Модифицированные полимерные микросферы в качестве носителей биолигандов в реакции латексной агглютинации тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.06, кандидат наук Бахтина, Анна Владимировна

• Бахтина, Анна Владимировна
• кандидат наук
• 2018

Оглавление диссертации кандидат наук Бахтина, Анна Владимировна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Полимерные микросферы в качестве носителей биолигандов в реакциях латексной агглютинации

1.2. Методы синтеза полимерных суспензий

1.3. Полимерные микросферы, содержащие на поверхности специфические лиганды, для аффинного связывания с биолигандами

Глава 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Исходные вещества

2.2. Методы исследования

2.2.1. Получение полистирольных хлорметилированных микросфер

2.2.2. Определение содержания полимера в суспензиях

2.2.3. Получение ПГМА-ЭГДМА полимерных микросфер методом затравочной полимеризации

2.2.4. Определение размеров частиц

2.2.5. Определение скорости седиментации полимерных микросфер

2.2.6. Определение краевого угла смачивания

2.2.7. Определение агрегативной устойчивости полимерных частиц

2.2.8. Анализ наличия функциональных групп

2.2.9. Получение диагностической тест-системы путем ковалентной иммобилизации дифтерийного анатоксина на поверхность полимерных частиц через карбодиимид

2.2.10. Постановка и учет результатов реакции латексной агглютинации

2.2.11. Исследование структуры полимерных частиц методом электронной сканирующей микроскопии

2.2.12. Исследование структуры полимерных частиц методом электронной просвечивающей микроскопии

2.2.13. Исследование структуры полимерных частиц с помощью метода ионного травления

2

2.2.14. Проведение реакции Майяра между аминогруппами полимерных микросфер и глюкозой, декстранами разной молекулярной массы

2.2.15. Проведение реакции Майяра между аминокислотой - глицином и глюкозой и декстранами разной молекулярной массы

2.2.16. Исследование диффузии молекул флуоресцентных производных декстранов и глюкозы в поры полимерных микросфер

2.2.17. Оценка флуоресценции продуктов реакции Майяра в различных средах методом конфокальной микроскопии

2.2.18. Получение диагностической тест-системы на основе полимерных микросфер, модифицированных продуктами реакции Майяра и танином

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Физико-химические свойства модифицированных полистирольных микросфер

3.2. Изучение структуры полимерных микросфер

3.3. Полиглицидилметакрилатные микросферы в качестве носителей биолигандов

3.3.1. Модификация и физико-химические свойства сополимерных глицидилметакрилат-этиленгликольдиметакрилатных (ПГМА-ЭГДМА) микросфер

3.3.2. Проведение реакции латексной агглютинации с использованием полимерных микросфер

3.4. Роль ПАВ при формировании отрицательного контроля в лунках плашки при протекании реакции латексной агглютинации

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

В руководстве работы принимал участие д.мед.наук, проф. Гусев С.А.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Модифицированные полимерные микросферы в качестве носителей биолигандов в реакции латексной агглютинации»

ВВЕДЕНИЕ

Гемагглютинационные диагностические тест-системы широко применяются в медицине. Они основаны на протекании иммунохимической реакции между эритроцитами, содержащими иммобилизованный на их поверхность антиген или антитело, и специфическими антителами или антигенами, содержащимися в исследуемых образцах. Гемагглютинационные диагностикумы имеют высокую чувствительность и специфичность и отличаются простотой постановки исследований, невысокой стоимостью и быстротой получения результатов. Однако устойчивость тест-систем во время хранения невысокая, что объясняется использованием в качестве носителей биолигандов эритроцитов. Эритроциты получают из крови птиц и млекопитающих и их свойства зависят от источника и способа выделения, они трудно поддаются стандартизации. В связи с этим замена эритроцитов на синтетические носители является актуальной и важной проблемой для создания диагностических тест-систем.

Среди синтетических носителей, предлагаемых для замены эритроцитов, перспективны функциональные полимерные микросферы, что обусловлено возможностью их синтеза различной полимерной природы с узким распределением по диаметрам, в широком интервале их значений.

В настоящее время многие фирмы выпускают диагностикумы на различные виды заболеваний. Анализ работ по синтезу полимерных микросфер для использования их в качестве носителей биолигандов позволил сделать вывод об их эмпирическом характере. Именно это является причиной более низкой чувствительности тест-систем по сравнению с гемагглютинационными, и невысокие сроки хранения. Таким образом возникает необходимость постановки систематических исследований по выявлению физико-химических свойств полимерных микросфер, которые при иммобилизации биолиганда на поверхность полимерных микросфер обеспечат его нативную конформацию и высокую чувствительность тест-систем.

Цель работы состоит в создании полимерных микросфер со свойствами, позволяющими получать диагностические тест-системы на их основе, с чувствительностью, аналогичной эритроцитарным диагностикумам.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Синтезировать хлорметилированные ПСТ-ДВБ и ПГМА-ЭГДМА микросферы с узким распределением по размерам, с диаметрами 1-5,0 мкм, устойчивые в физиологическом растворе, со скоростью седиментации в физиологическом растворе 3-8 мм/час.

2. Провести модификацию синтезированных сополимерных микросфер с диаметрами 3-5 мкм:

- путем аминирования (определить условия, природу аминирующего агента, среду аминирования);

- путем иммобилизации на поверхность аминированных полимерных микросфер декстранов разной молекулярной массы с последующим проведением реакции Майяра для ковалентного связывания их с поверхностью полимера;

3. Методом конфокальной микроскопии оценить протекание реакции Майяра на поверхности и в объеме полимерных микросфер;

4. Изучить структуру полимерных микросфер методами ионного травления и электронной микроскопии;

5. Изучить седиментацию полимерных микросфер в буферном растворе в лунках планшета и найти условия формирования четкого отрицательного контроля при проведении реакции латексной агглютинации;

6. Провести лабораторные испытания диагностических тест-систем, созданных на основе модифицированных полимерных микросфер, и сравнить их чувствительность с аналогичными параметрами эритроцитарных диагностикумов (титр 1:6400);

Научная новизна

- определены условия модификации синтезированных сополимерных микросфер с заданным комплексом свойств путем аминирования первичными аминами. Впервые показано влияние природы аминирующего агента (этилендиамина и гексаметилендиамина) и среды аминирования (воды, н-пропанола) на физико-химические свойства сополимеров (гидрофильность поверхности, ^-потенциал, скорость седиментации, содержание функциональных (амино)групп.

- установлено, что содержание активированных мономерных звеньев на поверхности полимерных микросфер должно составлять 25-50%, что в сочетании с остальными свойствами полимерных микросфер (диаметром, распределением по размерам, устойчивостью и скоростью седиментации в физиологических растворах) обеспечивает нативность антигенной структуры биолиганда, иммобилизованного на их поверхность, и высокую чувствительность реакции латексной агглютинации (титр 1:6400).

- методами ионного травления и электронной микроскопии показано, что полимерные микросферы имеют неоднородную по плотности пористую структуру, размер пор составляет величину порядка 30 нм.

- впервые проведена модификация поверхности сополимерных микросфер декстранами разной молекулярной массы, показано увеличение устойчивости полимерных микросфер в воде, растворах хлорида натрия и при хранении.

- впервые использована реакция Майяра как наиболее простой способ ковалентной иммобилизации сахаридов на поверхность аминированных сополимерных микросфер.

- методом конфокальной флуоресцентной микроскопии показано, что реакция Майяра протекает и на поверхности полимерных микросфер и во всем их объеме.

- показано, что модифицированные полиглицидилметакрилат-этиленгликольдиметакрилатные микросферы, содержащие равное количество

сомономеров, характеризуются оптимальными физико-химическими свойствами и чувствительность диагностических тест-систем, созданных с их использованием, аналогична наблюдаемой при использовании эритроцитарных тест-систем (титр 1:6400), что позволило их рекомендовать в качестве носителей биолиганда вместо эритроцитов.

- показано, что при проведении реакции латексной агглютинации в присутствии небольших добавок (~10-5 моль/г) неионных ПАВ (Твина 80, Твина 20 и тритона Х100) наблюдается четкое формирование агглютината-отрицательного контроля реакции («пуговки»).

Практическая значимость работы

Разработанные диагностические тест-системы с использованием модифицированных полистирол-дивинилбензольных и полиглицидилметакрилат-этиленгликольдиметакрилатных микросфер в качестве носителей биолигандов были апробированы на производственной базе ООО «Биодиагностика» с положительным результатом для определения уровня антител к дифтерийному анатоксину в сыворотках крови человека. Полимерные микросферы рекомендованы для создания диагностических тест-систем для лабораторной диагностики различных заболеваний.

Автор защищает:

- результаты исследования физико-химических свойств модифицированных полистирол-дивинилбензольных и полиглицидилметакрилат-этиленгликольдиметакрилатных микросфер;

- выбор аминирующего агента, среды аминирования и их влияние на физико-химические свойства сополимерных микросфер;

- результаты иссдедования структуры полимерных микросфер;

- использование реакции Майяра между аминогруппами полимерных микросфер и альдегидными группами молекул декстранов разной молекулярной массы для модификации поверхности сополимерных микросфер и определения размеров пор;

- влияние природы аминирующего агента и концентрации аминогрупп на поверхности полимерных микросфер на формирование агглютината в процессе реакции латексной агглютинации;

- улучшение контроля реакции латексной агглютинации в присутствии неионных ПАВ.

Глава 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Полимерные микросферы нашли широкое применение в различных

областях науки и техники. Они могут применяться в качестве матрицы для выращивания биологических тканей, в качестве калибровочных эталонов в электронной и оптической микроскопии, светорассеивании, при счете аэрозольных частиц и малоугловой рефракции рентгеновских лучей, счета вирусных частиц, определения размеров пор фильтров и биологических мембран и т.д [1-24]. Перспективно применение полимерных микросфер в качестве носителей биолигандов вместо эритроцитов при создании диагностических тест-систем для проведения полуколичественного анализа методом реакции латексной агглютинации (РЛА) [3-14].

Другое применение полимерные микросферы, окрашенные люминесцентным красителем, нашли в изучении строения сосудистого русла [17]. Метод заключается в введении в сосуды флуоресцентных меток различного диаметра, которые постепенно заполняют сосуды, позволяя получить трехмерную модель сосудистого русла, и проанализировать плотность (количество) сосудов в объеме, а также определить их пространственное расположение. Такие полимерные микросферы должны флуоресцировать, обладать низкой адгезивной активностью к внутренней поверхности сосуда, что исключит их прилипание к стенкам сосуда, и не образовывать коньюгатов друг с другом и с биологическими молекулами.

Еще одним применением полимерных микросфер может быть доставка радиоактивных изотопов в опухоль больного и её последующее разрушение ионизирующим излучением. Такие технологии лечения с различными способами доставки радионуклидов успешно применяются для лечения рака предстательной железы, рака щитовидной железы и других заболеваний [10,11].

1.1. Полимерные микросферы в качестве носителей биолигандов в

реакциях латексной агглютинации

Экспресс-диагностика с использованием полимерных микросфер в качестве носителей белка все шире входит в повседневную практическую работу клинико-диагностических лабораторий, вытесняя громоздкие и трудоемкие методы анализа [3-10, 19-23]. Наибольшее развитие получили диагностические тест-системы, основанные на реакции латекс-агглютинации (РЛА), протекающей между антигеном и антителом.

Схема РЛА показана на рис. 1.1.1, где АГ-Антиген, АТ-антитело.

&

* * * *

Полимерные микросферы АТ РЛА,узлами сетки

иммоОилизированные АГ служат молекулы АТ

Рис. 1.1.1. Схема протекания реакции латекс-агглютинации.

Агглютинация проявляется в слипании и осаждении полимерных частиц из первоначально стабильной суспензии [116]. В микропланшетах, в которых проводят РЛА, агглютинация проявляется в виде равномерного покрытия частицами поверхности лунки, тогда как в контроле на дне лунки образуется точечный латексный преципитат [1,56,116].

Главное неудобство визуального наблюдения РЛА состоит в том, что часто бывает трудно точно определить конечную точку агглютинации, так как белый цвет полимерной суспензии или осадка плохо воспринимается глазом. Окрашивание латекса в голубой, красный, желтый, зеленый и другие цвета позволяет преодолеть этот недостаток и облегчает наблюдение РЛА.

Вместо эритроцитов было предложено использовать и другие носители биолигандов [11,12,20,25,32,35-39,43,59-62,69,72,101,116], которые разделили на две группы:

— одна из них представляет собой биологические объекты - бактерии, липосомы, эритроциты, крахмальные шарики и др.;

— другая - небиологические объекты - активированный уголь, коллоидное золото, полимерные микросферы, стеклянные шарики.

Каждая группа характеризуется специфическими свойствами, определяющими область их применения. Основной недостаток биологических носителей заключаются в том, что они биодеградируемы и трудно поддаются контролю. Полимерные микросферы обладают рядом преимуществ перед биологическими носителями, которые заключаются в возможности варьировать поверхностные свойства и размер микросфер в широком диапазоне значений с сохранением узкого распределения частиц по размерам, вводить функциональные группы, необходимые для связывания с лигандами на стадии синтеза. Кроме того, они отличаются устойчивостью при хранении, возможностью наполнения микросфер добавками, придающими им новые специфические свойства и могут быть охарактеризованы по химическому строению, заряду, размеру частиц и распределению частиц по размерам (РЧР) [41-46].

Достоинством полимерных микросфер является воспроизводимость их физико-химических свойств в различных производственных партиях, что позволяет стандартизировать полученные тест-системы и производить диагностические наборы в промышленном масштабе.

Большое разнообразие свойств полимерных суспензий позволяет иммобилизовать на поверхности полимерных микросфер практически любые биологические вещества, начиная от антител и кончая антивирусами. Биологическая инертность полимерных суспензий позволяет полностью исключить возможность перекрестных неспецифических реакций с исследуемыми образцами, а также обеспечивает длительную сохранность готовых тест-систем

[13-23]. Однотипность техники постановки реакции латексной агглютинации делает этот метод диагностики легким и несложным.

Нельзя не отметить быстроту и удобство постановки реакции латексной агглютинации на стекле (2-10 мин.), отсутствие необходимости в специальном оборудовании и приспособлениях, возможность проведения больших партий анализов, невысокую стоимость и надежность метода. Этот метод позволяет проводить исследование не только в лабораториях, но и в полевых условиях [24,32,39,45].

Для исследований может быть использован любой материал от больных-сыворотка крови, слюна, моча, мокроты и т.д., а также из объектов окружающей среды - вода, смывы, почва, животные, аэрозоли и т.д.

Результат РЛА носит только качественный характер. Для получения полуколичественных результатов - для оценки степени агглютинации используют титры [116]. Под титром антител понимают то наибольшее разведение сыворотки или иной жидкости, при котором реакция антиген-антитело все еще учитывается [43,44,116]. Для количественной оценки агглютинации применяют такие оптические методы как: турбидиметрия [21,22], нефелометрия [26], а также радиоиммунологические методы [24,81].

Считают, что метод латексной агглютинации по чувствительности и специфичности превосходит многие классические серологические реакции и уступает лишь методам «третьего» поколения, например, радиоиммунологическому исследованию. В то же время при тщательной отработке методики получения латексных диагностикумов, соблюдении оптимальных условий их приготовления и постановки самой реакции метод латексной агглютинации по чувствительности и специфичности может приближаться к самым современным иммунологическим методам, в том числе радиоиммунологическому и иммуноферментному [43-45]. Так, например, было показано, что поверхностный антиген гепатита В (HBsAg) и чумного микроба выявляется в конечной концентрации до 10-4 текограмм/мл, возбудители чумы и

бруцеллеза могут быть обнаружены при концентрации до 10 микрочастиц/мл [48,72,73,87-88].

В то же время РЛА значительно проще в постановке, не требует какой-либо специальной аппаратуры и высококвалифицированных специалистов. Особенно полезен этот метод при проведении массовых обследований.

Тесты РЛА основаны на визуальной оценке характера агглютинации «слипания» полимерных частиц, содержащих на поверхности биолиганды (антитела или антигены), способные аффинно связываться с детектируемым компонентом (антигеном, антителом). Вследствие того, что антиген и антитело могут взаимодействовать одновременно с несколькими молекулами друг друга (агглютинировать), образуются пространственные сетки-агломераты. Обнаружение сеток-агломератов, а,следовательно, и обнаружение того или иного вида антигенов (антител) может быть визуально зарегистрировано, как скопление частиц носителей, содержащих на своей поверхности биолиганды (антиген, антитело) [13-23].

Среди синтетических частиц-носителей перспективными оказались полистирольные микросферы, которые могут быть синтезированы с узким распределением частиц по размерам (РЧР) в широком интервале диаметров, с определенным строением межфазного адсорбционного слоя. Полистирол, благодаря своей оптической прозрачности, высокой связывающей способности, прочности и хорошей воспроизводимости свойств, успешно используется в качестве носителя при разработке диагностических тест-систем [63-66,74,76-80].

К полимерным частицам предъявляются следующие требования: —узкое распределение по размеру;

— сферическая форма и наличие фунцциональных групп; —устойчивость в физиологическом растворе;

— способность присоединять биологические макромолекулы без значительного изменения их функциональной активности;

— обладать воспроизводимыми свойствами.

Размер полимерных микросфер регулируется методами и условиями их синтеза. Например, методом эмульсионной полимеризации получают полимерные суспензии с диаметрами частиц 0,03-0,2 мкм, суспензионной-0,3 мкм до 1 мм, осадительной-1-100 мкм, дисперсионной-1-15 мкм и затравочной 1-10 мкм. Типичные значения коэффициента вариации (мера отклонения диаметров частиц от среднего значения) составляют 1-3% (для частиц с диаметром в интервале 0,110 мкм), 10-30% (для частиц с диаметром в интервалах менее 0,06 и более 10 мкм) [41,44,48,63].

1.2. Методы синтеза полимерных суспензий

Кратко рассмотрим основные методы синтеза полимерных суспензий:

Эмульсионная полимеризация.

Методом эмульсионной полимеризации получают полимерные суспензии с широким распределением по размеру с диаметрами, не превышающими 0,2 мкм. Это обусловлено формированием частиц по разным механизмам: из мицелл ПАВ, микрокапель мономера и по механизму гомогенной нуклеации [41,44,55-58]. Узкое распределение частиц по размерам получают при полимеризации мономеров в присутствии нерастворимых в воде ПАВ [53] или при использовании специальных методов полимеризации, таких как дробное введение компонентов рецепта полимеризации (мономера, ПАВ) по ходу процесса [41,42,51].

Суспензионная полимеризация.

Сущность метода суспензионной полимеризации состоит в том, что мономер или смесь мономеров диспергируют в жидкой фазе, главным образом в водной, путем механического перемешивания в присутствии стабилизаторов таких как: крахмал, желатин, ацетилцеллюлоза, натриевые и калиевые соли полиакриловой и полиметакриловой кислот, сополимеры гидрофобных мономеров с малеиновым ангидридом и др. Эффективность защитного действия стабилизатора невысокая из-за их низкой концентрации, и образование частиц протекает по коагуляционному механизму. Размер полученных при этом

полимерных дисперсий идентичен размеру исходных капель мономера и колеблется от десятков микрон до нескольких миллиметров.

Средний диаметр частиц полимерной дисперсии, образующихся при суспензионной полимеризации, распределение их по размерам, устойчивость реакционной системы и конечной суспензии полимерных частиц определяются множеством факторов, таких как природа инициатора и стабилизатора, температура процесса, вязкость системы, рН среды, массовое соотношение мономерной и водной фаз, а также скорость перемешивания, тип перемешивающего устройства и форма реакционного сосуда [42]. Обычно распределение частиц полимерной суспензии широкое [51,52,66].

Осадительная полимеризация.

Получение полимерных суспензий с узким распределением по размерам возможно при использовании специальной методологии проведения синтеза: дробного введения компонентов по ходу полимеризации, полимеризации в условиях синтеза стабилизатора на границе раздела фаз и т.д.

Обычно полимеризацию проводят в средах, в которых образующийся при синтезе полимер нерастворим. Недостатком этого способа синтеза является плохая воспроизводимость результатов и невысокая устойчивость в буферных растворах [63,64,66].

Дисперсионная полимеризация.

Неотъемлемыми компонентами дисперсионной полимеризации являются мономер, растворитель/нерастворитель, инициатор и стерический стабилизатор [104,109]. Основное требование, предъявляемое к мономеру- растворимость в дисперсионной среде и, напротив, нерастворимость в ней образующегося из него полимера. Используемый растворитель обычно имеет низкую диэлектрическую константу, поэтому нельзя использовать обычные ПАВ, обеспечивающие создание электростатической стабилизации частиц. Для получения устойчивых полимерных суспензий применяют стерические стабилизаторы. Чтобы стабилизатор был эффективным, он должен быть амфипатным, т.е. должен

содержать как «якорь»- сегмент, обладающий сродством к поверхности частицы конечного полимера, так и сегмент, растворимый в реакционной среде. Используемые алифатические стабилизаторы делятся на три класса: 1) гомополимеры 2) блок- и графт - сополимеры 3) макромономеры. Для дисперсионной полимеризации используются как полярные, так и неполярные растворители. Во многих случаях полимеризацию проводят в спиртах, вода добавляется для регулирования растворимости олигомера в дисперсионной среде и, таким образом, для регулирования размеров частиц. Несмотря на большое количество публикаций по изучению механизма и кинетических закономерностей полимеризации мономеров, исследования в этой области продолжаются с целью изучения начальной стадии процесса для понимания механизма образования полимерных частиц [107-109]. На рис. 1.2.1 приведен схематично механизм дисперсионной полимеризации, принятый многими исследователями.

(а) Гомогенный раствор мономера, инициатора и стабилизатора. При распаде инициатора и образующихся радикалов образуются (в) олигомерные радикалы, которые, при достижении критической длины высаживаются из раствора, начинается прививка на молекулы стабилизатора. (с) Самонуклеация и агрегация первичных частиц-стадия. Рост частиц за счет набухания мономера и последующей полимеризации внутри частиц-стадия. (е) Продолжение роста частиц может происходить за счет поглощения полимера с образованием конечных частиц. Этим методом получают полимерные суспензии с узким

vA/W1 Stabilizer AiVAW Polymer

M Monomer

Initiator

Рис.1.2.1. Механизм дисперсионной полимеризации

распределением по размерам в широком интервале значений диаметров (3-20 мкм).

Затравочная полимеризация.

Данный метод удобен тем, что позволяет регулировать как размер частиц полимерной суспензии, так и природу функциональных групп на их поверхности [63,66,110]. Важной особенностью затравочной полимеризации является создание частиц с морфологией типа "ядро-оболочка», что открывает возможность синтеза полимерных микросфер, содержащих на поверхности функциональные группы, которые способны образовывать ковалентную связь с функциональными группами биолиганда. Для получения полимеров с различными функциональными группами в широких пределах варьируют концентрацию функционального сомономера [63,66].

Каждым из этих способов синтеза при определенных условиях можно получить полимерные суспензии с определенным диаметром частиц, узким распределением частиц по размерам, стабильностью в физиологических растворах и при хранении, наличием функциональных групп определенной природы и их концентрации на поверхности частиц.

Впервые были успешно применены поливинилтолуольные и полистирольные микросферы в качестве носителей антител при создании тест-систем для выявления антигенов ревматоидного артрита [43]. Сообщалось, что взаимодействие антигенов, находящихся в сыворотке крови пациента, с у-глобулином, адсорбированным на поверхность микросфер суспензии, привело к слипанию (агглютинации) полимерных частиц с образованием крупных агломератов, легко различимых невооруженным глазом. Вслед за этим появились публикации по использованию полистирольных микросфер, на поверхность которых физически адсорбировали биолиганды при создании диагностических тест-систем на другие виды заболеваний [1-24].

Однако, удачные лабораторные разработки таких тест-систем часто не могли быть воспроизведены при масштабировании. Многие исследователи

ориентировались на универсальность полимерного носителя при физической адсорбции на его поверхность биолигандов различной природы, строения, молекулярной массы и т.д. Однако ряд серьезных недостатков, среди которых следует выделить возможную десорбцию биолиганда с поверхности полимерных микросфер, обуславливают невысокую диагностическую эффективность тест-систем, недостаточное время их хранения, а также невоспроизводимость результатов анализа [63,66].

Свободными от указанных недостатков оказались полимерные суспензии с функциональными группами на поверхности, способными к ковалентному взаимодействию с функциональными группами биолигандов [31,32,43,44,46]. Проведенные исследования позволили сформулировать требования к полимерным частицам, используемым в качестве носителей биолигандов [63,66]:

1. размер полимерных микросфер от 0,2 до 0,8 мкм для слайдовых агглютинационных тестов; от 1,0 до 5,0 мкм для седиментационных агглютинационных тестов;

2. полимерная суспензия должна содержать частицы с узким распределением по размерам для обеспечения высокой чувствительности тестов, работающих по принципу реакции латекс-агглютинации;

3. полимерные микросферы должны на поверхности содержать функциональные группы, способные ковалентно связываться с функциональными группами молекул белка при максимальном сохранении их специфической и функциональной активности;

4. полимерные микросферы должны сохранять устойчивость в процессе их очистки, получении тест-систем и при длительном их хранении в буферных растворах.

В качестве функциональных полимерных суспензий были использованы полиметилметакрилатные, поли-2-гидроксиэтилметакрилатные,

полиакролеиновые [49,75,76,81-83,94,98,105,111]. Эти суспензии по сравнению с

суспензиями, несодержащими функциональных групп, имели следующие преимущества:

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Бахтина, Анна Владимировна, 2018 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Singer J.M, Plotz С. The latex fixation test. [.Application to the serologis diagnosis of rheumatoid arthritis. // Am. J.Med.-1956, - Vol.21 - P.888 - 893.

2. Чайка H.A. Применение реакции агглютинации латекса для диагностики паразитарных болезней. // Мед.паразитол. - 1982. - №2. - с.65 - 72.

3. Демина А.А., Самсонова И.М., Блинковский А.М., Журавлева Г.В., Полинский А.С., Ярославов А.А. Методы микроанализа: латекс - агглютинация и иммуноферментный анализ в диагностике менингококковой инфекции. //Ж-л микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 1987. - №9 - с.94-99.

4. Демина А.А., Ильина Т.В. Специфические латекс-препараты в этиологической диагностике гнойных бактериальных менингитов. // Ж-л микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 1985. - №11. с.3-6.

5. Александрова И.А., Анцифирова Н.Г., Александров А.Д., Мороз А.Ф. Разработка метода латекс-агглютинации для диагностики синегнойной инфекции. // Ж-л микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 1986. - №4. -с.10 -14.

6. Ruggeri F.M. Laboratory diagnosis of rotavirus infection in Diarrhoeal patienta by Immunoenzymatic and Latex - agglutination assays. // Microbiol. - 1992.-Vol.15. - №3. - P.249-257.

7. Temstet A. Evaluation of a monoclonal Antibody -Based Latex -agglutination Test for diagnosis of Cruptococ-cosis - Comparison with two test using Polyclonal antibodies. // J.Clin. Microbiol. - 1992. Vol.30. - №10. - p.2544 - 2550.

8. Hirschl A.M., Hirschl M.M., Berger J., Boffer M.L. Evaluation of a commercial latex test for serological diagnosis of helicobacter - Pylor: infection in freated and untreafed patients. // Eur. J. Clin. Microbiol. - 1991. - Vol.10. - №11. -P.971 - 974.

9. Leinonen M., Herva E. The latex agglutination test for the diagnosis of meningococcal and haemophilus influenzae meningitis. // Scand. J.Infect. Dis. - 1977. Vol.9. - №3. - P.187-191.

10. Severin W.P.J. Latex agglutination in the diagnosis of meningococcal meningitis.// J.Clin.Path. - 1972. - Vol.25. - P.1079 - 1982.

11. Duagn. Latex agglutination test for cytomegalovirus antibody screening of transplant donors-impotant aspects. // Microbiol. Infect Dis. - 1992. - Vol.15 - №5. -P.407-409.

12. Characteristics of inert beads provoking humoral immune responses in gallerin Mellonella Larval. // J.Insect Physiol. - 1992. - Vol.38 - №7, - P.533-541.

13. Misengard R.J. Development of rapid latex agglutination test for Periodontel Pathogens.// J.Periodontal. - 1992. - Vol.63 - №7 - P.611-617.

14. Hazeleger W.C., Beumer R.R., Rombouts F.M. The use of latex agglutination test for determining Campylobacter species. //Microbiol. - 1992.-apl. VOL. 14 - №4 - P.181-184.

15. Nathan C.F., Cohn Z.A. // J.ExP. Med., Vol.1981 - №154. - P.1539-1553.

16. De Coster, Cambiaso, Masson. Immunological diagnosis of pregnancy in the mare agglutination of latex particles.// The riogenology.1980.-Vol. 13 - №6 - P.433-440.

17. Полимерные микросферы в качестве носителей флуоресцентной метки при построении трехмерной модели сосудистого русла экспериментальных животных / Е.Н. Левшенко, И.А. Грицкова, С.А. Гусев, А.А. Гусев, Е.В. Волкова // Биотехнология. - 2013. - № 6. - С. 65-70.

18. Sam W.C. Latex agglutination assay for Delection of Cholera Toxin.// J.Clin.Microbiol.- 1992-Vol.30 - №9 - P.2518-2520.

19. Sada E. Delection of Lipoarabinomannan as a diagnostic test for Tuberculosisy/J.Clin.Microbiol.- 1992 — Vol.30 - №9 — P.2415-2418.

20. Перфдзе T.B., Халонен П. Иммунологическая диагностика вирусных инфекций. - М.: Медицина, 1985,-с,250.

21. Bernard A., Lauwerys R. Turbidimetric latex immunoassay for serum ferritin.// J.Immunol. Meth.-1984.-v/71.-P.141-147.

22. Delarrea L.B. Automated determination of streptolysin - 0 antibodies by a

turbidimetric latex immunoassay method. //J.Clin.lmmunoassay.-1992-Vol.l5-№3 -P.182-186.

23. Saada E. Detection of lipoarobinomannau as a diagnostic test for tuberculosis // J.Clin. Microbiol.- 1992.-Vol.30-№9 - P.2415-2418.

24. Requejo HIZ., Nascimento CMPC., Fahrat CK. Comparison of couter immunoelectrophoresis, latex agglutination and bacterial culture for the diagnosis of bacterial meningitis using urine, serum and cerebrospinal sluid samples.// Braz. J.Med.Biol. Res.-1992-Vol.25 - №4 - P.357-367.

25. Norde W. Adsorption of proteins from solution at the solid-liquid // Advan/ Colloid and Interface Sci. - 1986. - Vol.25. No 4. P. 267-340.

26. Камышный А.Л. Адсорбция глобулярных белков на твердых носителях: некоторые физико-химические характеристики // Ж. физ. химии. -1985. - т. 55. - Вып. З. -С. 562-580.

27. Ivarsson В. А., Hegg Р.О., Lundstrom K.L, Jansson VOL. Adsorption of proteins on metal surfaces studied by ellipsometric and capacitance measurements. // Colloids and Surfaces. - 1985. - Vol. 13. - P. 169-192.

28. Norde W., Lyklema J. The adsorption of human plasma albumin and bovine pancreas ribonoclease at negatively charged polystyrene surfaces. // J. Colloid and Interface Sci. - 1978. - Vol.66. — No. 2. - P. 257-302.

29. Lyklema J., Norde W., Biopolymer adsorption with special reference to the serum albumin-polystyrene latex system. // Croat. Chem. Actia. - 1973. - Vol.45. - No. l.-P. 67-84.

30. Kawaguchi H., Amagasa H., Hagiya T., Kimura N., Ohtsuka Y. Interraction between proteins and latex particles having different surface structures. // Colloids and Surfaces. - 1985. - Vol. 13. - P. 295-311.

31. Kondo A., Kawanot T., Higashitani K. Immunological agglutination kinetics of latex particles with covalently immobilized antigens. // J. Ferment Boieng. -1992. - Vol 73. - No. 6. - P. 435-439.

32. Kasuya Y., Fujimota K., Miyamoto M., Jujit T., Otaka A. Preparation of

peptide-carrying microspheres with bioactivity on platelets. // J. Biomater Sci-Polym. Ed. - 1993. - Vol.4. - No. 4. - P. 369-380.

33. Yamada T., Muzamatsu N., Kondo T. Phagocytosis of monosaccharide-Binding latex particles by buinea - Pig Poly.

34. Kondo A., Yamasaki R., Higashitani K. Affinity purification of antibodies using immunomicrospheres. //J.Ferment Bioeng.-1992-Vol.74 - №4 - P.226-232.

35. Nathar CJF., Cohn Z.A. // J.ExP.Med. - Vol.1981 - №154-P.l 539-1553 Quash G., Hager H.// U.S.Pat. 3857931(1974).

36. Quash G., Hager H.// U.S.Pat. 3857931(1974).

37. Dorman L.C. // U.S.Pat. 4045384(1977).

38. Srere P.A., Uyeda K. «Methode in enzimology» - Vol.XLIVOL., acad. Press. N.Y. -№2.-P. 11-19., 1986.

39. Enhanced agglutination method and kit. US Pat 4,636,479 MKN G 01 л N33/546 /Martin F.J., Kung T.V. -заявл. 20.04.1983, опубл. 13.01.1987.

40. De Baillcu N., Voegel J.C., Sohmitt A. Adsorption of human albumin and fibrinogen onto heparin-like materials. 1. Adsorption isoterms // Colloids and Surfaces.-1985.-v.l6.-p.271-288.

41. Emulsion Polymerization and Emulsion Polymers// Ed. by Lovell P.A., El-Aasser M.S.- John Wiley & Sons-1997 - p 826.

42. Polymeric Dispersions : Principles and Applications (NATO Asi Series. Series E, Applied Sciences, Vol 335.)// Ed.by Asua J.M.-N.-Y.: Kluwer Academic Pub.-1997-p 349.

43. Microspheres: Medical and Biological Applications.(Ed.A.Rembaum, Z-Tokes). CRC Press:Boca Raton, FI, 1988.

44. Polymeric nanoparticles and microspheres. (Ed.P.Guiot, P.Couvreur). CRC Press: Boca Ration, FI, 1986.

45. Camey J. Rapid diagnostic tests employing latex particles // Anal. Proc.-1990.-v.27.-p.99-100.

46. Immunological agglutination assay with dyed or colored latex and kits:US

Pat.4 419 543, МКИ G 08 N 32/00 / Dorman L.C., Bamgi Ь.В.-заявл.2.8.1982, опубл. 14.3.1984.

47. De Baillcu N., Voegel J.C., Sohmitt A. Adsorption of human albumin and fibrinogen onto heparin-like materials. 1. Adsorption isoterms // Colloids and Surfaces. -1985. -v. 16. -p.271 -288.

48. Latex polymter reagent for diagnostics tests: US Pat. 3 857931„ MKM D 08 N 32/00 / Hager Н.Х-заявл.21.5.1974, опубл.11.10.1974.

49. Margel S. Characterization and chemistry of polyaldehyde microspheres// J.ofPolym.Sci.,Polym.Chem.Ed.-1984.-v.22.-p.3521-3533.

50. Method of protein coupling with latex beads : Brit, Pat. 2 004892, МКИ C 08 L 89/00, C 08 F 2/44 / Fisher Е.А.-за явл.25.03.1978,опубл.12.1 1.1978.

51. Sakota K.,Okaya T. Kinetic studies of carboxylic monomer emulsion polymerization //J.Appl.Polym.Sci.-1976.-N 20.-p.l235-1244.

52. Sakota K.,Okaya T.Polymerization behavior of carboxylic monomers in the preparation of carboxylated latexes //J.Appl.Polym.Sci.-1976.-N 20.-p.2583- 2587.

53. Чирикова О.В.Синтез полимерных суспензий в присутствии карбоксилсодержащих поливинилсилоксанов:Дисс... .канд.хим.наук. МИТХТ, Москва, 1994.

54. Lyerly D.M., Hahn Р. An assay for elevated levels of fecal leukocytes // American Clin. Lab.-1994.-v.5.-p.l8-20.

55. Rembaum, S.P.S Yen, R. W. Molday, W. Dreyer. Emulsion polymerization, 236 (1976).

56. Bangs L.B. The latex course. Bangs laboratories Inc: Carmel Indianopolis. USA 1996, Vol. 4, p 1-15.

57. Basinska T. Poly(styrene/acrolein) and poly(styrene)/atetrbutoxy-w-vinilbensyl polyglycidol similarities and differences // E. Polymers.-2002.-Vol. 1, p 113.

58. LeDisser C., Wang P.C., Mitchell A.R. Analysis of Surface Aldehyde Function on Surfactant Free Polystyrene/Polyacrolein Latex // Macromolecules.-1996.-

Vol. 29, №3, p 953-959.

59. Carter D.C., He X.M. Structure of human serum albumin // Science.-1990.-Vol 249, p 302-303.

60. Пат. 4226747 США (1980).

61. М. Shahar, Н. Meshylam, S. Margel. J. Polym.Sci., Part A, Polym.Chem.Ed., 24,203 (1986).

62. Kumakura, I. Kaetsu. Coll.Polym.Sci., 262,450 (1984).

63. И.А. Грицкова, Н.И. Прокопов, В.И. Быков Полимерные микросферы в диагностике, М. 2004, 130с.

64. К.А. Алексеев, И.А. Грицкова, С.М. Кедик Полимеры для фармацевтической химии, М. 2011, 512с.

65. E. Zurkova, K. Bouchai, D. Zdenkova, Z. Pelzbayer, F. Svec, J. Kalal, H. G. Batz. J. PoIym.Sci.. Polym.Chem.Ed., 21,2949 (1983).

66. Н.И. Прокопов, И .А. Грицкова, В.Р. Черкасов, А.Е. Чалых, Синтез функциональных монодисперсных полимерных микросфер для ]аммунодиагностических исследований, МИТХТ, Москва, (1995).

67. Camli Т., Tuncel М., Senel S. Functional, Uniform, and Macroporous Latex-Particles-Preparation, Electron-Microscopic Characterization, and nonspecific protein adsortion proporties. J.APPL.P0LYM.SCI.-2002, Vol.84, iss.2, P. 414-429.

68. Грицкова И.А., Прокопов Н.И., Станишевский Я.М. Биотест-системы на основе полимерных микросфер // Вестник МИТХТ.-2006. Том 1.-Вып.2.-С.5-20.

69. Новые методы иммуноанализа // Под ред. Коллинза. М.: Мир, 1991.

240 с.

70. Иммунологическая диагностика вирусных инфекций // Под ред. Перадзе, Т. В., Халонена, П. М.: «Медицина», 1985. 302 с.

71. Hadfield S.G., Lane А., МсIllmurray М.В. A novel coloured latex test for the detection and identification of more than one antigen // Journal of Immunological Methods. 1987. V. 97. № 2. P. 153-158.

72. Yoshida T., Matsui T., Kobayashi S., Harada S, Kurimura T., Hinuma Y., Yamamoto N. A novel agglutination test for the human immunodeficiency virus antibody: a comparative study with enzyme-linked immunosorbent assay and immunofluorescence. // Jpn. J. Cancer Res. 1986. V. 77. № 12. P. 1211-1213.

73. Quinn T., Riggin С., Юте R., Francis H., Mulanga K., Sension M., Fauci A. Rapid latex agglutination assay using recombinant envelope polypeptide for the detection of antibody to the HIV. // JAMA. 1988. V. 260. № 4. P. 510-513.

74. Аракелов C.A., др. и. Сравнительная характеристика тест-систем для определения антител к ВИЧ. В Кн. Фундаментальные и прикладные вопросы проблемы СПИД. М.: 1988.

75. Станишевский Я.М. Диагностические тест-системы на основе конъюгатов «полимерная микросфера-биолиганд» медико-биологического применения дисс. докт. хим. наук. М.:2012.

76. Меньшикова А.Ю. Монодисперсные полимерные частицы с управляемой поверхностной структурой дисс. докт. хим.наук. Санкт-Петербург:2008.

77. Григорьева М.Е., Малюкова Е.Б., Грицкова И.А., Гусев С.А., Повалий Т.М., Чиликова Т.Ю. Способ получения полистирольного латекса для биохимических исследований А.с №1458360 БИ №6 1989 г.

78. Григорьева М.Е. Синтез полистирольных частиц для тестирования холестерина автореф. к.х.н. М. 1990.

79. Марков А.Г., Грицкова И.А., Станишевский Я.М., Быков В.А., Мягкова М.А., Каплун А.П., Скопинцев В.Б. Определение С-реактивного белка в сыворотке крови больных методом латексной агглютинации с использованием полимерных микросфер Биомедицинские технологии, М. 2004, вып. 22, с. 113 -121.

80. Волкова Е.В., Гусев С.А., Лукашевич А.Д., Гусев А.А. Разработка полимерных микросфер для иммунофлуоресцентного анализа. Биотехнология 2012 №4 с. 74-80.

81. Rembaum A., Chang M., Richrads M. Structure and immunological properties of polyacrolein formed by means of ionizing radiation and base catalysis // J. Polym.Sci.:Polym Chem Ed.-1984.-V.22.-№3.-P.609-621.

82. Лукин Ю.В., Бахарев В.И., Заиченко А.С., Воронов С.А., Зубов В.П., Грицкова И.А., Праведников А.Н. Полиакролеиновые латексы: синтез, введение наполнителей и механизм формирования // Докл. АН СССР.-1985.-Т.285.С.159-161.

83. Rembaum A., Yen S.P.S.,Molday R.W. Synthesis and reactions of hydrophilic functional microspheres for immunological studies // J.Macromol.Sci.Chem.A. 1979. №13. P.603-632.

84. Yen S.P.S., Rembaum A., Molday R.W., Dreyer W. // Emulsion Polymerization: Am. Chem. Soc.1976.P.236-244.

85. Иммунологическая диагностика вирусных инфекций / Под ред. Перадзе Т.В., Халонена П. - М.:Медицина,1985.-144 с.

86. Santos R.M., Forcada J. Acetal-functionalized polymer particles useful for immunoassays. 111:Preparation of latex-protein complexes and their applications // J.Materials Sci.: Materials in Medicine.-2001.- V.12.-№2. - P.173-180.

87. Ishii K., Kumagai T., Kurihara M., Shiozawa T., Noguchi H., Tozuka M., Ota H., Katsuyama T. A new diagnostic method for adenoma malignum and related lesions: latex agglutination test with a new monoclonal antibody, HIK1083 // Clinica Chemica Acta. - 2001. - V.312. - №1. - P.231-233.

88. Chart H., Willshaw G.A., Cheasty T. Evaluation of a reversed passive latex agglutination test for the detection of Verocytotoxin (VT) expressed by strains of VT-producing Escherichia coii.// Letters in Applied Microbiology. - 2001. - V. 32. - №. 6. -P. 370-374.

89. Smits H.L.; Chee H.D.; Eapen C.K.; Kuriakose M.; Sugathan S.; Gasem M.H.; Yersin C.; Sakasi D.; Lai-a-Fat R.F.M.; Hartskeerl R.A.; Liesdek B.; Abdoel T.H.; Goris M.G.A.; Gussenhoven G.C. Latex based, rapid and easy assay for human leptospirosis fn a single test format // Tropical Medicine and International Health. -

2001. - V. 6. - № 2. - P. 114-118.

90. Brown D.F.J., Walpole E. Evaluation of the Mastalex latex agglutination test for methicillin resistance in Staphylococcus aureus grown on different screening media // J. Antimicrobial Chemotherapy. - 2001. - V. 47. - № 2. - P. 187-189.

91. Attar Z.J., Chance M.L., EL-Safi S., Carney J., Azazy A., El-Hadi M., Dourado C., Hommel M. Latex agglutination test for the detection of urinary antigens in visceral leishmaniasis // Acta Tropica. - 2001. - V. 78. - № 1. - P. 11-16.

92. Sobanski M.A.; Robert Tucker C.; Thomas N.E.; Terence Coakley W. Submicron particle manipulation in an ultrasonic standing wave: Applications in detection of clinically important biomolecules // Bioseparation. - 2000. -V.9.- №6.-P.351-357.

93. Gritskova I.A, Bakeeva I.V., Grzywa-Niksinska J., Legocki M., Basyreva L., Grzywa E. Synthesis of polystyrene suspension with a narrow particle size distribution in the presence of dextran as a particle stabilizer for the use in immunochemical investigation // Polimery. 1996.41.nr9.p.503-507.

94. Бакеева И.В., Бородина И.А., Грицкова И.А. Синтез полимерных суспензий в присутствии декстранов разной молекулярной массы // Высокомолекулярные соединения. Сер. Б. 1997. Т39. №5.С.868-871.

95. Е.В. Волкова, А.Д. Лукашевич, И.С. Левачева, С.М. Левачев, С.А. Гусев, И.А. Грицкова. Выбор полимерных микросфер для проведения реакции латексной агглютинации в плашечном формате // Вестник МИТХТ. - 2013. - Т. 8. - № 6. - С. 68-72.

96. Солодухина Н.М. Полистирольные микросферы как носители биолиганда при определении 0-9-тетрагидроканнабинола в моче человека / Н.М. Солодухина, Л.А. Злыднева, Е.Н. Левшенко, М.А. Мягкова, И.А. Грицкова // Биотехнология.-2012. - №1. - С.90-96.

97. Станишевский Я.М., Скопинцев В.Б., Кравцов Э.Г., Григорьевская И.И., Быков В.А., Грицкова И.А. Фагоцитирование полимерных микросфер, иммобилизованных биолигандами, лейкоцитами периферической крови у

больных с острым панкреатитом. // Клиническая лабораторная диагностика №10,2003. С. 44-47.

98. Станишевский Я.М., Лобанов А.Н., Грицкова И.А., Кравцов Э.Г., Григорьевская И.И. Создание антительных тест-систем заданной специфичности. // Биомедицинские технологии. Москва-2003. С.-209-218.

99. Грицкова И.А., Лобанов А.Н., Станишевский Я.М., Прокопов Н.И., Кравцов Э.Г., Волина Е.Г., Григорьевская И.И. Получение антительных диагностических тест-систем заданной специфичности. // Биотехнологический журнал. - Москва-2003. - Вып. 2 - С. 81-88.

100. Станишевский Я.М., Григорьевская И.И., Лобанов А.Н., Кравцов Э.Г., Грицкова И.А. Тесты для экспресс-диагностики на основе латекс-агглютинации.// Биомедицинские технологии. - Москва 2003. - Вып.20 С.72-80.

101. Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля. — М.: Медицина, 1987. 255 с.

102. Tomas М. Agglutinatiom methods for rapid analysis // Nature. - 1986. - V. 320. - № 20. - P. 289-290.

103. Станишевский Я.М., Грицкова И.А., Прокопов Н.И., Кузмина Н.С., Кириллова Г.А., Кузнецова Г.И. Полимерные микросферы-носители биолиганда в реакции латекс-агглютинации для определения аутоантител к тиреоглобулину // Биомедицинские технологии и радиоэлектроника. -Москва,2004.-Вып.8-9.-С.61-65.

104. Barrett ke, Dispersion polymerization in organic media Per. from English. — L.: Chemistry, 1979. — 338 p.

105. Зубов В.П, Иванова А.Е., Жигис Л.С., Рапопорт Е. М., Марквичева Е.А, Лукин Ю.В., Зайцев С. Ю. Молекулярное конструирование полимерных материалов для биотехнологии и медицины. // Биоорганическая химия. — 1999. -Т. 25. - № 11. - С. 868-880.

106. Peula-Garcia J.M., Molina-Bolivar J.A., Velasco J., Rojas A., Galisteo-Gonzalez F. Interaction of Bacterial Endotoxine (Lipopolysaccharide) with latex particles: Application to latex agglutination immunoassays // J. Colloid Interface Sci. -

2002. - V. 245. - № 2. - P. 230-236.

107. В.Р. Черкасов, И.А. Грицкова, Н.И. Прокопов, А. Рихави. Синтез латексов с узким распределением частиц по размерам в условиях образования ИПАВ на границе раздела фаз. // Радикальная полимеризация: Тез. докл. I Всесоюзн.конфер.-Горький.1989.-с.217.

108. В.Е. Храмовичев, Н.И. Прокопов, И.А. Грицкова. Технология синтеза полимерных микросфер с хлорэтильными группами методом дисперсионной полимеризации. // 1-ая научно-техническая конференция молодых ученых МГАТХТ им. Ломоносова» Наукоемкие химические технологии».- Москва.-том 2.-С.75-76.

109. Е.В. Волкова, И.А. Грицкова, С.А. Гусев, А.Д. Лукашевич, А.А. Гусев, Е.Н. Левшенко, Л.А. Злыднева, К.О. Сочилина. Разработка полимерных микросфер для иммунофлуоресцентного анализа // Биотехнология. - 2012. - №4. -С.74-77.

110. Г.С. Тихомиров, Е.А. Гринфельд, П.Т. Полуэктов, И.А. Грицкова Современные представления о возможности регулирования свойств синтетических латексов методом затравочной полимеризации. В сб.: Получение синтетических латексов, их модифицирование. М., ЦНИИТЭнефтехим, 1985, с.8.

111. В.Н. Бахарев, А.Н. Буряков, Ю.В. Лукин, И.А. Грицкова, В.П. Зубов, С.А. Гусев Способ получения полиакролеиновых латексов., А.с. СССР №1565846, 1990

112. Silvia B. Matiacevich, M. Pilar Buera. A critical evaluation of fluorescence as a potential marker for the Maillard reaction / Food Chemistry 95 (2006) 423-430.

113. Кукушкина А.Н. Коллоидно-химические свойства эмульсионных систем, стабилизированных комплексами бычьего сывороточного альбумина с низкомолекулярными поверхностно-активными веществами:Дисс... канд.хим. наук. МИТХТ, Москва, 2009.

114. R. SHUKLA et al. : Insoluble Dextran Produced by L. mesenteroides with Maltose // Food Technol, Biotechnol. 49 (3) 291-296 (2011).

115. BY ALLENE JEANES, C. A. WILHAM, AND J. C. MIERS.PREPARATION AND CHARACTERIZATION OF DEXTRAN FROM LEUCONOSTOC MESENTEROIDES // From the Starch and Dextrose Division, Northern Regional Research Laboratory, Peoria, Illinois, Received for publication, June 21, 1948.

116. Крашенинникова И.Г. Полимерные суспензии медико-биологического назначения с узким распределением частиц по размерам дисс. докт. техн.наук. Москва:2007.