Лабораторные маркеры оценки функциональной активности тромбоцитов при хранении тромбоцитного концентрата тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Кишенко Василий Васильевич

• Кишенко Василий Васильевич
• кандидат наук
• 2026

Оглавление диссертации кандидат наук Кишенко Василий Васильевич

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Факторы, лимитирующие срок хранения тромбоцитного концентрата

1.2. Методы получения тромбоцитного концентрата

1.3. Тромбоциты - основной компонент тромбоцитного концентрата

1.4. Тромбоцитарные мембранные везикулы

1.5. МикроРНК

1.6. Повреждение тромбоцитов при хранении

1.7. Рефрактерность тромбоцитов после трансфузии

1.8. Методы оценки качества тромбоцитного концентрата

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Приготовление и хранение тромбоцитного концентрата

2.2. Фракционирование тромбоцитного концентрата

2.3. Сканирующая электронная микроскопия низкого напряжения

2.4. Динамическое рассеяние света

2.5. Полимеразная цепная реакция в реальном времени

2.6. Иммуноблотинг

2.7. Лазерная проточная цитометрия

2.8. Анализ данных

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1. Мофрологические признаки активации и везикуляции тромбоцитов при хранении

3.2. Оценка фракций тромбоцитного концентрата методом СЭМНН

3.3. Оценка везикулярных фракций методом динамического рассеяния света

3.4. Изменение количества микроРНК

3.5. Белковый состав фракций тромбоцитного концентрата

3.6. Характеристика фракций методом проточной цитометрии

3.7. Протокол оценки везикуляции в тромбоцитном концентрате

4. ОБСУЖДЕНИЕ

5. ВЫВОДЫ

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

7. ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ

8. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

9. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Лабораторные маркеры оценки функциональной активности тромбоцитов при хранении тромбоцитного концентрата»

Актуальность исследования

Одной из задач клинической лабораторной диагностики является разработка новых методов исследования клеточного состава биоматериалов, определение требований и показаний к условиям их применения, что напрямую связано с оценкой качества приготовления и хранения препаратов и компонентов крови, в том числе тромбоцитного концентрата.

Тромбоцитный концентрат (ТК) применяется для пациентов со сниженным количеством тромбоцитов или со сниженной функциональной активностью тромбоцитов в лечебных и профилактических целях (Garraud O., Hamzeh-Cognasse H., Chalayer E. et al, 2023). Переливание ТК используют в терапии гематологических злокачественных новообразований, недостаточности костного мозга, для профилактики или купирования геморрагического синдрома (Карпова О.В., Образцов И.В., Трахтман П.Е. и др., 2014; Liu C., Su Y., Guo W. et al, 2024). Пациенты могут получать переливания ТК для улучшения гемостаза во время спонтанного, травматического или периоперационного кровотечения (Lin H.C., Chang H.W., Hsiao S.H. et al, 2015). Помимо гемостаза тромбоциты выполняют множество других функций, таких как: стимулирование воспалительного и иммунного ответа; привлечение лейкоцитов и клеток-предшественников к местам сосудистых повреждений; хранение, выработка и высвобождение провоспалительных, противовоспалительных и ангиогенных факторов; генерация тромцбоцитарных везикул (Толстов Д.А., Богдан В.Г., 2012; Trochanowska-Pauk N, Walski T, Bohara R, et al, 2024). В настоящее время сфера применения ТК постепенно расширяется. Например, богатая тромбоцитами плазма, содержащая факторы роста, находит применение в области регенеративной медицины (Trochanowska-Pauk N., Walski T., Bohara R. et al, 2024).

Сроки хранения ТК ограничены и составляют от 3 до 7 дней, они зависят от способа получения концентрата и от принятых в данной стране стандартов хранения (Rezvany M.R., Moradi Hasan-Abad A., Sobhani-Nasab A. et al, 2024). Это создает серьезные проблемы как для станций переливания крови, так и для банков

крови. ТК с истекшим сроком хранения не могут быть использованы и утилизируются. По данным ВОЗ за 2021 год около 23% запасов копонентов крови во всем мире были утилизированы исключительно из-за истечения срока годности (Всемирная организация здравоохранения, 2023 г.).

На возможность использования ТК накладывают ограничения проведение окончательного лабораторного исследования доноров и логистические издержки. Особо остро эта проблема стоит перед больницами без собственных станций переливания крови, доставка препаратов крови в которые может занимать несколько дней (Liu C., Su Y., Guo W. et al, 2024). Нередко в банки крови поступают ТК с истекающими сроками хранения, что усложняет управление запасами и может привести к нехватке компонентов для переливания. Ограничения сроков хранения ТК приводят к значительной трате ресурсов (Garraud O., Hamzeh-Cognasse H., Chalayer E. et al, 2023).

Таким образом, широкое использование тромбоцитного концентрата наряду с ограниченным скором его хранения делает поиск маркеров оценки качества тромбоцитов при хранении актуальной задачей клинической лабораторной диагностики.

Степень разработанности темы

Переливание тромбоцитов - стандартная медицинская процедура необходимая для поддержания нормального уровня тромбоцитов в кровотоке.

Количество, качество и продолжительность жизни тромбоцитов являются тремя важными факторами в физиологии, патологии и переливании тромбоцитов. Существующие способы сбора и подготовки тромбоцитного концентрата, методы обработки, принимаемые для ограничения побочных трансфузионных реакций, а также методы хранения и консервации оказывают негативное влияние на тромбоциты (Garraud O., Hamzeh-Cognasse H., Chalayer E. et al, 2023; Trochanowska-Pauk N., Walski T., Bohara R. et al, 2024). Даже при «идеальных» условиях хранения в ТК могут происходить модификации, приводящие к снижению функциональной активности тромбоцитов и их жизнеспособности

(Maues J.H.D.S., Moreira-Nunes C.F.A., Pontes T.B. et al, 2018). Такие изменения, известные как повреждение тромбоцитов при хранении (Platelet Storage Lesion), влияют на срок полезного использования и качество полученного препарата (Maues J.H.D.S., Moreira-Nunes C.F.A., Pontes T.B. et al 2018; Liu C., Su Y., Guo W. et al, 2024).

Явление повреждения тромбоцитов при хранении связано с морфологическими, биохимическими и функциональными изменениями (Liu C., Su Y., Guo W. et al, 2024). Так показано, что тромбоциты в процессе хранения могут терять дискоидную форму, также может снижаться средний объем тромбоцитов (Maurer-Spurej Ею, Pfeiler G., Maurer N. et al, 2001; Ray V., Chaudhary R., Singh H. et al, 2003). Метаболическая активность тромбоцитов изменяет pH в ТК, что вместе с механической травмой, гипоксией и гипотермией провоцирует процессы активации и повреждения тромбоцитов (Seghatchian J., Krailadsiri P., 2001; Singh H., Chaudhary R., Ray V. et al, 2003). Активация тромбоцитов может приводить к их агрегации, высвобождению содержимого а-гранул и образованию тромбоцитарных везикул (Liu C., Su Y., Guo W. et al, 2024; Trochanowska-Pauk N., Walski T., Bohara R. et al, 2024). Также активация инициирует процессы апоптоза в тромбоцитах и может изменять экспрессию тромбоцитарных гликопротеинов (Сироткина О.В., Ласковец А.Б., Андоскин П.А. и др., 2016; Czabotar P.E., Lessene G., Strasser A. et al, 2014).

Несмотря на шикорое применение и важность тромбоцитных концентратов в клинической практике, оценка их качества и безопасности выполняется с учетом всего нескольких показателей: количество тромбоцитов, остаточное содержание лейкцоитов, pH и стерильность (Постановление Правительства Российской Федерации от 22.06.2019 № 797). Набор оцениваемых в рутинной практике показателей позволяет судить о безопасности, но не о состоянни тромбоцитов в концентрате (Garraud O., Hamzeh-Cognasse H., Chalayer E. et al, 2023). Активация тромбоцитов при получении и хранении ТК повышает в нем содержание биологически активных молекул, которые участвуют в воспалительных и других имунных реакциях, повышает клиренс тромбоцитов, влияет на гемостатические

свойства тромбоцитов (Liu C., Su Y., Guo W. et al, 2024; Trochanowska-Pauk N., Walski T., Bohara R. et al, 2024). Для повышения эффективности трансфузий, поиска и разработки новых методов производства ТК важно оценивать показатели, которые могут сказать о функциональном состоянии тромбоцитов. Одним из перспективных подходов к оценке состояния клеток в тромбоцитном концентрате может выступать анализ внеклеточных микровезикул в ТК, так как везикуляция является одним из основных проявлений активации тромбоцитов (Flaumenhaft R., 2006; Hulsmans M., Holvoet P., 2013; Ha D., Yang N., Nadithe V., 2016). В настоящий момент активно изучаются механизмы образования везикул; селективного накопления в них белков, липидов, мРНК и малых некодирующих РНК; пути транспортировки и внедрения микровезикул в клетку-реципиент; роль в межклеточной коммуникации и функциональное значение разных типов везикул (Schneider A., Simons M., 2013; Ha D., Yang N., Nadithe V., 2016; Kriebardis A.G., Antonelou M.H., Georgatzakou H.T. et al, 2016).

Изменения, происходящие с тромбоцитами при хранении, постоянно изучаются, идет поиск новых методов для функциональной характеристики тромбоцитов с целью их внедрения для более качественной характеристики тромбоцитных концентратов и таргетного их применения (VucetiC D., Ilic V., Vojvodic D. et al, 2018). Однако до настоящего времени не предложено единого лабораторного теста по оценке функциональной активности и жизнеспособности тромбоцитов в получаемых ТК до момента переливания реципиенту. Это связано с целым рядом причин. Первая причина заключается в неполном понимании причинных факторов и механизмов развития процесса повреждения тромбоцитов при хранении. Вторая - влияние индивидуальных особенностей тромбоцитов каждого донора, например, повышенная функциональная активность тромбоцитов. Также важную проблему составляет процесс подготовки проб к исследованию, так как любое воздействие на тромбоциты в концентрате вызывает физиологический ответ, приводящий к активации клеток (Devine D.V., Serrano K., 2010). Нет показателя, который бы полностью коррелировал с качеством получаемых ТК. Существует потребность в простом, экономически обоснованном

и чувствительном тесте или комбинации тестов, которые позволят контролировать качество переливаемых тромбоцитных концентратов (Singh H., Chaudhary R., Ray V. et al, 2003), что обусловливает необходимость поиска лабораторных маркеров оценки функциональной активности тромбоцитов при хранении тромбоцитного концентрата.

Цель исследования

Определить лабораторные морфологические, иммунологические и молекулярно-генетические маркеры функционального состояния клеток в тромбоцитном концентрате для оценки его качества на разных сроках хранения.

Задачи исследования:

1. Проанализировать морфологические изменения клеток тромбоцитного концентрата с помощью сканирующей электронной микроскопии низкого напряжения в процессе его хранения.

2. Разработать способ получения фракций различных типов мембранных везикул, содержащихся в тромбоцитном концентрате.

3. Охарактеризовать изменения функционального состояния тромбоцитов и мембранных везикул в процессе хранения тромбоцитного концентрата иммунологическими, биохимическими и молекулярно-генетическими методами.

4. На основе выявленных лабораторных маркеров функционального состояния тромбоцитов разработать протокол оценки состояния клеток в тромбоцитном концентрате при хранении для оценки его качества.

Научная новизна

Впервые определены лабораторные маркеры для оценки качества тромбоцитного концентрата в процессе хранения и разработан протокол лабораторного исследования для внедрения в клиническую практику.

Впервые для морфологической характеристики тромбоцитного концентрата использован метод сканирующей электронной микроскопии низкого напряжения

(СЭМНН), имеющий целый ряд преимуществ по сравнению с другими типами электронной микроскопии: не требуется токопроводящий слой, упрощается процесс иммунодетекции биологических структур, используется менее жесткая фиксация препаратов.

Впервые для количественной и иммунологической характеристики везикул и клеток при хранении тромбоцитного концентрата использован метод высокочувствительной проточной цитометрии.

Впервые методом ПЦР в реальном времени в тромбоцитах и внеклеточных микровезикулах проанализированы микроРНК mir-451a, 1шг-142-3р, 1ШГ-223 и 1шг-126, которые ранее не оценивались в процессе хранения тромбоцитного концентрата. Впервые показано изменение количества данных микроРНК в клетках и внеклеточных микровезикулах как молекулярно-генетический маркер состояния тромбоцитов при хранении тромбоцитного концентрата.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Теоретическая значимость работы заключается в комплексном анализе состояния тромбоцитов в процессе хранения тромбоцитного концентрата, что приближено к физиологическим условиям существования тромбоцитов. Был визуализирован процесс везикуляции тромбоцитов при хранении тромбоцитного концентрата, проведена комплексная биохимическая оценка содержимого тромбоцитов и выделяемых ими везикул, оценено изменение состава ряда белков и микроРНК в процессе активации тромбоцитов при хранении тромбоцитного концентрата. Полученные данные обогащают знания о физиологии тромбоцитов и тромбоцитарных везикул.

Найденные лабораторные маркеры и разработанный протокол, позволяющие оценить функциональное состояние тромбоцитов и их жизнеспособность имеет большое значение для оценки качества тромбоцитных концентратов в процессе приготовления и при трансфузии, и могут быть внедрены в практику клинической лабораторной диагностики. Новые методы оценки функционального состояния тромбоцитов позволяют получать больше клинически

значимой информации о состоянии клеток в тромбоцитном концентрате и применять подход к трансфузионной терапии в зависимости от клинических задач.

Методология и методы исследования

Диссертационная работа выполнялась с соблюдением всех правил проведения научных исследований, международных и российских этических принципов и норм. Проведение исследования было одобрено локальным этическим комитетом (протокол № 34 от 13.03.2017 г.).

Для реализации цели и решения задач исследования применялись общенаучные, как теоретико-эмпирические, так и специальные методы научного познания. Для обоснования основных положений были использованы анализ литературы, изучение нормативных документов, лабораторные и статистические методы.

Положения, выносимые на защиту:

1. Тромбоцитарные мембранные везикулы представляют собой биомаркер функционального состояния тромбоцитов в тромбоцитном концентрате, могут быть визуализированы с помощью сканирующей электронной микроскопии и выделены в отдельную фракцию методом ультрацентрифугирования.

2. В процессе хранения тромбоцитного концентрата увеличивается количество активированных тромбоцитов и тромбоцитарных мембранных везикул, что сопровождается увеличением в тромбоцитах количества активированной каспазы-3 и белка VDAC1, а в тромбоцитарных мембранных везикулах - увеличением количества микроРНК miR-126, miR-223, miR-15a, miR-221 и белка AGO2.

3. Разработан протокол лабораторной диагностики функционального состояния клеток в тромбоцитном концентрате на основе определения количества тромбоцитарных мембранных везикул с помощью проточной цитометрии и флуоресцентно окрашенных специфичных антител.

Степень достоверности и апробация результатов исследования

Достоверность полученных результатов обоснована теоретическим анализом проблемы с использованием литературных данных международных цитируемых баз, четким следованием дизайну исследования, протоколам конкретных исследований, использованием современных методов исследования и корректными приемами статистической обработки.

Результаты исследования были представлены в виде устных и стендовых сообщений на российских и международных конгрессах и симпозиумах: XVII Зимняя молодежная школа по биофизике и молекулярной биологии Петербургского института ядерной физики им. Б.П. Константинова, г. Гатчина, 29 февраля - 5 марта 2016 года; XXIX International Symposium on Technical Innovations in Laboratory Hematology, Milano, Italy, May 12-14, 2016; XXVIth Congress of the ISTH. Berlin, Germany, July 8-13, 2017; VI Всероссийская конференция «Противоречия современной кардиологии: спорные и нерешенные вопросы», г. Самара, 10-11 ноября 2017 года; XIX Зимняя молодежная школа по биофизике и молекулярной биологии Петербургского института ядерной физики им. Б.П. Константинова, г. Гатчина, 17-22 февраля 2018 года; The Congress on Open Issues in Thrombosis and Hemostasis 2018 together with the 9th Russian Conference on Clinical Hemostasiology and Hemorheology, St.Petersburg, October 46, 2018; The International Society on Thrombosis and Hemostasis Scientific and Standardization Committee Meeting. Dublin, Ireland, July 18-21, 2018; the XXVII Congress of the International Society on Thrombosis and Haemostasis, Melbourn, Australia, July 6-10, 2019; Российский форум по тромбозу и гемостазу совместно с 10-й (юбилейной) конференцией по клинической гемостазиологии и гемореологии, 8-9 октября 2020; XXX Всероссийская юбилейная научно-практическая конференция «Национальные традиции клинической лабораторной диагностики», Москва, 18-20 марта 2025 года.

Внедрение результатов в практику.

Результаты диссертационного исследования внедрены в практику работы станции переливания крови и в образовательный процесс кафедры лабораторной медицины и генетики ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова» МЗ РФ, а также ФГБУ РосНИИГТ ФМБА России.

Публикации по теме диссертации.

По теме диссертации опубликовано 16 печатных работ, из них 4 статьи - в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки Российской Федерации для опубликования основных результатов диссертационных исследований и в международной базе Scopus.

Личный вклад автора.

Диссертант непосредственно участвовал на всех этапах проведения исследования. Формулировка цели и задач, разработка дизайна исследования проводились совместно с научным руководителем д.б.н. Сироткиной О.В. Подбор и анализ зарубежных и отечественных литературных источников и нормативных документов по теме диссертационного исследования, проведение лабораторных исследований, формирование базы данных полученных результатов с последующим статистическим анализом, написание текста диссертации, подготовка публикаций и докладов по теме исследования выполнены диссертантом самостоятельно.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности.

Тема диссертационного исследования, его актуальность, цель и задачи, использованные материалы и методы, полученные результаты, их обсуждение, выводы и практические рекомендации соответствуют паспорту специальности 3.3.8. Клиническая лабораторная диагностика, в том числе п. 1 «Определение качественных и количественных характеристик морфологических, химических и

других параметров биологических материалов», п. 2 «Оптимизация и разработка новых методов исследования химического и клеточного состава биоматериалов, определение требований и показаний к условиям их применения», п. 4 «Разработка методов оценки физиологических лабораторных параметров организма и состава биологических жидкостей», п. 5 «Разработка теоретической базы для поисковых диагностических программ», п. 8 «Морфологические исследования биоматериала» и п. 11 «Молекулярно-генетические методы исследований».

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 132 страницах, состоит из следующих разделов: введение; обзор литературы; материалы и методы; результаты; обсуждение; выводы; практические рекомендации; перспективы дальнейшей разработки темы; список сокращений; список литературы, включающий 160 источников, из них 17 отечественных и 143 зарубежных. Диссертация содержит 2 таблицы и 32 рисунка.

Диссертационная работа выполнена на кафедре лабораторной медицины с клиникой Института медицинского образования и в научной лаборатории Института молекулярной биологии и генетики федерального государственного бюджетного учреждения «Национальный медицинский исследовательский центр им. В. А. Алмазова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Санкт-Петербург.

Сканирующая электронная микроскопия проводилась на базе Междисциплинарного ресурсного центра по направлению «Нанотехнологии», Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург (Дополнительное соглашение №2 от 11.08.2017 г. к Соглашению № С-РЦ 9/8 от 14.10.2015 г.)

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Факторы, лимитирующие срок хранения тромбоцитного концентрата

Для восполнения уровня тромбоцитов у пациентов со сниженным количеством тромбоцитов или со сниженной активностью тромбоцитов используют тромбоцитный концентрат (Garraud O., Hamzeh-Cognasse H., Chalayer E. et al, 2023). Время хранения ТК ограниченно, и в большинстве стран срок хранения ограничен пятью днями (Gabrilchak A., Gusyakova O., Antipov V. et al, 2024). Лимитируют сроки хранения ТК следующие факторы: короткий срок жизни тромбоцитов, риск бактериальной инфекции, повреждение тромбоцитов при хранении (Platelet Storage Lesion, PLS) и запуск процесса апоптоза (Södergren A.L., Tynngârd N., Berlin G. et al, 2016; Liu C., Su Y., Guo W. et al, 2024; Trochanowska-Pauk N., Walski T., Bohara R. et al, 2024). В организме продолжительность жизни тромбоцита составляет 7-10 дней. В настоящее время считается, что время жизни тромбоцитов ограничено внутренней программой апоптоза (Lebois M., Josefsson E.C. et al, 2016).

При переливании тромбоцитного концентрата существует риск передачи реципиенту патогенных микроорганизмов, источником которых может быть донор или нарушение стерильных условий в процессе получения препарата крови (Губанова М.Н., Чемоданов И.Г., Гайворонская В.В. и др., 2017; Rezvany M.R., Moradi Hasan-Abad A., Sobhani-Nasab A. et al, 2024). Попадание всего нескольких бактерий в ТК может приводить к накоплению большого количества бактерий или их токсинов в препарате. Хранение тромбоцитных концентратов осуществляется в специализированных инкубаторах на мешалках при температуре 22°C ± 2°C для предотвращения агрегации тромбоцитов и поддержания аэробного метаболизма (George C.E., Saunders C.V., Morrison A. et al, 2023). Температура и способ хранения обеспечивают идеальные условия для размножения бактерий с бактериальной обсемененностью от 1: 1000 до 1:2500 (Levy J.H., Neal M.D., Herman J.H., 2018; George C.E., Saunders C.V., Morrison A. et al, 2023). Для предотвращения бактериального загрязнения внедряют строгие критерии отбора доноров,

технологии двухэтапного лабораторного скрининга: серологический скрининг + тестирование нуклеиновых кислот (nucleic acid testing, NAT) (Губанова М.Н., Чемоданов И.Г., Гайворонская В.В. и др., 2017; Rezvany M.R., Moradi Hasan-Abad A., Sobhani-Nasab A. et al, 2024). Помимо скрининга для борьбы с инфекционными осложнениями и имунными реакциями используют технологии инактивации патогенов (pathogen reduction technology, PRT). Но, не смотря на все методы борьбы с посттрансфузионной инфекцией, на современном этапе сохраняется риск инфекции компонентов крови, особенно тромбоцитных концентратов (George C.E., Saunders C.V., Morrison A. et al, 2023).

Риск бактериального заражения является главным фактором, ограничивающим срок годности тромбоцитного концентрата (George C.E., Saunders C.V., Morrison A. et al, 2023). Согласно отчету Управления по контролю за продуктами и лекарствами США (US FDA) инфекции, вызванные бактериальным загрязнением, в период с 2012 по 2016 год занимают третью позицию по причинам смертности вследствие переливания крови, при этом бактериальная инфекция встречается значительно чаще вирусной (Rezvany M.R., Moradi Hasan-Abad A., Sobhani-Nasab A. et al, 2024).

В постоянных трансфузиях тромбоцитов нуждаются онкогематологические пациенты, что увеличивает риск развития тяжелых посттрансфузионных инфекционных осложнений. Посттрансфузионные инфекционные осложнения увеличивают продолжительность лечения и ухудшают прогноз (Губанова М.Н., Чемоданов И.Г., Гайворонская В.В. и др., 2017). Переливание ТС, контаминированного бактериями, часто является летальным для пациента (Brecher M.E., Hay S.N., 2005).

Не смотря на улучшение процессов получения и хранения компонентов крови, около 7 % всех переливаний ТС сопровождаются неблагоприятными трансфузионными реакциями (Adverse transfusion reactions, ATR) (Marcoux G., Duchez A.C., Rousseau M. et al, 201б).

K неблагоприятным реакциям относят: аллергические реакции, лихорадочные реакции, реакции трансплантат против хозяина, острое

повреждение легких при переливании (Transfusion-related acute lung injury, TRALI), посттрансфузионная перегрузка кровообращения (Transfusion-associated circulatory overload, TACO) (Semple J.W., Rebetz J., Kapur R., 2019; Garraud O., Hamzeh-Cognasse H., Chalayer E. et al, 2023; Chien S.H., Huang H.Y., Chen Y.J. et al, 2024). При этом TRALI является глобальной проблемой здравоохранения с частотой возникновения от 1:10000 переливаний до 1:100 переливаний у пациентов в критическом состоянии. TRALI обусловлено переливанием патогенных донорских антител и/или модификаторов биологического ответа, содержащихся в компоненте крови (McVey M.J., Weidenfeld S., Maishan M. et al, 2021).

Из аллергических реакций наиболее опасными являются анафилактические по типу IgA трансфузионных анафилактических реакций. Частота встречаемости такого осложнения 1:20 000 переливаний. Проявления этих реакций не отличается от классической анафилаксии. Диагноз анафилактической трансфузионной реакции устанавливается путем выявления IgA-антител в сыворотке пациента, получившего дозу тромбоцитного концентрата. Во избежание такой реакции пациентам с анти-IgA антителам должны переливаться тромбоциты, собранные от IgA-дефицитных доноров (Stroncek D.F., Rebulla P., 2007). Механизм развития лихорадочной реакции до конца не ясен. Предполагают, что это может быть связано с реакцией антилейкоцитарных антител реципиента с лейкоцитами в ТК. Было показано, что частота лихорадочных реакций снижается при очистке ТК от лейкоцитов (Chien S.H., Huang H.Y., Chen Y.J. et al, 2024). Однако при трансфузии эритроцитов, содержащих большие концентрации лейкоцитов, данные реакции развиваются значительно реже. Лихорадочные реакции чаще возникают именно при переливании тромбоцитных концентратов, их частота составляет от 5 до 30% от всех трансфузий ТК. Частота возникновения лихорадочных реакций находится в прямой зависимости от срока, в течение которого хранился тромбоцитный концентрат: чем дольше хранился ТК до переливания, тем вероятность развития реакции выше (Chien S.H., Huang H.Y., Chen Y.J. et al, 2024). Тромбоциты, которые были подвержены стрессу или подвергались длительному хранению, с большей

вероятностью будут секретировать факторы, вызывающие воспалительные и лихорадочные реакции (Garraud O., Hamzeh-Cognasse H., Chalayer E. et al, 2023).

Реакции «трансплантат против хозяина», связанные с переливанием -редкое фатальное событие, наблюдаемое у пациентов с ослабленным иммунитетом или иммунокомпетентных пациентов. Данную реакцию вызывают многие компоненты крови, в том числе тромбоциты. Клинически возможны следующие проявления: эритема, диарея, гепатит, аплазия. При лабораторном исследовании выявляется: панцитопения, повышенный уровень щелочной фосфатазы, увеличение уровня АЛТ, АСТ и билирубина. Биопсия печени или кишечника обнаруживает инфильтраты лимфоцитов. Патогенез заключается в пролиферации донорских Т-лимфоцитов и повреждении тканей реципиента, таких как кожа, печень, кишечник и костный мозг. Как правило, реакция развивается через 1-2 недели после трансфузии. Проводимая на современном этапе инактивация компонентов крови позволяет значительно снизить частоту развития реакции «трансплантат против рецепиента» (Manduzio P., 2018).

Примерно у 10-15 % пациентов может развиться аллоиммунная рефрактерность к переливанию тромбоцитов (allo-PTR), вызванная аллоантителами против человеческого лейкоцитарного антигена I класса (HLA-I) или антигенов системы HPA (Kayama A., Eto K., 2024).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Кишенко Василий Васильевич, 2026 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Варга О.Ю., Рябков В.А. Апоптоз: понятие, механизмы реализации, значение. Экология человека 2006.7:8-32.

2. Глобальный доклад по текущей ситуации в отношении безопасности донорской крови и ее наличия, 2021 г. [Global status report on blood safety and availability 2021]. Женева: Всемирная организация здравоохранения; 2023 г. Лицензия: CC BYNC-SA 3.0 IGO.

3. Губанова М.Н., Чемоданов И.Г., Гайворонская В.В., Аюпова Р. Ф., Кожемяко О. В., Аверьянов Е. Г., Мадзаев С. Р., Жибурт Е. Б Инактивация патогенов в клеточных компонентах крови Трансфузиология № 3 (Том 18) 2017.

4. Дивакова Ю.В., Колосков А.В. Эндотелиально-тромбоцитарное взаимодействие при сепсисе. Гематология и трансфузиология. 2022;67(3):406-418.

5. Долгов В.В., Свирин П.В., Лабораторная диагностика нарушений гемостаза, Тверь: Триада 2005:22-60.

6. Дятлова А.С., Дудков А.В., Линькова Н.С., Хавинсон В.Х. Молекулярные маркеры каспаза-зависимого и митохондриального апоптоза: роль в развитии патологии и в процессах клеточного старения. Успехи современной биологии, 2018, том 138, № 2:126-137.

7. Карпова О.В., Образцов И.В., Трахтман П.Е., Игнатова А.А., Пантелеев М.А., Румянцев С.А. Сравнение морфофункциональных свойств тромбоцитов в зависимости от различных способов процессинга. Онкогематология. 2014;9(4):37-45.

8. Ермаков А.И., Гайковая Л.Б., Сироткина О.В., Вавилова Т.В. Исследование уровня тромбоцитарных микрочастиц и экспрессии Р-селектина у пациентов с заболеваниями периферических артерий нижних конечностей. Медицинский академический журнал. 2023;1(№1):107-114.

9. Кондратов К.А., Петрова Т.А., Михайловский В.Ю., Иванова А.Н., Костарева А.А., Федеров А.В. Изучение внеклеточных везикул, выделенных из плазмы

крови, с помощью сканирующей электронной микроскопии низкого напряжения Цитология. 2017; 59 (3): 169—177.

10.Мазуров А.В., Васильев С.Я. Физиология и патология тромбоцитов, М.: Литтерра, 2011 г.

11.Минеева Н.В., Кробинец И.И., Блинов М.Н., Капустин С.И. Антигены и антитела к тромбоцитам (обзор литературы). Онкогематология. 2013;8(3):60-68.

12.Михайлова В.А., Белякова К.Л., Вязьмина Л.П., Шевелева А.Р., Сельков С.А., Соколов Д.И. Определение микровезикул, образуемых nk-клетками, методом проточной цитофлуориметрии. Медицинская иммунология 2018, 20(2):251-254.

13.Пономарева А.А., Невзорова Т.А., Мордаханова Э.Р., Андрианова И.А., Литвинов Р. И. Структурная характеристика тромбоцитов и тромбоцитарных микровезикул. Цитология 2016, 58 (2): 105—114.

14. Постановление Правительства Российской Федерации от 22.06.2019 № 797 "Об утверждении Правил заготовки, хранения, транспортировки и клинического использования донорской крови и ее компонентов и о признании утратившими силу некоторых актов Правительства Российской Федерации"

15.Рахмани А.Ф., Михайлова Е.А., Дубинкин И.В., Калмыкова о.С., Галузяк В.С., Троицкая В.В., Гапонова Т.В. Рефрактерность к трансфузиям донорских тромбоцитов у больных апластической анемией и гемобластозами. Онкогематология 2018,13(2):62-72.

16.Сироткина О. В., Ласковец А. Б., Андоскин П. А., Емельянов А. К., Заботина А. М., Вавилова Т. В. Увеличение количества рецепторов GP IIb-IIIa и P2Y12 в тромбоцитах при активации — свидетельство синтеза белков de novo. Молекуляр. биол. 2016, 50 (1):128-135.

17.Толстов Д.А., Богдан В.Г. Тромбоцитарные концентраты: классификация, технологии получения, биологические эффекты. Военная медицина 2012, №3:141-144.

18.Aatonen M., Gronholm M., Siljander P.R. Platelet-derived microvesicles: multitalented participants in intercellular communication. Semin Thromb Hemost. 2012;38(1): 102-113.

19.Aatonen M., Ohman T., Nyman T.A., Laitinen S., Gronholm M., Siljander P.R. Isolation and characterization of platelet-derived extracellular vesicles. J Extracell Vesicles. 2014;3.

20.Allen R.D., Zacharski L.R., Widirstky S.T., Rosenstein R., Zaitlin L.M., Burgess D.R. Transformation and motility of human platelets: details of the shape change and release reaction observed by optical and electron microscopy. J Cell Biol. 1979;83(1):126-142.

21.Aloui C., Barlier C., Awounou D., Thiam S., Fagan J., Claverol S., Tavernier E., Mounier C., Hamzeh-Cognasse H., Cognasse F., Garraud O., Laradi S. Dysregulated pathways and differentially expressed proteins associated with adverse transfusion reactions in different types of platelet components. J Proteomics. 2020;218:103717.

22.Ambrose A.R., Alsahli M.A., Kurmani S.A., Goodall A.H. Comparison of the release of microRNAs and extracellular vesicles from platelets in response to different agonists. Platelets. 2018;29(5):446-454.

23.Aoki N., Yokoyama R., Asai N., Ohki M., Ohki Y., Kusubata K., Heissig B., Hattori K., Nakagawa Y., Matsuda T. Adipocyte-derived microvesicles are associated with multiple angiogenic factors and induce angiogenesis in vivo and in vitro. Endocrinology. 2010;151(6):2567-2576.

24.Basak I., Bhatlekar S., Manne B.K., Stoller M., Hugo S., Kong X., Ma L., Rondina M.T., Weyrich A.S., Edelstein L.C., Bray P.F. miR-15a-5p regulates expression of multiple proteins in the megakaryocyte GPVI signaling pathway. J Thromb Haemost. 2019;17(3):511-524.

25.Basse F., Gaffet P., Bienvenue A. Correlation between inhibition of cytoskeleton proteolysis and anti-vesiculation effect of calpeptin during A23187-induced activation of human platelets: are vesicles shed by filopod fragmentation? Biochim Biophys Acta. 1994;1190(2):217-224

26.Bertino A.M., Qi X.Q., Li J., Xia Y., Kuter D.J. Apoptotic markers are increased in platelets stored at 37 degrees C. Transfusion. 2003;43(7):857-866.

27.Bessos H., Seghatchian J. What's happening? The expanding role of apheresis platelet support in neonatal alloimmune thrombocytopenia: current status and future trends. Transfus Apher Sci. 2005;33(2):191-197.

28.Blachly-Dyson E., Baldini A., Litt M., McCabe E.R., Forte M. Human genes encoding the voltage-dependent anion channel (VDAC) of the outer mitochondrial membrane: mapping and identification of two new isoforms. Genomics. 1994;20(1):62-67.

29.Bobrie A., Colombo M., Krumeich S., Raposo G., Théry C. Diverse subpopulations of vesicles secreted by different intracellular mechanisms are present in exosome preparations obtained by differential ultracentrifugation. J Extracell Vesicles. 2012;1.

30.Bobrie A., Théry C. Exosomes and communication between tumours and the immune system: are all exosomes equal? Biochem Soc Trans. 2013;41(1):263-267.

31.Bode A.P., Orton S.M., Frye M.J., Barry J.U. Vesiculation of platelets during in vitro aging. Blood. 1991;77:887-895.

32.Boilard E., Duchez A.C., Brisson A. The diversity of platelet microparticles. Curr Opin Hematol. 2015;22(5):437-444.

33.Boilard E., Paré G., Rousseau M., Cloutier N., Dubuc I., Lévesque T., Borgeat P., Flamand L. Influenza virus H1N1 activates platelets through FcyRIIA signaling and thrombin generation. Blood. 2014;123(18):2854-2863.

34.Brecher M.E., Hay S.N. Bacterial contamination of blood components. Clin Microbiol Rev. 2005;18(1):195-204.

35.Bynum J.A., Meledeo M.A., Peltier G.C., Mcintosh C.S., Taylor A.S., Montgomery R.K., Reddoch-Cardenas K.M., Getz T.M., Fitzpatrick M.G., Cap A.P. Evaluation of a lyophilized platelet-derived hemostatic product. Transfusion. 2019;59(S2): 1490-1498.

36.Capraru A., Jalowiec K.A., Medri C., Daskalakis M., Zeerleder S.S., Mansouri Taleghani B. Platelet Transfusion-Insights from Current Practice to Future Development. J Clin Med. 2021;10(9):1990.

37.Chen W., Liang X., Syed A.K., Jessup P., Church W.R., Ware J., Josephson C.D., Li R. Inhibiting GPIba Shedding Preserves Post-Transfusion Recovery and Hemostatic Function of Platelets After Prolonged Storage. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2016;36(9): 1821-1828.

38.Chendrimada T.P., Gregory R.I., Kumaraswamy E., Norman J., Cooch N., Nishikura K., Shiekhattar R. TRBP recruits the Dicer complex to Ago2 for microRNA processing and gene silencing. Nature. 2005;436(7051):740-744.

39.Chien S.H., Huang H.Y., Chen Y.J., Tsai Y.C., Lu S.H., Lee L.H., Liu H.M., Chen W.C., Liu Y.C., Lin T.A., Liu C.Y. Comparing transfusion reactions between prestorage and post-storage leukoreduced apheresis platelets: an analysis using propensity score matching. Ann Hematol. 2024;103(4):1389-1396.

40.Czabotar P.E., Lessene G., Strasser A., Adams J.M. Control of apoptosis by the BCL-2 protein family: implications for physiology and therapy. Nat Rev Mol Cell Biol. 2014;15(1):49-63.

41.de Boer H.C., van Solingen C., Prins J., Duijs J.M., Huisman M.V., Rabelink T.J., van Zonneveld A.J. Aspirin treatment hampers the use of plasma microRNA-126 as a biomarker for the progression of vascular disease. Eur Heart J. 2013;34(44):3451-3457.

42.Deppermann C., Kratofil R.M., Peiseler M., David B.A., Zindel J., Castanheira F.V.E.S., van der Wal F., Carestia A., Jenne C.N., Marth J.D., Kubes P. Macrophage galactose lectin is critical for Kupffer cells to clear aged platelets. J Exp Med. 2020;217(4): e20190723.

43.Devine D.V., Serrano K. The platelet storage lesion. Clin Lab Med. 2010;30(2):475-487.

44.Diallo I., Benmoussa A., Laugier J., Osman A., Hitzler W.E., Provost P. Platelet Pathogen Reduction Technologies Alter the MicroRNA Profile of Platelet-Derived Microparticles. Front Cardiovasc Med. 2020;7:31.

45.Du X., Fox J.E., Pei S. Identification of a binding sequence for the 14-3-3 protein within the cytoplasmic domain of the adhesion receptor, platelet glycoprotein Ib alpha. J Biol Chem. 1996;271(13):7362-7367.

46.Ferreira A.A., Zulli R., Soares S., de Castro V., Moraes-Souza H. Identification of platelet refractoriness in oncohematologic patients. Clinics (Sao Paulo). 2011;66(1):35-40.

47.Fijnheer R., Modderman P.W., Veldman H., Ouwehand W.H., Nieuwenhuis H.K., Roos D., de Korte D. Detection of platelet activation with monoclonal antibodies and flow cytometry. Changes during platelet storage. Transfusion. 1990;30(1):20-25.

48.Fitzpatrick G.M., Cliff R., Tandon N. Thrombosomes: a platelet-derived hemostatic agent for control of noncompressible hemorrhage. Transfusion. 2013;53 Suppl 1:100S-106S.

49.Flaumenhaft R., Dilks J.R., Richardson J., Alden E., Patel-Hett S.R., Battinelli E., Klement G.L., Sola-Visner M., Italiano J.E.Jr. Megakaryocyte-derived microparticles: direct visualization and distinction from platelet-derived microparticles. Blood. 2009;113(5): 1112-1121.

50.Flaumenhaft R. Formation and fate of platelet microparticles. Blood Cells Mol Dis. 2006;36(2):182-187.

51.Forest S.K., Hod E.A. Management of the Platelet Refractory Patient. Hematol Oncol Clin North Am. 2016;30(3):665-677.

52.Frojmovic M.M., Kasirer-Friede A., Goldsmith H.L., Brown E.A. Surface-secreted von Willebrand factor mediates aggregation of ADP-activated platelets at moderate shear stress: facilitated by GPIb but controlled by GPIIb-IIIa. Thromb Haemost. 1997;77(3):568-576.

53.Gardiner E.E., Andrews R.K. Platelet receptor expression and shedding: glycoprotein Ib-IX-V and glycoprotein VI. Transfus Med Rev. 2014;28(2):56-60.

54.Garraud O., Hamzeh-Cognasse H., Chalayer E., Duchez A.C., Tardy B., Oriol P., Haddad A., Guyotat D., Cognasse F. Platelet transfusion in adults: An update. Transfus Clin Biol. 2023;30(1):147-165.

55.Gasperi V., Vangapandu C., Savini I., Ventimiglia G., Adorno G., Catani M.V. Polyunsaturated fatty acids modulate the delivery of platelet microvesicle-derived microRNAs into human breast cancer cell lines. J Nutr Biochem. 2019;74:108242.

56.George C.E., Saunders C.V., Morrison A., Scorer T., Jones S., Dempsey N.C. Cold stored platelets in the management of bleeding: is it about bioenergetics? Platelets. 2023;34(1):2188969.

57.Grewal P.K. The Ashwell-Morell receptor. Methods Enzymol. 2010;479:223-241.

58.Grozovsky R., Begonja A.J., Liu K., Visner G., Hartwig J.H., Falet H., Hoffmeister K.M. The Ashwell-Morell receptor regulates hepatic thrombopoietin production via JAK2-STAT3 signaling. Nat Med. 2015;21(1):47-54.

59.Guo S.C., Tao S.C., Yin W.J., Qi X., Yuan T., Zhang C.Q. Exosomes derived from platelet-rich plasma promote the re-epithelization of chronic cutaneous wounds via activation of YAP in a diabetic rat model. Theranostics. 2017;7(1):81-96.

60.Ha D., Yang N., Nadithe V. Exosomes as therapeutic drug carriers and delivery vehicles across biological membranes: current perspectives and future challenges. Acta Pharm Sin B. 2016;6(4):287-296.

61.Heddle N.M., Klama L., Singer J., Richards C., Fedak P., Walker I., Kelton J.G. The role of the plasma from platelet concentrates in transfusion reactions. N Engl J Med. 1994;331(10):625-628.

62.Heijnen H., van der Sluijs P. Platelet secretory behaviour: as diverse as the granules ... or not? J Thromb Haemost. 2015;13(12):2141-51.

63.Heijnen H.F., Schiel A.E., Fijnheer R., Geuze H.J., Sixma J.J. Activated platelets release two types of membrane vesicles: microvesicles by surface shedding and exosomes derived from exocytosis of multivesicular bodies and alpha-granules. Blood. 1999;94(11):3791-3799.

64.Henne W.M., Buchkovich N.J., Emr S.D. The ESCRT pathway. Dev Cell. 2011;21(1):77-91.

65.Heusermann W., Hean J., Trojer D., Steib E., von Bueren S., Graff-Meyer A., Genoud C., Martin K., Pizzato N., Voshol J., Morrissey D.V., Andaloussi S.E., Wood M.J., Meisner-Kober N.C. Exosomes surf on filopodia to enter cells at

endocytic hot spots, traffic within endosomes, and are targeted to the ER. J Cell Biol. 2016;213(2): 173-184.

66.Hoffmeister K.M., Felbinger T.W., Falet H., Denis C.V., Bergmeier W., Mayadas T.N., von Andrian U.H., Wagner D.D., Stossel T.P., Hartwig J.H. The clearance mechanism of chilled blood platelets. Cell. 2003;112(1):87-97.

67.Hoshino D., Kirkbride K.C., Costello K., Clark E.S., Sinha S., Grega-Larson N., Tyska M.J., Weaver A.M. Exosome secretion is enhanced by invadopodia and drives invasive behavior. Cell Rep. 2013;5(5): 1159-1168.

68.Hosseini E., Ghasemzadeh M., Nassaji F., Jamaat Z.P. GPVI modulation during platelet activation and storage: its expression levels and ectodomain shedding compared to markers of platelet storage lesion. Platelets. 2017;28(5):498-508.

69.Hulsmans M., Holvoet P. MicroRNA-containing microvesicles regulating inflammation in association with atherosclerotic disease. Cardiovasc Res. 2013;100(1):7-18.

70.Gabrilchak A., Gusyakova O., Antipov V., Medvedeva E., Tukshumskaya L. A modern overview of the process of platelet formation (thrombocytopoiesis) and its dependence on several factors. Biochem Med (Zagreb). 2024;34(3):030503.

71.Jurk K., Kehrel B.E. Platelets: physiology and biochemistry. Semin Thromb Hemost. 2005;31(4):381-392.

72.Kailashiya J. Platelet-derived microparticles analysis: Techniques, challenges and recommendations. Anal Biochem. 2018;546:78-85.

73.Kato M., Slack F.J. Ageing and the small, non-coding RNA world. Ageing Res Rev. 2013;12(1):429-435.

74.Kawamura S., Iinuma H., Wada K., Takahashi K., Minezaki S., Kainuma M., Shibuya M., Miura F., Sano K. Exosome-encapsulated microRNA-4525, microRNA-451a and microRNA-21 in portal vein blood is a high-sensitive liquid biomarker for the selection of high-risk pancreatic ductal adenocarcinoma patients. J Hepatobiliary Pancreat Sci. 2019;26(2):63-72.

75.Kayama A., Eto K. Mass production of iPSC-derived platelets toward the clinical application. Regenerative therapy. 2024;25:213-219.

76.Kothakota S., Azuma T., Reinhard C., Klippel A., Tang J., Chu K., McGarry T.J., Kirschner M.W., Koths K., Kwiatkowski D.J., Williams L.T. Caspase-3-generated fragment of gelsolin: effector of morphological change in apoptosis. Science. 1997;278(5336):294-298.

77.Krammer T.L., Zeibig S., Schrottmaier W.C., Pirabe A., Goebel S., Diendorfer A.B., Holthoff H.P., Assinger A., Hackl M. Comprehensive Characterization of Platelet-Enriched MicroRNAs as Biomarkers of Platelet Activation. Cells. 2022;11(8):1254.

78.Kriebardis A.G., Antonelou M.H., Georgatzakou H.T., Tzounakas V.L., Stamoulis K.E, Papassideri I.S. Microparticles variability in fresh frozen plasma: preparation protocol and storage time effects. Blood Transfus. 2016;14(2):228-237.

79.Köberle V., Kakoschky B., Ibrahim A.A., Schmithals C., Peveling-Oberhag J., Zeuzem S., Kronenberger B., Waidmann O., Pleli T., Piiper A. Vesicle-associated microRNAs are released from blood cells on incubation of blood samples. Transl Res. 2016;169:40-46.

80.Labrie A., Marshall A., Bedi H., Maurer-Spurej E. Characterization of platelet concentrates using dynamic light scattering. Transfus Med Hemother. 2013;40(2):93-100.

81.Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970; 227:680-685.

82.Landry P., Plante I., Ouellet D.L., Perron M.P., Rousseau G., Provost P. Existence of a microRNA pathway in anucleate platelets. Nat Struct Mol Biol. 2009; 16(9):961 -966.

83.Lebois M., Josefsson E.C. Regulation of platelet lifespan by apoptosis. Platelets. 2016;27(6):497-504.

84.Levy J.H., Neal M.D., Herman J.H. Bacterial contamination of platelets for transfusion: strategies for prevention. Crit Care. 2018;22(1):271.

85.Li J., van der Wal D.E., Zhu G., Xu M., Yougbare I., Ma L., Vadasz B., Carrim N., Grozovsky R., Ruan M., Zhu L., Zeng Q., Tao L., Zhai Z.M., Peng J., Hou M., Leytin V., Freedman J., Hoffmeister K.M., Ni H. Desialylation is a mechanism of

Fc-independent platelet clearance and a therapeutic target in immune thrombocytopenia. Nat Commun. 2015;6:7737.

86.Li J., Xia Y., Bertino A.M., Coburn J.P., Kuter D.J. The mechanism of apoptosis in human platelets during storage. Transfusion. 2000;40(11):1320-1329.

87.Li R., Hoffmeister K.M., Falet H. Glycans and the platelet life cycle. Platelets. 2016;27(6):505-511.

88.Lin H.C., Chang H.W., Hsiao S.H., Chou M.L., Seghatchian J., Burnouf T. Platelet-derived microparticles trigger THP-1 monocytic cell aggregation and release of pro-coagulant tissue factor-expressing microparticles in vitro. Transfus Apher Sci. 2015;53(2):246-252.

89.Linares R., Tan S., Gounou C., Arraud N., Brisson A.R. High-speed centrifugation induces aggregation of extracellular vesicles. J Extracell Vesicles. 2015;4:29509.

90.Lindsay C.R., Edelstein L.C. MicroRNAs in Platelet Physiology and Function. Semin Thromb Hemost. 2016;42(3):215-222.

91.Liu C., Su Y., Guo W., Ma X., Qiao R. The platelet storage lesion, what are we working for? J Clin Lab Anal. 2024;38(1-2):e24994.

92.Manczak M., Sheiko T., Craigen W.J., Reddy P.H. Reduced VDAC1 protects against Alzheimer's disease, mitochondria, and synaptic deficiencies. J Alzheimers Dis. 2013;37(4):679-690.

93.Manduzio P. Transfusion-associated graft-versus-host disease: A concise review. Hematol Rep. 2018;10(4):7724.

94.Marcoux G., Duchez A.C., Rousseau M., Lévesque T., Boudreau L.H., Thibault L., Boilard E. Microparticle and mitochondrial release during extended storage of different types of platelet concentrates. Platelets. 2017;28(3):272-280.

95.Masyuk A.I., Huang B.Q., Ward C.J., Gradilone S.A., Banales J.M., Masyuk T.V., Radtke B., Splinter P.L., LaRusso N.F. Biliary exosomes influence cholangiocyte regulatory mechanisms and proliferation through interaction with primary cilia. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2010;299(4):G990-9.

96.Mateescu B., Kowal E.J., van Balkom B.W., Bartel S., Bhattacharyya S.N., Buzás E.I., Buck A.H., de Candia P., Chow F.W., Das S., Driedonks T.A., Fernández-

Messina L., Haderk F., Hill A.F., Jones J.C., Van Keuren-Jensen K.R., Lai C.P., Lässer C., Liegro I.D., Lunavat T.R., Lorenowicz M.J., Maas S.L., Mäger I., Mittelbrunn M., Momma S., Mukherjee K., Nawaz M., Pegtel D.M., Pfaffl M.W., Schiffelers R.M., Tahara H., Thery C., Tosar J.P., Wauben M.H., Witwer K.W., Nolte-'t Hoen E.N. Obstacles and opportunities in the functional analysis of extracellular vesicle RNA - an ISEV position paper. J Extracell Vesicles. 2017;6(1):1286095.

97.Mateo A., Perez de la Lastra J.M., Garrido J.J., Llanes D. Platelet activation studies with anti-CD41/61 monoclonal antibodies. Vet Immunol Immunopathol. 1996;52(4):357-362.

98.Maugeri N., Malato S., Femia E.A., Pugliano M., Campana L., Lunghi F., Rovere-Querini P., Lussana F., Podda G., Cattaneo M., Ciceri F., Manfredi A.A. Clearance of circulating activated platelets in polycythemia vera and essential thrombocythemia. Blood. 2011;118(12):3359-3366.

99.Maurer-Spurej E., Chipperfield K. Past and future approaches to assess the quality of platelets for transfusion. Transfus Med Rev. 2007;21(4):295-306.

100. Maurer-Spurej E., Pfeiler G., Maurer N., Lindner H., Glatter O., Devine D.V. Room temperature activates human blood platelets. Lab Invest. 2001;81(4):581-592.

101. Maues J.H.D.S., Moreira-Nunes C.F.A., Pontes T.B., Vieira P.C.M., Montenegro R.C., Lamarao L.M., Lima E.M., Burbano R.M.R. Differential Expression Profile of MicroRNAs During Prolonged Storage of Platelet Concentrates As a Quality Measurement Tool in Blood Banks. OMICS. 2018;22(10):653-664.

102. McVey M.J., Weidenfeld S., Maishan M., Spring C., Kim M., Tabuchi A., Srbely V., Takabe-French A., Simmons S., Arenz C., Semple J.W., Kuebler W.M. Platelet extracellular vesicles mediate transfusion-related acute lung injury by imbalancing the sphingolipid rheostat. Blood. 2021;137(5):690-701.

103. Michael J.V., Wurtzel J.G.T., Mao G.F., Rao A.K., Kolpakov M.A., Sabri A., Hoffman N.E., Rajan S., Tomar D., Madesh M., Nieman M.T., Yu J., Edelstein

L.C., Rowley J.W., Weyrich A.S., Goldfinger L.E. Platelet microparticles infiltrating solid tumors transfer miRNAs that suppress tumor growth. Blood. 2017;130(5):567-580.

104. Miyamoto S., Marcinkiewicz C., Edmunds L.H.jr., Niewiarowski S. Measurement of platelet microparticles during car-diopulmonary bypass by means of captured ELISA for GPIIb/IIIa. Thromb. Haemost. 1998;80:225-320.

105. Nasiri S. Infusible platelet membrane as a platelet substitute for transfusion: an overview. Blood Transfus. 2013;11(3):337-342.

106. Neumuller J., Meisslitzer-Ruppitsch C., Ellinger A., Pavelka M., Jungbauer C., Renz R., Leitner G., Wagner T. Monitoring of platelet activation in platelet concentrates using transmission electron microscopy. Transfus Med Hemother. 2013;40(2):101-107.

107. Ng M.S.Y., Tung J.P., Fraser J.F. Platelet Storage Lesions: What More Do We Know Now? Transfus Med Rev. 2018;S0887-7963(17)30189-X.

108. Nicholas R.A. Identification of the P2Y(12) receptor: a novel member of the P2Y family of receptors activated by extracellular nucleotides. Mol Pharmacol. 2001;60(3):416-420.

109. Norouzi M., Mesbah-Namin S.A., Deyhim M.R. Analysis of changes in the expression pattern of miR-326 and miR-145 during storage of platelet concentrate in blood bank condition and its relationship with some markers of platelet quality. J Thromb Thrombolysis. 2021;52(4): 1036-1042.

110. Osman A., Hitzler W.E., Meyer C.U., Landry P., Corduan A., Laffont B., Boilard E., Hellstern P., Vamvakas E.C., Provost P. Effects of pathogen reduction systems on platelet microRNAs, mRNAs, activation, and function. Platelets. 2015;26(2):154-163.

111. Osman A., Hitzler W.E., Meyer C.U., Landry P., Corduan A., Laffont B., Boilard E., Hellstern P., Vamvakas E.C., Provost P. Effects of pathogen reduction systems on platelet microRNAs, mRNAs, activation, and function. Platelets. 2015;26(2):154-163.

112. Piccin A., Murphy W.G., Smith O.P. Circulating microparticles: pathophysiology and clinical implications. Blood Rev. 2007;21(3):157-171.

113. Pluthero F.G., Kahr W.H.A. The Birth and Death of Platelets in Health and Disease. Physiology (Bethesda). 2018;33(3):225-234.

114. Pontes T.B., Moreira-Nunes Cde F., Maues J.H., Lamarao L.M., de Lemos J.A., Montenegro R.C., Burbano R.M. The miRNA Profile of Platelets Stored in a Blood Bank and Its Relation to Cellular Damage from Storage. PLoS One. 2015;10(6):e0129399.

115. Pook M., Tamming L., Padari K., Tiido T., Maimets T., Patarroyo M., Juronen E., Jaks V., Ingerpuu S. Platelets store laminins 411/421 and 511/521 in compartments distinct from a- or dense granules and secrete these proteins via microvesicles. J Thromb Haemost. 2014;12(4):519-527.

116. Powner D., Kopp P.M., Monkley S.J., Critchley D.R., Berditchevski F. Tetraspanin CD9 in cell migration. Biochem Soc Trans. 2011;39(2):563-567.

117. Preußer C., Hung L.H., Schneider T., Schreiner S., Hardt M., Moebus A., Santoso S., Bindereif A. Selective release of circRNAs in platelet-derived extracellular vesicles. J Extracell Vesicles. 2018;7(1):1424473.

118. Quach M.E., Chen W., Li R. Mechanisms of platelet clearance and translation to improve platelet storage. Blood. 2018;131(14):1512-1521.

119. Quach M.E. GPIb-IX-V and platelet clearance. Platelets. 2022;33(6):817-822.

120. Ray V., Chaudhary R., Singh H. Modified CMI, an essential adjunct to CMI of platelet for quality control during preparation and storage of platelet concentrates. Transfus Apher Sci. 2003;29(2):147-149.

121. Reddoch-Cardenas K.M., Bynum J.A., Meledeo M.A., Nair P.M., Wu X., Darlington D.N., Ramasubramanian A.K., Cap A.P. Cold-stored platelets: A product with function optimized for hemorrhage control. Transfus Apher Sci. 2019;58(1):16-22.

122. Rezvany M.R., Moradi Hasan-Abad A., Sobhani-Nasab A., Esmaili M.A. Evaluation of bacterial safety approaches of platelet blood concentrates: bacterial screening and pathogen reduction. Front Med (Lausanne). 2024;11:1325602.

123. Rinder H.M., Murphy M., Mitchell J.G, Stocks J., Ault K.A., Hillman R.S. Progressive platelet activation with storage: evidence for shortened survival of activated platelets after transfusion. Transfusion. 1991;31(5):409-414.

124. Rumjantseva V., Grewal P.K., Wandall H.H., Josefsson E.C., Sorensen A.L., Larson G., Marth J.D., Hartwig J.H., Hoffmeister K.M. Dual roles for hepatic lectin receptors in the clearance of chilled platelets. Nat Med. 2009;15(11): 1273-1280.

125. Sadallah S., Eken C., Martin P.J., Schifferli J.A. Microparticles (ectosomes) shed by stored human platelets downregulate macrophages and modify the development of dendritic cells. J Immunol. 2011;186(11):6543-6552.

126. Sahoo S., Klychko E., Thorne T., Misener S., Schultz K.M., Millay M., Ito A., Liu T., Kamide C., Agrawal H., Perlman H., Qin G., Kishore R., Losordo D.W. Exosomes from human CD34(+) stem cells mediate their proangiogenic paracrine activity. Circ Res. 2011;109(7):724-728.

127. Schneider A., Simons M. Exosomes: vesicular carriers for intercellular communication in neurodegenerative disorders. Cell Tissue Res. 2013;352(1):33-47.

128. Seghatchian J., Krailadsiri P. Platelet storage lesion and apoptosis: are they related? Transfus Apher Sci. 2001;24(1):103-105.

129. Semple J.W., Rebetz J., Kapur R. Transfusion-associated circulatory overload and transfusion-related acute lung injury. Blood. 2019;133(17):1840-1853.

130. Shevchuk O., Begonja A.J., Gambaryan S., Totzeck M., Rassaf T., Huber T.B., Greinacher A., Renne T., Sickmann A. Proteomics: A Tool to Study Platelet Function. Int J Mol Sci. 2021;22(9):4776.

131. Shiri R., Yari F., Ahmadinejad M., Vaeli S., Tabatabaei M.R. The caspase-3 inhibitor (peptide Z-DEVD-FMK) affects the survival and function of platelets in platelet concentrate during storage. Blood Res. 2014;49(1):49-53.

132. Shoshan-Barmatz V., Keinan N., Abu-Hamad S., Tyomkin D., Aram L. Apoptosis is regulated by the VDAC1 N-terminal region and by VDAC oligomerization: release of cytochrome c, AIF and Smac/Diablo. Biochim Biophys Acta. 2010;1797(6-7): 1281-1291.

133. Sims P.J., Faioni E.M., Wiedmer T., Shattil S.J. Complement proteins C5b-9 cause release of membrane vesicles from the platelet surface that are enriched in the membrane receptor for coagulation factor Va and express prothrombinase activity. J Biol Chem. 1988;263(34):18205-18212.

134. Singh H., Chaudhary R., Ray V. Platelet indices as quality markers of platelet concentrates during storage. Clin Lab Haematol. 2003;25(5):307-310.

135. Snyder E.L., Horne W.C., Napychank P., Heinemann F.S., Dunn B. Calcium-dependent proteolysis of actin during storage of platelet concentrates. Blood. 1989;73(5): 1380-1385.

136. Stroncek D.F., Rebulla P. Platelet transfusions. Lancet. 2007;370(9585):427-438.

137. Sturk A., Burt L.M., Hakvoort T., ten Cate J.W., Crawford N. The effect of storage on platelet morphology. Transfusion. 1982;22(2): 115-120.

138. Su Z., Ni L., Yu W., Yu Z., Chen D., Zhang E., Li Y., Wang Y., Li X., Yang S., Gui Y., Lai Y., Ye J. MicroRNA-451a is associated with cell proliferation, migration and apoptosis in renal cell carcinoma. Mol Med Rep. 2015;11(3):2248-2254.

139. Sunderland N., Skroblin P., Barwari T., Huntley R.P., Lu R., Joshi A., Lovering R.C., Mayr M. MicroRNA Biomarkers and Platelet Reactivity: The Clot Thickens. Circ Res. 2017;120(2):418-435.

140. Sut C., Aloui C., Tariket S., Arthaud C.A., Eyraud M.A., Fagan J., Chavarin P., Hamzeh-Cognasse H., Laradi S., Garraud O., Cognasse F. Assessment of soluble platelet CD40L and CD62P during the preparation process and the storage of apheresis platelet concentrates: Absence of factors related to donors and donations. Transfus Clin Biol. 2018;25(3):192-196.

141. Sodergren A.L., Tynngard N., Berlin G., Ramstrom S. Responsiveness of platelets during storage studied with flow cytometry--formation of platelet subpopulations and LAMP-1 as new markers for the platelet storage lesion. Vox Sang. 2016;110(2): 116-125.

142. Tao S.C., Yuan T., Rui B.Y., Zhu Z.Z., Guo S.C., Zhang C.Q. Exosomes derived from human platelet-rich plasma prevent apoptosis induced by glucocorticoid-associated endoplasmic reticulum stress in rat osteonecrosis of the femoral head via the Akt/Bad/Bcl-2 signal pathway. Theranostics. 2017;7(3):733-750.

143. Thon J.N., Devine D.V. Translation of glycoprotein IIIa in stored blood platelets. Transfusion. 2007;47(12):2260-2270.

144. Thon J.N., Schubert P., Devine D.V. Platelet storage lesion: a new understanding from a proteomic perspective. Transfus Med Rev. 2008;22(4):268-279.

145. Trochanowska-Pauk N., Walski T., Bohara R., Mikolas J., Kubica K. Platelet Storage-Problems, Improvements, and New Perspectives. Int J Mol Sci. 2024;25(14):7779.

146. Uhl L., Assmann S.F., Hamza T.H., Harrison R.W., Gernsheimer T., Slichter S.J. Laboratory predictors of bleeding and the effect of platelet and RBC transfusions on bleeding outcomes in the PLADO trial. Blood. 2017;130(10): 12471258.

147. Vetlesen A., Mirlashari M.R., Ezligini F., Kjeldsen-Kragh J. Evaluation of platelet activation and cytokine release during storage of platelet concentrates processed from buffy coats either manually or by the automated OrbiSac system. Transfusion. 2007;47(1): 126-132.

148. Vinholt P.J., Frederiksen H., Hvas A.M., Sprog0e U., Nielsen C. Measurement of platelet aggregation, independently of patient platelet count: a flow-cytometric approach. J Thromb Haemost. 2017;15(6): 1191-1202.

149. Vinholt P.J. The role of platelets in bleeding in patients with thrombocytopenia and hematological disease. Clin Chem Lab Med. 2019;57(12):1808-1817.

150. Vucetic D., Ilic V., Vojvodic D., Subota V., Todorovic M., Balint B. Flow cytometry analysis of platelet populations: usefulness for monitoringthe storage lesion in pooled buffy-coat platelet concentrates. Blood Transfus. 2018;16(1):83-92.

151. Wang X., Gu H., Huang W., Peng J., Li Y., Yang L., Qin D., Essandoh K., Wang Y., Peng T., Fan G.C. Hsp20-Mediated Activation of Exosome Biogenesis in Cardiomyocytes Improves Cardiac Function and Angiogenesis in Diabetic Mice. Diabetes. 2016;65(10):3111-3128.

152. Weyrich A.S., Lindemann S., Tolley N.D., Kraiss L.W., Dixon D.A., Mahoney T.M., Prescott S.P., McIntyre T.M., Zimmerman G.A. Change in protein phenotype without a nucleus: translational control in platelets. Semin Thromb Hemost. 2004;30(4):491-498.

153. White I.I., Gilbert C. Congenital and acquired platelet disorders: Current dilemmas and treatment strategies. Semin Hematol 2006;43:37-41.

154. Willeit P., Zampetaki A., Dudek K., Kaudewitz D., King A., Kirkby N.S., Crosby-Nwaobi R., Prokopi M., Drozdov I., Langley S.R., Sivaprasad S., Markus H.S., Mitchell J.A., Warner T.D., Kiechl S., Mayr M. Circulating microRNAs as novel biomarkers for platelet activation. Circ Res. 2013;112(4):595-600.

155. Wu J., Piao Y., Liu Q., Yang X. Platelet-rich plasma-derived extracellular vesicles: A superior alternative in regenerative medicine? Cell Prolif. 2021;54(12):e13123.

156. Xu K., Han B., Bai Y., Ma X.Y., Ji Z.N., Xiong Y., Miao S.K., Zhang Y.Y., Zhou L.M. MiR-451a suppressing BAP31 can inhibit proliferation and increase apoptosis through inducing ER stress in colorectal cancer. Cell Death Dis. 2019;10(3):152.

157. Yan Y., Zhang J., Zhang Q., Chen Y., Zhu X., Xia R. The role of microRNAs in platelet biology during storage. Transfus Apher Sci. 2017;56(2): 147-150.

158. Yu S., Deng G., Qian D., Xie Z., Sun H., Huang D., Li Q. Detection of apoptosis-associated microRNA in human apheresis platelets during storage by quantitative real-time polymerase chain reaction analysis. Blood Transfus. 2014;12(4):541-547.

159. Yu S., Huang H., Deng G., Xie Z., Ye Y., Guo R., Cai X., Hong J., Qian D., Zhou X., Tao Z., Chen B., Li Q. miR-326 targets antiapoptotic Bcl-xL and mediates apoptosis in human platelets. PLoS One. 2015;10(4):e0122784.

160. Zamore P.D., Haley B. Ribo-gnome: the big world of small RNAs. Science. 2005;309(5740): 1519-1524.