Микробиологическое получение алкалоида рокефортина микроскопическим грибом Penicillium roquefortii тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат биологических наук Бойченко, Денис Михайлович

• Бойченко, Денис Михайлович
• кандидат биологических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Бойченко, Денис Михайлович

1. Введение

2. Обзор литературы

2.1. Общее представление об алкалоидах.

Распространение и применение.

2.2. Алкалоиды, биогенетически происходящие из триптофана.

2.2.1. Эргоалкалоиды.

2.2.2. Модифицированные циклические пептиды, содержащие остаток триптофана. 11 2.2.2.1. Рокефортин. Структура и биосинтез, биологическая активность, продуценты.

2.2.3. Регуляция и условия биосинтеза индольных алкалоидов.

2.3. Роль алкалоидов в метаболизме и физиологии продуцентов.

3. Материалы и методы

4. Результаты 45 4.1. Выбор объекта исследований. Мутагенез и отбор штамма-продуцента. 464.2. Физиолого-биохимические особенности мутантного штамма

P.roquefortii f39. Алкалоидный состав P.roquefortii.

4.3. Оптимизация химического состава ферментационной среды.

4.4. Оптимизация физико-химических условий выращивания продуцента.

4.5. Условия выращивания посевного материала P.roquefortii f39.

4.6. Условия, определяющие форму роста P.roquefortii f39.

4.7. Выделение рокефортина из культуральной среды. 84 Заключение 93 Выводы 94 Список литературы 95 Приложение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Микробиологическое получение алкалоида рокефортина микроскопическим грибом Penicillium roquefortii»

Актуальность проблемы

В последние годы наблюдается возросший интерес специалистов к биологически активным веществам микроскопических грибов. Особое внимание в связи с действием на организм человека и животных привлекают микотоксины. К последним относятся многие грибные алкалоиды — продукты вторичного обмена, происходящие из аминокислот. Интерес к алкалоидам обусловлен не только их токсикологическим значением. Широкое и разнообразное применение алкалоиды находят при решении как фундаментальных задач таксономии, биохимии, так и прикладных задач химиотерапии и экологии.

Одним из наиболее значимых вторичных метаболитов микромицетов является рокефортин, относящийся к группе дикетопиперазиновых алкалоидов. Этот метаболит, синтезируемый многими видами грибов рода Penicillium, обладает ярко выраженными нейротоксическими, антибиотическими и антипротозойными свойствами (Scott, 1981; Martin Gonzalez et al, 1997). Продуценты рокефортина широко распространены в природе и часто поражают продукты питания и корма. Как следствие, проблемы биосинтеза и свойств этого микотоксина привлекают внимание многих специалистов-токсикологов. Кроме того, значительный интерес к рокефортину проявляется и в фундаментальной науке. Рокефортин используется как хемотаксономический маркер при определении некоторых видов грибов рода Penicillium.

Препараты рокефортина находят применение при токсикологическом мониторинге, в первую очередь, кормов, при изучении механизмов микотоксикозов и в хемотаксономии. В связи с этим, особую значимость приобретают задачи, связанные с препаративным получением рокефортина. Ранние исследования касались лишь некоторых проблем его образования и имели сугубо фундаментальную направленность. К настоящему времени известны биогенетические предшественники рокефортина, но последовательность его синтеза носит лишь предположительный характер. Интенсивно изучались условия биосинтеза грибами этого токсина. Установлена зависимость уровня накопления рокефортина от различных факторов внешней среды (Решетилова, Козловский, 1985; Kusch, Rehm, 1986; Kulakovskaya et al., 1997). Однако концентрация алкалоида в лабораторных условиях, как правило, невысока (5-15 мг/л) (Козловский, Решетилова, 1984). Имеется обширный материал по распространению способности к синтезу рокефортина среди микроскопических грибов (Frisvad, Filtenborg, 1983;

Козловский, Решетилова, 1987; Frisvad, Filtenborg, 1989). Вместе с тем, малоизученны прикладные аспекты микробиологического получения алкалоида. Например, не исследованы условия его препаративного выделения, существующие же методы основаны на обобщенном подходе к извлечению метаболитов подобного рода.

Таким образом, имеющиеся данные несистематичны и не могут являться основой технологии ферментации грибов-продуцентов рокефортина.

Цель и задачи работы.

Целью работы являлось создание метода микробиологического получения рокефортина. Для достижения этой цели необходимо было решить следующие задачи:

- провести отбор перспективного штамма среди грибов рода Penicillium и на его основе получить высокопродуктивную культуру методом мутагенеза и селекции;

- исследовать некоторые физиолого-биохимические свойства полученного мутантного штамма;

- определить наиболее благоприятные для биосинтеза рокефортина состав среды и условия выращивания продуцента;

- оптимизировать условия выделения целевого продукта;

- создать лабораторный регламент на микробиологическое получение препарата рокефортина.

Научная новизна работы заключается в том, что:

- установлена возможность получения стабильных мутантов Penicillium roquefortii с измененным уровнем алкалоидообразования;

- установлена причина циклического характера биосинтеза рокефортина. Предложен способ устранения колебаний концентрации внеклеточного алкалоида.

- у гриба P.roquefortii £39 выделены и охарактеризованы новые изомеры клавиновых эргоалкалоидов, образующиеся в минорных количествах.

Практическая ценность результатов исследования заключается в:

- получении мутанта с повышенным уровнем накопления рокефортина;

- оптимизации условий культивирования продуцента и выделения целевого продукта;

- создании на основе полученных данных лабораторного регламента на микробиологическое производство препарата рокефортина.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Бойченко, Денис Михайлович

ВЫВОДЫ

1. Методом индуцированного мутагенеза получен штамм P.roquefortii f39, обладающий повышенным в 2,5-3 раза уровнем синтеза рокефортина по сравнению с исходной культурой.

2. Оптимизированы состав среды и параметры условий культивирования му-тантного штамма, что позволило еще в 3 раза повысить образование рокефортина (до 80-90 мг/л культуральной жидкости).

3. Впервые показано, что ранее описанный сложный циклический характер накопления рокефортина у P.roquefortii обусловлен колебаниями рН среды в процессе роста продуцента. Предложена среда, содержащая мочевину, при росте на которой отсутствует бифазный характер алкалоидообразования, что делает процесс микробиологического получения рокефортина значительно более воспроизводимым и надежным.

4. Впервые установлены причины потери алкалоида в процессе его выделения, заключающиеся в постферментационных процессах перераспределения рокефортина между средой и клетками, а также во взаимодействии алкалоида с продуктами окисления хлороформа (экстрагента). Отработаны условия выделения целевого продукта, позволившие сократить его потери.

5. Впервые выделены и охарактеризованы ранее не описанные изомеры кла-виновых алкалоидов фумигаклавинов А и Б, фестуклавина и ханоклавина-1, синтезируемые некоторыми мутантными штаммами P.roquefortii.

6. Создан лабораторный регламент на микробиологическое получение рокефортина с использованием мутантного штамма P.roquefortii f39.

95

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Для получения продуцента рокефортина был проведен ультрафиолетовый мутагенез культуры Penicillium roquefortii ВКМ F-2389. Из 200 исследованных мутантов был отобран наиболее стабильный штамм f39 с повышенной в 2,5-3 раза способностью к синтезу рокефортина.

Изучена зависимость накопления алкалоида мутантным штаммом от различных факторов культивирования. Установлено, что оптимальной является среда, содержащая два источника углерода — янтарную кислоту и маннит в концентрациях, соответственно, 5,4 и 65 г/л. Значительное действие на алкалоидообра-зование оказывали уровень аэрации, рН среды. Наибольшее накопление рокефортина при культивировании продуцента было отмечено при уровне аэрации около 40% от насыщения (в условиях ферментера) либо при сульфитном числе 12 (в условиях колб) и исходного рН среды 4,5-4,7.

Установлено, что описанный у грибов рода Penicillium малопредсказуемый периодический характер накопления алкалоидов обусловлен колебаниями рН среды при росте продуцента, которые, в свою очередь, зависят от природы источника азота. Так, бифазный тип синтеза рокефортина особенно выражен на среде с солями аммония. Нами была предложена среда, содержащая мочевину в качестве источника азота, при использовании которой наблюдалось плавное, без периодов падения накопление алкалоида. Это повысило воспроизводимость и надежность процесса получения рокефортина.

Установлены условия наиболее полного выделения рокефортина. Показано, что причинами потерь являются:

1. поглощение алкалоида из среды мицелием в анаэробных условиях;

2. модификация рокефортина этилхлоркарбонатом, содержащимся в хлороформе, который используется для экстракции.

По результатам работы создан лабораторный регламент на получение препарата рокефортина.

94

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Бойченко, Денис Михайлович, 2002 год

1. Арушанян А.В., Веприцкая И.Г., Акименко В.К., Козловский А.Г., Кулаев И.С. Изучение полифосфатного обмена и цианрезистентности гриба Penicillium sizovae в процессе алкалоидообразования. //Биохимия. 1985. Т.50. N.11. С.1836-1842.

2. Бекмаханова Н.Е., Козловский А.Г. Влияние различных источников углерода и азота на рост и накопление алкалоидов в культуре Penicillium roqueforti. //Микробиологическая промышленность. 1974. Вып. 116. №8. С.39-43.

3. Бойченко Д.М., Решетилова Т.А. Сравнительная характеристика образования алкалоидов диким и мутантным штаммами Penicillium roquefortii. //Изв. Тульского гос. Ун-та. 2000. Вып. 6. С. 91-96.

4. Большая медицинская энциклопедия. Т.23. //под ред. Петровского Б.В. 1984. М.: "Советская энциклопедия". 543 с.

5. Винокурова Н.Г., Решетилова Т.А., Аданин В. М., Козловский А.Г. Исследование алкалоидного состава грибов Penicillium palitans и Penicillium oxalicum. //Прикл. биохимия и микробиология. 1991. Т.27. Вып.6. С.850-855.

6. Дудка И.А., Вассер С.П., Элланская И.А. и др. Методы экспериментальной микологии. 1982. Киев:"Наукова Думка". 550с.

7. Зеленкова Н.Ф., Аринбасаров М.У., Козловский А.Г. // Журнал аналитической химии. 1996. Т.51. Вып.6. С.679-683.

8. Козловский А.Г., Аданин В.М., Дазе Х.М., Грефе У. Ругулозувины А и Б — дикетопиперазиновые алкалоиды грибов Penicillium rugulosum и Penicillium piscarium. //Прикл. биохимия и микробиология. 2001. Т.37. Вып.З. С.292-296.

9. Козловский А.Г., Веприцкая И.Г. Влияние источников углерода на биосинтез эргоалкалоидов и активность ключевых ферментов углеводного обмена у Penicillium sizovae. //Микробиология. 1987. Т.56. №.4. С.587-592.

10. Козловский А.Г., Винокурова Н.Г., Аданин В.М., Седмера П. Вторичные метаболиты штаммов грибов, оттносящихся к Penicillium fellutanum. //Прикл. биохимия и микробиология. 1997. Т.ЗЗ. Вып.4. С.408-414.

11. Н.Козловский А.Г., Винокурова Н.Г., Желифонова В.П. Микотоксины грибов Penicillium vulpinum (Cooke & Massee) Seifert & Samson //Микробиология. 2000. T.69. №1. C.45-48.

12. Козловский А.Г., Винокурова Н.Г., Желифонова В.П., Аданин В.М. Вторичные метаболиты грибов вида Penicillium janczewskii. //Прикл. биохимия и микробиология. 1997. Т.ЗЗ. Вып. 1. С.70-74.

13. Козловский А.Г., Винокурова Н.Г., Решетилова Т.А., Сахаровский В.Г., Баскунов Б.П., Селезнев С. Новые метаболита Penicillium glandicola var. glandicola — гландиколин А и гландиколин В. //Прикл. биохимия и микробиология. 1994. Т.ЗО. Вып.З. С.410-414.

14. Козловский А.Г., Желифонова В.П., Винокурова Н.Г., Озерская С.М. Влияние микроэлементов на биосинтез вторичных метаболитов у гриба Penicillium citrinum Thorn ВКМ F-1079. //Микробиология. 2000. Т.69. №5. С.642-646.

15. Козловский А.Г., Решетилова Т.А. Биосинтез и метаболизм алкалоидов группы рокефортина у микроскопических грибов //Биотехнология. 1987. Т.З. №5. С.565-571.

16. Козловский А.Г., Решетилова Т.А. Биосинтез рокефортина в процессе роста грибов рода Penicillium. //Микробиология. 1984. Т.53. №.1. С.81-84.

17. Козловский А.Г., Решетилова Т.А., Медведева Т.Н. Роль триптофана и гистидина в биосинтезе алкалоидов у Penicillium roqueforti. //Микробиология. 1982. Т.51. №.1. С.48-53.

18. Козловский А.Г., Решетилова Т.А., Медведева Т.Н., Аринбасаров М.У., Сахаровский В.Г., Аданин В.М. Внутри- и внеклеточные алкалоиды Penicillium roqueforti. //Биохимия. 1979. Т. 44. Вып.9. С. 1691-1700.

19. Козловский А.Г., Решетилова Т.А., Сахаровский В.Г., Аданин В.М., Зякун A.M. Продукты метаболизма алкалоидов рокефортина и 3,12-дигидророкефортина у гриба Penicillium farinosum. //Прикл. биохимия и микробиология. 1988. Т.24. Вып.5. С.642-646.

20. Козловский А.Г., Соловьева Т.Ф. Влияние условий культивирования на биосинтез алкалоидов Penicillium kapuscinski. //Прикл. биохимия и микробиология. 1986. Т.22. Вып.4. С.548-553.

21. Козловский А.Г., Стефанова-Аврамова JI.H., Решетилова Т.А., Сахаровский В.Г., Аданин В.М. //Прикл. биохимия и микробиология. 1981. Т. 1-7. Вып.6. С.806-812.

22. Кулаковская Т.В., Кувичкина Т.Н., Решетилова Т.А. О механизме транспорта алкалоида рокефортина в клетки гриба-продуцента Penicillium crustosum Thorn ВКМ F-1746. //Прикл. биохимия и микробиология. 1995. Т.31. Вып.2. С.224-228.

23. Ловкова М.Я. Биосинтез и метаболизм алкалоидов в растениях. 1981. М.: "Наука". 168с.

24. Лукнер М. Вторичный метаболизм у микроорганизмов, растений и животных, //под ред. М.И.Залрометова. 1979. М.: "Мир". 548с.

25. Малашенко Ю.Р., Мучник Ф.В., Романовская В.А., Садовников Ю.С. Математические модели и ЭВМ в микробиологической практике. 1980. Киев:"Наукова Думка". 196с.

26. Орехов А.И. Химия алкалоидов. 1955. М.: Изд-во АН СССР. 859с.

27. Перт С.Д. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. 1978. М.: "Мир". 331с.

28. Портер Дж.К. Алкалоиды спорыньи и других эндофитов, вызывающие токсичный синдром у скота при питании зараженными травами //Прикл. биохимия и микробиология. 1993. Т.29. Вып.1. С.51-55.

29. Решетилова T.A., Козловский А.Г. Алкалоиды микроорганизмов. //Успехи микробиологии. 1988. Т.22. С.133-169.

30. Решетилова Т.А., Козловский А.Г. Биосинтез алкалоидов мицелиальными грибами. //Прикл. биохимия и микробиология. 1990. Т.26. Вып.З. С.291-306.

31. Решетилова Т.А., Козловский А.Г. Особенности регуляции биосинтеза алкалоидов триптофаном и его аналогами у Penicillium roqueforti. //Микробиология. 1985. Т.54. №.5. С.699-703.

32. Решетилова Т.А., Кулаковская Т.В., Винокурова Н.Г., Козловский А.Г. Исследование процесса экскреции рокефортина из клеток продуцента Penicillium crustosum Thorn BKM F-1746. //Прикл. биохимия и микробиология. 1997. Т.ЗЗ. Вып.2. С.206-208.

33. Решетилова Т.А., Ярчук Н.И., Шурухин Ю.В., Козловский А.Г. Алкалоиды гриба Penicillium expansum. //Прикл. биохимия и микробиология. 1991. Т.27. Вып.5. С.725-730.

34. Ржехачек 3. Некоторые аспекты регуляции синтеза эргоалкалоидов. //Прикл. биохимия и микробиология. 1992. Т.28. Вып.6. С.828-843.

35. Сахаровский В.Г., Козловский А.Г. Исследование строения костаклавина и эпикостаклавина методом 'Н-ЯМР. //Журнал структурной химии. 1983. Т. 24. №1. С.100-105.

36. Соловьева Т.Ф., Баскунов Б.П., Бузилова И.Г., Решетилова Т.А. Экзогенный триптофан как фактор, регулирующий алкалоидообразование у Penicillium aurantio-virens Biourge ВКМ F-229. //Прикл. биохимия и микробиология. 1999. Т.35. Вып.З. С.313-318.

37. Соловьева Т.Ф., Баскунов Б.П., Киселева О.В., Козловский А.Г. Биосинтез алкалоидов культурой Penicillium puberulum. //Микробиология. 1992. Т.61. N.3. С.395-403.

38. Соловьева Т.Ф., Баскунов Б.П., Нефедова М.Ю., Козловский А.Г. Биосинтез лейцилтриптофанилдикетопиперазина культурой Penicillium aurantio-virens и особенности его образования. //Микробиология. 1989. Т.58. N.3. С.393-399.

39. Соловьева Х.Ф., Решетилова Т.А., Баскунов Б.П., Григорян К.М., Козловский А.Г. Алкалоиды грибов рода Penicillium, выделенные из продуктов питания. //Прикл. биохимия и микробиология. 1995. Т.31. Вып.5. С.545-550.

40. Стефанова-Аврамова Л.Н., Козловский А.Г. Влияние условий культивирования на биосинтез алкалоидов Penicillium gorlenkoanum. //Микробиология. 1984. Т.53. №.3. С.437-442.

41. Химическая энциклопедия. Т.1. //под ред. Кнунянц И.Л. 1988. М.: "Советская энциклопедия". 623с.

42. Abe М., Yamatodani S., Yamano Т., Kozu Y., Yamada S. Production of alkaloids and related substances by fungi. Examination of filamentous fungi for their ability of producing ergot alkaloids. //J. Agr. Chem. Soc. Japan. 1967. V.41. N2. P.67-73.

43. Aninat C., Hayashi Y., Andre F., Delaforge M. Molecular requirements for inhibition of Cytochrome P450 activity by roquefortine. //Chem. Res. Toxicol. 2001. V.14. N.9. P.1259-1265.

44. Arnold D.L., Scott P.M., McGuire P.F., Hawig J., Nera E.A. Acute toxicity studies on roquefortine and PR-toxin, metabolites of Penicillium roqueforti in the mouse. //Food Cosmet. Toxicol. 1987. V.16. P.369-371.

45. Barrow K.D., Colley P.W., Tribe D.E. Biosinthesis of the neurotoxin alkaloid roquefortine. //J.C.S.Chem.Comm. 1979. P.225-226.

46. Berde В., Schild H.O. (Eds) //Ergot alkaloids and related compounds. Berlin. Heidelberg. New York: Handbook exp. Pharm. Springer-Verlag,. 1978. V.49. 1003p.

47. Bhat В., Harrison D.M., Lamont H.M. //J. Chem. Soc. Chem. Comm. 1990. P. 1518.

48. Bhat В., Harrison D.M., Lamont H.M. //Tetrahedron. 1993. V.49. P.10663

49. Birch'AJ., Farrar K.R.//J. Chem. Soc. 1963. P.4277.

50. Birch A.J., Wright JJ. Studies in relation to biosynthesis. XLII. The Structural elucidation and some aspects of the biosynthesis of the brevianamides A and E. //Tetrahedron. 1970. V.26. P.2329-2344.

51. Bockelmann W., Portius S., Lick S., Heller K. J. Sporulation of Penicillium camemberti in submerged batch culture. //Syst Appl Microbiol. 1999. V.22. N.3. P. 479-485.

52. Borg A., Le Grand K., Hokfors H., Paulson C. Mykotoxiner bildade av Penicillium roqueforti — en orsak till forgiftning. //Parakliniskt seminariearbete. 1991. Statens Veterinarmedicinska Anstalt. Uppsala. 176 p.

53. Boysen M., Skouboe P., Frisvad J., Rossen 1. Reclassification of the Penicillium roqueforti group into three species on the basis of molecular genetic and biochemical profiles. //Microbiology. 1996. V.142. N.3. P.541-549.

54. Braselton V.R., Rumler P.C. MS/MS screen for the tremorgenic mycotoxins roquefortine andpenitreme A. //J. Vet. Diagn. Invest. 1996. V.8. N.4. P.515-518.

55. Campbell J.A., Kryda M.J., Treuhaft M.W., Marx J.J. Jr., Roberts R.C. Cheese worker's hypersensitivity pneumonitis. //Am. Rev. Respir. Dis. 1983. Vol.127. N.4. P.495-496.

56. Carbone I., Koch L.M. Ribosomal DNA sequence divergence within internal transcribed spacer 1 of the Sclerotiniaceae. //Mycologia. 1993. V.85. N.3. P.415-427.

57. Cenis J.L. Rapid extraction of fungal DNA for PCR amplification. //Nucleic Acids Res. 1992. V.20. P.2380.

58. Cole R.J., Kirksey J.W., Cox R.H., Clardy J. Structure of tremor-producing indole, TR-2.//Agric. Food. Chem. 1975. V.23. N.5. P.1015-1018.

59. Cole R.J., Kirksey J.W., Moore J.H., Blankenship B.R., Diener U.L., Davis N.B. Tremorgenic toxin from Penicillium verrucosum. //Appl. Microbiol. 1972. V.24. N.2. P.248-250.

60. Day J.B., Mantle P.G. Biosynthesis of radiolabeled verruculogen by Penicillium simplicissimum. //Appl. Envir. Microbiol. 1982. V.43, N.3. P.514-516.

61. Day J.B., Mantle P.G., Shaw B.I. Production of verruculogen by Penicillium estinogenum in stirred fermenters. //J. Gen. Microbiol. 1980. V.117. N.2. P.405-410.

62. Eicman N., Clardy J., Cole R.J., Kirksey J.W. The structure of fumitremorgm A. //Tetrahedron Lett. 1975. V.12. p.1051-1054.

63. Erge D., Maier W., Groger D. Untersuchungen uber die enzymatische Umwandlung von Chanoclavin-I. //Biochem. Physiol. Pflansen. 1973. V.164. P.234-247.

64. Erge D., Schumann В., Groger D. Influence of tryptophan and related compounds on ergot alkaloid formation in Claviceps purpurea (FR.) Tul //Z. Allg. Mikrobiol. 1984. V.24. N.10. P.667-678.

65. Fayos J., Lokensgard D., Clardy J., Cole R.J., Kirksey J.W. Structure of verruculogen, a tremor production peroxide from Penicillium verruculosum. //J.Am. Chem. Soe. 1974. V.96. P.6785-6787.

66. Finoli C., Vecchio A., Galli A., Dragoni I. Roquefortine С occurrence in blue cheese. //J. Food Prot. 2001. V.64. N.2. P.246-251.

67. Flieger M., Wurst M., Shelby R. Ergot alkaloids — sources, structures and analytical methods // Folia microbiol. 1997. V.42. №1. P. 3-30.

68. Floss H.G. Regulation of alkaloid synthesis in the ergot fungus. //In: Microbiology. Ed. D. Schlessinger, 1976. American Society for Microbiology. Washington. P.553-554.

69. Flowers A.E, Garson M.J., Webb R.I., Dumdei E.J., Charan R.D. Cellular origin of chlorinated diketopiperazines in the dictyoceratid sponge Dysidea herbacea (Keller). //Cell Tissue Res. 1998. V.292. N.3. P.597-607.

70. Frank R.K., Orth R., Ivankovic S., Kuhlmann M., Schmahl D. Investigations on carcinogenic effects of Penicillium caseicolum and P.roqueforti in rats. //Experentia. 1977. V.33. N.4. P.515-516.

71. Frisvad J. C., Filtenborg O. Classification of terverticillate penicillia based on profiles of mycotoxins and other secondary metabolites. //Appl. Environment. Microbiol. 1983. V.46. N.6. P.l301—1310.

72. Frisvad J. C., Filtenborg O. Terverticillate penicillia: chemotaxonomy and mycotoxin production.//Mycologia. 1989. V.81. N.6. P.837-861.

73. Frisvad J.C. Physiological criteria and mycotoxin production as aids in identification of common asymmetric penicillia. //Appl. Environment. Microbiol. 1981. V.41. N.3. P.568-579.

74. Frisvad J.C., Samson R.A. Filamentous fungi in foods and feeds: ecology, spoilage and mycotoxin production. In: Handbook of applied mycology. V.3. Foodsand feeds. Eds.: Arora D.K., Mukeiji K.G., Marth E.H. 1991. Marcel Dekker. New York. P.31-68;.

75. Geiser D.M., Dorner J.W., Horn B.W., Taylor J.W. The phylogenetics of mycotoxin and sclerotium production in Aspergillus flavus and Aspergillus oryzae. //Fungal Genetics and Biology. 2000. V.31. N.3. P.169-179.

76. Gorst-Allman C.P., Steyn P.S., Vleggaar R. The biosynthesis of roquefortine. An investigation of acetate and mevalonate incorporation using high field NMR spectroscopy. IIJ. Chem. Soc. Chem. Comm. 1982. P.652-658.

77. Gravesen S., Frisvad J.C., Samson R.A. Microfungi. 1994. Munksgaard. Copenhagen. 168 p.

78. Groger D., Tyler V.E. Jr. Alkaloid production by Claviceps paspali in submerged culture. //Lloydia. 1963. V.26. N.2. P.174-177.

79. Guarro J., Gene J., Stchigel A.M. Developments in Fungal Taxonomy. //Clinical Microbiology Reviews. 1999. V.12. N.3. p.454-500.

80. Haggblom P. Isolation of roquefortine С from feed grain. //Appl. Environment. Microbiol. 1990. V.56. N.9. P.2924-2926.

81. Handbook of experimental pharmacology. Eds.: Berde В., Schild H.O. V.49. Ergot alkaloids and related compounds. Springer-Verlag. Berlin. 1978. 732 p.

82. Heinstein P.F., Lee S.L., Floss H.G. Isolation of dimethylallylpyrophosphate: tryptophan dimethylallyltransferase from the ergot fungus (Claviceps species). //Biochem. Biophys. Res. Commun. 1971. V.44. N. P.1244.

83. Hirano A., Iwai J., Masuma R., Tei K., Omura S. Neoxaline, a new alkaloid produced by submered cultures of Penicillium and Aspergillus strains. //J. Antibiotics. 1979. V.22. N.8. P.781-785.

84. Horn B.W., Dorner J.W. Regional Differences in Production of Aflatoxin B1 and Cyclopiazonic Acid by Soil Isolates of Aspergillus flavus along a Transect within the United States. //Appl. Environment. Microbiol. 1999. Vol. 65. N.4. P.1444-1449.

85. Ibba M., Taylor S.J.C., Weedon C.M., Mantle P.G. Submerged fermentation of Penicillium paxilli biosynthesizing paxilline, a process inhibited by calcium-induced sporalation. //J. Gen. Microbiol. 1987. V.133. N. P.3109-3119.

86. Kawai K., Nozawa K., Nakajima S., Litaka Y. //Chem. Pharm. Bull. 1984. V.32. N.l. P.94-98.

87. Kinsella J.E., Hwang D.H. Enzymes of Penicillium roqueforti involved in the biosynthesis of cheese flavor. //CRC Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 1976. V.8. N.2. P.191-228. "

88. Kishan G.R., Harish C.A. Effect of aminoacid on ephedrine production in Ephedra ceraroliona. //Phytochemistry. 1979. V. 18. N.3. P.484-485.

89. Konda Y., Onda M., Hirano A., Omura S. Oxaline and neoxaline. //Chem. Pharm. Bull. 1982. V.28. N.10. P.2987-2993.

90. Kopp-Holtwiesche В., Rehm H.J. Antimicrobial action of roquefortine. //J. Environ. Pathol. Toxicol. Oncol. 1990. V.10. N.l-2. P.41-44.

91. Kozlovsky A.G., Vinokurova N.G., Adanin V.M., Grafe U. Piscarinines, new polycyclic diketopiperazine alkaloids from Penicillium piscarium VKM F-691. //Natural products letters. 2000. V. 14. N.5. P.333-340.

92. Krupyanko V.I., Reshetilova T.A. The effect of roquefortine on some enzymes of the gastroenteric tract. IX International IUPAC symposium on mycotoxins and phycotoxins. 1996. 27-31 May. Italy. Rome. P.215.

93. Kulakovskaya T.V., Reshetilova T.A., Kuvichkina T.N., Vinokurova N.G. Roquefortine excretion and uptake by Penicillium crustosum Thom VRM F-1746. //Process Biochemistry. 1997. V.32. N.l. P.29-33.

94. Kusch J., Rehm H.J. Regulation aspects of roquefortine production by free and Ca-alginate immobilized mycelia of Penicillium roquefortii. //Appl. Microbiol. Biotechnol. 1986. V.23. N.5. P. 394-399.

95. Lafont P., Debeaupuis J.-P., Gaillardin M., Payen J. Production of mycophenolic acid by Penicillium roqueforti strains. //Appl. Environment. Microbiol. 1979. V.37. №3. P.365-368.

96. Larroche C., Arpah M., Gros J.B. Methyl-ketone by . Ca-alginate/Eudrasit RL entrapped spores of Penicillium roqueforti. //Enzyme Microb. Technol. 1989. V.ll. N.l P.106-112.

97. Larroche С., Gros J.B. Batch and continuous 2-heptanone production Ca-alginate/Eudrasit RL entrapped spores of Penicillium roqueforti — application to aroma production. //Biotechnol. Bioeng. 1989. V.34. N.l. P.30-38.

98. Larsen Т.О., Frisvad J.C., Jensen, S.R. Aurantiamine, a diketopiperazine from two varieties of Penicillium aurantiogriseum. //Phytochemistry. 1992.-V.31. N.5. P. 16131615.

99. Liewen M.B., Marth E.H. Growth of sorbate-resistant and -sensitive strains of Penicillium roqueforti in the presence of sorbate. //J. Food Protect. 1985. V.48. N.4. P.525-529.

100. Makarieva T.N., Ilyin S.G., Stonik V.A., Lyssenko K.A., Denisenko V.A. Pibocin, the first ergoline marine alkaloid from the far-eastern ascidian Eudistoma sp. //Tetrahedron Letter. 1999. V.40. P.1591-1594.

101. Mantegani S., Brambilla E., Varasi M. Ergoline derivatives: receptor affinity and selectivity. //Farmaco. 1999. V.54. N.5. P.288-296.

102. Mantle P.G., Penny R.H.C. Tremorgenic mycotoxins and neurological disorders — a review. //The veterinary Annual. 1981. P.51-62.

103. Mantle P.G., Perera K.P., Maishman N.J., Mundy G.R. Biosynthesis of penitrems and roquefortine by Penicillium crustosum. //Appl. Environment. Microbiol. 1983. V.45. N3. P.1486-1490.

104. Mantle P.G., Wertheim J.S. Production of verruculogen during growth of Penicilllium raistrickii. //Trans. Br. Mycol. Soc. 1982. V.79. N.2. P.348-350.

105. Martin Gonzalez A., Benitez L., Soto Т., Rodriguez de Lecea J., Gutierrez J. С. A rapid bioassay to detect mycotoxins using a melanin precursor overproducer mutant of the ciliate Tetrahymena thermophila. //Cell Biol. Int. 1997. V.21. N.4. P.213-216.

106. M'islivec P., Dieter C., Bruce V.R. Effect of temperature and relative humidity of spore germination of mycotoxic species of Aspergillus and Penicillium. //Mycologia. 1975. V.67.N.6. P. 1187-1189.

107. Montastruc J.L., Rascol O., Senard J.M. Treatment of Parkinson's disease should begin with a dopamine agonist. //Mov. Disord. 1999. V.14. № 5. P.725-730.

108. Moreau С. Moulds, toxins and food. 2nd ed. 1979. John Wiley&Sons. Chichester. All p.

109. Nagel D.W., Pachler K.G., Steyn P.S., Vleggaar R„ Wessels Ph.L. X-ray structure of oxaline, a novel alkaloid from Penicilliun oxalicum. //J. Chem. Soc. Chem. Comm. 1974. V.96. N.5. P. 1021-1022.

110. Nairn N. Alkaloid production by some local fungi. //Zbl. Bact. 11 Abt. 1980. V.135. N.8.P.715-720.

111. Nqroozian E., Lagerwerf F., Lingeman H., Brinkman U. A., Kerkhoff M.A. Determination of roquefortine С in blue cheese using on-line column- switching liquid chromatography. III. Pharm. Biomed. Anal. 1999. V.20. N.3. P:611-619.

112. Ohmomo S., Kitamoto H.K., Nakajima T. Detection of roquefortines in Penicillium roqueforti isolated from molded maize silage. IIJ. Sci. Food Agr. 1994. V.64. N.2 P.211-215.

113. Ohmomo S., Miyazaki K., Ohashi Т., Abe M. On the mechanism for the formation of Indole Alkaloids in Penicillium concavo-rugulosum. //Agr. Biol. Chem. 1977. V.41. N.9. P. 1707-1710.

114. Ohmomo S., Ohashi Т., Abe M. On the mechanism of the formation of indole alkaloids in Penicillium roqueforti. //Agric. Biol. Chem. 1979. V.43. N.10. P.2035-2038.

115. Ohmomo S., Sato Т., Utagava Т., Abe M. Isolation of festuclavine and three new indole alkaloids, roquefortine А, В and С from the cultures of Penicillium roqueforti //Agr. Biol. Chem. 1975. V.37. P.1333-1334.

116. Olivigni F.J. Bullerman L.B. Production of penicillic acid and patulin by an atypical Penicillium roqueforti isolate. //Appl. Environ. Microbiol. 1978. V.35. N.2. P.435-438.

117. Otsuka H., Quigley F.R., Groger D., Anderson J.A., Floss H G. In vivo and in vitro evidence for N-methylation as the second pathway-specific step in ergoline biosynthesis. //Planta Medica. 1980. V.40. N.l. P.109-114.

118. Patterson D.S.P., Shreeve B.J., Roberts B.A., McDonald S.M. Verruculogen produced by soil fungi in England and Wales. //Appl.Environ.Microbiol. 1981. V.42. N.5. R916-917.

119. Pirt S.J., Callow D.S. Continuos-flow culture of the filamentous mold Penicillium chrysogenum and the control of its morphology. //Nature. 1959. V.184. N.4683. P.307-310.

120. Pitt J.I. Penicillium viridicatum, Penicillium verrucosum and production of ochratoxin A. //Appl. Environ. Microbiol. 1987. V.53. N.2. P.266-269.

121. Pitt J.I., Hocking A.D. Fungi and Food Spoilage. 1985. Academic Press, Sydney. 550 p.

122. Pitt J.I., Leistner L. Toxigenic Penicillium species. In: Eds.: Smith I.E., Henderson R.S. Mycotoxins and animal foods. 1991. CRC Press, London, P.81-99.

123. Plate R., Hermkens P.H.H., Behm H., Ottenheijm H.C.J. //J. Org. Chem. 1987. V.52. N.2. P.560-564.

124. Quilco A., Panizzi L. //Chem. Ber. 1943.V.76. p.348.

125. Rehacek Z., Sajdl P. Ergot alkaloids. Chemistry, biological effect, biotechnology. Praha. 1990. 383p.

126. Roberts B.A., Marcello M.G., Carlton W.W., Tuite J.E. The isolation and identification of brevianamide A from corn cultures of Penicillium viridicatum. //Lloidia. 1973. V.36. N.5. P.440-442.

127. Roberts B.A., Strays J.W. The isolation of brevianamide A from Penicillium ochraceus. //Lloidia. 1975. V.38. P.355-366.

128. Sambrook J, Fritsch E.F, Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual. 1989. Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, N.Y. 1200 p.

129. Schell M.M. Tremorgenic toxin intoxication. //Veterinary Medicine. 2000. V.95. N.4. P.283-286.

130. Schoch U., Luthy J., Schlatter C. Mycotoxins in mold-ripened cheese. //Mitt Geb. Lebensmittelunters Hyg. 1983. V.74. N.l. P.50-59.

131. Schroeder H.W., Cole R.J., Hein H., Kirksey J.W. Tremorgenic mycotoxjn from Aspergillus caespitosus. //Appl. Microbiol. 1975. V.29. N.6. P.857-858.

132. Schwarz G., Eich E. Influence of ergot alkaloids on growth of Streptomyces purpurescens and production of its secondary metabolites. //Planta Med. 1983. V.47. N.4. P.212-214.

133. Scott P.M. Toxins of Penicillium Species Used in Cheese Manufacture. //J. Food Protect. 1981. V.44. N.9. P.702-710.

134. Scott P.M., Kennedy B.P.C. Analysis of blue cheese for roquefortine and other alkaloids from Penicillium roqueforti .//J. Agric. Food Chem. 1976. V.24. №4. P.865-868.

135. Scott P.M., Kennedy B.P.C., Harwig J., Blanchfield B.J. Study of conditions for production of roquefortine and other metabolites of Penicillium roqueforti. //Appl. Environment. Microbiol. 1977. V.33. N.2. P.249-253.

136. Scouboe P., Frisvad J.C., Taylor J.W., Lauritsen D., Boysen M., Rossen L. Phylogenetic analysis of nucleotide sequences from the ITS region of terverticillate Penicillium species. //Mycol. Res. 1999. V.103. N.7. P.873-881.

137. Sharpell F.H. Microbial flavors and fragrances. In: Moo-Young M. (Ed.). Comprehensive biotechnology. The principles, applications, and regulations of biotechnology in industry, agriculture, and medicine. 1985. New York. Pergamon Press. P.965-981.

138. Soobok L.Hong, James E.Robbers Genetics of alkaloid formation in Penicillium roquefortii. //Appl.and Environmental Microbiol. 1985. V.50. N.3. P.558-561.

139. Steyn P. S., Vleggaar R. Roquefortine, a intermediate in the biosynthesis of oxaline in cultures of Penicillium oxalicum. //J. Chem. Soc. Chem. Comm. 1983. P.560-561.

140. Steyn P.S., Yemmali M. Some newly discovered mycotoxins. //Ann.Nutr.Alim. 1977. V.91, p. 651-662.

141. Still P.E., Wei R., Smalley E.B., Strong F.M. A mycotoxin from Penicillium roquefortii isolated from toxic cattle feed. //Fed. Proceedings. 1972. V.31. N.2. P.733-737.

142. Taniwaki M.H., Hocking A.D., Pittt J.I., Fleet G.H. Growth of fungi and mycotoxin production on cheese under modified atmospheres. //Int.J.Food.Microbiol. 2001. V. 68. N.l-2. P.125-133.

143. Terashima Т., Kuroda Y., Kaneko Y. Studies on alkaloids of Streptomyces. I. Screening of alkaloid-producing microorganisms and pharmacological activity of alkaloids.//Agr. Biol. Chem. 1970.V.34. N.5. P.747-755.

144. Trinci A.P.J. Kinetics of growth of mycelial pellets of Aspergillus nidulans. //Arch. Microbiol. 1970. V.73. N.4. P.353-367.

145. Tsubaki K. Penicillium isolated from toxic ensilage. //J. Appl. Mycol. Soc. Japan. 1956. V.l . P.6-7.

146. Tuller G., Armbruster G., Wiedenmann S., Hanichen Т., Schams D., Bauer J. Occurrence of roquefortine in silage — toxicological relevance to sheep. //J. Animal Physiology and Animal Nutrition. 1998. V.80. N2-5. P.246-249.

147. Uramoto M., Tanabe M., Hirotsu K., Clardy J. A new tremorgenic metabolite related to verruculogen from Penicillium verruculosum. //Heterocycles. 1982. N.17. P.349-353.

148. Vesonder R.F., Tjarks L., Rohwedder W., Kieswetter D.O. Indole metabolites of Penicillium cyclopium NRRL 6093. //Experientia. 1980. V36. N.ll. P. 1306-1307.

149. Vinas I., Dadon J., Sanchis V. Citrinin-producing capacity of Penicillium expansum strains from apple packinghouses of Lerida (Spain). //Int. J. Food Microbiol. 1993. V.19. N.2. P.153-156

150. Vining L.C., Mclnnes A.G., Smith D.G., Wright J.L.C., Taber W.A. Dimeric clavine alkaloids, produced by Penicillium citreo-viride. //In: Overproduction of microbial products (Ed. V.Krumphanzl et al.). Academic Press. 1982. P.243-251.

151. Wagener R.E., Davis N.D., Diener U.L. Penitrim A and Roquefortine Production by Penicillium commune. //Appl. Environ. Microbiol. 1980. V.39. N.4. P.882-887.

152. Willingale J., Perera K.P.C., Mantle P.G. An intermediary role for the tremorgenic mycotoxin TR-2 in the biosynthesis of verruculogen. //Biochem.J. 1983. V.214. P.991-993.

153. Wyllie T.D. Mycotoxins and mycotoxicoses: an overview. In: Proceedings of the symposium on Mycotoxins and mycotoxicoses. 1972. USA. Colombia. P.1-28.

154. Yamazaki M., Suzuki S., Myiaki K. Tremorgenic toxins from Aspergillus fumigatus Fres. //Chem. Pharm. Bull. 1971. V.19. P.1739-1740.