Изучение воздействия N-ацетил карнозина и D-пантетина на ультрафиолет-индуцированную катаракту в эксперименте тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.08, кандидат медицинских наук Сосновская, Ольга Евгеньевна

  • Сосновская, Ольга Евгеньевна
  • кандидат медицинских науккандидат медицинских наук
  • 2008, Москва
  • Специальность ВАК РФ14.00.08
  • Количество страниц 122
Сосновская, Ольга Евгеньевна. Изучение воздействия N-ацетил карнозина и D-пантетина на ультрафиолет-индуцированную катаракту в эксперименте: дис. кандидат медицинских наук: 14.00.08 - Глазные болезни. Москва. 2008. 122 с.

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Сосновская, Ольга Евгеньевна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Эпидемиология возрастной катаракты.

1.2 Структура, ультраструктура и химический состав нормально функционирующего хрусталика.

1.3 Современные представления об этиологии и патогенезе возрастной катаракты.

1.3.1 Патоморфологическая картина помутнения хрусталика.

1.3.2 Химический состав мутнеющего хрусталика.

1.3.3 Факторы риска возрастной катаракты.

1.3 А Свободнорадикальная концепция катарактогенеза.

1.3.5 Агрегация водорастворимых белков хрусталика.

1А Современное состояние проблемы медикаментозного лечения возрастной катаракты.

1.5 Биохимические предпосылки применения комбинации препаратов (N-ацетил карнозина и D-пантетина) для предупреждения развития УФ-индуцированной катаракты.

1.6 Экспериментальные модели катаракт.

Глава 2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Общая структура исследований.

2.2 Моделирование экспериментальной катаракты.

2.3 Методы клинических исследований в эксперименте.

2.3.1 Субъективная клиническая оценка.

2.3.2 Объективная клиническая оценка.

2.4 Методы гистологического исследования.

2.5 Методы биохимических исследований в эксперименте.

2.5.1 Выделение основных белков хрусталика.

2.5.2 Гель-проникающая хроматография белков хрусталика.

2.5.2.1 Гель-проникающая хроматография водорастворимых белков хрусталика.

2.5.2.2 Гель-проникающая хроматография водонерастворимых белков хрусталика.

2.5.3 Электрофорез в полиакриламидном геле (ПААГ).

2.5.3.1 Электрофорез в ПААГ водонерастворимых белков хрусталика.

2.5.3.2 Электрофорез в ПААГ водорастворимых белков хрусталика.

2.6 Методика статистического анализа.

Глава 3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Клиническое течение УФ-индуцированной катаракты.

3.2 Результаты применения комбинации препаратов на модели УФ-индуцированной катаракты по данным метода экспертных оценок.

3.3 Результаты применения комбинации препаратов на модели УФ-индуцированной катаракты по данным микроденситометрического анализа.

3.4 Результаты применения комбинации препаратов на модели УФ-индуцированной катаракты по данным гистологического исследования.

3.5 Влияние комбинации препаратов на состояние основных белков хрусталика крысы на модели УФ-индуцированной катаракты.

3.5.1 Результаты разделения водорастворимых белков хрусталиков глаз животных из разных экспериментальных групп при помощи гель-проникающей хроматографии.

-43.5.2 Результаты электрофореза водорастворимых белков в ПААГ.

3.5.3 Определение количества водонерастворимых белков целого хрусталика.

3.5.4 Результаты разделения водонерастворимых белков при помощи гель-проникающей хроматографии.

3.5.5 Результаты электрофореза водонерастворимых белков в ПААГ.

3.6 Результаты воздействия комбинации препаратов на передний и задний отрезок глаза в условиях ультрафиолетового облучения по данным гистологического исследования.

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Глазные болезни», 14.00.08 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение воздействия N-ацетил карнозина и D-пантетина на ультрафиолет-индуцированную катаракту в эксперименте»

В структуре слепоты и слабовидения возрастная катаракта занимает одно из ведущих мест в мире [26, 27, 63, 140]. В то же время, возрастная катаракта приобретает все большее социальное значение благодаря отмечаемым в последние годы сдвигам дермографических показателей в сторону постарения населения.

В настоящее время нет эффективного медикаментозного лечения возрастной катаракты, поэтому основными способами лечения являются хирургические вмешательства [63]. В России ежегодно выполняется 180 тыс. операций по поводу катаракты, но это охватывает лишь десятую часть от общего количества больных [35]. В то же время, хирургическое лечение не является патогенетически обоснованным, в отличие от медикаментозного. Несомненно, что знание этапов патогенеза развития возрастной катаракты явилось бы основой для эффективной медикаментозной терапии. Однако патофизиологические процессы начала этого заболевания еще далеко не полностью установлены. Поэтому в исследовании этиологии катаракты уже многие годы заняты не только представители медицинской науки, но и исследователи в области молекулярной биологии, биохимии и биофизики [24]. Существенным достижением является сформулированная в последние годы свободнорадикальная теории катарактогенеза. Подтверждением ее справедливости является факт того, что в офтальмологической практике применяют препараты, обладающие антиоксидантными (АО) свойствами [6, 29, 50, 116, 153, 187, 215]. В то же время, катаракта - это многофакторное и многостадийное заболевание, поэтому существует возможность воздействия и на другие этапы процесса катарактогенеза. Например, на стадию образования водонерастворимых белковых агрегатов, образование которых признано одной из ключевых стадий процесса развития катракты [47, 72, 120, 129, 158].

Действительно оказалось, что усиление шаперон-подобных свойств а-кристаллина, то есть его способности предупреждать агрегацию поврежденных белков, лежит в основе механизма антикатарактального действия тетрапептида D-пантетина. Как известно, это соединение эффективно тормозит развитие экспериментальных катаракт (радиационной, селенитовой, галактозной, стрептозотоциновой и др.) [101, 119].

Последние исследования показали, что N-ацетил карнозин, обладающий антикатарактальным действием [82], способен тормозить ультрафиолет-индуцированную агрегацию (Зь-кристаллина in vitro как молекулярный шаперон [40]. Более того, смесь этих пептидов (N-ацетил карнозина и D-пантетина) in vitro более эффективно тормозит процесс агрегации кристаллинов под воздействием ультрафиолетового излучения (УФ), чем каждый из них в отдельности [59, 186].

Полученные результаты дали основания для разработки новой комбинации антикатарактальных препаратов, действующей по шаперон-подобному механизму.

Условия формирования помутнений хрусталиков in vitro полностью не могут повторить условия развития катаракты в живом организме, поэтому, чтобы дать окончательный ответ об эффективности предложенной комбинации препаратов (N-ацетил карнозина и D-пантетина), необходимо изучение ее антикатарактальных свойств in vivo.

Для постановки такого эксперимента необходима легко воспроизводимая и адекватная модель возрастной катаракты. По данным литературы, катаракта, индуцированная низкими дозами ультрафиолетового облучения (УФО) приближена к возрастной. Действительно, под влиянием УФ и видимого света в хрусталике происходят процессы фотоокисления и агрегации водорастворимых белков, что является одним из основных этапов патогенеза возрастной катаракты [80, 120, 129, 130, 149].

Таким образом, актуальность изучения воздействия комбинации препаратов (N-ацетил карнозина и D-пантетина) на УФ-индуцированную катаракту в эксперименте несомненна.

Целью работы является изучение воздействия комбинации препаратов (N-ацетил карнозина и D-пантетина) на УФ-индуцированную катаракту в эксперименте на крысах.

Задачи исследования

1. Разработать легко воспроизводимую пролонгированную экспериментальную модель УФ-индуцированной катаракты;

2. Разработать шкалу субъективной оценки степени прозрачности хрусталика крысы вида Wistar для этой модели;

3. Изучить особенности клинической картины УФ-индуцированной катаракты на разных этапах ее формирования;

4. Изучить влияние УФ на передний и задний отрезок глаза;

5. Исследовать эффективность применения различных доз комбинации препаратов (N-ацетил карнозина и D-пантетина) на развитие УФ-индуцированной катаракты на основе клинико-морфологических и биохимических методов исследования;

6. Определить эффективность применения различных способов введения комбинации препаратов (N-ацетил карнозина и D-пантетина).

Научная новизна работы

1. Разработана пролонгированная модель УФ-индуцированной катаракты, что открывает перспективы для контролирования ближайших и отдаленных результатов медикаментозного воздействия на развитие возрастной катаракты у крыс (положительное решение о выдаче патента на изобретение по заявке № 2007118210 от 16.05.2007 «Способ моделирования катаракты»);

2. Изучены этапы формирования УФ-индуцированной катаракты в различных слоях хрусталика в эксперименте на крысах;

-93. Впервые в условиях in vivo произведено исследование действия комбинации препаратов нового класса (N-ацетил карнозина и D-пантетина) - шаперон-подобных соединений на модели УФ-индуцированной катаракты и доказана антикатарактальная эффективность комбинации препаратов, как препаратов нового поколения (заявка на выдачу патента на изобретение «Фармацевтическая композиция для профилактики развития и лечения начальной стадии возрастной катаракты (варианты)» № 2007144339 от 3.12.2007); 4. Впервые, на основе клинико-морфологических и биохимических методов исследования определен наиболее эффективный способ введения комбинации препаратов, содержащей N-ацетил карнозин и D-пантетин.

Полученные данные в эксперименте на крысах, касающиеся антикатарактальной эффективности комбинации N-ацетил карнозина и D-пантетина при УФ-индуцированной катаракте, дают теоретическое обоснование для клинического изучения антикатарактальных свойств комбинации этих препаратов при возрастной катаракте.

Практическая значимость работы

1. Доказана возможность клинического изучения комбинации препаратов (N-ацетил карнозина и D-пантетина);

2. Представленные в работе данные об антикатарактальном действии комбинации препаратов обосновывают перспективность поиска эффективных комбинаций аналогов этих соединений, обладающих более выраженной шаперон-подобной антикатарактальной активностью.

Основные положения, выносимые на защиту 1. Клинико-морфологическая картина, установленная на модели УФ-индуцированной катаракты, достоверно отражает степень патологических нарушений, происходящих в хрусталике, и может использоваться для контроля эффективности медикаментозной терапии возрастной катаракты;

-102. Длительное введение смеси ди- и тетрапептидов в экспериментально-терапевтических дозах (по 25, 150 мг/кг внутрибрюшинно и 5 % раствора инстилляционно каждого из пептидов) оказывает тормозящее действие на развитие УФ-индуцированной катаракты;

3. Наиболее выраженный антикатарактальный эффект комбинации препаратов по результатам клинико-морфологических и биохимических методов исследования выявлен при инсталляционном пути введения;

4. Комбинация пептидных препаратов в виде инсталляций и внутрибрюшинных инъекций оказывает выраженное протекторное действие на роговицу.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены и обсуждены: на Конференции молодых ученых (Клинические и экспериментальные исследования в офтальмологии) — М., 2005, где доклад получил призовое место; на II Всероссийской научной конференции молодых ученых (Актуальные проблемы офтальмологии) — М., 2007, где доклад был отмечен первой премией; на Юбилейной научно-практической' конференции (Федоровские чтения) - М., 2007; на Научно-практической конференции (Современные методы диагностики и лечения заболеваний роговицы и склеры) - М., 2007.

Апробация диссертации состоялась на заседании проблемной комиссии «Терапевтическая офтальмология и офтальмофармакология» ГУ НИИ глазных болезней РАМН (Протокол № 3/1 от 21 марта 2008 г.).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 12 печатных работ, из них 5 в центральной печати. Подано 2 заявки на выдачу патентов на изобретения: положительное решение о выдаче патента по заявке № 2007118210 от 16.05.2007 «Способ моделирования катаракты»; приоритетная справка № 2007144339 от 3.12.2007 «Фармацевтическая композиция для профилактики развития и лечения начальной стадии возрастной катаракты (варианты).

-11

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 122 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, 2-х глав собственных исследований, заключения, выводов, указателя использованной литературы.

Похожие диссертационные работы по специальности «Глазные болезни», 14.00.08 шифр ВАК

Заключение диссертации по теме «Глазные болезни», Сосновская, Ольга Евгеньевна

выводы

1. Впервые разработана пролонгированная модель УФ-индуцированной катаракты у крыс, особенности клинико-морфологической картины которой сопоставимы с возрастными изменениями хрусталиков у этого вида экспериментальных животных.

2. Разработана шкала бальной оценки помутнений хрусталика с помощью метода экспертных оценок, которая с высоким коэффициентом корреляции (коэффициент ранговой корреляции Спирмана R=0,74) связана с объективными методами оценки прозрачности хрусталика.

3. Показано, что применение комбинации пептидных препаратов (N-ацетил-карнозина и D-пантетина) в соотношении 1:1 в виде инстилляций в глаза и внутрибрюшинных инъекций позволяет существенно и с высокой степенью достоверности (Р < 0,0001, U-тест Манна и Уитни) замедлить процессы формирования УФ-индуцированной катаракты in vivo.

4. Установлено, что комбинация препаратов (N-ацетил-карнозина и D-пантетина), примененная в инсталляциях оказывает более эффективное антикатарактальное действие, чем внутрибрюшинные инъекции (степень достоверности Р < 0,003, U-тест Манна и Уитни).

5. Применение комбинации препаратов на модели УФ-индуцированной катаракты приводит к уменьшению количества водонерастворимых белковых агрегатов в хрусталике.

6. Гистологические исследования показали, что длительное ультрафиолетовое облучение (длина волны УФ 280-400 нм, мощность облучения 4,7±0,23 Вт/м~) вызывает дегенеративные изменения всех слоев роговицы, но не оказывает отрицательного воздействия на другие структуры переднего и заднего отрезка глаза крыс вида Wistar, кроме хрусталика.

-997. Установлено, что комбинация пептидных препаратов в виде инстилляций в глаз и внутрибрюшинных инъекций оказывает выраженное протекторное действие, препятствуя отрицательному воздействию ультрафиолетового облучения на все слои роговицы. 8. Показано, что комбинация препаратов (D-пантетина и N-ацетил-карнозина) обладает выраженной антикатарактальной активностью в эксперименте и может быть рекомендована для клинической апробации.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Катаракта является наиболее частой причиной слепоты у лиц старшего возраста. Изучение особенностей патогенеза развития возрастной катаракты является основой для разработки эффективных методов лечения этого заболевания. В настоящее время патофизиологические механизмы возникновения возрастной катаракты изучены недостаточно, однако роль усиления процессов свободнорадикального окисления неоспорима. Косвенным указанием на важную роль СРО является тот факт, что в офтальмологической практике в основном используются препараты, обладающие антиоксидантными свойствами.

Результаты многочисленных исследований, проведенных в последнее десятилетие, свидетельствуют о возможности оказания терапевтического воздействия на другие этапы катарактогенеза, в частности, замедлить процесс агрегации водорастворимых белков хрусталика. Как известно, неспецифическая агрегация белков цитоплазмы клеток хрусталика — ключевая стадия процесса помутнения хрусталика.

Усиление шаперон-подобных свойств а-кристаллина, то есть способности этого белка предупреждать агрегацию поврежденных белковых молекул, лежит в основе механизма антикатарактального действия пептида D-пантетина. Пептид N-ацетил карнозин, в отличие от D-пантетина, непосредственно сам обладает шаперон-подобными свойствами и способен защищать хрусталик от помутнения. При этом было доказано in vitro, что смесь этих пептидов (N-ацетил карнозин и D-пантетин) более эффективно тормозит процесс агрегации кристаллинов под воздействием ультрафиолетового облучения, чем каждый из них в отдельности. Такое усиление антиагрегаторных свойств смеси препаратов, вероятно, результат того, что N-ацетил карнозин и D-пантетин влияют на процесс агрегации белков посредством разных молекулярных механизмов.

Процесс агрегации кристаллинов in vitro при действии ультрафиолетового излучения отражает лишь одну, хотя и ключевую стадию возникновения помутнения хрусталика. Поэтому, для проверки гипотезы о том, что смесь пептидов, обладающих шаперон-подобной активностью, может эффективно тормозить процесс агрегации кристаллинов, необходимо изучение его антикатарактальных протекторных свойств в условиях in vivo.

Для изучения механизмов действия антикатарактальных препаратов требуется легко воспроизводимая и адекватная модель возрастной катаракты. Ультрафиолетовое излучение В-спектра (280-315 нм) индуцирует процессы фотоокисления и агрегации водорастворимых белков хрусталика с образованием водонерастворимых белковых комплексов.

Окисление и агрегация кристаллинов является одним из основных этапов патогенеза возрастной катаракты. Другие виды экспериментальных возрастных катаракт (крысы линии OXIS, мыши линии Эймори и т.д.) сопряжены с различными нарушениями на генетическом уровне и не являются оптимальными для нашего исследования.

Целью работы явилось изучение воздействия комбинации препаратов (N-ацетил карнозина и D-пантетина) на УФ-индуцированную катаракту в эксперименте in vivo.

В процессе работы было обследовано 33 крысы самца вида Wistar (66 глаз) в возрасте от 20 до 23 дней с массой тела 39-41 гр. Срок наблюдения составил 10 месяцев (43 недели). К концу исследования масса тела животных достигала 400-450 г.

Была разработана модель УФ-индуцированной катаракты. В условиях максимального мидриаза (1% раствор атропина сульфата) животных подвергали облучению светом двух ультрафиолетовых кварцевых облучателей ОУФК-01 «Солнышко» (А=280-400 нм) в течение 16 мин через день в течение 10 месяцев. Средняя мощность облучения на полу клетки составила в диапазоне А и В ультрафиолетового излучения 4,7±0,23 Вт/м2.

Первую группу составили 8 животных, которым инициировали формирование УФ-индуцированной катаракты, но не вводили комбинацию препаратов; вторую (контрольную) группу составили 7 крыс, которые не подвергались воздействию УФ и не получали пептиды; в 3-й группе (6 животных, 12 глаз) облучаемые животные получали комбинацию препаратов в виде инстилляций в оба глаза 5 % раствора каждого из пептидов; в 4-й группе (6 животных, 12 глаз) облучаемые животные получали комбинацию препаратов в виде внутрибрюшинных инъекций в дозе 25 мг/кг D-пантетина и 25 мг/кг N-ацетил карнозина; в 5-й группе (6 животных, 12 глаз) облучаемые животные получали комбинацию препаратов в виде внутрибрюшинных инъекций в дозе по 150 мг/кг каждого из пептидов.

Инстилляции и внутрибрюшинные инъекции проводили однократно каждый день в течение всего периода наблюдения (10 месяцев). В те дни, когда животных облучали, комбинация препаратов вводилась за 45 минут до облучения.

Субъективную оценку динамики развития катаракты проводили при помощи метода экспертных оценок цифровых фотографий хрусталика с использованием собственной шести-бальной шкалы (от 0 до 5 баллов). Объективную инструментальную оценку степени помутнения хрусталика осуществляли с помощью микроденситометрии биомикроскопических оптических срезов хрусталиков при помощи специализированной компьютерной программы для анализа цифровых изображений. Необходимо отметить высокий уровень корреляции данных, полученных обоими методами — методом экспертных оценок и микроденситометрии оптических срезов.

Животных выводили из эксперимента через 10 месяцев, после чего проводили изучение изолированных хрусталиков гистологическими и биохимическими методами. Гистологическое исследование хрусталиков разных экспериментальных групп проводили на полутонких срезах. Биохимические исследования включали оценку состояния водорастворимых и водонерастворимых белков хрусталика посредством гель-проникающей хроматографии и электрофореза в ПААГ.

Биомикроскопическое исследование хрусталиков (метод экспертных оценок) позволило выявить динамику формирования помутнения хрусталиков у животных исследуемых групп в ходе эксперимента и описать клиническую картину формирования УФ-индуцированной и возрастной катаракт.

В облучаемой группе оптическая прозрачность кортикальных слоев и ядра хрусталика сохранялась до полутора месяцев, затем развивалось слабовыраженное диффузное помутнение в ядре и появлялась зернистость в передних и задних кортикальных слоях. Далее под воздействием ультрафиолетового облучения помутнения в ядре прогрессировали быстрее, чем в коре. К концу эксперимента (через 10 месяцев) в облучаемой группе наблюдали формирование средней степени выраженности однородного облакоподобного помутнения хрусталика, более интенсивного в ядерных слоях (катаракта 5 баллов), в то время как в контрольной группе хрусталик в значительно большей степени сохранял свою прозрачность (катаракта 2-3 балла). Зрелая катаракта при этом способе моделирования катаракты не формировалась.

Скорость развития и величина помутнения хрусталика в контрольной группе была меньше, чем в облучаемой группе. Через полтора месяца после начала эксперимента в контрольной группе определяли помутнения хрусталиков только в виде незначительного уплотнения наружного кортикального слоя под передней капсулой. К концу эксперимента обнаруживалось лишь умеренно выраженное диффузное помутнение в ядре и однородное слабовыраженное помутнение в передних и задних кортикальных слоях хрусталика.

Несмотря на разную скорость развития помутнения в облучаемой и контрольной группах, отмечена определенная схожесть клинической картины развития катаракты в этих группах. Это может свидетельствовать о родстве механизмов катарактогенеза при УФ-индуцированной и возрастной катаракте у вида крыс Wistar.

При исследовании хрусталиков у животных облучаемой группы посредством микроденситометрии выявлено, что оптическая плотность всех слоев хрусталика у животных облучаемой группы значительно увеличивается в первые три месяца от начала облучения, после чего темпы этого прироста несколько снижаются. Следует отметить, что показатель оптической плотности передней капсулы хрусталика за все время эксперимента практически не меняется, как в облучаемой, так и в контрольной группе. Офтальмоскопически этот процесс проявляется в виде уплотнения капсулы. Наиболее выраженное увеличение показателя оптической плотности к концу эксперимента отмечено в ядерных слоях.

В передних и задних кортикальных слоях хрусталика нарастание помутнений проходило практически одинаково, но более медленными темпами, чем в ядре.

В контрольной группе в течение всего периода наблюдения диагностировано небольшое равномерное увеличение показателя оптической плотности во всех слоях, что может являться свидетельством естественного процесса развития возрастных изменений хрусталика у животного этого вида.

В группах животных, получавших комбинацию препаратов на фоне УФО, как в виде инстилляций, так и виде внутрибрюшинных инъекций, скорость нарастания помутнений в хрусталиках была значительно медленнее, чем в облучаемой группе. Различие между группами облученных животных и облученных животных, получавших комбинацию препаратов, было достоверно, начиная с 82 дня эксперимента, в дальнейшем достоверность различия существенно возрастала. К концу эксперимента на 313 день более выраженный антикатарактальный эффект комбинации препаратов был получен в 3-ей группе, то есть эффективность инстилляций пептидов была выше, чем внутрибрюшинных инъекций.

График прироста показателя оптической плотности в кортикальных слоях и ядре хрусталика в 3-ей группе (облучение и инсталляции комбинации препаратов) практически полностью повторяет кривую 2-й группы (контрольной), с вероятностью большей 95 % животные 3-ей и 2-ой групп могут быть отнесены к одной группе. В 4-ой и 5-ой группах (облучение и введение по 25 мг/кг и по 150 мг/кг пептидов внутрибрюшинно соответственно) величины показателя оптической плотности хрусталика в динамике несколько превышали соответствующие значения в контрольной группе. Различие показателя оптической плотности между группами облученных животных и облученных животных, получавших комбинацию препаратов в инсталляциях и внутрибрюшинно, было достоверным, начиная с 30 дня эксперимента.

Сравнивая группы животных, получавших комбинацию препаратов различными способами, следует отметить, что, в кортикальных слоях, начиная со 104 дня, инсталляции комбинации препаратов действуют эффективнее, чем инъекции в дозе по 25 мг/кг каждого из пептидов, а на 313 день эффективнее, чем в дозе по 150 мг/кг D-пантетина и N-ацетил карнозина. В ядерных слоях инстилляции комбинации препаратов действуют эффективнее, чем инъекции в дозах по 25 мг/кг и по 150 мг/кг каждого из пептидов, начиная со 104 дня. Нарастание помутнений в передних и задних кортикальных слоях, а также во всех слоях ядра хрусталика проходило практически одинаково.

По данным морфологического исследования незначительное нарушение прозрачности хрусталиков в контрольной группе, по всей видимости, обусловлено пространственными и структурными изменениями хрусталиковых волокон, появлением участков межволоконного отека с локальной вакуолизацией. Основные изменения были локализованы в ядре и передних субкапсулярных кортикальных слоях хрусталика.

В облучаемой группе нарушение прозрачности хрусталика в результате длительного воздействия ультрафиолетового излучения мы связываем с развитием выраженных структурных нарушений, которые проявляются в виде ослабления межволоконных связей, фрагментации части волокон и межклеточного отека практически во всех отделах хрусталика.

Патоморфологическая картина хрусталиков и в облучаемой, и в контрольной группе соответствовала изменениям, характерным для возрастной катаракты человека.

Полученные данные морфологического исследования групп крыс, получавших комбинацию пептидных препаратов на фоне облучения, позволили установить результат воздействия комбинации препаратов на хрусталик экспериментальных животных. Так, в группе облученных крыс, получавших комбинацию препаратов в виде инстилляций, отмечена сохранность передней капсулы, кортикальных слоев хрусталика по глубине, в отличие от облученных крыс, но не получавших пептидные препараты. Незначительный отек ядра при этом не сопровождался фрагментацией хрусталиковых волокон. Однако, намного более лучшие гистологические результаты получены в группе крыс, получавших комбинацию препаратов внутрибрюшинно по 150 мг/кг каждого из пептидов, в которой полностью сохранилась вся архитектоника вещества хрусталика по всей толще и практически повторяла результаты контрольной группы.

Таким образом, данные патоморфологического исследования хрусталиков крыс, получавших комбинацию препаратов в виде инстилляций или внутрибрюшинных инъекций на фоне ультрафиолетового облучения, свидетельствуют о протекторной функции комбинации препаратов на ткани хрусталика в условиях УФ-индуцированной модели катаракты у крыс. Наибольшая антикатарактальная активность установлена при инъекционном способе введения пептидов в дозе по 150 мг/кг каждого из пептидов.

По данным морфологического исследования у животных всех исследуемых групп животных в сетчатке, радужке, цилиарном теле, склере и конъюнктивы патологических изменений выявлено не было.

Основываясь на результатах гистологического исследования, мы делаем вывод о наличии у комбинации препаратов корнеопротективных свойств. Перед началом работы мы не ставили перед собой цели всесторонне исследовать влияние комбинации препаратов на роговицу, и наши выводы носят сугубо предварительный характер, требуя дополнительных экспериментальных исследований.

Известно, что помутнение хрусталика, в особенности на начальных стадиях развития катаракты, сопровождается накоплением в клетках нерастворимых белковых агрегатов. Поэтому, мы вправе были ожидать, что облучение УФО вызовет повышенное накопление в клетках хрусталика нерастворимых белковых агрегатов по сравнению с контролем, а применение комбинации препаратов NAC и ПТ снизит количество таких агрегатов. При этом следует подчеркнуть, что снижение количества агрегатов при действии комбинации NAC и ПТ может явиться лишь косвенным указанием на то, что молекулярный механизм действия связан с шаперон-подобной активностью комбинации препаратов. В образовании водонерастворимых агрегатов в клетках хрусталика участвуют растворимые белки цитоплазмы, наружных и внутренних мембран, белки цитоскелета. Поэтому было также необходимо исследовать и полипептидный состав водорастворимой и водонерастворимой фракции хрусталиков животных соответствующих экспериментальных групп с целью определения конкретных участников процесса агрегации.

Исследование состава водорастворимой фракции хрусталика показало, что белковый состав по данным как гель-фильтрации, так и электрофореза в различных экспериментальных группах идентичен в пределах ошибки измерения. Исследование состава водонерастворимой фракции хрусталика показало следующее.

Количество водонерастворимых белков под действием УФО существенно возрастает, тогда, как применение комбинации препаратов в любых исследованных дозах на фоне УФО снижает количество водонерастворимого белка до уровня контрольной группы.

При разделении с помощью гель-проникающей хроматографии водонерастворимых белков, растворенных в мощном детергенте -гуанидинхлориде, получено, что в образцах всех исследуемых групп животных присутствуют три основные фракции - фракция-1 (высокомолекулярная фракция, вес > 1 ООО кДа), фракция-2 с молекулярным весом в пределах 100-200 кДа и фракция-3 с молекулярным весом около 40 кДа. При этом пики этих фракций в значительной степени уширены, что свидетельствует о том, что каждая фракция представляет собой набор белков в достаточно широком диапазоне молекулярных масс.

Сравнение хроматограмм образцов разных экспериментальных групп позволило выявить следующее. Содержание белков во фракции-1 и фракции-2 в группе облученных крыс увеличено, а во фракции-3 -уменьшено по сравнению с контрольной группой. Применение комбинации препаратов снижает содержание как фракции-1, так и фракции-2. При этом молекулярный вес белков фракции-2 несколько снижается. Обнаружены некоторые различия в результатах применения инстилляций и инъекций комбинации препаратов: при действии инстилляций смещение молекулярного веса фракции-2 несколько выше, чем при действии инъекций. Но этот эффект незначителен.

Исследование полипептидного состава водонерастворимых белков методом электрофореза не выявило существенных различий между группами.

Таким образом, можно сделать вывод о том, что применение комбинации препаратов на модели УФ-индуцированной катаракты приводит к уменьшению количества водонерастворимых белковых агрегатов в хрусталике. Это является косвенным указанием на то, что комбинация пептидных препаратов может действовать по шаперон-подобному механизму. Однако исследование молекулярного механизма требует специальных исследований.

Анализ результатов проведенного комплексного исследования (клиническими, гистологическими и биохимическими методами) позволяет заключить, что испытуемая комбинация препаратов (D-пантетина и N-ацетил карнозина) обладает выраженной антикатарактальной активностью по отношению к УФ-индуцированной катаракте у крысы, приближенной к естественным условиям формирования возрастной катаракты. Комбинация препаратов, действуя по новому шаперон-подобному механизму, выполняет протективную функцию при применении, как в виде инсталляций, так и в виде внутрибрюшинных инъекций. Полученные данные позволяют рекомендовать разработку лекарственной формы комбинации препаратов и дальнейшее клиническое испытание.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Сосновская, Ольга Евгеньевна, 2008 год

1. Амбросимова А.Н., Шафиркин А.В., Федоренко Б.С. Вероятность развития помутнений хрусталика и образования зрелых катаракт при действии излучений с различными значениями ЛПЭ // Авиакосмическая и экологическая медицина. — 2000. Т. 34, № 3. - С. 33-41.

2. Андреев А.Н. Особенности состояния гемо- и гидродинамики глаза у больных с возрастной катарактой // В кн.: Проблемы геронтологии и гериатрии. Матер, научн. конф. Волгоград. - 1998. - С. 96-98.

3. Ахалоя М.Я., Бейжуматов А.Л., Граевская Е.Э. Влияние таурина, карнозина и казоморфина на функциональную активность перитонеальных тучных клеток крыс // Бюлл. эксперим. биол. и мед. -2006. Т. 140, № 3. - С. 302-305.

4. Ахалоя М.Я., Гончаренко А.Л., Бейжуматов А.Л. Влияние ультрафиолетового излучения зоны «В» на индуцированные иммобилизационным стрессом изменения защитных систем C57BL16 мышей // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 2006. — Т. 140, № 2. — С. 180183.

5. Бшоус В.Й. Квшакс в лжуванш катаракт: безпоресередш результати застосування // Наук. Конф. Офтальм., присвяч. 125 риччю. .акад. В.П. Фшатова, Одеса, УкраТна, 2000, Тези доп. - Одеса, «Астропринт», 2000. с. 46-47.

6. Багиров Н.А. Современные проблемы катарактогенеза // Офтальмол. журн. 2000. - № 6. - С. 98-102.

7. Бирич Т.В., Позняк Н.И., Прокошина Н.А., Черенкевич С.Н. Водорастворимые белки нормальных и катарактальных хрусталиков человека и их устойчивость к действию УФ и видимого света // Вестн. офтальмол. 1984. - № 4. - С. 64-66.

8. Болдырев А.А. Карнозин. Биологическое значение и возможности применения в медицине. — М.: «Изд-во МГУ». 1998. - 320с.

9. Бунин Ф.Я. Метаболические факторы патогенеза первичной открытоугольной глаукомы (аналитический обзор) // В кн.: Глаукома. Матер. Всерос. конф. М. - 1999. - С. 40-47.

10. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И. и др. Свободные радикалы в живых системах // Итоги науки и техники. Серия биофизика. — Т. 29. — М.: «ВИНИТИ». 1991.-С. 132-160.

11. Дарбре А. Практическая химия белка. М.: «Мир». - 1989. - С. 293-297.

12. Девяткина Т.А., Тарасенко Л.М., Безуглый Ю.В. Антиоксиданты в профилактике стрессовых повреждений в онтогенезе // 5-й Всес. съезд геронт, и гериатров, Тбилиси, 22-25 ноября, 1988; Тезисы и реф. докладов, -ч. 1. Киев, 1988. - 192с.

13. Деев А.И., Асейчев А.В., Владимиров Ю.А. Свободно-радикальные аспекты катарактогенеза // Вестн. РАМН. 1999. - № 2. - С. 22-26.

14. Деев А.И., Бабижаев М.А. Возможно ли задержать развитие катаракты? // Успехи геронтол. 1997. - № 1. - С. 85-88.

15. Евграфов В.Ю., Батманов Ю.Е. Катаракта. М.: «Медицина». - 2005. -386с.

16. Егоров Е.А. Рациональная фармакотерапия в офтальмологии М.: «Литгера». - 2004. - С. 175-177.

17. Егоров Э.В., Алехина В.А., Волобуева М.Т. и др. Использование нового антиоксиданта «Гистохром» в лечении заболеваний глаз // Клин, офтальмология. — 1998. № 3 - С. 12-16.

18. Ермакова В.Н., Бабижаев М.А., Бунин А.Я. Влияние карнозина на внутриглазное давление // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1988. — № 4. — С. 451-453.

19. Жеру И.Н. Некоторые аспекты патогенеза возрастной катаракты // Съезд офтальмол. России 7-й: Тез. докладов. — М. — 2000. — ч. 1. 34с.

20. Зак П.П., Егорова Т.С., Розенблюм Ю.З., Островский М.А. Спектральная коррекция зрения: научные основы и практические приложения — М.: «Научный мир». 2005. - С. 26-30.

21. Калачев И.И., Можеренков В.П., Прокофьева Г.Л. Аскорбиновая кислота в офтальмологии // Вестн. офтальмол. 1994. - № 1. — С. 35-36.

22. Корольова В.В., Воскресенська Л.К. Ропвка i кришталик як об,экти стресорного ушкоджения // Наук. конф. офтальм., присвяч. 125-р1ччю.акад. В.П. Фшатова, Одеса, УкраТна, 2000. Тези доп. — Одеса, «Астропринт», 2000. - С. 26-27.

23. Корсакова Н.И. Морфофункциональная характеристика гистаминсодержащих структур хрусталика в норме и эксперименте: Дис. канд. мед. наук. -Чебоксары, 2004. 138с.

24. Леус Н.Ф., Метелицина И.П., Дрожжина Г.И. и др. Роль ферментных систем антирадикальной защиты в патогенезе возрастной катаракты // Съезд офтальмологов Украины 8-й: Тез. докладов. Одесса. — 1990. -172с.

25. Либман Е.С., Шахова Е.В. Слепота и инвалидность вследствие патологии органа зрения в России // Вестн. офтальмол. — 2006. — № 1. — С. 35-37.

26. Либман Е.С., Шахова Е.В. Состояние и динамика слепоты и инвалидности вследствие патологии органа зрения в России // Съезд офтальмол. России.- 7-й: Тез. докладов. М. - 2000. - ч. 2. - С. 209-214.

27. Логай И.М., Леус Н.Ф. Биофизическая и биохимическая характеристики хрусталика // Катаракта / Под ред. З.Ф. Веселовской. Киев, 2002. — С. 54-79.

28. Майчук Ю.Ф., Ларина Л.А. Применение вита-йодурола методом инсталляции и магнитофореза в лечении метаболических заболеваний глаз // Русс. мед. журн. 2003. - Т. 4, № 3. - С. 102-104.

29. Майчук Ю.Ф., Ларина Л.А., Сергиенко В.И., Формазюк В.Е. Глазные капли карнозина в лечении метаболических поражений роговицы // Методические рекомендации МНИИ глазных болезней им. Гельмгольца. 1999. - С. 20-22.

30. Майчук Ю.Ф., Орловская Л.Е. Лекарственные препараты тауфона и методы их применения при заболеваниях роговицы // Методические рекомендации МЗ РСФСР. -1991.-13 с.

31. Макаров И.А. Объективные квантитативные математические методы анализа изображений в диагностике заболеваний переднего отрезка глаза: Автореф. дис. докт. мед. наук. М., 2003. - 296 с.

32. Мальханов В.Б., Шевчук Н.Е., Имаева А.Р. Изучение проблем катарактогенеза методом органных культур // В сб. «Актуальные проблемы офтальмологии». Уфа: «Гилем». - 1999. - С. 414-418.

33. Мальцев Э.В., Павлюченко К.П. Биологические особенности и заболевания хрусталика. — Одесса: «Астропринт». 2002. — 446с.

34. Малюгин Б.Э. Хирургия катаракты и интраокулярная коррекция афакии: достижения, проблемы, перспективы развития // Вестн. офтальмол. -2006. -№ 1.-С. 37-41.

35. Метелицина И.П., Коломийчук С.Г., Кравченко Л.И., Леус Н.Ф. Концентрация витаминов-антиоксидантов и субстратов НАД-зависимых дегидрогеназных систем в крови больных возрастной катарактой // Журн. Акад мед. наук Украшы. 1996. - № 4. - С. 696-703.

36. Минц С.С., Бережов С.Н., Нурмухамедов А.Ч. и др. Влияние факторов аридной зоны на развитие возрастной катаракты в Туркменистане // В кн.: Патология оптических сред глаза. — Ашгабад. 1992. - С. 53-54.

37. Можеренков В.П., Сергушев С.Г., Прокофьева Г.Л. Консервативное лечение возрастных катаракт в начальных стадиях заболевания // Мед. помощь.-2002.-№ 1.-С. 34-35.

38. Островский М.А. Молекулярная физиология зрения и спектральные требования к офтальмооптике // В сб.: Клиническая физиология зрения. М.: «Русомед». - 1993. - С. 27-56.

39. Островский М.А. Молекулярные механизмы повреждающего действия света на структуры глаза и системы защиты от такого повреждения // Успехи биологической химии. 2005. - Т. 45. — С. 173-204.

40. Островский М.А. Федорович И.Б. Донцов А.Е. «Процессы фотоокисления в структурах глаза. Защитная функция хрусталика и защитных пигментов // Биофизика. — 1987. — Т. 32, № 5 — С.896-909.

41. Павлюченко К.П., Акимова О.Г., Борзенко Б.Г. Особенности углеводного обмена у больных с возрастной катарактой // Офтальмол. журн.- 1998.-№3.-С. 217-220.

42. Павлюченко К.П., Эль-Бишара Р.А. Возрастная катаракта и метаболический статус тиамина // Вопросы клинической офтальмологии. 2002. - № 1. — С. 35-39.

43. Петров С.Ю. Анатомия глаза и его придаточного аппарата. — М.: «Геотар-мед». — 2003. — 152с.

44. Позняк Н.И., Барковский Е.В. Возрастная катаракта. Минск: «Полибиг». - 1997. - 175 с.

45. Позняк Н.И., Барковский Е.В. Структурная реорганизация мембран клеток коры хрусталика при возрастной катаракте // В кн.: Возрастные особенности органа зрения в норме и при патологии. — М. 1992. - С. 33-35.

46. Позняк Н.И., Рубенчик А .Я. Электронно-микроскопическая характеристика хрусталика при катаракте // Здравоохранение Белоруссии. 1987. - № 6. - С. 30-33.

47. Полунин Г.С. Эффективность медикаментозного лечения различных видов катаракт // Журнал доказательной медицины для практикующих врачей «CONSILIUM MEDICUM»: Приложение «Офтальмология». — 2001.-С. 9-11.

48. Полунин Г.С., Гуров А.Н., Касимов А.К. Компьютерно-анализаторная система телевизионных изображений как новый объективный клинический метод оценки состояния хрусталика // Вестн. офтальмол. — 1993.-№ 1.-С. 18-20.

49. Полунин Г.С., Макаров И.А., Шеремет H.JT. Особенности течения отдельных видов лучевых катаракт // Вестн. офтальмол. — 1998. — № 5. — С. 32-35.

50. Проспект на препарат пантосин. Токио, 1977. — С. 1-11.

51. Пучковская Н.А. Актуальные вопросы патогенеза, диагностики и лечения сенильной катаракты // Журн. Акад мед. наук Украшы. 1995. — № 2. - С. 245-254.

52. Пучковская Н.А., Метелицына И.П., Красновид Т.А. и др. // Взаимосвязь между показателями активности ГЛУ-зависимых ферментов и скоростью прогрессирования возрастной катаракты // Офтальмол. журн. 1993.-№ 2.-С. 88-90.

53. Скрипка В.К., Петруня М.С., Евтушенко В.Ф. Значение общесоматических заболеваний в развитии возрастных катаракт // Эффект, методы диагностики и лечения катаракты и вопросы ее патогенеза. Одесса. - 1987. - С. 34-35.

54. Сомов Е.Е. Клиническая анатомия органа зрения человека. — СПб.: «Ольга». 1997. - 144 с.

55. Сомов Е.Е., Михайлов И.Б. Лекарственные средства в современной офтальмологической практике. — СПб.: Санкт-Петербургское медицинское издательство. 2003. - 64с.

56. Соустов Л.В., Челноков Е.В., Битюрин Н.М. и др. Исследование молекулярных механизмов поддержания прозрачности хрусталика глаза при воздействии УФ излучения // Конф. РАН. Фундаментальные науки -медицине. Тез. докладов. М. - 2004. - С. 192-194.

57. Соустов Л.В., Челноков Е.В., Битюрин Н.М. и др. Изучение тепловой и фотоагрегации кристаллинов и поиск принципиально новых антикатарактальных препаратов // Конф. РАН. Фундаментальные науки медицине. Тез. докладов. - М. - 2003. - С. 36-39.

58. Утно Л .Я. Основные пути метаболизма, регулируемые пантетином // В Сб. «Пантетин: метаболизм, фармакология и регуляция обмена липидов». Рига: «Зинатне». - 1991. - С. 5-8

59. Ушаков Н.А., Максимов И.Б., Хавинсон В.Х. и др. Экспериментальные модели глюкозной, перекисной и кальциевой катаракт и возможности медикаментозного влияния на них // Съезд офтальмологов России 6-й: Тез. докладов. М. - 1994. - 72 с.

60. Шабалин Н.В., Шатохина С.Н., Девяткин А.А. и др. Морфология жидких сред глаза (новая теория инволютивного катарактогенеза). — М.: «Медицина». 2004. - С. 82-83.

61. Эмануэль Н.М. Антиоксиданты и увеличение продолжительности жизни // Физиол. журн. 1984. - Т. 30, № 1. - С. 1-8.

62. Эмануэль Н.М. Некоторые молекулярные механизмы и перспективы профилактики старения // Известия Акад. наук СССР, серия биол. -1975.-№4.-С. 503-511.

63. Юнева А.О., Крамаренко Г.Г., Витрещак Т.В. и др. Влияние карнозина на продолжительность жизни Drosophila melanogaster // Бюлл. эксп. биол. мед. 2002. - Т. 133, № 6. - С. 646-649.

64. Яценко О.В., Брюзгина Т.С., Рева С.Н. Жирно-кислотный состав липидов в биологических объектах при возрастной катаракте // Клинич. лаб. диагностика. 2000. - № 2. - С. 11-12.

65. Ahrend M., Bours J., Wegener A., Breipohi W. Crystallin self-organization after experimental dissociation into polypeptides // Ophthal. Res. 1998. -suppl.l. — № 159-P. 30.

66. Aldini G., Facino R.M., Beretta G., Carini M. Carnosine and related dipeptides as quenchers of reactive carbonyl species: From structural studies to therapeutic perspectives // Biofactors. 2005. - Vol. 24, № 1-4. - P. 77-87.

67. Aldini G., Orioli M., Carini M., Maffei Facino R. Profiling histidine-containing dipeptides in rat tissues by liquid chromatography/electrosprayionization tandem mass spectrometry // J. Mass Spectrom. 2004. - Vol. 39, № 12.-P. 1417-1428.

68. Anwar M.M., Moustafa M.A. The effect of melatonin on eye lens of rats exposed to ultraviolet radiation // Сотр. Biochem. Physiol. Toxicol. Pharmacol.-2001.-Vol. 129, № l.-P. 57-63.

69. Argirova M., Argirov O. Inhibition of ascorbic acid-induced modifications in lens proteins by peptides // J. Peptide Sci. 2003. - Vol. 9, № 3. - P. 170176.

70. Ayala M.N., Michael R., Soderberg P.G. Influence of exposure time for UV radiation-induced cataract // Invest. Ophthalmol. Vis Sci. 2000. - Vol. 41, № 11.-P. 3539-3543.

71. Ayala M.N., Soderberg P.G. Vitamin E can protect against ultraviolet radiation-induced cataract in albino rats // Ophthal. Res. 2004. - Vol. 36. -P. 264-269.

72. Azza Khalil Amer, Onsy Badie, Lekaa A. Moemen The role of copper, zinc and antioxidants in aqueous humor of senile and diabetic cataract // Bull. Ophthal. Soc. Egypt. 2000. - Vol. 93, № 2. - P. 503-507.

73. Azzam N., Dovrat A. Long-term lens organ culture system to determine age-related effects of UV irradiation on the eye lens // Exp. Eye Res. 2004. -Vol. 79, №6.-P. 903-911.

74. Bassnett S., Kuszac J.R., Reinisch L., Brown H. Intercellular communication between epithelial end fiber cells of the eye lens // J. Cell. Biol. 1994. -Vol. 107, №4.-P. 799-811.

75. Bassnett S., Missey H., Vucemilo I. Molecular architecture of the lens fiber cell basal membrane complex 11 J.Cell Sci. 1999. - № 112. - P. 2155-2165.

76. Beiting J.B. Will a vitamin a day keep eye diseases away? // Eye world. — 1998.-Vol.3, №2.-P. 11-12.

77. Berthound V., Cook A., Beyer E. Characterization of the gap junction protein connexin 56 in the chicken lens by immuno-fluorescens and immunoblotting //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1994.-Vol. 35, № 12.-P. 4109-4117.

78. Bettelheim F., Chylade L.T. Light scattering of whole excited human cataractous lenses. Relationship between different light scattering parameters. // Exp. Eye Res. 1985. -Vol. 41, № l.-P. 19-30.

79. Bloemendal H., De Jong W., Jaenicke R. et al. Ageing and vision: structure, stability and function of lens crystallins // Prog. Biophys. Mol. Biol. 2004. — №86.-P. 407-485.

80. Boldyrev A.A. Protection of proteins from oxidative stress: a new illusion or a novel strategy? // Ann N.Y. Acad. Sci. 2005. - № 1057. - P. 193-205.

81. Boldyrev A.A., Dupin A.M., Bunin A.Y. et al. The antioxidative properties of carnosine, a natural histidine containing dipeptide // Biochem. Int. 1987. -Vol. 15, №6.-P. 1105-1113.

82. Borchman D., Burdwell W., Yappert M. Regional and age-dependent difference in the phospholipids composition of human lens membranes // Ophthal. Vis. Sci. 1994. - Vol. 35, № 11. - P. 3938-3942.

83. Burdwell W., Borchman D., Porter R. et al. Separation and characterization of the unknown phospholipids in human lens membranes // Ophthal. Vis. Sci. -1994. Vol. 35, № 13. - P. 4333-4343.

84. Burgio M.R., Kim C.J., Dow C.C. Koretz G.F. Correlation between the Chaperone-like Activity Aggregat Size of a-crystallin with Increasing Temperature // Biochim. and Biophys. Res. Comm. — 2000. Vol. 268, № 2. -P. 426-432.

85. Cacciatore I., Cocco A., Costa M. et al. Biochemical properties of new synthetic carnosine analogues containing the residue of 2, 3-diaminopropionic acid: the effect of N-acetylation // Amino Acids. 2005. - Vol. 28, № 1. - P. 77-83.

86. Chasovnikova L.V., Formazyuk V.E., Sergienko V.I. The antioxidative properties of carnosine and other drugs // Biochem. Int. 1990. - Vol. 20, № 6.-P. 1097-1103.

87. Chiou S.H., Azari P., Himmel M.E., Squire P.G. Isolation and physical characterization of bovine lens crystallins // Int. J. Pept. Protein Res. — 1979. -№ 13.-P. 409-417.

88. Churchill G., Louis C. Stimulation of P2u-purinergic or ala-adrenergic receptors mobilizes Ca" in lens cells // Invest. Ophthal. Vis. Sci. 1997. — Vol. 38, №5. -P. 855-865.

89. Clark J.I., Huang Q. Modulation of the chaperone-like activity of bovine a-crystallin//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - Vol. 93. -P. 15185-15189.

90. Clark J.I., Livesey J.C., Steele J.E. Delay or inhibition of rat lens opacification using pantethine and WR-77913 // Exp. Eye Res. 1996. - Vol. 62, № i.-p. 75-84.

91. Collicchio P., Stinso P., Libondi T. et al. Modifications in the cortical soluble crystallins from aging human lenses // Ophthal. Res. — 1998. — suppl.l. — № 2121. -P. 132.

92. Congdon N.T., West S.T., Duncan D.T. et al. The effect of pantethine and ultraviolet-B radiation on the development of lenticular opacity in the emory mouse // Curr. Eye Res. 2000. - Vol. 20, № 1. - P. 17-24.

93. Delaye M., Gromiec A. A Mutual diffusion of crystallin proteins at finite concentrations: a light-scattering study // Biopolymers. 1983. — Vol. 22. — P. 1203-1221.

94. Delaye M., Tardieu A. Short-range order of crystallin proteins accounts for eye lens transparency // Nature. 1983. - № 302. - P. 415-417.

95. Dillon J., Zheng L., Merriam J.C., Gaillard E.R. The optical properties of the anterior segment of the eye: implications for cortical cataract // Exp. Eye Res. 1999. - Vol. 68, № 6. - P. 785-795.

96. Dong X., Soderberg P.G., Ayala M., Lofgren S. The Effect of Exposure Time on maximum acceptable dose for avoidance of ultraviolet radiation-induced cataract // Ophthal. Res. 2005. - № 37. - P. 197-201.

97. Duncan G., Wormstone I., Davies P. The aging human lens: structure growth and physiological behavior // Brit. J. Ophthal. 1997. - Vol. 81, № 10.-P. 818-823.

98. Friberg G., Pande J., Ogun O., Benedek G.B. Pantethine inhibits the formation of high-Tc protein aggregates in gamma В crystallin solutions // Curr. Eye Res. 1996.-Vol. 15, № 12.-P. 1182-1190.

99. Fu L., Liang JJ.-N. Conformational change and destabilization of cataract gC-crystallin T5P mutant // FEBS Letters. 2002. - Vol. 25801 - P. 1-4.

100. Garland D. Role of site-specific, metal-catalyzed oxidation in lens aging and cataract f hypothesis // Exp. Eye Res. 1990. - Vol. 50. - P. 677-682.

101. Gritz D.C. Can cataract be prevented? // Bulletin of the World Health Organization. 2001. - Vol.79, № 3. - P. 260-261.

102. Guiotto A., Calderan A., Ruzza P., Borin G. Carnosine and carnosine-related antioxidants // Curr. Med Chem. 2005. - Vol. 12, № 20. - P. 22932315.

103. Hales A., Chumberlain C., McAvoy J. Cataract induction in lenses cultured with transforming growth factor // Invest. Ophthal. Vis. Sci. — 1995. Vol. 36, №8.-P. 1709-1713.

104. Harding J J. Can drugs or micronutrients prevent cataract? // Drugs Aging. -2001.-Vol. 18, № 7.-P. 473-486.

105. Harrington V., McCall S., Huynh S. et al. Crystallins in water soluble-high molecular weight protein fractions and water insoluble protein fractions in aging and cataractous human lenses // Mol. Vis. — 2004. № 10. — P. 476489.

106. Harrington V., Srivastava O.P., Kirk M. Proteomic analysis of water insoluble proteins from normal and cataractous human lenses // Mol. Vis. — 2007. -№ 13.-P. 1680-1694.

107. Head K.A. Natural therapies for ocular disorders, part two: cataracts and glaucoma // Alternative Med. Rev. 2001. - Vol. 6, № 2. - P. 141-166.

108. Hennis A., Suh-Yuh Wu., Hiaowei Li et al. Lens opacities and mortality // Ophthalmology. 2001. - Vol. 108, № 3. - P. 498-504.

109. Hightower R., Duncan 0., Harrison E. Intracellular calcium concentration and calcium transport in rabbit lens // Invest. Ophthal. — 1985. Vol. 26, № 7. -P. 1032-1035.

110. Hipkiss A.R., Brownson C. Carnosine reacts with protein carbonyl groups: another possible role for the anti-ageing peptide? // Biogerontology. 2000. — Vol. 1,№3.-P. 217-223.

111. Hiraoka Т., Clark J.I. Inhibition of lens opacification during the early stages of cataract formation // Invest. Ophthalmol. Vis Sci. 1995. - Vol. 36, № 12. -P. 2550-2555.

112. Hockwin O., Kojima M., Sakamoto Y. et al. UV damage to the eye lens: further results from animal model studies: a review // J. Epidemiol. 1999. -Vol. 9, № 6. - Supp 1. - P. 39-47.

113. Ibaraki N., Li-Ren L., Reddy V. Effect of growth factors on proliferation and differentiation in human lens epithelial cells in early subculture // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1995. - Vol. 36. - P. 2304-2312.

114. Jung W.T., Rho S.H., Park W.C. Racemization of lens crystalline constituents in UV-induced cataract evaluated by chiral GC/MS spectroscopy // Ophthal. Res. 1996. - Vol. 28. - Suppl. 2. - P. 26-31.

115. Krivandin A.V., Lvov Y., Ostrovski M.A. et al. Structural conversions of crystallins under senile cataract, dehydration and UV-irradiation studied by X-ray diffraction // Exp. Eye Res. 1989. - Vol. 49. - P. 853-859.

116. Kudriashov I.B., Deev L.I., Goncharenko E.N. et al. Radioprotective properties of carnosine // Radiats Biol. Radioecol. 1999. - Vol. 39, № 2-3. -P. 268-271.

117. Lenney J.F., Peppers S.C., Kucera-Orallo C.M., George R.P. Characterization of human tissue carnosinase // Biochem. J. — 1985. — № 228 P. 653-660.

118. Leske M.C., Suh-Yuh W., Hennis A. et al. Diabetes, hypertension and central obesity as cataract risk factors in a black population; the Barbados eye study // Ophthalmology. 1999. - Vol. 106, № 1. - P. 35-41.

119. Lewis В., Harding J. The effects of aminoguanidin on the glycation (non-enzymic glycosylation) of lens proteins // Exp. Eye Res. 1990. - Vol. 50, № 5.-P. 463-467.

120. Li W.C., Spector A. Lens epithelial cell apoptosis is an early event in the development of UVB-induced cataract // Free Radic. Biol. Med. — 1996. -Vol. 20, №3.-P. 301-311.

121. Liang J.N., Bose S.K., Chakrabarti B. Age-related changes in protein conformation in bovine lens crystallins // Exp. Eye Res. 1985. - Vol. 40, № 4.-P. 461-469.

122. Lou M.F., Mc Kellar R., Chyan O. Quantitation of lens protein mixed disulfides by ionexchange chromatography // Exp. Eye Res. 2000. - Vol. 46.-P. 607-616.

123. Lundstrom M. Aspects on cataract surgery and quality of life an analysis of 10.000 completed Catquest question - naires // The XXXV Nordic Congress of Ophthalmology at Tampere Hall, Tampere, Finland, 23-27, August 2002. - P. 19.

124. Mares-Periman J., Lyle В., Klein B. et al. Vitamin supplements use and incident cataracts in a population-based study // Arch. Ophthal. 2000. - Vol. 118,№ 11.-P. 1556-1563.

125. Mathias R.T., Rae J.L. Transport properties of the lens // Amer. J. Physiol. 1985.-Vol. 249, №3.-P. 181-190.

126. Matsushima H., David L.L., Hiraoka Т., Clark J.L Loss of cytoskeletal proteins and lens cell opacification in the selenite cataract model // Exp. Eye Res. 1997.-Vol. 64, №3.-P. 387-395.

127. McNeil J.J., Robman L., Tikellis G. et al. Vitamin E supplementation and cataract: randomized controlled trial // Ophthalmology. — 2004. № 111. - P. 75-84.

128. Meneses P., Greiner J., Glonek T. Comparison of membrane phospholipids of the rabbit and pig crystalline lens // Exp. Eye Res. 1990. - Vol. 50, № 3 — P. 235-240.

129. Meyer L.M., Soderberg P., Dong X., Wegener A. UVR-B induced cataract development in C57 mice // Ophthal. Res. 2005. - № 81. - P. 389-394.

130. Mir S., Weatley H., Makmenes I. et al. A comparative histologic study of the fibrillin microfibrillar system in the lens capsule of normal subjects and subjects with Marfan syndrome // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1998. — Vol. 39, № l.-P. 84-93.

131. Morner C.T. Untersuchngen der Proteinsubtanren in den leichtbrechen den Medion des Auges // Ztschr. f. physiol. Chem. 1894. - Vol. 18, № 61. - P. 106.

132. Nai-Teng Yu., Bando M., Kuck J. Localization of UV-induced changes in mouse lens // Exp. Eye Res. 1990. - Vol. 50, № 3. - P. 327-329.

133. Nakova E., Mechandjiev D., Nakova A. Na+ K+ pump activity in experimental Dikwat induced cataract in rabbit 'TchinchiP // International Congress of Ophthalmology XXVIII-th: Book of Abstracts. Amsterdam, The Netherlands. - 1998. - P. 102.

134. Nevidimova T.I., Prokop'eva V.D., Naidenova N.N. et al. Effect of carnosine on immunocompetent cells from alcoholic patients // Bull. Exp. Biol. Med. 2004. - Vol. 138, № 3. - P. 255-258.

135. Nishi O., Nishi K., Fujiwara T. et al. Effects of the cytokines on the proliferation of and collagen synthesis by human cataract lens epithelial cells // Brit. J. Ophthal. 1996. - Vol. 80, № 1. - P. 63-68.

136. Orhan H., Marol S., Hepsen I., Sahin G. Effects of some probable antioxidants on selenite-induced cataract formation and oxidative stressrelated parameters in rats // Toxicology. 1999. - Vol. 139, № 3. - P. 219232.

137. Ortwerth B.J., Chemoganskiy V., Olesen P.R. Studies of singlet oxygen formation and UVA light-mediated photobleaching of the yellow chomophores in human lenses // Exp. Eye Res. 2002. - Vol. 74. — P. 217229.

138. Ostrovsky M.A., Sergeev Y.V., Atkinson D.B. et al. Comparison of ultraviolet induced photo-kinetics for lens-derived and recombinant beta-crystallins // Mol. Vis. 2002. - Vol. 8, № 72-8. - P. 72-78.

139. Packer L., Azzi A., Kraemer K. et al. Future directions in preclinical vitamin E research: panel discussion // A. Ann N. Y. Acad Sci. — 2004. — № 1031.-P. 305-312.

140. Parisi A.V., Downs N. Cloud cover and horizontal plane eye damaging solar UV exposures // Invest. J. Biometeorol. 2004. - Vol. 49, № 2. - P. 130-136.

141. Paunksnis A., Svaldeniene E., Planciuniene R. et al. Age related biometric and biochemical changes of the dog eye lens // Ophthal. Res. — 2000. Vol. 32, suppl.2. -№ 251. - P. 38.

142. Pierscionek-Balcersak В., Augusteyn R.C. A new method for studying protein changes in the human during aging and cataract formation // Austr. J. Optometry. 1985. - Vol. 68, №> 2. - P. 49-59.

143. Pol I.K., Modak S.P. Immunochemical characterization and quantitative distribution of crystallins in the epithelium and differentiating fibre all populations of chick embryonic lens // Exp. Eye Res. — 1984. — Vol. 39, № 4. -P. 415-434.

144. Ponce A., Sorensen Ch., Takemoto L.I. Role of short-range protein interactions in lens opacifications // Mol. Vis. 2006. - № 12. - P. 879-884.

145. Rao P.S., Huang Q., Horwitz J., Zigler J.S. Evidence that a-crystallin prevents nonspecific protein aggregation in the intact eye lens // Acta. Biochim. and Biophys. 1995. - Vol. 1245. - P. 439-447.

146. Reddan J., Giblin F., Dziedzic D. et al. Hydrogen peroxide specific epithelial subpopulations in cultured rabbit lenses // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1995. - Vol. 36, № 2. - P. 289-299.

147. Reddy G.B., Bhat K.S. UVB irradiation alters the activities and kinetic properties of the enzymes of energy metabolism in rat lens during aging // J. Photochem. Photobiol. B. 1998. - Vol. 42, № 1. - P. 40-46.

148. Reddy G.B., Reddy P.Y., Vijayalakshmi A., Kumar M.S., Suryanarayana P., Sesikeran B. Effect of long-term dietary manipulation on the aggregation of rat lens crystallins: role of alpha-crystallin chaperone function // Mol. Vis. -2002.-№8.-P. 298-305.

149. Reddy V., Giblin F., Li Ren Lin, Chkrapani B. The effect of aqueous humour ascorbate on ultraviolet B-induced DNA damage in lens epithelium // Invest. Ophthal. Vis. Sci. 1998. - Vol. 39, № 2. - P. 344-350.

150. Reddy V.P., Garrett M.R, Perry G., Smith M.A. Carnosine: a versatile antioxidant and antiglycating agent // Sci. Aging Knowledge Environ. 2005. № 18.-P. 12.

151. Risa O., Saether O., Lofgren S. et al. Metabolic changes in rat lens after in vivo exposure to ultraviolet irradiation: measurements by high resolution MAS1H NMR spectroscopy // Invest. Ophthalmol. Vis Sci. 2004. - Vol. 45, №6.-P. 1916-1921.

152. Sasaki A., Ito S., Kasari H., Ishii Y. The abnormal structure of the lens capsule // Europ. J. Ophthal. 1995. - Vol. 51, № 2A. - P. 248:

153. Senthilkumar R., Chaerkady R., Sharma K.K. Identification and Properties of Anti-chaperone-like peptides Derived from Oxidized Bovine lens pL-Cristallins // J. Biol. Chem. 2002. - Vol. 277, № 42. - P. 39143-39146.

154. Sergeev Y.V., Soustov L.V., Chelnokov E.V et al. Increased Sensitivity of amino-arm Truncated рАЗ-cristallin to UV-Lite-Indused Photoaggregation // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2005. - Vol. 46, № 9. - P. 3263-3273.

155. Shang F., Taylor A. Function of the ubiquitin proteolytic pathway in the eye // Exp. Eye Res. 2004. - Vol. 78. - P. 1-14.

156. Sharma K.K., Kumar R.S., Kumar G.S., Quinn P.T. Synthesis, and characterization of a Peptide Identified as a functional element in a aA-cristallin // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275, № 6. - P. 3767-3771.

157. Shearer T.R. Review of selenite cataract // Curr. Eye Res. — 1992. Vol. 11, №4.-P. 357-369.

158. Shearer T.R. Selenite nuclear cataract: review of the model // Mol. Vis. — 1997.-Vol.3, №8.-P. 8.

159. Shestopalov V.I., Bassnett S. Three-dimensional organization of primary lens fiber cells // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2000. - Vol. 41. - P. 859863.

160. Shun-Shun G.A., Vrensen G.F., Brown N.P. et al. Does the pathogenesis of watercleffes reside in the lens fiber membrane? // Eye Lens Membranes and Aging / Eds. Vrensen G. and Glauwaert J. FURAGE Publ., 1991. - P.261-271.

161. Sliney D.H. Estimating the solar ultraviolet radiation exposure to an intraocular lens implant // J. Cataract Rfract. Surg. 1987. - Vol. 13. - P. 296-301.

162. Slingsby C., Bateman O. Rapid separation of bovine (3-crystallin subunits PBb f3B2, pB3, PA3 and f3A4 // Exp. Eye Res. 1990. - Vol. 51, № 1 - P. 2126.

163. Soustov L.V., Chelnokov E.V., Bityurin N.M. et al. Investigation of photoaggregation of proteins irradiated by XeCl laser light // Proceedings of SPIE 2003. - Vol. 5149. - P. 85-95.

164. Spector A. Aspects of Biochemistry of Cataract // In: The Ocular lens, — 1985, H. Maisel, Marcel Dekker, Inc. P. 405-436.

165. Spector A., Wang G.M., Wang R.R. The prevention of cataract caused by oxidative stress in cultured rat lenses II. Early effects of photochemical stress and recovery // Exp. Eye Res. 1993. - Vol. 57, № 6. - P. 659-667.

166. Srinivas V., Raman В., Rao K.S., Ramakrishna Т., Rao Ch.M. Arginine hydrochloride enhances the dynamics of subunit assembly and the chaperone-like activity of a-crystallin // Mol. Vis. 2005. - Vol. 11. - P. 249-255.

167. Stvolinsky S., Kukley M., Dobrota D. et al. Carnosine protects rats under global ischemia // Brain Res. Bull. 2000. — Vol. 53, №4.-P. 445-448.

168. Tardien A., Laporte D., Krop K.L., Delay M. Calf lens alpha-crystallin quaternary structure. A three-layer tetrahedral model // J. Mol. Biol. 1986. -Vol. 192, №4. -P. 711-724.

169. Taylor A., Jacques P.F., Chylack L.T. Jr. et al. Long-term intake of vitamins and carotenoids and odds of early age-related cortical and posterior subcapsular lens opacities // Am. J. Clin. Nutr. 2002. - Vol. 75, № 3. — P. 540-549.

170. Toh Т., Morton J., Coxon J. et al. Medical treatment of cataract // Clin, and Experim. Ophthalmol. 2007. - № 35. - P. 664-671

171. Tomodo A., Yoneyama Y., Yamaguchi Т., Shirao E. Mechanism of coloration of human lenses induced by near-ultraviolet-photooxidized 3-hydroxykynurenine // Ophthal. Res. 1990. - Vol. 22, № 3. - P. 152-159.

172. Tomson I.A., Augusteyn R.C. Ontogeny of human lens crystallins // Exp. Eye Res. 1985. - Vol. 40, № 3. - P. 393-410.

173. Trevithchick J.R. Risk reductation of cataract and macular degeneration by vitamins E and C? // Ophthal. Res. 2000. - Vol. 32, suppl. 2. - № 1341. - P. 87.

174. Truitsina I.E., Shabanova M.E., Chikunova B.Z. et al. Characterization of the anti-ulcer effectiveness of carnosine // Patol. Fiziol. Eksp. Ter. — 1997. -№4.-P. 17-20.

175. Truscott R., Martinez M. Decolouration of the lens pigment in senile nuclear cataract // Ophthal. Res. 1990. - Vol. 22, № 4. - P. 271-246.

176. Truscott R.J. Age-related nuclear cataract-oxidation is the key // Exp. Eye Res. 2005. - Vol. 80, № 5. - P. 709-725.

177. Uga S., Tsuchiya K., Ishikawa S. Histopathological study of Emory mouse cataract // Albrecht v. Graefes Arch. klin. exp. Ophthal. — 1988. Bd. 226. -P. 15-27.

178. Vaicaitiene К., Gerniauskiene L., Paunksnis A. Vitamin E concentration and advanced cataract in elderly lithuanians // Congr. Europ. Soc. Ophthal. Xlll-th: Final program a. abstract book Istambul. - 2001. - P. 223.

179. Vladimirov I.A. Free radicals and antioxidants // Vestn. Ross. Akad. Med. Nauk. 1998. - № 7. - P. 43-51.

180. Volkov O.V. Biological role of carnosine and its use in ophthalmology // Biomed Khim.-2005.-Vol. 51, №5.-P. 481-484.

181. Vrensen G. Lens Membranes and Aging Topics in Aging Research in Europe. Leiden. -1991. - P. 5.

182. Vrensen G., Willekens В., De Jong P. et al. Heterogeneity in ultrastructure and elemental composition of perinuclear lens retrodots // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 1994. - Vol. 35, № l.-P. 199-206.

183. Wang A.M., Ma C., Xie Z.H., Shen F. Use of Carnosine as a Natural Anti-senescence Drug for Human Beings // Biochemistry. Vol. 65, № 7. - 2000. -P. 869-871.

184. Wang J.J., Mitchell P., Simpson J.M. et al. Visual impairment age-related cataract and mortality // Arch. Ophthal. 2001. - Vol. 119, № 8. - P. 11861190.

185. Wegener A., Heinitz M., Dwinger M. Experimental evidence for interactive effects of chronic UV irradiation and nutritional deficiencies in the lens // Dev. Ophthalmol. 2002. - № 35. - P. 113-124.

186. Yoshida H., Murachi Т., Tsukahara J. Analysis of heavy molecular weight proteins of the Nakano mouse lenses // Acta Soc. Ophthal. Jap. — 1986. Vol. 90, №4.-P. 125-144.

187. Yoshida M., Takashima Y., Inoue M. et al. JPHC Study Group. Prospective study showing that dietary vitamin С reduced the risk of age-related cataracts in a middle-aged Japanese population // Eur. J. Nutr. 2007. - Vol. 46, suppl. 2.-P. 118-124.

188. Zigman S. Enviromental near-UV radiation and cataracts // Optomet. Vis. Sci. 1995. - Vol. 72. - P. 899-901.

189. Zigman S. UVA-radiation damage to lens epithelial cells and antioxidant protection // Ophthal. Res. 2000. - Vol. 32, suppl. 2. - № 1442. - P. 93.

190. Zoric L., Marco vie M. Some parameters of oxidative stress in the cataractous lens // Congr. Europ. Soc. Ophthal. ХШ-th: Final program a. abstract book. Istambul. - 2001. - P. 224.216. http://www.arvo.org217. http://www.ethos.ag

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.