Культивирование Digitalis purpurea L. в условиях in vitro и получение сердечных гликозидов на её основе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат технических наук Смольникова, Яна Викторовна

• Смольникова, Яна Викторовна
• кандидат технических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат технических наук Смольникова, Яна Викторовна

Содержание

Введение

Глава 1. Аналитический обзор

1.1 Описание и фармацевтическая значимость представителей рода

Digitalis

1.2 Сердечные гликозиды, химическое строение и классификация

1.3 Культура растительных клеток как альтернативный способ производства промышленно значимых метаболитов

1.4 Способы регуляции вторичного метаболизма в культуре in vitro

1.5 Культивирование in vitro представителей рода Digitalis

Глава 2. Объекты и методы исследования

2.1 Объект исследования

2.2 Получение каллусной ткани и исследование Digitalis purpurea L. в культуре in vitro

2.3 Химический состав интактного растения и каллусных тканей Digitalis

purpurea L

Глава 3. Культивирование in vitro Digitalis purpurea L

3.1 Получение интактных стерильных растений Digitalis purpurea L. в культуре in vitro

3.2 Индукция каллусогенеза Digitalis purpurea L

3.3 Подбор гормонального состава среды для культивирования каллусной ткани Digitalis purpurea. L

3.4 Суспензионное культивирование Digitalis purpurea L

3.5 Иммобилизация каллусной ткани Digitalis purpurea L. на инертные носители

3.6 Повышение продуктивности каллусной ткани Digitalis purpurea L. под действием стрессогенных факторов

3.7 Оптимизация условий культивирования каллусной ткани

Digitalis purpurea L

3.8 Химический состав каллу сной ткани Digitalis purpurea L

Глава 4. Технология культивирования in vitro Digitalis purpurea L. и выделения гликозидов из каллу сной ткани

4.1 Влияние параметров экстракции на извлечение экстрактивных веществ из каллу сной ткани и исходного растения Digitalis purpurea L

4.2 Оптимизация выхода гликозидов из биомассы каллусной ткани Digitalis purpurea L

4.3 Технологический процесс получения гликозидов из каллусной ткани

Digitalis purpurea L

Библиографический список

Приложения

Приложение А. Статистическая обработка результатов

Приложение Б. ВЭЖХ — Хроматографический профиль сердечных

гликозидов

Приложение В. и планирование организации производства гликозидов из каллусной ткани Digitalis purpurea L

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Культивирование Digitalis purpurea L. в условиях in vitro и получение сердечных гликозидов на её основе»

Введение

Актуальность проблемы

В настоящее время перед биотехнологией как наукой и отраслью промышленности стоит актуальная задача поиска альтернативных источников и разработки методов получения биологически активных веществ растительного происхождения, применяемых для разных целей в сельском хозяйстве, пищевой промышленности, в медицине.

Сложившаяся ситуация в ассортименте лекарственного растительного сырья и его продукции показывает, что почти вся сырьевая база, обеспечивающая потребность в препаратах на фармацевтическом рынке России, оказалась на территории ближнего зарубежья.

Потери сырьевых источников, расположенных на территории бывших союзных республик, освоение минеральных ресурсов, интенсивные технологии в сельском хозяйстве, негативное влияние промышленных предприятий — все эти факторы обострили проблему обеспечения медицины и других отраслей лекарственным растительным сырьем в полном объеме и ассортименте. Особенно это актуально для регионов с повышенной антропогенной нагрузкой [1].

Растения являются незаменимым источником получения очень многих практически ценных веществ. При этом следует подчеркнуть, что промышленное получение некоторых соединений, например, сердечных гликозидов, флавоноидов, кумаринов, эфирных масел достигается только путем выделения их из растительного сырья. Между тем возможности получения так называемых «метаболитов интереса» в достаточном количестве зачастую ограничены. Это связано с сокращением ресурсов некоторых ценных дикорастущих растений, принадлежностью многих лекарственных растений к группам эндемов, редким и исчезающим видам. В

связи с этим большой интерес в качестве источника биологически активных веществ представляют культуры растительных клеток [2].

Культуры растительных клеток могут синтезировать самые разнообразные по химической природе вещества. Среди них эфирные масла, фенольные соединения, алкалоиды, стероиды, терпеноиды и др. Но, несмотря на то, что биомасса культивируемых клеток с начала 80-х годов используется в качестве источника экономически значимых продуктов, ряд трудностей и нерешенных вопросов сдерживает широкомасштабное применение культивируемых клеток, обусловливает нерентабельность

биотехнологических производств многих ценных видов растений.

Неотселектированные дедифференцированные клетки накапливают, как правило, незначительное, по сравнению с интактным растением, количество веществ специализированного обмена. Только благодаря правильно разработанной стратегии получения высокопроизводительных штаммов к настоящему времени получены культуры тканей, в которых содержание вторичных продуктов достаточно велико, чтобы служить лекарственным сырьем [2].

Культивируемые клетки высших растений способны синтезировать традиционно используемые продукты растительного происхождения, создавать принципиально новые вещества, трансформировать дешевые предшественники в ценный продукт. Преимуществом данного метода является возможность получения продукта независимо от внешних климатических, почвенных условий, круглогодично, и сохраняя при этом естественные ареалы ценных лекарственных растений.

Среди лекарственных средств, применяемых в современной фармакотерапии сердечно-сосудистых заболеваний, препараты наперстянки занимают особое место. Хотя они насчитывают несколько веков истории, их мощное кардиотоническое действие пока ничем не удалось заменить. Это единственная группа, не имеющая заменителей химического происхождения,

и все лекарственные препараты этой группы вырабатываются только из растений.

В то же время, выход сердечных гликозидов из растения является непостоянной величиной и зависит от климатических условий, срока вегетации растения, от времени суток, в которое производится сбор. Календарные сроки уборки ограничены. Исходя из этих фактов, экономически интересным и перспективным представляется создание технологии, при которой осуществлялось бы круглогодичное, независимое от внешних факторов, культивирование растения и получение гликозидов на его основе.

Известны работы, описывающих производство сердечных гликозидов в культуре ткани наперстянки пурпурной [3], но в целом, выход продукта остается довольно низким, и, кроме того, в течение нескольких субкультивирований способность к синтезу карденолидов в культуре in vitro часто сокращалась или исчезала полностью.

Однако часть проведенных исследований показывает, что при правильном подборе условий для культивирования, использовании различных гормональных сред, изменении светового режима, воздействия элиситоров, или других стрессогенных факторов (ультрафиолетового излучения) можно существенно повлиять на синтез вторичных метаболитов.

В связи с этим культивирование тканей и клеток Digitalis purpurea L. in vitro с целью их промышленного использования для получения соединений специализированного определяет актуальность данного исследования.

Цель работы - разработать условия культивирования in vitro и установить их влияние на повышение продуктивности клеточной культуры Digitalis purpurea L.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить ряд

задач:

- изучить особенности введения в культуру Digitalis purpurea L., установить закономерности влияния способов культивирования на продуктивность клеточных тканей;

- исследовать влияние эпигенетических, стрессогенных факторов на рост, развитие и накопление сердечных гликозидов в каллусной ткани Digitalis puprurea L.;

- установить закономерности влияния физико-химических факторов на прирост биомассы и накопление гликозидов и провести оптимизацию процесса культивирования каллусной ткани Digitalis puprurea L.;

- определить химический состав полученной каллусной ткани Digitalis puprurea L.;

- разработать математическую модель и подобрать условия выделения гликозидов из каллусной ткани Digitalis puprurea L;

- разработать принципиальную технологическую схему получения сердечных гликозидов в культуре ткани Digitalis puprurea L.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Смольникова, Яна Викторовна

Основные результаты и выводы по работе

В результате проведенных исследований можно сделать следующие выводы:

1. Введена в культуру in vitro Digitalis purpurea L. Установлен состав среды, позволяющий получить максимальный прирост биомассы (51,6 мг/г а. с. м.), обеспечивающий высокую скорость роста культуры (0,22 сут-1) и накопление наибольшего количества гликозидов (0,67 % от а. с. м).

2. Установлено, что наиболее эффективным способом культивирования каллусной ткани Digitalis purpurea L., обеспечивающим наибольшее накопление гликозидов, является иммобилизация каллусной ткани на пенополиуретановые пластины.

3. В результате УФ-облучения ткани получена высокопродуктивная клеточная линия с максимальным ростовым индексом (18,78), приростом биомассы (715,11 мг сырой массы) и выходом гликозидов (0,78 % от а. с. м.)

4. Исследование биохимического и минерального состава каллусной ткани показало, что ее состав соответствует составу исходного растения.

5. Проведено математическое моделирование процессов культивирования и извлечения оптимальными условиями культивирования каллусной ткани Digitalis purpurea L., обеспечивающими максимальный прирост биомассы и накопление гликозидов являются: концентрация сахарозы в среде 20 г/л; фотопериод 16 ч; температурный режим выращивания культуры 22 °С. Для максимального извлечения гликозидов из каллусной ткани Digitalis purpurea L. процесс экстракции необходимо проводить при следующих параметрах: продолжительность экстракции 12 ч, гидромодуль 10, размер частиц 3 мм.

6. На основании полученных экспериментальных данных разработана технологическая схема получения гликозидов из биомассы Digitalis purpurea L., рассчитаны основные технико-экономические показатели. Экспериментальное предприятие по производству гликозидов из каллусной ткани Digitalis purpurea L. является рентабельным, чистая прибыль составляет 3965,82 тыс. руб. Срок окупаемости 3,5 года.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Смольникова, Яна Викторовна, 2012 год

Библиографический список

1. Белоногова, В. Д. Ресурсы, экологическая безопасность и фитохимические исследования дикорастущих лекарственных растений Пермского края : дис. ...д-ра фармац. наук: 15.00.02 / В. Д. Белоногова -Пермь, 2009. - 523 с.

2. Запрометов, М. Н. Вторичный метаболизм и его регуляция в культурах клеток и тканей растений / М. Н. Запрометов // Культура клеток растений. -М.: Наука, 1981. С. 37-50.

3. Bruneton, J. Pharmacology, phytochemistry, medicinal plants / J. Bruneton. - Paris: Lavoisier, 1995. - 915 p.

4. Государственная фармакопея СССР. - 11-е изд. - 2-й вып. - М.: Медицина, 1987. - С. 253-255

5. Муравьева, Д. А. Фармакогнозия / Д. А. Муравьева. - М.: Медицина, 1987. - 656 с.

6. Георгиевский, В. П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В. П. Георгиевский, Н. Ф. Комиссаренко, С. Е. Дмитрук. - Новосибирск: Наука, 1990. - 333 с.

7. Попова, Т. Д. Очерки о гомеопатии / Т. Д. Попова. - К.: Наукова думка, 1988.- 192 с.

8. Гаммерман, А. Ф. Лекарственные растения / А. Ф. Гаммерман, Г. Н. Кадаев, А. А. Яценко-Хмелевский. - 4-е изд., испр. и доп. - М. : Высш. шк., 1990.-542 с.

9. Гацура, В. В. Сердечные гликозиды как регуляторы биоэнергетики и функции контрактильных белков миокарда / В. В. Гацура // Фармакология и токсикология. - 1980. - № 3. - С. 265-273.

10. Вотчал, Б. Е. Сердечные гликозиды / Б. Е. Вотчал, Е. М. Слуцкий. - М.: Медицина, 1973. - 200 с.

11. Гринкевич, Н. И. Химический анализ лекарственных растений / под ред. Н. И. Гринкевич, JI. Н. Сафронич. - М. : Высш. шк., 1983. - 176 с.

12. Макаревич, И. Ф. Траснформированные сердечные гликозиды и агликоны и их биологическая активность / И. Ф. Макаревич, Э. П. Кемертелидзе. - Тбилиси: Мециенереба, 1984. - 252 с.

13. Макаревич, И. Ф. Карденолиды и буфадиенолиды / И. Ф. Макаревич, Э. П. Кемертелидзе. - Тбилиси: Мециенереба, 1975. -227 с.

14. Grunvald, С. Encyclopedia of plant Physiology / С. Grunvald, E. A. Bell, В. V. Charlwood. - Berlin, Heidelberg, 1980. - Vol. 8. - P. 244-245.

15. Schutte, H. R. Secondary plant substances. Aspects of steroid biosynthesis / H. R. Schutte // Progress in botany. - 1987. - Vol. 49. -P. 117-136.

16. Ramstad, E. Mevalonic acid as precursor in the biogenesis of digitoxigenin / E. Ramstad, J. L. Beal // J. pharm. Pharnacol. - 1960. -Vol. - 12. -P. 552-556.

17. Gregory, H, Biogenesis of digitoxigenin / H.Gregory, E. Leete // Chemistry and industry. - London, 1969. - P. 1242-1243.

18. Tschesche, R. Biosynthesis of cardenolides, bufadienolides and steroid sapogenins / R. Tschesche. - London, 1972. - P. 187-202.

19. Helmbold, H. Sterols in cells culture of Digitalis lanata / H. Helmbold, W. Voelter, E. Reinhard // Planta Med., 1978. - Vol. 33. - P. 185187.

20. Bennett, R. D, A function of sitosterol / R. D. Bennett, E. Heftmann, B. J. Winter // Phytochemistry. - 1969. - Vol. 8. - P. 2325-2328.

21. Бурьянов, Я. И. Успехи и перспективы генно-инженерной биотехнологии растений / Я. И. Бурьянов // Физиология растений. - 1999. -Т. 46. - № 6. - С. 930-944.

22. Бутенко, Р. Г. Клеточные технологии для получения экономически важных веществ растительного происхождения / Р. Г. Бутенко // Культура клеток растений и биотехнология. - М.: Наука, 1986. - С. 3-20.

23. Воллосович, А. Г. Культура ткани раувольфии как продуцент противоаритмических алкалоидов: автореф. дис.... д-ра фармац. наук / А. Г. Воллосович. - СПб., 1992. - 38 с.

24. Запрометов, М. Н. Вторичный метаболизм и его регуляция в культурах клеток и тканей растений / М. Н. Запрометов // Культура клеток растений. - М.: Наука, 1981. - С. 37-50.

25. Калинин, Ф. JI. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений / Ф. JI. Калинин, В. В. Сарнацкая, В. Е. Полищук. - Киев: Наукова думка, 1980. - 488 с.

26. Носов, А. М. Регуляция синтеза вторичных соединений в культуре клеток растений / А. М. Носов // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. - М.: Наука, 1991. - С. 5-20.

27. Сассон, А. Биотехнология: свершения и надежды / А. Сассон; пер. с англ. под ред. В. Г. Дебабова. - М.: Мир, 1987. - 411 с.

28. Zenk, М. Н. Anthraqhinon Production by Cell Suspension Cultures of Morinda citrifolia / M. H. Zenk, H. El-Shagi, U. Schulte // Planta Medica. -1975.-V. 41.-P. 79.

29. Аманов, С. Б. Культура каллусных тканей полыни гладкой как новый источник противоопухолевого препарата «Арглабин» / С. Б. Аманов, А. Ш. Додонова, С. М. Адекенов // Биология клеток растений in vitro и биотехнология: - Тез. докл. VIII Междунар. конф. - Саратов, 2003.

30. Кузовкина, И. М. Организация вторичного метаболизма вкультивируемых клетках и корнях Ruta graveolens / И. М. Кузовкина // Биология клеток растений in vitro и биотехнология: - Тез. докл. VIII Междунар. конф. - Саратов, 2003. - С 173.

31. Культура тканей Ungernia victoris. Получение, особенности и биологические эффекты экстракта / JI. П. Можилевская [и др.]. // Биология клеток растений in vitro и биотехнология: Тез. докл. VIII Междунар. конф. -Саратов, 2003.-С. 215.

32. Носов, А. М. Особенности синтеза изопреноидов в клетках растений in vitro / А. М. Носов // Биология клеток растений in vitro и биотехнология: Тез. докл. VIII Междунар. конф. - Саратов, 2003. - С. 225.

33. Шамина, З.Б. Повышение продуктивности культуры клеток стефании гладкой- Stephania glabra (Roxb) Miers / 3. Б. Шамина, Т. А. Савина, Е. А. Осипова, Ю. Г. Попов // Физиология растений. - 1994. -Т. 41.-№6.-С. 885-890.

34. Савина, Т. А. Изучение возможности использования клеточной культуры подофилла щитовидного в качестве источника биологически активных соединений / Т. А. Савина, Н. С. Цыбулько // Биология клеток растений in vitro и биотехнология: Тез. докл. VIII Междунар. конф. -Саратов, 2003.-С. 281.

35. Синтез, накопление и локализация стероидных гликозидов в клетках разных штаммов Dioscorea deltoidea Wall. / Р. Г. Бутенко [и др.]. // Физиология растений. - 1992. - Т. 39. - Вып. 6. - С. 1146-1150.

36. Formation of the indole alkaloids serpentine and ajmalicine in cell suspension cultures of Catharanthus roseus / M. H. Zenk [et al.] // Plant Tissue Culture and its Biotechnological Application. - Berlin, Heidelberg and New York: Springer-Verlag, 1977. - P. 27-44.

37. Fujita, Y. Selection of cell lines with high productivity of shikonin derivatives by protoplast culture of Lithospermum erythrorhizon cells / Y. Fujita, S. Takahashi, Y. Yamado // Agric. Biol. Chem. - 1985. - Vol. 49. - P. 1755-1759.

38. Kokate, C. Steroidal glycoalkaloids in tissue cultures of Solarium khasianum during organogenesis / C. Kokate, S. Radwan // Planta med. - 1978. -Vol. 33. - № 3. - P. 301-310.

39. Misawa, M. Production of natural substances by plant cell cultures described in Japanese Patents / M. Misawa // Plant tissue culture and its biotechnological application. - Berlin, Heidelberg and New York: SpringerVerlag, 1977.-P. 17-26.

40. Peters, J. Rooting and the metabolism of nicotine in tobacco callus cultures / J.Peters, P. Wu, W.Sharp, E. Paddock // Physiol, plant. - 1974. -Vol. 31.-№2. -P. 97-100.

41. Knobloch, К. H. Influence of Medium Composition on the Formation of Secondary Compounds in Cell Suspension Cultures of Catharanthus roseus (L.) G. Don / К. H. Knobloch, J. Berlin // Z. Naturforsch. - 1980. - Vol. 35C. -P. 551-556.

42. Godoy-Hernandez, G. Effect of Fungal Homogenate Enzyme Inhibitors and Osmotic Stress on Alkaloid Content of Catharanthus roseus Cell Suspension Cultures / G. Godoy-Hernandez, V. M. Loyola-Vargas // Plant. Cell Rep.-1991.-Vol. 10. -№ 11. - P. 537-540.

43. Воллосович, H. E. Раувольфия змеиная в статической культуре ткани. Выбор штаммов, пути удешевления сред, фармакологическая оценка препаратов: автореф. дис.... канд. фармац. наук / Н. Е. Воллосович. - Л., 1979.- 17 с.

44. Продуктивность различных тканей диоскореи дельтовидной / С. Л. Каранова [и др.]. // Культура клеток растений и биотехнология. - М.: Наука, 1986.-С. 83-87.

45. Штаммы культуры тканей Rauwolfia serpentina и их продуктивность / Н. Е. Воллосович [и др.]. // Растительные ресурсы. - 1976. -Т. 12.-№4.-С. 578-582.

46. Повышение продуктивности культуры клеток стефании гладкой - Stephania glabra (Roxb) Miers / 3. Б. Шамина [и др.]. // Физиология растений. - 1994. - Т. 41. - № 6. - С. 885-890.

47. Шамина, 3. Б. Генетическая изменчивость в популяциях соматических клеток в культуре: автореф. дис.... д-ра биолог, наук / 3. Б. Шамина. - Л., 1988. - 34 с.

48. А. с. 1058281 СССР, МКИ3 С 12 N 5/00. Штамм Panax ginseng ИФРЖ-1 - продуцент биологически активных веществ женьшеня и способ получения биологически активных веществ / Р. Г. Бутенко, Н. А. Мясоедов, 3. Б. Шамина, Л. И. Слепян (СССР). - заявл. 04.01.82; зарег. 01.08.83.

49. А. с. 1058282 СССР, МКИ3 С 12 N 5/00. Штамм Panax ginseng ИФРЖ-2 - продуцент биологически активных веществ женьшеня и способ получения биологически активных веществ / Р. Г. Бутенко, Н. А. Мясоедов, 3. Б. Шамина, Л. И. Слепян (СССР). - заявл. 04.01.82; зарег. 01.08.83.

50. А. с. 1540267 СССР, МКИ3 С 12 N 5/00. Штамм культивируемых клеток растений Rauwolfia serpentina Benth. - продуцент аймалина / А. Н. Куклин, И. Е. Каухова, А. Г. Воллосович, С. А. Минина, В. А. Кунах, О. В. Захленюк, Е. Г. Алхимова, Л. К. Алпатова (СССР). - заявл. 03.08.87; зарег. 01.10.89.

51. Николаева, Л. А. Культура тканей лекарственных растений и ее биотехнологическое использование / Л. А. Николаева. - СПб: Изд-во ЛХФИ, 1992.-60 с.

52. Ржежабек, И. Влияние количества и форм азота на рост клеток и накопление стероидных соединений в суспензионной культуре Solanum laeiniatum / И. Ржежабек, О. А. Горелова // Культура клеток растений и биотехнология. - М.: Наука, 1986. - С. 70-76.

53. Petiard, V. Studies on variability of plant tissue cultures for alkaloid production in Catharanthus roseus and Papaver somniferum callus cultures / V. Petiard, C. Banbault A. Bariand [et al.] II Primary and secondary metabolism of plant cell cultures. - Springer, 1985. - P. 133-143.

54. Hosoda, N. Some accounts on culture conditions of callus tissues of Solarium laciniatum Ait. for producing solasodine / T. Hefner, J. Stockigt // Agric. and Biol. Chem. - 1979. - Vol. 43. - № 8. - P. 1745-1748.

55. Галынкин, В. А. Перспективный источник новых противоаритмических средств - культура ткани раувольфии змеиной / В. А. Галынкин, И. Е. Каухова, Е. М. Сергеева, В. А. Кузнецова // Научные труды НИИ Фармации. - М., 1997. - Т. XXXVI. - С. 255-260.

56. Додонова, А. Ш. Изучение суспензионной культуры полыни гладкой / А. Ш. Додонова, С. Б. Аманов, С. М. Адекенов // Биология клеток растений in vitro и биотехнология: тез. докл. VIII Междунар. конф. - Саратов, 2003.-С. 81.

57. Савина, Т. А. Изучение возможности использования клеточной культуры подофилла щитовидного в качестве источника биологически активных соединений / Т. А. Савина, Н. С. Цыбулько // Биология клеток растений in vitro и биотехнология: Тез. докл. VIII Междунар. конф. -Саратов, 2003.-С. 281.

58. Miura, Y. Isolation of vinblastine in callus culture with differentiated roots of Catharanthus roseus (L.) G. Don-Vinca rosea / Y. Miura, K. Hirata, N. Kurano // Agr. and Biol. Chem. - 1987. - Vol. 51. - P. 611-614.

59. Бутенко, P. Г. Клеточные технологии для получения экономически важных веществ растительного происхождения / Р. Г. Бутенко // Культура клеток растений и биотехнология. - М.: Наука, 1986. - С. 3-20.

60. Тухтасинов, М. X. Химическое изучение культуры ткани раувольфии змеиной Rauwolfia serpentina (L.) Benth. и получение из нее лекарственных препаратов: автореф. дис.... канд. фармац. наук / М. X. Тухтасинов. - М., 1977. - 21 с.

61. Fujita, Y. Industrial Production of Shikonin and Berberin / Y. Fujita // Application of Plant Cell and Tissue Culture. - CIBA Foundation Symposium, 1988.-P. 218-225.

62. Misawa, M. Production of natural substances by plant cell culturesdescribed in Japanese Patents / M. Misawa // Plant tissue culture and its biotechnological applieation. - Berlin, Heidelberg and New York: SpringerVerlag, 1977. -P. 17-26.

63. Болдырева, Я. А. Влияние элементов минерального питания на рост каллусной ткани и синтез алкалоидов в культуре ткани катарантуса розового / Я. А. Болдырева, Н. А. Величко // Биотехнология. - 2003. - № 1. -С. 53-62.

64. Скуратова, Е. В. Двустадийное культивирование иммобилизованных на пенополиуретане клеток василистника малого / Е. В. Скуратова, Е. В. Юшкова, Н. А. Величко, С. М. Репях // Биотехнология. - 1998. - № 6. -С. 36-41.

65. Фаулер, М. В. Экономические аспекты промышленного культивирования клеток растений / М. В. Фаулер; пер. с англ. В. И. Негрука // Биотехнология сельскохозяйственных растений. - М.: Агропромиздат, 1987.-С. 9-42.

66. Хиггинс, И. Биотехнология. Принципы и применение / под ред. И. Хиггинса, Д. Беста, Дж. Джонса; пер. с англ. под ред. А. А. Баева. - М.: Мир, 1988.-479 с.

67. Культура тканей и клеток алкалоидных растений / Л. Н. Березнеговская [и др.]. - Томск: Изд-во Том. ун-та, 1975. - 194 с.

68. Линд си, К. Новые экспериментальные системы для изучения синтеза вторичных метаболитов с использованием культуры тканей растений / К. Линдси, М. М. Йомэн; пер. с англ. В. И. Негрука // Биотехнология сельскохозяйственных растений. -М.: Агропромиздат, 1987. - С. 43-66.

69. Носов, А. М. Культура клеток высших растений - уникальная система, модель, инструмент / А. М. Носов // Физиология растений. - 1999. -Т. 46.-№6.-С. 837-844.

70. Чибиляев, Т. X. Состояние и перспективы работ по культивированию тканей и клеток лекарственных растений / Т. X. Чибиляев // Химико-фармацевтический журнал. - 1984. - № 8. - С. 971-979.

71. Allan, Е. J. Biologically active plant secondary metabolites: perspectives for the future / E. J. Allan, M. W. Fowler // Chem. Ind. (London). -1985. - V. 17. - № 12. - P. 408-410.

72. Barz, W. Potential of Plant cell cultures for pharmaceutical production / W. Barz, В. E. Ellis // Natural products as medicinal agents / Eds J. L. Beal and E. Reinhard. - Stuttgart: Hippokrates, 1981. - P. 471-507.

73. Brodelius, P. Production of Biochemicals with Immobilized Plant Cells: Possibilities and Problems / P. Brodelius // Ann. N. Y. Acad. Sci. - 1983. -V. 413.

74. Butenko, R. G. Some Features of Cultural Plants Cells / R. G. Butenko // Plant Cell Culture. Advances in Science and Technology in the USSR. - M: Mir Publishers, 1985. - P. 11-20, 383-393.

75. Fowler, M. W. The large scale cultivation of plant cells / M. W. Fowler // Prog. Ind. Microbiol. - 1982. - № 16. - P. 207-229.

76. Garew, D. P. Plant tissue culture: Its fundamentals application and relationship to medicine plant studies / D. P. Garew, E. J. Staba // Lloydia. - 1965. -V. 28. -№ 3. - P. 1-26.

77. Taticek, R. A. The Scale-up of Plant Cell Culture: Engineering considerations / R. A. Taticek, Murray Moo-Yong, R. L. Legge // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. - 1991. - V. 24. - № 2. - P. 139.

78. Yeoman, M. M. The Synthetic Potential of Cultured Plant Cell / M. M. Yeoman, M. B. Meidzybrodska, K. Lindsey, W. R .McLauchlan // Plant Cell Cultures: Results and Perspectives / Eds. Sala [et al.]. - Amsterdam: Elsevier, 1980.-P. 327.

79. Синтез и исследование противоаритмической активности N-(4)-пропилаймалин бромида / Я. В. Костин [и др.]. // Химико-фармацевтический журнал. - 1987. - № 5. - С. 559-561.

80. Слепян, JI. И. Культуры тканей лекарственных растений и перспективы их использования в фармации / J1. И. Слепян, А. Г. Воллосович, Р. Г. Бутенко // Растительные ресурсы. - 1968. - Т. 4. - Вып. 4. - С. 457-467.

81. Строгов, С. Установка для получения препаратов из культур клеток растений / С. Строгов, В. Муратов // Ремедиум. - 2000. - № 3. - С. 59

82. Deno, Н. Production of shikonin derivatives by cell suspension cultures of Lithospermum erythrorhizon. VI. Production of Shikonin derivatives by a two-layer culture containing an organic solvent / H. Deno, C. Suga, T. Marimoto et al. // Plant Cell Reports. - 1987. - V. 6. - № 3. - P. 197-199.

83. Уразбахтина, H. А. Особенности культивирования растений семейства тиссовых - продуцентов дитерпеноида - таксола: автореф. дис. канд. биол. наук / Н. А. Уразбахтина. - Уфа, 2000. - 24 с.

84. Кунах, В. А. Особенности культуры изолированных тканей растений как клеточной популяции в связи с перспективой применения ее в генетике и селекции. Экспериментальная генетика растений. - Киев: Наукова думка, 1977.-С. 112-123.

85. Кунах, В. А. Изменчивость растительного генома в процессе дедифференцировки и каллусообразования in vitro // Физиол. растений, 1999. -Т. 46.-№6.-С. 919-929

86. Действие кинетина на дифференциацию и образование фенольных соединений в каллусной культуре чайного растения / М. Н. Запрометов [и др.]. // Физиол. Растений. - 1986. - Т. 33. - № 2. - С. 356364.

87. Кузовкина, И. Н. Характеристика штамма каллусной ткани руты душистой {Ruta graveolens), продуцирующей рутакридон / И. Н. Кузовкина,

Т. П. Чернышева, И. Е. Альтерман. // Физиол. Растений. - 1979. - Т. 26. -№ 3. - С. 429-500.

88. Биотехнология растений: культура клеток / Г. П. Болвелл [и др.]. - М.: Агропромиздат, 1989. - 280 с.

89. Бутенко, Р. Г. Культура изолированных тканей и физиология морфогенеза растений / Р. Г. Бутенко. - М.: Наука, 1964. - 272 с.

90. Фаулер, М. В. Экономические аспекты промышленного культивирования клеток растений / М. В. Фаулер // Биотехнология сельскохозяйственных растений. - М.: Агропромиздат, 1987. - С. 19-32.

91. Toivonen, L. The effect of temperature on growth, indole alkaloid accumulation and lipid composition of Catharanthus roseus cell suspension cultures. / L. Toivonen, S. Laakso, et al. // Plant Cell Reports. - 1992. -Vol. 11 (8).-P. 390-394.

92. Дитченко, Т. И. Влияние условий освещения на рост и содержание флавоноидов в каллусной культуре шалфея лекарственного / Т. И. Дитченко // Биология клеток растений in vitro и биотехнология: Материалы IX Междунар. конф. - М.: ООО «ИД ФБК-ПРЕСС», 2008. -С. 250-251.

93. Manabu Hagimori. Studies on the production of Digitalis Cardenolides by Plant Tissue Culture / Manabu Hagimori, Takashi Matsumoto, Yukiteru Obi // Plant. Phisiol. - 1982. - V. 69. - P. 653-656.

94. DiCosmo, F. and Towers, G.H.N. // Phytochemical Adaptations to Stress. - Plenum Publ. Corp. - 1984. - P. 91-175.

95. Тарчевский, И. А. Элиситор-индуцируемые сигнальные системы и их взаимодействие // Физиология растений. - 2000. - Т. 47. — № 2. — С. 321331.

96. Zhao, J. Elicitor signal transduction leading to production of plant secondary metabolites / J. Zhao, L. C. Davis, R. Verpoorte // Biotechnology Advances. - 2005. - Vol. 23. - P. 283-333.

97. Саркисова, М. Культура тканей Dioscorea deltoidea Wall, как продуцент стероидных сапонинов и генинов / М. Саркисова, Р. Бутенко, А. Синюхин // Растит, ресурсы. -1971. - Т. 7. - № 3. - С. 526-533.

98. Белецкий, Ю. Д. Искусственные мутации хлоропластов у высших растений. / Белецкий, Ю. Д. - Ростов-на-Дону: Изд-во РГУ, 1989. - 80 с.

99. Генкель, П. А. Физиология устойчивости растительных организмов // Физиология сельскохозяйственных растений. - М.: Изд-во Моск. ун-та, 1967. - Т. 3. - С. 87-325.

100. Bornman, J. F. UV-radiation as an environmental stress in plants. / J. F. Bornman // J. Photochem. Photobiol. - 1991. - Vol. 8(3). - P. 337-341.

101. Шамансуров, С. Влияние УФ-радиации на рост различных органов растений. / С. Шамансуров, О. А. Акназаров // Изв. АН Тадж ССР. -1988.-№33.-С. 41-44.

102. Frederick, J. Е., The budget of biologically active ultraviolet radiation in the earthatmosphere system./ J. E. Frederick, D. Lubin // Ecology. - 1988. -Vol. 44. - P. 342-347.

103. Hildebrandt, A. L. La culture des tissus vegetaux / A. L. Hildebrandt, A. J. Riker. - 1953.

104. Mulabagal, V. Plant Cell Cultures - An Alternative and Efficient Source for the Production of Biologically Important Secondary Metabolites / V. Mulabal, H.-S. Tsay // International Journal of Applied Science and Engineering. - 2004. - Vol. 2. - P. 29-48.

105. Somberg, J. Digitalis: 200 years in perspective. / J. Somberg, D. Greenfield, D. Tepper // American. Heart Journal. - 1986. - Vol. 111. — P. 615— 620.

106. Luckner, M. Cardenolides. / M. Luckner, B. Diettrich // Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plant. - Academic press, Inc. London. - 1988. -Vol. 5.-P. 193-212.

107. Hagimori, M. Studies on the production of Digitalis Cardenolides by Plant Tissue Culture / M. Hagimori, T. Matsumoto, Y. Obi. // Plant. Phisiol. -1982. - Vol. 69 - P. 653-656.

108. Lui, J. H. Cardenolides production from Digitalis lanata Ehrh. Organ cultures. / J. H. Lui, E. J. Staba // J. of Natural Products. - 1979. - Vol. 42. -682 p.

109. Ohlsson, A. B. Effect of gibberellic acid on cardenolide accumulation by Digitalis lanata tissue cultures grown in light and darkness. / A. B. Ohlsson, L. Bjork // Journal of Plant Physiology. - 1988. - Vol. 133(5). - P. 535-538.

110. Ohlsson, A.B. Effect of abscisic acid on cardenolide accumulation and growth in Digitalis lanata tissue cultures / A. B. Ohlsson // Journal of Plant Physiology. - 1990. - Vol. 136. - P. 510-512.

111. Berglund, T. Ultrastructure of Digitalis lanata tissue cultures: Effect of giberellic acid and SAN 9789. / T. Berglund, A. B. Ohlsson // Protoplasma. 1991.-Vol. 161.-P. 58-69.

112. Zohra, F. Callus induction, biomass growth, and plant regeneration in Digitalis lanata Ehrh.: influence of plant growth regulators and carbohydrates / F. Zohra, M. Abdul, F. Samar, A. Anjum, U. Shahid // Cellular Differentiation and Molecular Genetics Section, Department of Botany, Turk J Bot. - 2009. - Vol. 33. -P. 393-405.

113. Manabu Hagimori. Fermenter Culture of Shoot-forming Cultures of Digitalis purpurea L J Manabu Hagimori, Takashi Matsumoto, Yoichi Mikami // Agric. Biol Chem. - 1984. - Vol. 48 (4). - P. 965-970.

114. Ghanem, A. In vitro propagation and cardiac glycosides content of Digitalis lanatas. A. Ghanem, A. M. Aboul-Enein, A. El-Sawy, M. R. Rady, M. Mona // Ibrahem international journal of academic research. - 2010. - Vol. 2. -No. 6. - November, Part II. - Hamdard University, New Delhi 110 062 - INDIA, C. 349-356.

115. Артамонов, В. И. Биотехнология - агропромышленному комплексу / В. И. Артамонов. - М.: Наука, 1989. - 160 с.

116. Артамонов, В. И. Сельские профессии биотехнологии / В. И. Артамонов. - М.: Изд-во МСХА, 1992. - 127 с.

117. Атанасов, А. Биотехнология в растениеводстве / А. Атанасов -Новосибирск: ИЦ и Г СО РАН, 1993.-241 с.

118. Баев, А. А. Биотехнология: под ред. A.A. Баева. М.: Наука, 1984.-309 с.

119. Биотехнология сельскохозяйственных растений. М.: Агропромиздат, 1987. - С. 241-244.

120. Bornman, J. F. UV-radiation as an environmental stress in plants. / J. F. Bornman // J. Photochem. Photobiol. - 1991. - Vol. 8(3). - P. 337-341.

121. Бутенко, Р. Г. Изолированные протопласты растений - объект и модель для физиологических исследований / Р. Г. Бутенко // Культура клеток растений. - М.: Наука, 1981. - С. 69-84.

122. Лакин, Г. Ф. Биометрия / Г. Ф. Лакин. - М.: Высш. шк., 1980. -

292 с.

123. Государственная фармакопея СССР. Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. - М.: Медицина, 1989. - 400 с.

124. Компанцева, Е. В., Идентификация и количественное определение флавоноидов в многокомпонентном лекарственном средстве кардиотонического действия / Е. В. Компанцева, А. Ю. Айрапетова // Фармация. - 2000. - № 1. - С. 40-41.

125. Ермаков, А. И. Методы биохимического исследования растений. / А. И. Ермаков. - Ленинград: Агропромиздат, 1987. - 320 с.

126. Бузун, Г. А. Определение белков в растениях с помощью амидо-черного / Г. А. Бузун, К. Н. Джемухадзе, Л. Д. Милешко // Физиология растений. - 1982. - Т. 29. - № 1. - С. 198-204.

127. Ушанова, В. М. Основы научных исследований / В. М. Ушанова, О. И. Лебедева. - Красноярск, 2003. - 98 с.

128. Сорокина, И. К. Основы биотехнологии растений. Культура клеток и тканей: учебное пособие / Составители: И. К. Сорокина, Н. И. Старичкова, Т. Б. Решетникова, Н. А. Гринь. - УМК биологического факультета СГУ им. Н. Г. Чернышевского. - 2002. - 45 с.

129. Основы сельскохозяйственной биотехнологий / Г. С. Муромцев [и др.]. -М: Наука, 1990.

130. Морфогенез и микроклональное размножение в культуре in vitro представителей рода Digitalis. / Л. Г. Бердичевец [и др.]. // Биология клеток in vitro и биотехнология: тез. докл. IX Междунар. конф. - М.: ИД ФБК-ПРЕСС, 2008. - С. 44.

131. Kreis, W. Cardenolide biosinthesis in foxglove / W. Kreis, A. Hensel, U. Stuhlemmer // Planta Med. - 1998. - V. 64. - P. 491-499.

132. Основы химической регуляции роста и продуктивности растений / Г. С. Муромцев [и др.]. - М.: Агропромиздат, 1987. - С. 316-322.

133. Asemota, О. Date palm {Phoenixdactylifera L.) in vitro morphogenesis in response to growthregulators, sucrose and nitrogen. / O. Asemota, C. R. Eke, J. O. Odewale // African J. Biotechnol. - 2007. - Vol. 6. -P. 2353-2357.

134. Биотехнология растений: культура клеток / Г. П. Болвелл [и др.]. - М.: Агропромиздат, 1989. - 280 с.

135. Калинин, Ф. Л. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений / Ф. Л. Калинин, В. В. Сарнацкая, В. Е. Полищук. - Киев: Наукова думка, 1980. - 487 с.

136. Garve, R. Growth, morphogenesis and cardenolide formation in long-term cultures of Digitalis lanala. / R. Garve, M. Luckner, E. Vogel, A. Tewes, L. Nover // Planla medico. - 1980. - Vol. 40. - P. 92-103.

137. Цыренов, В. Ж. Основы биотехнологии: Культивирование изолированных клеток и тканей растений: учебно-методическое пособие /

B. Ж. Цыренов. - Улан-Удэ: ВСГТУ, 2003.

138. Абилев, С. К. Основные классы химических соединений, мутагенное действие которых связано с активностью их метаболитов /

C. К. Абилев // Итоги науки и техники. Серия общая генетика. - М.: ВИНИТИ, 1988. -Вып.9. - 197 с.

139. Рапопорт, И. А. Особенности и механизм действия супермутагенов / И. А. Рапопорт // Супермутагены. - М., 1966. - С. 9-22.

140. Канаш, Е. В. Изменение продуктивности и содержания пигментов у растений фасоли при ультрафиолетовом стрессе. / Е. В. Канаш // Фотосинтез и продуктивность растений. - Саратов: ВАСХНИЛ, 1990. -С. 86-89.

141. Akihisa, T. Light induced antocyanin reduces the extent of damade to DNA in UV-irradiated / T. Akihisa, T. Kosaku, O. Takeo // Plant Cell Physiol. -1991.-Vol. 32(4).-P. 541.

142. Beggs, C. UV-B radiation and adaptive mechanisms in plant / C. Beggs, U. Shneider-Ziebert, Wellman // Photoch. Photobiol. - 1986. - Vol. 3. -P. 243-255.

143. Сидоров, В. A. Биотехнология растений. Клеточная селекция / В. А. Сидоров, отв. ред. Ю. Ю. Глеба. - Киев: Наук, думка, 1990. - 280 с.

144. Драницина, В. Б. Микроэлементы - химически и фармакологически активные ингредиенты лекарственных растений: автореф. дис. ... канд. биол. наук / В. Б. Драницина. - Ярославль, 1975. - 26 с.

145. Филиппович, Ю. Б. Биологическая химия: учеб. пособие / Ю. Б. Филиппович. - M.: Academia, 2008. - 254 с.