Матриксные металлопротеазы и их тканевые ингибиторы в опухолях и плазме крови больных раком толстой кишки тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат биологических наук Короткова, Екатерина Андреевна

• Короткова, Екатерина Андреевна
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Короткова, Екатерина Андреевна

Содержание

Список основных сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Клиническая характеристика больных

2.2. Получение и обработка материала

2.3. Иммуноферментные исследования

2.4. Статистический анализ. 55 ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Содержание матриксных металлопротеиназ и их тканевых 56 ингибиторов в опухолях больных колоректальным раком.

3.1.1. Сравнительная оценка экспрессии ММП/ТИМП в опухоли и 56 в окружающей неизмененной слизистой оболочке толстой кишки.

3.1.2. Корреляционные взаимосвязи уровней экспрессии ММП и 60 ТИМП в тканях злокачественных опухолей, полипах и неизмененной слизистой толстой кишки.

3.1.3. Сравнительная оценка экспрессии ММП/ТИМП в опухоли и 61 в окружающей неизмененной слизистой оболочке толстой кишки в зависимости от клинико-морфологических особенностей.

3.1.3.1. Сравнительная оценка экспрессии ММП и ТИМП в 61 зависимости от пола и возраста пациентов.

3.1.3.2. Экспрессии ММП и ТИМП опухолях и неизмененной 63 слизистой в зависимости от глубины инвазии, лимфогенного и гематогенного метастазирования.

3.1.3.3. Экспрессии ММП и ТИМП опухолях и неизмененной 69 слизистой в зависимости от стадии заболевания, степени дифференцировки и локализации опухоли.

3.1.4. Заключение

3.2. Содержание матриксных металлопротеиназ и их тканевых 75 ингибиторов в сыворотке крови больных колоректальном раком.

3.2.1. Сравнение содержания ММП и ТИМП в сыворотке крови 75 больных раком и доброкачественными полипами толстой кишки и контрольной группы.

3.2.1.1. Взаимосвязь показателей содержания матриксных

металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов в плазме крови и опухолях больных колоректальным раком.

3.2.2. Содержания матриксных металлопротеиназ и их тканевых 81 ингибиторов в плазме крови в зависимости от пола и возраста пациентов.

3.2.3. Содержание ММП-2, ММП-7, ММП-9, ТИМП-1 и ТИМП-2 83 (нг/мл ) в плазме крови больных раком толстой кишки в зависимости от степени дифференцировки опухоли.

3.2.4. Взаимосвязь уровней металлопротеиназ и их ингибиторов в 85 плазме крови со стадией заболевания (ВОЗ).

3.2.5. Содержание ММП/ТИМП в плазме крови больных 86 колоректальном раком в зависимости от глубины инвазии

опухоли, лимфогенного и гематогенного метастазирования. 3.2.5.1. Заключение

3.3. Прогностическое значение матриксных металлопротеиназ и их 94 ингибиторов у больных колоректальным раком: результаты 5-летнего наблюдения.

3.3.1.Общая безрецидивная выживаемость больных РТК

3.3.2. Выживаемость больных РТК в зависимости от содержания 95 ММП и ТИМП в опухоли и плазме крови.

ГЛАВА IV. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ЛИТЕРАТУРА

Список основных сокращений

КРР - колоректальный рак

ВКМ - внеклеточный матрикс

ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения

ММП - матриксная металлопротеиназа

ММПИ - ингибиторы матриксных металлопротеиназ

мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота

МТ-ММП - матриксная металлопротеиназа мембранного типа

НПКР - неполипозный колоректальный рак

РТК - рак толстой кишки

ТИМП - тканевой ингибитор матриксных металлопротеиназ

АРС - аденоматозный полипоз ободочной кишки

IGF-II- инсулиноподобный фактор роста второго типа

FISH - флюоресцентная гибридизация in situ

MSI - микросателлитная нестабильность

N - норма (гистологически неизмененная слизистая)

RT-PCR - обратно-транскриптазная полимеразная цепная реакция

TGF- трансформирующий фактор роста

TNF- фактор некроза опухоли

иРА - активатор плазминогена урокиназного типа

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Матриксные металлопротеазы и их тканевые ингибиторы в опухолях и плазме крови больных раком толстой кишки»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Несмотря на успехи, достигнутые в диагностике, и совершенствование хирургических методов лечения, смертность от рака толстой кишки остается довольной высокой. При этом у значительного процента больных при выявлении опухоли одновременно обнаруживаются регионарные и отдаленные метастазы. Трудности ранней диагностики и высокий метастатический потенциал определяют необходимость углубленного изучения механизмов распространения опухоли, знание которых могло бы стать основой для создания новых препаратов, целенаправленно воздействующих на процессы метастазирования и инвазии.

Одним из основных механизмов инвазии злокачественных опухолей является разрушение окружающей базальной мембраны и внеклеточного матрикса (ВКМ) ассоциированными с опухолью протеазами, играющими также важную роль в процессах метастазирования и неоангиогенеза [2, 46]. В опухолевой инвазии задействовано несколько классов протеаз, к важнейшим из которых следует отнести группу матриксных металлопротеиназ (ММП) или матриксинов, названных так именно за свою способность специфически гидролизовать все основные белки внеклеточного матрикса, в первую очередь, коллаген [42-43, 47, 119, 157]. ММП - это мультигенное семейство, состоящее из более 20 секретируемых и связанных с поверхностью клетки цинк-зависимых эндопептидаз. Помимо большинства компонентов ВКМ, их субстратами могут быть также другие протеазы, хемотак-сические молекулы, латентные формы факторов роста, растворимые и

мембранно-ассоциированные белки, связывающие факторы роста. Важнейшими представителями семейства ММП являются различные неспецифические (ММП-1, ММП-8, ММП-13) и специфические (ММП-2/желатиназа А и ММП-9/желатиназа В) коллагеназы, матрилизин (ММП-7), стромелизины (ММП-3 и ММП-10). Активность ММП в межклеточном пространстве специфически подавляется тканевыми ингибиторами (ТИМП) - четырьмя структурно родственными белками, три из которых (ТИМП-1, -2 и -4) секретируются в растворимой форме, а один (ТИМП-3) -связан с ВКМ [134].

Для многих ММП продемонстрировано увеличение экспрессии в опухолях различного генеза, причем активация происходит по паракринному механизму с участием факторов роста и цитокинов, секретируемых инфильтрирующими опухоль макрофагами и лимфоцитами, а также клетками опухолевой стромы [13]. В последнее время появляются данные, свидетельствующие о том, что ТИМП, в первую очередь, ТИМП-1 и ТИМП-2, играют важную самостоятельную роль в регуляции роста и дифференци-ровки опухолевых и нормальных клеток, а также обладают антиангиоген-ными свойствами [134]. В связи с этим различные ММП и ТИМП рассматриваются в настоящее время в качестве возможных биологических маркеров прогноза и лекарственной чувствительности злокачественных опухолей, в частности, рака толстой кишки [100, 135, 169], а использование природных и синтетических ингибиторов ММП считается перспективным подходом к противоопухолевой терапии [10, 110, 122].

Цель работы:

Сравнительная оценка содержания различных матриксных металло-протеиназ и их тканевых ингибиторов в опухолях, гистологически неизмененной слизистой толстой кишки и плазме крови больных колоректальным раком в зависимости от различных клинико-морфологических особенностей для выявления наиболее перспективных биологических маркеров этого заболевания.

Задачи исследования:

1. Иммуноферментными методами определить содержание различных ММП (2, 3, 7, 9, 13) и их тканевых ингибиторов 1, 2 и 4 типов в опухолях и неизмененной слизистой больных раком толстой кишки, а также в доброкачественных полипах толстой кишки.

2. Определить концентрацию ММП и ТИМП в плазме крови больных раком толстой кишки до начала лечения и через 1-2 недели после операции, сопоставить полученные результаты с соответствующими показателями здоровых доноров и проанализировать взаимосвязь концентрации изучаемых белков в плазме крови с уровнем их экспрессии в опухолевой ткани.

3. Проанализировать взаимосвязь содержания исследованных маркеров в опухолях и плазме крови с основными клинико-морфологическими особенностями рака толстой кишки (стадией процесса, локализацией и гистологическим строением опухоли, глубиной инвазии, наличием лимфогенных и гематогенных метастазов, полом и возрастом больных).

4. Проанализировать взаимосвязь уровня исследованных маркеров в опухолях и плазме крови больных колоректальным раком с выживаемо-

стью пациентов и оценить их значение для прогноза заболевания в различных клинических группах.

Научная новизна и практическая значимость исследования:

Впервые количественными иммуноферментными методами исследован спектр экспрессии различных матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов в опухолях и гистологически неизмененной слизистой больных раком толстой кишки и показано, что уровни всех исследованных ММП и их тканевых ингибиторов 1 и 2 типа достоверно повышены в опухолях по сравнению с неизмененной слизистой. Проанализирована также концентрация соответствующих белков в плазме крови и прослежена динамика ее изменения больных на фоне проводимого лечения, в результате чего показано, что ММП-7 является перспективным маркером РТК, коррелирующим с распространенностью процесса.

Впервые продемонстрировано неблагоприятное значение высоких уровней ММП-7 и ТИМП-1 в плазме крови для прогноза общей выживаемости больных РТК различных стадий, а также достоверное неблагоприятное влияние повышенной экспрессии ММП-7 в опухоли на выживаемость больных с диссеминированным опухолевым процессом.

В результате многофакторного анализа выживаемости пациентов выявлено, что уровни концентрации ММП-7 и ТИМП-1 в плазме крови до оперативного вмешательства являются независимыми прогностическими факторами и могут быть рекомендованы в качестве дополнительных маркеров прогноза рака толстой кишки.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Достоверное увеличение содержания ключевых матриксных ме-таллопротеиназ и их тканевых ингибиторов в опухолях большинства больных раком толстой кишки по сравнению с гистологически неизмененной слизистой.

2. Матрилизин (ММП-7) как перспективный серологический маркер колоректального рака, коррелирующий с распространенностью процесса.

3. Уровни ММП-7 и ТИМП-1 в плазме крови, как независимые прогностические факторы, определяющие течение заболевания.

Апробация работы.

Апробация диссертации состоялась на совместной научной конференции сотрудников лабораторий клинической биохимии, клинической иммунологии, иммунологии гемопоэза централизованного клинико-лабораторного отдела, хирургического отделения проктологии, хирургического отделения абдоминальной онкологии кафедры клинической биохимии и лабораторной диагностики ФПДО МГМСУ и кафедры онкологии РМАПО ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н.Блохина» РАМН 15 июня 2012 г. Материалы диссертации представлены на IV и V Съездах онкологов и радиологов СНГ (Баку, 2006 г., Ташкент, 2008 г.), XIV Российском Национальном Конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 2007 г.), XII Российском онкологическом конгрессе (Москва, 2008 г.), VI Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 2009 г.), 18th International Congress on Anti-cancer Chemotherapy (Paris, France, 2007), 35th Meeting of the International Society for Oncodevelopmental Biology and Medi-

cine (Prague, 2007), 36th Meeting of the International Society of Oncology and BioMarkers (Tokyo, Japan, 2008), BIT Life Sciences' 2nd Annual World Cancer Congress-2009 (Пекин, 2009), Международной конференции "Diagnostics and therapy for advanced gastrointestinal tumors (Vrnjacka Banja, Serbia, 2012).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ, в т.ч. 5 статей в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 140 страницах, состоит из введения, обзора литературы, характеристики клинического материала и методов исследования, собственных результатов исследования, заключения, выводов и указателя литературы, включающего 8 отечественных и 162 зарубежных источника. Работа иллюстрирована 34 таблицами и 19 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Короткова, Екатерина Андреевна

выводы

1. Содержание ключевых матриксных металлопротеиназ (ММП-2, 3, 7, 9 и 13) и их тканевых ингибиторов 1 и 2 типа достоверно повышено по сравнению с гистологически неизмененной слизистой в опухолях 73%-92% больных раком толстой кишки. Выраженной взаимосвязи уровней исследуемых маркеров в опухолях с основными клинико-морфологическими особенностями заболевания не обнаружено.

2. Концентрация ММП-7 в плазме крови больных раком толстой кишки достоверно повышена, а концентрация ТИМП-1 достоверно снижена по сравнению с показателями контрольной группы; уровни других исследованных маркеров достоверно не отличаются от нормы. Положительная корреляционная связь плазматической и внутриопухо-левой концентрации выявлена только для ММП-9.

3. После хирургического удаления опухоли в плазме крови отдельных пациентов происходят разнонаправленные изменения уровней исследованных ММП и ТИМП; при оценке группы в целом отмечена достоверная нормализация (повышение) уровня ТИМП-1 и дальнейшее увеличение содержания ММП-7 в плазме, что свидетельствует о неопухолевом происхождении, по крайней мере, части циркулирующих в крови маркеров.

4. Содержание ММП-9 и ТИМП-1 в плазме крови пациентов с метастазами в лимфатических узлах достоверно ниже, чем у больных без лимфогенных метастазов, а у больных с отдаленными метастазами достоверно повышены уровни ММП-7 и ТИМП-1. Взаимосвязи уровней исследованных маркеров в плазме крови с другими клини-ко-морфологическими факторами, включая глубину инвазии опухоли и стадию РТК, не обнаружено.

5. Высокие уровни ММП-7 и ТИМП-1 в плазме крови являются факторами неблагоприятного прогноза общей выживаемости больных раком толстой кишки: при содержании ММП-7> 4,0 нг/мл 5-летняя выживаемость составила 32,6%, а при более низком ее уровне -85,8%; для ТИМП-1 5-летняя выживаемость в подгруппах с высоким и низким уровнем маркера (пороговое значение - 347 нг/мл) составила 48,5 и 77,6% соответственно. На выживаемость больных РТК с отдаленными метастазами неблагоприятно влияет также высокий (более 7,8 нг/мг белка) уровень ММП-7 в опухоли.

6. При многофакторном анализе, включавшем стадию заболевания, локализацию, степень дифференцировки и глубину инвазии опухоли, наличие лимфогенных или отдаленных метастазов, продемонстрировано, что высокие уровни ММП-7 и ТИМП-1 в плазме крови являются независимыми факторами неблагоприятного прогноза рака толстой кишки.

Глава IV. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Разработка новых методов адъювантной терапии рака толстой кишки является одним из наиболее перспективных направлений в области исследования данного заболевания, поскольку, несмотря на значительные достижения хирургии и улучшение диагностических методов, большинство больных поступают на лечение с распространенным процессом, требующим комплексного лечения. В то же время, РТК относится к числу заболеваний, мало чувствительных к традиционным видам химиотерапии.

В последние годы большое внимание исследователей привлекает так называемая направленная таргетная терапия злокачественных опухолей, суть которой сводится к избирательному воздействию на ключевые биологические системы, участвующие в регуляции пролиферации, дифференци-ровки, метастазирования и инвазии опухолей.

Известно, что одним из основных механизмов инвазии злокачественных опухолей является разрушение окружающей базальной мембраны и внеклеточного матрикса (ВКМ) ассоциированными с опухолью протеазами, играющими также важную роль в процессах метастазирования и не-оангиогенеза. В опухолевой инвазии задействовано несколько классов протеаз, к важнейшим из которых следует отнести семейство матриксных металлопротеиназ, названных так именно за свою способность специфически гидролизовать все основные белки внеклеточного матрикса, в первую очередь, коллаген. Важнейшими представителями ММП являются желати-назы А и В/специфические коллагеназы коллагена IV типа (ММП-2 и 9), а также матрилизин - ММП-7. Публикации последнего десятилетия свидетельствуют о том, что именно эти ММП являются перспективными маркерами для дифференциальной диагностики и прогноза течения рака толстой кишки. Активность ММП в межклеточном пространстве специфически подавляется четырьмя тканевыми ингибиторами. Среди них наиболее значимым маркером рака толстой кишки, по данным литературы, является ТИМП-1.

Следует отметить, что большая часть исследований опухолевых тканей, описанных в литературе, выполнена полуколичественными иммуно-гистохимическими методами. В них, как правило, оценивали отдельно экспрессию ММП и/или ТИМП в эпителиальных и стромальных клетках, однако общую количественную оценку состояния ММП-зависимого про-теолиза в опухолевой ткани не проводили. Не обнаружили мы в литературе и исследований, посвященных сравнению уровня ММП и ТИМП в опухолях и плазме крови.

Все вышеизложенное определило цель и задачи нашего исследования, в которое вошли 99 больных РТК оперированных в отделении проктологии РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН: 1) используя количественные иммунофер-ментные тесты, провести сравнительную оценку содержания ММП-2, ММП-3, ММП-7, ММП-9 и ММП-13 их тканевых ингибиторов 1, 2 и 4 типа в опухолях, неизмененной слизистой и плазме крови больных раком и доброкачественными новообразованиями толстой кишки; 2) проанализировать взаимосвязь этих показателей с основными клинико-морфологическими особенностями рака толстой кишки; 3) на основании полученных результатов оценить клинические перспективы определения данных маркеров.

Для установления специфичности наблюдаемых изменений в плазме крови исследовали группу здоровых доноров, а для опухолевой ткани у больных РТК одновременно с опухолью исследовали участок непораженной опухолевым процессом слизистой, а также 9 доброкачественных полипов толстой кишки. В опухолях и плазме крови большинства из них было определено содержание пяти металлопротеиназ их ингибиторов.

На первом этапе статистического анализа полученных данных мы сопоставили содержание исследованных ММП и ТИМП в злокачественных опухолях, неизмененной слизистой и доброкачественных полипах толстой кишки. Было выявлено, что уровень экспрессии большинства исследуемых нами металлопротеиназ и их ингибиторов в опухолевой ткани оказался выше, чем в неизмененной слизистой оболочке толстой кишки. В полипах статистически значимое снижение концентрации исследуемых белков, по сравнению со злокачественными опухолями наблюдалось, только для ММП-2, что косвенно подтверждает участие желатиназы-А в формировании инвазивного потенциала рака толстой кишки. Достоверное повышение экспрессии в доброкачественных опухолях по сравнению с неизмененной слизистой нами было отмечено у ММП-7 и ТИМП-1. По данным ряда авторов, гипперэкспрессия ММП-7 у больных семейным аденоматозным по-липозом ободочной кишки может объяснять предрасположенность к коло-ректальному раку, что подтверждает значительную роль этой протеиназы в стимуляции роста и малигнизации доброкачественных опухолей толстой кишки [33].

Мы проанализировали корреляционные взаимосвязи между уровнями изучаемых маркеров в опухолях и неизмененных тканях толстой кишки. Выявлена достоверная положительная корреляция содержания ТИМП-1 с содержанием ММП-9, ММП-13, ММП-2, а также содержания ТИМП-2 с уровнем ММП-2 в тканях рака толстой кишки. В гистологически неизмененной слизистой отмечена только корреляция уровней ТИМП-1 и ММП-7, не наблюдаемая в опухолевой ткани, и взаимосвязь концентраций ТИМП-1 и ММП-2. Таким образом, соотношение экспрессии различных ММП и их ингибиторов в опухолевой и нормальной тканях различно. В то же время, для ключевых ММП (2, 7, 9) и ТИМП-1 выявлена достоверная положительная взаимосвязь их содержания в опухолях и неизмененных тканях.

Во многих ретроспективных исследованиях у онкологических больных наблюдается повышенная экспрессия многих ММП и ТИМП включая ММР-2, 7, 9, ТИМП-1, 2 в первичном очаге и/или метастазах, ассоциированная со степенью инвазии органа, с развитием отдаленных метастазов, плохим прогнозом, низкой выживаемостью [16-17, 28]. В обследованной нами группе больных выраженной взаимосвязи уровней исследуемых маркеров в опухолях и неизмененной слизистой больных первичным раком толстой кишки с основными клинико- морфологическими особенностями заболевания выявлено не было, что не исключало их потенциальной роли в качестве независимых факторов прогноза выживаемости больных.

В практическом плане важен вопрос о том, в какой мере изменение продукции матриксных металлопротеиназ и их ингибиторов в опухолевой ткани отражается на их концентрации в периферической крови, так как при наличии корреляции между этими показателями появляется возможность оценки метастатического и инвазивного потенциала опухоли. Для этого мы проанализировали концентрацию маркеров в плазме крови, полученной до начала специфического лечения, в сравнении с группой здоровых доноров и ее изменение после удаления первичной опухоли.

Содержание ММП-7 было достоверно выше в плазме крови больных раком толстой кишки до оперативного вмешательства по сравнению с показателями контрольной группы, уровни других исследованных ММП, а также ТИМП-2 и 4 не отличались от нормы. После удаления опухоли происходят разнонаправленыые изменения уровней маркеров у отдельных больных. В целом по группе, уровень ММП-7 продолжал достоверно увеличиваться по сравнению с нормой и после удаления первичной опухоли и даже достоверно превышал дооперационный показатель. В то же время концентрации ММП-9 и ММП-2 в плазме крови больных РТК после удаления первичной опухоли не отличались от концентрации этих белков до специфического лечения. Таким образом, мы не получили ожидаемого снижения концентрации маркеров в плазме крови после удаления первичной опухоли, а уровень концентрации некоторых из них наоборот увеличивался, что свидетельствует о неопухолевом происхождении, по крайней мере, части ММП, циркулирующих в периферической крови. Это подтверждается и отсутствием корреляции исходно повышенных уровней ММП-7 с содержанием этого маркера в опухоли.

Не сильная, но достоверная положительная корреляция между внут-риопухолевым и плазматическим содержанием выявлена только для ММП-9, которая в отличие от других маркеров не отличается от нормы ни до, ни после операции. Можно предположить, что высокий плазматический уровень металлопротеиназ и их ингибиторов в послеоперационном периоде вероятнее всего связан с посттравматическим асептическим воспалительным процессом.

Особый интерес представляло исследование диагностического значения уровня ТИМП-1 в плазме крови, поскольку группой исследователей из Дании [65] он был предложен в качестве маркера КРР. Нами выявлены принципиально иные закономерности: исходный уровень ТИМП-1 в плазме крови больных РТК был достоверно снижен по сравнению с контрольной группой, а после удаления опухоли он достоверно возрастал, приближаясь к нормальному. Увеличение уровня ТИМП-1 в послеоперационном периоде согласуется с данными опубликованными в работах [56, 68, 161], а различия с данными могут быть связаны с тем, что эти исследователи использовали собственную тест-систему, а мы работали стандартными наборами фирмы «1пукп^еп (ВюБоигсе)».

В целом, анализ содержания матриксных металлопротеиназ и их ингибиторов в плазме крови показал, что наиболее перспективным маркером рака толстой кишки является ММП-7. Оптимальное соотношение специфичности (70%) и чувствительности (71%) отмечается при использовании порогового уровня 1,8 нг/мл. Попытки увеличить специфичность за счет увеличения порогового значения до 95% процентиля нормы резко снижали чувствительность теста. Несколько снижает потенциальную значимость

ММП-7 как серологического маркера, в особенности непосредственно в послеоперационном периоде, и то, что ее уровень в плазме продолжает возрастать и после удаления опухоли.

При анализе взаимосвязи показателей плазмы крови с клинико-морфологическими особенностями рака толстой кишки отмечено достоверно более низкое содержание ММП-9 и ТИМП-1 у пациентов с метастазами в лимфатических узлах по сравнению с больными без лимфогенных метастазов, а также увеличение уровней ММП-7 и ТИМП-1 при наличии отдаленных метастазов. Ассоциации с другими клинико- морфологическими факторами, включая глубину инвазии опухоли и стадию РТК, не обнаружено. Наблюдалась только некоторая тенденция к увеличению уровня концентрации ММП-7 в плазме крови больных IV стадией. Достоверное увеличение уровня ММП-7 в плазме до и после операции в группе больных с отдаленными метастазами по сравнению с больными без отдаленных метастазов может послужить критерием оценки степени распространенности опухолевого процесса и фактором прогноза.

Для выявления прогностической значимости содержания ММП и ТИМП в опухолях и плазме крови больных колоректальным раком нами был проведен анализ их взаимосвязи с выживаемостью пациентов различных клинических групп. 5-летнюю безрецидивную выживаемость удалось проследить у 54 больных, она составила 70,0%. Рецидив заболевания обнаружен только у 13 из прослеженных пациентов (19,7%), поэтому статистически значимо оценить влияние уровней исследуемых показателей на безрецидивную выживаемость больных различных клинических групп не удалось.

Общую выживаемость 99 обследованных больных удалось проследить в течение 1,0 - 66,1 мес (медиана прослеженности - 25,6 мес). За время наблюдения умерло 24 человека, общая 5-летняя выживаемость во всей обследованной группе составила 70,0%. Медиана выживаемости достигнута не была. Прогностическое значение мы оценивали для маркеров, уровни которых, по нашим данным, в наибольшей степени изменены у больных КРР, а именно - ММП-2, 7, 9 и ТИМП-1. В качестве дискриминационных уровней для оценки влияния маркеров на выживаемость пациентов были выбраны показатели верхних квартилей исследованной выборки.

Оказалось, что уровень экспрессии изученных ММП и ТИМП в опухоли достоверно не влияет на выживаемость общей группы пациентов. Однако высоко достоверное влияние на общую выживаемость больных РТК оказывали уровни ММП-7 (р=0,00001) и ТИМП-1 (р=0,009) в плазме крови, взятой до оперативного вмешательства. При этом высокие уровни обоих маркеров являются факторами неблагоприятного прогноза: при содержании ММП-7, равном или выше 4,0 нг/мл, 5-летняя выживаемость пациентов составила 32,6% (медиана - 15 мес), а при более низком уровне ММП-7 - 85,8%; для ТИМП-1 соответствующие показатели в подгруппах с высоким и низким уровнем маркера составили 48,5 (медиана - 18,3 мес) и 77,6% соответственно (медиана не достигнута). Следует отметить, что прогноз РТК достоверно зависел и от характера изменения уровня ММП-7 в плазме крови после удаления опухоли: он был более благоприятным у тех пациентов, у которых уровень маркера после операции возрастал.

Таким образом, при анализе всей группы пациентов без учета их клинико-морфологических особенностей наиболее значимым прогностическим маркером оказался предоперационный уровень ММП-7 в плазме крови.

Далее мы проанализировали, каким образом концентрация ММП и ТИМП в плазме крови и опухоли влияет на выживаемость в зависимости от степени распространенности опухолевого процесса. Для этого все больные были разделены на три группы в зависимости от наличия лимфогенных и отдаленных метастазов. В группе без каких-либо метастазов достоверные различия выявлены только для ММП-7 плазмы крови: общая выживаемость больных с низким плазматическим содержанием ММП-7 составила 100%, а пациентов с высоким уровнем маркера - всего 60%. В группе пациентов с лимфогенными, но без отдаленных метастазов ни один из маркеров не влиял на выживаемость пациентов.

В то же время выживаемость больных с диссеминированным процессом (М+) зависела не только от уровня ММП-7 в плазме крови, но и от содержания этой протеиназы в опухоли. В группе с низкой концентрацией ММП-7 в плазме крови 3-летняя выживаемость составила 65%, а в группе с высокой концентрацией - только 12,0%) (медиана - 8 месяцев). В подгруппе с низким содержанием ММП-7 в опухоли медиана выживаемости составила 20 мес (5-летняя выживаемость - 47%), а при более высоком уровне ММП-7 - медиана 9,2 месяцев, 5 из 6 пациентов этой подгруппы умерли в первые 2 года после циторедуктивной операции.

У больных диссеминированным КРР проявилось и прогностическое значение содержания ТИМП-1 в плазме крови: при низком уровне маркера медиана выживаемости не была достигнута, а при высоком она составила всего 9 мес, выживаемость - 57% и 11% соответственно.

Для оценки независимости выявленного прогностического значения изученных маркеров мы провели многофакторный анализ, включавший стадию заболевания, локализацию, гистологическое строение (степень дифференцировки), глубину инвазии опухоли, наличие лимфо-генных или отдаленных метастазов, а также все исследованные биохимические показатели. Высокие уровни ММП-7 и ТИМП-1 в плазме крови оказались независимыми факторами неблагоприятного прогноза КРР, наряду с наличием отдаленных метастазов.

Таким образом, анализ взаимосвязи содержания нескольких ключевых ММП и их тканевых ингибиторов в опухолях и плазме крови больных РТК с основными клинико-морфологическими особенностями заболевания и 5-летней выживаемостью пациентов показал, что наиболее перспективным прогностическим, а, возможно, и диагностическим маркером этого заболевания является ММП-7 (матрилизин) - металло-протеиназа, которая помимо разрушения компонентов внеклеточного матрикса, участвует также в процессинге некоторых биологически важных молекул клеточной поверхности. Это заключение согласуется с данными опубликованных в литературе экспериментальных и клинических исследований [68]. В то же время, не удалось подтвердить диагностическую значимость ТИМП-1, обнаруженную некоторыми исследователями [162], хотя и этот маркер оказался независимым фактором прогноза рака толстой кишки.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Короткова, Екатерина Андреевна, 2012 год

Литература

1. Ганусевич, И. И. Роль матриксных металлопротеиназ (ММП) при злокачественных новообразованиях. 1. характеристика ММП регуляция их активности, прогностическое значение / И. И. Ганусевич // Онкология-2010.- № 1. - С. 10-16.

2. Клиническая роль системы активации плазминогена в опухолях человека. / Е. С. Герштейн, Н. Е. Кушлинский, Ш. Ж. Талаева, М. Н. Сандыбаев // Молекулярная медицина - 2007.- № 1. - С.4-8.

3. Давыдов, М. И. Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ (состояние онкологической помощи, заболеваемость и смертность) / М. И. Давыдов, Е. М. Аксель // Вестник РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН.- 2009.-Т. 20, № . (прил. 1) - С.52-122.

4. Прогностическая значимость экспрессии матриксных металлопротеиназ в аденокарциномах толстой кишки и их метастазах / В. В. Делекторская, А. Г. Перевощиков, Д. А. Головков,

H. Е. Кушлинский // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 2007.-Т. 143, № 4. - С.434-438.

5. Кныш, В. И. Пути улучшения результатов лечения колоректального рака/ В. И. Кныш, В. Л. Черкес, В. С. Ананьев // Российский онкологический журнал - 2001.- № 5. - С.25.

6. Кондакова, И. В. Матриксные металлопротеазы-новые опухолевые прогностические маркеры / И. В. Кондакова, Е. В. Клишко, Е. В. Малахова // Российский Биотерапевтический журнал.- 2008.-Т. 7, №

I. - С.58-62.

7. Пророков, В. В. Современные принципы диагностики и скрининга рака прямой кишки / В. В. Пророков, А. Г. Малихов, В. И. Кныш // Практическая онкология - 2002.-Т. 3, № 2. - С.77.

8. Соловьева, Н. И. Матриксные металлопротеиназы: регуляция активности и роль в процессе онкогенеза / Н. И. Соловьева // Вопр. мед. химии.- 2000.- № 5. - С.30-31.

9. Host CD 147 blockade by small interfering RNAs suppresses growth of human colon cancer xenografts / D. Abraham, K. Zins, M. Sioud et al. // Front Biosci.- 2008.-Vol. 13, №2. P.5571-5579.

10. Retinoic acids reduce matrilysin (matrix metalloproteinase 7) and inhibit tumor cell invasion in human colon cancer / Y. Adachi, F. Itoh, P. Yamamoto et al. // Tumour Biol.- 2001.-Vol. 22, № 4. - P.247-253.

11. Expression of matrix metalloproteinase 8 (MMP-8) and tyrosinase-related protein-1 (TYRP-1) correlates with the absence of metastasis in an isogenic human breast cancer model / D. Agarwal, S. Goodison, B. Nicholson, et al. // Differentiation.- 2003.-Vol. 71, № 2. - P.l 14-125.

12. Agren, M. S. Matrix metalloproteinases and colon anastomosis repair: a new indication for pharmacological inhibition? / M. S. Agren, L. N. Jorgensen, J. M. Delaisse // Mini Rev Med Chem - 2004.-Vol. 4, № 7. -P.769-778.

13. Molecular pathways regulating EGF-induced epithelio-mesenchymal transition in human ovarian surface epithelium / N. Ahmed, S. Maines-Bandiera, M. A. Quinn et al. // Am J Physiol Cell Physiol.- 2006.-Vol. 290, № 6. - P.C1532-1542.

14. Matrix metalloproteinase-21 is expressed epithelially during development and in cancer and is up-regulated by transforming growth factor-beta 1 in keratinocytes / K. Ahokas, J. Lohi, S. A. Illman et al. // Lab Invest-2003.-Vol. 83, № 12. - P.1887-1899.

15. Ala-aho, R. Collagenases in cancer / R. Ala-aho, V. M. Kahari // Biochimie.- 2005.-Vol. 87, № 3-4. - P.273-286.

16. Allgayer, H. Molecular regulation of an invasion-related molecule-options for tumour staging and clinical strategies / H. Allgayer // Eur J Cancer.- 2006.-Vol. 42, № 7. - P.811-819.

17. Conversion of highly malignant colon cancer from an aggressive to a controlled disease by oral administration of a metalloproteinase inhibitor / Z. An, X. Wang, N. Willmott et al. // Clin Exp Metastasis - 1997.-Vol. 15, № 2. - P.184-195.

18. Matrix metalloproteinase inhibition prevents colon cancer peritoneal carcinomatosis development and prolongs survival in rats / T. Aparicio, S. Kermorgant, V. Dessirier et al. // Carcinogenesis - 1999.-Vol. 20, № 8. - P.1445-1451.

19. Prognostic values of matrix metalloproteinase family expression in human colorectal carcinoma/ T. Asano, M. Tada,, S. Cheng et al. // J Surg Res-2008.-Vol. 146, № 1. - P.32-42.

20. Baker, A. H. Metalloproteinase inhibitors: biological actions and therapeutic opportunities / A. H. Baker, D. R. Edwards, G. Murphy // J Cell Sci.- 2002,-Vol. 115, № 19.. P.3719-3727.

21. Baker, E. A. Profiles of matrix metalloproteinases and their tissue inhibitors in intraperitoneal drainage fluid: relationship to wound healing / E. A. Baker, D. J. Leaper // Wound Repair Regen.- 2003.-Vol. 11, № 4. -P.268-274.

22. Baker, E. A. The plasminogen activator and matrix metalloproteinase systems in colorectal cancer: relationship to tumour pathology / E. A. Baker, D. J. Leaper // Eur J Cancer.- 2003.-Vol. 39, № 7. - P.981-988.

23. Relevance of biologic markers in colorectal carcinoma: a comparative study of a broad panel / C. Barozzi, M. Ravaioli, A. D'Errico et al. // Cancer.- 2002.-Vol. 94, № 3. - P.647-657.

24. Bartsch, J. E. Matrix metalloproteinase expression in breast cancer / J. E. Bartsch, E. D. Staren, H. E. Appert,. // J Surg Res. - 2003.-Vol. 110, № 2. - P.383-392.

25. Stromal expression of invasion-promoting, matrix-degrading proteases MMP-1 and -9 and the Ets 1 transcription factor in HNPCC carcinomas and sporadic colorectal cancers / P. Behrens, M. Mathiak, E. Mangold et al.//Int J Cancer.-2003.-Vol. 107, № 2. - P. 183-188.

26. Rapid increase in serum levels of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) postoperatively is associated with a decrease in the amount of intracellular MMP-9 / A. Belizon, I. Kirman, M. Karten et al. // Surg Innov - 2005.-Vol. 12, № 4. - P.333-337.

27. Beral, V. UK cancer survival statistics / V. Beral, R. Peto // BMJ. - 2010.-Vol. 341, -P.4112.

28. Bird, N. C. Biology of colorectal liver metastases: A review / N. C. Bird, D. Mangnall, A. W. Majeed // J Surg Oncol.- 2006.-Vol. 94, № 1. - P.68-80.

29. Restricted expression of membrane type 1-matrix metalloproteinase by myofibroblasts adjacent to human breast cancer cells / C. Bisson, S. Blacher, M. Polette et al. // Int J Cancer.- 2003.-Vol. 105, № 1. - P.7-13.

30. Bjorklund, M. Peptide inhibition of catalytic and noncatalytic activities of matrix metalloproteinase-9 blocks tumor cell migration and invasion / M. Bjorklund, P. Heikkila, E. Koivunen // J Biol Chem.- 2004.-Vol. 279, № 28. - P.29589-29597.

31. Prognostic significance of matrix metalloproteinase expression in colorectal carcinomas / B. Bodey, B. Bodey, S. E. Siegel, H. E. Kaiser // In Vivo.- 2000.-Vol. 14, № 5. - P.659-666.

32. Bonomi, P. Matrix metalloproteinases and matrix metalloproteinase inhibitors in lung cancer / P. Bonomi // Semin Oncol - 2002.-Vol. 29, № 1. Suppl 4 - P.78-86.

33. beta-catenin regulates the expression of the matrix metalloproteinase-7 in human colorectal cancer / T. Brabletz, A. Jung, S. Dag et al. // Am J Pathol.- 1999.-Vol. 155, № 4. - P.1033-1038.

34. Treatment of colorectal liver metastases by adenoviral transfer of tissue inhibitor of metalloproteinases-2 into the liver tissue / K. Brand, A. H. Baker, A. Perez-Cantoet et al // Cancer Res.- 2000.-Vol. 60, № 20. -P.5723-5730.

35. Brew, K. Tissue inhibitors of metalloproteinases: evolution, structure and function / K. Brew, D. Dinakarpandian, H. Nagase // Biochim Biophys Acta.-2000.-Vol. 1477, № 1-2. - P.267-283.

36. Brinckerhoff, C. E. Interstitial collagenases as markers of tumor progression / C. E. Brinckerhoff, J. L. Rutter, U. Benbow // Clin Cancer Res.-2000.-Vol. 6, № 12. - P.4823-4830.

37. Increased matrix metalloproteinase 2 concentration and transcript expression in advanced colorectal carcinomas / C. C. Chan, M. Menges, H. D. Orzechowski et al. // Int J Colorectal Dis.- 2001.-Vol. 16, № 3. -P.133-140.

38. The matrix metalloproteinase-7 regulates the extracellular shedding of syndecan-2 from colon cancer cells / S. Choi, J. Y. Kim, J. H. Park et al. // Biochem Biophys Res Commun.- 2012.-Vol. 417, № 4. - P. 1260-1264.

39. Collins, H. M. Spectrum of matrix metalloproteinase expression in primary and metastatic colon cancer: relationship to the tissue inhibitors of metalloproteinases and membrane type-1-matrix metalloproteinase / H. M. Collins, T. M. Morris, S. A. Watson // Br J Cancer.- 2001.-Vol. 84, № 12. - P.1664-1670.

40. Matrix metalloproteinase/tissue inhibitors of matrix metalloproteinase phenotype identifies poor prognosis colorectal cancers / S. Curran, S. R. Dundas, J. Buxton et al. // Clin Cancer Res.- 2004.-Vol. 10, № 24. -P.8229-8234.

41. Circulating matrix metalloproteinase-9 is transiently elevated after colorectal surgery /1. H. de Hingh, E. T. Waas, R. M. Lomme et al. // Int J Colorectal Dis.- 2004.-Vol. 19, № 5. - P.446-450.

42. Deryugina, E. I. Matrix metalloproteinases and tumor metastasis / E. I. Deryugina, J. P. Quigley // Cancer Metastasis Rev - 2006.-Vol. 25, № 1. -P.9-34.

43. Deryugina, E. I. Pleiotropic roles of matrix metalloproteinases in tumor angiogenesis: contrasting, overlapping and compensatory functions / E. I. Deryugina, J. P. Quigley // Biochim Biophys Acta.- 2010.-Vol. 1803, № 1. - P.103-120.

44. [The significance of beta-catenin and matrix metalloproteinase-7 expression in colorectal adenoma and carcinoma] / G. J. Duan, X. C. Yan, X. W. Bian et al. // Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi.- 2004.-Vol. 33, № 6. -P.518-522.

45. Duffy, M. J. Proteases as prognostic markers in cancer / M. J. Duffy // Clin Cancer Res.- 1996.-Vol. 2, № 4. - P.613-618.

46. Duffy, M. J. Cancer invasion and metastasis: changing views / M. J. Duffy, P. M. McGowan, W. M. Gallagher // J Pathol.- 2008.-Vol. 214, № 3. - P.283-293.

47. Egeblad, M. New functions for the matrix metalloproteinases in cancer progression / M. Egeblad, Z. Werb // Nat Rev Cancer. - 2002.-Vol. 2, № 3. -P.161-174.

48. Increased gelatinase A (MMP-2) and cathepsin B activity in invasive tumor regions of human colon cancer samples / M. R. Emmert-Buck, M. J. Roth, Z. Zhuanget et al. // Am J Pathol.- 1994.-Vol. 145, № 6. -P.1285-1290.

49. Macrophage-specific overexpression of human matrix metalloproteinase-12 in transgenic rabbits / J. Fan, X. Wang, L.Wu et al. // Transgenic Res-2004.-Vol. 13, № 3. - P.261-269.

50. Inhibition of human MDA-MB-231 breast cancer cell invasion by matrix metalloproteinase 3 involves degradation of plasminogen / A. R. Farina, A. Tacconelli, L. Cappabianca et al. // Eur J Biochem - 2002.-Vol. 269, № 18. - P.4476-4483.

51. The distribution of matrix metalloproteinases and tissue inhibitor of metalloproteinases in colorectal cancer / N. C. Gallegos, C. Smales, F. J. Savage et al. // Surg Oncol.- 1995.-Vol. 4, № 1. - P.21-29.

52. Garbett, E. A. Proteolysis in colorectal cancer / E. A. Garbett, M. W. Reed, N. J. Brown // Mol Pathol. - 1999.-Vol. 52, № 3. - P.140-145.

53. SPARC/osteonectin induces matrix metalloproteinase 2 activation in human breast cancer cell lines / C. Gilles, J. A. Bassuk, H. Pulyaeva et al. // Cancer Res.- 1998.-Vol. 58, № 23. - P.5529-5536.

54. Inhibition of tumor cell invasiveness by chemically modified tetracyclines / Y.Gu, H. M. Lee, E. J. Roemeret et al. // Curr Med Chem.- 2001.-Vol. 8, № 3. - P.261-270.

55. Guo, H. EMMPRIN (CD 147), an inducer of matrix metalloproteinase synthesis, also binds interstitial collagenase to the tumor cell surface / H. Guo, R. Li, S. Zucker, B. P. Toole // Cancer Res.- 2000.-Vol. 60, № 4. -P.888-891.

56. Impact of elective resection on plasma TIMP-1 levels in patients with colon cancer / J. H. Hammer, L. Basse, M. N. Svendsen et al. // Colorectal Dis.- 2006.-Vol. 8, № 3. - P.168-172.

57. Expression of most matrix metalloproteinase family members in breast cancer represents a tumor-induced host response / K. J. Heppner, L. M. Matrisian, R. A. Jensen, W. H. Rodgers // Am J Pathol - 1996.-Vol. 149, № 1. -P.273-282.

58. Proteases in gastrointestinal neoplastic diseases / L. Herszenyi, M. Plebani, P. Carraro et al. // Clin Chim Acta.- 2000.-Vol. 291, № 2. -P.171-187.

59. Matrix metalloproteinase-9 expression in the normal mucosa-adenoma-dysplasia-adenocarcinoma sequence of the colon / L. Herszenyi, F. Sipos, O. Galamb et al. // Pathol Oncol Res. - 2008.-Vol. 14, № 1. - P.31-37.

60. Role of matrix metalloproteinases in colorectal carcinogenesis / M. J. Heslin, J. Yan, M. R. Johnson et al. // Ann Surg. - 2001.-Vol. 233, № 6.-P.786-792.

61. Increased expression of tissue inhibitor of metalloproteinases type 1 (TIMP-1) in a more tumourigenic colon cancer cell line / R. E. Hewitt, K. E. Brown, M. Corcoran, W. G. Stetler-Stevenson // J Pathol.- 2000.-Vol. 192, № 4. - P.455-459.

62. Hidalgo, M. Development of matrix metalloproteinase inhibitors in cancer therapy / M. Hidalgo, S. G. Eckhardt // J Natl Cancer Inst. - 2001.-Vol. 93, № 3. - P.178-193.

63. Stromal cells as the major source for matrix metalloproteinase-2 in cutaneous melanoma / U. B.Hofmann, A. A. Eggert, K. Blasset et al. // Arch Dermatol Res.- 2005.- P. 1-7.

64. Matrix metalloproteinases in human melanoma / U. B. Hofmann, J. R. Westphal, G. N. Van Muijen, D. J. Ruiter // J Invest Dermatol - 2000.-Vol. 115, № 3. - P.337-344.

65. Localization of tissue inhibitor of metalloproteinases 1 (TIMP-1) in human colorectal adenoma and adenocarcinoma / M. N. Holten-Andersen, U. Hansen, N. Brunner et al. // Int J Cancer. - 2005.-Vol. 113, № 2. -P. 198-206.

66. High preoperative plasma tissue inhibitor of metalloproteinase-1 levels are associated with short survival of patients with colorectal cancer / M. N. Holten-Andersen, R. W. Stephens, H. J. Nielsen et al. // Clin Cancer Res.- 2000.-Vol. 6, № 11. - P.4292-4299.

-12867. Matrix metalloproteinase-2 and -7 expression in colorectal cancer / S. W. Hong, Y. K. Kang, B. Lee et al. // J Korean Soc Coloproctol - 2011.-Vol. 27, № 3. - P.133-139.

68. Detection of regional lymph node metastases in colon cancer by using RT-PCR for matrix metalloproteinase 7, matrilysin / Y. Ichikawa, T. Ishikawa, N. Momiyama et al. // Clin Exp Metastasis.- 1998.-Vol. 16, № 1. - P.3-8.

69. [Extracellular matrix degradation enzymes: important factors in liver metastasis of colorectal cancer and good targets for anticancer metastatic therapy] / Y. Ichikawa, T. Ishikawa, K. Tanaka et al. // Nihon Geka Gakkai Zasshi. - 2001.-Vol. 102, № 5. - P.376-380.

70. MMP-9 is differentially expressed in primary human colorectal adenocarcinomas and their metastases / M. Illemann, N. Bird, A. Majeed et al. // Mol Cancer Res. - 2006.-Vol. 4, № 5. - P.293-302.

71. Significance of coexpression of urokinase-type plasminogen activator, and matrix metalloproteinase 3 (stromelysin) and 9 (gelatinase B) in colorectal carcinoma / K. Inuzuka, Y. Ogata, H. Nagase, K. Shirouzu // J Surg Res. - 2000.-Vol. 93, № 2. - P.211-218.

72. Cancer statistics, 2009 / A. Jemal, R. Siegel, E. Ward et al. // CA Cancer J Clin. - 2009.-Vol. 59, № 4. - P.225-249.

73. Distribution of gelatinase B (MMP-9) and type IV collagen in colorectal carcinoma / M. Jeziorska, N. Y. Haboubi, P. F. Schofield et al. // Int J Colorectal Dis. - 1994.-Vol. 9, № 3. - P. 141-148.

74. Expression of collagenase-3 (MMP-13) and collagenase-1 (MMP-1) by transformed keratinocytes is dependent on the activity of p38 mitogen-activated protein kinase / N. Johansson, R. Ala-aho, V. Uitto et al. // J Cell Sci.- 2000.-Vol. 113, №2. - P.227-235.

75. Collagenase-3 (MMP-13) is expressed by tumor cells in invasive vulvar squamous cell carcinomas / N. Johansson, M. Vaalamo, S. Grenman et al. // Am J Pathol.- 1999.-Vol. 154, № 2. - P.469-480.

76. Role of tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs) in colorectal carcinoma / Y. E. Joo, K. S. Seo, J. Kimet et al. // J Korean Med Sci-1999.-Vol. 14, № 4. - P.417-423.

77. Jumper, C. Determination of the serum matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) and tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 (TIMP-1) in patients with either advanced small-cell lung cancer or non-small-cell lung cancer prior to treatment / C. Jumper, E. Cobos, C. Lox // Respir Med.- 2004.-Vol. 98, № 2. - P.173-177.

78. [The expression of matrix metalloproteinases (MMPs), tissue inhibitor of metalloproteinases (TIMPs) and angiogenesis in relation to the depth of tumor invasion and lymph node metastasis in submucosally invasive colorectal carcinoma] / S. A. Jung, S. K Yang, J. S Kim et al. // Korean J Gastroenterol. - 2005.-Vol. 45, № 6. - P.401-408.

79. Interleukin-1 beta promotes matrix metalloproteinase expression and cell proliferation in calcific aortic valve stenosis / J. J. Kaden, C. E Dempfle, R. Grobholz et al. // Atherosclerosis.- 2003.-Vol. 170, № 2. - P.205-211.

80. Expression of collagenase-3 (MMP-13) by tumor cells in squamous cell carcinomas of the head and neck / V. M. Kahari, N. Johansson, R. Grenman et al. // Adv Exp Med Biol.- 1998.-Vol. 451, - P.63-68.

81. Increased type IV collagen-degrading activity in metastases originating from primary tumors of the human colon / G. Karakiulakis, C. Papanikolaou, S. M. Jankovic et al. // Invasion Metastasis - 1997.-Vol. 17, № 3. - P.158-168.

82. Immunohistochemical detection of membrane-type-1-matrix metalloproteinase in colorectal carcinoma / R. Kikuchi, T. Noguchi, S. Takeno et al. // Br J Cancer. - 2000.-Vol. 83, № 2. - P.215-218.

- 13083. Kim, T. S. Correlation between expression of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2), and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) and angiogenesis in colorectal adenocarcinoma / T. S. Kim, Y. B. Kim // J Korean Med Sci. -1999.-Vol. 14, № 3. - P.263-270.

84. Matrilysin (MMP-7) induces homotypic adhesion of human colon cancer cells and enhances their metastatic potential in nude mouse model / M. Kioi, K. Yamamoto, S. Higashi et al. // Oncogene.- 2003.-Vol. 22, № 54. - P.8662-8670.

85. Role of matrix metalloproteinase-7 in colorectal adenomas / H. Kirimlioglu, V. Kirimlioglu, S. Yilmaz et al. // Dig Dis Sci. - 2006,-Vol. 51, № 11.- P.2068-2072.

86. Altered plasma matrix metalloproteinase-9/tissue metalloproteinase-1 concentration during the early postoperative period in patients with colorectal cancer / I. Kirman, S. Jain, V. Cekic et al. // Surg Endosc. -2006.-Vol. 20, № 3. - P.482-486.

87. Cellular mechanisms for human procollagenase-3 (MMP-13) activation. Evidence that MT1-MMP (MMP-14) and gelatinase a (MMP-2) are able to generate active enzyme / V. Knauper, H. Will, C. Lopez-Otin et al. // J Biol Chem. - 1996.-Vol. 271, № 29. - P.17124-17131.

88. Kumar, S. Protection from tumor necrosis factor-mediated cytolysis by overexpression of plasminogen activator inhibitor type-2 / S. Kumar, C. Baglioni //J Biol Chem. - 1991.-Vol. 266, № 31. - P.20960-20964.

89. MMP-2 geno-phenotype is prognostic for colorectal cancer survival, whereas MMP-9 is not / A. M. Langers, C. F. Sier, L. J. Hawinkels et al. // Br J Cancer. - 2008.-Vol. 98, № 11. - P. 1820-1823.

90. Quantification of tissue inhibitor of metalloproteinases 2 in plasma from healthy donors and cancer patients / M. B. Larsen, R. W. Stephens, N. Brunner et al. // Scand J Immunol. - 2005.-Vol. 61, № 5.. P.449.46O.

91. Leeman, M. F. New insights into the roles of matrix metalloproteinases in colorectal cancer development and progression / M. F. Leeman, S. Curran, G. I. Murray // J Pathol. - 2003.-Vol. 201, № 4. - P.528-534.

92. Leeman, M. F. Matrix metalloproteinase 13 activity is associated with poor prognosis in colorectal cancer / M. F. Leeman, J. A. McKay, G. I. Murray // J Clin Pathol.- 2002.-Vol. 55, № io. - P.758-762.

93. Increased expression of the Mr 72,000 type IV collagenase in human colonic adenocarcinoma / A. T Levy, V. Cioce, M. E. Sobel et al. // Cancer Res.- 1991.-Vol. 51, № 1. - P.439-444.

94. Macrophage migration inhibitory factor enhances neoplastic cell invasion by inducing the expression of matrix metalloproteinase 9 and interleukin-8 in nasopharyngeal carcinoma cell lines / Z. Li, Y. Ren, Q. C. Wu et al. // Chin Med J (Engl).-2004.-Vol. 117, № 1. - P. 107-114.

95. Matrix metalloprotease 2 (MMP-2) and matrix metalloprotease 9 (MMP-9) type IV collagenases in colorectal cancer / N. B. Liabakk, I. Talbot, R. A. Smith et al. // Cancer Res.- 1996.-Vol. 56, № 1. - P. 190-196.

96. Metastatic potential correlates with enzymatic degradation of basement membrane collagen / L. A. Liotta, K. Tryggvason, S. Garbisa et al. // Nature.- I980.-Vol. 284, № 5751. - P.67-68.

97. Littlepage, L. E. Coevolution of cancer and stromal cellular responses / L. E. Littlepage, M. Egeblad, Z. Werb // Cancer Cell.- 2005.-Vol. 7, № 6. -P.499-500.

98. Controlling tumor angiogenesis and metastasis of C26 murine colon adenocarcinoma by a new matrix metalloproteinase inhibitor, KB-R7785, in two tumor models / L. Lozonschi, M. Sunamura, M. Kobari et al. // Cancer Res.- 1999.-Vol. 59, № 6. - P. 1252-1258.

99. [Expression of matrix metalloproteinase 1 in tissue of colon carcinoma and its clinical prognostic significance] / Z. H. Lu, Y. J. Fang, X. J. Wu et al. // Zhonghua Yi Xue Za Zhi. - 2011.-Vol. 91, № 41. - P.2895-2898.

100. Tumor epithelial cell matrix metalloproteinase 9 is a target for antimetastatic therapy in colorectal cancer / W. J. Lubbe, Z. Y. Zhou, W. Fu et al. // Clin Cancer Res.- 2006.-Vol. 12, № 6. - P. 1876-1882.

101. Malemud, C. J. Matrix metalloproteinases (MMPs) in health and disease: an overview / C. J. Malemud // Front Biosci - 2006.-Vol. 11,- P. 16961701.

102. Increased membrane type 1 matrix metalloproteinase expression from adenoma to colon cancer: a possible mechanism of neoplastic progression / S. Malhotra, E. Newman, D. Eisenberg et al. // Dis Colon Rectum-2002.-Vol. 45, № 4. - P.537-543.

103. Mannello, F. Tissue inhibitors of metalloproteinases and programmed cell death: conundrums, controversies and potential implications / F. Mannello, G. Gazzanelli // Apoptosis. - 2001.-Vol. 6, № 6. - P.479-482.

104. Coexpression of matrilysin and laminin-5 gamma2 chain may contribute to tumor cell migration in colorectal carcinomas / T. Masaki, M. Sugiyama, H. Matsuoka et al. // Dig Dis Sci. - 2003.-Vol. 48, № 7. -P.1262-1267.

105. Masuda, H. Host expression of matrix metalloproteinase-2 and tissue inhibitor of metalloproteinase-2 in normal colon tissue affects metastatic potential of colorectal cancer / H. Masuda, H. Aoki // Dis Colon Rectum.- 1999.-Vol. 42, № 3. - P.393-397.

106. The role of the matrix metalloproteinase stromelysin in the progression of squamous cell carcinomas / L. M. Matrisian, S. McDonnell, D. MillerB et al. // Am J Med Sci.- 1991.-Vol. 302, № 3. - P. 157-162.

107. Inhibition of invasion and lymph node metastasis of gastrointestinal cancer cells by R-94138, a matrix metalloproteinase inhibitor / T. Matsuoka, M. Yashiro, T. Sawada et al. // Anticancer Res - 2000.-Vol. 20, №6B.-P.4331-4338.

108. Matsuyama, Y. Comparison of matrix metalloproteinase expression between primary tumors with or without liver metastasis in pancreatic and colorectal carcinomas / Y. Matsuyama, S. Takao, T. Aikou // J Surg Oncol.- 2002.-Vol. 80, № 2. - P. 105-110.

109. Expression and localization of the matrix metalloproteinase pump-1 (MMP-7) in human gastric and colon carcinomas / S. McDonnell, M. Navre, Jr. R. J. Coffey, L. M. Matrisian // Mol Carcinog. - 1991.-Vol. 4, № 6. - P.527-533.

110. Coexpression of matrix metalloproteinase-7 (MMP-7) and epidermal growth factor (EGF) receptor in colorectal cancer: an EGF receptor tyrosine kinase inhibitor is effective against MMP-7-expressing cancer cells / K. Mimori, K. Yamashita, M. Ohta et al. // Clin Cancer Res. -

2004.-Vol. 10, № 24. - P.8243-8249.

111. Mook, O. R. The role of gelatinases in colorectal cancer progression and metastasis / O. R. Mook, W. M. Frederiks, C. J. Van Noorden // Biochim Biophys Acta. - 2004.-Vol. 1705, № 2. - P.69-89.

112. Impairment of stromelysin-1 transcriptional activity by promoter mutations in high microsatellite instability colorectal tumors / A. Moran, P. Iniesta, C. de Juan et al. // Cancer Res. - 2005.-Vol. 65, № 9. - P.3811-3814.

113. Clinical relevance of MMP-9, MMP-2, TIMP-1 and TIMP-2 in colorectal cancer / A. Moran, P. Iniesta, C. Garcia-Aranda et al. // Oncol Rep-

2005.-Vol. 13, № 1.-P.l 15-120.

114. Overexpression of matrix metalloproteinase-7 mRNA in human colon carcinomas / M. Mori, G. F. Barnard, K. Mimori et al. // Cancer. - 1995.-Vol. 75, № 6 Suppl. - P.1516-1519.

115. The expression of MMP-2 and TIMP-2 in patients with primary colorectal adenocarcinoma: correlation with liver metastasis / M. Mukai, S.

Sadahiro, N. Tokunaga et al. // Oncol Rep. - 1999.-Vol. 6, № 5. . p.969-973.

116. Murphy, G. Progress in matrix metalloproteinase research / G. Murphy, H. Nagase // Mol Aspects Med. - 2008.-Vol. 29, № 5. - P.290-308.

117. Matrix metalloproteinase-1 is associated with poor prognosis in colorectal cancer / G. I. Murray, M. E. Duncan, P. O'Neil et al. // Nat Med. - 1996.-Vol. 2, № 4. - P.461-462.

118. Prognostic and predictive potential molecular biomarkers in colon cancer / A. Nastase, L. Paslaru, A. M. Niculescu et al. // Chirurgia (Bucur). -2011.-Vol. 106, № 2. - P.177-185.

119. Matrix metalloproteinases: biologic activity and clinical implications / A. R. Nelson, B. Fingleton, M. L. Rothenberg, L. M. Matrisian // J Clin Oncol. - 2000.-Vol. 18, № 5.. P. 1135-1149.

120. Combined analysis of studies of the effects of the matrix metalloproteinase inhibitor marimastat on serum tumor markers in advanced cancer: selection of a biologically active and tolerable dose for longer-term studies / J. Nemunaitis, C. Poole, J. Primroseet et al. // Clin Cancer Res.- 1998.-Vol. 4, № 5. - P.l 101-1109.

121. Newell, K. J. Matrilysin (matrix metalloproteinase-7) expression in ulcerative colitis-related tumorigenesis / K. J. Newell, L. M. Matrisian, D. K Driman // Mol Carcinog.- 2002.-Vol. 34, № 2. - P.59-63.

122. Prevention of liver metastasis of human colon cancer by selective matrix metalloproteinase inhibitor MMI-166 / K. Oba, H. Konno, T. Tanaka et al. // Cancer Lett.- 2002.-Vol. 175, № 1. - P.45-51.

123. Effect of combination therapy with matrix metalloproteinase inhibitor MMI-166 and mitomycin C on the growth and liver metastasis of human colon cancer / M. Ohta, H. Konno, T. Tanaka et al. // Jpn J Cancer Res-2001,-Vol. 92, № 6. - P.688-695.

124. Dual over-expression pattern of membrane-type metalloproteinase-1 in cancer and stromal cells in human gastrointestinal carcinoma revealed by in situ hybridization and immunoelectron microscopy / H. Ohtani, H. Motohashi, H. Sato et al. // Int J Cancer.- 1996.-Vol. 68, № 5. - P.565-570.

125. Ornstein, D. L. Balance between activation and inhibition of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) is altered in colorectal tumors compared to normal colonic epithelium / D. L. Ornstein, K. H. Cohn // Dig Dis Sci-2002.-Vol. 47, № 8. - P.1821-1830.

126. Owen, J. L. T cell-derived matrix metalloproteinase-9 in breast cancer: friend or foe? / J. L. Owen, V. Iragavarapu-Charyulu, D. M. Lopez // Breast Dis. - 2004.-Vol. 20, - P.145-153.

127. Suppression of angiogenesis and therapy of human colon cancer liver metastasis by systemic administration of interferon-alpha / S. Ozawa, H. Shinohara, H. O. Kanayama et al. // Neoplasia. - 2001.-Vol. 3, № 2. -P.154-164.

128. Expression of gelatinase-A (MMP-2) in human colon cancer and normal colon mucosa / S. Papadopoulou, A. Scorilas, N. Arnogianaki et al. // Tumour Biol.-2001.-Vol. 22, № 6. - P.383-389.

129. Gelatinase (MMP-2 and -9) expression in gastrointestinal malignancy / S. L. Parsons, S. A. Watson, H. M. Collins et al. // Br J Cancer. - 1998,-Vol. 78, № 11. -P.1495-1502.

130. Phase I/II trial of batimastat, a matrix metalloproteinase inhibitor, in patients with malignant ascites / S. L. Parsons, S. A. Watson, R. J. Steele // Eur J Surg Oncol. - 1997.-Vol. 23, № 6. - P.526-531.

131. An overview of collagenase-3 expression in malignant tumors and analysis of its potential value as a target in antitumor therapies / A. M. Pendas, J. A. Uria, M. G. Jimenez et al. // Clin Chim Acta - 2000,-Vol. 291, № 2. - P.137-155.

132. Neoplastic progression of human colorectal cancer is associated with overexpression of the stromelysin-3 and BM-40/SPARC genes / H. Porte, E. Chastre, S. Prevot et al. // Int J Cancer.- 1995.-Vol. 64, № 1. - P.70-75.

133. Stromal expression of 72 kda type IV collagenase (MMP-2) and TIMP-2 mRNAs in colorectal neoplasia / R. Poulsom, M. Pignatelli, W. G. StetlerStevenson et al. // Am J Pathol.- 1992.-Vol. 141, № 2. - P.389-396.

134. Ramnath, N. Matrix metalloproteinase inhibitors / N. Ramnath, P. J. Creaven, // Curr Oncol Rep. - 2004.-Vol. 6, № 2. - P.96-102.

135. Simultaneous determination of matrix metalloproteinase (MMP)-7, MMP-1, -3, and -13 gene expression by multiplex PCR in colorectal carcinomas / E. Roeb, M. Arndt, B. Jansen et al. // Int J Colorectal Dis.- 2004.-Vol. 19, № 6. - P.518-524.

136. Activity and cellular origin of gelatinases in patients with colon and rectal carcinoma differential activity of matrix metalloproteinase-9 / E. Roeb, C. G. Dietrich, R.Winograd et al. // Cancer.- 2001.-Vol. 92, № 10. - P.2680-2691.

137. Roeb, E. Matrix metalloproteinases and colorectal cancer/ E. Roeband S. Matern // Med Klin (Munich). - 2003.-Vol. 98, № 12. - P.763-770.

138. Prognostic significance of matrix metalloproteinase 2 and tissue inhibitor of metalloproteinase 2 expression in prostate cancer / J. S. Ross, P. Kaur, C. E. Sheehan et al. // Mod Pathol.- 2003.-Vol. 16, № 3. - P. 198-205.

139. Biological activity and clinical implications of the matrix metalloproteinases / M. Rydlova, Jr. L. Holubec, Jr. M. Ludvikova et al. // Anticancer Res. - 2008.-Vol. 28, № 2B. - P. 1389-1397.

140. Sato, H. Roles of membrane-type matrix metalloproteinase-1 in tumor invasion and metastasis / H. Sato, T. Takino, H. Miyamori // Cancer Sci. -2005.-Vol. 96, № 4. - P.212-217.

141. Membrane-type 1 matrix metalloproteinase and cell migration / M. Seiki, H. Mori, M. Kajita et al. // Biochem Soc Symp - 2003.-Vol., № 70. -P.253-262.

142. Broad antitumor and antiangiogenic activities of AG3340, a potent and selective MMP inhibitor undergoing advanced oncology clinical trials / D. R. Shalinsky, J. Brekken, H. Zou et al. // Ann N Y Acad Sci - 1999.-Vol. 878, P.236-270.

143. The differential effects of IL-1 and TNF-alpha on proinflammatory cytokine and matrix metalloproteinase expression in human chondrosarcoma cells / J. Shi, E. Schmitt-Talbot, D. A. DiMattia, R. G. Dullea // Inflamm Res.- 2004.-Vol. 53, № 8. - P.377-389.

144. Expression of matrix metalloproteinase-1 in human colorectal carcinoma / J. Shiozawa, M Ito, T. Nakayama et al. // Mod Pathol.- 2000.-Vol. 13, № 9. - P.925-933.

145. Membrane type-1 matrix metalloproteinase and TIMP-2 in tumor angiogenesis / N. E. Sounni, M. Janssen, J. M. Foidart, A. Noel // Matrix Biol.- 2003.-Vol. 22, № 1. - P.55-61.

146. MMP-1 is a prognostic marker for hematogenous metastasis of colorectal cancer / E. Sunami, N. Tsuno, T. Osada et al. // Oncologist. - 2000.-Vol. 5, № 2. - P.108-114.

147. Decreased synthesis of matrix metalloproteinase-7 and adhesion to the extracellular matrix proteins of human colon cancer cells treated with troglitazone / E. Sunami, N. H. Tsuno, J. Kitayama et al. // Surg Today .-2002.-Vol. 32, № 4. - P.343-350.

148. Identification of membrane-type matrix metalloproteinase-1 as a target of the beta-catenin/Tcf4 complex in human colorectal cancers / M. Takahashi, T. Tsunoda, M. Seiki et al. // Oncogene - 2002.-Vol. 21, № 38. - P.5861-5867.

149. Antitumor efficacy of hypothemycin, a new Ras-signaling inhibitor / H. Tanaka, K. Nishida, K. Sugita, T. Yoshioka // Jpn J Cancer Res - 1999.-Vol. 90, № 10. -P.l 139-1145.

150. Tien, Y. W. Intravasation-related metastatic factors in colorectal cancer / Y. W. Tien, Y. M. Jeng, R. H. Hu et al. // Tumour Biol.- 2004.-Vol. 25, № 1-2. - P.48-55.

151. Tomita, T. Matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases in colonic adenomas-adenocarcinomas / T. Tomita, K. Iwata // Dis Colon Rectum. - 1996.-Vol. 39, № 11. - P. 1255-1264.

152. van der Stappen, J. W. Correlation between collagenolytic activity and grade of histological differentiation in colorectal tumors / J. W. van der Stappen, T. Hendriks, T. Wobbes // Int J Cancer.- I990.-Vol. 45, № 6. -P.1071-1078.

153. Visse, R. Matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of metalloproteinases: structure, function, and biochemistry / R. Visse, H. Nagase // Circ Res. - 2003.-Vol. 92, № 8. - P.827-839.

154. Circulating gelatinases and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in colorectal cancer metastatic liver disease / E. T. Waas, T. Wobbes, T. Ruers et al. // Eur J Surg Oncol. - 2006.-Vol. 32, № 7.. p.756-763.

155. Wagenaar-Miller, R. A. Matrix metalloproteinases in colorectal cancer: is it worth talking about? / R. A. Wagenaar-Miller, L. Gorden, L. M. Matrisian // Cancer Metastasis Rev. - 2004.-Vol. 23, № 1-2. - P.l 19-135.

156. Therapeutic effect of the matrix metalloproteinase inhibitor, batimastat, in a human colorectal cancer ascites model / S. A. Watson, T. M. Morris, S. L. Parsons et al. // Br J Cancer. - 1996.-Vol. 74, № 9. - P.1354-1358.

157. Westermarck, J. Regulation of matrix metalloproteinase expression in tumor invasion / J. Westermarck, V. M. Kahari // Faseb J - 1999.-Vol. 13, № 8. - P.781-792.

158. Intestinal, tumorigenesis is suppressed in mice lacking the metalloproteinase matrilysin / C. L. Wilson, K. J. Heppner, P. A. Labosky et al. // Proc Natl Acad Sci U S A.- 1997.-Vol. 94, № 4. -P.1402-1407.

159. Mouse macrophage metalloelastase generates angiostatin from plasminogen and suppresses tumor angiogenesis in murine colon cancer / Z. Xu, H. Shi, Q. Li et al. // Oncol Rep. - 2008.-Vol. 20, № 1. - P.81-88.

160. Overexpression of extracellular matrix metalloproteinase inducer in multidrug resistant cancer cells / J. M. Yang, Z. Xu, H. Wu et al. // Mol Cancer Res.- 2003.-Vol. 1, № 6. - P.420-427.

161. Increased plasma levels of urokinase plasminogen activator and matrix metalloproteinase-9 in nonsmall cell lung cancer patients / S. F. Yang, Y. S. Hsieh, C. L. Lin et al. // Clin Chim Acta.- 2005.-Vol. 354, № 1-2. -P.91-99.

162. Impact of plasma tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 on long-term survival in patients with colorectal cancer / N. Yukawa, T. Yoshikawa, M. Akaike et al. // Oncology. - 2007.-Vol. 72, № 3-4. -P.205-208.

163. Prognostic impact of tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 in plasma of patients with colorectal cancer / N. Yukawa, T. Yoshikawa, M. Akaike et al. // Anticancer Res. - 2004.-Vol. 24, № 3b. - P.2101-2105.

164. Plasma concentration of tissue inhibitor of matrix metalloproteinase 1 in patients with colorectal carcinoma / N. Yukawa, T. Yoshikawa, M. Akaike et al. // Br J Surg. - 2001.-Vol. 88, № 12. - P. 1596-1601.

165. Zeng, Z. S. Unique activation of matrix metalloproteinase-9 within human liver metastasis from colorectal cancer / Z. S. Zeng, J. G. Guillem // Br J Cancer.- 1998.-Vol. 78, № 3. - P.349-353.

of matrix metalloproteinase-9 / Z. S. Zeng, Y. Huang, A. M. Cohen, J. G. Guillem//J Clin Oncol.- 1996.-Vol. 14, № 12. - P.3133-3140.

167. Matrix metalloproteinase-7 expression in colorectal cancer liver metastases: evidence for involvement of MMP-7 activation in human cancer metastases / Z. S. Zeng, W. P. Shu, A. M. Cohen, J. G. Guillem // Clin Cancer Res.- 2002.-Vol. 8, № 1. - P. 144-148.

168. Zucker, S. Critical appraisal of the use of matrix metalloproteinase inhibitors in cancer treatment / S. Zucker, J. Cao, W. T. Chen // Oncogene. - 2000.-Vol. 19, № 56. - P.6642-6650.

169. Zucker, S. Role of matrix metalloproteinases (MMPs) in colorectal cancer / S. Zucker, J. Vacirca // Cancer Metastasis Rev. - 2004.-Vol. 23, № 1-2. - P.101-117.

170. Plasma matrix metalloproteinases 7 and 9 in patients with metastatic breast cancer treated with marimastat or placebo: Eastern Cooperative Oncology Group trial E2196 / S. Zucker, M. Wang, J. A. Sparano et al. // Clin Breast Cancer. - 2006.-Vol. 6, № 6. - P.525-529.