Лептоспироз в Республике Мали и идентификация лептоспир тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат биологических наук Кулибали, Д.

• Кулибали, Д.
• кандидат биологических наук
• 1994

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Кулибали, Д.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЖГЕРАТУШ

1.1. Общие сведения

1.2. Распространенность лептоспироза в странах Африки

1.3. Климато-географические и экономические особенности Республики Мали

1.4. Дифференциация лептоспир.

1.5. Молекулярные аспекты организации лептоепир

1.6. Использование некоторых современных методов анализа для ускоренной идентификации инфекционных агентов, в том числе лептоспир.

ГЛАВА I. СОБСТВЕННЫЕ ИСШЩЦОВАНШ

2.1. Материалы и методы исследования

2.1.1. Культивирование лептоспир .•.••.

2.1.2. Серологические исследования

2.1.3. Выделение ДНК

2.1.4. Подбор праймеров и постановка амплификации.

2.1.5. Снектрофотометрическая оценка концентрации и чистоты ДНК и праймеров

2.1.6. Электрофорез в агарозном геле.

2.1.7. Идентификация лептоспир.

ГЛАВА Ш. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Характеристика роста исследуемых штаммов лептоспир.

3.2. Распространенность лептоспироза в Республике Мали.

3.3. Этиологическая структура лептоспироза крупного рогатого скота в Республике

3.4. Подбор праймеров для использования полимеразной цепной реакции

3.5. Первичные испытания праймеров и подбор условий для постановки полимеразной цепной реакции.

3.6. Проверка специфичности праймеров и оценка чувствительности метода на препаратах ДНК l. interrogans и других микроорганизмов

3.7. Отработка метода постановки полимеразной цепной реакции на препаратах бактериальной массы ь. interrogans

3.8. Оценка работы метода в модельной системе 1 при исследовании образцов бакмассы

L. interrogans, разведенных в моче.

ГЛАВА ХУ. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ. III

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Лептоспироз в Республике Мали и идентификация лептоспир»

Актуальность теш. Лептоспироз представляет собой зооантро-понозную, природно-очаговую инфекцию, поражающей человека, домашних и диких животных. Материальный ущерб, наносимый лентошшрозом животноводству, складывается из гибели части заболевших животных, абортов, потери продуктивности животных и затрат на проведение диагностики и противоэпизоотических мероприятий.

Большой вклад в изучение лептоспироза внесли С.й.Тарасов, В.В.Ананьин, В.И.Терских, А.А.Варфоломеева, С.Я.Любашенко, B.C. Киктенко, Ю.А.Малахов, Ю.Г.Чернуха, Р.§.Сосов и др., а также ученый Соединенных Штатов Америки, ряда стран Европы, Японии, Австралии и других стран.

Лептоспироз но данным ВОЗ, остается одним из самых распространенных зооантропонозных заболеваний животных в Мире. Имеются сообщения о наличии лептоспироза и в странах Африки, в том числе и в странах сопредельных с Республикой Мали. Исследования лептоспироза животных и лвдей в Республике Мали не проводились и заболевание в официальной ветеринарной отчетности не регистрируется.

В связи с этим нам представлялось актуальным выяснить наличие лептоспироза животных в Республике Мали, а в случае его обнаружения выяснить этиологическую структуру лептоспироза крупного рогатого скота на территории Республики.

Диагностика лептоепироза в настоящее время основана на таких традиционных методах, как серологический и культуральный. Серологическая диагностика лептоепироза (РИА, РСК, иммуно-ферментный анализ и др.), позволяющая выявить специфические антитела и антигены, дает только ретроспективную оценку заболевания, т.к. диагностический титр антител появляется у заболевших животных только к концу заболевания и не дают надежной информации жри латентно протекающей инфекции и у носителей. Культуральный метод затруднен в связи со сложностями выделения, культивирования и тестирования леитоепир.

До настоящего времени актуальным остается вопрос поиска и новых методов диагностики лептоспироза и идентификации леитоепир, базирующихся на применении более специфичных методов молекулярной биологии и геносистематики. К числу таких методов относятся; рестрикциошшй анализ ДНК, метод гибридизационшх зондов, моно-клональных антител (Ю.В.Ананьина, 1990), ДНК-гибридизации (С.К. Артюшин, 1991), полимеразной цепной реакции (А.В1®ек@з* et ai.,

1991), ША (Т.Bogautdineva et al. , X99I), иммунодисперсион-ный анализ (Е.И.Ерохин, 1990), блот-гибрвдизации (j.y. H©@key,

1992) и др.

Наибольшее внимание привлекает метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), основанный на выявлении специфического фрагмента ДНК исследуемого возбудителя в исследуемом материале путем амплификации ее копий в реакции полимеризации со специально подобранными праймерами (затравками). Высокая чувствительность метода и сравнительно непродолжительное время, затрачиваемое на проведение реакции амплификации, открывает широкие возможности для использования его в диагностике инфекционных болезней, в том числе и лептоспироза, и идентификации возбудителей.

Педь -работы. Целью работы являлось выявление серологическим методом (РМА) наличия лептоспироза крупного рогатого скота на территории Республики Мали и отработка режима постановки полимеразной цепной реакции (ИЦР) с целью идентификации лептоспир.

В задачи исследований входило:

- провести серологические исследования (РМА) на лептоспироз сывороток крови крупного рогатого скота, полученных от животных в Республике Мали;

- определить инфицированность животных и этиологическую структуру лептоспироза крупного рогатого скота;

- подобрать праймеры для проведения амплификации;

- определить оптимальные условия постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР) с ДНК лептоспир;

- проверить специфичность и чувствительность ЩР на модельных системах при детекции лептоспир.

Научная новизна. Впервые в Республике Шли проведено исследование на лептоспироз серологическим методом сывороток крови крупного рогатого скота, на основании которых установлено наличие лептоспирозней инфекции у животных.

Противолептоепирозные антитела в сыворотках крови крупного рогатого скота выявлены в диагностических титрах в провинции Ку-ликоро у 83,63$, в провинции Кутиала у 52,0$ животных. Антитела выявлены к лептоспирам 17 серогрупп. Ведущую роль в этиологической структуре лептоспироза (по высоте титра антител) занимают лептосниры серогрупп Sejr»© (40,95$), L©uisiaaa (30,47$), Hebdomadis (29,52$), Ranaram (20,95$), Taraasevi (14,28$).

Показана возможность использования полимеразной цепной реакции для идентификации лептоспир iaterxogMa и Mfiexa. Подобраны праймеры и оптимальные условия проведения ИЦР с очищенными препаратами ДНК и с лизатами лептоспир в воде и в моче. Установлено, что применяемый метод является высокочувствительным и специфичным.

Практическая значимость. Результаты серологических исследований обосновывают необходимость разработки мероприятий в Республике Мали по диагностике и мерам борьбы с лептоспирозом. Показана возможность использования полимеразной ценной реакции для дифференциации патогенных и сапрофитных лептоспир и выявления их в исследуемом материале (в моче) без выделения ДНК.

На защиту выносятся: I. Данные о распространенности лепто-спирозной инфекции у крупного рогатого скота на территории Республики Мали.

2. Данные об этиологической структуре леятоспирозной инфекции крупного рогатого скота на основе анализа обнаруженных в сыворотках крови противолеитоспирозных антител.

3. Результаты идентификации лептоспир с помощью полимеразной цепной реакции.

Апробация диссертационного материала. Основные результаты диссертационной работы доложены и обсуждены: на XI конференции молодых ученых медицинского факультета РУДН (Москва, 1992 г.), на ХП конференции молодых ученых РУДН (Москва, 1993 г.), на Ж конференции молодых ученых РУДН (Москва, 1994 г.).

По результатам исследований сдано в печать "Труды молодых ученых медицинского факультета РУДН" две работы.

Предварительное рассмотрение диссертации проведено на совместном заседании кафедры микробиологии и ЦНИЯа Российского

Университета дружбы народов и лаборатории молекулярной биологии и биохимии Российского института экспериментальной ветеринарии (Москва, 1994 г.).

Объем работы. При выполнении данной работы нами выполнен следующий объем экспериментальных исследований: получено и исследовано в РМА 105 проб сывороток крови крупного рогатого скота; поставлено более 2000 серологических реакций; выращено на жидких средах около 15 литров культур лептоспир музейных штаммов лептоспир; произведено и проанализировано более 500 посевов и пересевов лептоспир, просмотрено в темном поле зрения микроскопа более 15000 препаратов при оценке чистоты роста лептоспир и при оценке результатов серологических исследований; выделено ДНК из 26 штаммов лептоспир; подобраны праймеры, проведена реакция амплификации, проведен электрофорез и произведена оценка результатов с 26 штаммами лептоспир и 10 штаммами бактерий других видов.

Диссертационная работа изложена на ^ страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение, практические рекомендации, выводы, список использованной литературы.

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Кулибали, Д.

выводы

1. На основании обнаружения противолептоспирозных антител в сыворотках крови крупного рогатого скота нами впервые установлено наличие лептоспирозной инфекции у животных в Республике Мали.

2. В РМА. противолептоспирозные антитела выявлены в 72 (из 105) образцах сыворотки крови крупного рогатого скота (68,75$)

• в титрах 1:50 - 1:3200.

3. По данным серологических исследований в этиологической структуре лептоспироза крупного рогатого скота в Республике Мали преобладающими являются лептоспиры серогрупп: Без гее (40,95%) iLouisiana (30,47%) ,Heodomadis (29,52%) ,Ranar»ia(2©,95%)?T a2?ass©vi(X4,28%) Кроме того выявлены противолептоспирозные антитела к лептоспирам других 12 серогруш лептоспир.

4. Отработаны оптимальные режимы постановки лолимеразной цепной реакции с препаратами ДНК лептоспир.

5. Чувствительность ПЦР с препаратами ДНК лептоспир составляет 10 пг ДНК, что в пересчете соответствует 20-50 клеток в об, разце.

6. Образцы ДНК лептоспир интерроганс после электрофореза в IjK-ном агарозном геле всегда давали полосу специфической амплификации, а образцы ДНК лептоспир бифлекеа, как и других видов микроорганизмов, не давали ее.

7. Установлена возможность использования ПЦР с препаратами лизированных кипячением в воде или моче лептоспир, без выделения ДНК.

8* Полимеразная щепная реакция пригодна для идентификации

L. interrogans ОТ Ь. в if lex а И ДРУГИХ ВИДОВ МИКр00рГаНИЗшв. Она проста в техническом отношении, чувствительна и специфична при выявлении продукта амплификации лептоспир и перспективна для использования в практической работе*

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Результаты серологических; исследований и изучения этиологической структуры лептоспироза сельскохозяйственных животных на территории Республики Мали будут переданы в Департамент но изучению зооантропонозов Министерства сельского хозяйства и Департамент ветеринарного Управления ШХ и животноводства, которые рекомендовано положить в основу разработки Национальной противо-лептоспирозной программы.

2. Метод полимеразной цепной реакции следует шире применять для идентификации лептоспир и при диагностике лептоспироза.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Кулибали, Д., 1994 год

1. Агузарова М.Х. Источники и пути передачи лептоспирозной инфекции в Северо-Осетинской AGGP // Лептоспирозы: Тр. 1У Всесоюзн. конф. по лептоспирозам. - М., 1967. - С. 144.

2. Ананьин В.В. Резервуары патогенных лептоспир в природе: Дис. . докт. наук. М., 1954. - 105 с.

3. Ананьин В.В. Лептоспирозы людей и животных. М.: Медицина, 1971. - 314 с.

4. Ананьина Ю.В. Опыт применения бикарбонатного теста для дифференциации патогенных и сапрофитных лептоспир // Матер, симпоз. по лептоспирозу. М., 1975. - С. 3-4.

5. Ананьина Ю.В., Чернуха Ю.Г. Зависимость антитеяогенеза от вида хозяина возбудителя // Лептоспироз. М., 1976.1. С. 185.

6. Артюшин С.К. Генетическое родство лептоспир // Матер, пятого съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов Азербайджана. Баку, 1980. - С. II9-I20.

7. Артюшин С.К. Изучение генетического родства лептоспир: Ав-тореф. дис. . канд. биол. наук. М., 1981. - 16 с.

8. Артюшин O.K., Киктенко B.C., Ежов Г.Й., Лысенко A.M. Нуклеотидный состав, размер генома и гомологии в ДНК лептоспир серогруппы Armenica // Биол. науки. 1982. - № 10.1. G. 19-21.

9. Ашмарин И.И. Молекулярная биология. Л.: йзд-во Ленинград.ун-та, 1977. 368 с.1.. Бакулов И.А., Гаршио М.Г. География болезни животных зарубежных стран. М.: Колос, 197I. - 200 с.

10. Народа О.В. Очерки по мировому распространению важнейших заразных болезней человека. М.: Медицина, 1967. - 300 с.

11. Бернасовская Е.П., Мацов В.М. Вьщеление полисахаридных фракций лептоспир методом Фуллера // Микробиол. журн. 1971. -Т. 33, № 4. - С. 454-459.

12. Бернасовская Е.П., Угрюмов Б.Л. и др. Лептоспирозы. Киев: Здоровье, 1978. - G. 300.

13. Бернасовская Е.П., Угрюмов Б.Л. и др. Лептоспирозы. Киев, 1979. - 403 с.

14. Бобылкова Т.В., Долотова м.П. и др. О заболеваемости лепто-спирозом рабочих мясокомбинатов Тульской области // Лептоспирозы. Киев, 1979. - G. 90.

15. Бялик З.М., Харикова А.А. и др. Лептоспироз у различных профессиональных групп населения Воронежской области // Лептоспирозы: Тез. докл. У1 Всесоюзн. научн. конф. по лептоспиро-зу. Баку. - М., 1976. - G. 59.

16. Варфоломеева А.А. Лептоспирозы // Gob. медицина. М., 1946. - С. 8-9, 10-12.

17. Волина Е.Г., Иванов А.П., Киктенко B.C., Ткаченко Е.А., Арутюнова Г.А. Применение прямого иммуноферментного анализа с родоспецифическим переоксидазным коныогатом при лептоепирозе // Журн. микробиол. 1986. - № 12. - С. 72-75.

18. Волина Е.Г., Ткаченко Е.А., Иванов А.П., Киктенко B.G. Методические рекомендации к проведению иммуноферментных методов в диагностике лептоспироза. М.: УДН, 1987. - 12 с.

19. Волина Е.Г., Мельнецкая Е.В., Бернасовская Е.В., Киктенко B.C. Сравнительная оценка чувствительности различных методовсерологической диагностики лептоспир // ЖМЭЙ. 1990. - № 12. - G. 98-103.

20. Газарян B.C. К методике выращивания лептоспир инфекционной иктерогемоглобинурии крупного рогатого скота // Тр. Армянского НИВЙ. 1947. - Вып. У. - С. 15.

21. Гирич B.C. Морфологические особенности колоний лептоспир на плотной питательной среде под воздействием некоторых солей и биологических факторов // Тез. докл. У1 Всесоюзн. научн. конф. по лептоспирозу. М., 1976. - С. 7-8.

22. Гладкий Ю.Н. Индустриализация и региональное развитие в Африке. Л.: Наука, 1987. - 235 с.

23. Годлевская М.В., Дранкин Д.И. Лептоспироз как профессиональная инфекция // Лептоспирозы: Тез. докл. У1 Всесоюзн. научн. конф. по лептоспирозу, Баку. М., 1976. - С. 66.

24. Гольденштейн З.А. Лептоспироз как профессиональное заболевание людей в Краснодарском Крае // Лептоспирозы: Тр. 1У Всесоюзн. конф. по лептоспирозам. М., 1967. - С. 144.

25. Гольденштейн З.А. Лептоспироз как профессиональное заболевание в Краснодарском Крае // Матер, докл. научн. конф. по лептоспирозам. Краснодар, 1969. - С. 131.

26. Гольденштейн З.А. Лептоспироз как профессиональное заболевание у животноводов Краснодарского Края // Тез. докл. научн. конф. по лептоспирозам. Казань, 1971. - С. 115.

27. Горшанова Е.Н., Саликов Ю.С. Фактор передачи лептоспироза на скототрассах Дагестана // Лептоспирозы. Киев, 1979.1. С. 98.

28. Дас Субхаш Чандра. Этиологическая структура лептоспироза в Народной Республике Бангладеш: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 1993. - 16 с.

29. Дубова А.А., Кузнецова Л.И. и др. Некоторые факторы, определяющие риск инфицирования лептоспирами при работе на мясокомбинатах // Матер. Всесоюзн. конф. Львов, 1988. -С. 167.

30. Ежов Г.И. Изучение химического состава и биологической особенности лептоспир: Дис. . докт. биол. наук. М., Х975. -330 с.

31. Ежов Г.й., Киктенко B.C., Березов Т.Т. Содержание нуклеиновых кислот и нуклеотидный состав ДНК лептоспир // Журн. гиг., эпидемиол., микробиол. и иммунол. Прага, 1975. - Т. Х9,2. С. 46.

32. Ежов Г.И., Лысенко A.M. и др. Изучение гомологий в нуклео-тидных последовательностях ДНК лептоспир // Актуальные проблемы лептоспироза. М.: УДН, 1979. - С. 18.

33. Ежов Г.Й., Лысенко A.M., Волохова Н.А., Артюшин G.K., Ахме• дов М.М. Изучение генетической гомологии ДНК лептоспир // Лептоспирозы. Киев: Изд-во Киевек. НИИ эпидемиологии, 1979. - С. 55-57.

34. Еков Г.И., Артюшин G.K., Лысенко A.M. Нуклеотидный состав и гомология ДНК паразитических лептоспир // ЖМЭИ. 1982. -Т. 10. - С. 47-48.

35. Ежов Г.И., Лысенко A.M., Артюшин С.К. Генотипические и фено-типические критерии систематики лептоспир // Лептоспирозы: Тез. докл. УШ Всесоюзн. конф. по лептоспирозам. Тбилиси, 1983. - С. 3.

36. Ежов Г.И., Артюшина И.А., Фоменко А.С. Полусинтетические и синтетические питательные среды для культивирования лептоспир // Передовой научно-производственный опыт в биологической промышленности: Экспресс-информация. М., 2983. - G. 3.

37. Земсков М.В. Водная лихорадка. Воронеж, I960. - 120 с.

38. Иванова П.Л., Бумари С.А. Анализ генома. Методы. М.: Мир, 1990. - 182 с.

39. Киктенко B.G. Лептоспирозы человека. М.: Медгиз, 1954. -G. 46.

40. Киктенко B.C., Левина Л.Ф. О влиянии солей тяжелых металлов на патогенные и сапрофитные лептоспиры // Лаб. дело. 1968. - № 8. - С. 187-189.

41. Киктенко B.G. 0 резервуарах и очагах лептоспирозной инфекции в природе // ЖМЭИ. 1972. - № 9. - С. I06-II0.

42. Киктенко B.C., Ежов Г.й., Волина Е.Г., Левина Л.Ф., Саруха-нова Л.Е., Хисамов Г.З. Лептоспироз. М.: УДН, 1985. -150 с.

43. Кунде Т. Этиологическая структура лептоспироза в Республике Бенин: Дис. . канд. биол. наук. М., 1991. - 175 с.

44. Кунде Т., Ежов Г.И., Левина Л.Ф. Распространение лептоспироза в Республике Бенин // Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов: Тез. докл. Всесоюзн. научн. конф. М., 1991.

45. Лесников А.Л., Токаревич К.Н. Лептоспироз. Л.: Медицина, 1982. - G. 150.

46. Логинова Л.Г., Богданова Т.И. Бактерии рода Thermus и их термостабильные ферменты // Биотехнол. 1991. - № 3. -G. 23-29.

47. Лысенко A.M., Артюшин С.К. 0 статусе рода лептоспир // Биохимия и биофизика микроорганизмов. Горький: йзд-во Горь-ковск. ун-та, 1980. - С. 25-27.

48. Любашенко G.fl. Лептоспирозы животных: инфекционная желтуха. М., 1948. - С. 58-61.

49. Любашенко С.Я., Новикова Л.С. Характеристика морфологических, серологических и патогенных свойств штаммов лептоспир, полученных от различных видов животных // ЖМЭИ. 1950. - № 8. -G. 35-39.

50. Малахов Ю.А. Свинья как один из резервуаров патогенных лептоспир в природе // Тез. докл. У Всесоюзн. конф. по лептоспирозу людей и животных. Казань, 1971. - С. 299.

51. Малахов Ю.А. Лептоспироз животных. М.: Агропромиздат, 1992. - 239 с.

52. Малахов Ю.А., Гущин В.Н. Успехи и задачи в борьбе с лепто-спирозом животных // Лептоспирозы: Тез. докл. Ш Всесоюзн. конф. по лептоспирозу. Тбилиси, 1983. - С. 18.

53. Мальков И.Г. Дифференциация М. tuberculosis м. Bovis от атипичных видов микобактерий методами ДНК-ДНК гибридизации и полимеразной цепной реакции: Дис. . канд. биол. наук.1. М., 1993. 188 с.

54. Мефодьев В.В., Валова Г.П. и др. К изучению комплекса мер по профилактике лептоспирозов в антропургических очагах // Лептоспирозы: Тр. У научн. конф. по лептоспирозам. Казань, 197X. - 0. 157.

55. Мефодьев В.В., Пекло Г.Н. Лептоспирозы Северо-Западной Сибири // Лептоспирозы. Киев, 1979. - С. 136.

56. Мистюк И.В., Евдокимова О.А. Эпвдемиология лептоспирозов в РСФСР и мероприятия по их профилактике // Лептоспирозы: Тез. У научн. конф. по лептоспирозам. Казань, 197I. - С. 161.

57. Мусаев М.А. Лептоспироз крупного рогатого скота. М.: Сель-хозиздат, 1959. - 301 с.

58. Онучко В.Г. Малийские этюды. М.: Наука, 1986. - 170 с.

59. Плангишвили Д.Л. Молекулярная биология. 1986. - Т. 20. -С. 488.

60. Радченко Г.Ф. Страны Сахелы. М.: Мысль, 1983. - С. 11-77.

61. Романенко В.Г. Роль лептоспир в этиологии инфекционной икте-рогемоглобинурии крупного рогатого скота // Тр. Ростовской областной вет.-опытной станции. Ростов-на-Дону, 1940. -Вып. Ж. - С. 18-22.

62. Роетомян С.В. Столовая зелень как возможный фактор передачи лептоспирозной инфекции // Матер, симпоз. по лептоспирозу. -М., 1975. С. 137.

63. Саруханова Л.Е., Волина Е.Г., Киктенко B.C., Ежов Г.й. Культивирование лептоспир на жидких бессывороточных питательных средах // Лаб. дело. 1980. - № 7. - С. 439-441.

64. Соболева Г.Л. Результаты изучения роста лептоспир в полусинтетической среде // Профилактика и меры борьбы с лептоспирозом сельскохозяйственных животных. Махачкала, 1981.1. С. 18.

65. Сосов Р.Ф. Лептоспироз // Болезни свиней. М., 1970. -С. 214-220.

66. Тарасов С.И., Эпштейн Г.В. К вопросу об этиологии так называемой водной лихорадки // ЖГЭМИ. 1928. - № 9. - С. 51-52.

67. Терских В.И. Лептоспирозы людей и животных. М., 1945. -257 с.

68. Терских В.й. Лептоспирозы методика изучения лептоспирозов, меры борьбы с ними и проблема ликвидации природных очагов1./ Под ред. акад. Е.Н.Павловского. М., 1952. - G. 200.

69. Терских В.И., Коковин И.Л. Лептоспирозные заболевания людей. М.: Медицина, 1964. - С. 216.

70. Троп И.Е. Эпидемиологическая характеристика групповой и спорадической заболеваемости лептоспирозом в восточных регионах РСФСР // Лептоспирозы: Тез. докл. Ш Всесоюзн. конф. по лептоспирозам. Тбилиси, 1983. - С. 155.

71. Фомин Б.А., Артюшин С.К. ДНК гибридизационный зонд для идентификации бруцелл // Матер. Всесоюзн. научн. конф. по сельскохо-зяйст. биотехн.: Тез. выступлений. Целиноград, 1991. - С. 128129.

72. Чернуха Ю.Г. Этиологическая структура лептоспироза в СССР // Лептоспирозы: Тр. У Всесоюзн. конф. по лептоспирозам человека и животных. Казань, 197I. - С. 26.

73. Чернуха Ю.Г., Евдокимова О.А. и др. О несоответствии ареалов хозяина и возбудителя // ЖМЭИ. 1988. - № 12. - С. 70.

74. ADLER В.,MURPHY A. et а 1 . Detect ion., of specific ant i leptospiral immundglobins M & G in .'fiuman serun by sol i<4. Phase ELISA // J.CLIN.Microbiol.-1990.-v.2.-p.452-457.

75. ALTAMIRANO M.,KELLY M.T. et al. Characterization of a DNA probe detection of M.tuberculosis complex in clinical samples by PCR.// J.clin.Microbiol.-1992.-v.30.-N 8.-p.21"3-2176.

76. ANANYINA YU. V.,MAKEEV S.M. Cultural and pathogenic pecularities of Leptospira interrogans Hanka serovar Javanica serogroup.//VII European and IX URSS Leptospirosis research conference Moscow-1991.-Abstracts.-Moscow.-1990.

77. ARTUSHIN S.,BELONSOV V. et a 1.Development of DNA.Hybridization probe for identification of Leptospira interrogans serovar Pomona.// Leptospirosis:VII European and IX USSR Leprospirosis Res.conference-Moscow. -1991 . -p. 53 .

78. BABUDIERI В.,ARCHETI I. Leptospira nel territoris Fra il Sagan el 1eme.//R.С. inst. sup. Sanit.-1940.-v.3.-p.461-466.

79. BAYRET R. L. Leptospirose Chez les animaux d'elevage au Senegal.//Med.Afri.Noire.-1971.-v.16.-N.II.-p.803-805.

80. BAZOVSKA S.K. ,HEVIN H.K. et a 1.Leptospira Sp. strain Dimbovitza,Pirst isolate in Europe with characteristics of the proposed genus Leptonema.// Int. J. Syst.Bacteriol.-1983-v.33.-p.325-328.

81. BEHYMER D. E. , RI EM ANN H.P. et al. Mass screening of cattle seraagainst in . infections disease agents using an ELISA system for monitoring health in livestock.// Amer.J. Vet. Res.-1991.-v.52.-N.10.-p.1699-1705.

82. BLOCKER A., BARANTON G.,SAINT GERONS I.DETECTION OF LEPTOSPIRA SPECIFIC 16 S DNA sequences using Polymerase chaine Reaction.// Leptospirosis: VII European & IX USSR leptospirosis Research conference.-Moscow.-1990.-p.54.

83. BODY B.A.DNA Hibridization for:identification bacteria.//J.Mol.Biol.-1990.-v.8.p.33.

84. BOGAUTDINEVA T.,BOGAUTDINOV Z. Genus specific diagnosis of leptospirosis by ELISA.// Leptospirosis:VII European and IX USSR Leptospirosis Res. conference.-Moscow.-1991.-p.54.

85. BOIRON H.La leptospirose existetelle en A.O.F.//Acta trop.1948.v.5.-p.195-200. •

86. BOROS J.,A. KISS et al.Physival. map of the seven Ribosemal RNA genes of E. Coli.//Nucleic Acids Res.-1979.-6:1817-1830.

87. BOTT К.F.,G.С. STEWART et al. Genetic mapping of cloned ribosomal RNA genes.// In A.T. Genesan and J.A. Hoch (ed.),Genetics and biotechnology of baci11i-Acad.Press.Inc. New York.-1984.-p.19-34.

88. BURAND J.P., HORTON H.M. et al. The use of PCR and shortwave UV irridiation to detect bacilovirus DNA on the surface of gygsy moth eggs.// J. inf. Dis.1992.-v.168-p.2591-2599.

89. BURDIN M.L.rFREYD G.and/ Ashferd W.A. Leptospirosis in Kenya due te leptospira grippotyphosa.// Veterinary Recerd.-1958.-v.70.-p.830-834.

90. CAROLE А.В.,RICHARD L. et al. Comparison of there techniques to detect L. interrogans serovar Hardjo type hardjo-bovis in bovine urine.//Am. J. Vet. Res.-v.50.-N.7-1989.p.1001-1003.

91. CHRONAS G. ,MOYES A.,YOUNG H. Syphilis diagnosis screening by enzyme immune essay and variation in Fluorescent treponemal antibody absorbed (FTA-ABS) Lonfirmatory test performance.// Med. Lab. Sci.-1992.-Vol.42.-N.I.-p.50-55.

92. CELBY С.,PENHECT E.E. et al. Unique ribosome structure of Leptospira interrogans is composed of four RNA components.// J. of BACTERIOL.-1990.-Vol.172.-N.6.-p.3478-3480.

93. DEMMELER G.J.,BUFFONE J. et al. Detection of cytomegalovirus in urine from newborns by using polymerase chain reaction DNA amplification.// J.infect. Dis.-1988.-v.158.-p.1177-1185.

94. ELAIN E.D.,GOOTE J.G. Identification of Bordetedla pertussis in nasopharyngeal swabs by PCR amplification of a region of the adenylete cyclase gene.// J.Med.Microbiolol.#1993.-v.38.-p.140-14 4.

95. EZEH O.A. and AGLA M.I.The detection of antibodies incattle and pigs in plateau state of Nigeria.//In proceeding XII the world Vet. congress on diseases of cattle ,utrecht,the Netherlands.-1982.v 42 .-p.1285-1286. # .

96. EZEH A.O.,ELLIS W.A. et al.The prevalence of leptospirosis in abattoir worker in Jos,in Nigeria.//J.Vet.Med.-1988.-v.44.-p.69-73.

97. ENGRALL P.&PERLMANN 1972.ELISA Tect to detect Leptospira.//Microbiol. immunol.1972.-v.8.-p.170.

98. EROHIN E.P.New methods identification Leptospira.//Microbiol.immunol.-1990.-v.20.-p.160.

99. FACH P.TRAP D. et al. Biotinylated probes to detect Leptospira interrogans on det GI hybridization or by in situ hybridization.// Lett. appli. microbiol. (GBR).-1991.-v.12.-N5.-p.171-176.

100. FAINE S. Guidelines for the control of the Leptospirosis.-Edited by Faine S. WHO.,Geneva.-1982.-p.305.

101. FAINE S. and STALLMAN N. D. Amended descriptions of the genus leptospira Noguchi 1917 and the species L. interrogans Stimson (1907)Wenyen 1926 and L.biflexa (Welbach and Binger 1914 Noguchi 1918).// Int. J. Syst. Bacteriol.-1992.-v.32.-p.461-463.

102. FALKOW S.The use of DNA hybridization for the identification of pathogenic bacteria.// Depaetment of medical Microbiology,STANFORD University.-USA.-1983.-p.33.

103. FOX G. E. , STACTELRANDT E. et al. The phylogeny of procaryetes.// Science.-1980 --v.209.-p.457-4 63.

104. FRAYA DE AZEVEDE J. M.,Isolation leptospira serovars Ballum and Grippotyphosa from Regents in Nigeria.// Bull. Hyg.-1961.-v.38.-p.580.

105. FUKUNAGA M.,HORIE J. Nucleotide sequence of a 23 S RNA gene f-rom leptospira interrogans serovar canicola strain Moulton.// nucleic acids Res.-1989.-Vol.17.-p.2123.

106. FUKUNAGA M. and MIFUCHI J. Tthe number of large RNA genes in L. interrogans and L. Biflexa.// Microbiol, immunol.-1989.-Vol.33.-p.459-466.

107. FUKUNAGA M. and MIFUCHI J. Unique organization of Leptospira interrogans RNA crenes.// J. of Bacterid.-1989.-v.171-N II.-p.5763-5767.

108. FUKUNAGA M.,HORIE I. et al. Isolation and characterisation of the 5 Sr RNA crene of 1. interrogans .// J. of Bacterid .-1990 . v . 172 .-N 6.-p.3264-3268.

109. FUKUNAGA M.,HORIE J et a 1.Nucleotide sequence of 16 Sr RNA gene for I». interrogans serovar Canicola s.train Mou.l ton.//Nucleic Acids Res.-1990.-Vol.18.-n 2.-p.366.

110. GALLIMANT M. Sondes nucleiques et amplification de l'adn.// Lett, infect. Microbiol.-1991-1992.-v.7.-N 2.-p.46.

111. GILLET R.Un siijet de la recente epidemie de denque a Dakar.Note sur un cas de sspirochetose humaine.//Bui1. Sec. Path, exet.-1926.-19.-p.860-863.

112. GOEZ J.Diagnostique de la spirochetose Icterohaemorrhagie en A.O.F.:These.-Paris.-1933.-p.180.

113. GOLD L. , PRILNOW D. et al.Translational initiation in prokaryotes.// Annu. Rev. Microbiol.-1981.-35:365-403.

114. GRAVEKAMP C.,KEMP H.V.D. et al. Detection of icterohaemorrhagiae or copenhageni in human serum by the polymerase chain Reaction.// Leptospirosis:VII European and IX USSR Leptospirosis Res. Conference.-Moscow.-1991.-p.57.

115. GUIDELINES.For the control of Leptospirosis.// edited by FAINE S. WHO -Geneva.-1982.

116. HAAPALA, M. REGU and ALEXANDER. Справочная Лаборатория /

117. Лептоспирозная. В0з. и ФА0. Вашингтон. США. - 1969.

118. HERRMANN J. L. Genome conversation in isolates of Leptospira interrogans.// J. Bacterid.-1991.-v.173.-N.93.-p.7582-7588.

119. HOGERSEIL H. Z . . Terpstra W.J. et al. Leptospirosis in rural Ghana.// Trop. Geogr. Med.-1986.-v.38.-p.162-166.

120. HOLLAND J. , PARKER A.J.C. and HESLEP C.G. The prevalence of antibodies against leptospiroses in goats.sheep and cattle in Nothern Nigeria.//Rep. W.A.F. Res. team Royal Vet. college,University of1.ndon.-197-7.-p. 29-37.

121. HOVIND H.K.,ELLIS W.A. et a 1.Leptospira parva sp. Nov. some morphol. and Biological characters.//Zentra1. Bact.Parasitenkol Infect. Hyg. Adt.Orig. Eeihe.-1981.-1981.-v.250.-p.343-354.

122. JOHNSON R.C. and HARRIS V.G. Differentiation of pathogenetics and saprophytics Leptospires.I. Grth 'at low temperatures.//J. Bacteriology.-1977.-94.-p.27-31.13 6. JOHNSON» R.G* The spirochetes.// Annu. Rev Microbiol.-1977 . -31.-p.89-106.

123. JOHNSON R.C. 1981. Aerobic spirochetes.//The genus leptospira in P.M. ATTAR. H. stolp (ed.).-1981.-p.582-591.

124. JOHNSON R.C. and FAINE S.Family II.Leptospiraceae.// Bergey1 manuel of syst. Bacteriol.-1984.-v.I.-p.62-67.

125. JOHNSON R.C. and Faine S. Leptospiraceae.// In N.R.KREIG and HOLD J.G.(edi.),BERGLY1S manual of systematic bacteriology.-1984.-p.62-70.

126. JOSS A.W.L.,JEAN M.W. et a 1.Texoplasma polymerase chain reaction on experimental Hood samples .//J .Med . Microbiol.-1993 .-v.38.-p.38-43.

127. KAI M. ,KAMIYA S. et al.Rapid detection of mycoplasma pneumoniae in clinical samples by polymerase chain reaction.//J.Med.Microbiol.-1993.-v.38.-p.166-17 0.

128. KISS A., SAIN B. et al.1977.The number of rRNA genes in E.Celi.//FEBS Leh.-19 77.-79:7 7-7 9.

129. KOBAYASHI H.,and OSAWA S.The number of 5 Sr RNA genes in B. subtilis.//FEBS.LeH.-1982.-141:161-16 3.

130. KOUNDE T.,EJOV G.I.,LEXINA L.F.Serological examination of domestic animals and differents groups of population for leptospirosis VII European and IX USSR Leptospirosis research conference,Moscow,February 1991.Abstracts Moscow-1990.-p.9.

131. KOUNDE Th.Serological survey of Leptospirosis in Republic of Benin.//Leptospirosis on the African continent.Procedings of ACEC/STD3

132. MARMUR J.,DOTY P. Heterogeneity in deoxyribonucleic acids.II Dependence on compositiom of the configurationa1 stability of deoxyribonucleic acids.//Nature.-1959.-183.-p.1427-1429.

133. MARMUR J.,DOTY P. Determination of the base composition of deoxyribonucleic acid from ins thermol denaturation temperature.//J.Mol. Biol1962.-v.5.-p.109-118.

134. NAKENE P.,KAWAOI A. Perexidase-labelled antibodyra new method of conjugation.//J.Histochem.Cytochem.-1974.-v.22.-p.1084-1091.155.NIELSEN J.N.,ARMST

135. ONG C.N. et al.Relationship among selected leptospira interrogans serogroups as determined by nuclic acidhybridization.J.clin.Microbiol.-1989.-v.27.-p.2724-2729.

136. NOC F., ESQUIER A.Les spirochetes a Dakar.//Bui1.9 sec.Path.Exet.-1920.-v.20.-p.672.

137. NOMURA M. and MORGAN E.A.Genetics of bacterial ribosomes.//Annu. Rev. Genet.-1977.-II:297-347.

138. PALMER N.M.A.,NOLAN A. et a 1.Development of an ELISA for detection of antibodies to the Sejroe group in bovin sera.//Leptospirosi s: VII European and IX USSR Leptospirosis Res.conference.-Moscow.-1991.-p.61.

139. PASTER В.J.,STACTOBRANDT E. et al. The phylogeny of the -spirochetes.//Syst.appli.Microbiol.-1984.-v.5.-p.337-351.

140. PASTER В.J.,DEWHERST F.E. et a 1.Leptospira interrogans 16S ribosoma1 RNA,complete sequence.//Phylogenetic analysis of the spirochetes.1990.2,36.

141. PYATKIN К.KRIVOSHEIN Y.Microbiology.-Mir pul1ishers.-Moscow.-1980.-p.560.

142. ROTHSTEIN N.S.Leptospirosis in Ghana a preliminary serological survey.//Ghana med.J.-19 64.-1964.-N.3.-p.90-9 3.

143. SAIKI R.К.,SHARF S. et al.Enzymatic amplification of globin genomic sequences and restriction site analysis of for diagnosis of siekle cell anemia .//Science.-1985.-v.230.-p.1350-1354 .

144. SAIKI R.К.,GELFAND D.H. et al.Primer directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase.//Science.-1988.-v.2 39.-p.487-491.

145. SHINE J.and DOLGARNO L.D. The 3°terminal sequence of E.CELI 16 Sr RNA complementary to nonsense triplets and ribosome binding sites.//Proc.Natl.acad.Sci.USA.-1971.-71:-p.1342-1346.

146. SAOAWA M.,OSAWA S.et al.The number of r RNA genes in mycoplasma capricolum. //Mol. Gen. Genet •-1981.-v .182 : 502-504.17 3»STWART G.C. et al.Delaited physical mapping of r RNA genes of В.subti1is gene.//Microbiol.immunol.-1982.-v.19.-p.153-162.

147. VAN DER GIESSEN J.W.,EGER B. et a 1.Amplification of 16 S rRNA sequences to detect M.paratuberculosis.//L.Med.Microbiol.-1992.-v.36.-N4.-p.255-263.

148. VAN EYS G.J.,ZAAL J. et a 1.Hybridization with hardjo-bovis-specific recombinant probes as a method for type discrimination of leptospira interrogans serovar hardio.//J.Gen.Microbiol.-1988 . -v.134.-p.567-574.

149. WOESE et al.Genome organisATION OF Leptospira.//J.Mol.Evol.-1978.-v.II.-p.245-252.

150. WREN В.W.,HEARD S.R. et a 1.Characterization of Cl.difficile • "strains by PCR with toxin A &B specific primers.//J.Med.Microbiol.1993.-v.38.-p.109-113.

151. YANAGAWA R.,SHINAGAWA M.et a 1.Serologica1 studies of leptospiras by immunodiffusion.//Zbl.Bakt.-Abt.I.orig.Bd.A.228.-p.369-377.

152. YANISH P.C.,VIEIRA J. &MESSING J. Gene.-1985.-v.33.-p-103119.

153. YASUDA P.H. ,STEIGRWALT A.G. et a 1.Deoxyribonucleic acid relatedness betwen serogroups and serovars in the family leptospiraceae with proposals for seven new leptospira species.//Int.J.Syst.Bact.-1987.-v.37.-N4.-p.407-415.