Клонирование и анализ генов иммуноглобулинов американской норки тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Наякшин, Александр Матвеевич

• Наякшин, Александр Матвеевич
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Наякшин, Александр Матвеевич

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Организация кластера генов тяжелых цепей.

1.2. Эволюция и классификация Ун-генов.

1.3. Организация генов /^-легких цепей

1.4. А5 и VpreB

1.5. Эволюция и классификация Х-генов.

1.6. Структура локуса к-легких цепей

1.7. Эволюция и классификация к-генов.

1.8. Генетика ИГ норки.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Животные.

2.2. Подготовка ДНК-зондов.

2.3. Выделение ДНК плазмид и бактериофагов.

2.4. Выделение поли (А+) РНК.

2.5. Конструирование кДНК-овой библиотеки.

2.6. Скрининг кДНК-овой библиотеки антителами.

2.7. Скрининг кДНК-овой библиотеки ДНК-зондами.

2.8. Мечение белка А радиоактивным 1251.

2.9. Определение нуклеотидной последовательности.

2.10. Выделение высокомолекулярной ДНК из крови.

2.11. Блот-гибридизация

2.12. Иммуноблоттинг и иммуноферментный анализ.'.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Глава 3. КЛОНИРОВАНИЕ И АНАЛИЗ А.-ГЕНОВ НОРКИ

3.1. Клонирование Х-генов

3.2. Анализ первичной последовательности А.-генов.

3.3. Структура \/А,-локуса.

3.4. Структура СХ-локуса.

Глава 4 . КЛОНИРОВАНИЕ И АНАЛИЗ k-ГЕНОВ НОРКИ

4.1. Клонирование к-генов.

4.2. Структура локуса к-цепей.

Глава 5. КЛОНИРОВАНИЕ И АНАЛИЗ ГЕНОВ у-ТЯЖЕЛЫХ

ЦЕПЕЙ НОРКИ

5.1. Клонирование генов у-тяжелых цепей ИГ норки.

5.2. Анализ Ун-области.

5.3. Особенности первичной структуры Су-области.

5.4. Функциональные сайты Су-цепей норки.

5.5. Структура Су-локуса у норки.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клонирование и анализ генов иммуноглобулинов американской норки»

Актуальность исследования. Иммунный ответ у позвоночных представляет собой чрезвычайно сложный и многоступенчатый процесс, б основе обеспечения которого лежит не менее сложное и представительное надсемейство иммунологических рецепторов, включающее в себя мультигенное семейство иммуноглобулинов (ИГ). Характерными чертами этого семейства являются представленность на разных хромосомах, разнообразие форм генов, кодирующих отдельные цепи ИГ и их элементы, перестройка генов в ходе онтогенеза и иммунного ответа, избирательность экспрессии индивидуальных генов в синтезирующих ИГ клетках (Ноп]о et а1., 1989).

В совокупности эти свойства делают мультигенное семейство ИГ крайне интересным объектом для изучения различных аспектов эволюции генома эукариот, в частности, молекулярных механизмов эволюции, коэволюции стуктурных и регуляторных последовательностей, возникновения генов с новыми функциями и т.д. Решение этих проблем во многом зависит от таксономического расширения сферы исследований, т.е. вовлечения в нее новых видов животных, удаленных от традиционных объектов иммуногенетики, поскольку основные данные о принципах организации и экспрессии генов ИГ получены при изучении соответствующих локусов человека и мыши.

Проведенные в лаборатории иммуногенетики ИЦиГ СО РАН работы по генетике тяжелых цепей ИГ американской норки свидетельствовали о существовании особенностей, касающихся структуры и экспрессии генов ИГ. Как известно, у всех изученных до настоящего времени животных гены тяжелых (Н) и легких (Ь) цепей ИГ расположены на разных хромосомах. Гены различных классов и подклассов ИГ тесно сцеплены, а кодируемые аллелями разных локусов аллотипы внутривидовые антигенные детерминанты) наследуются в виде фиксированных комбинаций - аллогрупп (Honjo et al., 1983) . В противоречие с классической схемой, у аллотипов Н-цепей IgG норки не обнаружено ни тесного сцепления, ни аллелизма, а анализ количественного проявления аллотипов тяжелых цепей показал, что для некоторых из них характерна вариабельность количественной экспрессии и широкое распространение минорных концентраций (Фомичева, 1988). Кроме того, литературные данные свидетельствовали об отсутствии у норки, в отличие от других видов млекопитающих, к-легких цепей (Hood et.al., 1967).

Изучение причин этих отклонений от общепринятых представлений о структуре и экспрессии генов ИГ затруднялось полным отсутствием данных о строении этих генов на молекулярно-генетическом уровне. Необходимость получения такой информации определила постановку задач диссертационной работы.

Цели и задачи исследования. Цель данной работы заключалась в изучении на молекулярно-генетическом уровне структуры локусов, кодирующих тяжелые цепи иммуноглобулина класса G (у) , а также к- и

А-легкие цепи иммунноглобулинов американской норки. В ходе работы планировалось решить следующие конкретные задачи: 1) клонировать гены, кодирующие у-, к- и Х-цепи и определить их первичные последовательности, 2) провести анализ последовательностей с целью выявления характерных для норки особенностей, уровня гомологии по отношению к их аналогам у других видов млекопитающих и классификации вариабельных генов, 3) используя полученные специфические молекулярные зонды к различным участкам генов ИГ, оценить количество генов, входящих в у-, к- и А-локусы.

Научная новизна и практическая ценность. Все представленные в диссертации данные получены впервые. В результате работы клонированы и проанализированы гены легких и у-тяжелых цепей американской норки.

Установлено, что геном американской норки содержит 6-7 CA.- генов, при этом как минимум три из них функциональные и один, вероятно, является псевдогеном. Подгруппа VA-генов, к которой принадлежат клонированные гены, содержит не менее 15 членов и входит в III группу по принятой на данный момент классификации.

Обнаружена, в отличие от ранее опубликованных в литературе данных, экспрессия у норки к-цепей. Соответствующий локус содержит 1 константный и по меньшей мере 7 вариабельных генов.

Константные у-гены, количество которых оценивается в 4-6 членов, при учете данных по уровню гомологии и расположению опорных аминокислот наиболее близки к Су~областям овцы и быка. Подгруппа Ун-генов, в которую входят клонированные гены, насчитывает не менее 21 члена и вероятно, является наиболее представительной среди других подгрупп \/н-генов норки.

Проведенные исследования структуры и организации генов иммуноглобулинов вносят вклад в частную генетику американской норки и расширяют наши представления о строении одного из наиболее сложных мультигенных семейств генома эукариот. Полученные в процессе работы молекулярные зонды могут быть использованы для дальнейшего изучения генов ИГ норки, в частности для их хромосомной локализации и определения тонкой структуры локуса. Практический эффект от исследования генов иммуной системы, учитывая экономическую важность вида, может быть связан в первую очередь с определением генетических маркеров устойчивойсти к различным инфекционным заболеваниям . 8

Автор выражает благодарность научному руководителю работы А.В.Таранину, а также сотрудникам лаборатории иммуногенетики Е.С.Белоусову, Б.Ю.Алябьеву, Л.А.Бовкун и В.В.Перемыслову за боль шую помощь в работе.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Наякшин, Александр Матвеевич

86 ВЫВОДЫ

1. С помощью моноклональных антител идентифицированы и выделены к-и А-типы легких цепей иммуноглобулинов американской норки. Количественное соотношение к/А цепей в иммуноглобулинов сыворотки крови составляет в среднем 46:54. Установлено, что ранее обнаруженные аллотипы легких цепей иммуноглобулинов норки L1-L5 являются маркерами А-типа.

2 . Иммуноскрининг кДНКовых библиотек селезенки норки позволил клонировать кДНК, кодирующие А,-, к-, и у-цепи иммуноглобулинов этого вида. Определены последовательности кДНК, проведен сравнительный анализ различных сегментов генов иммуноглобулинов норки и других млекопитающих. Проведена оценка количества V и С-генов в различных локусах методом Саузерн-блот анализа.

3. Геном норки содержит 6-7 СА-генов, при этом как минимум три из них являются функциональными. Семейство УА,-генов, к которому принадлежат клонированные гены, содержит не менее 11 членов и относится к III группе.

4. к^локус норки содержит единственный С-ген и не менее 7 V-генов, относящихся к подгруппе II. В отличие от других млекопитающих, к-цепи которых имеют на СООН-конце цистеин, СООН-концевым аминокислотным остатком к-цепей норки является глутамин.

5. Локус тяжелых цепей иммуноглобулинов норки содержит от 4 до 6 Су-генов. Наиболее представительная подгруппа Ун-генов норки насчитывает не менее 21 члена и относится к наиболее древнему III клану Ун-генов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Наякшин, Александр Матвеевич, 2000 год

1. Баранов O.K., Таранин A.B., Фомичева И.И. Генетика и эволюция иммуноглобулинов у Mustelidae // Проблемы генетики и эволюционой теории (Под ред. Шумного В.К. и Рувинского А.О.)Новосибирск, " Наука" - 1991. - С. 163-176.

2. Волкова О.Ю. Генетика легких цепей иммуноглобулинов американской норки // Кандидатская диссертация, Институт цитологии и генетики. 1993,- С.148.

3. Кхунь Т.В., Янг Р., Дэвис Р. Конструирование и скрининг библиотек кДНК в векторах XgtlO и À,gtll. // Клонирование ДНК. Методы. (Под ред. Гловера Д.М.), М: Мир, Москва.- 1988. С. 71-106.

4. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование // М. : Мир.- 1984.- С.477.

5. Таранин A.B. Сравнительное иммуногенетическое исследование у цепей иммуноглобулинов куницеобразных // Кандидатская диссертация, Институт цитологии и генетики 1988.- С.108.

6. Фомичева И.И. Анализ молекулярного распределения аллотипов иммуноглобулина G ( IgG) у американской норки // Иммунология.- 1988. N.1 - С.23-27.

7. Чувпило С.А., Кравченко В.В. Твердофазный метод определения нуклеотидной последовательности ДНК // Биоорган, химия. 1983. -Т.9, N. 12 - С.1634-1637.

8. Akimenko M.A., Heidmann О., Rougeon F. Complex allotypes of the rabbit immunoglobulin kappa light chain are encoded by structural alleles // Nucleic Acid Res.- 1984.- V.12, N.llp.4691-4701.

9. Anderson M.L.M., Szajnert M.F., Kaplan J.C., McColl L. Young B.D. The isolation of a human Ig Va gene from a recombinant library of chromosome 22 and estimation of its copy number // Nucleic Acid Res.- 1984.- V.12, N.17 p.6647-6661.

10. Auadi H., Marche P.N.,Cazenave P.-A. Evolution of the rabbit immunoglobulin k chain genes // Immunogenetics.- 1991,- V.34,1. N.1.- p.201-207.

11. Aviv H., and Leder P. Purification of Biologically active globin messenger RNA by chromatography on oligothymidilic acid-cellulose // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.-1972,- V.69, N.6- p.1408-1412 .

12. Battey J., Max E.E., McBridge W.O., Swan D. and Leder P. A processed human immunoglobulin 8 gene has moved to chromosome 9 // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.- 1982.-V.79, N.19 p.5956-5960.

13. Bauer S.R., Huebner K., Budarf M et al. The human VpreB gene is located on chromosome 22 near a cluster of VAl gene segment // Immunogenetics.- 1988.- V.28, N.5 p. 328-333.

14. Bauer S.R., Kudo A., Melchers F. Structure and pre-B lymphocyte restricted expression of the VpreB gene in humans andconservation of its structure in other mammalian species // EMBO J.- 198 8.- V. 7 , N . 1.- p.111-116.

15. Bauer T.R., Blomberg B. The human /1 L chain Ig locus: Recaracterization og JCÀ.6 and identification of a functional JCÂ7 // J.Immunol. 1991.- V,146, N.8. - p.2813-2820.

16. Bech-Hansen N.T., Linsley P.S. and Cox D.W. Restrrction fragment length polymorphism associated with immunoglobulin Cy genes reveal linkage disequilibrium and genomic organization // Proc.Nat1.Acad.Sci.USA.-1983.-V.80, N.22 p. 6952-6956.

17. Belyaev D.K., Fomicheva I.I., Baranov O.K., Taranin A.V Genetic polymorphism of IgG in mink. II. A genetic analysis of allotypes // Expl Clin. Immunogenet.- 1986b. V.3, N.2 - p.65-74.

18. Belyaev D.K., Fomicheval.I., Taranin A.V., Baranov,O.K. Genetic polymorphism of IgG in mink.I. Identification of 8 allotypes // Expl.Clin.Immunogenet. 1986a. - V.3, N.l - p.10-19.

19. Benammar A., Cazenave P.-A. A second rabbit kappa isotype // J.Exp.Med.- 1982,- V.156, N.2 p.585-595.

20. Bennamar A., Brezin C., Cazenave P.-A. Rabbit immunoglobulin allotype: a sixth allele at the b locus (b95) // Mol.Immunol.-197 9.- V.16, N.5 p.98 3-98 7.

21. Bentley D.L. and Rabbits T.H. Cell humans V immunoglobulin gene number: implication for the origin of antibody diversity // Cell. 1981.- V.24, N.3 - p.613-623.

22. Bernard 0.,Hozumi N., Tonegawa S. Sequences of mouse immunoglobulin light chain genes before and after somatic changes // Cell.- 1978.- V.15, N.4.- p.1133-1144.

23. Blomberg B., Traunecker A., Eisen H.N., Tonegawa S. Organization of four mouse A, light chain immunoglobulin genes // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1981.-V.78, N.6.- p.3765-3769.

24. Bonhomme F., Catalan J., Britton-Davidian J., Chapman V.M., Morivaki K., Nevo E., Thaler L. Biochemical diversity and evolution in the genus Mus // Biochem.Genet.- 1984.- V.22, N.3/4 -p.275-303.

25. Bothwell A.L.M., Paskind M., Reth M., Imanishi-Kari T., Rajewsky K. and Baltimore D. Heavy chain variable region contribution to the NP family of antobodies: Somatic mutation evident in a y2a variable region // Cell.- 1981.- V.24, N.3- p. 625- 637.

26. Bovkun L.A., Peremislov V.V., Nayakshin A.M. Belousov E.S., Mechetina L.V., Aasted B., Taranin A.V. Expression of immunoglobulin kappa and lambda chains in mink // Eur.J.Immunol.-1993.- V.23, N.8 p.1929-1934.

27. Brockley F. , Alexandre D., Chuchana P., Huck S., Lefranc G., Lefranc M.-P. First nucleotide, sequence of a human immunoglobulin variable X gene belonging to subgroup II // Nucl.Acid Res.- 1989.-V. 17, N. 10.- p.3976-3982.

28. Broeder P.H., Osman G.E., Mackle J.J. and Lalor T.M. The organization of the mouse Igh V locus // J.Exp.Med.- 1988.- V.168, N . 10 p. 2261-2270.

29. Broeder P.H., Thompson M.A. and Riblet R.J. The content and organization of mouse Igh-V families // In Regulation of the Immune System. UCLA Symposia on Molecular and Cellular Biology, New series, New York, eds.Liss A.R. Inc.- V.18 1984, p.445.

30. Bruggeman M., Free J., Diamond A., Howard J., Cobbold S. and Woldmann H. Immunoglobulin heavy chain locus of the rat: Striking homology to mouse antibodies gene // Proc.Natl. Acad.Sci.USA.-198 6.- V.8 3, N.16- p. 6075-6079.

31. Burton D.R. Immunoglobulin G: functional sites // Mol. Immunol.- 1985 V.22, N.3 - p.161-206.

32. Carson S. and Wu G.E. A linkage map of the mouse immunoglobulin lambda chain locus // Immunogenetics.- 1989.- V.29, N.3.- p.173-179.

33. Chang H., Dmitrovsky E., Hieter P.A., Mitchell K., Leder P., Turoczi L., Kirsh I.R., Hollis G.F. Identification of three new Ig like genes in man // J.Exp.med.- 1986.- V.163, N.2. - p.425-435.

34. Chomczynski P., and Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidine thiocyanate-phenol-chloroform extraction // Anal.Biochem.- 1987,- V.162, N.l p.156-159

35. Christoph T. and Krawinkel U. Physical linkage of variable, diversity and joining gene segments in immunoglobulin heavy chain locus of the mouse // Eur.J.Immunol.- 1989.- V.19, N.8 p. 15211523.

36. Chuchana P., Blancher A., Brockly F., Alexandre D., Lefranc G., Lefranc M.-P. Definition of the human immunoglobulin variablelambda (IGLV) gene subgroup // Eur.J.Immunol.- 1990,- V.20, N.7 -p.1317-1325.

37. Combriato G., and Klobeck H.-G. VÀ. and JÀ.-CÀ. gene segments of the human immunoglobulin A,-light chain locus are separated by 14 kb and rearrange by a deletion mechanism // Eur.J.Immunol.- 1991.1. V.21, N. 8 p.1513-1522.

38. Cory S. Immunoglobulin variable region genes // Surv.Synth. Pathway Res.- 1984,- V.3, N.l p.149-164.

39. Cory S., Tyler B.M., Adams J.M. Sets of immunoglobulin V genes homologues to ten cloned Vk sequences; implications for the numberof germline Vk genes // J.Mol.Appl.Genet.- 1981.- V.l, N.l.- p.103-116.

40. D'eustachio P., Bothewell A., Takaro T.,Baltimore D., Ruddle F. Chromosomal locations of structural genes encoding murine immunoglobulin X light genes: genetics of murine X light chains // J. Exp. Med.- 1981.- V.153, N.4 p.793-800.

41. D'eustachio P., Pravtcheva D., Marcu K. and Ruddle F.H. Chromosomal location of the structural gene cluster encoding murine immunoglobulin heavy chains // J.Exp.Med.- 1980,- V.151, N. 6 p.1545-1550.

42. D'Hoostelaere L.A., Bauer S.R., Melchers F. Restriction fragment analysis of VpreB and X5 within the genus Mus // Eur.J.Immunol.- 1989.- V.19, N.l.- p.37-42.

43. Deev S.M., Combriato G., Kl'obeck, H. G. , Zachau H.G. Reciprocal recombination products of Vk-Jk joining reactions in human lymphoid cell lines // Nucleic Acid Res.- 1987.-V.15, N.I.- p.1-14.

44. Diesenhofer J. Crystallographic refinement and atomic models of a human Fc fragment and its complex with fragment B of protein A from Staphylococcus aureus at 2.9 and 2.8 A resolution // Biochemistry.- 1981.- V.20, N.8 p.2361-2370.

45. Dildrop R., Gause A., Muller W., RajewskyK. A new V gene expressed in lambda-2 light chains of the mouse // Eur.J.Immunol.-1987,- V.17, N.5 p.731-734.

46. Dover G. Molecular drive: a cohesive mode of species evolution // Nature.- 1982.- V.299, N.5879, p.111-117.

47. Duncan A.R., and Winter G. The binding site for the Clq on IgG // Nature. 1988. - V.332, N.6166 - p.738-740.

48. Duncan A.R., Woof J.M., Partridge L.J., Burton D.R., Winter G. Localization of the binding site for the human high affinity Fc receptor on IgG // Nature.- 1988.- V.332, N.6164 p.563-564.

49. Durdik J., Moore M.W., Seising E. Novel k light-chain gene rearrangments in mouse A light chain-producing B lymphocytes // Nature.- 1984.- V.307, N.5953 p.749-752.

50. Duvoism R.M., Hayzer D.J., Belin D., Jaton J.-C. A rabbit IgA L chain C region gene encoding C21 allotypes // J.Immunol.- 1988.-V.141, N. 7 p.1596-1601.

51. Duvoisin R.M., Heidmann 0., Jaton J.-C. Characterization of four rabbit immunoglobulin X light chain constant region genes // J.Immunol.- 1986,- V.136, N. 11 p.4297-4302.

52. Duvoisin R.M., Jaton J.-C. Nucleotide sequence of a cDNA clone encoding a rabbit immunoglobulin-^ light chain: the VA. region differs markedly from that of other species // J.Immunol.- 1987,-V . 138, N.7 p.2316-2322.

53. Dyrberg T., and Billestrup N. Preparation of 1251-protein A usable for up to 10 months in immunoassay // J.Immunol.Meth. -1984.- V.71, N.2 p.193-201.

54. Edelman G.M., Gunningham B.A., Gall W.E., Gottlieb P.D., Rutisha user U. and WaxdalM.J. The covalent structure of an entire XC immunoglobulin molecule //Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1969.- V.63, N. 1 - p. 78-85.

55. Emorine L., Dreher K., Kindt T.J., Max E.E. Rabbit immunoglobulin k gene: Structure of a germ line b4 allotype J-C locus and evidence for several b4-related sequences in the rabbit genome // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.- 1983.- V.80, N.18- p.5709-5713.

56. Erikson J., Martinis J., Croce C.M. Assignment of the genes for the human X immunoglobulin chains to chromosome 22 // Nature.-1981.-V.294, N.58 37 p.173-175.

57. Falkner F.G. and Zachau H.G. Correct transcription of an immunoglobulin k gene requires un upstream fragment containing conserved sequence elements // Nature.- 1984,- V.310, N.5972 -p.71-74.

58. Feinberg A.P., Vogelstein B.A. A technique for radiolabeling DNA restriction endonuclease fragments to high specific activity // Anal.Biochem.- 1983.- V.132, N.l p.6-13.

59. Frank M.B., Gutman G.-A. Two pseudogenes among three rat immunoglobulin lambda chains genes // Mol.Immunol.- 1988.- V.25, N . 10.- p.953-960.

60. Ghaffari S. H., and Lobb C.J. Cloning and sequence analysis of channel catfish heavy chain cDNA indicate phylogenetic diversity within the IgM immunoglobulin family.// J.Immunol.- 1989 V.142,1. N.6 p.1356-1365.

61. Gimble J.M., Levens D. and Max E.E. B-cell nuclear protein's binding in vivo to the human immunoglobulin k enhancer: Localization by exonuclease protection // Mol.Cell.Biol.- 1987,-V.7, N. 5 p.1815-1822.

62. Gubler U., and Hoffman B.J. A simple and very efficient method for generating cDNA libraries // Gene. 1983. - V.25, N.2p.263-269.

63. Gustafson S., Proper J., Bowie E.J.W., Sommer S.S. Parameters affecting the yield of DNA from human blood // Anal.Biochem.1987. V.16 5, N.2 - p.294-299.

64. Gutman G.A., Besta R.M., Frank M.B. and Baverstock P.R. Duplication of Jk genes within genus Rattus // Immuno- genetics.-1987. V.26, N.l/2 - p. 14-20.

65. Hayser D.J. Immunoglobulin lambda light chain evolution : IgA. and IgA.-like sequences from three major groups // Immunogenetics.-1990.- V.31, N.3. p.157-174.

66. Hayzer D.J. and Jaton J.-C. Cloning and sequencing of two functional rabbit germ-line immunoglobulin VA. genes // Gene. -1989. V.80, N.2- p.185-191.

67. Hayzer D.J., Duvoisin R.M., Jaton J.-C. c DNA clones encoding rabbit immunoglobulin X chains: evidence for length variation of the third hypervariable region and for a novel constant region // Biochem. J.- 1987,- V.245, N.3 p.691-697.

68. Heidmann 0. and Rougeon F. Immunoglobulin Klight chain diversity in rabbit is based on the 3' length heterogenity of germ-line variable genes // Nature.- 1984,- V.311, N.5981 p.74-76. "

69. Hesse J.E., Lieber M.R., Gellert M. and Mizuuchi K.

70. Extrachromosomal DNA substrates in pre-B cells undergo inversion or deletion at immunoglobulin V-(D)-J joining signals. // Cell.-1987.- V.4 8, N.6 p. 775-783.

71. Hieter P.A., Hollis G.F. Korsmeyer S.J. Woldmann T.A. and Leder P. Clustered arrangment of immunoglobulin X constant region genes in man // Nature. 1981.- V.294, N.5841 - p.536-540.

72. Holmes D.S., and Quigley M. A Rapid boiling method for the preparation of bacterial plasmid // Anal.Biochem.- 1981.- V.114, N. 1 p.193-197.

73. Honjo T., Shimuzu A. and Yaoita Y. Constant-region genes of the immunoglobulin heavy chain and molecular mechanism of class switching.// In " Immunoglobulin genes" , ed Honjo T., 1989, Academic Press, New York.-1989.- p.124-149.

74. Hood L., Cray W.R., Sanders B.G. and Dreyer W.J. Light chain evolution // Cold Spring Harb.Symp.quant.Biol.- 1967,- V.32p.133-146.

75. Hood L., Kronenberg M. and Hunkapiller T. T cell antigen receptors and the immunoglobulinsupergene family // Cell.- 1985.-V.40, N. 2 p. 225-229.

76. Kabat E.A., Wu T.T., Reid-Miller M. et al. Sequences of Protein of Immunological Interest // 4th Edn. US department of' Health and Human Services, NIH, Bethesda, MD.- 1987.

77. Kelley D.E., Coleclough C. and Perry R.P. Functional significance and evolutionary development of the 5'-termini regions of immunoglobulin variable- region genes // Cell.- 1982.-V. 29, N. 2 p.681-689.

78. Kindt T.J., Gris C., Guenet J.L., Bonhomme F., Cazenave P.-A. Lambda light chain constant gene complements in wild-derivedxnbred mouse strain // Eur.J.Immunol.- 1985.- V.15, N.3 p.535-54 0.

79. Kirsch I.R., Morton C.C., Nakahara K. and Leder P. Human immunoglobulin heavy chain genes map to a region of translocation in malignant B lymphocytes // Science.- 1982,- V.216, N.4543p.301-303.

80. Klobeck H.-G., Solomon A., Zachau H.G. Contribution of human VkII germ-line genes to light-chain diversity // Nature. 1984.-V.309, N. 5963 - p.73-76.

81. Klobeck H.G. and Zachau H.G. The human Ck gene segment and the kappa deleting element are closely linked // Nucl.Acids.Res.-1986,- V.14, N.ll p. 4591-4603.

82. Klobek H.G., Meindl A., Combriato G., Solomon A. and Zachau H.G. Human immunoglobulin kappa light chain genes of subgroupsll and III // Nucl.Acid.Res.- 1985,- V.13, N.18 p.6499-6513.

83. Kodaira M., Kinashi T., Umemura I., Matsuda F. , Noma T., Ono Y. and Honjo T. Organization and evolution of variable region genes of the human immunoglobulin heavy chain // J.Mol.Biol.-1986.- V.190, N.4.- p. 529-541.

84. Krawmkel U., Christoph T. and Blankenstein T. Organization of the Ig Vh locus in' mice and human.// Immunol.Today.- 1989.- V.10, N10 p.339-344.

85. Kroemer G., Helmberg A., Bernot A., Auffray C., Kofler R. Evolutionary relationship between human and mouse immunoglobulinkappa light chain variable region genes // Immunogenetics.- 1991.-V.33, N. 1 p.42-49.

86. Kudo A., and Melchers F. A second gene, VpreB in the X5 locus of the mouse, which appears to be selectively expressed in pre-B lymphocytes // EMBO J.- 1987b.- V.6, N.9 p.2267-2272.

87. Kudo A., Sakaguchi N., Melchers F. Organization of the murine Ig-related X5 gene transcribed selectively in pre-B lymphocytes // EMBO J.- 1987a.- V.6, N.l p.103-107.

88. Lim N.M., Pene J.J. Optimal conditions for supercoil DNA sequencing with the Escherichia coli DNA polymerase I large fragment // Gene Anal.Techn.- 1988 V.5, N.l - p.32-39.

89. Livant D., Blatt C., Hood L. One heavy chain variable region gene segment subfamily in the BALB/c mouse contains 500-1000 or more members // Cell 1986.- V.47, N.3 - p. 461-470.

90. Lotscher E., Grzeshick K.-H., Bauer H.G., Pohlenz H.-D., Straubinger B., Zachau H.G. Dispersed human immunoglobulin k-light chain genes // Nature.- 1986.- V.320, N.6061- p.456-458.

91. Lotscher E., Zimmer F.-J., Klopstock Th., Grzeshick K.-H., Jaenichen R., Straubinger B., Zachau H.G. Localization, analysis and evolution of transposed human immunoglobulin Vk genes // Gene.-1988,- V.69, N.2- p.215-223.

92. Mami F., Cazenave P.-A., Kindt T.J. Conservation of the immunoglobulin CA.5 gene in the Mus genus // EMBO J.- 1988,- V.7, N.l p.117-122.

93. Max E.E., Seidmann J.C.,Leder P. Sequences of five potential recombination sites encoded close to an immunoglobulin k constant region gene // Proc.Nat1.Acad.Sci.USA. 1979.- V.76, N.7.p.3450-3454.

94. Max E.E./Maizel J.V., Leder P. The nucleotide sequence of a 5.5 kilobase DNA segment containing the mouse k immunoglobulin J and C region genes // J.Biol.Chem.- 1981.- V.256, N.10 p.5116-5120 .

95. Maxam A.M., Gilbert W. Sequencing end-labelled DNA with base specific cleavage// Methods in Enzyrnology 1980,- V.65, Pt 1 -p.499-560.

96. Medveczky P., Chang C.W., Oste C. et al. Rapid vacuum driven transfer of DNA and RNA from gels to solid support // BioTechniques. 1987.- V.5, N.2 - p.242-246.

97. Melchers F., Karasuyama H., Haasner D., Bauer S., Kudo A., Sakagashi N., Jameson B. and Rolink A. The surrogate light chain in B-cell development // Immunology Today.- 1993.- V.14, N.2 -p.60-68 .

98. Miller J., Bothwell A., Storb U. Phisical linkage of the constant region genes of immunoglobulin I and III //

99. Proc.Natl.Acad.Sci.USA.- 1981.- V.78, N.6 p.3829-3833.

100. Milner E.C.B., Willems K., van Dijk, and Sasso E.H. The human VH locus // In Molecular Mechanisms of Immune Regulation.

101. R. Srivastava, B.P.Ram, and P.Tyle, editors. VCH Publishers, New York 1991 . - p.135-158.

102. Natvig J.B. and Kunkel H.G. Human immunoglobulin: classes, subclasses, genetic variants and idiotypes // Adv.Immunol, ed. Kunkel H.G. and Dixon F.J., Academic Press, New York.-19731. V. 16,- p.1-59.

103. Parvari R., Ziv E., Lentner F., Tel-Ors., Burstein Y. and Schecter I. Analyses of chicken immunoglobulin light chain cDNA clones indicate a few germline VA, genes and allotypes of the CX locus // EMBO J.- 1987.- V.6, N.l p.97-102.

104. Peremislov V.V., Mechetina L.V. and Taranin A.V. Monoclonal antibody against heavy and light chainsof domestic mink IgG // Hybridoma.- 1992,- V.ll, N.5 p.629-638.

105. Picard D., Schaffner W. A lymphocyte-specific enhancer in themouse immunoglobulin k gene // Nature.- 1984.- V.307, N.5946 -p. 80-82.

106. Poljak R.J., Amzel L.M., Avey H.P., Chen B.L, Phizackerely R.P. and Saul F. The three dimensional structure of the Fab' fragment of a human myeloma immunoglobulinat 2.0-A resolution // Proc.Natl.Sci.USA.-1974.- V.71, N.9 p.3440-3445.

107. Rathbun G., Berman J., Yancopouls G. and Alt F.W. Organization and expression of the mammalian heavy-chain variableregion locus.// in "Immunoglobulin genes", ed.Honio, Academic Press, New York.-1989 p.63-89.

108. Ravetch J.V., Siebenlist U., Korsmeyer S., Waldmann T. and Leder P. Structure of the human immunoglobulin fi locus:

109. Characterization of embrionic and rearranged J and D genes // Cell.- 1981.- V.27, N.3- p. 583-591.

110. Reddy K.J., Kuwabara T., Sherman L.A. A simple and efficient prosedure for the isolation of high- quality phage X DNA using DEAE-cellulose column // Anal.Biochem.- 1988.- V.168, N.2 p.324-331 .

111. Reth M., Jackson N. and Alt F.W. VhDhJh formation and DJh replacement during pre-B differentiation: non-random usage of gene segments // EMBO J.- 1986.- V.5, N p.2131-2138.

112. Reynaud C.-A., Anquez V., Grimal H., Weill J.-C. A hyperconversion mechanism generates the chicken light chain preimmune repertoire // Cell.- 1987,- V.48, N.3 p.379-388.

113. Reynaud C.-A., Mackay C.R., Muller R.G. and Weill J.C. Somatic generation of diversity in a mammalian primary lymphoid organ: The sheep ileal Peyer's patches // Cell 1991.- V.64, N.5 - p.995-1005.

114. Reynaud C.A., Anques V., Dahan A., Weill J.C. A single reaarangment event generats most of the chicken immunoglobulin light chain diversity // Cell.- 1985.- V.40, N.2- p.283-291.

115. Sakaguchi N., Melchers F. A.5, a new light chain-related locus selectively expressed in pre-B lymphocyte // Nature.- 1986.

116. V. 324, N. 6097- p.579-582.

117. Sakano H., Huppi K., Heinrich G., Tonegawa S. Sequences at the somatic recombination sites of immunoglobulin light-chains genes // Nature.- 1979,- V.280, N.5720 p.288-294.

118. Sanchez P. and Cazenave P.-A. A new variable region in mouse immunoglobulin X light chains //J.Exp.Med.- 1987.- V.166, N.lp.265-270.

119. Sanchez P., Marche P.N., Rueff-Juy D., Casenave P.-A. Mouse VA,x gene sequence generate no junctional diversity and is conservec in mammalian species // J.Immunol.- 1990.- V.144, N.12 p. 28162820 .

120. Sanger F., Nicklen S., and Coulson A.R. DNA sequencing with chain terminating inhibitors // Proc. Natl. Acad.Sci.USA. 1977-V. 74, N.12 - p.5463-5467.

121. Sasso E.H., Silverman G.J., and Mannik M. Human IgA and IgG F(ab)'2 that bind to staphylococcal protein A belong to the VHIII subgroup // J.Immunol.- 1991. V.147, N.6 - p.1877-1883.

122. Sasso E.H., Silverman G.J., and Mannik M. Human IgM molecules that bind Staphylococcal protein A contain VHIII H chains //

123. J.Immunol.- 1989.- V.142, N.12 p.2778-2784.

124. Schiff C., Milili M. and Fougereau M. Interstain conservation of the murine polyglutamic acid-60-alanine-30-tyrosine-10-tyrosine-10 specific antibody Vk repertoire as analysed at the germline gene level // EMBO J.- 1983.- V.2, N.10 p.1771-1776.

125. Schiff C., Milili M., Fougereau M. Isolation of early immunoglobulin A.-like gene transcripts in human fetal liver // Eur.J.Immunol.- 1989,- V.19, N.10 p.1873-1878.

126. Schroeder H., Hillson J.L. and Perlmutter R. Early restriction of the human antibody repertoire // Science.- 1987.-V.238, N. 4828- p. 791-793.

127. Schroeder H., HillsonJ., Perimutter R. Structure and evolution of mammalian Vh families // Int. Immunol.- 1989.- V.2,1. N.l.- p. 41-50.

128. Scott C.L., Mushinki J.F., Huppi K., Weigert M., Potter M. Amplification of immunoglobulin A. constant genes in populations of wild mice // Nature.- 1982.- V.300, N.5894 p.757-760.

129. Seising E., Durdik J., Moore M. and Persiani M. Immunoglobulin lambda genes // In "Immunoglobulin genes", ed.by Honio, Academic Press, New York.- 1989,- p.111-122.

130. Seising E., Miller J., Wilson R. and Storb U. Evolution of mouse immunoglobulin X genes // Proc.Nat1.Acad.Sci.USA.- 1982.-V. 79, N. 15 p.4681-4685.

131. Seppala I., Kaartinen M., Ibrahim S., and Makela 0. Mouse Ig coded by VH families S107 or J606 bind to protein A // J.Immunol.-1990.- V.14 5, N.14 p.2989- 2993.

132. Shamblott M.J.,and Litman G.W. Complete nucleotide sequence of primitive vertebrate immunoglobulin light chain genes // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.- 1989.- V.86, N.12- p.4684-4688.

133. Shimizu A., Takahashi N., Yaoita Y. and Honjo T. Organization of the constant-region gene family of the mouse immunoglobulin heavy chain // Cell.- 1982.- V.28, N.3- p.499-506.

134. Shroeder H.W., Hillson J.L., and Perlmutter R.M. Structure and evolution of mammalian VH families // Int.Immunol.- 1990. -V. 2, N,1 p.41-50.

135. Shulz G.E. and Schirmer R.H. Principles of Protein Structure //Springer-Verlag, Berlin.- 1979 p.235.

136. Siebenlist U., Ravetch J.V., Korsmeyer S., Waldmann T., Leder P. Human immunoglobulin D segments encoded in tandem multigenic families // Nature.- 1982.- V.294, N.5842- p. 631-635.

137. Southern E. Detection of specific sequenses among DNA fragments separated by gel electrophoresis // J.Mol.BioI.- 1975.-V . 98, N.3 p.503-514.

138. Stavnezer J., Kekish 0., Batter D., Greneir J., Balazs I., Henderson E and Zegers B.J.M. Abberant recombination events in B cell lines from a k-deficient human // Nucl.Acid.Res.- 1985.

139. V.13, N. 10 p. 3495-3514 .

140. Steen M.-L., Hellman L. and Pettersson U. The immunog lobulin lambda locus in rat consist .of two CA and a single VX gene //J Gene.- 1987,- V.55, N.l p.75-84.

141. Steen M.-L., Hellman L., Petterson U. The immunoglobulin lambda locus in rat consists of two CX genea and a single VX gene // Gene.- 1987,- V.55, N.l p.75-84.

142. Storb U., Haash D., Arp B., Sanches P., Cazenave P.-A. Physical linkage of mouse A. genes by pulsed-field gel electrophoresis suggests that the rearrangment process favors proximate target sequences // Moll.Cell.Biol.-1989.- V.9, N.3 -p.711-720.

143. Stratagene. ZAP-cDNA synthesis kit // Instruction manual.-1990 .

144. Straubinger B., Thiebe R. , Huber C., Osterholzer E. and Zachau H.G. Two unusual human immunoglobulin Vk genes.// Biol.Chem.Hoppe Seyler.- 1988.- V.369, N.2 p. 601-607.

145. Strohal R., Helberg A., Kroemer G., Kofler R. Mouse Vk gene classification by nucleic acid sequence similarity // Immunogenetics.- 1989.- V.30, N.3- p.475-493.

146. Tao and Morrison S.L. Studies of aglycosylated chimeric mouse-human IgG. Role of carbohydrate in the structure andeffector functions mediated by .the human IgG constant region // J.Immunol.- 1989,- V.143, N.8 p.2595-2601.

147. Taub R.A., Hollis G.F., Hieter P.A., Korsmeyer S., Waldman T.A., Leder P. // Variable amplification of immunoglobulin A, light-chain genes in human population // Nature.- 1983.- V.304, N.5922 -p. 172-174.

148. Tutter A. and Riblet R. Conservation of an immunoglobulin variable-region gene family indicates a specific noncoding function // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1989.- V.86, N.19 J p. 7460-7464.

149. Tutter A. and Riblet R. Duplication and deletions of Vh genes in inbred strains of mice // Immunogenetics.- 1988.- V.28, N.2 -p.125-135.

150. Tutter A., Broeder P., ShlomchikM., and Riblet R. Structure, map position and evolution of two newly diverged mouse Ig Vh gene families // J. Immunol.- 1991,- V.147, N.9 p. 3215-3223.

151. Udey J.A. and Blomberg B.B. Human X light chain locus: organization and DNA sequences of three genomic J regions // Immunogenetics.- 1987,- V.25, N.l p.63-70.

152. Vasicek T.J. and Leder.P. Structure and expression of the human immunoglobulin X genes // J.exp.Med.- 1990.- V.172, N.3 -p.609-620.

153. Waldman A.S. and Liskay R.M. Dependence of intrachromosomal recombination in mammalian cells on uninterrupted homology // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 1987.- V.84, N.15 - p.5340-5348.

154. Wood C. and Tonegawa S. Diversity and joining segments of' mouse immunoglobulin heavy chain genes closely linked and in the same orientation: Implication for the joining mechanism // Proc.Natl.Acad.Sci.USA.- 1983,- V.80, N.10 p.3030-3034.

155. Wu G., and Cannon R.E. An economical large scale procedure to purify E.coli arrtplifiable plasmids for DNA sequencing, in vitro transcription and in vitro mutagenesis // Experimentia.- 1985.1. V. 41, N.8 p.1488-1490.

156. Yamasaki N., Komori Sh., Watanable T. Complementary DNA for a human subgroup IV immunoglobulin A.-chain // Mol. Immunol. 1987,1. V. 24, N. 9 p.981-985.

157. Yancopoulos G.D., Desiderio S.V., Pasking M., Kearney J.F., Baltimore D. and Alt F.W. Preferential utilization of the most Jh-proximal Vh gene segments in pre-B-cell lines // Nature.- 1984.-V.311, N.5988- p.727 -729.

158. Zachau H.G. Immunoglobulin light chains genes of the k type in man and mouse// In " Immunoglobulin genes", ed.by Honio, Academic Press, New York.-1989. p.92-107.

159. Zachau H.G.The human immunoglobulin k locus and some of its acrobatics // Biol.Chem.Hoppe-Seyler.- 1990.- V.371, N.I.- p.1-6.108

160. Zimmer F.G., Huber C., Quenzel M., Scheck H., Stiller C. Thiebe R. and Zachau H. Evolution of a group of transposed human Vk genes.// Biol.Chem.Hoppe Seyler.- 1990,- V.371, N3 p.283-290.