Мембранная и растворимая формы дисахаридаз тонкой кишки в онтогенезе крыс: (Соотношение, свойства и гормональная регуляция) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.13, кандидат биологических наук Гордова, Людмила Анатольевна

• Гордова, Людмила Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Гордова, Людмила Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ.4

ГЛАВА 1. Обзор литературы.10

1.1. Характеристика основных типов пищеварения.10

1.2. Дисахаридазы тонкой кишки млекопитающих.12

1.2.1. Дисахаридазы тонкой кишки крысят.14

1.2.2. Распределение дисахаридазных активностей вдоль тонкой кишки млекопитающих.17

1.3. Факторы, регулирующие развитие ферментных систем.19

1.3.1. Пищевые факторы.21

1.3.2. Цитокинетические изменения.22

1.3.3. Гормональные факторы.23

1.4. Влияние гормонов на активность дисахаридаз тонкой кишки.25

1.4.1. Влияние глюкокортикоидов на активность дисахаридаз тонкой кишки.^.25

1.4.2. Влияние тироксина на активность дисахаридаз тонкой кишки.31

1.4.3. Совместное действие глюкокортикоидов и тироксина на активность дисахаридаз тонкой кишки.33

1.5. Мембранная и растворимая формы дисахаридаз тонкой кишки.35

ГЛАВА 2. Методы исследования.38

2.1. Экспериментальные животные.

2.2. Введение гормонов.

2.3. Получение гомогенатов слизистой оболочки тонкой кишки крыс.38

2.4. Получение мембранной и цитозольной фракций слизистой оболочки тонкой кишки крыс методом выделения везикул мембран щеточной каймы энтероцитов.39

2.5. Определение активности ферментов тонкой кишки крыс.41

2.5.1. Определение активности сахаразы.41

2.5.2. Определение активности мальтазы и лактазы.43

2.5.3.Определение активности лактазы в присутствии трибутирина.44

2.6. Определение содержания белка.45

2.7. Определение кинетических характеристик мальтазы.

2.8. Обработка результатов экспериментов.

2.9. Степень очистки ферментных препаратов.

ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований.48

3.1. Активность дисахаридаз тонкой кишки интактных крысят

10-, 20-, 30-дневного возраста и взрослых крыс.48

3.1.1. Активность дисахаридаз в гомогенатах слизистой оболочки тощей и подвздошной кишки крыс.48

3.1.2. Активность дисахаридаз в мембранной и цитозольной цитозольной фракциях слизистой оболочки тощей и подвздошной кишки у крыс разного возраста.51

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Мембранная и растворимая формы дисахаридаз тонкой кишки в онтогенезе крыс: (Соотношение, свойства и гормональная регуляция)»

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Постнатальное развитие многих представителей млекопитающих сопровождается существенной перестройкой ферментного спектра тонкой киптки. Эти изменения связаны с необходимостью ассимиляции новых компонентов пищи при переходе от молочного питания к дефинитивному. Они особенно характерны для незрелорождающихся млекопитающих, к которым относятся и крысы. Для этих животных четко дифференцированы периоды питания - молочный, смешанный, дефинитивный. Периоду молочного питания свойственен определенный ферментный спектр и особое распределение ферментов вдоль тонкой кишки. Характерной особенностью является наличие в слизистой оболочке тонкой кишки незрелорождающихся млекопитающих высокой активности лактазы. Вместе с тем тонкая кишка этих животных лишена или содержит незначительные количества карбогидраз, расщепляющих мальтозу, сахарозу и другие дефинитивные поли-, олиго- и дисахариды в отличие от кишки взрослых. При переходе от молочного питания к дефинитивному происходят изменения ферментного спектра кишечной слизистой оболочки тонкой кишки. Наблюдается индукция синтеза одних ферментов (сахаразы, мальтазы), участвующих в переваривании дефинитивной пищи, и репрессия других, например, лактазы, расщепляющей молочный сахар. Кроме того, происходят изменения градиента распределения ферментативной активности вдоль тонкой кишки (обзоры: Koldovsky, 1969; Уголев, 1972, 1991; Henning, 1985, 1987; Kretchmer, 1985; Buddington, 1994; Тимофеева, 1995; Lebenthal, Lebenthal, 1999 и др.). Изменение активности кишечных дисахаридаз в процессе онтогенеза крыс имеет физиологическое значение, так как позволяет переваривать диету, богатую углеводами. Однако в настоящее время механизмы этих перестроек изучены недостаточно.

В формировании структурно-функциональных характеристик тонкой кишки в процессе онтогенеза, в том числе и ее ферментного спектра, реализующего мембранный гидролиз углеводных компонентов пищи, известно участие гормонов коры надпочечников и щитовидной железы. Они являются основными координаторами изменений, которые происходят в пищеварении и метаболизме крыс при переходе от молочного питания к смешанному и дефинитивному. Показано, что при матурации пищеварительной системы индукция таких ферментов щеточной каймы энтероцитов, как сахараза и мальтаза, связана с глюкокортикоидами, а репрессия лактазы - с тироксином (Doell, Kretchmer, 1964; Moog, 1971; Уголев, 1985, 1991; Castillo et al, 1991; Nanthakumar, Henning, 1993; Nsi-Emvo et al., 1996; Lebenthal, Lebenthal, 1999, и др.).

В последние годы при изучении механизмов ассимиляции пищи стало уделяться внимание дифференциации кишечных ферментов на мембранную и растворимую формы. Ранее было показано, что преимущественно цитозольные пептидазы тонкой кишки существуют в виде мембранной и растворимой форм, которые различаются по своим физико-химическим характеристикам (отношение к температуре, ингибиторам и активаторам, рН, электрофоретическая подвижность и т.д.) (Kim et al., 1974; Peters, 1975; Reisenauer et al., 1992; Тимофеева, Гордова, 1994; Гордова и др., 1998 и др.). Только в последние годы появились отдельные работы, в которых была обнаружена растворимая форма и у мембраносвязанных ферментов, в том числе дисахаридаз, составляющая у взрослых крыс не более 10% от суммарной активности обеих форм (Lorenzsomi et al., 1987; Sandhu, Mahmood, 1990; Гордова и др., 1998; Batt et al., 1998 и др.).

Свойства и функциональная роль мембраносвязанных ферментов тонкой кишки в настоящее время изучены достаточно полно, в том числе в онтогенезе (Уголев, 1972, 1985, 1991; Auricchio et al., 1981; Kretchmer, 1985; Уголев и др., 1986, 1992; Noren et al., 1986; Alpers, 1987; Buddington, 1994; Тимофеева, 1995; van Beers et al., 1995, и др.). Однако следует отметить, что большая часть работы выполнена на гомогенатах слизистой оболочки тонкой кишки. Продемонстрировано, что мембраносвязанные кишечные ферменты выполняют нутритивные функции, реализуя мембранное пищеварение основных компонентов пищи. В отношении цитозольных три- и дипептидаз дискутируется их роль во внутриклеточном пищеварении и в катаболизме клеточных белков.

Однако роль растворимой формы мембраносвязанных дисахаридаз и соотношение обеих форм ферментов в процессе онтогенетического развития пока неясны. В настоящее время, несмотря на важность этой проблемы, ей посвящены лишь отдельные работы (Yedlin S.T. et al., 1981; Sandhu M., Mahmood A., 1990; Kolinska et al., 1991; Batt et al., 1998).

Неизвестно также каким образом контролируется соотношение и свойства мембранной и растворимой форм дисахаридаз, выполняющих особо важные нутритивные функции в период перехода от молочного питания к смешанному, а затем дефинитивному. Действие гормонов на соотношение и свойства мембранной и растворимой форм кишечных дисахаридаз практически не изучалось. Актуальность такого исследования связана с тем, что понимание гормональной регуляции активности кишечных ферментов, динамики соотношения мембранной и растворимой форм в онтогенезе, а также функции растворимой формы может иметь важное значение в развитии фундаментальных представлений об ассимиляции пищи и понимания возможной нутритивной роли растворимой формы дисахаридаз. Исследования возможной нутритивной роли растворимой формы дисахаридаз, особенно в раннем онтогенезе, могут быть полезными при разработке рационального детского питания в период раннего онтогенеза и в условиях патологии.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. 1. Сопоставить динамику активности, соотношения и свойств мембранной и растворимой форм дисахаридаз в различных отделах тонкой кишки, что обусловлено их неидентичной топографией, у крысят разного возраста.

2. Сопоставить эти характеристики при воздействии на крысят гормонов коры надпочечников и щитовидной железы (раздельно и совместно), которые являются основными координаторами изменений, происходящих в пищеварении крыс при переходе от молочного питания к дефинитивному.

3. С использованием комплексного подхода (возрастная динамика и гормональные воздействия) в изучении соотношения активности и свойств мембранной и растворимой форм дисахаридаз выяснить функциональное значение растворимой формы у крысят различных возрастных групп, а также адаптируемость этой формы ферментов при переходе от молочного типа питания к смешанному и дефинитивному.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. 1. Определить активность дисахаридаз (сахараза, мальтаза, лактаза) в гомогенатах слизистой оболочки тощей и подвздошной кишки 10-, 20-, 30-дневных крысят и взрослых крыс.

2. Изучить динамику активности и соотношения мембранной и растворимой форм сахаразы, мальтазы и лактазы в тощей и подвздошной кишке 10-, 20-, 30-дневных крысят и взрослых крыс.

3. В идентичных экспериментальных условиях изучить свойства (кинетические характеристики - Кщ и V тах, влияние модификаторов) мембранной и растворимой форм дисахаридаз в тощей и подвздошной кишке крыс разных возрастных групп.

4. Определить активность дисахаридаз в гомогенатах слизистой оболочки тощей и подвздошной кишки, а также соотношение и свойства мембранной и растворимой форм ферментов (кинетические параметры, влияние модификаторов) у крысят после введения им тироксина и/или дексаметазона.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Активность, соотношение и свойства мембранной и растворимой форм дисахаридаз тощей и подвздошной кишки крысят меняется при переходе крысят от молочного питания к смешанному и дефинитивному.

2. У крысят в период раннего онтогенеза значительная активность дисахаридаз наблюдается в растворимой форме, что может свидетельствовать об её нутритивной роли, и особенно в подвздошной кишке, которая в этот период особенно важна в качестве резервной зоны.

3. Введение дексаметазона и/или тироксина приводит к изменению активности и соотношения двух форм дисахаридаз с уменьшением доли растворимой формы, что характерно для взрослых животных.

4. Увеличение активности мальтазы с возрастом и под действием гормонов происходит за счет увеличения синтеза ферментного белка. Репрессия лактазы под действием тироксина обусловлена снижением активности её растворимой формы.

5. Влияние гормонов коры надпочечников и щитовидной железы на активность растворимой формы дисахаридаз служит подтверждением её участия в пищеварении в раннем онтогенезе.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Показано, что у крыс в раннем онтогенезе в тощей и, особенно, в подвздошной кишке наблюдается значительная активность растворимой формы дисахаридаз.

Установлено, что при переходе от молочного питания к смешанному, а затем дефинитивному соотношение мембранной и растворимой форм сахаразы и мальтазы меняется в сторону увеличения доли активности мембранной формы. Активность растворимой формы с возрастом не уменьшается, однако, её доля существенно снижается, особенно в подвздошной кишке, что продемонстрировано впервые. Соотношение двух форм ферментов в тощей и подвздошной кишке становится похожим на их соотношение в тонкой кишке у взрослых крыс.

Впервые обнаружена высокая доля активности растворимой формы лактазы в тощей и подвздошной кишке не только 10-и 20-дневных, но и у 30-дневных крысят, когда наблюдается репрессия этого фермента.

Установлено, что введение 7-8 дневным крысятам дексаметазона и/или тироксина изменяет соотношение активности мембранной и растворимой форм сахаразы и мальтазы в сторону увеличения доли активности мембранной формы и снижения доли активности растворимой формы, особенно, в подвздошной кишке. Соотношение двух форм ферментов при этом соответствует их распределению в энтероцитах, характерному для взрослых животных.

Впервые обнаружено, что тироксин вызывает значительное увеличение активности мембранной формы лактазы в тощей и в подвздошной кишке.

Впервые обнаружены различия в кинетических характеристиках (Кш и Ушах) растворимой и мембранной форм мальтазы. Количественное изменение этих параметров в ответ на гормональные воздействия соответствует их изменениям при взрослении.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ. Одновременное использование комплексного подхода (возрастная динамика и гормональные воздействия) при изучении активности мембранной и растворимой форм дисахаридаз и их свойств в раннем онтогенезе и у взрослых животных, а также соотношения этих форм может иметь важное значение в развитии фундаментальных представлений об ассимиляции пищи, особенно в раннем постнатальном онтогенезе. Наши данные впервые позволят приблизиться к пониманию возможной нутритивной роли растворимой формы дисахаридаз при созревании тонкой кишки, а также проанализировать их адаптивные возможности. Работа также имеет важное значение для анализа молекулярных механизмов формирования спектра кишечных ферментов. Полученные данные могут быть полезными при разработке рационального детского питания в период раннего онтогенеза.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации были доложены на 3-й Российской гастроэнтерологической неделе (Москва, 1997), 4-й Республиканской научно-практической конференции "Современные тенденции развития гастроэнтерологии" (Ижевск, 1998), Всероссийской научной конференции с международным участием, посвященной 150-летию со дня рождения Й.П. Павлова (Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН, Санкт-Петербург, 1999), Международной конференции "Механизмы функционирования висцеральных систем", посвященной 150-летию И.П. Павлова (Институт физиологии им. И.П. Павлова РАН, Санкт-Петербург, сентябрь 1999 г.). 9

ОБЪЁМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, 3-х глав, общего заключения, выводов и списка литературы. Текст диссертации изложен на 127 страницах машинописи и включает 14 таблиц, 14 рисунков. Библиографический указатель содержит 239 источников, в том числе 35 отечественных и 204 зарубежных.

Заключение диссертации по теме «Физиология», Гордова, Людмила Анатольевна

ВЫВОДЫ

1. В тощей и подвздошной кишке у крысят всех возрастных групп активность сахаразы (за исключением 10-дневных животных, у которых она отсутствует) и мальтазы обнаружена не только в мембранной, но и цитозольной фракциях, причем в подвздошной кишке в отличие от тощей доля активности растворимой формы этого фермента значительна, особенно, у 10- и 20-дневных крысят.

Соотношение обеих форм сахаразы и мальтазы в тощей и, особенно, в подвздошной кишке при переходе от молочного питания к дефинитивному меняется в сторону увеличения доли мембранной формы, хотя активность растворимой формы с возрастом не снижается, что показано впервые.

2. Впервые обнаружена высокая доля активности растворимой формы лактазы в тощей и подвздошной кишке не только у 10- и 20-дневных крысят (от суммарной активности обеих форм этой дисахаридазы), но и у 30-дневных животных, у которых наблюдается репрессия фермента.

3. У 10-дневных крысят дексаметазон (аналог гидрокортизона) вызывал повышение активности как мембранной, так и растворимой форм сахаразы и мальтазы. При этом наблюдалось более значительное увеличение активности мембранный формы ферментов в тощей кишке, а растворимой формы - в подвздошной.

4. Впервые обнаружено, что введение тироксина вызывало у 10-дневных крысят повышение активности лишь мембранной формы мальтазы, более выраженное в тощей кишке; значительное увеличение активности мембранной формы лактазы и снижение активности ее растворимой формы - в подвздошной кишке.

5. Обнаружено, что Утах обеих форм мальтазы увеличивается с возрастом животных, причем более значительно для мембранной формы, чем для растворимой, в обоих отделах тонкой кишки у крыс всех возрастных групп.

Изменение кинетических характеристик обеих форм мальтазы, наблюдавшееся при введении дексаметазона и тироксина, было сходным с их изменением при взрослении животных.

6. У животных всех возрастных групп активность мембранной формы лактазы в тощей и подвздошной кишке стимулировалась трибутирином в большей степени, чем активность растворимой формы фермента. Дексаметазон и/или тироксин вызывали снижение уровня стимуляции активности обеих форм фермента.

ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Сахараза в тонкой кишке новорожденных крысят отсутствует. Ее активность появляется на 15-16-й дни жизни и быстро возрастает (Rubino et al., 1964; Иезуитова и др., 1964; Koldovsky, 1969; Henning, Kretchmer, 1973; Seetharamet al, 1977; Уголев, 1978, 1991; Yeh, Holt, 1986; Henning, 1985; Уголев и др., 1992; Buddington, 1994; Тимофеева, 1995; Nsi-Emvo et al., 1996, и др.). В наших экспериментах активность сахаразы появлялась в гомогенатах слизистой тонкой кишки в конце третьей недели. К 30-дневному возрасту крысят уровень активности фермента тощей и подвздошной кишке достигал уровня взрослых животных.

Показано, что активность мальтазы в тонкой кишке крысят низка в первые две недели после рождения и значительно возрастает в течение следующих двух недель (Rubino et al, 1964; Koldovsky, 1969; Henning, Kretchmer, 1973; Уголев, 1978; Henning, 1981, 1985, 1987; Уголев и др., 1992; Büddington, 1994; Тимофеева, 1995; и др.).

Незначительная активность мальтазы была обнаружена нами в тощей и подвздошной кишке 10-дневных крысят. При переходе крысят на дефинитивное питание в возрасте 30 дней активность мальтазы резко возрастала и достигала уровня взрослых животных в обоих отделах тонкой кишки.

Особенностью раннего постнатального периода является наличие в слизистой оболочке тонкой кишки незрелорождающихся млекопитающих, в том числе и человека, высокой активности лактазы. С возрастом активность фермента снижается, причем это обнаружено многими исследователями при использовании гомогенатов слизистой оболочки тонкой кишки (Koldovsky, 1969; Уголев, 1978, 1985, 1991; Henning, 1981, 1987; Tsuboi et al., 1981,1985, 1992; Jonas et al., 1985; Freund et al., 1990, 1991a; Рахимов, 1991; Уголев и др., 1992; Auricchio, 1994; Buddington, 1994; Тимофеева, 1995; Lee et al., 1997; O'Connor, Diamond, 1999 и др.).

Несмотря на интенсивные исследования, молекулярный механизм снижения активности лактазы неизвестен.

Исследования снижения активности лактазы, показали, что и внутриклеточный процессинг и постсекреторная деградация фермента участвуют в снижении активности лактазы (Jonas et al., 1985; Freund et al., 1990; 1991a; Buller et al., 1990a; Keller et al., 1992; Rings et al., 1992, 1994; Lee et al., 1997 и др.). В частности, показана увеличенная деградация лактазы и продукция неактивной 100 кДа субъединицы лактазы у взрослеющих крыс, которая остается и во взрослом состоянии (Liu et al., 1992). Предполагается также, что цитокинетические изменения, ведущие к уменьшению жизни энтероцитов, могут обеспечить основу снижения лактазы (Tsuboi et al., 1981, 1985, 1992; Smith, James, 1987).

Анализ гликозиляции лактазы-флоридзин-гидролазы показал, что основная структура этого гликопротеина не изменяется в процессе онтогенеза крысы. Изменения происходят в терминальных частях структуры фермента, где в раннем возрасте преобладают сиаловые кислоты, замещающиеся в процессе развития на фукозу. Причем в подвздошной кишке обнаружено более длительное присутствие сиаловых кислот в молекуле лактазы (Cousineau, Green, 1980; Kraml et al.,1984; Buller, 1990b; Freund et al., 1991a; Biol et al., 1992). Считается, возраст-зависимое изменение активности лактазы не связано с процессами десиализации и фукозилирования фермента в процессе постнатального развития.

В последнее время стали появляться работы, в которых была обнаружена активность растворимой формы дисахаридаз во фракции супернатанта слизистой оболочки тонкой кишки новорожденных крысят (Beaulieu et al., 1984; Sandhu, Mahmood, 1990; Тимофеева, Гордова, 1994; Тимофеева и др., 1996; Гордова, 1998; Гордова и др., 1998; Егорова и др., 1998; Batt et al., 1998, и др.). Как правило, эти работы были выполнены на разных животных, на отдельных возрастных группах и в различных методических условиях.

В наших исследованиях, выполненных в идентичных методических условиях одновременно на разных возрастных группах крыс (10-, 20-, 30-дневных и взрослых), для которых характерен определенный тип питания (молочный, смешанный и дефинитивный), показано, что возраст-зависимое снижение активности лактазы затрагивает не только мембранную форму фермента, но и растворимую. Ранее аналогичные данные были показаны на мышах, у которых растворимая форма лактазы была также обнаружена в тонкой кишке мышей и ее уровень до 13-го дня постнатальной жизни, был существенно выше, чем у взрослых животных (Beaulieu et al., 1984). Как и все дисахаридазы, лактаза является мембраносвязанным ферментом и большая часть ее активности обнаружена в мембранной фракции. Однако нами обнаружен высокий уровень активности лактазы в цитозольной фракции слизистой оболочки как тощей, так и подвздошной кишки у крысят всех возрастных групп. В тощей кишке она составляла 15, 7 и 20% и в подвздошной кишке 26, 19 и 24% от суммарной активности мембранной и цитозольной фракций у 10-,

20- и 30-дневных крысят соответственно. У взрослых крыс активность фермента в обеих фракциях тощей и подвздошной кишки практически отсутствовала.

Впервые обнаружена высокая активность растворимой формы лактазы в тощей и подвздошной кишке не только 10- и 20-дневных, но и 30-дневных крысят, когда наблюдается репрессия этого фермента. Доля растворимой формы лактазы с возрастом не уменьшалась ни в тощей, ни в подвздошной кишке, хотя уровень активности каждой из форм при этом снижался.

В тощей кишке 20-, 30-дневных крысят и взрослых крыс активность сахаразы наблюдалась в основном во фракции мембран слизистой оболочки, составляя в среднем 96-98% от суммарной активности мембранной и цитозольной фракций. Наоборот, в подвздошной кишке 20-дневных крысят активность сахаразы в цитозольной фракции составляла 14% от суммарной активности обеих фракций, у 30-дневных только 9%, а у взрослых крыс около 2%, т.е. как в тощей кишке.

По данным Янга и соавт. (Young et al., 1981) доля активности растворимой формы сахаразы у взрослых крыс также была низка вдоль всей тонкой кишки и составляла менее 7% от суммарной активности фермента в обеих фракциях.

В тощей кишке животных всех возрастных групп активность мальтазы наблюдалась в основном в мембранной фракции, составляя у 10-дневных крысят 91%, у 20-дневных - 95% и у 30-дневных и взрослых крыс - 98-98.5%, соответственно.

Следует заметить, что, как и в случае с сахаразой, в подвздошной кишке крыс отмечался значительный уровень активности растворимой формы мальтазы. Так, у 10-дневных крысят 39% мальтазной активности наблюдалось в цитозольной фракции подвздошной кишки, а у 20-дневных - уже только 15% от суммарной активности обеих фракций. По мере взросления и перехода на смешанное питание соотношение активности растворимой и мембранной форм мальтазы в подвздошной кишке становилось похожим на соотношение этих форм в тощей кишке: у 30-дневных крысят в цитозольной фракции обнаружено лишь 6%, а у взрослых - 2% от суммарной активности обеих фракций.

Важно отметить, что активность мембранной формы мальтазы, как и сахаразы, преобладала в тощей кишке, причем это характерно для каждой возрастной группы животных (примерно в 1.2-2.5 раза выше, чем в подвздошной кишке). Напротив, активность растворимой формы была выше в подвздошной кишке по сравнению с тощей примерно также в 1.4-2.5 раза.

Таким образом, наши исследования постнатального развития активности дисахаридаз тонкой кишки на различных онтогенетических моделях показали, что соотношение мембранной и растворимой форм ферментов меняется с возрастом и в нроксимо-дистальном направлении.

Аналогичные результаты были получены при изучении кишечной щелочной фосфатазы и аминоолигопептидазы тонкой кишки крыс. Так, у 14-дневных крысят активность растворимой формы щелочной фосфатазы составляла 35% от суммарной активности. У взрослых крыс она составляла уже только 3-12% (Уошщ й а1., 1981; БашНт, МаЬтооё, 1990). Различалось также распределение мембранной и растворимой форм щелочной фосфатазы вдоль тонкой кишки взрослых крыс и крысят. Активность растворимой формы увеличивалась от двенадцатиперстной к подвздошной кишке у взрослых крыс и 14-дневных крысят, активность мембранной формы была максимальной в двенадцатиперстной кишке взрослых крыс и в подвздошной кишке крысят (Уошщ й а!, 1981).

Уровень активности растворимой аминоолигопептидазы у 12-16-дневных крысят составлял 13 и 6% от общей активности фермента в подвздошной и тощей кишке соответственно. К 36-му дню жизни доля активности растворимой формы фермента снижалась до 8 и 3% соответственно. Активность мембранной формы преобладала в подвздошной кишке 12-16-дневных крысят и в тощей кишке 20-36-дневных крысят ^¡вепаиег ^ а!., 1992).

Таким образом, анализ данных литературы, а также полученные нами результаты, подтверждают предположение о том, что в процессе постнатального развития крыс изменяется активность и соотношение цитозольных и мембранных ферментов, в том числе дисахаридаз.

Изменение соотношения двух форм мембраносвязанных ферментов в сторону уменьшения доли растворимой формы при матурации тонкой кишки дает возможность высказать предположение о физиологической роли каждой из форм в период раннего онтогенетического развития. По-видимому, такая динамика соотношения мембранной и растворимой форм пищеварительных ферментов тонкой кишки млекопитающих в период перехода от молочного питания к дефинитивному связана с перераспределением функциональной нагрузки на разные группы ферментов вдоль длины кишки.

Высокая активность растворимой формы мембраносвязанных дисахаридаз в раннем постнатальном периоде, по-видимому, необходима для ассимиляции пищевых субстратов (например, лактозы), проникновение которых в не полностью расщепленном виде внутрь энтероцитов возможно вследствие повышенной проницаемости мембран щеточной каймы, особенно в подвздошной кишке, выполняющей в этот период развития компенсаторные функции (Уголев и др1,1983, 1986; Уголев, 1985, 1991).

Известно, что резервная зона тонкой кишки у млекопитающих, в том числе и у человека, минимальна в период-молочного питания. В этот период имеет место сдвиг активности многих кишечных ферментов в дистальном направлении, и подвздошная кишка выполняет компенсаторные функции. Возможно, подвздошная кишка благодаря присутствию значительной доли растворимой формы дисахаридаз способна в случае особых ситуаций и к внутриклеточному расщеплению Сахаров и других субстратов, характерных для дефинитивного питания (Уголев и др., 1992; Егорова и др., 1998). Это предположение согласуется с исследованиями кинетических характеристик мембранной и растворимой форм мальтазы, в которых нами показано, что по сравнению с тощей, именно в подвздошной кишке крысят разного возраста растворимая форма характеризовалась более значительной величиной Vmax.

Кроме того, при исследовании регуляторных свойств мембранной и растворимой форм лактазы отмечено, что в подвздошной кишке 10-дневных крысят растворимая форма лактазы стимулировалась трибутирином в большей степени по сравнению с тощей.

Скорее всего, наличие растворимой формы пищеварительных ферментов в раннем онтогенезе является свидетельством структурно-функциональной незрелости тонкой кишки, что подтверждается существенным снижением доли растворимой формы мембраносвязанных ферментов при переходе к дефинитивному питанию и, кроме того, может рассматриваться как адаптивный признак, способствующий выживанию и развитию организма (Егорова и др., 1998).

Возможно, растворимая форма ферментов является предшественником мембранной формы, которая у взрослых животных осуществляет нутритивные функции. Это было ранее показано в отношении аминоолигопептидазы тонкой кишки (Maze, Gray, 1980; Reisenauer et al., 1992). He было обнаружено различий в некоторых свойствах (рН-зависимости, молекулярной массе, термостабильности, субстратной специфичности и т.д.) между двумя формами мальтазы тонкой кишки крыс и было высказано предположение, что растворимая форма - это диссоциированная форма мембраносвязанного фермента (Galand, Forstner, 1974а, Ъ).

В то же время несколько фактов позволяют заключить, что растворимая форма дисахаридаз тонкой кишки крыс не является частью или источником мембранной. Так, на основании различия растворимой и мембранной форм мальтазы тонкой кишки крысят по углеводной структуре, предполагается, что они являются независимыми формами фермента (Salvatore et al, 1980; Kolinska et al., 1991; Tardy et al., 1994). Аналогичные данные были получены при изучении щелочной фосфатазы тонкой кишки 16-дневных крысят растворимая форма которой содержит больше фукозы и N-ацетилгалактозамина по сравнению с мембранной формой (Yedlin et al., 1981). В отношении сахаразы тонкой кишки крыс разного возраста обнаружены различия в кинетических свойствах (Km и Vmax) двух форм (Sandhu, Mahmood, 1990). Аналогично, в наших исследованиях, сравнение мембранной и растворимой форм мальтазы тонкой кишки крысят и взрослых крыс по кинетическим характеристикам показало, что мембранная форма мальтазы по сравнению с растворимой отличалась более высокими значениями Vmax в тощей и подвздошной кишке у животных всех возрастных групп. С возрастом животных наблюдалось увеличение Vmax растворимой и, особенно, мембранной форм фермента тощей и подвздошной кишки. При этом, однако, обе формы кишечной мальтазы характеризовались приблизительно одинаковым сродством к субстрату (т.е. величиной Кт) у крыс разного возраста.

Сезард и соавт. (Cezard et al., 1979) определили различия в физических и иммунологических свойствах внутриклеточной и мембранной форм сахаразы тонкой кишки крыс. В частности, показано, что активность растворимой сахаразы остается стабильной до 30 мин при 50°С, тогда как мембранный фермент при этих условиях был термолабилен. Цитозольная форма сахаразы меньше мембранной на 40 кДа, что удивительно, если считать цитозольную форму предшественником мембранной, так как считается, что предшественник должен быть больше, чем функциональный белок (Cezard et al., 1979). Является ли цитозольная форма предшественником мембранной - неизвестно, хотя, возможно, растворимый фермент может служить предшественником на определенных стадиях развития внутриклеточных процессов. Роль цитозольной стадии во время синтеза мембранного гликопротеина пока неизвестна. Механизм переноса гликопротеинов от рибосом на эндоплазматический ретикулум, аппарат Гольджи и к окончательному месту действия фермента может включать его "свободное" нахождение в цитозоле в процессе внутриклеточного синтеза (Cezard et al., 1979).

Изучение нами регуляторных свойств мембранной и растворимой форм лактазы тонкой кишки 10-дневных крысят показало также различия в уровне стимуляции трибутирином активности двух фбрм фермента. Активность мембранной формы сильнее стимулировалась трибутирином по сравнению с растворимой (за исключением подвздошной кишки 10-дневных крысят), причем эта закономерность не менялась с возрастом.

В тощей и подвздошной кишке 30-дневных крысят нами отмечено увеличение Утах и Кщ мембранной и растворимой форм мальтазы. Однако, значительное увеличение Утах "компенсируется" снижением сродства обеих форм фермента к субстрату. Возможно столь значительные изменения в кинетических свойствах связаны с критическим периодом перехода крысят от смешанного питания к дефинитивному, в течение которого отмечается также увеличение веса крысят, а также массы кишечной слизистой. По-видимому, мальтаза, обнаруженная в мембранной и растворимой фракциях, является одним и тем же ферментом, а его удельная активность повышается с возрастом за счет увеличения синтеза ферментативно-активного белка.

Как было отмечено ранее, глюкокортикоиды и тироксин являются основными координаторами изменений ферментного спектра, реализующего в особенности мембранный гидролиз углеводных компонентов пищевых субстратов, в процессе постнатального развития.

В связи с этим мы попытались выяснить их влияние на активность и соотношение мембранной и растворимой форм дисахаридаз.

Под влиянием дексаметазона наблюдалось преждевременное появление активности сахаразы в гомогенатах слизистой оболочки как тощей, так и подвздошной кишки у крысят 10-дневного возраста. Активность сахаразы в гомогенате слизистой оболочки тощей кишки увеличивалась до 50%, а в подвздошной - до 100% от активности у 30-дневных крысят. При дифференциации двух форм сахаразы обнаружена индукция активности как мембранной, так и растворимой форм сахаразы. Так, уровень активности мембранной формы фермента в тощей и подвздошной кишке составлял 70-76% от уровня активности у взрослых крыс. При этом соотношение активности мембранной и растворимой форм сахаразы в тощей и подвздошной кишке становилось практически таким же, как у крысят 30-дневного возраста

Дексаметазон вызывал увеличение активности мальтазы в гомогенатах слизистой оболочки тощей и подвздошной кишки 10-дневных крысят до уровня активности у взрослых животных. Наблюдалось также резкое увеличение активности мембранной - в 17 и 37 раз - и менее значительное увеличение активности растворимой - в 4.5 и 8 раз - форм мальтазы тощей и подвздошной кишки соответственно. Соотношение двух форм фермента в тощей кишке было примерно таким же, как у 30-дневных крысят, а в подвздошной - как у 20-дневных.

Активность лактазы в гомогенатах, мембранной и цитозольной фракциях слизистой оболочки тощей и подвздошной кишки достоверно не менялась под действием дексаметазона.

Таким образом, нами была обнаружена значительная индукция активности обеих форм сахаразы и мальтазы дексаметазоном, особенно мембранной формы. Соотношение мембранной и растворимой форм сахаразы и мальтазы при действии дексаметазона менялось в сторону увеличения доли мембранной формы и снижения доли растворимой формы, особенно в подвздошной кишке, что соответствовало их соотношению у крысят более старшего возраста - 20- и 30-дневных.

Ранее на примере кишечной щелочной фосфатазы было показано, что активность мембранной формы у крысят, инъецированных кортизоном, увеличивалась, а активность растворимой формы снижалась (Sandhu, Mahmood, 1990).

Ранее было высказано предположение о том, что глюкокортикоиды индуцируют синтез de novo ферментного белка на основании данных об увеличении активности мальтазы и общего белка после введения 13-дневным крысятам кортизона (Galand, Forstner, 1974а, b; Forstner, Forstner, 1979). Показано, что действие глюкокортикоидов в раннем (10 дней) и более позднем (16 дней) возрасте на активность и количество мРНК сахаразы-изомальтазы (SI) основано на различных механизмах. Первый эффект базируется на способности гормона преждевременно индуцировать экспрессию гена сахаразно-изомальтазного комплекса. Трабер и соавт. (Traber et aL, 1992) идентифицировали три положительных регуляторных элемента: SIF-1, -2, -3 в промоторе сахаразо-изомальтазного гена. Ядерный белок, который связывает SIF-1, является специфичным для кишечника и необходим для инициации транскрипции. SIF-2 и -3 активируют транскрипцию гена. Предполагается, что глюкокортикоиды вызывают предварительную транскрипцию гена сахаразы-изомальтазы путем инициации синтеза SIF-1-связывающего белка и могут регулировать количество мРНК сахаразы на уровне SIF-2- и -3-связывающих участков (Nsi-Emvo et al., 1996). Второй эффект основан на изменении в кинетике энтероцитов в системе крипта-ворсинка (Nanthakumar, Henning, 1993).

Определение нами кинетических параметров растворимой и мембранной форм мальтазы тощей и подвздошной кишки показало, что увеличение активности обеих форм мальтазы в ответ на введение дексаметазона происходит благодаря увеличению Утах, что также предполагает увеличение количества фермента при этих условиях. При этом количественное изменение этих параметров в ответ на гормональные воздействия было сходным с их изменением при взрослении. Другими исследователями также было показано увеличение Vmax при действии кортизона для мембраносвязанной формы сахаразы (Sandhu, Mahmood, 1990).

В последнее время показано, что содержание сиаловых кислот в мембранах щеточной каймы зависит от гидрокортизона и различно в старых и новых популяциях энтероцитов. Показано, что через три дня после введения гормона 9-10-дневным крысятам в мембранах щеточной каймы энтероцитов присутствуют как сиализированные, так и десиализированные формы ферментов, в то время как еще через три дня преобладают только десиализированные формы, характерные для энтероцитов взрослых животных (Kraml et al., 1984; Mahmood, Torres-Pinedo, 1985; Chu et al., 1986; Buller et al., 1990b; Biol et al., 1992; Tardy et al., 1994). Кроме того, на примере глюкоамилазы показано, что снижение содержания сиаловых кислот касается не только мембранной формы фермента, но и также и растворимой формы мембраносвязанной мальтазы (Kolinska et al., 1991).

Таким образом, глюкокортикоиды вызывают не только увеличение активности мембранной и растворимой форм ферментов, но и изменения в их структуре, характерные для взрослых животных.

Ранее было показано, что введение тироксина (1 мкг/г массы тела) не вызывало преждевременной индукции активности сахаразы в тощей кишке крысят до 13-дневного возраста (Yeh et al., 1989; 1991а, b). В наших исследованиях введение тироксина 7-8-дневным крысятам вызывало преждевременное появление незначительной активности сахаразы в гомогенате слизистой оболочки тонкой кишки, в мембранной и цитозольной фракциях тощей и подвздошной кишки.

Предполагается, что эффекты гормонов щитовидной железы для развития мальтазы, как и сахаразы, являются вторичными к сопровождающим их изменениям уровня кортикостероидов. Вывод, что тироксин не играет прямой роли в нормальном развитии сахаразы и мальтазы в тонкой кишке подтверждается данными из опытов на культуре клеток тонкой кишки сосущих крыс и мышей, в которых показано, что гормон неспособен вызвать увеличение активности этих ферментов (Henning, 1987).

Однако нами впервые обнаружено индуцирующее действие тироксина на активность мембранной формы мальтазы, которое в большей степени было выражено в тощей кишке. Активность растворимой формы мальтазы при этом оставалась практически неизменной, в связи с чем ее доля значительно снижалась и составляла 2% в тощей и 14% в подвздошной кишке, что соответствовало соотношению двух форм фермента у крысят 20- и 30-дневного возраста.

Действие тироксина связывают, как правило, с репрессией активности лактазы в период перехода от молочного питания к дефинитивному. Нами однако не было отмечено достоверного снижения активности лактазы в гомогенатах слизистой оболочки тощей и подвздошной кишки 10-дневных крысят, инъецированных тироксином.

Следует отметить, что наши данные согласуются с данными других авторов, которые также не наблюдали снижения активности лактазы (в гомогенате слизистой оболочки тонкой кишки) при действии сходных доз тироксина (1 мкг/г массы тела), вводимых крысятам такого же возраста (УеЬ е1 а1., 1991а). Снижение активности лактазы под действием тироксина начинается с 19 дня постнатальной жизни, как показали эти авторы. Только когда тироксин вводился вместе с кортизоном, подавляющий эффект наблюдался у 9-дневных крысят (УеЬ е1 а1., 1991а).

Однако при дифференциации фермента на мембранную и растворимую формы обнаружено, что тироксин вызывал снижение активности растворимой формы лактазы тощей и подвздошной кишки. В то же время изучение кинетических характеристик растворимой формы показало увеличение ее сродства к субстрату (т.е. снижение Кт) и Утах (в подвздошной кишке) при этих условиях.

Кроме того, было обнаружено существенное увеличение активности мембранной формы лактазы в обоих отделах тонкой кишки, что приводило к изменению соотношения двух форм фермента. Возможно индуцирующий эффект тироксина на активность мембранной формы лактазы обусловлен введением фармакологической дозы (примерно в 50 раз превышает физиологический уровень тироксина в этот возрастной период), но такие дозы используют, как правило, большинство исследователей.

Таким образом, нами обнаружено, что введение тироксина вызывало у 10-дневных крысят увеличение активности мембранной формы мальтазы, которое в большей степени было выражено в тощей кишке. При этом активность растворимой формы фермента в обоих отделах тонкой кишки оставалась неизменной. Наблюдалось также значительное увеличение активности мембранной формы лактазы и снижение активности ее растворимой формы в тощей и подвздошной кишке 10-дневных крысят. Возможно, репрессивное действие тироксина на активность лактазы в гомогенатах слизистой оболочки тонкой кишки, продемонстрированное многими авторами, связано с репрессией ее растворимой формы.

В настоящее время выполнено много исследований, посвященных выяснению механизма действия тироксина в отношении репрессии активности лактазы с возрастом (Freund et al., 1989, 1990; Yeh et al., 1991b; Hodin et al., 1992; Liu et al., 1992, и др.), но нет единой точки зрения, что, возможно объясняется использованием разных доз тироксина и крыс разного возраста.

Показано, что тироксин не изменяет синтез лактазы и вероятно регулирует экспрессию лактазы на посттрансляционном уровне (Freund et al., 1989; Liu et al., 1992). Возможно, тиреоидные гормоны проявляют свой эффект на экспрессию гидролаз щеточной каймы энтероцитов, действуя также на рост и дифференциацию кишечного эпителия (Yeh et al., 1991d; Liu et al.,1992). Показано, что тироксин способствует ускорению обновления фермента за счет его деградации, которая может быть частично обусловлена повышением продукции панкреатических гидролаз под действием тироксина (Tsuboi et aL, 1981; Lu et al., 1988).

В наших опытах уровень активности сахаразы в каждом из ферментативноактивных препаратов тощей кишки крысят, инъецированных дексаметазоном и тироксином одновременно, не отличался от уровня активности при действии дексаметазона в отдельности. Однако в подвздошной кишке уровень активности был ниже по сравнению с индуцированным уровнем активности в тощей кишке и меньше, чем у крысят, инъецированных только дексаметазоном.

Другими исследователями на гомогенатах слизистой оболочки тонкой кишки крыс, напротив, было показано, что наибольшая индукция активности сахаразы наблюдалась после совместного введения гормонов (Yeh et al., 1991а; Leeper et al., 1998). Предполагалось, что гормоны совместно действуют на рецепторы стероидных гормонов, увеличивая экспрессию гена сахаразы (Yeh et al., 1991а).

Хеннинг и соавт. при введении глюкокортикоидов одновременно с тироксином, наблюдали более значительное увеличение активности мальтазы в гомогенатах слизистой оболочки тонкой кишки (по сравнению с действием только глюкокортикоидов). На основании этого они предполагают, что действию глюкокортикоидов может способствовать тироксин, который, таким образом, принимает участие в развитии активности мальтазы (Martin, Henning, 1982; McDonald, Henning, 1992).

Однако, хотя в наших исследованиях мы наблюдали индукцию активности мембранной формы мальтазы при действии тироксина, активность мальтазы при одновременном действии дексаметазона и тироксина практически равнялась активности при действии дексаметазона отдельно в каждом из препаратов слизистой оболочки тонкой кишки. Как и в случае сахаразы, в подвздошной кишке уровень активности в каждом из ферментативноактивных препаратов был ниже по сравнению с индуцированным уровнем активности фермента в тощей кишке и меньше, чем у крысят, инъецированных только дексаметазоном.

Ранее было показано, что совместное введение тироксина и кортизона вызывало уменьшение активности лактазы в гомогенатах слизистой оболочки тонкой кишки до уровней более низких, чем у контрольных или инъецированных кортизоном крыс (Leeper, Henning, 1983; Yeh et aL, 1991a, d). Предположительно, более низкий уровень активности фермента у крыс, инъецированных кортизоном совместно с тироксином, являлся результатом увеличенной деградации фермента (Yeh et aL, 1991d). Отмечалось также и отсутствие эффекта на вводимые одновременно гормоны (McDonald, Henning, 1992).

Нами не было отмечено влияния совместного введения гормонов на активность лактазы в гомогенатах слизистой оболочки тощей и подвздошной кишки 10-дневных крысят. При дифференциации фермента на мембранную и растворимую форму также не было обнаружено достоверного изменения активности растворимой и мембранной форм лактазы, что наблюдалось и при действии дексаметазона отдельйо.

Однако было показано изменение под влиянием дексаметазона и/или тироксина регуляторных свойств как мембранной, так и растворимой формы лактазы. Обнаружено, что активность растворимой и мембранной форм лактазы тонкой кишки опытных крысят (по сравнению с контрольными животными разного возраста) стимулировалась трибутирином в гораздо меньшей степени.

Полученные результаты показали, что эффект совместного действия тироксина и дексаметазона на активность растворимой и мембранной форм сахаразы и мальтазы в обоих отделах тонкой кишки был ниже, чем при действии только дексаметазона, и выше, чем при действии тироксина, а активность обеих форм лактазы в тощей и подвздошной кишке 10-дневных крысят практически не изменялась.

Таким образом, в наших экспериментах показано, что введение дексаметазона и/или тироксина вызывало изменение активности и соотношения мембранной и растворимой форм сахаразы и мальтазы до уровня их активности у крысят более старшего возраста. Обнаруженные изменения кинетических параметров растворимой и мембранной форм мальтазы позволяют предположить увеличение количества фермента при этих условиях. При этом количественное изменение этих параметров в ответ на гормональный воздействия было сходным с их изменением при взрослении. Уровень активности обеих форм сахаразы и мальтазы в тощей и подвздошной кишке 10-дневных крысят, инъецированных дексаметазоном и/или тироксином, соответствовал уровню активности обеих форм ферментов у интактных крысят более старшего возраста. Обращает на себя внимание, что дексаметазон в большей степени индуцировал активность мембранной формы ферментов, чем растворимой, причем эффект дексаметазона на активность растворимой формы в подвздошной кишке был выше, чем в тощей. Эффект совместного действия гормонов на активность растворимой и мембранной форм сахаразы и мальтазы в тощей и подвздошной кишке был меньше по сравнению с эффектом дексаметазона отдельно. Соотношение двух форм ферментов изменялось в сторону увеличения доли мембранной формы, что также характерно для крысят более старшего возраста. Доля активности растворимой формы ферментов в тощей и подвздошной кишке значительно снижалась с возрастом, а также после введения крысятам гормонов, особенно при одновременном их введении.

Не было обнаружено существенного влияния дексаметазона отдельно или вместе с тироксином на активность лактазы в гомогенате слизистой оболочки тощей и подвздошной кишки. Однако при дифференциации фермента на мембранную и растворимую формы обнаружена репрессия тироксином активности растворимой формы и значительная индукция активности мембранной формы лактазы в тощей и в подвздошной кишке.

Таким образом, полученные нами результаты продемонстрировали, что мембранная и растворимая формы дисахаридаз тонкой кишки в период перехода от молочного питания к смешанному и дефинитивному регулируются гормонами и которые вызывают не только количественные изменения ферментативного белка, но и влияют на его распределение в энтероцитах в процессе онтогенетического развития. По-видимому, влияние глюкокортикоидов и тироксина на изменение активности и соотношения мембранной и растворимой форм дисахаридаз, является дополнительным подтверждением участия растворимой формы этих ферментов в нутритивных процессах в раннем онтогенезе. Изменяя экспрессию двух форм дисахаридаз в периоды перехода от молочного типа питания к смешанному и дефинитивному, глюкокортикоиды и тироксин способствуют функциональному созреванию тонкой кишки (Тимофеева, 1995; Егорова и др., 1998; Гордова, Тимофеева, 1999 и др.).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Гордова, Людмила Анатольевна, 2000 год

1. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия // Под ред. С.С. Дебова.-М.:Медицина, 1983. 750 с.

2. Гордова JI.A. Топография кишечных ферментов у обезьян Макака резус // Журн.эвол.биохим. и физиол. -1996.- Т. 32, N. 5. С. 658-661.

3. Гордова JI.A. Мембранная и растворимая формы некоторых дисахаридаз тонкой кишки крыс в онтогенезе // Журн.эвол. биохим. и физиол. 1998. Т 34, N. 3. - С. 386-388.

4. Гордова JI.A., Егорова В.В., Иезуитова H.H., Тимофеева Н.М. Некоторые свойства растворимой и нерастворимой форм кишечных гидролаз у обезьян Макака резус // Журн.эвол.биохим. и физиол. -1998. Т. 34, N. 3. - С. 338-345.

5. Гордова JLA., Тимофеева Н.М. Эффект дексаметазона и тироксина на соотношение мембранной и растворимой форм кишечных дисахаридаз в онтогенезе крыс // Докл.АН. -1999. Т. 365, N. 1. - С. 135-137.

6. Егорова В.В., Гордова В.В., Иезуитова H.H., Никитина A.A., Тимофеева Н.М. Соотношение мембранной и растворимой форм кишечных ферментов в онтогенезе крыс // Физиол. журн. им.И.М.Сеченова 1998. - Т. 84, N. 1-2,- С. 82-88.

7. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты // Под ред. В .К. Антонова и А.Е.Браунштейна. М.: Мир, 1982. - Т. 1. - 390 с.

8. Елецкий Ю.К., Цибулевский А.Ю. Ультраструктурные и молекулярные основы транспорта веществ через щеточную кайму энтероцита тонкой кишки // Усп.соврем.биолоши. -1979. Т. 87, вып. 2. - С. 304-320.

9. Иезуитова H.H., Тимофеева Н.М., Егорова В.В., Никитина A.A. Гидролазы пищеварительных органов в онтогенезе // Физиол. журн. СССР. 1986. Т.72., N.4. - С.416-424.

10. Иезуитова Н.Н., Тимофеева Н.М., Колдовский O.K., Нуркс Я.Я., Уголев А.М. Поетнатальное развитие ферментативной активности поверхности тонкой кишки у крыс (инвертаза, пептидаза, липаза) // Докл.АН СССР. -1964. Т. 154, N 4. - С. 990-993.

11. Ленинджер А. Основы биохимии // Под ред. В.А. Энгельгарда, Я.М. Варшавского. М.: Мир, 1985. - Т. 3. - 974 с.

12. Лисочкин Б.Г., Хмельницкий О.К. Ультраструктура клеток слизистой оболочки тонкой кишки // В кн: Физиология всасывания. Руководство по физиологии. Л. Наука, 1977. - С. 82-121.

13. Комиссарчик Я.Ю., Уголев А.М. Ультраструктура и возможное функциональное значение гликокаликса микроворсинок кишечных клеток // Докл. АН СССР. 1970. - Т. 194, N 3. -С. 731-733.

14. Кушак Р.И. Пшцеварительно-транспортная система энтероцитов. Рига: Зинатне, 1983. -304 с.

15. Мецлер Д. Биохимия // Под ред. А.Е. Браунштейна. М. Мир, 1980.

16. Павлов И.П. Лекции о работе главных пищеварительных желез. М.; Л.: Изд.-во АН-СССР, 1951. - Т. 2. - С. 11-215.

17. Рахимов К.Р. Механизмы усвоения лактазы в онтогенезе человека и животных. Ташкент, 1991. - 136 с.

18. Рахимов К.Р., Демидова А.И. Углеводы и механизмы их усвоения. Ташкент, 1986. -130 с.

19. Тимофеева Н.М. Роль пепшдаз в ассимиляции белков // Физиол.журн.им. И.М.Сеченова. -1993. Т. 79, N. 6.-С. 1-18.

20. Тимофеева Н.М. Матурация кишечных пищеварительных ферментов в онтогенезе // Физиол.журн. им.И.М.Сеченова. 1995. - Т. 81, N.7. - С. 1-16.

21. Тимофеева Н.М., Гордова JI.A. Характеристика свойств некоторых мембранных и цитозольных пептидаз энтероцитов разных видов животных // Журн.эвол. биохим. и физиол. -1994. Т. 30, N.1. - С. 23-28.

22. Тимофеева Н.М., Гордова JI.A., Егорова В.В., Иезуитова Н. Н., Никитина А.А. Мембранная и растворимая формы кишечных ферментов в онтогенезе // Росс. журн. энтерологии, генатологии, колонроктологии. -1996. Т. 6, N. 4. С. 69.

23. Уголев AM. Мембранное пищеварение. Полисубстратные процессы, организация и регуляция. Л.: Наука, 1972. - 358 с.

24. Уголев А.М. Эволюция пищеварения и принципы эволюции функций. Л., Наука, 1985. -544 с.

25. Уголев А.И. Естественные технологии биологических систем. Л.: Наука, 1987, - 317 с.

26. Уголев А.М. Адаптационно-компенсаторные процессы на примере мембранного гидролиза и транспорта. Л.: Наука, 1991, - 286 с.

27. Уголев AM., Иезуитова Н.Н. Определение активности инвертазы и других дисахаридаз. В кн: Исследование пищеварительного аппарата у человека. Л.: Наука, 1969. - С. 192-196.

28. Уголев А.М., Иезуитова Н.Н., Тимофеева Н.М. Физиология мембранного (пристеночного) пищеварения // Руководство по физиологии. Физиология пищеварения. Изд. Л.: Наука, 1974. - С. 542-570.

29. Уголев А.М., Иезуитова Н.Н., Цветкова В.А. Эволюционная физиология пищеварения // Эволюционная физиология / Под ред. Е.М. Крепса. Л.: Наука, 1983.- Ч. 2, - С. 301-370, 482-490.

30. Уголев А.М., Иезуитова Н.Н., Цветкова В.А. Структурная и функциональная организация мембранного пищеварения // Мембранный гидролиз и транспорт. Новые данные и гипотезы / Под ред. А.М. Уголева. Л.: Наука, 1986. - С. 7-44.

31. Уголев А.М., Тимофеева Н.М., Егорова В.В., Никитина А.А. Детальная характеристика ферментного спектра тонкой кишки крыс в раннем постнатальном периоде // Физиол.журн. им. И.М. Сеченова. -1992. Т. 78, N. 8. - С. 21-28.

32. Уголев А.М., Тимофеева Н.М., Иезуитова Н.Н. Функциональная топография ферментативных и транспортных процессов в тонкой кишке // Физиология всасывания / Под ред. А.М. Уголева. Л.: Наука, 1977.- С. 524-565.

33. Шешукова Т.А., Озолс А.Я. Гуморальная регуляция активности кишечных ферментов // Успехи физиол. наук. 1990. - Т. 21, N. 1. - С. 47-61.

34. Шешукова Т.А., Апине А.Л., Малышева Т.А. Влияние гидрокортизона на активность карбогидраз вдоль кишечной ворсинки у цыплят // Физиол.журн. им. И.М.Сеченова. -1992. Т.78, N. 8. - С.138-144.

35. Ugolev А.М. Membrane (contact) digestion // Biomembranes, v.4A, Intestinal absorbtion/Ed. by D.H.Smith. London, N.-Y.: Plenum Press, 1974. - Vol. 4 A. - P. 285-362.

36. Alpers D.H. Digestion and absorption of carbohydrates and proteins. // Physiology of the gastrointestinal tract/Ed.: L.R.Johnson. New York: Raven Press, 1987. - V. 2. - P. 1469-1487.

37. Asp N.G., Dahlqvist A., Koldovsky O. Small intestinal bgalactosidase activity // Gastroenterology. 1970. - Vol. 58. - P. 591-593.

38. Asp N.-G., Gudmand-Hoyer E., Andersen B., Berg N.-O., DaMqvist A. Distribution of disaccharidases, alkaline phosphatse and intracellular enzymes along the human small intestine // Scand. J. Gastroenterol. 1975. - Vol. 10, N 6. - P. 647-651.

39. Auricchio S. Regulatory mechanisms of the lactase activity in adult intestine // Gastroenterology. 1994. - Vol. 106, N 5.- P. 1376-1378.

40. Auricchio S., Dahlqvist A., Semenza G. Solubilization of the human intestinal disaccharidases // Biochim.biophys.acta. 1963. - Vol. 73, N 3-4. - P. 582-587.

41. Auricchio S.A., Stellato A., De Vizia B. Development of brush border peptidases in human and rat small intestine during fetal and neonatal life // Pediatr.Res. -1981. Vol. 15. - P. 991-995.

42. Batt R.M., Burgess D., Edwards G.B., van de Waal S., Sorensen S.H., Hart C.A. Subcellular biochemical changes during the development of the small intestine of pony foals // Bioch.Bioph.Res.Commun. -1998. Vol. 246, N. 3. - P. 765-770.

43. Baxter J.D., Rousseau G.G. Monographs on endocrinology. V.12 // Glucocorticoid hormone action. Berlin, etc.: Springer-Verlag, 1979. - 638 p.

44. Berg N.O., Dahlqvist A., Lindberg T., Nordon A. Correlation between morphological alterations and enzyme activities in the mucosa of the small intestine // Scand. J.Gastroenterol. 1973. - Vol. 8, N. 8. - P. 703-712.

45. Biol M.C., Martin A., Louisot P. Nutritional and developmental regulation of glycosylation processes in digestive organs // Bioehimie. -1992. Vol. 74. - P. 13-24.

46. Blair D.G.R., Tuba J. Rat intestinal sucrase. 1.Intestinal distribution and reaction kinetics I I Canad.J.Biochem. and Physiol.- 1963. Vol. 41, N. 4. - P. 905-916.

47. Brunner J., Hauser H., Braun H., Wilson K.J., Wacker H., O'Neill B., Semenza G. The mode of association of the enzyme complex sucrase-isomaltase with the intestinal brush border membrane// J.BioLChem. 1979. - Vol. 254. - P. 1821-1828.

48. Brunner J., Hauser H., Semenza G. Single bilayer lipid-protein vesicles formed from phosphatidylcholine and small intestinal sucrase-isomaltase // J.Biol.Chem. 1978. - Vol. 253. -P. 7538-7546.

49. Buddington R.K. Nutrition and ontogenic development of the intestine // Canad.J.Physiol.a.PhaniL 1994. - Vol. 72, N. 3. - P. 251-259.

50. Buller H.A., Montgomeru R.K., Sasak W.V., Grand R.J. Biosynthesis, glycosylation and intracellular transport of intestinal lactase-phlorizin hydrolase in rat // J.BioLChem. 1987. -Vol. 262. - P. 17206-17210.

51. Buller H.A., Rings E.H.H.M., Montgomery R.K., Sasak W.V., Grand R.J. Further studies of glucosylation and intacellular transport of lactase-phlorizin hydrolase in rat small intestine // BiochemJ.- 1989a. Vol. 263. - P. 249-254.

52. Buller H.A., Rings E.H.H.M., Pajrt D., Montgomery R.K., Grand R.J. Glycosylation of lactase-phlorizin hydrolase in rat small intestine during development // Gastroenterology. 1990b. - Vol. 98. - P. 667-675.

53. Castillo R.O., Reisenauer A.M., Kwong L.K., Tsuboi K.K., Quan R., Gray G.M. Intestinal lactase in the neonatal rat: maturational changes in the intracelular processing and brush-border degradation // J.Biol.Chem. -1990. Vol. 265. - P. 15889-15893.

54. Celano P., Jumawan J., Horowitz C., Lau H., Koldovsky O. Prenatal induction of sucrase activity in rat jejunum // BiochemJ. 1977.- Vol. 162. - P. 469-472.

55. Cezard J.-P., Broyart J.P., Cuisinier-Gleizes P., Mathieu H. Sucrase-isomaltase regulation by dietary sucrose in the rat // Gastroenterology. 1983. - Vol. 84. - P. 18-25.

56. Cezard J.-P., Conklin K.A., Das B.C., Gray G.M. Incomplete intracellular forms of intestinal sucrase membrane sucrase-isomaltase // J.Biol.Chem.- 1979. Vol. 254, N. 18. - P. 8969-8975.

57. Chu S.-H.W., Walker W.A. Developmental changes in the activities of sialyl- and fucosyltransferases in rat small intestine // Biochim.biophys.acta. 1986. - Vol. 883. - P. 496500.

58. Cooper B.T., Candy D.C.A., Harries J.T., Peters T.J. Subcellular fractionation studies of the intestinal mucosa in congenital sucrase-isomaltase deficiency // Clin. Sci. 1979. - Vol. 57. - P. 181-185.

59. Cousineau J., Green J.R. Isolation and characterization of the proximal and distal forms of lactase-phlorizin hydrolase from the small intestine of the suckling rat // Biochim.biophys.acta. -1980. VoL 615, N 1. - P. 147-157.

60. Cowell G.M., Tranum-Jensen J., Sjostrom H., Noren O. Topology and quaternary structure of pro-sucrase/isomaltase and final-form sucrase/isomaltase // BiochemJ. 1986. - Vol. 237, N. 2. -P. 455-461.

61. Dahlqvist A. A method for the assay of intestinal disaccharidases // Anal. Biochem. 1964. -Vol. 7, N. l. -P. 18-23.

62. Dahlqvist A., Asp N.G. Rat small intestinal (5-galactosidases. Influence of pH on the hydrolysis of different substrates // BiochemJ. -1967. Vol. 103. - P. 86-89.

63. Danielsen E.M. Biosynthesis of intestinal microvillar proteins. Dimerization of aminopeptidase N and lactase-phlorizin hydrolase // Biochemistry. 1990. - Vol. 29. - P. 305-308.

64. Danielsen E.M. Dimeric assembly of enterocyte brush border enzyme // Biochemistry. 1994. -Vol. 33.-P. 1599-1605.

65. Danielsen E.M., Cowell G.M. Biosynthesis of intestinal microvillar proteins. Further characterization of the intracellular processing and transport // FEBS Lett. 1984. - Vol. 166. - P. 28-32.

66. Danielsen E.M., Cowell G.M. Biosynthesis of intestinal microvillar proteins // BiochemJ. -1986. Vol. 240, N. 3. - P. 777-782.

67. De Ritis G., Falonyk L.M., Trier J.S. Differetiation and maturation of cultured fetal rat jejunum // Develop. Biol. 1975. - Vol. 45, N. 2. - P. 304-317.

68. Desnuelle P. Chemistry and enzymology of pancreatic endopeptidases // Molecular and cellular basis of digestion / Ed. P.Desnuelle.- Amsterdam etc.: Elsevier, 1986. P. 195-211.

69. Development of mammalian absorptive processes /Ed. K.Elliot, Whelan J.Ciba Found.Symp.70.-Amsterdam etc.: Excerpta Medica, 1979.-338 p.

70. Doell R.G., Kretchmer N. Studies of small intestine during development. I. Distribution and activity of (3-galactosidase // Biochim.biophys.acta. 1962. - Vol. 62, N. 2. - P. 353-362.

71. Doell R.G., Kretchmer N. Intestinal invertase: precocious development of activity after injection of hydrocortisone // Science. 1964. - Vol. 143. - P. 42-44.

72. Doell RG., Rosen G., Kretchmer N. Immunochemical studies of intestinal disaccharidases during normal and precocious development // Proc.Nat.Acad. Sci. USA 1965. - Vol. 54, N. 4. -P. 1268-1273.

73. Dussault J.H., Labrie F. Development of the hypothalamic -pituitary-thyroid axis in the neonatal rats // Endocrinology. -1975. Vol. 97. - P. 1321-1324.

74. Eichholz A. Studies on the organization of the brush border in intestinal epithelial cells. V. Subfiractionation of enzymatic activities of microvillus membrane // Biochim.biophys.acta. -1968. Vol. 163, N. l.-P. 101-107.

75. Eichholz A. Fractions of the brush border // Feder.Proceed. 1969. - Vol. 28, N. 1. - P. 30-34.

76. Flanagan P.R., Forstner G.G. Enzyme activity in partly dissociated fragments of rat intestinal maltase/glucoamilase //Biochem.J.- 1978. Vol. 177. - P. 487-492.

77. Freund J.-N., Duluc I., Foltzer-Jourdainne C., Gosse F., Raul F. Specific expression of lactase in the jejunum and colon during postnatal development and hormone treatments in the rat // BiochemJ. 1990. - Vol. 268. - P. 99-103.

78. Freund J.-N., Duluc I., Raul F. Discrepancy between the intestinal lactase enzymatic activity and mRNA accumulation in sucklings and adults. Effect of starvation and thyroxine treatment // FEBS Lett.- 1989. Vol. 248, N. 1-2,- P. 39-42.

79. Freund J.- N., Duluc I., Raul F. Lactase expression is controlled differently in the jejunum and ileum during development in rats // Gastroenterology.- 1991a.- Vol. 100.- P. 388-394.

80. Freund J.N., Foltzer-Jourdainne C., Duluc I., Galluser M., Gosse F., Raul F. Rat lactase activity and mRNA expression in relation to the thyroxine and corticoid status // Cell Mol. Biol.- 1991b.-Vol. 37, N. 4.- P. 463-466.

81. Galand G., Forstner G.G. Isolation of microvillus plasma membranes from suckling-rat intestine (The influence of premature induction of digestive enzymes by injection of Cortisol acetate) // BiochemJ. 1974a. - Vol. 144, N. 2. - P. 293-302.

82. Galand G., Forstner G.G. Soluble neutral and acid maltases in the suckling-rat intestine. The effect of Cortisol and development // BiochemJ. 1974b. - Vol. 144, N. 2. - P. 281-292.

83. Goda T., Yasutake H., Takase S. Lactase-phlorizin hydrolase and sucrase-isomaltase genes are expressed differently along the villus-crypt axis of rat jejunum // J.Nutr. 1999. - Vol.129, N. 6. -P.l 107-1113.

84. Grand R.J., Jaksina S. Additional studies on the regulation of carbohydrate-dependent enzymes in the jejunum; changes in amino acid pools, protein synthesis and the effect of actinomycin-D // Gastroenterology. 1973. - Vol. 64. - P. 429-437.

85. Gudmand-Hoyer E., Skovbjerg H. Disaccharide digestion and maldigestion I I Scand. J. Gastroenterology. 1996. - Vol. 31, Supp. 216. - P. 111-121.

86. Hauri H.P., Green J.R. The development of sucrase in the intestinal brush-border membrane of the suckling rat // Biochem. Soc. Trans. -1978. Vol. 6, N. 6. - P. 1202-1204.

87. Hauri H.P., Stirchi E.E., Bienz D., Fransen J.A.M., Marxer A. Expression and intracellular transport of microvillus membrane hydrolases in human intestine // J. CelLBiol. 1985. - Vol. 101.-P. 838-851.

88. Hecht A., Torbey C.F., Korsmo H.A., Olsen W.A. Regulation of sucrase and lactase in developing rats: role of nuclear factors that bind to two gene regulatory elements // Gastroenterology. 1997. - Vol. 112. - P. 803-812.

89. Henning S.J. Plasma concentration of total and free corticosterone during development in rat // Amer.J.Physiol. 1978a. - Vol. 235. - P. E451-E 456.

90. Henning S.J. Permissive role of thyroxine in the ontogeny of jejunal sucrase // Endocrinology. -1978b.-Vol. 102.-P. 9-15.

91. Henning S.J. Postnatal development: coordination of feeding, digestion and metabolism // Amer.J.Physiol. -1981. Vol. 241, N. 3. - P. G199-G214.

92. Henning S.J. Ontogeny of enzymes in the small intestine // Annu.Rev.Physiol. 1985. - Vol. 47. -P. 231-245.

93. Henning S.J. Functional development of the gastrointestinal tract // Psysiology of the gastrointestinal tract / Ed. L.R.Johnson. New York: Raven Press, 1987. - Vol. 1. - P. 285-301.

94. Henning S.J. Ontogeny of the intestinal mucosa // Psysiology of the gastrointestinal tract / Ed. L.R. Johnson. 3th ed. New York: Raven Press, 1994. - P. 571-610.

95. Henning S.J., Guerin D.M. Role of diet in the determination of jejunal sucrase activity in the weaning rat //Pediatr.Res.-1981.-Vol. 15.-P. 1068-1072.

96. Henning S J., Kretchmer N. Development of intestinal function in mammals // Enzyme. 1973. -Vol. 15. - P. 3-23.

97. Henning S.J., Leeper L.L. Coordinate loss of glucocorticoid responsiveness by intestinal enzymes during postnatal development // Amer.J.Physiol. 1982. - Vol. 242. - P. G 89-G 94.

98. Henning S.J., Ballard P.L., Kretchmer N. A study of the cytoplasmic receptors for glucocorticoids in intestine of pre- and postweaned rats // J.BioLChem. 1975a. - Vol. 250. - P. 2073-2079.

99. Henning S.J., Helman T.A., Kretchmer N. Studies on normal and precocious appearance of jejunal sucrase in suckling rats // Biol.Neonate. 1975b. - Vol. 26, N. 3-4. - P. 249-262.

100. Henning S.J., Leeper L.L., Dien D.N. Circulating corticosterone in the infant rats: the mechanism of age and thyroxine effects // Pediatr. Res. -1986. Vol. 20, N. 1. - P. 87-92.

101. Herbst J.J., Koldovsky O. Cell migration and cortisone induction of sucrase activity in jejunum and ileum// BiochemJ.-1972. VoL 126,N. 3. - P. 471-476.

102. Hodin R.A., Chamberlain S.M., Upton M.P. Thyroid hormone differetially regulates rat intestinal brush border enzyme gene expression // Gastroenterology. 1992. - Vol. 103. - P. 1529-1536.

103. Hodin R.A., Meng S., Chamberlain S.M. Thyroid hormone responsiveness is developmentally regulated in the rat small intestine: a possible role for the a-2 receptor variant // Endocrinology. -1994. Vol. 135, N. 2. - P. 564-568.

104. Holdsworth C.D., Sladen G.E. Absorption from stomach and small intestine // Scientific basis of gastroenterology / Ed. H.L. Duthie, K.G. Wormsley. Edinburgh etc. Livingstone, 1979. - P. 338-397.

105. Hormones and their actions / Ed. B.A. Cooke, R.J.B. King, H.J. van der Molen. Amsterdam etc.: Elsevier, 1988. - Patr 1. - 293 p.

106. Hsia D.Y.Y., Makler M., Semenza G., Prader A. p-galactosidase activity in human intestinal lactases // Biochim.biophys.acta. -1966. Vol. 113, N. 2. - P. 390- 393.

107. Hu C.B., Spiess M., Semenza G. The mode of anchoring and precursor forms of sucrase-isomaltase and maltase-glucoamylase in chicken intestinal brush border membrane. Phylogeenefic implications // Biochim.biophys. acta. 1987. - Vol. 896. - P. 275-286.

108. Jonas M.M., Montgomery R.K., Grand R.J. Intestinal lactase synthesis during postnatal development in the rat // Pediatries. 1985. - Vol. 19. - P. 956-962.

109. Jones R.E. Intestinal absorption and gastro-intestinal digestion of protein in the young rat during the normal and cortisone-induced post-closure period // Biochim.biophys.acta. 1972. - Vol. 274.-P. 412-419.

110. Jumawan J., Koldovsky O. Comparison of the effect of various doses of thyroxine on jejunal disaccharidases in intact and adrenalectomized rats during the first 3 weeks of life // Enzyme. -1978. Vol. 23. - P. 206-209.

111. Keller P., Zwicker E., Mantei N., Semenza G. The levels of lactase and of sucrase-isomaltase along the rabbit small intestine are regulated both at the mRNA level and post-translationally // FEBS Lett. -1992. Vol. 313. - P. 265-269.

112. Kendall K., Jumawan J., Koldovsky O. Development of jejunoileal differences of activity of lactase, sucrase and acid p-galactosidase in isografts of fetal rat intestine // Biol.Neonate. 1979. -Vol. 36.-P. 206-214.

113. Kessler M., Acuto О., Storelli С., Murer H., Muller M., Semenza G. A modified procedure for the rapid preparation of efficiently transporting vesicles from small intestinal brush border membranes // Biochim.biophys.acta. 1978. - Vol. 506. - P. 136-154.

114. Kim Y.S. Intestinal mucosal hydrolysis of proteins and peptides // Peptide transport and hydrolysis. Oxford etc.: ASP, 1977. - P. 151-171.

115. Kim Y.S., Brophy EJ. Rat intestinal brush border membrane peptidases.I. Solubilization, purification, and physicochemical properties of two different forms of the enzyme // J.BioLChem. 1976. - Vol. 251. - P. 3199-3205.

116. Kim Y.S., Kim Y.W., Sleisenger M.H. Studies on the properties of peptide hydrolases in the brush border and soluble fractions of small intestinal mucosa of rat and man // Biochim.biophys.acta. -1974. Vol. 370. - P. 283-296.

117. Koldovsky O. Development of the functions of the small intestine in mammals and man. Basel; New York; Karger, 1969. - 204 p.

118. Koldovsky O. Development mammalian absorbtive process/ Eds. K.Elliot, J.Whelan. -Amsterdam, 1979. -P.147-158.

119. Koldovsky O., Herbst J.J. Cell migration and cortisone-evoked decrease of acid p-gaiactosidase in the ileum of suckling rats // Gastroenterology. 1973. - Vol. 64, N. 6. - P. 1142-1149.

120. Koldovsky O., Sunshine P. Effect of cortisone on developmental parrem of the neutral and the acid p-galactosidase of the small intestine of the rat // BiochemJ. 1970. - Vol. 117. - P. 467471.

121. Koldovsky O., Jirsova V., Heringova A. Effect of aldosterone and corticosterone on (3-galactosidase and invertase activity in the small intestine of rats // Nature. 1965. - Vol. 206, N. 17.-P. 78-79.

122. Koldovsky O., Jumawan J., Palmieri M. Effect of thyroidectomy on the activity of a-glucosidases and acid hydrolases in the small intestine of rats during weaning // J.Endocrinology.- 1975.-Vol. 66.-P. 31-36.

123. Kolinska J., Kraml J. Separation and characterization of sucrase-isomaltase and of glucoamylase of the rat intestine // Biochim.biophys.acta. 1972. - Vol. 284, N. 1. - P. 235-247.

124. Kolinska J., Zakostelecka M., Asfaw B. Comparison of sialylation of maltase-glucoamylase in brush-border and soluble fractions of the small intestine of immature rats // Biochem.Int. 1991. -Vol.25, N.3.-P. 521-529.

125. Kraml J., Kolinska J., Kadlecova L., Zakostelecka M., Lojda Z. Effect of hydrocortisone on the desialylation of intestinal brush-border enzymes of the rat during postnatal development // FEBS Lett. 1984. - Vol. 172, N. 1. - P. 25-28.

126. Kretchmer N. Memoral lecture lactose and lactase. A historical perspective // Gastroenterology. -1971. Vol. 61, N. 6. - P. 805-813.

127. Madara J.L., Trier J.S. Functional morphology of the mucosa of the small intestine // Physiology of the gastrointestinal tract/Ed.: L.RJohnson. New York: Raven Press, 1987. - V. 2. - P. 12091249.

128. Mahmood A., Torres-Pinedo R. Effect of hormone administration on the sialylation and fucosylation of intestinal microvillus membranes of suckling rats // Pediatries. 1985. - Vol. 19, N. 9. - P. 899-902.

129. Maroux S., Louvard D. On the hydrophobic part of aminopeptidase and maltase with bind the enzyme to the intestinal brush border membrane // Biochim.biophys.acta. 1976. - Vol. 419. - P. 189-195.

130. Martin G.R., Henning S.J. Relative importance of corticosterone and thyroxine in the postnatal development of sucrase and maltase in rat small intestine // Endocrinology. 1982. - Vol. 111, N. 3. - P. 912-918.

131. Martin G.R., Henning S.J. Enzymatic development of the small intestine: are glucocorticoids necessary? // Amer. J.Physiol. 1984. - V. 246. - P. G695-G699.

132. Mauiri L., Rossi M., Raia V., D'Auria S., Swallow D., Quaroni A., Auricchio S. Pathy expression of lactase protein in adult rabbit and rat intestine // Gastroenterology. 1992. - Vol. 103. - P. 1736-1746.

133. Maze M., Gray G.M. Intestinal brush border aminooligopeptidases: cytosol precursors of the membrane enzyme // Biochemistry. 1980. - Vol. 19. - P. 2351-2358.

134. McBurney M.I. The gut: central organ in nutrient requirements and metabolism // Can.J.Physiol.Pharm. -1994. Vol 72, N. 3. - P. 260-265.

135. Moog F. The functional diffeentiation of the small intestine. III. Influence of the pituitary-adrenal system on the differentiation of phosphatase in the duodenum of the suckling mouse // J.Exper.Zool. 1953. - Vol. 124. - P. 329.

136. Moog F. Hormones and development / Ed: M.Hamburgh and E.Barrington. New-York, 1971. -P. 143-160.

137. Nairn H. Y., Lentze M.J. Impact of O-glycosylation on the function of human intestine lactase-phlorizin hydrolase // J.Biol.Chem. -1992. Vol. 267. - P. 25494-25504.

138. Nairn H. Y., Sterchi E.E., Lentze M. J. Biosynthesis and maturation of lactase-phlorizin hydrolase in the human small intestinal epithelial cells // BiochemJ. 1987. - Vol. 241. - P. 427-434.

139. Nairn H. Y., Sterchi E.E., Lentze M. J. Structure, biosynthesis and glycosylation of human small intestina maltase-glucoamylase // J.BioLChem. 1988. - Vol. 263. - P. 19709-19717.

140. Nanthakumar N.N., Henning S.J. Ontogeny of sucrase-isomaltase gene expression in rat intestine: responsiveness to glucocorticoids // Amer.J.Physiol. 1993. - Vol. 264. - P. G306-G311.

141. Noren O., Sjostrom H., Cowell G.M., Tranum-Jensen J., Hansen O.C., Welinder K.G. Pig intestinal microvillar maltase-glucoamylase. Structure and membrane insertion // J.BioLChem. -1986a. Vol. 261. - P. 12306-12309.

142. Noren O., Sjostrom H., Danielsen E.M., Cowell G.M. The enzymes of the enterocyte plasma membrane // Molecular and cellular basis of digestion / Ed. P. Desnuelle. Amsterdam etc.: Elsevier, 1986b. - P. 335-365.

143. Nsi-Emvo E., Foltzer-Jourdainne C., Raul F., Gosse F., Duluc I., Koch B., Freund J.-N. Precocious and reversible expression of sucrase-isomaltase unrelated to intestinal cell turnover // Amer.J.Physiol. -1994. Vol. 266. - P. G568-G575.

144. Nsi-Emvo E., Launay J.F., Raul F. Is udult type hypolactasia in the intestine of mammals related to changes in the intracellular processing of lactase? // Cell.Mol.Biol. 1987. - Vol. 33, N. 3. - P. 335-344.

145. Nsi-Emvo E., Raul F., Koch B., Neuville P., Foltzer-Jourdainne C. Sucrase-isomaltase gene expression in suckling rat intestine: hormonal, dietary and growth factor control // J. Pediatr.Gastroenterol.Nutr. -1996. Vol. 23, N. 3. - P. 262-269.

146. O'Connor T.P., Diamond J. Ontogeny of intestinal safety factors: lactase capacities and lactose loads // Amer .J.Physiol. 1999. - Vol.276. - P. R753-R765.

147. Pereira B., Sivakami S. A comparison of the active site of maltase-glucoamylase from the brush border of rabbit small intestine and kidney by chemical modification studies // BiochemJ. -1991. Vol. 274. - P. 349-354.

148. Peters T.J. The subcellular localization of intestinal peptide hydrolyses // Peptide transport in protein nutrition / Ed. D.M. Matthews, J.W. Payne. Amsterdam etc.: ASP, 1975. - P. 43-267.

149. Pressley L., Funder J.W. Glucocorticoid and mineralocorticoid receptors in gut mucosa // Endocrinology. 1975. - Vol. 97. - P. 588-596.

150. Raul F., Kedinger M., Simon P.M., Grenier J.F., Haffen K. Comparative in vivo and in vitro effect of mono- and disaccharide on intestinal brush border enzyme activities in suckling rats // BioLNeonate. -1981. Vol. 39. - P. 200-207.

151. Reisenauer A., Lee E.A., Castillo R.O. Ontogeny of membrane and soluble amino-oligopeptidases in rat intestine // Amer.J.Physiol. -1992. Vol. 262. - P. G178-G184.

152. Rings E.H.H.M., De Boer P.A.J., Moorman A.F.M., van Beers E.H., Dekker J., Montgomeery R.K., Grand R.J., Buller H.A. Lactase gene expression during early development of rat small intestine//Gastroenterology. -1992. Vol. 103, N. 4. - P. 1154-1161.

153. Rossi M., Maiuri L., Russomanno C., Auricchio S. In vitro biosynthesis of lactase in preweaning and adult rabbit // FEBS Lett. 1992. - V. 313. - P. 260-264.

154. Rossi M., Maiuri L., Salvati Y.M., Russomanno C., Auricchio S. Analysis of lactase processing in rabbit // FEBS Lett. 1993a. - Vol. 336. -P. 299-303.

155. Rubino A., Zimbalatti F., Auricchio S. Intestinal disaccharidase activities in adult and suckling rats // Biochim.biophys.acta. -1964. Vol. 92, N. 2. - P. 305-311.

156. Saavedra J.M., Perman J.A. Current concepts in lactose malabsorption and intolerance // Annu. Rev. Nutr. 1989. - Vol. 9. - P. 475-502.

157. Salvatore A, Lee L., Forstner J., Forstner G. Concanavalin a binding of soluble neutral maltase-glucoamylase in suckling rat intestine //Biochem.Biophys.Res.Comm. 1980. - Vol. 93, N. 1. -P. 315-320.

158. Sandhu M., Mahmood A. Kinetic characteristics of soluble and brush border alkaline phosphatase and sucrase activities in developing rat intestine.Effect of hormones // Indian J.of Biochem. Biophys. 1990. - Vol. 27. - P. 88-92.

159. Sangild P.T., Sjostrom H., Noren O., Fowden A.L., Silver M. The prenatal development and glucocorticoid control of brush border hydrolases in the pig small intestine // Pediatr.Res. 1995. -Vol. 37, N. 2. - P. 207-212.

160. Schmitz J., Bressen N., Triadou J. Polyacrylamide gel electrophoresis of brush border membrane proteins and of cytoplasmic protein in 8 cases of congenital sucrose intolerance // Gastroenterology. Clin. biol. 1980. - Vol. 4. - P. 251-256.

161. Scott J., Peters T.J. Protection of epithelial function in human jejunum cultured with hydrocortisone // Amer.J.Physiol. 1983. - Vol. 244, N. 5. - P. G532-G540.

162. Seetharam B., Kwo-Yih Yeh, Moog F., Alpers D.H. Development of intestinal brush-border membrane proteins in the rat // Biochim.biophys.acta. 1977. - Vol. 470. - P. 424-436.

163. Semenza G. Intestinal oligosaccharidases and disaccharidases. In: Handbook of physiology. 6. Alimentar Canal. - V., Washington, 1968. - P. 2543-2565.

164. Semenza G. The mode of anchoring of sucrase-isomaltase to the small intestinal brush border membrane and its biosynthetic implications. Proceed of the 12th FEBS Meet., 1979. - V. 53. -P. 21-28.

165. Semenza G. Anchoring and biosynthesis of stalked brush border membrane proteins: glycosidases and peptidases of enterocytes and renal tubuli // Ann.Rev.Cell.Biol. 1986. - Vol. 2. - P. 255-313.

166. Semenza G., Auricchio S. Chromatographic separation of human intestinal disaccharidases // Biochim.biophys.acta. -1962. Vol. 65, N. 1. - P. 173-175.

167. Semenza G., Auricchio S., Rubino A. Multiplicity of human intestinal disaccharidases. I. Chromatographic separation of maltases and of two lactases // Biochim.biophys.acta. 1965. -Vol. 96, N. 3. - P. 487-497.

168. Shinder D.A., Rakhimov K.R., Usmanova O.D. Delay in natural decline of lactase activity in the small intestine of prematurely weaned rats as related to changes in their thyroid status // Comp.Biochem.Physiol. 1995. - Vol. 111, N. 3. - P. 453-459.

169. Skovbjerg H., Danielsen E.M., Noren O. Purification and characterization of amphiphilic lactase/phlorizin hydrolase from human small intestine // Europ.J.Biochem. 1981. - Vol. 114. -P. 653-661.

170. Smith M.W., James P.S. Cellular origin of lactose decline on postweaned rats // Biochim.biophys.acta. 1987. - Vol. 905. - P. 503-506.

171. Sorenson S.H., Noren O., Sjostrom H., Danielsen E.M. Amphiphilic pig intestinal maltase-gkucoamylase. Structure and specificity // Europ.J.Biochem. 1982. - Vol. 126. - P. 559-568.

172. Spencer R.P. Spatial distribution of intestinal activities // Yale J.Biol.Med. 1964. - Vol. 36, N. 4.-P. 279-294.

173. Spiess M., Brunner J., Semenza G. Hydrophobic labeling, isolation, and partial characterization of the NH420-terminal membranous segment of sucrase-isomaltase complex // J.Biol. Chem. -1982. Vol. 257. - P. 2370-2377.

174. Tanaka T., Takase S., Goda T. A possible role of a nuclear factor NF-LPH1 in the regional expression of lactase-phlorizin hydrolase along the small intestine // J.Nutr.Sci.Vitaminol. -1997. Vol. 43, N. 5. - P. 565-573.

175. Tardy F., Louisot P., Martin A. Ontogenic and nutritional modifications on the intestinal fucosylation process at the weaning period // Biochim.biophys.acta. 1994. - Vol. 1201, N. 1. -P. 41-50.

176. Thomson A.B.R., Keelan M. The aging gut // Canad. J.Phisiol.Pharm 1986. - Vol. 64, N. 1. -P. 19-29, 30-38.

177. Toloza E.M., Diamond J.M. Ontogenetic development of nutrient transporters in rat intestine // Amer.J.Physiol. 1992. - Vol. 263. - P. G593-G604.

178. Traber P.G., Wu G.D., Wang W. Novel DNA-binding proteins regulate intestine-specific transcription of the sucrase -isomaltase gene // MoLCelL Biol. 1992. - Vol. 12. - P. 3614-3627.

179. Troelsen J.T., Olsen J., Noren O., Sjostrom H. A novel intestinal trans-factor (NF-LPH1) interacts with the lactase-phlorizin hydrolase promoter and co-varies with enzymatic activity // J.BioLChem. -1992. Vol. 267. - P. 20407-20411.

180. Tsuboi K.K., Kwong L.K., Burrill P.H., Sunshine P. Sugar hydrolases and their arrangement on the rat intestinal microvillus membrane // J.Membr.Biol. 1979. - Vol. 50. - P. 101-122.

181. Tsuboi K.K., Kwong L.K., D"Harlingue A.E., Stevenson D.K., Kerner J.A., Sunshine P. The nature of maturational decline of intestinal lactase activity // Biochim.biophys.acta. 1985. - Vol. 840. - P. 69-78.

182. Tsuboi K.K., Kwong L.K., Neu J., Sunshine P. A proposed mechanism of normal intestinal lactase decline in the postweaned mammal // Bioch.Bioph.Res.Commun. 1981. - Vol. 101, N. 2.-P. 645-652.

183. Tsuboi K.K., Kwong L.K., Sunshine P., Castillo R.O. Mechanism of maturational decline of rat intestinal lactase-phlorizin hydrolase // BiochemJ. -1992. Vol. 282, N. 1. - P. 107-113.

184. Quaroni A., J.Q.Tean, M.Goke, D.K.Podolsky. Glucocorticoids have pleiotropic effects on small intestinal crypt cells // Amer.J.Physiol. 1999. - Vol. 277. - P. G 1027-G 1040.

185. Villa M., Menard D., Semenza G., Mantei N. The expression of lactase enzymatic activity and mRNA in human fetal jejunum. Effect of organ culture and of treatment with hydrocortisone // FEBS Lett. 1992. - Vol. 301, N. 2. - P. 202-206.

186. Walker P., Dubois J.D., Dussault J.H. Free thyroid hormone concentrations during postnatal development in the rat //Pediatr. Res. 1980. - Vol. 14. - P. 247-249.

187. Yedlin S.T., Young G.P., Seetharam B., Seetharam S., David H. Characterization and comparison of soluble and membranous forms of intestinal alkaline phosphatase from the suckling rat // J.BioLChem. 1981. - Vol. 256, N. 11. - P. 5620-5626.

188. Yen K.-Y., Holt P.R Ontogenic timing mechanism initiates the expression of rat intestinal sucrase activity // Gastroenterology. 1986. - Vol. 90, N. 3. - P. 520-526.

189. Yeh K.-Y., Moog F. Intestinal lactase activity in the suckling rat: influence of hypophysectomy and thyroidectomy // Science. -1974. V. 182. - P. 77-79.

190. Yeh K.-Y., Du F.W., Holt P.R. Endogenous corticosterone rather than dietary sucrose as a modulator for intestinal sucrase activity in artificially reared rat pups // J.Nutr. 1986. - Vol. 116. - P. 1334-1342.

191. Yeh K.-Y., Yeh M., Holt P.R. Differential effects of thyroxine and cortisone on jejunal sucrase expression in suckling rats // Amer. J.Physiol. 1989. - Vol. 256. - P. 604-612.

192. Yeh K.-Y., Yeh M., Holt P.R. Thyroxine and cortisone cooperate to modulate postnatal intestinal enzyme differentiation in the rat // Amer.J.Physiol. 1991a. - Vol. 260. - P. G371-G378.

193. Yeh K.-Y., Yeh M., Holt P.R. Intestinal lactase expression and epithelial cell transit in hormone-treated suckling rats // AmerJ.Phys. 1991d. - Vol. 260. - P. G379-G384.

194. Yeh K.-Y., Yeh M., Montgomery R.K., Grand R.G., Holt P.R. Cortisone and thyroxine modulate intestinal lactase and sucrase mRNA levels and activities in the suckling rat // Biochem.Biophys.Res.Comm. 1991b. - Vol. 180, N. 1. - P. 174-180.

195. Yeh K.-Y., Yeh M., Pan P.-C., Holt P.R. Posttranslation cleavage of rat intestinal lactase occurs at the luminal side of the brush border membrane // Gastroenterology. 1991c. - Vol. 101. - P. 312-318.

196. Young G.P., Yedlin S.T., Alpers D.H. Distribution of soluble and membranous forms of alkaline phosphatase in the small intestine of the rat // Biochim.biophys.acta. -1981. Vol. 676. - P. 257265.

197. Zhang H., Malo C., Buddington R.K. Suckling induces rapid intestinal growth and changes in brush border digestive functions of newborn pigs // J.Nutr. 1997. - Vol. 127, N. 3. - P. 418-426.1281. БЛАГОДАРНОСТИ

198. Выражаю искреннюю признательность за поддержку и помощь в моей работе над диссертацией коллективу лаборатории физиологии питания Института физиологии им. И.П. Павлова РАН.

199. Приношу огромную благодарность моему научному руководителю доктору медицинских наук Нине Михайловне Тимофеевой.

200. С особой теплотой я вспоминаю о моем первом учителе академике Александре Михайловиче Уголеве, с которым мне посчастливилось работать в начале моей научной деятельности.