Молекулярно-генетические предикторы хронического лимфолейкоза тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.07, кандидат наук Каримов, Денис Олегович

• Каримов, Денис Олегович
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Каримов, Денис Олегович

ОГЛАВЛЕНИЕ

Введение

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные данные об эпидемиологии, особенностях 8 клинического течения и терапии хронического лимфолейкоза

1.2. Патогенез и молекулярно-генетические основы формирования 13 хронического лимфолейкоза

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы исследования

2.2. Методы исследования. 30 2.2.1. Клинико-лабораторные и инструментальные методы 30 исследования.

2.2.2 Молекулярно-генетические методы исследования

2.3. Статистические методы обработки результатов исследования

ГЛАВА 3. КЛИНИКО-ГЕМАТОЛОГИЧЕСКАЯ

ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ

ЛИМФОЛЕЙКОЗОМ

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ 47 ИССЛЕДОВАНИЙ

4.1. Анализ полиморфных вариантов -308G>A гена TNFA, Arg72Pro 47 гена ТР53,13494A>G гена ТР53,309T>G гена MDM2, -248G>A гена

ВАХ, 936С>Т гена VEGFA у больных ХЛЛ

4.2. Репликативные исследования полиморфных локусов, выявленных по результатам полногеномного анализа ассоциаций 69 при ХЛЛ

4.3. Оценка уровня экспрессии генов цитокиновой сети (TNFA),

онкогенов (MDM2, ZAP-70), генов факторов роста (VEGFA), генов

супрессоров опухолей (ТР53), 1ш1ША-145 у больных ХЛЛ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Список литературы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетические предикторы хронического лимфолейкоза»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Хронический лимфолейкоз (XJIJI) опухолевое заболевание лимфатической ткани, характеризующееся накоплением зрелых лимфоцитов костном мозге, лимфоузлах и крови. Это заболевание, занимает одно из ведущих мест в структуре гематологической заболеваемости и представляет значительный научный и практический интерес. Анализ эпидемиологических данных о распространенности XJIJ1 среди населения России и за рубежом свидетельствует о явной тенденции заболевания к дальнейшему росту [Бессмельцев С.С., 2013, Бакиров А.Б., 2007, Воробьев А.И., 1985, Hallek М. et al., 2013].

Согласно литературным данным и результатам собственных наблюдений при первом обращении больного примерно в 40% случаев отсутствуют характерные для XJIJI клинические проявления, такие как анемия, тромбоцитопения, увеличение лимфоузлов и гепатоспленомегалия [Воробьев А.И., 2000]. Нередко диагноз XJIJI устанавливается уже на поздних стадиях, когда к течению основного заболевания присоединяются тяжелые инфекционные осложнения, сопутствующие заболевания, происходит прогрессирование опухоли и нарушается общее состояние больных. В связи с этим одной из важных задач для медицины является поиск маркеров прогноза, позволяющих осуществлять прогноз риска развития XJIJI [Волкова М.А. 2010]

Важным фактором развития XJIJI является наследственная предрасположенность. В связи с этим в последние годы был проведен молекулярно-генетический анализ ряда генов-кандидатов, полиморфные варианты которых предположительно ассоциируют с риском развития этого заболевания [Виноградова Ю.Е., 2000, Калимуллина Д.Х., 2004] Однако при XJIJI, как и в случае с другими многофакторными заболеваниями, влияние полиморфизма отдельного гена на функциональные свойства белка во многом зависит от свойств целой системы, в которой он функционирует [Бакиров Б.А., 2005]. Это, в свою очередь, в значительной мере обусловлено индивидуальными особенностями организма и условиями окружающей

среды. Поэтому один и тот же набор генов-кандидатов может обладать различной функциональной значимостью не только в разных популяциях, но и у разных индивидов [Полынский A.A., 2013]. В связи с этим выяснение функциональной значимости ряда генов-кандидатов, задействованных в патогенезе XJIJI, выявление молекулярно-генетических факторов прогноза заболевания является актуальной научной задачей

Цель исследования - поиск новых прогностических критериев оценки риска развития, тяжести течения и эффективности терапии хронического лимфолейкоза на основе ассоциации полиморфных вариантов и уровня экспрессии генов, кодирующих некоторые компоненты цитокиновой системы, онкогенов, факторов роста, микроРНК.

Для достижения цели поставлены следующие задачи:

1. Дать клиническую и молекулярно-генетическую характеристику клинических форм хронического лимфолейкоза.

2. Изучить частоты аллельных вариантов генов цитокиновой сети {TNFА (rsl800629)), онкогенов (ВАХ (rs4645878), MDM2 (rs2279744)), генов факторов роста (VEGFA (rs3025039), генов супрессоров опухолей (ТР53 (rsl042522, rsl625895)) у больных хроническим лимфолейкозом.

3. Провести репликативные исследования полиморфных локусов rs735665, rsl949733 и rsl 1158493, выявленных в результате полногеномного анализа ассоциаций при хроническом лимфолейкозе.

4. Провести анализ уровня экспрессии генов цитокиновой сети {TNFA), онкогенов (MDM2, ZAP-70), генов факторов роста (VEGFA), генов супрессоров опухолей (ТР53), микроРНК (miR-145) у больных хроническим лимфолейкозом.

5. Оценить связь полиморфизма генов-кандидатов с эффективностью терапии больных хроническим лимфолейкозом.

Научная новизна работы. Впервые выявлены маркеры полиморфных локусов генов TNF A (rsl 800629), ВАХ (rs464587S), АСОХЗ (rs 1949733), ассоциированные с риском развития XJIJI.

Выявлена ассоциация полиморфного варианта онкогена MDM2 с развитием агрессивной и доброкачественной формы хронического лимфолейкоза.

Установлено, что маркером лучшего ответа на проводимую терапию были полиморфные локусы генов VEGFA и TNFA.

Показано снижение экспрессии генов TNF A, MDM2, ZAP-7 0 у больных с доброкачественной формой XJIJI, снижение экспрессии генов TNF A, TP 53, miR-145 у больных с агрессивной формой XJ1JI.

Практическая значимость. Результаты работы могут быть использованы для прогнозирования риска развития, тяжести течения и ответа на терапию у больных ХЛЛ.

Материалы работы могут быть использованы в учебном процессе на биологических и медицинских факультетах ВУЗов, а также на курсах последипломного образования врачей.

Внедрение результатов исследования в практику

Результаты исследований используются для прогнозирования течения заболевания в гематологическом центре г. Уфы, Республиканской клинической больницы в работе гематологического центра ГБУЗ «Республиканская клиническая больница им. Г.Г. Куватова» и в работе Министерства здравоохранения Республики Башкортостан.

Результаты исследования внедрены в образовательный процесс на кафедре биологии Башкирского государственного медицинского университета и используются для преподавания дисциплины «Геном человека».

Апробация материалов диссертации

Материалы диссертации доложены на II Российском симпозиуме «Молекулярно-генетическая диагностика злокачественных опухолей человека» (Москва, 2009), VIII Российской конференции с международным участием «Злокачественные лимфомы» (Москва, 2011), Всероссийской молодежной конференции «Фармакологическая коррекция процессов жизнедеятельности. Доклинические и клинические исследования новых лекарственных препаратов» (Уфа, 2012), Всероссийской молодежной конференции «Фармакологическая коррекция процессов

жизнедеятельности. Доклинические и клинические исследования новых лекарственных препаратов» (Уфа, 2012), 78-ой Всероссийской научно-практической, X Российской конференции с международным участием «Злокачественные лимфомы» (Москва,2013), заседаниях ученого совета Института биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН (Уфа, 2012-2014).

Личный вклад автора.

Автором осуществлялось проведение исследований по всем разделам диссертационной работы. Проведен анализ обзора литературы, сформулированы цель, задачи и методы исследования. Проведено клиническое обследование больных. Выполнен анализ полиморфных локусов генов TNFA (rs 1800629), В АХ (rs4645878), MDM2 (rs 2279744), VEGFA (rs3025039), TP53 (rsl042522, rsl625895), ACOX3 (rsl949733), PPP2R5 (rsl 1158493), GRAMD2 (rs735665) и уровня экспрессии генов TNFA, MDM2, ZAP-70, VEGFA, TP53, микроРНК.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 19 печатных работы, из них 8 статей в журналах рецензируемых ВАК РФ, получено 3 патента на изобретение.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Прогностическими маркерами повышенного риска развития хронического лимфолейкоза являются полиморфные локусы генов TNF А и ВАХ.

2. Полиморфный локус rs 1949733 гена АСОХЗ является маркером повышенного риска развития ХЛЛ

3. Установлена ассоциация полиморфного варианта онкогена MDM2 с развитием агрессивной и доброкачественной формы хронического лимфолейкоза.

4. Маркерами лучшего ответа на прводимую терапию были полиморфные локусы генов VEGFA и TNF А.

5. У больных с доброкачественной формой ХЛЛ снижена экспрессия генов TNF A, MDM2, ZAP-70, у больных с агрессивной формой ХЛЛ наблюдалось снижение экспрессии генов TNFA, TP53, miR-145.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 116 странице машинописного текста, иллюстрирована 23 таблицами, 27 рисунками. Состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Список литературы содержит 158 источников, из них отечественных 80 и 78 иностранных авторов.

Работа выполнялась в лаборатории физиологической генетики Института биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской Академии наук (зав. лабораторией д.м.н., проф. Мустафина O.E.), на кафедре биологии (зав. кафедрой д.м.н., проф. Викторова Т.В.) Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ректор д.м.н., проф. Павлов В.Н.), в лаборатории молекулярно-генетических исследований Уфимского научно-

исследовательского института «Медицины труда и экологии человека» (директор д.м.н., проф. Бакиров А.Б.), в гематологическом отделении ГБУЗ «Республиканская клиническая больница им. Г.Г. Куватова» (главный врач Нагаев Р.Я.).

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные данные об эпидемиологии, особенностях

клинического течения, диагностики и терапии хронического лимфолейкоза

ХЛЛ является самым распространенным лейкозом взрослых в западных странах [Свирновский А.И., 2010, Kriachok I.A. et al., 2012]. Заболеваемость ХЛЛ составляет 2-6 случаев на 100000 населения в год и увеличивается до 12,8 случаев на 100000 в возрасте 65 лет [Davis A.S. et al., 2014]. Однако, в последнее время ХЛЛ диагностируется все чаще у молодых пациентов [Стругов В.В., 2012, Стадник Е.А., 2008, Цымбалов О.В., 2014, Shaknovich R. et al., 2013].

Одно из первых крупных исследований, которое посвящено изучению распространенности ХЛЛ, было проведено в 2007 году Dores и соавт. [Dores G.M., 2007]. В мультицентровом исследовании были собраны материалы 20 тысяч пациентов с ХЛЛ и лимфомами из малых лимфоцитов. В исследуемую группу вошли больные диагноз, которым был поставлен в период с 1987 по 2004 (данные Национального института рака в США (Surveillance, Epidemiology and End Results (SEER), National Cancer Institute's - NCI)). В результате исследования было показано, что с возрастом наблюдался геометрический рост заболеваемости ХЛЛ и лимфомами из малых лимфоцитов, притом заболеваемость ХЛЛ превышала таковую для лимфом из малых лимфоцитов во всех группах пациентов, которые были разделены по полу и возрасту. Частота случаев заболевания ХЛЛ и лимфомами из малых лимфоцитов была выше на 70-90% среди мужчин, чем среди женщин с учетом возраста [Загоскина Т.П., 2010]. У афроамериканцев и азиатов уроженцев островов Тихого океана заболеваемость была существенно ниже, практически на 69-80%, чем у представителей европеоидной расы [Dores G.M., 2007].

По данным Бакирова Б.А. с соавт. средний уровень заболеваемости за 1990-2009 гг. составил 1,04±0,077, смертности - 0,64±0,042, распространенности - 3,84±0,408 на 100 тыс. населения.

Анализ заболеваемостью ХЛЛ в разных возрастных группах показал, что, что наибольший показатель заболеваемости зарегистрирован в группе пациентов 80-84 лет, а самый низкий уровень заболеваемости был в группе пациентов с возрастом 25-29 лет. Показан рост уровня заболеваемости в возрастной группе 45-74 и 85 лет и старше. Снижение показателей заболеваемости наблюдалось в возрасте 75-84. Среди женщин с летальным исходом заболевания выявлена тенденция к увеличению доли лиц молодого возраста.

Сравнительный анализ динамики эпидемиологических показателей хронического лимфолейкоза за 1990-2009 гг. показал высокий темп роста распространенности (438,6%) по сравнению с показателями заболеваемости (128,3%) и смертности (129,6%) [Бакиров Б.А. 2012].

На данный момент принято несколько видов классификаций ХЛЛ. В США обычно пользуются классификацией по К.11.11аь Гематологи европейской школы напротив, чаще использует в своей лечебной практике классификацию по 1.Ь.Вте1. Но в последние десятилетия во многих странах используют обе классификации, для более адекватной интерпретации диагноза, назначения лечения и составления прогноза заболевания (рис.1.1.1)

• 0 стадия - изолированный лимфоцитоз (более 15,0 Г/л в периферической крови, более 40% в костном мозге).

• I стадия - лимфоцитоз и увеличение лимфатических узлов.

• II стадия - лимфоцитоз и спленомегалня и/или гепатомегалпя независимо от увеличения лимфатических узлов.

• III стадия - лимфоцитоз, гемоглобин менее 110 г/л независимо от увеличения лимфатических узлов и органов

• IV стадия - лимфоцитоз, количество тромбоцитов менее 100,0 г/л независимо от наличия анемии, увеличения лимфатических узлов и органов

• А стадия - уровень гемоглобина 100 г/л и более, тромбоцитов 100 Г/л и более, менее трех зон поражения

• В стадия - уровень гемоглобина 100 г/л и более, тромбоцитов 100 Г/л и более, три и более зоны поражения

• С стадия - уровень гемоглобина менее 100 г/л и/или

тромбоцитов менее 100 Г л.

'................ .. ,■....., ■ _—__ , -------------------

Рис. 1.1.1. Виды классификации ХЛЛ.

В России нередко в дополнении к выше представленным классификациям, применяется классификация, предложенная А.И. Воробьевым (рис. 1.1.2).

• В-клеточный вариант

• Т-клеточный вариант

• Доброкачественная форма

• Агрессивная форма

• Селезеночная форма

• Абдоминальная форма

• Опухолевая форма

• Костномозговая форма

..._________ггпппч_нгтг-i...........шип——......... »и—..............................................-i................... ............................ пи.».« п................................ г - ---- ..................■■■ ■ '

Рис. 1.1.2. Классификация ХЛЛ предложенная А.И. Воробьевым

В начале заболевания многие годы может наблюдаться лишь лимфоцитоз 40-50%, около верхнего уровня нормы лейкоцитов в крови. Постепенно начинают, увеличиваются лимфоузлы, различной локализации шея, подмышечные впадины, средостение, брюшная полость, в паховой области. Основные осложнения, которые наблюдаются при ХЛЛ это: герпетическая инфекция, инфильтрация VIII пары черепных нервов (по причине которой ослабляется слух у пациентов, развитие нейролейкемии, экссудативный плеврит, туберкулез и простудные инфекции, трансформация в лимфосаркому (синдром Рихтера) [Архипов Е.В., 2011].

Основным признаком XJIJI является лимфоцитоз, при сильном поражении костного мозга, в периферической крови он может достигать 80-90% . Даже при значительном лейкоцитозе, такие симптомы как анемия и тромбоцитопения могут не проявляться. Наиболее характерный признак XJIJI - это тени Гумпрехта в мазке, которые являются полуразрушенными ядрами лимфоцитов. По мере программирования заболевания в крови и костном мозге начинают обнаруживаться пролимфоциты и лимфобласты. Но их значительно большое количество характерно лишь для последних стадий заболевания. Для волосатоклеточного лимфолейкоза характерно особое строение мембраны лимфоцитов в виде выростов. Для постановки диагноза XJIJI необходимо повышение абсолютного числа лимфоцитов в периферической крови более 5x10% в течение трёх месяцев. Также необходимо подтверждение клональности лимфоцитов с помощью иммунофенотипирования [Бялик Т.Е., 2007, Жевак Т.Н., 2012, Chesnais V. et al., 2012].

При микроскопическом исследовании мазков крови обнаруживаются опухолевые клетки, которые по морфологическому строению напоминают зрелые лимфоциты. В них наблюдается клеточное ядро с высоко конденсированным хроматином без ядрышек, с узким ободком цитоплазмы. Иногда отмечается значительное увеличение уровня (более 10 %) более молодых клеток (пролимфоцитов и параиммунобластов). В таких случаях проводят дифференциальную диагностику с пролимфоцитарным лейкозом [Исаева Н.В., 2013].

По современным стандартам иммунофенотипирование лимфоцитов с помощью проточной цитометрии является обязательным для установления диагноза. Для диагностики используют периферическую кровь или пунктат костного мозга. Характерным для клонов клеток XJIJI являться наличие следующего иммунофенотипа: выявление Т-клеточного маркера CD5 и В-клеточных маркеров CD 19 и CD23. Напротив наблюдается снижение всасываемости маркеров CD20, CD79b и мембраносвязанных

иммуноглобулинов IgM и IgD по сравнению с нормальными В-клетками. Также диагноз ХЛЛ можно поставить при иммунофенотипировании биоптата лимфатического узла или селезёнки [Тикунова Т.С. 2012, Шибинская A.B., 2009, ShenS. et al., 2012].

При ХЛЛ нередко проводят цитогенетическое исследование. Для этого применяется две методики стандартное кариотипирование либо флуоресцентная гибридизация in situ. Это может быть важным, так как выявление некоторых хромосомных мутаций имеет прогностическую значимость. В ходе лечения клоны опухоли проходят свое эволюционное развитие и могут поменять свой генотип, вследствие этого исследование нужно проводить перед каждым курсом лечения или в случаях развития рефрактерности к проводимому лечению. Для кариотипирования требуется применение митогена, поскольку без дополнительных стимулов к клеточному делению, трудно получить достаточное количество метафазных пластинок для анализа. Интерфазная флуоресцентная гибридизация in situ для диагностики ХЛЛ не требует применения дополнительных факторов роста для деления клеток, обладает высокой чувствительностью. Принцип метода основан на применении специфических зондов, которые связываются с хромосомами и позволяют выявить наиболее частые хромосомные мутации [Стадник Е.А. 2011].

Хромосомные мутации - довольно частое явление для ХЛЛ. Они обнаруживаются более чем в 80 % случаев заболевания. Наблюдение за хромосомными мутациями происходит давно и собрано уже достаточно информации для составления прогноза заболевания, при наиболее часто встречающихся мутаций:

• dell3ql4 обнаруживается примерно в 58 % случаев, является маркером доброкачественного течения заболевания;

• трисомия по хромосоме 12 обнаруживается в 15 % случаев, прогноз не изменен;

• dell lq обнаруживается приблизительно в 10 % случаев и может ассоциироваться с резистентностью к алкилирующим препаратам;

• del 17р13 обнаруживается в 7 % случаев, характеризуется плохим прогнозом, наблюдается резистентность к обычным схемам химиотерапии с использованием алкилирующих препаратов и аналогов пурина;

• del6q21 при обнаружении характеризуется неблагоприятным прогнозом.

В последние годы в лечении XJIJI достигнуты значительные успехи. Новые виды лечения позволяют достигнуть значительного продления жизни пациентам. В настоящее время используют несколько групп препаратов для лечения ХЛЛ:

1. Алкилирующие препараты в монотерапии (хлорамбуцил,

циклофосфан), часто сочетают с глюкокортикостероидными гормонами.

2. Полихимиотерапия (СОР, CHOP, CAP, POACH).

3. Пуриновые аналоги в виде монотерапии (флударабин, кладрибин, пентостатин), либо их сочетание с другими цитостатиками.

4. Моноклональные антитела (алемтузумаб, ритуксимаб).

5. Комбиниция моноклональных антителе цитостатиками

(иммунохимиотерапия).

6. Трансплантация костного мозга

В настоящее время ХЛЛ остается по прежнему неизлечимым заболеванием, но продолжительность жизни после постановки диагноза может быть очень вариабельной, от нескольких месяцев до десятка лет. При лечении ХЛЛ нужно учитывать различные группы пациентов. Например при назначении хлорамбуцила общий уровень ответов на проводимую терапию , беспрогрессивная выживаемость будет ниже по сравнению с флударабином. Но хлорамбуцил подходит для терапии первой линии пожилым пациентам, так как он хорошо показал себя в качестве препарата для поддержания

ремиссии. Бендамустин, цитотоксический аналог пурина, был зарегистрирован для лечения XJIJI в 2008 году. Монотерапия бендамустином показала повышение длительности полной ремиссии [Стадник Е.А., 2012, Семенова Н.Ю., 2012, Сарибекян P.A., 2013].

Первым зарегистрированным препаратом на основе моноклональных антител был ритуксимаб. Многочисленные исследования, показали его высокую эффективность в сочетаниями с другими препаратами для лечения XJ1JI. Дальнейшие исследования привели к созданию алемтезумаба, рекомбинантного моноклонального антитела, нацеленного на клеточный поверхностный антиген CD52. Алемтузумаб показал многообещающий профиль безопасности в сочетании с удовлетворительной эффективностью при XJIJI с неблагоприятным прогнозом. Офатумаб - является полностью гуманизированным CD20 моноклональным антителом. На основании промежуточного анализа ключевых международных клинических испытаний, которые включали данные 138 пациентов с XJIJI, рефрактерными к флударабину и алемтузумабу. В промежуточном анализе монотерапия офатумабом показала увеличение частоты частичных ремиссий на 11%, и хорошую переносимость у пожилых пациентов [Маслак A.C., 2013, Burger J.A. et al., 2012, Derenzini E. et al., 2014].

XJIJl имеет явно выраженный иммунофенотип, отличающийся тем, что происходит ко-экспрессия рецепторов CD 19, CD5, CD23, в сочетании с низким уровнем поверхности иммуноглобулинов. Этот фенотипический профиль отличается от всех нормальных ростков гемопоэза [Kutsch N. et al., 2014, Warner J.L. et al., 2012].

Для оценки эффективности лечения обычно пользуются критериями, разработанные Национальным Институтом Рака США или Международной рабочей группой по XJ1JI (Cheson B.D. et al., 1996):

Полная ремиссия характеризуется:

1. Отсутствие увеличения лимфоузлов, печени и селезенки

2. Отсутствие общеклинических симптомов (снижение массы тела, повышенная потливость).

3. Нормализация показателей периферической крови (количество гранулоцитов >1,5х105/л, тромбоцитов >100х105//л, лимфоцитов <4,0x105/л, содержание Нв >110 г/л.

4. В миелограмме и трепанобиоптате лимфоцитоз > 30%. Допускаются небольшие скопления лимфоцитов в биоптате костного мозга.

Частичная ремиссия:

1. Снижение числа лимфоцитов периферической крови на 50% и более.

2. Снижение количества лимфоаденопатий больше чем на 50%) и/или снижение показателей размеров печени/селезенки больше чем на 50%

плюс один из критериев:

- гранулоциты >1,5><109/л или его увеличение на 50%;

- тромбоциты >100*109/л или его увеличение на 50%;

- уровень Нв >110 г/л или его увеличение на 50%.

Прогрессирование заболевания:

1. Рост двух и более лимфоузлов в два раза за последние 2 недели. Размер хотя бы одного лимфатического узла составляет более 2 см в диаметре или обнаружение новых лимфоузлов поддающихся пальпации.

2. Увеличение размеров печени и/или селезенки на 50% или обнаружена гепато- или спленомегалия, которая отсутствовала ранее.

3. Увеличение абсолютного числа лимфоцитов в периферической крови более чем на 50%, при условии, что их общее количество не менее 5,0 *109/л.

4. Преобразование заболевания в более агрессивную форму (с-м Рихтера, пролимфоцитарный лейкоз).

Стабильное состояние:

Сохранение основных показателей, отсутствие ремиссии и прогрессии.

1.2. Патогенез и молекулярно-генетические основы формирования хронического лимфолейкоза

Как и любой другой онкогенез, формирование XJ1JI базируется на нормальных механизмах дифференцировки, апоптоза и клеточного цикла. Изменения состояния ключевых генов, активирующих или контролирующих созревание лимфоцитов, могут привести к развитию опухоли [Нигматуллина К.И., 2007, Рабинович Е.И., 2012, Сиротина С.С., 2013].

Одним из решающих событий в патогенезе XJIJI, которое способствует накоплению клонов опухоли, является нарушение апоптоза. К одним из ключевых регуляторов апоптоза относят цитокины, в том числе и факторы некроза опухолей а и (3 (ФНОа, ФНО(3) [Никитин Е.А., 2010, Lech-Maranda Е. et al., 2013]. По аминокислотному составу эти два белка очень сходны (гомология составляет около 30%), они проявляют схожую активность по регуляции воспалительной реакции, контролю иммунного ответа и онкогенеза [Свирновский А.И., 2013, Lech-Maranda Е. et al., 2012]. Биологический эффект ФНО связан с лизисом значительного числа опухолевых клеток как in vivo, так и in vitro. Детальное изучение ФНО выявило близкое структурное и функциональное сходство между ними. Оба фактора через одинаковые специфические рецепторы вызывают апоптоз. Также они активируют полиморфноядерные лейкоциты, проявляют антивирусную активность [Jain P. et al., 2012, Durrieu L. et al., 2012, Soderberg A. et al., 2013].

Макрофаги или лимфоциты в покое не продуцируют ФНО. Стимуляция их экспрессии начинается только после воздействия индуктора. Цитотоксическое действие ФНО на опухолевую клетку реализуется путем деградации ДНК и нарушением функционирования митохондрий. Апоптотический эффект ФНО усиливается под действием интерферона.

Также одним из механизмов синергического действия ФНОа и ß является увеличение экспрессии генов кодирующих рецепторы ФНО на опухолевых клетках под влиянием интерферонов [Blix E.S. et al., 2012, Naito M. et al., 2012].

ФНОа был впервые обнаружен в сыворотке мышей, которым вводили бактериальные продукты. Источником ФНОа являются активированные макрофаги [Schwamb J. et al., 2012].

Белок ФНОа человека синтезируется в клетках в виде предшественника, включающего 233 аминокислотных остатка [Hassan Н.Т. et al. 1996]. В независимых исследованиях из культур активированных Т-клеток выделили ФНОр, также обладающий литической активностью по отношению к чужеродным клеткам [Lee H. et al., 2012, Cols M. et al., 2012, Yoon J.Y. et al., 2012]. Исходя из названия клеток, которые продуцируют этот белок, его стали обозначать как лимфотоксин. Подобно ФНОа, ФНОр синтезируются в клетке в виде предшественников, построенного из 247 аминокислотных остатков.

Ген TNFA тесно сцеплен с геном TNFß. Расстояние между этими двумя генами составляет всего 1000 пар оснований. Данный ген у человека локализован на 6 хромосоме в локусе 6р21.3 [Fonte Е. et al., 2013].

Секреция ФНОа может регулироваться, как на транскрипционном, так и на посттранскрипционном уровнях. Во многих работах описано несколько полиморфных локусов [Wilson A. et al., 1997, Zauli G. et al., 2012]. Но вопрос о влиянии различных аллельных вариантов в данных полиморфных локусах гена TNFA на уровень экспрессии соответствующего цитокина остается дискуссионным. При исследовании экспрессии на линиях В-лимфоцитов человека было показано, что при наличии полиморфного локуса -308G>A экспрессия гена TNFA in vitro повышена: при наличии аллеля А было зафиксировано увеличение экспрессии практически в 2 раза [Wilson A. et al., 1997]. Однако, другие исследования не подтверждают эти данные [Asslaber D. et al., 2013, Girbl T. et al., 2013, Schmiedel B.J. et al., 2013].

В регуляции опухолевого процесса задействовано множество компонентов, главным из которых является белок р53, известный также как супрессор опухолей. В ответ на окислительный стресс или гипоксию происходит активация белка, в основном за счет снижения процессов его убиквининовой деградации и посредством смены конформации молекулы, которая приводит к повышению его активности. В зависимости от локализации белок р53 выполняет разные функции [Веппег А. е1 а1., 2014, Dong НЛ. ег а1., 2012].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Каримов, Денис Олегович, 2015 год

Список литературы.

1. Алешечкииа, М.М. Закономерности изменения содержания фактора некроза опухоли-альфа и интерлейкина-10 в динамике опухолевой прогрессии при хроническом лимфолейкозе [Текст] / М.М. Алешечкина, Т.Н. Жевак, Т.В. Шелехова // Бюллетень медицинских интернет-конференций. 2013. Т. 3. № 2. С. 225-226.

2. Архипов, Е.В. Клинический случай наблюдения пациента с дебютом хронического лимфолейкоза [Текст] / Е.В. Архипов, С.И. Сафиуллина // Вестник современной клинической медицины. 2011. Т. 4. № 2. С. 52-54.

3. Посттравматическое стрессовое расстройство у больных гемобластозами [Текст] / А.Б. Бакиров, P.M. Масагутов, Б.А. Бакиров [и др.] // Медицинский вестник Башкортостана. 2007. Т. 2. № 6. С. 48-52.

4. Бакиров, Б.А. Особенности заболеваемости хроническим лимфолейкозом на территориях с развитым многопрофильным производством [Текст] / Б.А.Бакиров, Р.А.Сулейманов, А.Б. Бакиров // Здоровье населения и среда обитания. 2012. № 11. С. 17-19.

5. Баранова, А.И. Клонирование кандидатного гена Leu5 [Текст] / А.И. Баранова, Е.А. Никитин // Гематология и трансфузиология. 2000. Т.45. №3. С.15-19.

6. Бессмельцев, С.С. Практические аспекты применения алемтузумаба (кэмпас) при хроническом лимфолейкозе [Текст] / С.С. Бессмельцев, Е.В. Карягина, Е.В. Литвинская // Клиническая онкогематология. 2010 Т. 3. № 2 . С.25-30.

7. Бессмельцев, С.С. Лимфоидное микроокружение при хроническом лимфоцитарном лейкозе [Текст] / С.С. Бессмельцев, Н.Ю. Семенова,

B.И. Ругаль // Современные проблемы науки и образования. 2013. № 5.

C. 314

8. Особенности эндобронхиальной микрогемоциркуляции у больных хроническим лимфолейкозом [Текст] / В.В. Войцеховский, A.A. Григоренко, С.И. Ткачева [и др.] //Тихоокеанский медицинский журнал. 2011. №2. С. 41-44.

9. Нарушение эндобронхиальной микрогемоциркуляции у больных хроническим лимфолейкозом [Текст] / В.В. Войцеховский, A.A. Григоренко, С.И.Ткачева [и др.] // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2012. № 46. С. 52-57.

10. Волкова, М.А. Хронический лимфолейкоз [Текст] / М.А. Волкова // Клиническая онкогематология. 2010. Т. 3. № 2. С. 209-210.

11. Воробьев, А.И. Хронический лимфолейкоз [Текст] / А.И. Воробьев, М.Д. Бриллиант. -М: Медицина, 1985-501 с.

12. Гимаева, 3. Ф. Применение циклоферона в комплексном лечении больных хроническим лимфолейкозом на фоне терапии хлорбутином [Текст] / 3. Ф. Гимаева, А.Б. Бакиров // Гематология и трансфузиология. 2005. №5. С.11

13. Сравнительный анализ экспрессии циклина dl в клетках в-клеточных лимфом и реактивного лимфаденита [Текст] / A.A. Гладких, Д.М. Поташникова, Е.П. Корнева [и др.] // Гематология и трансфузиология. 2011. Т. 56. №4. С. 3-11.

14. Исследование цитокинового баланса при лимфопролиферативных заболеваниях [Текст] / Н.П. Домникова, Т.Ю. Долгих, Ю.А. Дьячкова [и др.] // Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. 2013. Т. 33. № 1. С. 20-27.

15. Микровезикулы крови при хронических лимфопролиферативных заболеваниях [Текст] / Н.П. Домникова, Т.Ю. Долгих, Е.В. Шоленберг [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2013. Т. 156. №7. С. 106-109.

16. Жевак, Т.Н. Диагностическое и прогностическое значение увеличения содержания в крови провоспалительных и противовоспалительных цитокинов при хроническом лимфолейкозе [Текст] / Т.Н. Жевак, Н.П. Чеснокова, Т.В. Шелехова // Клиническая лабораторная диагностика. 2013. №2. С. 33-36.

17. Закономерности изменения цитокинового профиля крови при хроническом лимфолейкозе различной степени тяжести [Текст] / Т.Н. Жевак, Н.П. Чеснокова, Т.В. Шелехова, O.E. Царева // Фундаментальные исследования. 2011. № 10-1. С. 65-69.

18. Закономерности изменений цитокинового статуса при хроническом лимфолейкозе и их роль в патогенезе прогрессирующих форм заболевания [Текст] / Т.Н. Жевак, Н.П. Чеснокова, Т.В. Шелехова // Саратовский научно-медицинский журнал. 2012. Т. 8. № 2. С. 203-209.

19. Загоскина, Т.П. Алемтузумаб в терапии хронического лимфолейкоза [Текст] / Т.П. Загоскина // Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика. 2010. Т. 3. № 4. С. 327-335

20. Сравнительная оценка эффективности флударабинсодержащих режимов и иммунохимиотерапии при хроническом лимфолейкозе [Текст] / Т.П. Загоскина, С.Б. Ткаченко, М.Е. Голубева [и др.] // Терапевтический архив. 2010. Т. 82. № 1. С. 35-39.

21. Нарушение естественных киллерных клеток при хроническом лимфолейкозе [Текст] / E.H. Зотина, Т.П. Загоскина, О.В. Малых, И.В. Гришина // Фундаментальные исследования. 2012. № 4-1. С. 57-62.

22. Исаева, Н.В. Интерпретация результатов иммунофенотипирования при диагностике лимфопролиферативного заболевания с учетом иммунофенотипического счета [Текст] / Н.В. Исаева, Г.А. Зайцева, Т.П. Загоскина // Клиническая лабораторная диагностика. 2013. № 2. С. 3033.

23. Калимулллина, Д.Х. Полиморфизм (-174G>C) гена IL6 и выживаемость при множественной миеломе [Текст] / Д.Х. Калимуллина, А.Б. Бакиров, Т.В. Викторова // Российский биотерапевтический журнал. 2004. Т. 3. № З.С. 32-36.

24. Современные представления о роли теломер и теломеразы в патогенезе гематологических и онкологических заболеваний [Текст] / Н.С. Карпова, K.M. Абдулкадыров, Е.А. Селиванов, В.А. Балашова // Medline.ru. 2012. Т. 13. № 1.С. 38-57.

25. Лечение резистентных больных хроническим лимфолейкозом программами, включающими алемтузумаб в виде монотерапии или в сочетании с флударабином [Текст] / Е.В. Катаева, А.К. Голенков, Е.В. Трифонова [и др.] // Онкогематология. 2011. № 2. С. 4-8.

26. Кондратовский, П.М. Нарушения в системе белка р53 и их влияние на патогенез хронических лимфопролиферативных заболеваний [Текст] / П.М. Кондратовский, А.И. Дубиков, А.Ю. Дорошевская // Онкогематология. 2011. № 3. С. 65-76.

27. Королёва, Н.В. Риск заболевания гемобластозами у персонала Сибирского химического комбината [Текст] / Н.В. Королёва, P.M. Тахауов, А.Б. Карпов // Материалы XLI научно-практической конференции с международным участием "Гигиена, организация

здравоохранения и профпатология". Новокузнецк, 2006. С. 50-53.

28. Крячок И. А. Опыт применения алемтузумаба в лечении больных хроническим лимфолейкозом в национальном институте рака Украины [Текст] / И. А. Крячок // Онкогематология. 2010. Т.З. № 2. С. 12-23.

29. Луговская Г.И. Иммунофенотипическое исследование клона опухолевых клеток в диагностике в-хлл [Текст] / Г.И. Луговская, О.Н. Чибисова // Медицинский алфавит. 2012. Т. 3. № 14. С. 20-21.

30. Маниатис Т. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование / Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Сэмбрук -М.: Мир, 1984, 480 с.

31. Исследование ß-2 микроглобулина и тимидинкиназы как прогностических факторов при остром лимфобластном лейкозе и хроническом лимфолейкозе [Текст] / А.Г. Мазур, Е.В. Миронова, М.Н. Ткаченко, Н.В. Горяинова // Украшський радюлопчний журнал. 2013. Т. 21. №3. С. 328-330.

32. Мартынкевич, И. С. Цитогенетическая диагностика хронического лимфолейкоза [Текст] / И.С. Мартынкевич // Клиническая онкогематология. 2010. Т.З. №2. С.20-23.

33. Маслак, A.C. Степень разветвленности n-гликанов белков плазмы у пациентов с хроническим лимфолейкозом на разных стадиях лечения [Текст] / A.C. Маслак // Журнал Гродненского государственного медицинского университета. 2013. № 4 (44). С. 097-100.

34. Муравьева, Е.А. Поражения кожи при хроническом лимфолейкозе [Текст] / Е.А. Муравьева, О.Ю. Олисова, Е.А. Никитин // Российский журнал кожных и венерических болезней. 2013. № 6. С. 4-9.

35. Микрочипы в диагностике лимфопролиферативных заболеваний [Текст] / Т.В. Наседкина, H.A. Гусева, О.Н. Митяева [и др.] // Молекулярная медицина. 2007. № 3. С.54-60.

36. Нигматуллина, К.И. Заболеваемость и распространенность хроническим лимфолейкозом в Республике Башкортостан [Текст] / К.И. Нигматуллина, Д.Х. Калимуллина // Башкирский химический журнал .

2006. Т.13. №5. С.117-118.

37. Нигматуллина, К.И. Заболеваемость, распространенность и выживаемость при хроническом лимфолейкозе в Республике Башкортостан за 2001-2005 годы [Текст] / К.И. Нигматуллина, Д.Х. Калимуллина, В.Н. Ручкин // Медицинский вестник Башкортостана.

2007. № 2. С. 93-98.

38. Никитин, Е.А. Хронический лимфолейкоз высокого риска: история, определение, диагностика и лечение [Текст] / Е.А. Никитин, А.Б. Судариков // Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика. 2013. Т. 6. № 1. С. 59-67.

39. Проточная цитометрия в дифференциальной диагностике хронических в-клеточных лимфопролиферативных заболеваний [Текст] / A.B. Новицкий, В.Ю. Никитин, И.А. Сухина [и др.] // Вестник СевероЗападного государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова. 2011. Т. 3. № 2. С. 149-165.

40. Применение локального введения аутологичной обогащенной тромбоцитами плазмы у больной с язвенным дефектом кожи [Текст] / С.М. Носков, Л.Ю. Широкова, A.B. Аршинов [и др.] // Научно-практическая ревматология. 2011. № 1. С. 66-68.

41. Овсепян, В.А. Возможная ассоциация полиморфизма генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков с особенностями клинического

течения хронического лимфолейкоза [Текст] / В.А. Овсепян, В.А. Росин, Т.П. Загоскина // Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика. 2011. Т. 4. № 4. С. 279-285.

42. Иммунодиагностика хронического лимфоцитарного лейкоза с использованием иммунологических биочипов [Текст] / Н.Г. Овчинина, A.B. Шишкин, E.H. Никитин [и др.] // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2010. Т. 149. № 2. С. 184-186.

43. Полынский, A.A. Спонтанный разрыв селезенки, как показательный признак хронического лимфолейкоза [Текст] / A.A. Полынский, Д.В. Сухоцкий // Журнал Гродненского государственного медицинского университета. 2013. № 4. С. 124-125.

44. Полиморфизм гена р53 как потенциальный маркер предрасположенности к развитию неходжкинских злокачественных лимфом [Текст] / Т.И. Поспелова, E.H. Воропаева, М.И. Воевода, О.В. Березина//Гематология и трансфузиология.-2010- Nl.-C.l 1

45. Опыт использования циклических нуклеотидов в качестве молекулярно-биологических маркеров индивидуального канцерогенного риска [Текст] / Е.И. Рабинович, C.B. Поволоцкая, В.А.Турдакова, С.Н. Соколова // Медицина экстремальных ситуаций. 2012. № 4 (42). С. 89-97.

46. Рогова Е.С. Клиникодиагностическое и прогностическое значение иммунологических и цитогенетических нарушений при хроническом лимфолейкозе // Аспирантский вестник Поволжья. 2013. № 1-2. С. 68-70.

47. Рудакова, A.B. Эффективность затрат на бендамустин в терапии хронического лимфоцитарного лейкоза [Текст] / A.B. Рудакова //

Фармакоэкономика. Современная фармакоэкономика и фармакоэпидемиология. 2011. Т. 4. № 3. С. 29-33.

48. Ругаль, В.И. Особенности нишеобразующих структур и строму костного мозга больных хроническим лимфоцитарным лейкозом [Текст] / В.И. Ругаль, С.С. Бессмельцев, Н.Ю. Семенова // Medline.ru. 2013. Т. 14. № -2. С. 347-361.

49. Свирновский, А.И. Критерии диагностики и эффективности терапии хронического лимфоцитарного лейкоза [Текст] / А.И. Свирновский // Здравоохранение (Минск). 2010. № 1. С. 42-45.

50. Свирновский, А.И. Прогнозирование при хроническом лимфоцитарном лейкозе на этапе разработки новых методов терапии и интенсивного развития представлений о биологии заболевания [Текст] / А.И. Свирновский // Медицинские новости. 2012. № 11 (218). С. 6-12.

51. Семенова, Н.Ю. Нишеформирующие структуры костного мозга при хроническом лимфолейкозе [Текст] / Н.Ю. Семенова // Современная медицина: актуальные вопросы. 2014. № 27. С. 74-78.

52. Сарибекян, P.A. Анализ условий культивирования клеток в-клеточного хронического лимфолейкоза [Текст] / P.A. Сарибекян, И.А. Воробьев // Гематология и трансфузиология. 2013. Т. 58. № 3. С. 32-36.

53. Семенова, Н.Ю. Стромальное микроокружение лимфатических узлов при хлл [Текст] / Н.Ю. Семенова, В.И. Ругаль // Medline.ru. 2012. Т. 13. № -2. С. 524-537.

54. Клинические ассоциации генетических вариантов интерлейкинов с формированием хронического лимфолейкоза у пациентов старших возрастных групп [Текст] / С.С. Сиротина, Т.С. Тикунова, К.И. Прощаев, [и др.] // Клиническая медицина. 2013. Т. 91. № 11. С. 47-52.

55. Сиротина, С.С. Молекулярные и генетические механизмы патогенеза хронического лимфолейкоза [Текст] / С.С. Сиротина, Т.И. Якунченко // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия: Медицина. Фармация. 2013. Т. 22. № 11. С. 185-190.

56. Изучение ассоциаций генетических маркеров интерлейкинов с клинико-лабораторными показателями больных хроническим лимфолейкозом [Текст] / С.С. Сиротина, Т.С. Тикунова, К.И. Прощаев [и др.] // Известия Юго-Западного государственного университета. Серия: Управление, вычислительная техника, информатика. Медицинское приборостроение. 2012. №2-3. С. 242-245.

57. Смирнова, О.В. Клинико-иммунологические проявления и нарушения метаболизма внутриклеточных ферментов лимфоцитов у больных хроническим лимфолейкозом [Текст] / О.В. Смирнова, A.A. Савченко,

B.Т. Манчук // Сибирский онкол. Журнал. 2007. №2.

C.15-21.

58. Смирнова, О.В. Метаболические нарушения в клетках иммунной системы в зависимости от стадии заболевания у больных хроническим лимфолейкозом [Текст] / О.В. Смирнова, A.A. Савченко, В.Т. Манчук // Медицинская иммунология. 2007. Т.9. №2-3. С.288-289.

59. Смирнова JI.A. Хронический лимфолейкоз: современные подходы к лечению [Текст] / JI.A. Смирнова, А.И. Свирновский, JI.B. Колбаско // Рецепт. 2011. №4. С. 83-87.

60. Лекарственная чувствительность лейкозных клеток ex vivo и прогнозирование ответа пациентов с хроническим лимфоцитарным лейкозом на терапию [Текст] / А.И. Свирновский, Т.Ф. Сергиенко, Л.А. Смирнова [и др.] // Здравоохранение (Минск). 2010. № 3. С. 57-60.

61. Свирновский, А.И. Биологические свойства лейкозных клеток и клинический фенотип при хроническом лимфоцитарном лейкозе [Текст]

/ А.И. Свирновский // Гематология и трансфузиология. 2010. Т. 55. № 1. С. 25-31.

62. Иммунные и кардиоваскулярные нарушения у больных хроническим лимфолейкозом при использовании разных схем полихимиотерапии [Текст] / И.В. Снежко, Ю.В. Шатохин, Е.В. Бурнашева, О.Н. Шатохина // Медицинский алфавит. 2012. Т. 3. № 14. С.35-38.

63. Современная лекарственная терапия и прогностические факторы при хроническом лимфолейкозе. Обзор литературы и собственные данные [Текст] / Е.А. Стадник, А.В. Никитин, Ю.А. Алексеева [и др.] // Бюллетень сибирской медицины. 2008. Т. 7. Прил. 3. С.41-52.

64. Стадник, Е.А. Хронический лимфолейкоз [Текст] / Е.А. Стадник // Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика. 2011. Т. 4. № 1. С. 86-91.

65. Хронический лимфолейкоз. Рекомендации по диагностике и лечению [Текст] / Е.А. Стадник, В.В. Стругов, Ю.В. Вирц, А.Ю. Зарицкий // Трансляционная медицина. 2012. № 6 (17). С. 5-15.

66. Стругов, В.В. Механизм действия и клиническая эффективность нового алкилирующего препарата бендамустин при хроническом лимфолейкозе [Текст] / В.В. Стругов, Е.А. Стадник, А.Ю. Зарицкий // Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика. 2011. Т. 4. № 3. С. 217-227.

67. Моделирование микроокружения клеток хронического лимфолейкоза в лимфатических узлах [Текст] / В.В. Стругов, C.B. Жук, Р.Ш. Бадаев [и др.] // Трансляционная медицина. 2013. № 6 (23). С. 88-102.

68. Ретроспективное исследование результатов применения режимов FC/FCR в первой линии терапии хронического лимфолейкоза [Текст] /

B.B. Стругов, E.A. Стадник // Трансляционная медицина. 2012. № 6 (17).

C. 104-115.

69. Анализ заболеваемости гемобластозами населения ЗАТО Северск [Текст] / P.M. Тахауов, А.Б. Карпов, Н.В. Королёва, Л.Ф. Писарева // Здравоохранение Российской Федерации. 2007. №1. С.24-27.

70. Тахауов, P.M. Заболеваемость гемобластозами и лейкозами городского населения г. Северска и персонала Сибирского химического комбината [Текст] / P.M. Тахауов, А.Б. Карпов, Н.В. Королёва // Радиобиология. Радиоэкология. 2008. Т.48. №3. С.326-334.

71. Тикунова, Т.С. Анализ вклада сочетаний генов факторов некроза опухоли и их рецепторов в генетическую предрасположенность к хроническому лимфолейкозу [Текст] / Т.С. Тикунова // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия: Медицина. Фармация. 2012. Т. 17. № 4. С. 183-185.

72. Фиясь, А.Т. Хронический лимфолейкоз: диагностика и лечение [Текст] / А.Т. Фиясь, Б.И. Френкель // Журнал Гродненского государственного медицинского университета. 2011. № 4 (36). С. 93-97.

73. Морфоиммунологические варианты В-ХЛЛ [Текст] / М.А.Френкель, A.B. Шибинская, H.A. Купрышина, H.H. Тупицын // Материалы V съезда онкологов и радиологов СНГ. Ташкент, 14-16 мая 2008 г. С.86.

74. Цымбалов, О.В. Новые представления на этиологию лимфолейкоза и значение стоматологической санации [Текст] / О.В. Цымбалов // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. 2014. № 2. С. 205-209.

75. Морфоиммунологическая характеристика B-клеточного хронического лимфолейкоза: возрастной аспект [Текст] / A.B. Шибинская, М.А.

Френкель, H.A. Купрышина [и др.] // Клиническая геронтология. 2009. Т.15. №3. С.10-15.

76. Иммунофенотипическая характеристика морфологических вариантов В-клеточного хронического лимфолейкоза [Текст] / A.B. Шибинская, М.А. Френкель, H.A. Купрышина, H.H. Тупицын // Вестник РОНЦ им. H.H. БлохинаРАМН. 2009. Т.20. №3. С.82-91.

77. . Использование биочипов для иммуноморфологи-ческой диагностики хронического лимфолейкоза [Текст] / A.B. Шишкин, Н.Г. Овчинина, С.С. Бессмельцев, A.B. Козлов // Вопросы онкологии. 2013. Т. 59. № 6. С. 761-765.

78. Мониторинг иммунологических показателей при применении алемтузумаба в лечении больных в-клеточным хроническим лимфолейкозом (в-хлл) [Текст] / Ю.Ю. Чуксина, В.В. Яздовский, Е.В. Катаева, А.К. Голенков // Вестник Уральской медицинской академической науки. 2011. № 2-2 (35). С. 74-75.

79. Иммунологический мониторинг пациентов b-клеточным хроническим лимфолейкозом (b-хлл) при терапии препаратами на основе моноклональных антител (кэмпас) [Текст] / Ю.Ю. Чуксина, В.В. Яздовский, Е.В. Катаева, А.К. Голенков // Российский аллергологический журнал. 2011. № 4. С. 420-422.

80. Дифференциальная диагностика периферических мелкоклеточных В-клеточных лимфом [Текст] / Ю.Ю. Чуксина, В.В. Яздовский, Е.В. Катаева [и др.] // Клиническая геронтология 2002. №1. С. 22-23.

81. Stress-Induced Alternative Splice Forms of MDM2 and MDMX Modulate the p53-Pathway in Distinct Ways [Текст] / G. Jacob Aishwarya, К Ravi, [et al.] //PLoS One. 2014; 9(8)

82. Mimicking the microenvironment in chronic lymphocytic leukaemia - where does the journey go? [Текст] / D Asslaber, EM Grossinger, T Girbl [et al.]// Br Journal Haematol. 2013 Mar;160(5):711-4.

83. microRNA-34a expression correlates with MDM2 SNP309 polymorphism and treatment-free survival in chronic lymphocytic leukemia [Текст] / D Asslaber, JD Piñón, I Seyfried [et al.]// Blood. 2010 May 27; 115(21): 4191-7

84. Ayad, M.W. Angiogenic factor VEGFA and its relationship with biological prognostic markers in chronic lymphocytic leukemia [Текст] / MW Ayad, El AA. Naggar // Egypt Journal Immunol. 2010; 17( 1 ):59-71.

85. Bax and Bak are required for apogossypolone, a ВНЗ-mimetic, induced apoptosis in chronic lymphocytic leukemia cells [Текст] / К Balakrishnan, S Aggarwal, W Wierda, V Gandhi. // Leuk Lymphoma. 2013 May;54(5):1097-100.

86. Investigation of an NQOl polymorphism as a possible risk and prognostic factor for chronic lymphocytic leukemia [Текст] / A Begleiter, D Hewitt, SB Gibson, JB Johnston. // Leuk Res. 2009 Jan;33(l):74-81.

87. European Research Initiative on CLL (ERIC). MDM2 promotor polymorphism and disease characteristics in chronic lymphocytic leukemia: results of an individual patient data-based meta-analysis [Текст] / A Benner, L Mansouri, D Rossi, [et al.] // Haematologica. 2014 Aug;99(8): 1285-91.

88. Best, O.G. Heat shock protein-90 inhibitor, NVP-AUY922, is effective in combination with fludarabine against chronic lymphocytic leukemia cells cultured on CD40L-stromal layer and inhibits their activated/proliferative phenotype [Текст] / OG Best, SP Mulligan. // Leuk Lymphoma. 2012 Nov;53(ll):2314-20.

89. Billard, С. Apoptosis inducers in chronic lymphocytic leukemia [Текст] / С Billard. // Oncotarget. 2014 Jan 30;5(2):309-25.

90. Phospho-specific flow cytometry identifies aberrant signaling in indolent B-cell lymphoma [Текст] / ES Blix, JM Irish, A Husebekk [et al.] // BMC Cancer. 2012 Oct 16; 12:478.

91. Mechanisms of action of the anti-VEGF A monoclonal antibody bevacizumab on chronic lymphocytic leukemia cells [Текст] / J Bogusz, A Majchrzak, A M^dra [et al.] // Postepy Hig Med Dosw (Online). 2013 Mar 1; 67:107-18.

92. Burger, J.A. Coming full circle: 70 years of chronic lymphocytic leukemia cell redistribution, from glucocorticoids to inhibitors of В-cell receptor signaling [Текст] / JA Burger, E Montserrat. // Blood. 2013 Feb 28;121(9):1501-9.

93. Bush, W.S. Chapter 11: Genome-wide association studies [Текст] / WS Bush, JH Moore // PLoS Comput Biol. 2012;8(12):el002822.

94. Gene immunotherapy of chronic lymphocytic leukemia: a phase I study of intranodally injected adenovirus expressing a chimeric CD 154 molecule [Текст] / JE Castro, J Melo-Cardenas, M Urquiza [et al.] // Cancer Res. 2012 Jun 15;72(12):2937-48.

95. Spliceosome mutations in myelodysplastic syndromes and chronic myelomonocytic leukemia [Текст] / V Chesnais, О Kosmider, F Damm [et al.] // Oncotarget. 2012 Nov;3(l l):1284-93.

96. Stromal endothelial cells establish a bidirectional crosstalk with chronic lymphocytic leukemia cells through the TNF-related factors BAFF, APRIL, and CD40L [Текст] / M Cols, CM Barra, В He [et al.]// Journal Immunol. 2012 Jun 15;188(12):6071-83.

97. Genome-wide association study offollicular lymphoma identifies a risk locus at 6p21.32 [Текст] / L Conde, E Halperin, NK Akers [et al.]// Nat Genet. 2010 Aug;42(8):661-4.

98. Davis, A.S. Leukemia: an overview for primary care [Текст] / AS Davis, AJ Viera, MD Mead // Am Fam Physician. 2014 May 1 ;89(9):731-8.

99. Dearden, С. B- and T-cell prolymphocytic leukemia: antibody approaches [Текст] / C.Dearden // Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2012;2012:645-51.

100. Derenzini, E. Bendamustine: role and evidence in lymphoma therapy, an overview [Текст] / E Derenzini, PL Zinzani, BD Cheson.// Leuk Lymphoma. 2014 Jul;55(7): 1471-8. 12:

101. A genome-wide association study for chronic lymphocytic leukemia [Текст] / Di Bernardo MC, D Crowther-Swanepoel P, Broderick, [et al.] // National Genetics 2008 Oct; 40(10): 1204-10.

102. MDM2 promoter SNP309 is associated with an increased susceptibility to chronic lymphocytic leukemia and correlates with MDM2 mRNA expression in Chinese patients with CLL [Текст] / HJ Dong, С Fang, L Fan [et al.] // Int JOURNALCancer. 2012 May 1;130(9):2054-61.

103. CLL and SLL: overview of the descriptive epidemiology [Текст] / GM Dores, WF Anderson, RE Curtis [et al.] // Br Journal Haematol. 2007 Dec;139(5): 809-19

104. Human interferon-alpha increases the cytotoxic effect of CD56(+) cord blood-derived cytokine-induced killer cells on human B-acute lymphoblastic leukemia cell lines [Текст] / L Durrieu, J Gregoire-Gauthier, MM Dieng [et al.] // Cytotherapy. 2012 Nov;14(10):1245-57.

105. Regulation of the MIR155 hostgene in physiological and pathological processes [Текст] / TS Elton, H Selemon, SM Elton, NL Parinandi. // Gene. 2013 Dec 10;532( 1): 1 -12.

106. Ferrer, G. Comment on "Soluble BAFF levels inversely correlate with peripheral В cell numbers and the expression of BAFF receptors" [Текст] / G Ferrer, С Moreno, E Montserrat. // Journal Immunol. 2012 Apr 1;188(7):2930-1.

107. In vitro sensitivity of CLL cells to fludarabine may be modulated by the stimulation of Toll-like receptors [Текст] / E Fonte, В Apollonio, L Scarfo [et al.] // Clin Cancer Res. 2013 Jan 15;19(2):367-79.

108. Bone marrow stromal cell-derived vascular endothelial growth factor (VEGFA) rather than chronic lymphocytic leukemia (CLL) cell-derived VEGFA is essential for the apoptotic resistance of cultured CLL cells [Текст] / I Gehrke, RK Gandhirajan, SJ Poll-Wolbeck [et al.] // Mol Med. 2011; 17(7-8):619-27.

109. Differential expression of the Bcl-2 and Bax isoforms in CD 19 positive B-lymphocytes isolated from patients diagnosed with chronic lymphocytic leukaemia [Текст] / R Ghassemifar, L Forster, J Finlayson [et al.] // Pathology. 2012 Dec;44(7):632-7.

110. CD40-mediated activation of chronic lymphocytic leukemia cells promotes their CD44-dependent adhesion to hyaluronan and restricts CCL21-induced motility [Текст] / T Girbl, E Hinterseer, EM Grossinger [et al.] // Cancer Res. 2013 Jan 15;73(2):561-70.

111. AICAR induces Bax/Bak-dependent apoptosis through upregulation of the ВНЗ-only proteins Bim and Noxa in mouse embryonic fibroblasts [Текст] / DM Gonzalez-Girones, С Moncunill-Massaguer, D Iglesias-Serret [et al.] // Apoptosis. 2013 Aug;18(8):1008-16.

112. Heterogeneity of p53-pathway Protein Expression in Chemosensitive Chronic Lymphocytic Leukemia: A Pilot Study [Текст] / MJ Groves, SF Maccallum, MT Boylan [et al.] // Journal Cancer. 2012;3:354-61.

113.Hallek, M. Chronic lymphocytic leukemia: 2013 update on diagnosis, risk stratification and treatment [Текст] / M.Hallek // Am Journal Hematol. 2013 Sep;88(9):803-16.

114. The receptor tyrosine kinase ROR1 - An oncofetal antigen for targeted cancer therapy [Текст] / M Hojjat-Farsangi, A Moshfegh, AH Daneshmanesh [et al.] // Semin Cancer Biol. 2014 Jul 25. pii:S1044-579X(14)00093-5.

115. Update on obinutuzumab in the treatment of B-cell malignancies [Текст] / T Illidge, EJ Cheadle, С Donaghy, J Honeychurch // Expert Opin Biol Ther. 2014 0ct;14(10):1507-17.

116. Jain, P. Richter's transformation in chronic lymphocytic leukemia [Текст] / P Jain, S O'Brien // Oncology (Williston Park). 2012 Dec;26(12):l 14652.

117. Lack of association between the MDM2 promoter polymorphism SNP309 and clinical outcome in chronic lymphocytic leukemia [Текст] / MA Kaderi, M Mansouri, N Zainuddin [et al.] // Leuk Res. 2010 Mar;34(3): 335-9.

118. Soluble CD40 ligand (sCD40L) provides a new delivery system for targeted treatment: sCD40L-caspase 3 chimeric protein for treating B-cell malignancies [Текст] / R Kedar, О Sabag, M Licthenstein, H Lorberboum-Galski // Cancer. 2012 Dec 15;118(24):6089-104.

119. Kriachok, IA. Chronic lymphocytic leukemia [Текст] / IA. Kriachok // Exp Oncol. 2012 Dec;34(4):378-80.

120. Kutsch, N. Emerging therapies for refractory chronic lymphocytic leukemia [Текст] / N Kutsch, M Hallek, В Eichhorst // Leuk Lymphoma. 2014 Jun 27:1-8.

121. Serum tumor necrosis factor-a and interleukin-10 levels as markers to predict outcome of patients with chronic lymphocytic leukemia in different risk

groups defined by the IGHV mutation status [Текст] / E Lech-Maranda, О Grzybowska-Izydorczyk, К Wyka [et al.] // Arch Immunol Ther Exp (Warsz). 2012 Dec;60(6):477-86.

122. Polymorphisms of TNF and IL-10 genes and clinical outcomeof patients with chronic lymphocytic leukemia [Текст] / E Lech-Maranda, W Mlynarski, О Grzybowska-Izydorczyk [et al.] // Genes Chromosomes Cancer. 2013. Mar;52(3):287-96.

123. A p53 axis regulates В cell receptor-triggered, innate immune system-driven В cell clonal expansion [Текст] / H Lee, S Haque, J Nieto [et al.] // Journal Immunol. 2012 Jun 15;188(12):6093-108.

124. Livak, K.J. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) [Текст] / K.J. Livak, T.D. Schmittgen // Method. Methods. 2001, Dec;25(4):402-8.

125. Vascular endothelial growth factor A (VEGFAA) gene polymorphisms have an impact on survival in a subgroup of indolent patients with chronic lymphocytic leukemia [Текст] / С Lozano-Santos, J Martinez-Velasquez, В Fernandez-Cuevas [et al.] // PLoS One. 2014 Jun 27;9(6): el01063.

126. Mathew, C.C. The isolation DNA [Текст] / C.C. Mathew // Ed. Walker J.M. - N.Y., L.: Human Press. 1984.Vol. 2. P. 31-34.

127. Intratumoral delivery of CD154 homolog (Ad-ISF35) induces tumor regression: analysis of vector biodistribution, persistence and gene expression [Текст] / J Melo-Cardenas, M Urquiza, TJ Kipps, JE Castro. // Cancer Gene Ther. 2012 May;19(5):336-44.

128. Lyn kinase and ZAP70 are substrates of PTPROt in B-cells: Lyn inactivation by PTPROt sensitizes leukemia cells to VEGFA-R inhibitor pazopanib [Текст] / T Motiwala, J Datta, H Kutay [et al.] // Journal Cell Biochem. 2010 Jul 1;110(4):846-56.

129. CD40L-Tri, a novel formulation of recombinant human CD40L that effectively activates В cells [Текст] / M Naito, U Hainz, UE Burkhardt [et al.] // Cancer Immunol Immunother. 2013 Feb;62(2):347-57.

130. Owen, С,J. Obinutuzumab for B-cell malignancies [Текст] / CJ Owen, DA. Stewart // Expert Opin Biol Ther. 2014 Aug;14(8): 1197-205.

131. The VEGFA receptor, neuropilin-1, represents a promising novel target for chronic lymphocytic leukemia patients [Текст] / A Piechnik, A Dmoszynska, M Omiotek [et al.] // Int Journal Cancer. 2013 Sep 15;133(6): 1489-96.

132. PLINK: a tool set for GWAS and PB analyses [Текст] / S Purcell, В Neale, К Todd-Brown [et al] // Am Journal Hum Genet. 2007 Sep;81(3):559-75.

133. Robak, T. Current and emerging monoclonal antibody treatments for chronic lymphocytic leukemia: state of the art [Текст] / T.Robak //. Expert Rev Hematol. 2014 Sep 24:1-17.

134. RANKL expression, function, and therapeutic targeting in multiple myeloma and chronic lymphocytic leukemia [Текст] / BJ Schmiedel, CA Scheible, T Nuebling [et al.] // Cancer Res. 2013 Jan 15;73(2): 683-94.

135. B-cell receptor triggers drug sensitivity of primary CLL cells by controlling glucosylation of ceramides [Текст] / J Schwamb, V Feldhaus, M Baumann [et al.] // Blood. 2012 Nov 8;120(19):3978-85.

136. MicroRNA-145 is regulated by DNA methylation and p53 gene mutation in prostate cancer [Текст] / О Seong. Suh, Yi Chen, Mohd Saif Zaman [et al.] // Carcinogenesis. 2011 May; 32(5): 772-778.

137. Shaknovich, R. Gene expression and epigenetic deregulation [Текст] / R. Shaknovich // Adv Exp Med Biol. 2013;792:133-50.

138. Phase II trials of single-agent anti-VEGFA therapy for patients with chronic lymphocytic leukemia [Текст] / T Shanafelt, С Zent, J Byrd [et al.] // Leuk Lymphoma. 2010 Dec;51(12):2222-9.

139. B-cell targeted therapy with rituximab for thyroid eye disease:closer to the clinic [Текст] / S Shen, A Chan, PP Sfikakis [et al.] // Surv Ophthalmol. 2013 May-Jun;58(3):252-65.

140. Soderberg, A. A protein disulfide isomerase/thioredoxin-1 complex is physically attached to exofacial membrane tumor necrosis factor receptors: overexpression in chronic lymphocytic leukemia cells [Текст] / A Soderberg, A Hossain, A Rosen. // Antioxid Redox Signal. 2013 Feb 1;18(4): 363-75.

141. Stephens, D.M. Chronic lymphocytic leukemia with del(17pl3.1): a distinct clinical subtype requiring novel treatment approaches [Текст] / DM Stephens, JC Byrd // Oncology (Williston Park). 2012 Nov;26(ll): 1044-54.

142. Strachan, T. Human Molecular Genetics. 2nd edition [Текст] / T Strachan, AP Read // New York: Wiley-Liss; 1999.

143. Modulationof microRNA processing by p53 [Текст] / HI Suzuki, К Yamagata, К Sugimoto [et al.] // Nature. 2009 Jul 23;460(7254): 529-33.

144. European Research Initiative on CLL (ERIC). Overview of available p53 function tests in relation to TP53 and ATM gene alterations and chemoresistance in chronic lymphocytic leukemia. [Текст] / GD te Raa, J Malcikova, S Pospisilova [et al.] // Leuk Lymphoma. 2013 Aug;54(8):1849-53.

145. VEGFA/VEGFAR2 interaction down-regulates matrix metalloproteinase-9 via STAT1 activation and inhibits В chronic lymphocytic leukemia cell

migration [Текст] / E Ugarte-Berzal, J Redondo-Muñoz, P Eróles [et al.] // Blood. 2010 Jan 28; 115(4):846-9.

146. Strong correlation between VEGFA and MCL-1 mRNA expression levels in B-cell chronic lymphocytic leukemia [Текст] / L Veronese, O Tournilhac, P Verrelle [et al.] //LeukRes. 2009 Dec;33(12):1623-6.

147. Prognostic relevance of angiopoietin-2, fibroblast growth factor-2 and endoglin mRNA expressions in chronic lymphocytic leukemia [Текст] / F Vrbacky, J Nekvindova, V Rezacova [et al.] // Neoplasma. 2014;61(5):585-92.

148. Association between single nucleotide polymorphism-genotype and outcome of patients with chronic lymphocytic leukemia in a randomized chemotherapy trial [Текст] / R Wade, MC Di Bernardo, S Richards [et al.] // Haematologica. 2011 Oct;96( 10): 1496-503.

149. Warner, J.L. Alemtuzumab use in relapsed and refractory chronic lymphocytic leukemia: a history and discussion of future rational use [Текст] / JL Warner, JE Arnason. // Ther Adv Hematol. 2012 Dec;3(6): 375-89.

150. MDM2 SNP309 promoter polymorphism, an independent prognostic factor in chronic lymphocytic leukemia [Текст] / К Willander, J Ungerback, К Karlsson [et al.] // Eur Journal Haematol. 2010 Sep;85(3): 251-6.

151. Effects of a SNP in the human TNFA promoter on transcriptional activation [Текст] / A.G.Wilson, J.A.Symon, T.L. McDowel [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. - 1997. - Vol. 94. - P. 3195-3199

152. VEGFA and bFGF gene polymorphisms in Polish patients with B-CLL [Текст] / T Wróbel, G Mazur, J Dzietczenia [et al] // Med Oncol. 2013 Mar;30(l):456.

153. Xia, Y. Angiogenic factors in chronic lymphocytic leukemia [Текст] / Y Xia, RN Lu, J Li. // Leuk Res. 2012 0ct;36(10):1211-7.

154. Wnts signaling in chronic lymphocytic leukemia [Текст] / JD Xu, JY Li, P Liu // Zhonghua Xue Ye Xue Za Zhi. 2012 Sep;33(9): 785-8.

155. Association of interleukin-6 and interleukin-8 with poor prognosis in elderly patients with chronic lymphocytic leukemia [Текст] / JY Yoon, S Lafarge, D Dawe [et al.] // Leuk Lymphoma. 2012 Sep;53(9):1735-42.

156. State of the art of the therapeutic perspective of sorafenib against hematological malignancies [Текст] / G Zauli, R Voltan, V Tisato, P Secchiero // Curr Med Chem. 2012;19(28):4875-84.

157. MDM2 promotor polymorphism and disease characteristics in CLL [Текст] / T Zenz, A Benner, S Stilgenbauer // Leuk Res. 2010 May;34(5): 578-9.

158. Akt is activated in chronic lymphocytic leukemia cells and delivers a pro-survival signal: the therapeutic potential of Akt inhibition [Текст] / J Zhuang, SF Hawkins, MA Glenn [et al.] // Haematologica. 2010 Jan;95(l): 110-8.