymers (Basel). - 2019. - Vol. 11. I. 11. - P. 1906.

131 Okamoto, Y. Effects of chitin and chitosan on blood coagulation / Y. Okamoto, R. Yano, K. Miyatake, I. Tomohiro // Carbohydrate Polym. - 2003. - P. 337-342.

132 Wang, XH. Crosslinked Collagen/Chitosan Matrices for Artificial Livers / X.H. Wang, D.P. Li, W.J. Wang, Q.L. Feng // Biomaterials. - 2003. -Vol. 24. - P. 3213-3220.

133 Филиппова, О.Е. Хитозан и его гидрофобные производные: получение и агрегация в разбавленных водных растворах // О.Е. Филиппова, Е.В. Корчагина / Высокомолекулярные соединения. Серия А. - 2012. - Т. 54. № 7. - С. 1130-1152.

134 Мукатова, М.Д. Качественные характеристики хитина и хитозана, полученных из панцирь содержащих отходов речных раков / М.Д. Мукатова, Н.А. Киричко, Е.Н. Романенкова // Вестник МГТУ. - 2015. -Т. 18. № 4. - С. 641-646.

135 Szymanska, E. Stability of Chitosan - A Challenge for Pharmaceutical and Biomedical Applications / E. Szymanska, K. Winnicka // Marine Drugs. -2015. - Vol. 13. I. 4. - P. 1819-1846.

136 Struszczyk, M. H. Global Requirements for Medical Applications of Chitin and its Derivatives // Polish Chitin Society, Monograph XI. - 2006. -P. 95-102

137 СанПиН 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов»: утверждены 06.11.2001: введены в действие 01.07.2002. - М.: Изд-во ФГУП «ИнтерСЭН». - 2002. - 168 с.

138 СанПиН 2.3.2.1293-03 «Гигиенические требования по применению пищевых добавок» отменен с 01.01.2021 г.

139 СанПиН 2.3.2.1290-03 «Гигиенические требования к организации производства и оборота биологически активных добавок к пище (БАД)» отменен с 01.01.2021 г.

140 Государственная фармакопея Российской Федерации. -XIV издание. Том II - М.: ФЭМБ, 2018. - 3262 с.

141 СанПиН 42-123-4089-86 «Предельно допустимые концентрации тяжелых металлов и мышьяка в продовольственном сырье и пищевых продуктах»: утверждены 31.03.1986: М.: МЗ СССР. - 1986.

142 Технический регламент Таможенного союза ТР ТС 021/2011 «О безопасности пищевой продукции»: утвержден 09.12.2011.

143 ГОСТ 5556-81. Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия. Введен 01.07.1982. 16 с.

144 ГОСТ 9412-93. Марля медицинская. Общие технические условия. Введен 01.01.1996. 11 с.

145 ГОСТ 1207-70 Повязки медицинские стерильные. Технические условия. Введен 01.07.1972. 8 с.

146 ГОСТ Р 15.013-2016 «Медицинские изделия. Система разработки и постановки продукции на производство».

147 Геллер, Л.Н. Методическое пособие к лабораторным занятиям по разделу «Медицинское товароведение» / Л.Н. Геллер, Н.П. Беда, Л.А. Гравченко. - Иркутск: ИГМУ, 2014. - 18 с.

148 Li, T.-T. Highly Absorbent Antibacterial Hemostatic Dressing for Healing Severe Hemorrhagic Wounds / T.-T. Li, Ch.-W. Lou, An-P. Chen, M.-Ch. Lee, T.-F. Ho, Y.-Sh. Chen, J.-H. Lin // Materials. - 2016. - V. 9. - P. 793.

149 Fulton, J.A. Wound Dressing Absorption: A Comparative Study / J.A. Fulton, K.N. Blasiole, T. Cottingham, M. Tornero, M. Graves, L.G. Smith, S. Mirza, E.N. Mostow // Advances in skin and wound care. - 2012. - Vol. 25. -No. 7. - P. 315-320.

150 Bakhsheshi-Rad, H.R. In vitro and in vivo evaluation of chitosan-alginate/gentamicin wound dressing nanofibrous with high antibacterial performance / H.R. Bakhsheshi-Rad, Z. Hadisi, A.F. Ismail // Polymer Testing. -2020. - Vol. 82 (106298). - 28 p.

151 ГОСТ Р ИСО 10993-2-2009 «Изделия медицинские. Оценка биологического действия медицинских изделий. Ч. 2. Требования к обращению с животными.

152 Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая / Под. ред. А.Н. Миронова. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.

153 Мельникова, Н.Б. Биомиметические подходы к исследованию свойств лекарственных веществ / Н.Б. Мельникова, О.Н. Соловьева, Е.Н. Кочетков // Известия высших учебных заведений. Химия и химическая технология. - 2019. - Т. 62. № 10. - С. 4-29.

154 Wang, S.S. The t-PA-encapsulated PLGA nanoparticles shelled with CS or CS-GRGD alter both permeation throughand dissolving pattern sofblood clots compared with t-PA solution: An in vitro thrombolysis study / S.S. Wang, N.K. Chou, T.W. Chung. // J Biomed Mater Res A. - 2009. - Vol. 91. № 3. -P. 753-761.

155 Pourshahrestani, S., Gallium-containing mesoporous bioactive glass with potent hemostatic activity and antibacterial efficacy / S. Pourshahrestani, E. Zeimaran., N.A. Kadri // Journal of Materials Chemistry. - 2016. - № 4. -P. 71-86.

156 Terrill, P. Absorption of blood by most wound healing dressings / P. Terrill, G. Sussman, M. Bailey // Primary Intension. - 2003. - Vol. 11(1). I. 710. - P. 12-17.

157 Wu, Sh. The efficient hemostatic effect of Antarctic krill chitosan is related to its hydration property / S. Wu, Z. Huang, J. Yue // Carbohydr. Polym. -2015. - N 132. - P. 295-303.

158 Von Boroviczeny, K.G. Recommendation for Measurement of Erythrocyte Sedimentation Rate of Human Blood: International Committee For Standardization in Haematology / K.G. Von Boroviczeny, L.E. Bottiger, B.S. Bull, A. Chattas // American Journal of Clinical Pathology. - 1977. -Vol. 68. I. 4. - P. 505-507.

159 Пат. RU 2127428 Российская Федерация, МПК G01N33/48, G01N33/49. Способ выявления и сравнительной оценки гемостатической активности кровоостанавливающих матричных препаратов местного действия / Кашперский Ю.П., Тимин Е.Н., Адамян А.А., Глянцев С.П., Макаров В.А.; заявитель и патентообладатель Институт хирургии им. А.В. Вишневского РАМН. - заявл. 08.09.93; опубл. 10.03.99.

160 Andrews, G.P. Characterization of the rheological, mucoadhesive, and drug release properties of highly structured gel platforms for intravaginal drug delivery / G.P. Andrews, L. Donnelly, D.S. Jones // Biomacromolecules. - 2009. - Vol. 10(9). - P. 2427-2435.

161 Jones, D.S. Physicochemical characterization and preliminary in vivo efficacy of bioadhesive, semisolid formulations containing flurbiprofen for the treatment of gingivitis / D.S. Jones, C.R. Irwin, A.D. Woolfson // J. Pharm. Sci. -1999. - Vol. 88(6). - P. 592-598.

162 Государственная фармакопея Российской Федерации. -XIII издание. Том I. - М.: ФЭМБ, 2015.

163 И-42-2-82 Временная инструкция по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных средств на основе метода «ускоренного старения» при повышенной температуре. Утверждена 05.10.1982. Введена в действие 18.04.1983.

164 Лавриненко, В.А. Физиология крови для студентов КРИ: Учебно-методическое пособие / Лавриненко В.А., Бабина А.В. - Новосибирск: Новосибирский государственный университет, 2015. - 116 с.

165 Полозюк, О.Н. Гематология: учебное пособие / О.Н. Полозюк, Т.М. Ушакова. - Персиановский: Донской ГАУ, 2019. - 159 с.

166 СП 2.2.1.3218-14 «Санитарно-эпидемиологические требования к устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)». Утв. постановлением Главного государственного санитарного врача РФ от 29 августа 2014 г. № 51.

167 Государственная фармакопея Российской Федерации. -XIV издание. Том I - М.: ФЭМБ, 2018. - 1814 с.

168 Hu, Zh. Investigation of the Affects of Molecular Parameters on the Hemostatic Properties of Chitosan / Zh. Hu, S. Lu, Y. Cheng et al. // Molecules. -2018. - Vol. 23. - P. 3147.

169 Kadyseva, O.V. Determination of Indicators Allowing to Evaluating the Hemostatic Activity of Chitosan without a Biological Experiment / O.V. Kadyseva, V.N. Bykov, O.Y. Strelova, A.N. Grebenyuk // Journal of Bioactive and Compatible Polymers. - 2021. - Vol. 36. I. 4. - P. 276-282.

170 Pan, M. Porous chitosan microspheres containing zinc ion for enhanced thrombosis and hemostasis / Z. Tang, J. Tu et al. // Mater. Sci. Eng. C. - 2018.-N. 85. - P. 27-36.

171 Li, J. Porous chitosan microspheres for applications as quick in vitro and in vivo hemostat /J. Li, X. Wu, Y. Wu et al. // Mater. Sci. Eng. C. - 2017. -N. 77. - P. 411-419.

172 Lu, L. Alkyl Chitosan Film - Highstrength, Functional biomaterials / L. Lu, C. Xing, Sh. Xin et al. // Journal of Biomedical Materials Research: Part A. - 2017. - Vol. 105 (11). - P. 3034-3041.

173 Kheirabadi, B.S. Safety evaluation of new hemostatic dressing in a model of extremity arterial hemorrhage in swine / B.S. Kheirabadi, M.R. Scherer, J.S. Estep et al. // J. trauma injury, infection and critical care. - 2009. - Vol. 67. N 3. - P. 450-459.

174 Kheirabadi, B.S. Safety Evaluation of New Hemostatic Agents, Smectite Granules, and Caolin-Coated Gause in a Vascular Injury Wound Model in Swine / B.S. Kheirabadi, J.E. Mace, I.B. Terrazas et al. // The Journal of TRAUMA Injury, Infection, and Critical Care. - 2010. - Vol. 68. № 2. - P. 269278.

175 Самохвалов, И.М. Усовершенствование экспериментальной модели для изучения эффективности местных гемостатических средств / И.М. Самохвалов, В.А. Рева, А.В. Денисов и др. // Военно-медицинский журнал. - 2015. - № 3. - С. 19-25.

176 National Research Council (US), Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Institute of Laboratory Animal Research, Division on Earth and Life Studies. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. 8th Edition. - Washington, DC: National Academy Press, 2011.

177 Gale, A.J. Current Understanding of Hemostasis / A.J. Gale // Toxicol Pathol. - 2011. - Vol. 39. I. 1. - P. 273-280.

178 Щенников, Е.П. Оценка кровопотери / Е.П. Щенников, С.В. Корулин // Бревитер: Коротко о главном. - 2007. - № 1. - С. 42-45.

179 Богдан, В.Г. Проблема острой кровопотери в хирургии. Сообщение 2. Способы определения объема и степени тяжести кровопотери / В.Г. Богдан, Ю.М. Гайн // Военная медицина. - 2007. - № 1. - С. 46-50.

180 Versteeg, H.H. New Fundamentals in Hemostasis / H.H. Versteeg, J.W.M. Heemskerk, M. Levi, P.H. Reitsma // Physiol. Review. - 2013. - Vol. 93. - P. 327-358.

181 Lyalina, T. Correlation Analysis of Chitosan Physicochemical Parameters Determined by Different Methods / Lyalina T., Zubareva A., Lopatin S., Zubov V., Sizova S., Svirshchevskaya E. // Organic and Medicinal Chemistry IJ.- 2017. - Vol. 1. I. 3. - P. 555562.

182 Хоменко, А.Ю. Регулирование морфологии и свойств нетканых и высокодисперсных биосовместимых материалов на основе хитозана и полимеров молочной кислоты, полученных методом электроформования: дисс. ... канд. физ-мат. наук: 01.04.17 / А.Ю. Хоменко. - М., 2016. - 168 с.

183 Lavertu, М. A validated 1H NMR method for the determination of the degree of deacetylation of chitosan / М. Lavertu, Z. Xia, A.N. Serreqi, M. Berrada // J. Pharm. Biomed. Anal. - 2003. - Vol. 32. - P. 1149-1158.

184 Rinaudo, M. Characterization of chitosan. Influence of ionic strength and degree of acetylation on chain expansion / M. Rinaudo, M. Milas, P. Le Dung // Int. J. Biol. Macromol. - 1993. - Vol. 15(5). - P. 281-285.

185 Lingchen, Li. The effect of Salt and Acid Concentration on the Dilute Solution Viscometry of Chitosan / Li Lingchen, under the direction of Dr. Samuel Hudson and Dr. Wendy Krause. - Raleigh, North Carolina: Textile Chemistry, 2013. - 66 P.

186 Шиповская, А.Б. Методы выделения и физико-химические свойства природных полисахаридов: Учебно-методич. пособие. - Саратов: Саратовский госуниверситет, 2015. - 64 с.

187 Моисеев, С.В. Определение параметров молекулярно-массового распределения декстранов методом диффузионно-упорядоченной спектроскопии ЯМР / С.В. Моисеев, Н.Е. Кузьмина, В.И. Крылов, В.А. Яшкир, В.А. Меркулов // Ведомости ЦНЭСМП. Экспертиза лекарственных средств. - 2014. - № 2. - С. 9-15.

188 Кузьмина, Н.Е. Возможности применения метода диффузионно-упорядоченной спектроскопии ЯМР для количественной оценки средней молекулярной массы пуллуланов / Н.Е. Кузьмина, С.В. Моисеев, В.И. Крылов и др. // Ведомости ЦНЭСМП. Экспертиза лекарственных средств. - 2013. - № 4. - С. 8-11.

189 Wang, Zh. Modification of chitosan with monomethyl fumaric acid in an ionic liquid solution / Zh. Wang, L. Zheng, Ch. Li et al. // Carbohydrate Polymers. - 2015. - Vol. 6. I. 117. - P. 973-979.

190 Li, W. Application of 1H DOSY for Facile Measurement of Polymer Molecular Weights / W. Li, H. Chung, Ch. Daeffler et al. // Macromolecules. -2012. - V. 21. № 45. 24. - P. 9595-9603.

191 Кадысева, О.В. Изучение влияния полидисперсности хитозана на его гемостатическую активность in vitro / О.В. Кадысева, О.Ю. Стрелова // Материалы XI Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего», Санкт-Петербург, 15 марта - 23 апреля 2021 г. - СПб.: Изд-во СПХФУ, 2021. - Т. 2 - С. 163-164.

192 Федосеева, Е.Н. Вязкостные свойства растворов хитозана и его реакционная способность / Е.Н. Федосеева, Л.А. Смирнова, В.Б. Федосеев // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского, серия: Химия. - 2008. - № 4. - С. 59-64.

193 Сливкин, А.И. Изучение свойств растворов хитозана / А.И. Сливкин, А.С. Беленова, Г.В. Шаталов // Вестник ВГУ, серия: Химия. Биология. Фармация. - 2014. - № 1. - С. 134-137.

194 Apryatina, K.V. Influence of macromolecules conformation of chitosan on its graft polymerization with vinyl monomers and the copolymer properties / K.V. Apryatina, E.K. Tkachuk, L.A. Smirnova // Carbohydrate Polymers. - 2020. - Vol. 235. 115954.

195 Kadyseva, O. Determination of physical and chemical parameters that can be used to predict the hemostatic activity of chitosan without conducting in vivo experiments / O. Kadyseva, V. Bykov, O. Strelova, A. Grebenyuk // Book of Abstracts Ninth International conference on radiation in various fields of research. - Herceg Novi, Montenegro, June 14-18, 2021. - P. 10.

196 Кадысева, О.В. Изучение физико-химических показателей хитозана, позволяющих усовершенствовать контроль качества сырья и дать прогноз эффективности местных гемостатических средств на его основе / Кадысева О.В., Таранченко В.Ф., Быков В.Н. // Материалы X Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего», Санкт-Петербург, 20-21 апреля 2020 г. - СПб.: Изд-во СПХФУ, 2020. - С. 181-184.

197 Быков, В.Н. Изучение конформационного состояния и способности к смачиванию как важных показателей для оценки качества сырья хитозана и образцов местных гемостатических средств на его основе / В.Н. Быков, О.В. Кадысева, А.Н. Гребенюк, О.Ю. Стрелова, Д.Д. Ловская, А.Е. Лебедев, М.С. Мочалова // Биофармацевтический журнал. - 2020. -Т. 12. № 4. - С. 38-44.

198 Воробьёв, А.И. КРОВЬ / А.И. Воробьёв, А.Н. Смирнов // Большая российская энциклопедия. Том 16. - Москва, 2010. - стр. 86.

199 Пат. RU2694372С1 Российская Федерация, МПК А61К 31/722. Гемостатическое средство на основе сукцината хитозана и экстракта календулы / Арешидзе Д.А., Макарцева Л.А., Певцова Е.А. и др.; заявитель и патентообладатель ГОУВО МО МГОУ. - № 2019112420; заявл. 24.04.2019; опубл. 12.07.2019.

200 Балыкин, В.П. Адсорбция метиленового синего и метанилового желтого на углеродной поверхности / В.П. Балыкин, О.А. Ефремова, А.В. Булатов // Вестник Челябинского государственного университета. -2004. - № 1. - С. 46-54.

201 Пьянова, Л.Г. Адсорбция красителей метиленового синего и метанилового желтого модифицированными углеродными сорбентами / Л.Г. Пьянова, В.А. Лихолобов, Л.К. Герунова, М.С. Дроздецкая, А.В. Седанова, Н.В. Корниенко // Журнал прикладной химии. - 2017. -Т. 90. Вып. 12. - С. 1678-1682.

202 Леваньков, С.В. Удельная поверхность хитозана и способ её определения / С.В. Леваньков, Е.В. Якуш // Известия Тихоокеанского научно-исследовательского рыбохозяйственного центра. - 2001. - № 129. -P. 109-115.

203 Луцевич, О.Э. Особенности применения гемостатических материалов местного действия в хирургии / О.Э. Луцевич, А.А. Гринь,

A.А. Бичев, В.В. Шепелев // Московский хирургический журнал. - 2016. -№ 3. - С. 12-20.

204 Kadyseva, O.V. Study of the effect of the physicochemical properties of chitosan on its hemostatic activity / O.V. Kadyseva, V.N. Bykov, O.Y. Strelova, A.N. Grebenyuk // Progress on Chemistry and Application of Chitin and its Derivatives. - 2021. - V. XXVI. - P. 112-120.

205 Пат. RU 2743425 C1 Российская Федерация, МПК A61K 9/70, 31/722, A61L 15/22. Гемостатическое средство на основе хитозанового аэрогеля / Н.В. Меньшутина, Д.Д. Ловская, А.Е. Лебедев, В.Н. Быков,

B.Б. Назаров; заявитель и патентообладатель ООО «ГЕМОТЕКС». -№ 2020112625; заявл. 27.03.2020; опубл. 18.02.2021.

ПРИЛОЖЕНИЕ А

Таблица А. 1 - Значения параметров молекулярно массового распределения исследуемых образцов хитозана_

Вклад фракции в

^ коэффициента Молекулярная среднее значение

Маркировка образца самодиффузии, масса фракции, молекулярной

№ определенный по пикам в ЯМР определенная по калибровочному массы, определенный

спектре графику, кДа интегрированием пика в ЯМР спектре

1 «Nat. Ingr» -10,70 -10,90 180,00 420,00 0,20 0,80

2 «Henan T.» -10,60 -10,70 123,00 180,00 0,34 0,66

-10,60 123,00 0,05

3 «Mezon» -10,80 276,00 0,29

-11,40 -920,00 0,66

-10,00 9,80 0,11

4 «Naturing» -10,10 -10,30 9,89 30,00 0,08 0,34

-10,60 123,00 0,47

-10,30 30,00 0,27

5 «HMC 70/50» -10,40 43,50 0,30

-10,50 66,70 0,43

-10,00 9,00 0,06

6 «HMC 70/200» -10,30 -10,60 30,00 123,00 0,11 0,23

-10,90 -420,00* 0,60

-10,10 9,89 0,04

7 «HMC 75/50» -10,40 -10,60 43,50 123,00 0,11 0,27

-10,80 276,00 0,58

8 «HMC 85/50» -10,00 -10,60 9,80 123,00 0,09 0,91

-10,30 30,00 0,08

9 «HMC 85/200» -10,60 123,00 0,23

-10,80 276,00 0,69

-10,30 30,00 0,10

10 «HMC 85/500» -10,40 -10,80 43,50 276,50 0,22 0,59

-11,00 -660,00* 0,09

Продолжение таблицы А. 1

Вклад фракции в

lg коэффициента Молекулярная среднее значение

Маркировка образца самодиффузии, масса фракции, молекулярной

№ определенный по пикам в ЯМР определенная по калибровочному массы, определенный

спектре графику, кДа интегрированием пика в ЯМР спектре

11 «НМС 95/50» -09,80 -10,60 4,00 123,00 0,08 0,92

-10,40 43,50 0,35

12 «НМС 95/200» -10,50 -10,80 66,70 276,50 0,27 0,10

-10,90 -420,00* 0,28

-10,20 43,50 0,10

13 «НМС 95/500» -10,50 66,70 0,19

-10,90 -420,00 0,71

-10,50 66,70 0,13

-10,70 180,00 0,12

14 «СНА-1» -10,80 276,50 0,16

-10,90 -420,00 0,34

-11,00 -660,00 0,25

-10,40 43,50 0,15

15 «СНА-2» -10,50 -10,60 66,70 123,00 0,30 0,27

-10,80 276,50 0,28

-10,30 30,00 0,20

-10,50 66,70 0,20

16 «СНА-3» -10,60 -10,70 123,00 180,00 0,24 0,11

-10,80 276,50 0,12

-10,90 -420,00 0,13

-09,70 3,50 0,04

-10,00 9,80 0,07

17 «СНА-7» -10,20 21,40 0,13

-10,40 43,50 0,22

-10,70 180,00 0,54

Значение молекулярной массы, определенное по экспоненциальной линии тренда к калибровочной кривой

Таблица А.2 - Усредненные значения светопропускания растворов образцов (в %) по мере добавления к ним 2,5 % водного раствора натрия гидроксида

\рН Образец 3,96 5,00 5,51 5,80 6,00 6,19 6,26 6,41 6,46 6,57 6,68 6,78 6,88 6,95 6,99 7,09 7,12 7,17 7,24 7,36 7,56 7,74 7,80 8,01 8,35 8,62 9,00 9,20 9,38 9,61

<^а11п§г» 100,0 - - - 97,0 - - - - - - - 94,1 - - - 70,9 - 53,5 41,2 34,7 - 32,7 - - 31,1 - - - 30,5

«Непап Т» 100,0 - - - - - - - - - - - - - 94,0 - - 86,1 61,0 37,2 - - - 36,5 - - - - - 36,1

«Mezon» 100,0 - 97,4 - - - - - 94,9 - - - - 94,0 - - - 91,2 81,3 69,8 - 59,7 - 54,3 - 49,0 - - - 48,8

«Naturing» 100,0 - 99,2 - - - - 95,0 - - - - 94,2 90,5 87,0 - 72,3 - 67,7 34,9 - 33,1 - - 32,5 - 31,8 - - 31,6

«70/50» 100,0 99,0 - - - - - 97,6 - - 96,0 - - - - 68,5 - 61,1 - 54,2 50,3 45,0 - 40,5 - - - 37,4 - 35,9

«70/200» 100,0 - - - 98,2 - 94,8 - 93,0 - - 92,1 - - 89,7 - 82,3 - - 61,1 - 51,5 - - 38,5 - - - - 32,9

«75/50» 100,0 - - - - 99,9 - 98,4 - - 96,9 - - 92,8 - - 80,3 - 38,8 - 37,9 - 37,0 - - - 35,4 - - 30,4

«85/50» 100,0 - 99,5 - - - - - - 93,7 - 87,2 - - 64,0 - 39,4 - - 37,5 - - 36,9 - 34,6 - - - - 28,0

«85/200» 100,0 - - - - - 97,5 - 95,1 - - 91,6 - - 83,0 - 61,9 - 52,9 - 42,9 36,6 - 36,1 - - - - 36,6 -

«85/500» 100,0 - - - - - - 96,9 - - 94,7 - - 90,6 - 79,0 - - - 48,8 - - 40,7 - - 30,2 - - - 26,8

«95/50» 100,0 - - 96,7 - - 91,7 - - 86,8 - 71,6 52,5 - 40,9 - - - 34,0 - 30,0 - 27,0 - - - - - - 26,3

Продолжение таблицы А.2

Образец 3,96 5,00 5,51 5,80 6,00 6,19 6,26 6,41 6,46 6,57 6,68 6,78 6,88 6,95 6,99 7,09 7,12 7,17 7,24 7,36 7,56 7,74 7,80 8,01 8,35 8,62 9,00 9,20 9,38 9,61

«95/200» 100,0 - - - 97,6 - 96,0 93,6 - - 89,9 - 81,1 - - - 40,6 - - 40,1 - - 38,5 - - 37,4 - - 32,0 -

«95/500» 100,0 - - - - - - - - 92,2 - 88,6 - 81,3 - - 58,0 - 42,0 - 39,2 - 36,3 - - 28,2 - - - 26,0

«СНА-1» 100,0 - - - 99,8 - - 99,5 - - 95,5 - - - - 93,8 - 87,7 51,6 - 44,1 - 36,2 - - - 27,8 - - 26,9

«СНА-2» 100,0 - - - - 99,1 - 97,2 96,3 - 94,9 94,0 90,0 - - 61,0 57,3 - - 39,7 - - 36,4 - 33,8 - - - - -

«СНА-3» 100,0 - - - - - 99,2 - - 98,4 - - 95,4 - 93,7 81,0 - 61,2 49,5 - - 45,9 44,7 - - - - 39,0 - 33,9

«СНА-7» 100,0 - - - - 99,6 - - - 97,5 - - - 95,2 - - 67,7 - 62,2 - 60,0 - 58,0 - 55,0 54,2 - - - 44,9

«Celox» 100,0 - 99,3 - 99,0 - - 98,6 - - 98,0 - - - - - - 95,6 84,2 - 47,0 - 46,8 - - 41,8 - - - 39,6

«Образец №1» 100,0 99,1 - - - 97,4 - - 95,0 - - - - - 85,1 75,4 66,8 - 48,5 41,8 - 42,9 - 44,2 46,5 - 46,0 - 45,7 -

«Гемоспас Био» 100,0 98,3 - 97,7 - - - 98,3 - - 96,8 - - - - - 94,0 - 87,6 63,8 - 63,0 - - 62,2 - 60,1 - - 59,9

«Образец №2» 100,0 - - - - - - - - 94,7 - 92,4 - 88,3 - - - 88,0 87,3 - 85,0 - - 82,5 - 78,1 - - - 76,7

«Гепоглос» 100,0 - 99,6 - 99,2 - 99,1 - 98,9 - 98,7 - - 98,4 - - - - 95,1 - 94,0 - - - 92,0 - - - - 91,9

Таблица А.3 - Заявленные в сертификатах соответствия и определенные в результате исследований физико-химические показатели хитозана

№ Образец Маркировка Степень ДА, % Молекулярная масса Влажность, % Общая зола, % Тяжелые металлы, мг/кг

Заявлено Найдено Заявленная вязкость или масса Найденная средне-вязкостная ММ, кДа Заявлено Найдено Заявлено Найдено Суммарно заявлено тяжелых металлов Pb Cd Щ (менее) As

Заявлено Найдено Заявлено Найдено Заявлено Найдено Заявлено Найдено

1 Хитозан «Natural Ingredients» «Nat. Ingr» 90,0 91,2 50-100 mPas1 373,0 <10,00 7,45 - 0,23 <20,00 - 0,110 - 0,004 - 0,075 - 0,005

2 Хитозан «Henan Tianfu» «Henan T» 86,3 92,3 <200 mPas2 160,0 <10,00 10,30 <2,00 0,93 <10,00 - 0,650 - 0,089 - 0,075 <0,500 0,740

3 Хитозан «Mezon» «Mezon» 88,0 76,9 408 mPas1 658,0 <12,00 8,85 1,30 1,15 - - 0,210 - 0,017 - 0,075 - 0,070

4 Хитозан «Naturing» «Naturing» 90,3 89,1 60 mPas1 120,0 <10,00 8,71 - 0,39 <20,00 - 0,189 - 0,026 - 0,075 - 0,054

5 Хитозан «Heppe Medical Chitosan GmbH» «HMC 70/50» 70,8 76,1 43 mPas2 108,1 2,60 7,76 0,30 0,31 - - 0,150 <0,500 0,008 0,200 0,075 - 0,098

6 «HMC 70/200» 72,3 77,9 219 mPas2 218,4 5,40 7,09 0,20 0,20 - - 0,138 <0,500 0,010 0,200 0,075 - 0,076

7 «HMC 75/50» 76,9 82,8 45 mPas2 125,0 3,20 8,19 0,40 0,43 - - 0,121 <0,500 0,010 0,200 0,075 - 0,105

8 «HMC 85/50» 85,5 89,8 50 mPas2 132,8 3,70 7,25 0,20 0,22 - - 0,129 <0,500 0,009 0,200 0,075 - 0,084

1 Условия определения вязкости производителем не указаны

2 Для 1 % раствора хитозана в 1 % растворе кислоты уксусной при 20° С

Продолжение таблицы А. 3

№ Образец Маркировка Степень ДА, % Молекуляр ная масса Влажность, % Общая зола, % Тяжелые металлы, мг/кг

Заявлено Найдено Заявленная вязкость или масса Найденная средне-вязкостная ММ, кДа Заявлено Найдено Заявлено Найдено Суммарно заявлено тяжелых металлов РЬ Сй Щ (менее) Л8

Заявлено Найдено Заявлено Найдено Заявлено Найдено Заявлено Найдено

9 Хитозан «Нерре Medical Chitosan GmbH» «НМС 85/200» 86,5 90,0 229 шРа,2 257,4 2,60 3,41 0,10 0,10 - - 0,134 <0,500 0,008 0,200 0,075 - 0,081

10 «НМС 85/500» 86,6 90,4 404 шРа,2 284,7 3,30 9,81 0,20 0,21 - - 0,146 <0,500 0,014 0,200 0,075 - 0,092

11 «НМС 95/50» 97,5 97,4 51 шРа,2 145,7 5,10 6,11 0,30 0,38 - - 0,160 <0,500 0,017 0,200 0,075 - 0,100

12 «НМС 95/200» 92,8 95,9 286 шРа,2 267,1 4,20 5,61 0,30 0,26 - - 0,169 <0,500 0,007 0,200 0,075 - 0,073

13 «НМС 95/500» 92,9 95,1 649 шРа,2 363,7 3,10 5,96 0,20 0,21 - - 0,118 <0,500 0,009 0,200 0,075 - 0,083

14 Хитозан ООО «Акрипол» «СНА-1» 87,1 82,8 400 кДа 419,1 10,80 12,36 0,00 0,54 <20,00 - 0,396 - 0,013 - 0,075 - 0,061

15 «СНА-2» 79,683,5 80,0 559-700 кДа 280,3 9,50 12,12 0,04 0,54 <20,00 - 0,447 - 0,025 - 0,075 - 0,011

16 «СНА-3» 91,487,5 90,1 343-420 кДа 202,8 9,40 11,40 0,02 0,82 <20,00 - 0,350 - 0,034 - 0,075 - 0,070

17 «СНА-7» 75,0 74,9 125,0 кДа 125,0 9,10 11,95 0,03 0,93 <20,00 - 0,440 - 0,017 - 0,075 - 0,005

1 Условия определения вязкости производителем не указаны

2 Для 1 % раствора хитозана в 1 % растворе кислоты уксусной при 20° С

ПРИЛОЖЕНИЕ Б

Сертификаты соответствия некоторых исследуемых образцов хитозана: «Henan T.», «Nat. Ingr», HMC «70/200», HMC «70/50», HMC «80/200»,

«Naturing»

HENAN TIANFU CHEMICAL CO., LTD

CERTIFICATE OF ANALYSIS

GHITOSAN

Batch No. Quantity Packaging Test Date Manufacture Date Exp. Date

TF20180308 1000kg 1 Ûkjj/Drgm 2018.03.28 2018.03.27 2020.03,26

ITE •Wl SPECIFICATION TEST METHOD RESULTS

Properties (physical): appearance Mite » Lfent Yellow. Free Flowing Q/ZAX 02-2012 Complies

C3diJUf ОСО.-Г1-ЧЗ Q/ZAX 02-2012 ~ornp!ies

Bülk Density • -S.20g.-r-: Series Predni Q/ZAX 02-2012 0.26g/rrl

Psiiide «¡¡»(Lt.S.Mesh i 20Me$n Q/ZAX 02-2012 Complies

ftppaa/ance pi the Solution Ctser-Coloyrlass to Light Yeilew Q/ZAX 02-2012 Complies

A.naîyffisal Properties:

Deaoeiyiaied Degree :sas.o% Q/ZAX 02-2012 86.34%

Identification

Salubrity >-99.0% tin 1K Acetic Add :) Q/ZAX 02-2012 39,6%

Content S10 0% Q/ZAX 02-2012 9.16%

Asis Content --10* Э/ZAX 02-2012 1.54%

Protein Content Non-Detectaple Q/ZAX 02-2012 Compiles

ysscasity <20ûmPa s {cpïMDetetmined by 1% Chitosan Dissolved in 1 % Acetic ftctd SWyiipn st Ï0 t) Q/ZAX 02-2012 25тРэ э

Heavy МеШз. ^iOppm Q/ZAX 02r2012 Oomplies

Arsenic ' С Sppsn Q/ZAX 02-2012 Complies

Microbial:

Total Aerobic MMT 1,000 ofufg Q/ZAX 02-2012 <1,000 cfu/g

ECot! Negative Q/ZAX 02-2012 Negative

Salmonella hieaetive Q/2AX 02-2012 Negative

Gonelustan: Meets Q/ZAX 02-2012 sunciards

Padtaqinq and Storaqe, Store in tiqht iifllit-resistant containers

Reason for Change: Updating Specification Format to Q/ZAX 02-2012

Effective Date1 Dec 25,2012 Code & Version: DG CHI 0.2Gg/ml 12

Part No DG 02 ■JfJi""............

Prepa/ed by Liu Tao Si'L,.....

Approved by QC Dept. Manager: MaXiuyun ....., ■

/

Shenyang abiding Science Avenue.HigH-tecii 4S0&00 ZHengzhot: Ch^t- . Tel: 66-37- 5S170693 FAX 8в-371-55170Ш

Рисунок Б.2 - сертификат соответствия хитозана Natural Ingredients («Shanghai Medicines & Health Products Import & Export Corporation», Китай)

C^iu-îau ¡¿/¿С

HEPPE MEDICAL CHITOSAN GmbH CEO: Dipt Biolachno!. Koljo Rlchtff

Certificate of Analysis Herniich-Damarow-St/oSe 1 □-06120 Halle (Soolc) Tel: »49 CO) 315 27 996 300 Fa*: [phone]S 37S Iiilo®ni9dicol-chrfosart.com wvw.medirai-chilosan.com HypoVerainsbank Halle (Saole)

Product line: Product: CAS: Product No.; Batch No.: Storage conditions: Production date: Expiry date: Chitoscience Chitosan 85/200 9012-76-4 23505 212-200918-01 < 25 °C, dry and well closed 20.09.2018 20.09.2021 Account: 356 864 832 BI7 000 700 86 SWIFT: BYVE DE MM 440 IBAN: DEM 8002 0086 0356 664B 32 Volksbank Halle (Soole) eG Account: 0001 160 966 BL7: BOO 937 84 SWIFT: GENO DE F1 HAL ¡BAN DEB3 8009 3764 0001 1609 66 VAT.I0: DE 249 720 508 Amtsgerlchr Sienddl HRB 5561

Parameter Method Limit Result

Appearance of solid product Appearance of solution Degree of deacetylation HMC QK-PA-0001 HMC QK-PA-0002 HMC QK-PA-00 03 white to light yellow complies clear, colorless to complies slightly yellowish 82.6 - 87.5 % 86.5 %

Viscosity (l % in 1 % acetic itid. 20 -Q HMC СЖ-РА-0004 151 - 350 mPas 229 mPas

Ashes (sulphMed} HMC QK-PA-0005 < 1 % 0.1 %

Dry matter content HMC QK-PA-0006 г 85 % 97,4 %

Heavy metals Hg Cd HMC QK-PA-0020 HMC QK-PA-0020 £ 0.2 ppm s 0.5 ppm complies complies

Halle (SaaleXJi. 10.2018

Richter ¿S Head of QA/QC Page: 1/1 Rev: 02

Санитарно-гигиенические показатели качества сырья

должны соответствовать требованиям ТР ТС 021/2011 (Технический регламент Таможенного союза о безопасности пищевой продукции), а также нормативам к растительным экстрактам и сырью по СанПин 2.3.2.1078-01

Наименование показателя* Спецификации НД, нормативы

Тяжелые металлы (в мг/кг. не более):

Свинец 5,0 ТР ТС 021/2011

Кадмий 1,0

Ртуть 1,0

Мышьяк 3,0

Хлорорганические соединения:

1 ХЦГ (и его изомеры) 0,1 ТР ТС 021/2011