Критерии оценки лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis к препаратам группы фторхинолонов культуральными методами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат наук Исаева, Юлия Дмитриевна

• Исаева, Юлия Дмитриевна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Исаева, Юлия Дмитриевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Понятие о лекарственной устойчивости М. tuberculosis

1.2. Принципы и методы культурального определения лекарственной чувствительности М.

tuberculosis

1.3. Определение лекарственной чувствительности М. tuberculosis к препаратам группы фторхинолонов

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Бактериальные штаммы

2.2. Лекарственные препараты

2.3. Микробиологические методы

2.4. Молекулярно-генетические методы

2.5. Статистическая обработка данных

ГЛАВА 3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ КРИТИЧЕСКИХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ЛЕВОФЛОКСАЦИНА, МОКСИФЛОКСАЦИНА И ГАТИФЛОК-САЦИНА ДЛЯ ОЦЕНКИ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ М. TUBERCULOSIS В СИСТЕМЕ ВАСТЕС MGIT 960 И МЕТОДОМ АБСОЛЮТНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ НА СРЕДЕ ЛЕ-ВЕНШТЕЙНА-ЙЕНСЕНА

3.1. Формирование стандартной панели клинических штаммов

М tuberculosis

3.2. Определение минимальных ингибирующих концентраций изучаемых фторхинолов

3.2. Установление критических концентраций изучаемых

фторхинолонов

ГЛАВА 4. ТЕСТ-СИСТЕМА SENSITITRE MYCOTB ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ M.TUBERCULOSIS

ГЛАВА 5. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ КЛИНИЧЕСКИХ ШТАММОВ M.TUBERCULOSIS К ПРЕПАРАТАМ ГРУППЫ ФТОРХИНОЛОНОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РАЗ-

ЛИЧНЫХ МЕТОДОВ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВОЗ Всемирная организация здравоохранения

ГКУЗМНПЦ Государственное казенное учреждение здравоох-

борьбы ранения «Московский городской научно-практический

с туберкулезом Центр борьбы с туберкулезом Департамента здра-

дзм воохранения города Москвы»

ди Доверительный интервал

кк Критическая концентрация

л-й Левенштейна-Йенсена плотная питательная среда

ЛУ Лекарственная устойчивость

лч Лекарственная чувствительность

МВТ Микобактерии туберкулеза

мик Минимальная ингибирующая концентрация

МЛУ Множественная лекарственная устойчивость возбу-

дителя

опц Отрицательная прогностическая ценность

ппц Положительная прогностическая ценность

птп Противотуберкулезные препараты

РЕ Ростовые единицы

ШЛУ Широкая лекарственная устойчивость возбудителя

ГТ ST Clinical and Laboratory Standards Institute (Институт

клинических и лабораторных стандартов США)

Bactec 960 Автоматизированная система Bactec™MGIT™960

GTX Гатифлоксацин

LVX Левофлоксацин

МОХ Моксифлоксацин

МусоТВ Тест-система Sensititre МусоТВ

М7Н9 Жидкая среда Middlebrook 7Н9

М7Н10 Агаровая среда Middlebrook 7Н10

OFX Офлоксацин

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Критерии оценки лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis к препаратам группы фторхинолонов культуральными методами»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы

Туберкулез представляет постоянную угрозу здоровью людей во всем мире и является причиной высокой смертности у взрослого населения. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) в 2011 году зарегистрировано около 8,7 млн. новых случаев этого заболевания и 1,4 млн. - летальных [154].

Напряженная эпидемическая ситуация по туберкулезу как в мире, так и в Российской Федерации, прежде всего, связана с увеличением числа случаев заболевания, вызываемых М. tuberculosis (МБТ) с множественной и широкой лекарственной устойчивостью (МЛУ/ШЛУ) [69, 98, 156, 157].

Повышение эффективности этиотропного лечения больных туберкулезом с МЛУ/ШЛУ возбудителя может быть достигнуто за счет введения в стандартные режимы химиотерапии антибактериальных препаратов, входящих в число резервных лекарственных средств, - фторхинолонов третьего и четвертого поколений. Однако вероятность выздоровления пациентов во многом будет зависеть от своевременно назначенного адекватного лечения, от уровня и скорости формирования устойчивости МБТ к препаратам [5, 94, 101, 102, 108]. В связи с этим необходимо быстро и качественно проводить определение лекарственной чувствительности (ЛЧ) возбудителя.

В последние годы разработаны молекулярно-генетические методы, позволяющие в короткие сроки (до 48 часов) определить лекарственную чувствительность МБТ к фторхинолонам [34, 43, 44]. Необходимо отметить, что результатом молекулярно-генетического анализа являются экспресс-данные о наличии или отсутствии устойчивости возбудителя ко всей группе фторхинолонов в целом. В то же время появились работы, в которых показано, что не все мутации, индуцирующие устойчивость МБТ к фторхинолонам, связаны с перекрестной устойчивостью [124]. Кроме того, все чаще обнаруживают мутации, роль которых в возникновении лекарственной устойчиво-

сти до конца не изучена [130]. Следовательно, для определения лекарственной чувствительности МБТ к препаратам группы фторхинолонов применение только молекулярно-генетических методов не может обеспечить необходимую достоверность результатов. Именно поэтому исключительно высока роль использования микробиологических методов, которые в комплексе с молекулярно-генетическими позволят получить наиболее точные и адекватные результаты для проведения больным своевременного эффективного лечения.

Чтобы определить лекарственную чувствительность возбудителя туберкулеза культуральными методами необходимо знать критическую концентрацию (КК) препарата, с помощью которой возможно разделение мико-бактерий на чувствительные и устойчивые [53, 96, 100]. В настоящее время единых критических концентраций резервных препаратов, в том числе и фторхинолонов не предложено. В этой связи вопрос выбора оценочных критериев для качественного и надежного определения лекарственной чувствительности МБТ к препаратам группы фторхинолонов при использовании культуральных методов приобрел особую актуальность.

Цель работы

Определение критериев оценки лекарственной чувствительности М. tuberculosis к препаратам группы фторхинолонов культуральными методами для повышения эффективности микробиологической диагностики туберкулеза, вызванного лекарственно-устойчивым возбудителем.

Задачи исследования

1. Создание лабораторной коллекции чувствительных и устойчивых к фторхинолонам клинических штаммов М. tuberculosis, охарактеризованных культуральными и молекулярно-генетическими методами.

2. Определение критических концентраций левофлоксацина, моксифлоксацина и гатифлоксацина для оценки лекарственной чувствительности М. tuberculosis в жидкой питательной среде Middlebrook 7Н9 с помо-

щью автоматизированной системы Bactec MGIT 960 и на плотной среде Ле-венштейна-Йенсена методом абсолютных концентраций.

3. Выявление устойчивости М. tuberculosis к офлоксацину и моксифлоксацину в жидкой среде Middlebrook 7Н9 с помощью тест-системы Sensititre МусоТВ.

4. Сравнительное изучение лекарственной чувствительности клинических штаммов М. tuberculosis к фторхинолонам разными культуральными методами с использованием установленных оценочных критериев.

Научная новизна

Впервые с использованием единой стандартной панели штаммов М tuberculosis установлены критические концентрации наиболее активных препаратов группы фторхинолонов для оценки лекарственной чувствительности возбудителя туберкулеза в жидкой Middlebrook 7Н9 и на плотной Левен-штейна-Йенсена питательных средах.

Впервые установлено значение критической концентрации гатифлок-сацина - 0,25 мкг/мл; обоснованы критические концентрации левофлоксаци-на - 1,0 мкг/мл и моксифлоксацина - 0,25 мкг/мл для оценки лекарственной чувствительности М. tuberculosis в автоматизированной системе Bactec MGIT 960.

Впервые определены значения критических концентраций левофлок-сацина - 2,0 мкг/мл, моксифлоксацина и гатифлоксацина - 0,75 мкг/мл для оценки лекарственной чувствительности М. tuberculosis методом абсолютных концентраций на плотной среде Левенштейна-Йенсена.

Установлены значения минимальных ингибирующих концентраций офлоксацина - 4,0 мкг/мл и моксифлоксацина - 1,0 мкг/мл, указывающие на устойчивость М. tuberculosis к данным препаратам в тест-системе Sensititre МусоТВ (количественный метод).

Впервые проведено сравнительное исследование лекарственной чувствительности клинических штаммов М. tuberculosis к препаратам фторхино-лонового ряда в тест-системе Sensititre МусоТВ, системе Bactec MGIT 960 и

методом абсолютных концентраций на среде Левенштейна-Йенсена с использованием для анализа результатов установленных оценочных критериев. Выявлен высокий уровень корреляции результатов.

Практическая значимость

Для раннего выявления устойчивости М. tuberculosis целесообразно применять систему Bactec MGIT 960 или тест-систему Sensititre МусоТВ, которые, в отличие от метода абсолютных концентраций с длительностью выполнения исследования 21-28 дней, позволяют получить результат на 5-14 день от начала инкубации, а также провести быструю коррекцию химиотерапии больных туберкулезом.

С помощью установленных в тест-системе Sensititre МусоТВ минимальных ингибирующих концентраций офлоксацина и моксифлоксацина можно выявить степень относительной устойчивости к ним (низкая или высокая,) М. tuberculosis, что необходимо клиницисту для выбора препарата из группы фторхинолонов, корректировки дозировки и схемы лечения пациента.

Созданная лабораторная коллекция клинических штаммов М. tuberculosis, охарактеризованных микробиологическими и молекулярно-генетическими методами и обладающих различным спектром лекарственной устойчивости к препаратам фторхинолонового ряда, позволит в дальнейшем проводить сравнительные исследования лекарственной чувствительности возбудителя к вновь синтезированным препаратам данной группы, а также апробировать новые методы микробиологической диагностики туберкулеза.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Для оценки лекарственной чувствительности М. tuberculosis установлены критические концентрации препаратов группы фторхинолонов. Для автоматизированной системы Bactec MGIT 960 с использованием жидкой питательной среды Middlebrook 7Н9 и метода абсолютных концентраций на плотной среде Левенштейна-Йенсена критические концентрации левофлок-

сацина составили 1,0 и 2,0 мкг/мл, соответственно, моксифлоксацина и га-тифлоксацина - 0,25 и 0,75 мкг/мл, соответственно.

2. Установленные в тест-системе Sensititre МусоТВ минимальные ин-гибирующие концентрации офлоксацина - 4,0 мкг/мл и моксифлоксацина -1,0 мкг/мл, указывают на устойчивость М. tuberculosis к этим препаратам.

3. Сравнительное изучение лекарственной чувствительности клинических штаммов М. tuberculosis в системе Bactec MGIT 960 и методом абсолютных концентраций на плотной среде Левенштейна-Иенсена при использовании установленных критических концентраций препаратов выявило высокий процент корреляции полученных результатов: для левофлоксацина в 99,0%, для моксифлоксацина в 97,1% и для гатифлоксацина в 96,1% случаев.

4. Данные, полученные в результате определения лекарственной чувствительности клинических штаммов М. tuberculosis тремя культуральными методами (в тест-системе Sensititre МусоТВ, в системе Bactec MGIT 960 и методом абсолютных концентраций на плотной среде Левенштейна-Йенсена), сопоставимы в 89,3% случаев для офлоксацина и в 94,6% - для моксифлоксацина.

Апробация диссертации и публикации

Диссертация апробирована на заседании Ученого совета ГКУЗ МНПЦ борьбы с туберкулезом ДЗМ, протокол №1 от 5 марта 2013 года.

Материалы диссертации доложены на:

- научно-практической конференции молодых ученых «Новые технологии в диагностике и лечении туберкулеза взрослых и детей», Москва, 2009;

- научно-практической конференции молодых ученых «Новые технологии в эпидемиологии, диагностике и лечении туберкулеза взрослых и детей», Москва, 2011;

- Всероссийской научно-практической конференции «Совершенствование медицинской помощи больным туберкулезом», Санкт-Петербург, 2011;

- X Московской ассамблее «Здоровье столицы», Москва, 2011;

- XI Московской ассамблее «Здоровье столицы», Москва, 2012;

- Российской научно-практической конференции молодых ученых с международным участием «Новые технологии в эпидемиологии, диагностике и лечении туберкулеза взрослых и детей», Москва, 2013;

- V Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням, Москва, 2013.

Основное содержание диссертации отражено в 11 опубликованных работах, включая 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 102 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Библиография включает 164 наименования, из них 82 на русском и 82 на иностранных языках. Диссертация иллюстрирована 6 рисунками и 23 таблицами.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Туберкулез является сложной многоуровневой медико-биологической и социальной проблемой, привлекающей к себе внимание многочисленных исследователей [3, 7, 70, 97]. На стыке XX и XXI веков туберкулез приобрел особую актуальность благодаря целому комплексу проблем, обусловивших специфичность развития эпидемического процесса данного заболевания в условиях одновременного разнонаправленного воздействия социально-экономических и медико-биологических факторов, развития медицинской науки в условиях перманентного реформирования системы здравоохранения [4, 57, 61]. Одной из самых значимых проблем во фтизиатрии, во многом определивших развитие эпидемического процесса в последние десятилетия, является все более широкое распространение устойчивости МБТ к противотуберкулезным препаратам (ПТП) [13, 39, 55, 56, 89, 156]. Данный феномен явился объектом изучения для исследователей, которых интересовали медико-биологические аспекты [4, 57, 61], влияние МЛУ МБТ на эффективность лечения больных, а также разработка организационных мероприятий, направленных на нивелирование последствий широкого распространения МЛУ возбудителя [37, 56, 64, 70, 155].

1.1. Понятие о лекарственной устойчивости М. tuberculosis

Лекарственная устойчивость (ЛУ) - это природная или приобретенная способность возбудителя заболевания сохранять жизнедеятельность при воздействии на него лекарственного средства. Она определяется как снижение чувствительности до такой степени, что данный штамм микроорганизмов способен размножаться при воздействии на него препарата в критической или более высокой концентрации. Развитие у микроорганизмов устойчивости к используемым для борьбы с ними препаратам является одним из проявлений фундаментального биологического свойства всех живых организмов — приспособляемости к изменениям условий внешней среды [48, 56].

Развитие ЛУ является неизбежным следствием применения антибактериальных препаратов. Впервые о приобретенной ЛУ МВТ было сообщено в 1940-х годах, вскоре после открытия и использования для лечения туберкулеза стрептомицина [126, 133]. На сегодняшний день развитие ЛУ МБТ в разной степени наблюдается в отношении всех известных ПТП, применяемых в схемах лечения больных туберкулезом [37, 39, 54, 72, 164].

Согласно современной классификации, выделяют два вида ЛУ: первичную и вторичную или приобретенную. Больные, никогда ранее не получавшие ПТП более одного месяца, однако, выделяющие лекарственно-устойчивые штаммы, инфицированы ими изначально, что говорит о генети-чески-детерминированной (первичной) устойчивости микроорганизма. Приобретенная (вторичная) ЛУ к ПТП развивается в результате неадекватной терапии, в случае невыполнения больным врачебных рекомендаций или прерывания лечения [48, 56].

Устойчивость возбудителя к ПТП обусловлена возникновением одной или нескольких хромосомных мутаций в генах МБТ, которые, как правило, происходят под действием неадекватной терапии или монотерапии [48, 72, 164].

В процессе размножения МБТ устойчивость к ПТП может развиваться и спонтанно, без какого-либо влияния этих препаратов, но лишь с определенной частотой. Устойчивая к воздействию ПТП микобактериальная клетка может появляться при каждом делении микобактерий. Частота такой спонтанной мутации может быть высокой, но обычно не более 10"6 [48, 75].

Осложненное течение туберкулеза связано с увеличением количества штаммов МБТ, устойчивых к наиболее эффективным химиопрепаратам основного ряда - изониазиду и рифампицину, так называемая МЛУ (MDR-multi drug resistance) [157].

В 2008 году ВОЗ выделила четыре страны, которые имели наибольшее количество предполагаемых случаев туберкулеза с МЛУ возбудителем в мире [155]. На третьем месте по числу таких случаев, уступив Китаю (100000),

Индии (99000) и обойдя Южную Африку (13000 случаев), была Российская Федерация (38000). В 2011 году почти 60% случаев туберкулеза с МЛУ возбудителем в мире приходилось на долю вышеуказанных стран [157]. Чрезвычайно серьезной проблемой здравоохранения является быстро прогрессирующее увеличение числа случаев туберкулеза с МЛУ возбудителем у впервые выявленных больных. Если в 2000 году в мире доля этого заболевания среди новых случаев составляла 1% [69], то в 2011 - 3,7% [157]. В 2010 году в среднем по России доля таких больных составила 14,4% [69], в Москве -13,3% [29].

Сочетание туберкулеза с МЛУ МВТ одновременно с устойчивостью к двум другим классам препаратов, по крайней мере, к одному из фторхиноло-нов и одному из инъекционных препаратов - амикацину, канамицину или капреомицину, создало новую угрозу распространения туберкулеза с ШЛУ (XDR-extensive drug resistance), о случаях которого впервые было объявлено в 2006 году [98, 156]. По данным ВОЗ (2012) к марту 2013 года в 84 странах, включая Российскую Федерацию, был зарегистрирован, по крайней мере, один случай туберкулеза с ШЛУ МБТ. В настоящее время заболеваемость туберкулезом с ШЛУ МБТ составляет в среднем 9% от обнаруженных случаев туберкулеза с МЛУ МБТ [156].

Нарастание туберкулеза с МЛУ/ШЛУ МБТ практически неизменно связано с ВИЧ-инфекцией [69, 106]. По оценкам ВОЗ, в 2011 году из 8,7 миллиона новых случаев туберкулеза приблизительно 1,1 миллион заболевших людей были ВИЧ-положительными. Наибольшее число таких случаев (79%) насчитывалось в Африканском регионе [156]. Около 430 000 человек в 2011 году умерли от ВИЧ-ассоциированного туберкулеза. Почти 25% случаев смерти среди людей с ВИЧ-инфекцией были вызваны туберкулезом. В Российской Федерации в 2010 году всего выявлено 10617 случаев туберкулеза, сочетанного с ВИЧ-инфекцией и это в 1,8 раза больше по сравнению с 2007 годом [69]. На поздних стадиях ВИЧ-инфекции почти у 60% больных был диагностирован туберкулез [69].

Согласно опубликованным Г.Е. Фрейманом (2012) данным по JI4 МБТ к основным ПТП, полученным в Централизованной бактериологической лаборатории ГКУЗ МНПЦ борьбы с туберкулезом ДЗМ, число устойчивых культур ежегодно увеличивается. Если в 2005 году выделено 46,7% устойчивых к стрептомицину культур МБТ, 53,4% - устойчивых к изониазиду, 33,0% - рифампицину и 8,2% - этамбутолу, то в 2009 г. удельный вес таких культур увеличился до 60,8%; 54,5%; 45,1% и 41,3%, соответственно [73].

Инфицирование лекарственно-устойчивыми штаммами МБТ представляет собой реальную угрозу здоровью населения в результате развития трудноизлечимого заболевания. Возрастание ЛУ МБТ ставит под сомнение успех мероприятий по борьбе с туберкулезом, поэтому раннее и достоверное выявление лекарственно-устойчивых штаммов представляется особенно актуальным [5, 6, 8, 42, 73, 74, 107, 155].

1.2. Принципы и методы культурального определения лекарственной чувствительности М. tuberculosis

С введением во фтизиатрическую практику этиотропного лечения встала задача изучения ЛЧ МБТ к ПТП. Перед микробиологами был поставлен вопрос о создании новых методов лабораторного исследования. Определять ЛЧ МБТ начали во второй половине прошлого столетия. Были предложены, изучены и внедрены в практику различные методы с использованием на первых этапах плотных питательных сред, а затем и жидких, а также прямых и непрямых способов ее определения [27, 31, 51, 52, 95, 96].

Экспертный комитет ВОЗ по туберкулезу в 1960 году отметил потребность в международных стандартах по определению ЛЧ МБТ, которые позволили бы сопоставлять результаты, полученные различными методами, и рекомендовал сделать соответствующие шаги по их установлению. На международной конференции в г. Женеве была проведена первая попытка сформулировать критерии определения ЛЧ МБТ с помощью надежных тестов. В результате были созданы рекомендации относительно определения ЛЧ МБТ к трем основным на тот период ПТП - стрептомицину, изониазиду и ПАСК с

помощью методов: абсолютных концентраций, коэффициента резистентности и пропорций. Данные рекомендации распространялись только для использования плотной питательной среды Левенштейна-Иенсена (Л-И), принятой ВОЗ за международный стандарт для определения ЛЧ МБТ к ПТП. Также международной конвенцией были приняты значения критических и высоких концентраций ПТП для оценки ЛЧ МБТ [96].

В последующем было высказано предположение, что исследования ЛЧ могли бы найти практическое применение в программе контроля туберкулеза. Это получило отражение в работе G. Conetti и соавт. (1969), в которой описан метод коэффициента резистентности, применяемый в то время Medical Research Council of Great Britain для оценки ЛЧ к препаратам основного и резервного ряда, а именно: стрептомицину, изониазиду, ПАСК, этио-намиду, циклосерину, канамицину, виомицину, тиоацетазону и пиразинами-ду с использованием минимальных ингибирующих концентраций (МИК) данных лекарственных средств [95]. Этими же авторами были представлены упрощенные и стандартные варианты метода пропорций для оценки ЛЧ МБТ к вышеперечисленным ПТП и дополнительно к капреомицину, этамбу-толу и рифампицину.

Таким образом, было положено начало стандартизации методов определения ЛЧ МБТ.

В дальнейшем с совершенствованием бактериологической диагностики туберкулеза изменялись и методы определения ЛЧ [51, 52]. Принципы и целесообразность использования микробиологических методов, сформулированные еще в 1960-х годах, почти не изменились, о чем свидетельствуют основные положения современных регламентаций, одобренных ВОЗ в 2008 году [158]. В действующем в настоящее время Приказе №109 МЗ РФ (2003) систематизированы подходы к определению ЛЧ МБТ в Российской Федерации [53]. Прежде всего, определение ЛЧ возбудителя туберкулеза является обязательным при его выделении первично, а в остальных случаях кратность и сроки определяют на основании клинической значимости. Следует учиты-

вать также, что в клинической практике результаты микробиологического исследования ЛЧ МВТ всегда нужно сопоставлять с данными, отражающими характер и динамику туберкулезного процесса [53, 100, 158].

Микобактерия туберкулеза - внутриклеточный патоген. А как известно внутриклеточная концентрация лекарственного препарата и его активность могут значительно отличаться от соответствующих показателей в сыворотке и/или других внеклеточных жидкостях [16, 18, 100, 158]. Микобактериальная популяция также часто неоднородна и состоит из микобактерий с различной степенью активности метаболических процессов и жизнеспособности, от которой в значительной мере зависит способность микобактерий размножаться. При этом, находящиеся в различных участках туберкулезной гранулемы микобактерии размножаются с различной интенсивностью. Кроме того, существуют еще дормантные (дремлющие) формы персистирующих микобактерий (L-формы), способные многие годы бессимптомно находиться в организме [11]. Эффективность лекарственного препарата может отличаться в отношении таких различных популяций; при этом, как известно, лекарственные препараты способны убивать только полностью жизнеспособные микроорганизмы [64, 70, 133], следовательно, при продолжительном лечении не все микобактерии погибают, но при определении ЛЧ какое-то время может выявляться их чувствительность к ПТП. Вследствие этого определение ЛЧ МВТ in vitro существенно отличается от способов оценки ЛЧ аэробных и факультативных бактерий и прямо или косвенно воздействует на получение результатов [45, 53]. Эксперты ВОЗ полагают, что первые результаты определения ЛЧ не всегда точно могут характеризовать бактериальную популяцию и при планировании тактики лечения врачам-клиницистам также следует руководствоваться результатами, полученными более современными экспресс-методами (колориметрические, с применением бактериофагов, гено-типические) [158]. Однако, все эти методы находятся на этапе разработки и предназначены по большей части только для определения ЛЧ к ПТП основного ряда. Также следует учесть, что в клинической практике результаты

микробиологического исследования JI4 МВТ всегда нужно сопоставлять с данными, отражающими характер и динамику туберкулезного процесса. Отмену химиопрепарата, к которому выявлена ЛУ МБТ, производить только при неэффективности химиотерапии или снижении ее эффекта в процессе лечения, в частности при продолжающемся выделении микобактерий [37, 53, 100, 158].

Известно, что основанием для дифференциации чувствительных и устойчивых штаммов МБТ к ПТП служит неспособность возбудителя расти или продолжать размножение на питательной среде, содержащей препарат в КК [40, 53, 62, 96, 100]. Поэтому значение КК для оценки ЛЧ МБТ является важным для предсказания клинической эффективности лекарственного препарата. Информация о наличии устойчивости штамма МБТ к КК ПТП должна насторожить лечащего врача, поскольку количество устойчивых особей может увеличиться в результате селекции при лечении этим препаратом. Общепринятым считается, что для каждого препарата критической является наименьшая концентрация, подавляющая рост не менее 95% штаммов МБТ «дикого типа», не подвергнутых воздействию данного лекарственного препарата, но одновременно не препятствующая размножению устойчивых штаммов, выделенных от больных, не отвечающих на химиотерапию [100]. Как правило, значение КК должно находится между наивысшей МИК, выявленной для «диких» штаммов и низшей МИК, выявленной для заведомо устойчивых штаммов [62, 63]. Учитывая, что состав и характеристики мико-бактериальной популяции со временем претерпевают изменения, необходимо периодически корректировать значения КК препаратов [70]. Для разных по составу питательных сред и методов определения ЛЧ величина КК одного и того же лекарственного препарата может различаться [63, 75].

Считается доказанным, что штамм является устойчивым в том случае, если доля устойчивых микобактерий среди всей микробной популяции больного достигает более 1% (10% для пиразинамида) [53, 100]. Эта часть микробной популяции уже через месяц способна вытеснить исходную и сформи-

ровать очаг поражения. Критерием устойчивости к ПТП второго ряда служит 10% рост микробной популяции [100].

Исследование ЛЧ МВТ с использованием, кроме критической еще и высокой концентрации препарата, позволяет установить степень устойчивости микобактерий в пределах популяции и тем самым прогнозировать эффективность лечения данным препаратом [53]. Наличие устойчивости штамма МВТ к КК препарата указывает на низкий уровень устойчивости, тогда как устойчивость к высокой концентрации - на высокий. Таким образом, КК соответствует значение пограничное для чувствительных и умеренно устойчивых штаммов, а высокой концентрации - для умеренно-устойчивых и устойчивых. Результат определения ЛЧ МВТ к обеим концентрациям ПТП дает врачу-клиницисту информацию для принятия решения о необходимости модификации режима химиотерапии.

В микробиологии также используются определение основного количественного показателя, характеризующего микробиологическую активность антибактериального препарата - величины минимальной концентрации, подавляющей видимый рост исследуемого микроорганизма в бульонной культуре или на плотной среде [45, 100]. Установление данного показателя в отношении МВТ позволяет оценить степень устойчивости возбудителя к конкретному препарату.

Во фтизиатрии ПТП принято делить на три группы: препараты первого, второго и третьего ряда [56]. Противотуберкулезные препараты первого (основного) ряда: препараты, включенные в стандартные режимы лечения туберкулеза - стрептомицин, изониазид, рифампицин, этамбутол и пирази-намид. Противотуберкулезные препараты второго ряда (резервные): препараты, рекомендуемые к использованию при наличии устойчивости возбудителя к препаратам первого ряда - циклосерин, этионамид, протионамид, канами-цин, капреомицин, амикацин, ПАСК, фторхинолоны. Противотуберкулезные препараты третьего ряда (альтернативные): в некоторых публикациях так именуются препараты, обладающие противотуберкулезной активностью, но

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Исаева, Юлия Дмитриевна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Балабанова Я. М., Дробниевский Ф., Федорин И.М. и др. Оптимизация лабораторной диагностики туберкулеза с использованием современных бактериологических и молекулярно-генетических методов // Туберкулез и болезни легких. - 2011. - №2. - С. 36-43.

2. Барило В.Н., Кузьмин А.В., Черноусова JI.H. и др. Ускоренное определение чувствительности Mycobacterium tuberculosis к основным противотуберкулезным препаратам в системе «ВАСТЕС MGIT 960» и на биочипах «ТБ-БИОЧИП» // Туберкулез и болезни легких. - 2009. - №11. - С. 56-60.

3. Белиловский Е.М., Борисов С.Е., Дергачев А.В. и др. Заболеваемость туберкулезом в России: ее структура и динамика // Проблемы туберкулеза и болезни легких. - 2003. - №7. - С. 4-11.

4. Богородская Е.М., Смердин С.В., Стерликов С.А. Организационные аспекты лечения больных туберкулезом в современных социально-экономических условиях // М.: Нью-Терра. -2011.-216с., ил.

5. Борисов С.Е., Мохирева Л.В., Иванушкина Т.Н. и др. Фторхинолоны в лечении туберкулеза - в поисках новой парадигмы (обзор зарубежной литературы) // Туберкулез и болезни легких. - 2011. - №12. - С. 5-16.

6. Васильева И.А., Самойлова А.Г., Багдасарян Т.Р. и др. Зависимость результатов лечения больных туберкулезом легких от спектра лекарственной устойчивости возбудителя // Туберкулез и болезни легких. - 2011. - №10. С. 28-32.

7. Вопросы патологии туберкулеза и изменчивости его возбудителя / Под ред. А.И. Струкова и М.Н. Лебедевой // М.: Гос. изд-во мед. лит-ры «Медгиз», 1956. - 174 с.

8. Голышевская В.И. Бактериологические исследования при болезнях легких // Пробл. туберкул, и болезн. легких. - М. - 1997. - № 5. - с. 51-53.

9. Голышевская В.И., Пузанов В.А., Севастьянова Э.В. и др. Достижения и перспективы микробиологической диагностики туберкулеза // Пробл. туберкул, и болезн. легких. - №7. - 2001. - с. 55-59.

10. Голышевская В.И., Севастьянова Э.В., Иртуганова O.A. и др. Современное состояние лабораторной службы России по диагностике туберкулеза: основные проблемы и пути их преодоления // Пробл. туберкул, и болезн. легких. - М. 2006. - № 12. - с. 36-43.

11. Дорожкова И.Р. Формы персистирования микобактерий туберкулеза в организме человека // Дисс. д-ра мед. наук. - М., 1974. - 418 с.

12. Дорожкова И.Р., Носова Е.Ю., Абрамова З.П. и др. Успешное решение многолетней проблемы экспресс-диагностики возбудителя туберкулеза и его лекарственной чувствительности к препаратам I и II ряда // Тезисы докладов III Научно-практической конференции «Современные технологии и методы диагностики различных групп заболеваний, лабораторный анализ». — М., 2010.-С. 28-29.

13. Дорожкова И.Р., Попов С.А., Медведева И.М. Мониторинг лекарственной устойчивости при туберкулезе в России в 1979-1998 г.г. // Пробл. туберкул, и болезн. легких. - 2000. - №5. - С. 19-22.

14. Дорожкова И.Р., Фрейман Т.Е., Абрамова З.П. и др. Новая технология для скрининга туберкулеза легких // Рос. мед. журнал. - 2007. - №2. -С. 12-15.

15. Дорожкова И.Р., Фрейман Г.Е., Макарова М.В. и др. Централизованная микобактериологическая лаборатория: организация, задачи и современные методы исследования. Научные труды. К 70-летию В.И. Летвинова // М.: МНПЦБТ, 2011. - С. 14-27.

16. Драбкина Р. О. Микробиология туберкулеза // М.: Гос. изд-во мед. лит-ры «Медгиз», 1963. - 255 с.

17. Зоркальцева Е.Ю. Гатифлоксацин (зарквин) в лечении инфекционной патологии // Туберкулез и болезни легких - 2010. - №5. - С. 64-68.

18. Зыков М.П. Микробиология туберкулеза // JL: Медицина, 1976. -

160 с.

19. Иванов И.Ю. Молекулярно-генетическое изучение клинических штаммов Mycobacterium tuberculosis!IДисс. канд. биол. наук. Оболенск Моск. обл.-2004.- 105 с.

20. Иртуганова O.A. Современные возможности микобактериологиче-ской лаборатории // Клиническая лабораторная диагностика. - 2006. - № 1.— С. 21-35.

21. Иртуганова O.A., Лобашева Г.П., Мороз A.M. и др. Автоматизированные системы выявления роста M.tuberculosis Bactec MGIT 960 и MB/Bact: сравнительный анализ // Материалы IV съезда научно-медицинской ассоциации фтизиатров. Тезисы докладов. - Йошкар-Ола. - 1999. - С. 241.

22. Иртуганова O.A., Смирнова Н.С. Лабораторная диагностика туберкулеза / Под ред. В.И. Литвинова, A.M. Мороза // М., 2001. - С. 39-50.

23. Иртуганова O.A., Смирнова Н.С., Мороз A.M. и др. Ускоренная культуральная диагностика туберкулеза с использованием автоматизированных систем BACTEC MGIT 960 и МВ/ВАСТ // Методические рекомендации. -М. -2001.

24. Иртуганова О.И., Смирнова Н.С., Слогоцкая Л.В. и др. Автоматизированные методы культурального определения M.tuberculosis на жидких средах // Пробл. туберкул, и болезн. легких. - 2001. - №3. - с.53-55.

25. Иртуганова О.И., Смирнова Н.С., Слогоцкая Л.В. и др. Бактериологические методы определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза // В сб.: Туберкулез сегодня: проблемы и перспективы. — М. -2000.-с. 73-75.

26. Исакова Ж.Т., Совхозова H.A., Гончарова З.К. и др. Сравнительный анализ определения лекарственно-устойчивых штаммов М. tuberculosis бактериологическим методом абсолютных концентраций и методом биологических микрочипов//Туберкулез и болезни легких. - 2011. -№3. - С. 57-59.

27. Клебанова A.A. Микробиологическая диагностика туберкулеза. Руководство по туберкулезу. T.I, под. ред. B.JI. Эйниса // М.: Гос. изд-во мед. лит-ры «Медгиз», 1959. - С. 384-408.

28. Лазарева Н.Б., Хайменова Т.Ю., Хайменов А .Я. Роль респираторных фторхинолонов в лечении туберкулеза легких при неэффективности препаратов первой линии // Антибиотики и химитерапия. - 2008. -№5-6. - С. 14-20.

29. Литвинов В.И., Сельцовский П.П., Рыбка Л.Н. и др. Туберкулез в городе Москве (2011). Аналитический обзор // М.: МНПЦБТ., 2012. - 249 с.

30. Макаревич Н.М., Благодарный Я.А., Ильина Т.Б. и др. Выявление и дифференциальная диагностика кислотоустойчивых микобактерий // Микробиологические методы исследования в современной фтизиопульмонологи-ческой клинике / Сб. трудов ЦНИИТ МЗ СССР, том XXXI // М., 1981. - С. 33-38.

31. Методическое письмо по организации и производству бактериологических исследований на туберкулез и определению лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза. МНИИТ МЗ РСФСР//М. - 1960. - 27с.

32. Можокина Г.Н., Соколова Г.Б., Дашиева Д.Г. и др. Сравнительная эффективность лечения моксифлоксацином и ломефлоксацином генерализованного туберкулеза мышей, вызванного лекарственно-устойчивым штаммом микобактерий // Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2005 - №2. - С. 19-22.

33. Мороз A.M. Лабораторная диагностика туберкулеза: реальность и перспективы // В сб.: Туберкулез сегодня: проблемы и перспективы. - М. -2000.-С. 64-65.

34. Мороз A.M., Носова Е.Ю., Галкина К.Ю. и др. Определение лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis с помощью биочипов // Методические рекомендации. М. - 2008. - 26 с.

35. Мороз A.M., Стерликов С.А., Скачкова Е.И. и др. Лабораторная диагностика туберкулеза с использованием биологических чипов // М.: РИО ЦНИИОИЗ. - 2009. - 52 с.

36. Методики клинических лабораторных исследований: Справочное пособие. Том 3. Клиническая микробиология. Бактериологические исследования. Микологические исследования. Паразитологические исследования. Инфекционная иммунодиагностика. Молекулярные исследования в диагностике инфекционных заболеваний / Под. ред. В.В. Меньшикова. - М.: Лабоа, 2009. - 880 с.

37. Мишин В.Ю. Химиотерапия туберкулеза легких. Сборник статей по химиотерапии туберкулеза в современных эпидемиологических условиях //М., 2008.-С. 29-50.

38. Мишин В.Ю., Чуканов В.И., Васильева. Эффективность лечения туберкулеза легких, вызванного микобактериями с множественной лекарственной устойчивостью // Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2002. -№12.-С.18-23.

39. Нечаева О.Б. Скачкова Е.И. Причины и факторы формирования лекарственной устойчивости при туберкулезе легких // Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2003. - №9. - С. 6-9.

40. Низова A.B. Изучение устойчивости к лекарственным препаратам первой и второй линии штаммов Mycobacterium tuberculosis, выделенных от больных с хроническим течением туберкулеза // Автореферат канд. биол. наук. М., 2009. - 22 с.

41. Новикова Т.И., Одинец B.C., Макрушникова А.И. и др. Микробиологические методы диагностики лекарственной резистентности на современном этапе // Материалы IV съезда научно-медицинской ассоциации фтизиатров. Тезисы докладов. - Йошкар-Ола. - 1999. - с. 32.

42. Новожилова И.А. Значимость определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза для успешного лечения туберкулеза легких // Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2004. - №4. - С. 29-31.

43. Носова Е.Ю., Галкина К.Ю., Антонова О.В. Молекулярно-биологический микрочип ТБ-БИОЧИП-2 для определения чувствительности М. tuberculosis с множественной устойчивостью к фторхинолонам у больных с впервые выявленным и хроническим течением туберкулеза // Вестник РАМН. - 2008. - №3. - с. 16-19.

44. Носова Е.Ю., Краснова М.А., Галкина К.Ю. и др. Молекулярно-генетические исследования при туберкулезе. Научные труды. К 70-летию В.И. Летвинова // М.: МНПЦБТ, 2011. - С. 155-175.

45. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Методические указания МУК 4.2.1890-04 от 4 марта 2004 года. - Режим доступа : http://www.antibiotic.ni/cmac/pdf/6 4 306.pdf

46. Падейская E.H., Яковлев В.П. Антимикробные препараты группы фторхинолонов в клинической практике // М.: Логата, 1998. - 352 с.

47. Перельман М.И., Соколова Г.Б., Можокина Г.Н. и др. Оптимизация комплексной химиотерапии туберкулеза при использовании моксифлок-сацина // Антибиотики и химиотерапия. - 2004. - №6. - С. - 20-24.

48. Попов С.А., Пузанов В.А., Нарвская О.В. Лекарственная устойчивость // Фтизиатрия: национальное руководство / Под ред. М.И. Перельмана. -М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. - С. 87-91.

49. Попов С.А., Пузанов В.А., Сабгайда Т.П. Проблемы мониторинга туберкулеза с лекарственной устойчивостью в Российской Федерации. Оценка результатов первого цикла мониторинга // Туберкулез и болезни легких — 2011.-№10. -С. 16-21.

50. Попов С.А., Сабгайда Т.П. Основные направления развития лабораторной диагностики туберкулеза (по материалам 42-й международной конференции международного союза борьбы против туберкулеза и болезней легких, г. Лиль, Франция, 26-30 октября 2011 г.) // Туберкулез и болезни легких.- 2012.-№6.-С. 3-13.

51. Приказ №250 МЗ СССР от 13 марта 1975 г. Методические указания по применению унифицированных клинических лабораторных методов

исследований. Определение чувствительности микроорганизмов к химиоте-рапевтическим препаратам // М. - 1976. — 29 с.

52. Приказ №558 МЗ СССР от 08 июля 1978 г. «Об унификации микробиологических методов исследования при туберкулезе» // М., 1978. - 72 с.

53. Приказ №109 МЗ РФ от 21 марта 2003 г. «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации». - М. - 2003. - 345 с.

54. Пунга В.В., Русакова Л.И., Пузанов В.А. и др. Распространенность туберкулеза с лекарственной устойчивостью // Туберкулез и болезни легких. -2011. -№10. - С. 6-15.

55. Рудой Н.М. Лекарственная устойчивость микобактерий туберкулеза (значение в клинике и эпидемиологии туберкулеза) // М.: Изд-во «Медицина», 1969. - 287 с.

56. Самойлова А. Г. Организация лечения туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью микобактерий в условиях угрозы развития эпидемии в Архангельской области // Дисс. канд. мед. наук. - Архангельск, 2005. - 147 с.

57. Сельцовский П.П., Литвинов В.И. Социальные аспекты эпидемиологической ситуации по туберкулезу // М.: МНПЦБТ. -2004. - 224 е., ил.

58. Соколова Г.Б. Левофлоксацин (Таваник) в комплексной терапии туберкулеза. Информационное письмо для врачей-фтизиатров // М., 2004. -С. 8.

59. Соколова Г.Б., Киртаева О.В., Лазарева Я.В. Флорацид - отечественный фторхинолон III поколения, в комплексной терапии туберкулеза // Антибиотики и химиотерапия, 2008, 53 С. 28-31.

60. Соколова Г.Б., Хайменова Т.Ю., Лазарева Я.В. и др. Спарфлокса-цин в комплексной терапии туберкулеза легких // Антибиотики и химиотерапия. - 2008. - Том 53. - № 5/6. - С. 21-27.

61. Стародубов В.И., Перельман М.И., Борисов С.Е. Туберкулез в России. Проблемы и пути их решения // Большой целевой журнал о туберкулезе. - 1999. - №2. - С.15-17.

62. Степаншина В.Н., Низова А.В., Мухина Т.Н. и др. Определение критических концентраций канамицина, капреомицина и офлоксацина, используемых для оценки лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis методом абсолютных концентраций на питательной среде Левен-штейна-Йенсена // Методические рекомендации ФГУН ГНЦГТМБ. -М. -2009.- 12 с.

63. Степаншина В.Н., Попов С.А., Апарина Н.А. и др. Определение критической концентрации канамицина для Mycobacterium tuberculosis в системе MGIT ВАСТЕС 960 // Туберкулез и болезни легких. - 2009..- №12. -С. 71-78.

64. Страчунский Л.С., Козлов С.Н. Современная антимикробная химиотерапия. Руководство для врачей // М.: Боргес, 2002. - 436 с.

65. Скотникова О.И., Соболев А.Ю., Носова Е.Ю. и др. Mycobacterium tuberculosis, ее выявление и определение лекарственной чувствительности / В сб.: Туберкулез сегодня: проблемы и перспективы // М. - 2000. - с. 84-85.

66. Скрягина Е.М., Залуцкая О.М., Рот А. и др. Тестирование лекарственной чувствительности микобактерий туберкулеза с использованием различных методов // Проблемы туберкулеза и болезней легких - 2001. -№5. -С. 43-45.

67. Теория и практика советской фтизиатрии / Под ред. проф. Ф.В. Шебанова. М.: Изд-во «Медицина», 1969. - 303 с.

68. Томан К. Туберкулез: выявление и химиотерапия. Вопросы и ответы // ВОЗ. Женева, 1980. - 298 с.

69. Туберкулез в Российской Федерации, 2010 г. Аналитический обзор статистических показателей, используемых в Российской Федерации. - М., 2011.-280 с.

70. Туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью (перевод с англ.) / Под ред. И. Бастиана, Ф. Порталса // Изд-во «Медицина и жизнь», 2003. - 268 с.

71. Тунгусова О.С. Молекулярно-генетические аспекты развития лекарственной устойчивости в условиях угрозы развития эпидемии туберкулеза в Архангельской области//Дисс. докт. мед. наук. Архангельск. - 2004. - 229с.

72. Тунгусова О.С., Марьяндышев А.О. Молекулярные механизмы формирования лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза (обзор литературы) // Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2001. -№6. -С. 48-49.

73. Фрейман Г.Е. Диагностика туберкулеза в современной централизованной микобактериологической лаборатории г. Москвы // Автореферат дисс. канд. мед. наук. - М. - 2012. - 28 с.

74. Фрейман Т.Е., Дорожкова И.Р., Абрамова З.П и др. Возможности ускоренного выявления возбудителя туберкулеза в централизованной микобактериологической лаборатории с помощью автоматизированной системы ВАСТЕС MGIT 960 // Сб.научн. тр. МНПЦ БТ. - М. - 2007. - С.12-15.

75. Хейфец Л.Б. Микробиологические аспекты выявления больных туберкулезом с лекарственной устойчивостью // Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2004. - №5. - С. 3-6.

76. Химиотерапия туберкулеза легких / Под ред. А.Г. Хоменко; АМН СССР // М.: Медицина, 1980, 280 е., ил.

77. Яковлев В.П., Литовченко К.В. Левофлоксацин - новый антимикробный препарат группы фторхинолонов // Инфекция и антимикробная терапия. - 2001.- №3 (5).- С. 132-140.

78. Яковлев В.П., Яковлев C.B. Моксифлоксацин - новый антимикробный препарат из группы фторхинолонов // М.: Информэлектро, 2002. -160 с.

79. Яковлев C.B., Яковлев В.П. Левофлоксацина- новый антимикробный препарат из группы фторхинолонов // М.: Дипак, 2006. - 240 с.

80. Ященко Т.Н., Немсадзе М.Н. Сборник методических материалов по микробиологической диагностике при туберкулезе. Алма-Ата. - 1976. -180 с.

81. Adjers-Koskela К., Katila М., Susceptibility testing with the Manual Mycobacteria Growth Indicator Tube (MGIT) and the MGIT 960 system provides rapid and reliable verification of multidrug-resistant tuberculosis // J. Clin. Microbiol. -2003. - Vol.41. - P. 1235-1239.

82. Abuali M., Katariwala R., LaBombardi V. A comparison of the Sensitive® MYCOTB panel and the agar proportion method for the susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. - 2011. -Vol. 31.-P. 835-839.

83. Alvirez-Freites E., Carter J., Cynamon M. In vitro and in vivo activities of gatifloxacin against Mycobacterium tuberculosis // Antimicrob. Agents Chemother. - 2002. - Vol. 46. - P. 1022-1025.

84. American Thoracic Society, Centers for Disease Control and Prevention, and Infectious Diseases Society of America. Treatment of tuberculosis. MMWR Recomm. Rep. - 2003. - Vol. 52. - P. 1-77.

85. An D., Duyen H., Lan N. et al. Beijing genotype of Mycobacterium tuberculosis is significantly associated with high-level fluoroquinolone resistance in Vietnam // Antimicrob. Agents. Chemother. - 2009. - Vol. 53. - P. 4835-4839.

86. Ängeby K.A., Jureen P., Giske C. et al. Wild-type MIC distributions of four fluoroquinolones active against Mycobacterium tuberculosis in relation to current critical concentrations and available pharmacokinetic and pharmacodynamic data // J. Antimicrob. Chemother. - 2010. - Vol. 65 (5). - P. 946-952.

87. Ardito F., Posteraro В., Sanguinetti M. et al. Evaluation of Bactec Mycobacterium Growth Indicator Tube (MGIT 960) automated system for drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis II J. Clin. Microbiol. - 2001. - Vol. 39. - P. 4440-4444.

88. Aziz M., Wright A., Laszlo A., et al. Epidemiology of antituberculosis drug resistance (the global project on anti- tuberculosis drug resistance surveillance): an updated analysis // Lancet.- 2006. - Vol. 368. - P. 2142-2154.

89. Banerjee R., Schecter G., Flood J. et al. Extensively drug-resistant tuberculosis: new strains, new challenges // Expert. Rev. Anti. Infect. Ther. -2008. -Vol. 6 (5).-P. 713-724.

90. Baohong J., Nacer L., Chantai T. et al. In vitro and in vivo activities of levofloxacin against Mycobacterium tuberculosis // Antimicrob. Agents Chemother. - 1995.-Vol. 39.-P. 1341-1344.

91. Becton Dickinson. 2002. Bactec MGIT 960 SIRE kits. - Режим доступа : http://www.bd. com/ds/technicalCenter/clsi/clsi-960pza.pdf

92. Berner P., Palicova F., Rusch-Gerdes S. et al. Multicenter evaluation of fully automated Bactec Mycobacterium Growth Indicator Tube 960 system for

-4 susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis II J. Clin. Microbiol. -2002. -

Vol. 40.-P. 150-154.

93. Brossier F., Veziris N., Aubry A. et al. Detection by GenoType MTBDRy/ test of complex mechanisms of resistance to second-line drugs and eth-ambutol in multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis complex isolates // J. Clin. Microbiol. - 2010. - Vol. 48. - P. 1683-1689.

94. Bryskier A., Lowther J. Fluoroquinolones and tuberculosis // Expert Opin. Investig. Drugs. - 2002. - Vol. 11(2). - P. 233-258.

95. Canetti G., Fox W., Khomenco A. et al. Advances in techniques of testing mycobacterial drug sensitivity and the use of sensitivity tests in tuberculosis control programmes // Bull WHO. 1969. - Vol. 41. - P. 21-43.

96. Canetti G., Froman S., Grosset J. et al. Mycobacteria: Laboratory methods for testing drug sensitivity and resistance. Bull WHO. - 1963. - Vol. 29. -P. 565-578.

97. Cegielski P.P., Chin D.P., Espinal M.A. et al. The global tuberculosis situation. Progress and problems in the 20th century, prospects for the 21st centure // Infect. Dis. Clin. North Am. - 2002. - Vol. 16 (1). - P. 1-58.

98. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Emergence of Mycobacterium tuberculosis with extensive resistance to second-line drugs-worldwide, 2000-2004. MMWR. -2006. - Vol. 55. - P. 301-305.

99. Chang K.C., Yew W.W., Chan R. C. Y. Rapid assays for fluoroquinolone resistance in Mycobacterium tuberculosis: a systematic review and metaanalysis // J. Antimicrob. Chemother. - 2010. - Vol. 65. - P. 1551-1561.

100. Clinical and Laboratory Standards Institute. Susceptibility testing of mycobacteria, nocardiae, and other aerobic actinomycetes; approved standard -second edition: document M24-A2. CLSI, Wayne, PA, USA, 2011.

101. Conde M. B., Efron A., Loredo C. et al. Moxifloxacin versus etham-butol in the initial treatment of tuberculosis: a double-blind, randomized, controlled phase II trial // Lancet. - 2009. - Vol. 373. - P. 1183-1189.

102. Devasia R.A., Blackman A., Gebretsadik T. et al. Fluoroquinolone resistance in Mycobacterium tuberculosis. The effect of duration and timing of fluoroquinolone exposure // Am. J. Respir. Crit. Care Med. - 2009. - Vol. 180. - P. 365-370.

103. Dye C., Scheele S., Dolin P. et al. Global burden of tuberculosis, estimated incidence, prevalence, and mortality by country // Journal of the American Medical Association. - 1999. - Vol. 282. - P. 676-686.

104. Espasa M., Salvado M., Vicente E. et al. Evaluation of the Versa-TREK system compared to the Bactec MGIT 960 system for first-line drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis II J. Clin. Microbiol. - 2012. - Vol. 50.-P. 488-491.

105. Fung-Tome J., Minassian B., Kolek B. et al. In vitro antibacterial spectrum of a new broad-spectrum 8-methoxy fluoroquinolone, gatifloxacin // J. Antimicrob. Chemother. - 2000. - Vol. 45. - P. 437-446.

106. Gandhi N.R., Moll A., Sturm A.W. et al. Extensively drug-resistant tuberculosis as a cause of death in patients co-infected with tuberculosis and HIV in a rural area of South Africa // Lancet. - 2006. - Vol. 368. - P. 1575-1580.

107. Gandhi N., Nunn P., Dheda K. et al. Multidrug-resistent and extensively drug-resistant tuberculosis: a threat to global control of tuberculosis // Lancet. - 2010. - Vol. 375. - P. 1830-1843.

108. Ginsburg A.S., Grosset J.H., Bishai W.R. Fluoroquinolones, tuberculosis and resistance // Lancet Infect. Dis. - 2003. - Vol. 3. - P. 432-442.

109. Grimaldo E.R., Tupasi T.E., Rivera A.B. et.al. Increased resistance to ciprofloxacin and ofloxacin in multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis isolates from patients seen at a tertiary hospital in the Philippines // Int. J. Tuberc. Lung. Dis. -2001. - Vol. 5. - P. 546-550.

110. Hall L., Jude K. P., Clark S.L. et al. Antimicrobial susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis complex for first and second line drugs by broth dilution in a microtitre plate format // J. Vis. Exp. - 2011. Jun. 24;(52). Pii: 3094. doi: 10.3791/3094.

111. Hayakawa I., Atarchi S., Yokohama S. et al. Synthesis and antibacterial activities of optically active ofloxacin // Antimicrob. Agents Chemother. -1986.- Vol.29. - P. 163-164.

112.Hershfield E. Tuberculosis: 9. Treatment. Canadian Medical Association Journal. - 1999. - Vol. 161 (4). - P. 405-411.

113. Huang T.S., Tu H. Z., Lee S.S. et al. Antimicrobial susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis to first-line drugs: comparisons of the MGIT 960 and Bactec 460 systems // Ann. Clin. Lab. Sei. - 2002. - Vol. 32. - P. 142147.

114. Ji B., Lounis N., Maslo C. et al. In vitro and in vivo Activities of moxi-floxacin and clinafloxacin against Mycobacterium tuberculosis II Antimicrob. Agents Chemother. - 1998. - Vol. 42. - P. 2066-2069.

115. Ji B., Lounis N., Truffot-Pernot C. et al. In vitro and in vivo Activities of levofloxacin against Mycobacterium tuberculosis II Antimicrob. Agents and Chemother. - 1995. - Vol. 39. - P. 1341-1344.

116. Johansen I.S., Ostergaard-Thomsen V., Marjamäki M. et al. Rapid , automated, nonradiometric susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis

complex to four first-line antituberculous drugs used in standard short-course chemotherapy // Diagn. Microbiol. Infect. Dis. - 2004. - Vol. 50 (2). - P. 103107.

117. Johnson J., Hadad D., Boom W. et al. Early and extended early bactericidal activity of levofloxacin, gatifloxacin and moxifloxacin in pulmonary tuberculosis // Int. J. Tuberc. Lung Dis. - 2006. - Vol. 10. - P. 605-612.

118. Kam K. M., Yip C. W., Cheung T.L. et al. Stepwise Decrease in moxifloxacin susceptibility amongst clinical isolates of multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis: correlation with ofloxacin susceptibility // Microb. Drug Resist. -2006.-Vol. 12.-P. 7-11.

119. Kontos F., Maniati M., Costopoulos C. et al. Evaluation of the fully automated Bactec MGIT 960 system for the susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis to first-line drugs: a multicenter study // J. Microbiol. Methods. -2004 - Vol. 56 - P. 291-294.

120. Kent P.T., Kubica G.P. Public Health Mycobacteriology: A Guide for the Level III Laboratory. Atlanta, GA: Centers for Disease Control and Prevention; 1985.

121. Kliiman K., Altraja A. Predictors of poor treatment outcome in multi-and extensively drug-resistant pulmonary TB // Eur. Respir. J. - 2009. - Vol. 33. -P. 1085-1094.

122. Krüüner A., Yates M.D., Drobniewski F.A. Evaluation of MGIT 960-based antimicrobial testing and determination of critical concentrations of first-and second-line antimicrobial drugs with drug-resistant clinical strains of Mycobacterium tuberculosis II J. Clin. Microbiol. - 2006. - Vol. 44. - P. 811-818.

123. Lin S.-Y. G., Desmond E., Bonato D. et al. Multicenter evalution of Bactec MGIT 960 system for second-line drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis complex II J. Clin. Microbiology. - 2009. - Vol. 47. - P. 36303634.

124. Malik S., Willby M., Sikes D. et al. New insights into fluoroquinolone resistance in Mycobacterium tuberculosis: functional genetic analysis of gyrA and gyrB mutations // PLOS ONE. - 2012. - Vol. 7. - P. 1-10.

125. Maruri F., Sterling T.R., Kaiga A.W. et al. A systematic review of gy-rase mutations associated with fluoroquinolone-resistant Mycobacterium tuberculosis and a proposed gyrase numbering system // J. Antimicrob. Chemother. -2012. - Vol. 67.-P. 819-831.

126. Mitchison D.A. Development of streptomycin resistant strains of tubercle bacilli in pulmonary tuberculosis; results of simultaneous sensitivity tests in liquid and solid media // Thorax. - 1950. - Vol. 5. - P. 144-161.

127.Moadebi S., Harder C., Fitzgerald M., et al. Fluoroquinolones for the treatment of pulmonary tuberculosis // Drugs. - 2007. - Vol. 67. - P. 2077-2099.

128. Mor N., Vanderkolt J., Heifets. Inhibitory and Bactericidal activities of levofloxacin against Mycobacterium tuberculosis in vitro and in human macrophages // Antimicrob. Agents Chemother. - 1994. - Vol. 38. - P. 1161-1164.

129. Palomino J.C., Traore H., Fissette K et al. // Evaluation of Mycobacterium Growth Indicator Tube (MGIT) for drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis II Int. J. Tuberc. Lung. Dis. - 1999. - Vol. 3. - P. 344-348.

130.Pantel A., Petrella S., Matrat S. et al. DNA Gyrase ingibition assay are necessary to demonstrate fluoroquinolone resistance secondary to gyrB mutations in Mycobacterium tuberculosis II Antimicrob. Agents Chemother. - 2011. - Vol. 55.-P. 4524-4529.

131.Pfyffer G.E., Bonato D.A., Ebrahimzadeh A. et al. Multicenter laboratory validation of susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis against classical second - line and newer antimicrobial drugs by using the radiometric BACTEC 460 technique and the proportion method with solid media // J. Clin. Microbiol. - Vol. 37. - P. 3179-3186.

132. Pitaksajjakul P., Wongwit W., Punprasit W. et al. Mutations in the gyrA and gyrB genes of fluoroquinolone-resistant Mycobacterium tuberculosis from TB

patients in Thailand // Southeast. Asian. J. Trop. Med. Public. Health. - 2005. -Vol. 36 Suppl 4. - P. 228-237.

133. Pyle M. M. Relative numbers of resistant tubercle bacilli in sputa of patients before and during treatment with streptomycin // Proc. Staff. Meet. Mayo. Clin. - 1947. - №22. - P. 465-473.

134. Richeldi L, Covi M, Ferrara G et al. Clinical use of Levofloxacin in the long-term treatment of drug resistant tuberculosis // Monaldi Arch. Chest. Dis. -2002.;-Vol. 57.- P. 39-43.

135. Roberts G.D., Goodman N.L., Heifets L. et.al. Evaluation of the Bac-tec radiometric method for recovery of mycobacteria and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from acid-fast smear-positive specimens // J. Clin. Microbiol. -1983. - Vol. 18. - P. 689-696.

136. Rodrigues C., Jani J., Shenai S. et al. Drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis against second-line drugs using the Bactec MGIT 960 systems // Int. J. Tuberc. Lung. Dis. - 2008. - Vol. 12. - P. 1449-1455.

137. Rodriguez J. C., Ruiz M., Climent A. et al. In vitro activity of four fluoroquinolones against Mycobacterium tuberculosis II Antimicrob. Agents Chemother. - 2001.- Vol. 17(3).-P. 229-231.

138. Rodriguez J. C., Ruiz M., Lopez M. et al. In vitro activity of moxiflox-acin, levofloxacin, gatifloxacin and linezolid against Mycobacterium tuberculosi II Int. J. Antimicrob. Agents. 2002. - Vol. 20. - P. 464-467.

139.Rustomjee R., Lienhardt C., Kanyok T. et al. A Phase II study of the sterilising activities of ofloxacin, gatifloxacin and moxifloxacin in pulmonary tuberculosis // Int. J. Tuberc. Lung. Dis. - 2008. - Vol. 12. - P. 128-138.

140.Rüsch-Gerdes S., Pfyffer G.E., Casal M. et al. Multicenter laboratory validation of the BACTEC MGIT 960 technique for testing susceptibilities of Mycobacterium tuberculosis to classical second-line drugs and newer antimicrobials // J. Clin. Microbiol. - 2006. - Vol. 44. - P. 688-692.

141. Sanders C.A., Nieda R.R., Desmond E.P. Validation of the use of Middlebrook 7H10 agar, BACTEC MGIT 960, and BACTEC 460 12B media for

testing the susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to levofloxacin // J. Clin. Microbiol. - 2004. - Vol. 42. - P. 5225-5228.

142. Scarparo C., Ricordi P., Ruggiero G. et al. Evaluation of the fully automated Bactec MGIT 960 system for testing susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to pyrazinamide, streptomycin, isoniazid, rifampin and ethambutol and comparison with the radiometric Bactec460TB method // J. Clin. Microbiol. -2004. - Vol. 42. - P. 1109-1114.

143. Siddiqi S., Rusch-Gerdes S., Alexander H. et al. MGIT Procedure Manual for BACTEC™MGIT™960 ТВ System (Also applicable for Manual MGIT) Mycobacteria Growth Indicator Tube (MGIT) Culture and Drug Susceptibility Demonstration Projects. - 2006. - Режим доступа : http://www.finddiagnostics.org/export/sites/ default/resource-centre/find documen-tation/pdfs/mgit manual nov 2007.pdf

144. Sirgel F.A., Warren R.M., Streicher E.M. et al. gyrA mutations and phenotypic susceptibility levels to ofloxacin and moxifloxacin in clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis II J. Antimicrob. Chemother. - 2012. - Vol. 67. -P. 1088-1093.

145. Takiff H.E., Salazar L., Guerrero C. et al. Cloning and nucleotide sequence of Mycobacterium tuberculosis gyrA and gyrB genes and detection of quin-olone resistance mutations // Antimicrob. Agents Chemother. - 1994. - Vol. 38. -P. 773-780.

146. Tarrand J J., Groschel D.H. Evaluation of the Bactec radiometric method for detection of 1% resistant populations of Mycobacterium tuberculosis II J. Clin. Microbiol. - 1985. - Vol. 21. - P. 941-946.

147. Todd P.A., Faulds D. Ofloxacin. A reappraisal of its antimicrobial activity, pharmacology, and therapeutic use // Drugs. - 1991. - Vol. 42. - P. 825876.

148. Tortoli E., Benedetti M., Fontanelli. et al. Evaluation of automated Bactec MGIT 960 system for testing susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to four major antituberculous drugs: comparison with the radiometric Bactec

460TB method and the agar plate method of proportion // J. Clin. Microbiol. -2002. - Vol. 40. - P. 607-610.

149.Tsukamura M. In vitro antituberculosis activity of a new antibacterial substance ofloxacin(DL8280) // Am. Rev. Respir. Dis. - 1985. - Vol. 131. - P. 348-351.

150. Van Ingen J., Simons S., Zwaan de R., et al. Comparative study on genotypic and phenotypic second-line drug resistance testing of Mycobacterium tuberculosis complex isolates // J. Clin. Microbiol. - 2010. - Vol. 48. - P. 27492753.

151. Wang J., Lee L., Lai H. et al. Fluoroquinolone resistance in Mycobacterium tuberculosis isolates: associated genetic mutations and relationship to antimicrobial exposure // J. Antimicrob. Chemother. - 2007. - Vol. 59. - P. 860-865.

152. World Health Organization. Anti-tuberculosis drug resistance in the world. Fourth global report. Geneva, Switzerland: WHO, 2008. WHO/HTM/TB/2008.394.

153. World Health Organization. Global tuberculosis control 2010. - Режим доступа : http:// www.who.int/tb/publications/global report/2010/en/

154. World Health Organization. Global tuberculosis report 2012. - Режим доступа : http:// apps.who.int/iris/bitstream/10665/75938/l/-9789241564502 eng.pdf

155. World Health Organization. Guidelines for the programmatic management of drug-resistant tuberculosis. Geneva: WHO, 2008. WHO/HTM/TB/ 2004.402.

156. World Health Organization. Multidrug and extensively drug-resistant ТВ (M/XDR-TB): 2010 Global report on surveillance and response. WHO/ HTM/TB/2010.3. - Режим доступа : uhttp: //whqlibdoc.who.int/publications/ 2010/ 9789241599191 eng.pdf

157. World Health Organization. Multidrug-resistant tuberculosis (MDR-TB) 2013 Update. - Режим доступа : http://www.who.int/tb/challenges/mdr/ MDR ТВ FactSheet.pdf

158. World Health Organization. Policy guidance on drug-susceptibility testing (DST) of second-line antituberculosis drugs. Geneva, Switzerland: WHO, 2008. WHO/HTM/TB/2008.392.

159. Yew W.W, Chan C.K., Leung C.C. et al. Comparative roles of levofloxacin and ofloxacin in the treatment of multidrug-resistant tuberculosis: preliminary results of a retrospective study from Hong Kong // Chest. - 2003. - Vol. 124.-P. 1476-1481.

160. Yew W.W., Chau C.H. Fluoroquinolones and tuberculosis // Int. J. Tu-berc. Lung. Dis. - 1998. - Vol. 2. - P. 1050-1052.

161. Yew W.W., Piddock L. J., Li M.S. et al. In-vitro activity of quinolones and macrolides against mycobacteria // J. Antimicrob. Chemother. - 1994. - Vol. 34.-P. 343-351.

162. Yin X., Yu Z. Mutation characterization of gyrA and gyrB genes in levofloxacin-resistant Mycobacterium tuberculosis clinical isolates from Guangdong Province in China // Infect. - 2010. - Vol. 61. - P. 150-154.

163. Young L.S., Berlin O.W., Inderlied C.G. Activity of ciprofloxacin and other fluorinated quinolones against mycobacteria // Am. J. Med. - 1987. - Vol. 82 (suppl 4A). - P. S23-S26.

164. Zhang Y., Yew W.W. Mechanisms of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis II Int. J. Tuberc. Lung. Dis. - 2009. - Vol. 13. - P. 1320-1330.