Молекулярные механизмы сопряжения гормональных рецепторов с G-белками в аденилатциклазной сигнальной системе позвоночных и беспозвоночных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, доктор биологических наук Шпаков, Александр Олегович

• Шпаков, Александр Олегович
• доктор биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации доктор биологических наук Шпаков, Александр Олегович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

ВВЕДЕНИЕ

Гормональные сигнальные системы, их эволюция

Аденилатциклазная сигнальная система

Рецепторы, функционально сопряженные с G-белками

Гетеротримерные ГТФ-связывающие белки

Аденилатциклаза цАМФ-зависимая протеинкиназа

ГЛАВА 1. Молекулярные детерминанты, ответственные за функциональное взаимодействие между рецепторами и гетеротримерными G-белками

1.1. Теоретический анализ первичной структуры рецепторов серпантинного типа для выявления в них молекулярных детерминант, взаимодействующих с G-белками

1.1.1. Участие первой цитоплазматической петли рецепторов в связывании G-белков

1.1.2. Участие второй цитоплазматической петли рецепторов в сопряжении с G-белками

1.1.3. Ключевая роль третьей цитоплазматической петли рецепторов в функциональном взаимодействии с G-белками

1.1.4. Участие С-концевого домена рецепторов в сопряжении с G-белками

1.2. Молекулярные детерминанты в молекулах а-субъединиц G-белков, определяющие их взаимодействие с рецепторами

ГЛАВА 2. Применение пептидов, производных первичной структуры сигнальных белков, для изучения молекулярных механизмов передачи гормонального сигнала в клетку 53 2.1. Обзор литературы

2.1.1. Пептиды, производные рецепторов серпантинного типа

2.1.2. Пептиды, производные а-субъединиц G-белков

2.1.3. Перспективы использования пептидной стратегии

2.2. Результаты экспериментальных исследований

2.2.1. Исследование молекулярных механизмов действия биогенных аминов на активность АЦС в тканях позвоночных и беспозвоночных с применением С-концевых пептидов а-субъединиц Gs- и Gj-белков

2.2.2. Исследование регуляции биогенными аминами активности АЦС в тканях моллюска Anodonta cygnea и применение С-концевых пептидов для идентификации типа G-белков, участвующих в этом процессе

2.3. Обсуждение результатов исследования

2.3.1. Разработка принципов применения С-концевых пептидов Ga-субъединиц для изучения сопряжения рецепторов с различными типами G-белков

2.3.2. Применение С-концевых пептидов для идентификации типа G-белков, участвующих в регуляторном действии биогенных аминов на АЦС в нервной и мышечной тканях моллюска

ГЛАВА 3. Молекулярные механизмы действия релаксина и инсулиноподобных пептидов моллюска на аденилатциклазу и участие в этом процессе гетеротримериых G-белков

3.1. Обзор литературы и теоретические исследования S

3.1.1. Множественность молекулярных механизмов действия пептидов инсулинового суперсемейства на клетку и участие в них гетеротримериых G-белков

3.1.2. Структурно-функциональная организация релаксиновой сигнальной системы

3.1.3. Структурно-функциональная характеристика и молекулярные механизмы действия инсулиноподобных пептидов моллюсков

3.2. Результаты экспериментальных исследований

3.2.1. Исследование молекулярных механизмов передачи релаксинового сигнала через трехкомпонентную АЦС

3.2.2. Исследование шестикомпонентного аденилатциклазного сигнального механизма действия релаксина

3.2.3. Молекулярные механизмы регуляторного влияния ИПП моллюска

A. cygnea на активность АЦС в тканях моллюска и крысы

3.3. Обсуждение результатов исследования

3.3.1. Регулируемая релаксином трехкомпонентная АЦС, включающая рецептор серпантинного типа LGR

3.3.2. Шестикомпопентный аденилатциклазный сигнальный механизм действия релаксина

3.3.3. Молекулярные механизмы регуляторного действия ИПП моллюска на АЦС

ГЛАВА 4. Нарушения функционального сопряжения рецепторов с G-белками при экспериментальном диабете

4.1. Обзор литературы

4.2. Результаты исследований

4.2.1. Регуляторное влияние биогенных аминов на активность АЦС в миокарде и скелетных мышцах крыс со стрептозотоциновым диабетом 1-го типа

4.2.2. Регуляция биогенными аминами и пептидными гормонами функциональной активности АЦС в тканях крыс с неонатальным СТЦ диабетом 2-го типа

4.3. Осуждение результатов исследования

ГЛАВА 5. Молекулярные механизмы действия поликатионных пептидов, мимикрирующих рецепторы, на функциональную активность АЦС

5.1. Обзор литературы

5.2. Результаты исследований

5.2.1. Характеристика поликатионных пептидов

5.2.2. Влияиие поликатиониых пептидов на активность АЦ и ГТФ-связывание G-белков

5.2.3. Влияние поликатионных пептидов на связывающие характеристики рецепторов и их сопряжение с G-белками

5.2.4. Исследование молекулярных механизмов действия поликатионных пептидов на компоненты АЦС - G-белки и рецептор '

5.3. Осуждение результатов исследований

5.3.1. Стратегия синтеза поликатионных пептидов и изучение чувствительности к ним АЦС

5.3.2. Механизмы действия поликатионных пептидов на АЦС и идентификация G-белков, мишеней их действия

ГЛАВА 6. Структурно-функциональная организация аденилатциклазной системы инфузорий и ее чувствительность к гормональным агентам

6.1. Обзор литературы и теоретический анализ первичных структур сигнальных белков низших эукариот

6.1.1. Обнаружение у низших эукариот гормонов, подобных таковым высших эукариот

6.1.2. Рецепторы серпантинного типа

6.1.3. Гетеротримерные G-белки

6.1.4. Аденилатциклазы и протеинкиназы А низших эукариот

6.1.5. Многообразие АЦС низших эукариот

6.2. Результаты экспериментальных исследований

6.2.1. Объекты исследования

6.2.2. Обнаружение и функциональная характеристика аденилатциклазы инфузорий

6.2.3. Чувствительность аденилатциклазы инфузорий к биогенным аминам

6.2.4. Идентификация и характеристика рецепторов катехоламинов у инфузорий

6.2.5. Стимуляция биогенными аминами ГТФ-связывания G-белков инфузорий

6.2.6. Чувствительность аденилатциклазы и G-белков инфузорий к пептидным гормонам млекопитающих

6.2.7. Характеристика цАМФ-зависимой протеинкиназы у инфузорий

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярные механизмы сопряжения гормональных рецепторов с G-белками в аденилатциклазной сигнальной системе позвоночных и беспозвоночных»

Актуальность исследования. Регуляция большинства жизненно важных функций и процессов в организме позвоночных и беспозвоночных животных осуществляется с помощью гормонов и гормоноподобных веществ. Их действие реализуется через высоко специализированные гормональные сигнальные системы. Предметом нашего исследования была наиболее широко распространенная гормопочувствительная аденилатциклазная система (АЦС). Ее основными компонентами являются рецептор, расположенный в плазматической мембране (ПМ) и специфически опознающий гормональный сигнал, гетеротримерный G-белок стимулирующего (Gs-белок) или ингибирующего (Gi-белок) типа, который состоит из трех типов субъединиц - а, р и у, и фермент аденилатциклаза (АЦ), генерирующий образование вторичного посредника цАМФ. цАМФ активирует протеинкиназу А (П1С4) и через нее регулирует широкий спектр эффекторных систем клетки.

Несмотря на значительный прогресс, достигнутый в последние годы в изучении АЦС, молекулярные механизмы передачи через нее гормонального сигнала остаются до конца невыясненными. Недостаточно информации о молекулярных детерминантах в белках, компонентах АЦС, вовлеченных в процесс их функционального взаимодействия и являющихся ключевыми звеньями в сигнал передающей цепи. Много вопросов остается и в отношении регуляции АЦС гормонами, которые действуют через рецепторы, не относящиеся к серпантинному типу. По-прежнему мало изученными остаются АЦС беспозвоночных животных, в первую очередь одноклеточных эукариот.

Понимание того, каким образом функционирует АЦС, является одним из магистральных направлений в современной биохимии и молекулярной эндокринологии, поскольку через эту систему свое регуляторное влияние на клетку оказывают более сотни различных по своей природе гормонов, а сама АЦС играет ключевую, координирующую роль в регуляции практически всех жизненно важных клеточных процессов - роста, метаболизма, апоптоза, дифференцирования. Решению актуальной проблемы функционирования АЦС и посвящено настоящее исследование, в котором изучены молекулярные механизмы функционального сопряжения компонентов АЦС и, в первую очередь, взаимодействия между активированным рецептором и G-белком, как ключевого этапа передачи гормонального сигнала через эту систему. В работе применен эволюционный подход, который заключался в сравнительном исследовании функциональных блоков АЦС у животных различного филогенетического уровня -высших позвоночных (крысы), многоклеточных беспозвоночных (моллюски, черви) и одноклеточных эукариот (инфузории). Оригинальным и перспективным является использование для выяснения молекулярных механизмов сопряжения рецепторов с G-белками пептидной стратегии, которая представляет собой принципиально новый подход в изучении функционирования сигнальных систем и их компонентов на субмолекулярном уровне.

Открытие в лаборатории АЦ сигнального механизма действия инсулина (Pertseva et al., 2003), заставляет по-новому взглянуть и на молекулярные механизмы действия на АЦС родственного ему релаксина. Релаксин регулирует широкий спектр физиологических процессов в организме человека и рассматривается как перспективный лекарственный препарат для лечения заболеваний репродуктивной, сердечно-сосудистой и нервной систем. Однако до сих пор молекулярные механизмы действия релаксина па клетку изучены недостаточно. Расшифровка этих механизмов представляет собой важнейший этап в понимании общих закономерностей регуляторпого влияния релаксина и других пептидов инсулинового суперсемейства на функциональную активность эффекторных, в том числе цАМФ-зависимых, систем клетки, и является необходимым условием для практического применения релаксина в медицине.

Создание новых, более эффективных, гормональных препаратов, обладающих высокой специфичностью и селективностью регуляторного действия на АЦС, требует разработки функциональных зондов для изучения молекулярных механизмов взаимодействия рецепторов с G-белками. Одним из перспективных подходов для разработки таких зондов является синтез негормональных регуляторов АЦС - пептидов, которые мимикрируют функционально важные для взаимодействия с G-белками участки рецепторов и способны влиять на функциональную активность компонентов АЦС. В настоящем исследовании нами были впервые синтезированы различные по своей структуре поликатионные пептиды, которые по независимому от рецептора механизму активируют G-белки и влияют на передачу гормональных сигналов через АЦС.

В настоящее время сравнительно мало известно о структурно-функциональной организации АЦС одноклеточных, в частности инфузорий. В то же время, исследование сигнальных систем одноклеточных представляет как теоретическую, так и практическую ценность. Согласно развиваемым в нашей лаборатории представлениям (Перцева, 1989; Pertseva, 1991), именно на уровне одноклеточных эукариот начинают формироваться гормональные сигнальные системы высших эукариот. Инфузории Dileptus anser и Tetrahymena pyriformis, избранные нами в качестве объектов, широко используются в экотоксикологических исследованиях. Поскольку АЦС является одной из мишеней внешних воздействий, то выяснение ее функционирования поможет в разработке новых эффективных подходов для оценки последствий таких воздействий и их мониторинга. Цели и задачи исследования. Цель исследования состояла в выяснении молекулярных механизмов функционального сопряжения гормональных рецепторов и гетеротримерных G-белков, компонентов АЦС, в клетках животных различного филогенетического уровня. Задачи исследования состояли:

1) С помощью сравнительного теоретического анализа выявить в рецепторах серпантинного типа и гетеротримерных G-белках молекулярные детерминанты, ответственные за их функциональное сопряжение и вовлеченные в процесс передачи гормонального сигнала.

2) Использовать пептидную стратегию, заключающуюся в синтезе пептидов, которые соответствуют взаимодействующим с рецепторами С-концевым участкам а-субъединиц G-белков, для исследования молекулярных механизмов передачи гормональных сигналов через АЦС в тканях позвоночных и беспозвоночных животных.

3) С применением впервые синтезированных пептидов, соответствующих С-концевому участку третьей цитоплазматической петли (С-ЦП-3) рецептора релаксина LGR7, выявить и изучить молекулярные механизмы передачи релаксинового сигнала через АЦС в тканях позвоночных и беспозвоночных животных.

4) Расшифровать и исследовать структурно-функциональную организацию АЦ сигнального механизма действия релаксина, обнаруженного в скелетных мышцах крысы и гладких мышцах моллюска Anodonta cygnea.

5) Исследовать чувствительность АЦС к биогенным аминам и пептидным гормонам при стрсптозотоциновом (СТЦ) диабете 1-го и 2-го типов у крыс и выявить локализацию нарушений в АЦС, возникающих в условиях этой патологии.

6) Провести сравнительное исследование механизмов действия синтетических поликатионных пептидов, не имеющих гомологии с сигнальными белками, но способных мимикрировать функционально важные для сопряжения с G-белками участки рецепторов, на функциональную активность компонентов АЦС.

7) Охарактеризовать АЦС одноклеточных эукариот - инфузорий D. anser и Т. pyriformis, и изучить молекулярные механизмы передачи через нее гормональных сигналов на этапе сопряжения рецептора с G-белком и АЦ.

Научная иовизна. В результате проведенных теоретических и экспериментальных исследований показано, что одним из основных молекулярных механизмов, лежащих в основе функционального сопряжения рецепторов с G-белками в тканях позвоночных и беспозвоночных, является способность поликатионных спиралей цитоплазматических петель активированного гормоном рецептора взаимодействовать с С-концевым сегментом а-субъединицы гетеротримерпого G-белка и опосредовать, таким образом, передачу гормонального сигнала к АЦ и цАМФ-зависимым эффекторным системам.

Впервые показано, что С-концевые пептиды а-субъединиц Gs- и Gj-бслков способны с высокой селективностью прерывают передачу гормонального сигнала через те типы G-белков, производными первичной структуры которых они являются, вследствие чего их можно применять для идентификации G-белков, участвующих в сигнальной трапсдукции.

Показано, что впервые синтезированные нами пептиды, соответствующие С-ЦП-3 релаксинового рецептора LGR7, не только влияют на передачу релаксинового сигнала через АЦС в сердце и мозге крыс, но и независимым от рецептора способом активируют G-белки и АЦ. Это указывает на участие рецептора LGR7 в трансдукции релаксинового сигнала в этих тканях и свидетельствует о вовлечении в процесс функционального сопряжения с G-белком С-ЦП-3 рецептора LGR7.

Впервые расшифрован АЦ сигнальный механизм действия релаксина, реализуемый в скелетных мышцах крысы, который включает: рецептор тирозинкиназного типа => Gj-белок (GPy-димер) => фосфатидилипозитол-З-киназу (ФИ-5

К) => протеинкиназу СС, (F1KCQ=> Gj-белок => АЦ. По своей структурно-функциональной организации он сходен с открытым в лаборатории АЦ сигнальным механизмом действия инсулина (Pertseva et al., 2003).

В работе впервые показано, что основные нарушения в АЦС при СТЦ диабете 1-го и 2-го типов у крыс, возникают па этапе сопряжения рецепторов биогенных аминов и пептидных гормонов с различными типами G-белков. Для изучения этих нарушений была применена разработанная автором пептидная стратегия.

Впервые охарактеризована АЦС представителей одноклеточных эукариот -инфузорий D. anser и Т. pyriformis, сходная по ряду свойств с АЦС позвоночных. Показано, что ее функциональная активность регулируется биогенными аминами и пептидными гормонами млекопитающих. Эти данные и результаты проведенного нами сравнительного теоретического анализа первичных структур компонентов АЦС одноклеточных, свидетельствуют о раннем формировании АЦС в эволюции. Научно-практическая значимость работы. Синтезированные нами и исследованные в работе пептиды, соответствующие участкам рецепторов и G-белков, ответственным за взаимодействие между ними, а также синтетические поликатионные пептиды, мимикрирующие эти участки, но не имеющие гомологии с сигнальными белками, могут быть в дальнейшем применены как в качестве функциональных зондов для изучения молекулярных основ функционирования АЦС, так и в качестве высокоэффективных и селективных негормональных регуляторов активности сигнальных белков. В перспективе на основе этих пептидов могут быть разработаны лекарственные препараты, избирательно действующие на функциональную активность гормональных сигнальных систем. Материалы диссертации могут быть использованы в курсах лекций для студентов и аспирантов в Санкт-Петербургском государственном университете, Медицинском университете, Химико-фармацевтической Академии и других Университетах и вузах России.

Положения, выносимые на защиту.

1. Основные молекулярные детерминанты, ответственные за взаимодействие с G-белками, локализованы в проксимальных к мембране участках цитоплазматических петель (ЦП) рецепторов и характеризуются наличием кластеров положительно заряженных аминокислот и способностью формировать спиральные структуры.

Синтетические пептиды, которые соответствуют участкам рецепторов и G-белков, ответственным за их функциональное взаимодействие, способны с высокой эффективностью и селективностью по конкурентному механизму прерывать проведение гормонального сигнала через АЦС.

2. Молекулярные механизмы стимулирующего АЦ действия релаксина являются ткане- и видоспецифичными и реализуются через гетеротримерные G-белки. В сердце и мозге крысы релаксин осуществляет свое действие через трехкомпонентную АЦС, в скелетных мышцах крысы и гладких мышцах моллюска A. cygnea - через шестикомпонентный АЦ сигнальный механизм.

3. В условиях СТЦ диабета 1-го и 2-го типа у крыс наблюдаются нарушения функционирования чувствительной к биогенным аминам и пептидным гормонам АЦС, в первую очередь на этапе сопряжения активированного гормоном рецептора с G-белком.

4. Синтетические поликатионные пептиды, мимикрирующие взаимодействующие с G-белками участки рецепторов, способны по независимому от рецептора механизму активировать G-белки и влиять на проведение гормонального сигнала через АЦС.

5. В клеточных культурах инфузорий D. anser и Т. pyriformis имеется функционально . активная АЦС, чувствительная к гормонам млекопитающих. Это согласуется с присутствием у одноклеточных эукариот сигнальных белков, гомологичных компонентам АЦС позвоночных, что свидетельствует об эволюционной ■ консервативности АЦС эукариотических организмов.

Апробация работы. Основные результаты и положения работы широко представлены на большом числе отечественных и зарубежных научных конференций и симпозиумов, в том числе: на VI Международном конгрессе по нейроэндокрииологии (Питтсбург, США, 2006), па 111 Международном симпозиуме по пептидам (Прага, Чехия, 2004), на III и IV Международных конференциях по релаксину и родственным пептидам (Брум, Австралия, 2000; Виоминг, США, 2004), на XVII, XXI и XXII Конференциях сравнительных эндокринологов (СБСЕ; Кордоба, Испания, 1994; Бонн, Германия, 2002; Уппсала, Швеция, 2004), на Международном симпозиуме по сигнальной трансдукции (FEBS; Брюссель, Бельгия, 2003), на Симпозиуме "Cell Signalling Mechanisms: from Membrane to Nucleus" (FEBS; Амстердам, Нидерланды, 1997), на Европейской конференции "Cell signaling, transcription, and translation as therapeutic targets" (Люксембург, 2002), на

Международном симпозиуме "Structure, stability and folding of proteins: fundamental and medical aspects" (Москва, 1998), на Международной научно-практической конференции «Инфузории в биотестировании» (Санкт-Петербург, 1997), на VII Восточноевропейской конференции по нейробиологии беспозвоночных (Калининград, 2003), на IV Международной конференции по простейшим нервным системам (Пущино, 1994), на XI, XII и XIII Международных конференциях по эволюционной физиологии (Санкт-Петербург, 1996, 2002, 2006), на Международной конференции «Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов» (Петрозаводск, 2004), на II Международной конференции «Эндокринная регуляция физиологических функций в норме и патологии», посвященной памяти М.Г. Колпакова (Новосибирск, 2002), на I и II Всероссийских симпозиумах по химии и биологии пептидов (Москва, 2003, Санкт-Петербург, 2005), на XV Всероссийском совещании «Структура и функции клеточного ядра» (Санкт-Петербург, 2005), на I съезде физиологов СНГ (Сочи, 2005), на Всероссийском физиологическом съезде (Екатеринбург, 2004), на Конференции «Молекулярные механизмы типовых патологических процессов», посвященной памяти П. М. Альбицкого (Санкт-Петербург, 2003), на I съезде Общества клеточной биологии (Санкт-Петербург, 2003), на Всероссийской конференции «Нейрофармакология в XXI веке» (Санкт-Петербург, 2002).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 85 научных работ, в том числе 45 статей в рецензируемых отечественных и международных научных изданиях и 40 тезисов докладов.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 300 страницах, состоит из введения, 6 отдельных глав, включающих обзор литературы, результаты экспериментальных и теоретических исследований и их обсуждение, главы с описанием методов исследования, заключения, выводов и списка литературы, включающего 342 источника, в том числе 78 отечественных и 264 иностранных. Работа иллюстрирована 87 рисунками и 11 таблицами.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Шпаков, Александр Олегович

ВЫВОДЫ.

1. Основные молекулярные детерминанты рецепторов серпантинного типа, ответственные за взаимодействие с G-белками, локализованы в проксимальных к мембране участках их цитоплазматических петель и характеризуются наличием кластеров положительно заряженных аминокислот и способностью формировать спиральные структуры.

2. Синтетические пептиды, соответствующие молекулярным детерминантам в а-субъединицах G-белков и рецепторах, которые ответственны за их функциональное сопряжение, способны с высокой эффективностью и селективностью по конкурентному механизму прерывать проведение гормонального сигнала, осуществляемого через те сигнальные белки, производными которых они являются.

3. Молекулярные механизмы стимулирующего АЦ действия релаксина являются ткане- и видоспецифичпыми. В сердце и мозге крысы релаксин осуществляет свое действие через трехкомпонентную АЦС, включающую рецептор LGR7 серпантинного типа, Gs-белок и АЦ, в скелетных мышцах крысы и гладких мышцах моллюска A. cygnea - через шестикомпонептный АЦ сигнальный механизм, включающий рецептор тирозипкииазпого типа, Ру-димер Gj-белка, фосфатидилипозитол-3-киназу, протеинкиназу Gs-белок и АЦ.

4. В условиях стрептозотоцинового диабета 1-го и 2-го типов у крыс наблюдается ослабление функционального сопряжения активированного гормоном рецептора с G-белком и АЦ. В большей степени нарушаются функции Gj-белков, что приводит к подавлению ингибирующего влияния биогенных аминов и соматостатина на АЦ.

5. Синтетические поликатионные пептиды, мимикрирующие взаимодействующие с G-белками участки рецепторов, активируют G-белки и негативно влияют на проведение гормонального сигнала через АЦС. Эффективность и молекулярные механизмы действия этих пептидов на АЦС определяются распределением положительно заряженных аминокислот в спирали, наличием гидрофобных радикалов и степенью разветвленности.

6. В клеточных культурах инфузорий Dileptus anser и Tetrahymenapyriformis обнаружена и охарактеризована чувствительная к гормонам млекопитающих АЦС, сопряженная с гетеротримерными G-белками и сходная по ряду признаков с гормоночувствительной АЦС позвоночных, что свидетельствует о высокой консервативности АЦС у представителей низших и высших эукариот и ее раннем формировании в эволюции.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает благодарность за помощь и содействие в проведении экспериментов сотрудникам лаборатории молекулярной эндокринологии Института эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова РАН ведущему научному сотруднику, доктору биологических наук Кузнецовой Людмиле Александровне, старшему научному сотруднику, кандидату биологических наук Плесневой Светлане Александровне, научному сотруднику, кандидату биологических наук Деркач Кире Викторовне, ведущему научному сотруднику, кандидату биологических наук Бондаревой Вере Михайловне, младшему научному сотруднику Шаровой Татьяне Сергеевне, за синтез пептидов - сотрудникам лаборатории биологически активных полимеров Института высокомолекулярных соединений РАН заведующему лабораторией, доктору химических наук, профессору Власову Геннадию Петровичу, старшему научному сотруднику, кандидату химических наук Гурьянову Ивану Александровичу, старшему научному сотруднику, кандидату химических наук Королькову Валерию Игоревичу, за предоставление клеточных культур инфузорий сотруднику лаборатории биологии одноклеточных организмов Института цитологии РАН старшему научному сотруднику, кандидату биологических наук Успенской Зое Ивановне.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате комплекса проведенных экспериментальных и теоретических исследований получены принципиально новые данные и расширены современные представления, касающиеся функционирования гормоночувствительной АЦС в клетках животных ' различного филогенетического уровня и молекулярных механизмов функционального взаимодействия рецепторов с гетеротримерными G-белками, как ключевого этапа передачи гормонального сигнала, осуществляемого через АЦС.

Несмотря на большое число работ, в которых проводился поиск участков в первичных структурах сигнальных белков, компонентов сопряженных с G-белками гормональных сигнальных систем, ответственных за функциональное взаимодействие между ними, до сих пор не проведен системный анализ полученных результатов. Такой анализ необходим как для идентификации набора универсальных молекулярных детерминант, вовлеченных в функциональное взаимодействие рецепторов с гетеротримерными G-белками и последних с эффекторами, так и для выяснения молекулярных механизмов процесса передачи гормонального сигнала, в основе которого лежит цепь конформационных перестроек пространственной структуры сигнальных белков, инициируемых связыванием гормона, берущая начало в лигандсвязывающем сайте рецептора и заканчивающаяся в каталитическом сайте фермента-генератора вторичных посредников, в случае АЦС - в каталитическом сайте фермента АЦ.

Основываясь на результатах проведенного нами сравнительного теоретического анализа первичных структур рецепторов серпантинного типа, относящихся ко всем основным их типам, и также на проанализированных и систематизированных нами данных литературы, в структуре этих рецепторов были выявлены молекулярные детерминанты, соответствующие проксимальным к мембране участкам ЦП, в первую очередь ЦП-3, которые ответственны за взаимодействие активированного гормоном рецептора с С-концевым сегментом а-субъединицы G-белка. Характерными особенностями таких участков являются присутствие в их структуре кластеров положительно заряженных АКО, образующих мотивы ВВххВ-типа, и способность к образованию амфипатических а-спиралей. Положительно заряженные АКО расположены в спирали таким образом, что они формируют положительно заряженную поверхность, которая, как можно полагать, и определяет функциональное взаимодействие рецептора с отрицательно заряженным рецептор-связывающим сайтом Ga-субъединицы. Образуемые проксимальными к мембране участками ЦП рецепторов амфипатические поликатионные спирали представляют собой продолжения, так называемые цитоплазматические «расширения», ТМ рецептора и формируют цитоплазматический выход из ТМК. Поскольку внутри ТМК рецептора или на его внешнем выходе расположен лиганд-связывающий сайт, с которым связывается молекула гормона, то между этим сайтом и проксимальными к мембране спиральными участками ЦП возможен непосредственный контакт через систему водородных связей и гидрофобных взаимодействий, которая формируется сетью АКО, расположенных внутри ТМК. Связывание лиганда вызывает такое перераспределение заряда в лигандсвязывающем сайте рецептора, которое инициирует изменение конформации проксимальных участков ЦП, ведет к их высвобождению из комплекса с другими участками рецептора и экспонированию в сторону Ga-субъединицы. Одной из перспективных физико-химических моделей, описывающих процесс передачи волны конформационных перестроек в системе рецептор-С-белок, является модель протонного насоса, экспериментально подтвержденная для эволюционно древних бактериальных родопсинов, предшественников всех рецепторов серпантинного типа эукариот, а также для некоторых рецепторов биогенных аминов.

Таким образом, выявленные нами молекулярные детерминанты могут рассматриваться, как ключевое звено в передаче гормонального сигнала на этапе сопряжения рецептора с G-белком, и представляют собой универсальный эволюционно древний механизм, лежащий в основе взаимодействия этих сигнальных белков. В то же время, проведенный нами теоретический анализ отчетливо продемонстрировал, что универсальность этих детерминант вовсе не означает, что они идентичны по своей структуре и локализации в серпантинных рецепторах, относящихся к различным их типам и сопряженных с различными G-белками. Так, несмотря на то, что в подавляющем большинстве рецепторов определяющую роль в сопряжении с G-белками играет ЦП-3, в некоторых типах рецепторах в этом процессе участвуют также ЦП-2 и СКД, причем структура локализованных в них молекулярных детерминант существенно не отличается от таковых в ЦП-3. В родопсине позвоночных, например, во взаимодействие с G-белками вовлечены ЦП-2, ЦП-3 и СКД. Это свидетельствует о том, что на начальных этапах эволюции, а родопсин берет свое начало непосредственно от бактериальных родопсинов, молекулярные детерминанты распределялись по всем ЦП рецептора и только впоследствии сосредоточились, в основном, в ЦП-3.

Нами показано, что функциональное значение различных участков ЦП-3 рецепторов для их взаимодействия с G-белками также не одинаково и определяется тем, с каким типом G-белка сопряжен рецептор. В Gs-сопряженных рецепторах для взаимодействия с Gs-белками более важны С-ЦП-3 и интерфейс ЦП-З/ТМ-6, в то время как в Gj/0-сопряженных рецепторах - их N-ЦП-З. В рецепторах, сопряженных с другими типами G-белков (Gqji,i4,i5,i6 и трансдуцином), набор участков, вовлеченных в связывание и активацию G-белков, более разнообразен и включает, в том числе, центральные участки ЦП-3. При этом в первичной структуре ЦП-3 локализованы консенсусные среди различных рецепторов N- и С-концевые мотивы, которые определяют селективность и эффективность их взаимодействия с определенными типами G-белком. Полученные данные могут быть использованы для направленного поиска в молекулах рецепторов и G-белков участков, функционально важных для передачи гормонального сигнала через АЦС, что и было продемонстрировано в наших экспериментах по изучению АЦС, чувствительной к пептидным гормонам и биогенным аминам.

Для исследования молекулярных механизмов функционального сопряжения компонентов АЦС и проверки сделанных на основе теоретических исследований выводов и предположений нами была разработана и применена пептидная стратегия, которая заключалась в синтезе пептидов, соответствующих по своей первичной структуре участкам этих белков, которые ответственны за взаимодействие между ними. С этой целью впервые были синтезированы пептиды, которые соответствуют по своей первичной структуре выявленным с помощью теоретического анализа участкам сигнальных белков - С-концевому сегменту ЦП-3 рецептора релаксина LGR7 серпантинного типа и С-концевым сегментам а-субъединиц Gs- и Gj-белков. Показано, что синтетические пептиды действуют на функциональную активность АЦС с высокой селективностью, что выражается в их влиянии только на те сигнальные пути, которые осуществляются с участием белков (рецепторов и а-субъединиц G-белков), производными АКП которых эти пептиды являются. Обнаружено также, что пептиды, производные рецептора LGR7, способны активировать пострецепторные звенья АЦС по независимому от рецептора механизму вследствие их прямого взаимодействия с Gs-белком. Применение таких пептидов открывает новые перспективы для поиска и разработки пегормональных регуляторов сигнальных систем, которые будут действовать по независимым от рецептора сигнальным путям и с высокой селективностью активировать пострецепторные звенья сопряженных с G-белками сигнальных каскадов.

Пептидная стратегия, основанная на применении пептидов, производных рецептора LGR7 и С-коицевых пептидов Ga-субъединиц, была использована для выяснения молекулярных механизмов действия на АЦС пептидного гормона релаксина, относящегося к пептидам инсулинового суперсемейства, который рассматривается как высоко эффективный лекарственный препарат для лечения широкого спектра заболеваний сердечно-сосудистой, нервной, выделительной и репродуктивной систем человека. Несмотря на то, что стимулирующее влияние релаксина на активность АЦ ранее было выявлено как в нашей лаборатории (Kuznetsova et al., 1999), так и другими авторами (Bani, 1997; Ivell, Einspanier, 2002), молекулярные механизмы действия гормона на АЦС до настоящего времени оставались не изученными. В частности, не был определен тип рецептора, через который релаксин опосредует свое регуляторное влияние на активность АЦ - предполагалось, что этот рецептор может относиться как к тирозинкиназному, так и к серпантинному типу (глава 3).

С помощью пептидной стратегии и широкого набора функциональных тестов нами впервые были установлены два различных АЦ сигнальных механизма действия пептидного гормона релаксина, которые являются ткане- и видоспецифичными. Первый из них, трехкомпонентный, включает рецептор серпантинного типа (LGR7), Gs-белок и фермент АЦ, в то время как второй, шестикомпонентный, включает более сложную цепь сигнальных белков: рецептор тирозинкиназного типа => Gj-белок (Gpy-димер) => ФИ-З-К => ПКС^ => Gs-белок АЦ. Несмотря на существенные различия в структурно-функциональной организации открытых нами АЦ сигнальных механизмов действия релаксина, они имеют и общие звенья - сопряжение гетеротримерного Gs-белка с ферментом АЦ. Показано, что трехкомпонентный АЦ сигнальный механизм, представляющий собой классическую АЦС, через которую свое регуляторное действие на АЦ оказывают значительное число гормонов и нейротрансмиттеров, функционирует в сердечной мышце и мозге крысы. В то же время, шестикомпонентный АЦ сигнальный механизм действия релаксина, сходный с таковым, обнаруженным ранее в лаборатории для инсулина (Pertseva et al., 2003) функционирует в скелетных мышцах крысы и гладких мышцах представителя беспозвоночных животных двустворчатого моллюска A. cygnea. Полученные нами данные свидетельствуют в пользу множественности сигнальных путей действия релаксина на активность АЦ в различных тканях, что важно учитывать при разработке новых подходов для практического применения релаксина в клинической медицине.

При изучении действия на АЦС других представителей инсулинового суперсемейства ИПП двустворчатого моллюска A. cygnea, имеющих общее с релаксином происхождение, также были выявлены различия в молекулярных механизмах действия этих пептидов на АЦ. При этом, однако, показано, что регуляторные эффекты двух исследованных нами ИПП нейронального происхождения осуществляются через гетеротримерные Gs-белки, что свидетельствует об универсальности этого компонента АЦС для обеспечения функционального сопряжения различных по природе рецепторов пептидов инсулинового суперсемейства с ферментом АЦ.

Возможным объяснением множественности молекулярных механизмов действия на АЦ пептидов инсулинового суперсемейства, которые являются сравнительно древними гормонами, появившимися еще на уровне примитивных беспозвоночных и обнаруженными даже у одноклеточных организмов (глава 6), является то, на начальных этапах эволюции апробировались различные молекулярные модели реализации регуляторного действия гормонов и гормоноподобных веществ на активность ферментов, генераторов циклических пуклеотидов, в частности АЦ. Так, например, у амебы D. discoideum сигнальный каскад, через который внеклеточный цАМФ стимулирует функциональную активность фермента АЦ-Л, структурно близкого АЦ млекопитающих, включает следующие основные звенья: цАМФ (хемоаттрактант) => цАМФ-рецептор => гетеротримерный Са2ру-белок (Gpy-димер) => Ras-белок => ФИ-З-К => белок CRAC => АЦ-Л => цАМФ (вторичный посредник) (Manahan et al., 2004). Этот АЦ сигнальный механизм действия цАМФ имеет много общих черт открытым нами шестикомпонентным АЦ сигнальным механизмом действия релаксина. В дальнейшем могла произойти дивергенция и специализация АЦ сигнальных механизмов действия гормонов, многие из них утратили свое значение и исчезли. В случае пептидов инсулинового суперсемейства различные АЦ сигнальные механизмы могли сохраниться вследствие того, что функцию рецепторпого компонента в них выполняют различные по своей структурно-функциональной организации рецепторы - как серпантинного, так и тирозинкиназпого типов.

Еще одной иллюстрацией успешного применения пептидной стратегии стало использование С-концевых пептидов а-субъедипиц Gs- и Gj-белков в сочетании с другими биохимическими и фармакологическими подходами для установления типа G-белков, участвующих в передаче гормонального сигнала, генерируемого биогенными аминами, в нервной и мышечной тканях моллюска A. cygnea, а также для выяснения молекулярных механизмов функционирования АЦС в этих тканях. Показано, что стимулирующие АЦ эффекты октопамина и дофамина в ганглиях моллюска A. cygnea реализуются через рецепторы, функционально сопряженные с Gs-белком, в то время как серотонин одновременно активирует как стимулирующий (через Gs-белок), так и ипгибирующий (через Gj-белок) пути регуляции АЦС. Во взятых для сравнения мышцах моллюска эффекты исследованных нами биогенных аминов осуществляются только через Gs-сопряженныс рецепторы. Совокупность собственных экспериментальных данных и сведений литературы позволила сделать вывод о том, что впервые выявленная в ганглиях моллюска A. cygnea АЦС сходна по ряду своих показателей с АЦС высших позвоночных животных.

Наряду с исследованием АЦС в норме, нами было изучено функциональное состояние этой сигнальной системы в тканях крыс, страдающих экспериментальным СТЦ диабетом, для чего применяли комплексный подход, составной частью которого также была пептидная стратегия. Показано, что при СТЦ диабете как 1-го, так и 2-го типов возникают значительные изменения чувствительности АЦС скелетных мышц и миокарда диабетических крыс к действию биогенных аминов и пептидных гормонов, которые в наибольшей степени проявляются в случае АЦС, сопряженной с Gj-белками. Одной из причин нарушений функционирования АЦС при диабете может быть ослабление функционального сопряжения рецепторов с Gj- и, в меньшей степени, Gs-белками. Выявлена тканевая специфичность изменений в функциональной активности Gs-сопряженной АЦС при СТЦ диабете 2-го типа, заключающаяся в снижении ее чувствительности к гормонам в миокарде диабетических крыс в сравнении с контролем при отсутствии заметных изменений в мозге. Полученные данные свидетельствуют о том, что применение С-концевых пептидов Ga-субъединиц при эндокринных и других патологиях может стать эффективным инструментом для выявления нарушений, возникающих в гормональных сигнальных системах на этапе сопряжения рецепторов с гетеротримерными G-белками.

Полученные при исследовании СТЦ диабета данные о снижении функциональной активности АЦС и ослаблении функционального взаимодействия проксимальных звеньев этой системы - рецептора и G-белка в мышечных тканях диабетических животных подтверждают основные положения высказанной нами ранее концепции молекулярных дефектов в гормональных сигнальных системах как причин эндокринной патологии (Перцева, Шпаков, 2004), которая устанавливает причинно-следственные связи между нарушениями, возникающими в гормональных сигнальных системах, и развитием эндокринных и гормон-зависимых заболеваний.

Выявление структурных особенностей G-белок-связывающих и G-белок-активирующих участков в молекулах рецепторов, таких как наличие поликатионных мотивов и способность к образованию a-спиралей, стало отправной точкой для создания серии синтетических пептидов, которые мимикрируют взаимодействующие с G-белками участки рецепторов, сходны с ними на уровне вторичной структуры - также способны формировать поликатионные амфипатические спирали, но не имеют гомологии на уровне первичной структуры. Показано, что впервые синтезированные нами поликатионные пептиды обладают способностью регулировать функциональную активность компонентов гормоночувствительной АЦС в клетках позвоночных и беспозвоночных животных, причем их действие направлено в основном на гетеротримерные G-белки и их функциональное сопряжение с рецептором. Некоторые из поликатионных пептидов, например разветвленные звездообразные пептиды, созданные на основе фрагмента 48-60 ТАТ-белка вируса иммунного дефицита 1-го типа человека, влияют также на рецептор и каталитический компонент АЦС - фермент АЦ, что свидетельствует в пользу того, что по своему действию на АЦС различные по структуре поликатионные пептиды отличаются друг от друга.

Проведенное в работе сравнение действия искусственно созданных поликатионных пептидов с природным токсином мастопараном обнаружило черты сходства и различий в их действии на АЦС. Как мастопаран, так и синтетические пептиды способны по независимому от рецептора механизму стимулировать функциональную активность G-белков и регулировать, таким образом, эффекторпые звенья цАМФ-зависимой сигнальной системы. Наряду с этим они по конкурентному механизму препятствуют передаче гормональных сигналов через АЦС, разобщая сигнальную цепь на этапе функционального сопряжения рецептора с G-белком. В то же время имеются и существенные различия в действии синтетических поликатионных пептидов и мастопарана на компоненты АЦС. Синтетические поликатионные пептиды способны стимулировать как Gs-, так и Gj-белки, хотя последние с меньшей эффективностью, и ингибировать передачу гормональных сигналов, осуществляемых через эти типы G-белков. Мастопаран селективно активирует Gj-белки и прерывает реализуемые через них сигнальные каскады. Так, например, в мышцах крысы мастопаран заметно превосходит синтетические поликатионные пептиды по своей способности блокировать ингибирующие эффекты биогенных аминов и соматостатина па предварительно стимулированную форсколином активность АЦ.

Создание искусственных иегормональных регуляторов АЦ на основе поликатионных пептидов линейной и разветвленной структуры не только открывает новое направление для изучения фундаментальных основ взаимодействия между сигнальными белками, возникших на самых ранних этапах эволюции, по и позволит уже в ближайшем будущем приступить к созданию нового поколения регуляторов гормональных сигнальных систем, мишенями действия которых являются G-белки и другие сигнальные белки, ответственные за пострецепторные этапы передачи гормонального сигнала. Следует подчеркнуть, что целенаправленный поиск негормопальпых пептидных регуляторов сигнальных систем ранее не проводился, и практически отсутствовала информация о самой стратегии создаиия таких регуляторов, вследствие чего полученные нами результаты и выводы могут рассматриваться как алгоритм для разработки более эффективных и селективных регуляторов сигнальных систем, действующих на пострецепторных этапах передачи сигнала.

Объектом нашего исследования, наряду с АЦС позвоночных и многоклеточных беспозвоночных, была избрана АЦС одноклеточных эукариот, которая лишь в общих чертах изучена для некоторых их представителей (дрожжевые грибы S. cerevisiae и S. pombe, амеба D. discoideum) и практически не изучена для подавляющего большинства других одноклеточных организмов, включая инфузорий. В результате проведенного комплексного исследования нами была впервые выявлена и охарактеризована АЦС в клеточных культурах двух видов свободноживущих инфузорий Dileptus anser и Tetrahymena pyriformis. Исследование культур Т. pyriformis с различной плотностью клеток и различного возраста показало, что фактором, определяющим уровень базальной активности АЦ, является стадия развития культуры. Показано, что АЦ инфузорий, как и АЦ высших эукариот, стимулируется такими активаторами фермента, как катионы марганца, NaF, гуаниновые нуклеотиды, форсколин, причем величина стимулирующего эффекта этих активаторов определяется уровнем базальной активности фермента - чем она выше, тем слабее выражен стимулирующий АЦ эффект.

Наряду с негормональными активаторами, АЦС инфузорий регулируется типичными гормонами позвоночных животных - глюкагоном и биогенными аминами, действующими через рецепторы серпантинного типа, а также пептидами инсулинового суперсемейства, реализующими свои эффекты через рецепторы тирозипкиназного типа (инсулин, ИФР-1) или через оба типа рецепторов (релаксин). Как и в случае негормональных регуляторов, величина и направленность их эффекта определяются уровнем базальной активности фермента. Специфичность действия биогенных аминов на АЦ инфузорий D. anser и Т. pyriformis доказывается блокированием их АЦ эффектов специфичными антагонистами АР и СР. С помощью фармакологических подходов у инфузорий выявлены родственные АР млекопитающих рецепторы, которые специфично связываются с лигандами Р-АР, хотя и с более низкой аффинностью в сравнении с таковой рецепторов высших эукариот. Обнаружено также, что биогенные амины стимулируют ГТФ-связывание гетеротримерных G-белков в клетках инфузорий. В клетках инфузорий нами впервые обнаружена активность ПКЛ и исследована ее регуляция глюкагоном и биогенными аминами. Действие гормонов на активность ПК4 и АЦ является однонаправленным, что указывает на функциональную связь между ними, как это наблюдается в клетках высших эукариот. Совокупность полученных данных указывают на присутствие в культурах инфузорий функционально активной АЦС, чувствительной к гормонам позвоночных животных. АЦС инфузорий включает рецепторы, в том числе сходные по ряду характеристик с АР высших эукариот, гетеротримерные G-белки и функционально сопряженный с ними фермент АЦ, который через изменение внутриклеточного уровня цАМФ регулирует активность ПКА, эффекторного звена АЦ-цАМФ-системы. Показано также, что АЦ эффекты пептидных гормонов (глюкагона и пептидов иисулиновой группы) в целом более выражены в сравнении с таковыми биогенных аминов. Это, возможно, связано с тем, что пептидные гормоны являются более древними сигнальными молекулами и вследствие этого более эффективно действуют на АЦС инфузорий, которая сформировалась гораздо раньше АЦС позвоночных животных.

Таким образом, данные, полученные нами в ходе экспериментального исследования АЦС инфузорий, а также результаты проведенного нами сравнительного теоретического анализа первичных структур сигнальных белков, потенциальных компонентов АЦС низших эукариот, позволяют более полно представить картину эволюции гормопочувствительпых АЦС эукариот и доказывают, что сложный ансамбль универсальных молекулярных детерминант, ответственных за функциональное взаимодействие между сигнальными белками, компонентами АЦС, сложился на самых ранних этапах эволюции и, в общих чертах, сохранился до уровня высших позвоночных. При этом ключевой этап передачи гормонального сигнала через АЦС - функциональное взаимодействие активированного лигандом рецептора с гетеротримерным G-белком у животных различного филогенетического уровня не претерпел значительных изменений. Именно на этом этапе определяются: (1) направленность (векторпость) сигнального импульса, в основе которой лежит селективное взаимодействие рецептора с определенным типом G-белка, через который осуществляется регуляция конкретной эффекторной системы клетки; (2) интенсивность сигнального импульса, которая повышается на уровне сопряжения G-белка с рецептором в десятки и сотни раз. На этапе функционального сопряжения рецептора с G-белком возможна регуляция активности сигнальной системы по независимому от рецептора механизму, причем в качестве таких негормональных регуляторов могут выступать как вещества природного происхождения (пептидные токсины), так и искусственно созданные пептиды, мимикрирующие участки молекул рецепторов и G-белков, функционально важные для их взаимодействия. Различные классы таких пептидов были нами синтезированы и успешно применены для регуляции функциональной активности АЦС в тканях различных видов животных.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Шпаков, Александр Олегович, 2007 год

1. Авдонин П.В., Ткачук В.А. Рецепторы и внутриклеточный кальций. М., Наука, 1994. 288 с.

2. Деркач К.В., Шпаков А.О., Кузнецова Л.А., Плеснева С.А., Успенская З.И., Перцева М.Н. Гормоночувствительная аденилатциклазпая система инфузории Dileptus anser II Цитология. 2002. Т. 44. С. 1129-1134.

3. Ирлипа И.С., Меркулова Н.Н. Выращивание больших масс Tetrahymena pyriformis, пригодных для биохимических исследований и синхронизации деления инфузорий // Цитология. 1975. Т. 17. С. 1208-1215.

4. Крутецкая З.И., Лебедев О.Е. Структурно-функциональная организация G-белков и связанных с ними рецепторов // Цитология. 1992. Т. 34. С. 24-45.

5. Крутецкая З.И., Лебедев О.Е. Структурио-функциональпая организация клеточных систем передачи сигнала // Цитология. 2000. Т. 42. С. 844-874.

6. Кузнецова Л.А. Успехи в изучении серотониновых рецепторов, сопряженных с аденилатциклазной системой, в тканях позвоночных и беспозвоночных животных // Ж. эвол. биохим. физиол. 1998. Т. 34. С. 256-266.

7. Кузнецова Л.А. Регуляторные свойства изоформ аденилатциклаз // Ж. эвол. биохим. физиол. 2002. Т. 38. С. 289-304.

8. Кузнецова Л.А., Плеснева С.А. Влияние биогенных аминов и полипептидных гормонов на активность протеинкиназы А и аденилатциклазы в мышцах моллюска Anodonta cygnea II Ж. эвол. биохим. физиол. 2001. Т. 37. С. 395-400.

9. Кузнецова JI.A., Шпаков А.О. Рецепторы серотонина, участвующие в модуляции аденилатциклазной системы, в тканях позвоночных и беспозвоночных // Ж. эвол. биохим. физиол. 1994. Т. 30. С. 293-309.

10. Лейбуш Б.Н., Чистякова О.В. Рецептор инсулиноподобпого фактора роста 1 в тканях моллюска Anodonta cygnea II Ж. эвол. биохим. физиол. 2003. Т. 39. С. 128-133.

11. Перцева М.Н. Молекулярные основы развития гормонокомпетентности. Л., Наука, 1989.256 с.

12. Перцева М.Н. Существует ли эволюционное родство между хемосигнальными системами эукариот и прокариот//Ж. эвол. биохим. физиол. 1990. Т. 26. С. 505-513.

13. Перцева М.Н., Плеснева С.А., Шпаков А.О., Русаков Ю.И., Кузнецова Л.А. Новые данные, свидетельствующие об участии аденилатциклазной системы в механизме действия инсулина и родственных пептидов // Докл. РАН. 1995. Т. 342. С. 410-412.

14. Перцева М.Н., Шпаков А.О. Хемосигнальные системы одноклеточных эукариот и бактерий как предшественники гормонокомпетентных систем высших животных // Ж. эвол. биохим. физиол. 1993. Т. 29. С. 454-474.

15. Перцева М.Н., Шпаков А.О. Консервативность инсулиновой сигнальной системы в эволюции беспозвоночных и позвоночных животных // Ж. эвол. биохим. физиол. 2002. Т. 38. С. 430-441.

16. Перцева М.Н., Шпаков А.О. Концепция молекулярных дефектов в гормональных сигнальных системах как причин эндокринных заболеваний // Рос. физиол. жури. 2004. Т 90. С. 446-447.

17. Перцева М.Н., Шпаков А.О., Плеснева С.А. Современные достижения в изучении сигнальных механизмов действия инсулина и родственных ему пептидов // Ж. эвол. биохим. физиол. 1996. Т. 32. С. 318-340.

18. Плеснева С.А., Кузнецова Л.А., Омельянюк Е.В., Шпаков А.О., Перцева М.Н. Адепилатциклазный сигнальный механизм действия релаксина // Ж. эвол. биохим. физиол. 2000. Т. 36. С. 562-568.

19. Прудников И.М., Осипенко О.Н., Кастрикина Т.Ф., Цывкин В.Н. Влияние дофамина на ионную проводимость и активность аденилатциклазы в центральной нервной системе прудовика//Нейрофизиология. 1992. Т. 24. С. 437-451.

20. Русаков Ю.И., Колычев А.П., Шипилов В.Н., Бондарева В.М. Инсулиноподобные пептиды цереброплеврального ганглия моллюска Anodonta cygnea: выделение, очистка и радиолигандный анализ // Ж. эвол. биохим. физиол. 2003. Т. 39. С. 339-345.

21. Русаков Ю.И., Колычев А.П., Шипилов В.Н., Бондарева В.М. Очистка и лиганд-рецепторный анализ и нсул и но подобных пептидов педального ганглия моллюска Anodonta cygnea II Цитология. 2004. Т. 46. С. 442-447.

22. Ткачук В.А., Балденков Г.Н. Выделение, очистка и характеристика регуляторных свойств аденилатциклазы из сердца кролика // Биохимия. 1978. Т. 43. С. 1097-1110.

23. Успенская З.И. Серотипы инфузории D. anser II Цитология. 2002. Т. 44. С. 305-313.

24. Шипилов В.Н. Инсулиноподобные нейропептиды моллюска Anodonta cygnea L.: функциональные свойства и амплификация специфичных мРНК // Вестник молодых ученых. 2004. С. 36-42.

25. Шпаков А.О. Молекулярные основы функционального сопряжения рецепторов и ГТФ-связывающих белков // Биол. мембраны. 1995а. Т. 12. С. 453-471.

26. Шпаков А.О. Поиск гомологичных последовательностей в первичной структуре долихол-сопряженных ферментов//Ж. эвол. биохим. физиол. 19956. Т. 31. С. 245-257.

27. Шпаков А.О. Гомология первичной структуры третьих цитоплазматических доменов рецепторов родопсинового типа и цитоплазматического хвоста Р-субъединицы инсулинового рецептора // Цитология. 1996а. Т. 38. С. 1179-1190.

28. Шпаков А.О. Молекулярные детерминанты рецепторов и ГТФ-связывающих белков, определяющие специфичность взаимодействий между ними // Ж. эвол. биохим. физиол. 19966. Т. 32. С. 488-511.

29. Шпаков А.О. Теоретическое и экспериментальное исследование участия аденилатциклазной сигнальной системы в механизме действия инсулина и родственных пептидов // Автореферат кандидатской диссертации. Санкт-Петербург, 1996в. 20 с.

30. Шпаков А.О. Структурные элементы молекул ГТФ-связывающих белков и эффекторов, опосредующие сопряжение между ними // Укр. биохим. ж. 1997. Т. 69. С. 320.

31. Шпаков А.О. Структурно-функциональная характеристика гетеродимерных фосфатидилинозитол-3-киназ и молекулярные механизмы их сопряжения с другими компонентами сигнальных систем // Цитология. 1999а. Т. 41. С. 975-991.

32. Шпаков А.О. Спирали с гептадной периодичностью в цитоплазматических доменах мембранно-связанных форм аденилатциклаз и их возможная роль во взаимодействии с другими компонентами аденилатциклазной сигнальной системы // Цитология. 19996. Т. 41. С. 667-674.

33. Шпаков А.О. Роль онкогенных G-белков в развитии опухолей эндокринной системы // Вопр. онкологии. 2001. Т. 47. С. 160-167.

34. Шпаков А.О. Молекулярные детерминанты в рецепторах серпантинного типа, ответственные за их функциональное сопряжение с гетеротримерными G-белками // Цитология. 2002а. Т. 44. С. 242-258.

35. Шпаков А.О. Роль Ру-димеров ГТФ-связывающих белков в процессах передачи гормонального сигнала // Ж. эвол. биохим. физиол. 20026. Т. 38. С. 512-529.

36. Шпаков А.О. Участие заряженных аминокислотных остатков цитоплазматических петель серпантинного типа в процессе передачи гормонального сигнала // Ж. эвол. биохим. физиол. 2003. Т. 38. С. 205-217.

37. Шпаков А.О. Структурно-функциональная организация сопряженных с G-белками сигнальных систем амебы Dictyostelium discoideum II Ж. эвол. биохим. физиол. 2006. Т. 42. С. 426-444.

38. Шпаков А.О. Рецепторы серпантинного типа и гетеротримериые G-белки дрожжевых грибов: структурно-функциональная организация и молекулярные механизмы действия // Ж. эвол. биохим. физиол. 2007а. Т. 43. С. 3-23.

39. Шпаков А.О. Структурно-функциональная организация аденилатциклаз одноклеточных эукариот// Цитология. 20076. Т. 49. С. 91-106.

40. Шпаков А.О., Гурьянов И.А., Власов Г.П. Молекулярные механизмы взаимодействия поликатионных пептидов с G-белками // Докл. РАН. 2005а. Т. 405. С. 270-273.

41. Шпаков А.О., Гурьянов И.А., Власов Г.П., Перцева М.Н. Молекулярные механизмы взаимодействия поликатионных пептидов с рецепторами серпантинного типа и гетеротримерными G-белками в тканях крыс // Ж. эвол. биохим. физиол. 2006а. Т. 42. С. 321-327.

42. Шпаков А.О., Деркач К.В., Перцева М.Н. Гормональные системы низших эукариот// Цитология. 20036. Т. 45. С. 223-234.

43. Шпаков А.О., Корольков В.И., Власова Е.Н., Афонина М.П., Власов Г.П. Влияние синтетических катионных пептидов на активацию аденилатциклазной сигнальной системы биогенными аминами в мышечных тканях моллюсков и крыс // Цитология. 2001. Т. 43. С. 483-490.

44. Шпаков А.О., Кузнецова Л.А., Плеснева С.А. Влияние тиолов и блокаторов сульфгидрильных групп на негативную регуляцию аденилатциклазной сигнальной системы биогенными аминами // Ж. эвол. биохим. физиол. 2000а. Т. 36. С. 293-297.

45. Шпаков А.О., Кузнецова Л.А., Плеснева С.А., Перцева М.Н. Молекулярные механизмы изменения чувствительности аденилатциклазиой сигнальной системы к биогенным аминам при стрептозотоциновом диабете // Бюл. экспер. биол. 2005д. Т. 140. С. 286-290.

46. Шпаков А.О., Перцева М.Н. Структурно-функциональная характеристика ГТФ-связывающих белков беспозвоночных животных // Ж. эвол. биохим. физиол. 1993. Т. 29. С. 635-653.

47. Шпаков А.О., Перцева М.Н. Структурно-функциональная характеристика Ру-субъедипиц G-белков и молекулярные механизмы их сопряжения с другими компонентами систем сигнальной трансдукции // Ж. эвол. биохим. физиол. 1997. Т. 33. С. 669-688.

48. Шпаков А.О., Перцева М.Н. Молекулярные основы функционального сопряжения белков компонентов инсулиновой сигнальной системы // Усп. биол. химии. 1999а. Т. 39. С. 141-186.

49. Шпаков А.О., Перцева М.Н. Использование пептидной стратегии для изучения молекулярных механизмов передачи гормонального сигнала в клетку // Ж. эвол. биохим. физиол. 2005. Т. 41. С. 389-403.

50. Шпаков А.О., Перцева М.Н. Молекулярные механизмы действия мастопарана на G-белки в тканях позвоночных и беспозвоночных животных // Бюл. экспер. биол. 2006. Т. 141. С. 273-277.

51. Шпаков А.О., Плеснева С.А., Кузнецова JI.A. Роль сульфгидрильпых групп цистеина в активации аденилатциклазной сигнальной системы биогенными аминами в тканях моллюсков и крыс // Ж. эвол. биохим. физиол. 20006. Т. 36. С. 92-96.

52. Шпаков А.О., Плеснева С.А., Кузнецова J1.A., Леонтьева Е.А. Инсулинрегулируемая аденилатциклазная сигнальная система в клеточной культуре фибробластов мыши линии L // Ж. эвол. биохим. физиол. 2003е. Т. 39. С. 438-444.

53. Шпаков А.О., Плеснева С.А., Кузнецова Л.А., Перцева М.Н. Исследование функциональной организации нового аденилатциклазного сигнального механизма действия инсулина // Биохимия. 20026. Т. 67. С. 403-412.

54. Acharya S., Saad Y., Karnik S.S. Transducin-a C-terminal peptide binding site consists of C-D and E-F loops ofrhodopsin II. Biol. Chem. 1997. V. 272. P. 6519-6524.

55. Albrizio S., D'Ursi A., Fattorusso C., Galoppini C., Greco G., Mazzoni M.R., Novellino E., Rovero P. Conformational studies on a synthetic C-terminal fragment of the a subunit of Gs proteins // Biopolymers. 2000. V. 54. P. 186-194.

56. Amatruda T.T., Dragas-Graonic S., Holmes R., Perez H. D. Signal transduction by the formyl peptide receptor: studies using chimeric receptors and site-drected mutagenesis // J. Biol. Chem. 1995. V. 270. P. 28010-28013.

57. Aris L., Gilchrist A., Rcns-Domiano S., Meyer C., Schatz P.J., Dratz E.A., Hamm H.E. Structural requirements for the stabilization of metarhodopsin II by the С terminus of the a subunit of transducin // J. Biol. Chem. 2001. V. 276. P. 2333-2339.

58. Bach Т., Syversvecn Т., Kvingedal A.M., Krobert K.A., Brattclid Т., Levy F.O. 5-HT4a and 5-HT4b receptors have nearly pharmacology and are both expressed in human atrium and ventricle // Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 2001. V. 363. P. 146-160.

59. Baker D.A., Kelly J.M. Structure, function, and evolution of microbial adenylyl and guanylyl cyclases // Mol. Microbiol. 2004. V. 52. P. 1229-1242.

60. Bakker R.A., Casarosa P., Timmerman H., Smit M.J., Leurs R. Constitutively active Gq/. ]-coupled receptor enable signaling by co-expressed Gj/0-coupled receptors // J. Biol. Chem. 2004. V. 279. P. 5152-5161.

61. Bartsch О., Bartlick В., Ivell R. Relaxin signalling links tyrosine phosphorylation to phosphodiesterase and adenylyl cyclase activity // Mol. Hum. Reprod. 2001. V. 7. P. 799-809.

62. Begin-Heick N. Liver p-adrenergic receptors, G proteins, and adenylyl cyclase activity in obesity-diabetes syndromes//Am. J. Physiol. 1994. V. 266. P. 1664-1672.

63. Berclovitz M., Le Roith D., von Schenk H., Ncwgaard C., Szabo M., Frohmann M., Shiloach J., Roth J. Somatostatin-like immunoreactivity and bioactivity is native to Tetrahymena pyriformis// Endocrinology. 1982. V. 110. P. 1939-1944.

64. Blahos J., Fischer Т., Brabct I., Stauffer D., Rovelli G., Bockacrt J., Pin J.P. A novel site on the G-protein that recognizes heptahelical receptors // J. Biol. Chem. 2001. V. 276. P. 32623269.

65. Bourrct R.B., Borkovich K.A., Simon M.J. Signal transduction pathways involving protein phosphorylation in prokaryotes//Ann. Rev. Biochem. 1991. V. 60. P. 401-441.

66. Breitweg-Lehmann E., Czupalla C., Storm R., Kudlacck O., Schunack W., Frcissmuth M., Nurnberg B. Activation and inhibition of G protein by lipoamines // Mol. Pharmacol. 2002. V.61.P. 628-636.

67. Bretwieser G.E. G protein-coupled receptor oligomerization: implications for G protein activation and cell signalling// Circ. Res. 2004. V. 94. P. 17-27.

68. Broadley K.J., Nederkoorn P.H., Timmerman H., Timms D., Davies R.H. The ligand-receptor-G-protein ternary complex as a GTP-synthase // J. Theor. Biol. 2000. V. 205. P. 297320.

69. Brown L.S., Dioumaev A.K., Lanyi J.K., Spudich E.N., Spudich J.L. Photochemical reaction cycle and proton transfers in neurospora rhodopsin // J. Biol. Chem. 2001. V. 276. P. 32495-32505.

70. Brugge J.S. New intracellular targets for therapeutic drug design // Science. 1993. V. 260. P. 918-919.

71. Brzostowski J.A., Kimmcl A.R. Signaling at zero G: G-protein-independent functions for 7-TM receptors//Trends Biochem. Sci. 2001. V. 26. P. 291-297.

72. Bulseco D.A., Schimcrlik M.T. Single amino acid substitutions in the гпг muscarinic reccptor alter receptor/G protein coupling without changing physiological response // Mol. Pharmacol. 1996. V. 49. P. 132-141.

73. Chabre M. Aluminofluoride and beryllofluoride complexes: new phosphate analogs in enzymology // Trends in Biochem. Sci. 1990. V. 50. P. 6-10.

74. Cheung A.H., Huang R.C., Graziano M.P., Stradcr C.D. Specific activation of Gs by synthetic peptides corresponding to an intracellular loop of the p-adrcncrgic receptor // FEBS Lett. 1991. V. 279. P. 277-280.

75. Cheung A.H., Sigal I.S., Dixon R.A.F., Strader C.M. Agonist-promoted sequestration of the P2-adrenergic receptor requires regions involved in functional coupling with Gs // Mol. Pharmacol. 1989. V. 35. P. 132-138.

76. Chidiac P. Rethinking receptor-G protein-effector interactions // Biochem. Pharmacol. 1998. V. 55. P. 549-556.

77. Chou P.Y., Fasman G.D. Prediction of the secondary structure of proteins from their amino acid sequence // Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol. 1978. V. 47. P. 45-148.

78. Christensen S.T., Guerra C.F., Awan A., Whcatley D.N., Satir P. Insulin receptor-like proteins in Tetrahymena thermophila ciliary membranes // Curr. Biol. 2003. V. 13. P. 50-52.

79. Christophc J. Glucagon receptors: from genetic structure and expression to effector coupling and biological responses//Biochim. Biophys. Acta. 1995. V. 1241. P. 45-57.

80. Clawgcs H.M., Dcprcc K.M., Parker E.M., Graber S.G. Human 5-HTj receptor subtypes exhibit distinct G protein coupling behaviors in membranes from Sf9 cells // Biochemistry. 1997. V.36. P. 12930-12938.

81. Cohen J.E., Onyike C.U., McElroy V.L., Lin A.H., Abrams T.W. Pharmacological characterization of an adenylyl cyclase-coupled 5-HT receptor in aplysia: comparison with mammalian 5-HT receptors // J. Neurophysiol. 2003. V. 89. P. 1440-1455.

82. Conklin B.R., Farfer Z., Lustig K.D., Julius D., Bowrne H.R. Substitution of three amino acids switches receptor specificity of Gq to that Gj // Nature. 1993. V. 363. P. 274-276.

83. Cotecchia S., Ostrowski J., Kjelsberg M.A., Caron M.G. Lefkowitz R.J. Discrete amino acid sequences of the ai-adrenergic receptor determine the selectivity of coupling to phosphatidylinositol hydrolysis//J. Biol. Chem. 1992. V. 267. P. 1633-1639.

84. Coppi A., Merali S., Eichinger D. The enteric parasite Entamoeba uses an autocrine catecholamine system during differentiation into the infectious cyst stage // J. Biol. Chem. 2002. V. 277. P. 8083-8090.

85. Covic L., Gresser A.L., Talavera J., Swift S., Kuliopulos A. Activation and inhibition of G protein-coupled receptors by cell-penetrating membrane-tethered peptides // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002a. V. 99. P. 643-648.

86. Covic L., Misra M., Badar J., Singh C., Kuliopulos A. Pepducin-based intervention of thrombin-receptor signaling and systemic platelet activation //Nat. Med. 2002b. V. 8. P. 11611165.

87. Cox R.T.L., Walker R.J. An analysis of the inhibitory responses of dopamine and octopamine on Helix central neurons//Сотр. Biochem. Physiol. 1988. V. 91. P. 541-547.

88. Csaba G. Phylogeny and ontogeny of hormone receptors: the selection theory of receptor formation and hormonal impriting // Biol. Rev. (Cambridge). 1980. V. 55. P. 47-63.

89. Csaba G. The unicellular Tetrahymena as a model cell for receptor research // Intern. Rev. Cytol. 1985. V. 95. P. 327-377.

90. Csaba G., Kovacs P. Insulin uptake, localization and production in previously insulin treated and untreated Tetrahymena. Data on the mechanism of hormonal imprinting // Cell. Biochem. Funct. 2000. V. 18. P. 161-167.

91. Csaba G., Kovacs P., Falus A. Human cytokines interleukin (IL)-3 and IL-6 affect the growth and insulin binding of the unicellular organism Tetrahymena II Cytokine. 1995. V. 7. P. 771-774.

92. Csaba G., Kovacs P., Pallinger E. Hormonal interactions in Tetrahymena'. effect of hormones on levels of epidermal growth factor (EGF) // Cell Biol. Int. 2005. V. 29. P. 301-305.

93. Cypess A.M., Unson C.G., Wu C.R., Sakmar T.P. Two cytoplasmic loops of the glucagon receptor are required to elevate cAMP of intracellular calcium // J. Biol. Chem. 1999. V. 274. P. 19455-19464.

94. Davey J. G-protein-coupled receptors: new approaches to maximize the impact of GPCRs in drug discovery // Exp. Opin. Ther. Targets. 2004. V. 8. P. 165-170.

95. Dincer D.U., Bidasee K.R., Guner S., Tay A., Ozcelikay Т., Altan V.M. The effect of diabetes on expression of Pr, P2- and Рз-adrenoreceptors in rat hearts // Diabetes. 2001. V. 50. P. 455-461.

96. Duerson K., Carroll R., Clapham D. a-Helical distorting substitution disrupt between m3 muscarinic receptor and G proteins // FEBS Lett. 1993. V. 324. P. 103-108.

97. Dursi A.M., Albrizio S., Greco G., Mazzeo S., Mazzoni M.R., Novellino E., Rovero P.

98. Conformational analysis of the Gas protein C-terminal region // J. Pept. Sci. 2002. V. 8. P. 476488.

99. Eichinger L., Pachebat J.A., Glockner G., Rajandream M.A., Sucgang R., Berriman M., Song J., Olsen R., Szafranski K., Xu Q. The genome of the social amoeba Dictyostelium discoideum // Nature. 2005. V. 435. P. 43-57.

100. Eisenschlos C., Flawia M.M., Torruella M., Torres H.N. Interaction of Trypanosoma cruzi adenylate cyclase with liver regulatory factors // Biochem. J. 1986. V. 236. P. 185-191.

101. Flawia M.M., Torres H.N. Adenylate cyclase activity in Neurospora crassa: modulation by glucagon and insulin // J. Biol. Chem. 1973. V. 248. P. 4517-4520.

102. Floyd P.O., Li L., Rubakhin S.S., Sweedler J.V. Insulin phohormone processing, distribution, and relation to metabolism in Aplysia californica // J. Neurosci. 1999. V. 19. P. 7732-7741.

103. Frederick J., Eichinger D. Entamoeba invandens contains the components of a classical adrenergic signaling system // Mol. Biochem. Parasitol. 2004. V. 137. P. 339-343.

104. Fujimoto I., Ikcnaka K., Kondo Т., Aimoto S., Kuno M., Mikoshiba K. Mast cell degranulating peptide and its optical isomer activate GTP-binding protein in rat mast cells // FEBSLett. 1991. V. 287. P. 15-18.

105. Fukushima N., Kohno M., Kato Т., Kawamoto S., Okuda K., Misu Y., Ueda H. Melittin, a metabostatic peptide inhibiting Gs activity// Peptides. 1998. V. 5. P. 811-819.

106. Galperin M.Y. Bacterial signal transduction network in a genomic perspective // Environ. Microbiol. 2004. V. 6. P. 552-567.

107. Gauthier С., Tavcrnicr G., Charpentier F., Langin D., Le Marec H. Functional Рз-AR in the human heart//J. Clin. Invest. 1996. V. 98. P. 556-562.

108. Gawler D., Milligan G., Spiegel A.M., Unson C.G., Houslay M.D. Abolition of expression of inhibitory guanine nucleotide regulatory protein G; activity in diabetes // Nature. 1987. V. 327. P. 229-232.

109. Gerhard C.C., Bakker R.A., Piek G.J., Planta R.J., Vreugdenhil E., Leysen J.E., van Heerikhuizen H. Molecular cloning and pharmacological characterization of a molluscan octopamine receptor//Mol. Pharmacol. 1997. V. 51. P. 293-300.

110. Gill G.N., Walton G.M. Assay of cyclic nucleotide-dependent protein kinase // Adv. Cycl. Nucl.Res. 1979. V. 10. P. 93-106.

111. Goldsmith L.T., Weiss G., Palcjwala S. Mechanism of action of relaxin human cervix. In: Tregear G. W., Ivell R., Bathgate R.A., Wade J.D., eds. Relaxin-2000. Dordrecht-Boston-London: Kluwer Acad. Publ., 2001. P. 285-289.

112. Gunnersen J.M., Fu P., Roche P.J., Tregear G.W. Expression of human relaxin genes: characterization of a novel alternatively-spliced human relaxin mRNA species // Mol. Cell. Endocrinol. 1996. V. 118. P. 85-94.

113. Gupta B.B.P. Mechanism of insulin action // Curr. Sci. 1997. V. 73. P. 993-1003.

114. Guiramand J., Montmayeur J.P., Geraline J., Bhatia M., Borteli E. Alternative splicing of the dopamine receptor directs specificity of coupling to G proteins // J. Biol. Chem. 1995. V. 270. P. 7354-7358.

115. Hadjiconstantinou M., Qu Z.K., Moroi-Fetters S.E., Neff N.H. Apparent loss of Gj protein activity in the diabetic retina// Eur. J. Pharmacol. 1988. V. 149. P. 193-194.

116. Hajos F. An improved method for the preparation of synaptosomal fractions in high purity // Brain Res. 1975. V. 93. P. 485-489.

117. Hamm H.E. The many faces of G protein signaling // J. Biol. Chem. 1998. V. 273. P. 669672.

118. Harashima Т., Heitman J. Ga subunit Gpa2 recruits kelch repeat subunits that inhibit receptor-G protein coupling during cAMP-induced dimorphic transitions in Saccharomyces cerevisiae II Mol. Biol. Cell. 2005. V. 16. P. 4557-4571.

119. Hashim S., Li Y., Nagakura A., Takeo S., Anand-Srivastava M.B. Modulation of G-protein expression and adenylyl cyclase signaling by high glucose in vascular smooth muscle // Cardiovasc. Res. 2004. V. 63. P. 709-718.

120. Hashim S., Li Y.Y., Wang R., Anand-Srivastava M.B. Streptozotocin-induced diabetes impairs G-protein linked signal transduction in vascular smooth muscle // Mol. Cell. Biochem. 2002. V. 240. P. 57-65.

121. Hayataka K., O'Connor M.F., Kinzler N., Weber J.T., Parker K.K. A bioactive peptide from the transmembrane 5-intracellular loop 3 region of the human 5HTia receptor // Biochem. Cell. Biol. 1998. V. 76. P. 657-660.

122. Herrmann R., Heck M., Hcnklein P., Henklein P., Kleuss C., Hofmann K.P., Ernst O.P.

123. Sequence of interactions in receptor-G protein coupling//J. Biol. Chem. 2004. V. 279. P. 2428324290.

124. Higashijima Т., Burnier J., Ross E.M. Regulation of Gj and G0 by mastoparan, related amphiphilic peptides and hydrophobic amines // J. Biol. Chem. 1990. V. 265. P. 14176-14186.

125. Hill S.J. G-protein-coupled receptors: past, present and future // Br. J. Pharmacol. 2006. V. 147. P. 27-37.

126. Hiripi L., Juhos S., Downer R.G. Characterization of tyramine and octopamine receptors in the insect (Locusta migratoria migratorioides) brain // Brain Res. 1994. V. 633. P. 119-126.

127. Hoffman C.S. Except in every detail: comparing and contrasting G-protein signaling in Saccharomyces cerevisiae and Schizosaccharomycespombe II Eukaryot. Cell. 2005. V. 4. P. 495503.

128. Hofmann K.P. Signalling states of photoactivated rhodopsin //Novartis Found. Symp. 1999. V. 224. P.158-175.

129. Hollingsworth M., Rudkin S., Douning S. Myometrial relaxant action of relaxin. In: Tregear G.W., Ivell R., Bathgate R.A., Wade J.D., eds. Relaxin-2000. Dordrecht-Boston-London: Kluwer Acad. Publ., 2001. P. 291-299.

130. Houslay M.D., Milligan G. Tailoring cAMP signaling responses through isoform multiplicity // Trends Biochem. Sci. 1997. V. 22. P. 217-224.

131. Hsu S.Y. New insights into the evolution of the relaxin-LGR signaling system // Trends Endocrinol. Metab. 2003. V. 14. P. 303-309.

132. Hsu S.Y., Nakabayashi K., Nishi S., Kumagai J., Kudo M., Sherwood O.D., Hsueh A.J. Activation of orphan receptors by the hormone relaxin // Science. 2002. V. 295. P. 671-674.

133. Hsu S.Y., Semyonov J., Park J.I., Chang C.L. Evolution of the signaling system in relaxin-family peptides// Ann. N.Y. Acad. Sci. USA. 2005. V. 1041. P. 520-529.

134. Jin H., Nip S., O'Dowd B.F., George S.R. Di dopamine receptor activity is not altered by a mutation in the first intracellular loop // Biochim. Biophys. Acta. 1998. V. 1402. P. 165-170.

135. Jonas E.A., Knox R.J., Kaczmarek L.K., Schwartz J.H. Insulin receptor in Aplysia neurons: characterization, molecular cloning, and modulation of ion currents // J. Neurosci. 1996. V. 16. P. 1645-1658.

136. Jost P., Fasshauer M., Kahn C.R., Benito M., Meyer M., Ott V., Lowell B.B., Klein H.H., Klein J. Atypical p-adrenergic effects on insulin signaling and action in (Зз-adrenoreceptor-deficient brown adipocytes // Am. J. Physiol. 2002. V. 283. P. 146-153.

137. Kallal L., Kurjan J. Analysis of the receptor binding domain of Gpalp, the Ga subunit involved in the yeast pheromone response pathway // Mol. Cell. Biol. 1997. V. 17. P. 2897-2907.

138. Kasahara M., Unno Т., Yashiro K., Ohmori M. CyaG, a novel cyanobacterial adenylyl cyclase and a possible ancestor of mammalian guanylyl cyclases // J. Biol. Chem. 2001. V. 276. P. 10564-10569.

139. Kawamura K., Sudo S., Kumagai J., Pisarska M., Hsu S.Y., Bathgate R., Wade J., Hsueh

140. A.J. Relaxin research in the postgenomic era//Ann. N. Y. Acad. Sci. 2005. V. 1041. P. 1-7.

141. Kidwai A.M., Radcliffe A.M., Lee E.V., Daniel E.E. Isolation and properties of skeletal muscle membrane // Biochim. Biophys. Acta. 1973. V. 289. P. 593-607.

142. Kimura K.D., Tissenbaum H.A., Liu Y., Ruvkun G. daf-2, an insulin receptor-like gene that regulates longevity and diapause in Caenorhabditis elegans И Science. 1997. V. 277. P. 942946.

143. Konig В., Gratzcl M. Site of dopamine Di receptor binding to Gs protein mapping with synthetic peptides // Biochim. Biophys. Acta. 1994. V. 1223. P. 261-266.

144. Koos R.D., Pillai S.B. Intersection of the relaxin and estrogen signaling pathways in the uterus II In: Tregear G.W., Ivell R., Bathgate R.A., Wade J.D., eds. Relaxin-2000. Dordrecht-Boston-London: Kluwer Acad. Publ., 2001. P. 101 -108.

145. Krupinski J., Lehman T.C., Frankenfield C.D., Zwaagstra J.C., Watson P.A. Molecular diversity of the adenylyl cyclase // J. Biol. Chem. 1992. V. 267. P. 24858-24862.

146. Kulkarni R.D., Thon M.R., Pan H., Dean R.A. Novel G-protein-coupled receptor-like proteins in the plant pathogenic fungus Magnaporthe grisea // Genome Biol. 2005. V. 6. R24.

147. Kusunoki H., Wakamatsu K., Sato K., Miyazawa Т., Kohno T. G protein-bound conformation of mastoparan-X //Biochemistry. 1998. V. 37. P. 4782-4790.

148. Kuznetsova L., Plesneva S., Derjabina N., Omeljaniuk E., Pertseva M.N. On the mechanism of relaxin action: the involvement of adenylyl cyclase signalling system // Regul. Peptides. 1999. V. 80. P. 33-39.

149. Kuznetsova L., Plesneva S., Shpakov A., Pertseva M. Functional defects in insulin and relaxin adenylyl cyclase signaling systems in myometrium of pregnant women with type 1 diabetes // Ann. N.Y. Acad. Sci. 2005. V. 1041. P. 446-448.

150. Kuznetsova L., Shpakov A., Rusakov Yu., Plesneva S., Bondareva V., Pertseva M.

151. Page S.L., Bi Y., Williams J.A. The CCK receptor activates RhoA through Gai2/i3 in NIH3T3 cells//Am. J. Physiol. 2003. V. 285. P. 1197-1206.

152. Roith D., Liotta A.S., Roth J., Shiloach J., Lewis M.E., Pert C.B., Krieger D.T. ACTH and р-endorphin like molecules are native to unicellular organisms // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1982. V. 79. P. 2080-2090.

153. Macda S., Lameh J., Mallet W.F., Philip M., Ramachandran J., Sadee W. Internalization of the Hml muscarinic cholinergic receptor involves the third cytoplasmic loop // FEBS Lett. 1990. V. 269. P. 386-388.

154. Malbon C.C. Insulin signalling: putting the "G-" in protein-protein interactions // Biochem. J. 2004. V. 380. P. 11-12.

155. Malmberg A., Strange P.G. Site-directed mutations in the third intracellular loop of the serotonin 5-HTia receptor alter G-protein coupling from G; to Gs in a ligand-dependent manner // J. Neurochem. 2000. V. 75. P. 1283-1293.

156. Manahan C.L., Iglesias P.A., Long Y., Devrcotcs P.N. Chemoattractant signaling in Dictyostelium discoideum H Annu. Rev. Cell. Dev. Biol. 2004. V. 20. P. 223-253.

157. Marin E.P., Krishna A.G., Zvyaga T.A., Isele J., Siebert F., Sakmar T.P. The amino terminus of the fourth cytoplasmic loop of rhodopsin modulates rhodopsin-transducin interaction // J. Biol. Chem. 2000. V. 275. P. 1930-1936.

158. Mathi S.K., Chan Y., Li X., Wheeler M.B. Scanning of the glucagon-like peptide-1 receptor localizes G protein-activating determinants primarily to the N terminus of the third intracellular loop// Mol. Endocrinol. 1997. V. 11. P. 424-432.

159. Matsuda N., Hattori Y., Gando S., Akaishi Y., Kemmotsu O., Kanno M. Diabetes-induced down-regulation of pi-AR mRNA expression in rat heart // Biochem. Pharmacol. 1999. V. 58. P. 881-885.

160. McCaman M.W. Noncatecholic phenylethylamines: octopamine and phenylethanolamine in the central nervous system of Aplysia / Eds. Mosnaim A.D. and Wolff M.A., NY: Marcel Dekker Inc., 1980. Part 2. P. 193-200.

161. McCudden C.R., Hains M.D., Kimple R.J., Siderovski D.P., Willard F.S. G-protein signaling: back to the future // Cell Mol. Life Sci. 2005. V. 62. P. 551-557.

162. McCue L.A., McDonough K.A., Lawrence C.E. Functional classification of cNMP-binding proteins and nucleotide cyclases with implications for novel regulatory pathways in Mycobacterium tuberculosis II Genome Res. 2000. V. 10. P. 204-210.

163. Mclntire W.E., MacCIeery G., Garrison J.C. The G protein p subunit is a determinant in the coupling of Gs to the Pi-adrenergic and A2a adenosine receptors // J. Biol. Chem. 2001. V. 276. P.15801-15809.

164. Megaritis G., Merkouris M., Georgoussi Z. Functional domains of 5- and ц-opioid receptors responsible for adenylyl cyclase inhibition // Receptors Channels. 2000. V. 7. P. 199-212.

165. Micttinen H.M., Gripentrog J.M., Mason M.M., Jesaitis A.J. Identification of putative sites of interaction between the human formyl peptide receptor and G protein // J. Biol. Chem. 1999. V. 274. P. 27934-27942.

166. Milligan G. Techniques used in the identification and analysis of function of pertussis toxin-sensitive guanine nucleotide binding proteins // Biochem. J. 1988. V. 255. P. 1-13.

167. Miura S., Zhang J., Karnik S.S. Angiotensin I type 1 receptor-function affected by mutations in cytoplasmic loop CD // FEBS Lett. 2000. V. 470. P. 331-335.

168. Moench S.J., Moreland J., Stewart D.H., Dewey T.G. Fluorescence studies of the location and membrane accessibility of the palmitoylation sites to rhodopsin // Biochemistry. 1994. V. 33. P. 5791-5796.

169. Morizumi Т., Imai H., Shichida Y. Two-step mechanism of interaction of rhodopsin intermediates with the C-terminal region of the transducin a-subunit // J. Biochem. (Tokyo). 2003. V. 134. P. 259-267.

170. Mousli M., Bronner C., Landry Y., Bockaert J., Rouot B. Direct activation of GTP-binding regulatory proteins (G proteins) by substance P and compound 48/80 // FEBS Lett. 1990. V. 259. P. 260-262.

171. Moxham C.M., Malbon C.C. Insulin action impaired by deficiency of the G-protein subunit Gia2 // Nature. 1996. V. 379. P. 840-844.

172. Mukhopadhyay S., Howlett A.C. CBi receptor-G protein association. Subtype selectivity is determined by distinct intracellular domains // Eur. J. Biochem. 2001. V. 268. P. 499-505.

173. Murray-Rust J., Macleod A.N., Blundell T.L., Wood S.P. Structure and evolution of insulins: amplifications for receptor binding// BioEssays. 1992. V. 14. P. 325-331.

174. Natarajan K., Ashley C.A., Hadwiger J.A. Related Ga subunits play opposing roles during Dictyostelium development // Differentiation. 2000. V. 66. P. 136-146.

175. Natochin M., Moussaif M., Artcmyev N.O. Probing the mechanism of rhodopsin-catalyzed transduction activation//J. Neurochem. 2001. V. 77. P. 202-210.

176. Natochin M., Muradov K.G., McEntaffer R.L., Artemycv N.O. Rhodopsin recognition by mutant Gas containing C-terminal residues of transducin // J. Biol. Chem. 2000. V. 275. P. 26692675.

177. Neer E.J., Smith T.F. G protein heterodimers: new structures propel new questions // Cell. 1996. V. 84. P. 175-178.

178. Nguyen B.T., Yang L., Sanborn B.M., Dessauer C.W. Phosphatidylinositol 3-kinase activity is required for biphasic stimulation of cyclic adenosine 3',5'-monophosphate by relaxin // Mol. Endocrinol. 2003. V. 17. P. 1075-1084.

179. Novotny J., Gustafson В., Ransnas L.A. Inhibition of P-adrenergic receptor-mediated signals by a synthetic peptide derived from the a subunit of the stimulatory G-protein // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. V. 219. P. 619-624.

180. Nurnberg В., Togel W., Krause G., Storm R., Breitweg-Lehmann E., Schunack W. Non-peptide G-protein activators as promising tools in cell biology and potential drug leads // Eur. J. Med. Chem. 1999. V. 34. P. 5-30.

181. Obosi L.A., Hen R., Beadle D.J., Bermudez I., King L.A. Mutational analysis of the mouse 5-HT7 receptor: importance of the third intracellular loop for receptor-G protein interaction // FEBS Lett. 1997. V. 412. P. 321-324.

182. Okamoto Т., Nishimoto I. Detection of G protein-activator regions in 1П4 subtype muscarinic cholinergic and ci2-adrenergic receptors based upon characteristics in primary structure // J. Biol. Chem. 1992. V. 267. P. 8342-8346.

183. Okamoto J., Okamoto Т., Murayama Y., Hayashi Y., Ogata E., Nishimoto I. GTP-binding protein-activator sequences in the insulin receptor // FEBS Lett. 1993. V. 334. P. 143-148.

184. Okuda A., Matsumoto O., Akaji M., Taga Т., Ohkudo Т., Kobayashi Y. Solution structure of intracellular signal-transducing peptide derived from human Рг-adrenergic receptor // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2002. V. 291. P. 1297-1301.

185. Olivcira M.M., Antunes A., De Mello F.G. Growth of Trypanosoma cruzi epimastigotes controlled by shifts in cyclic AMP mediated by adrenergic ligands // Mol. Biochem. Parasitol. 1984. V. 11. P. 283-292.

186. Panchenko M.P., Hoffenberg S.I., Tkachuk V.A. Purification and some properties of GTP-binding proteins from pig heart plasma membranes // Biochim. Biophys. Acta. 1987. V. 46. P. 452-455.

187. Patel T.B. Single transmembrane spanning heterotrimeric G protein-coupled receptors and their signaling cascades // Pharmacol. Rev. 2004. V. 56. P. 371-385.

188. Paveto C., Egidy G., Galvagno M.A., Passeron S.A. Guanine nucleotide-sensitive glucagon-stimulated adenylyl cyclase in Candida albicans: effect of glucagon on cell morphology// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1990. V. 167. P. 1177-1183.

189. Pertseva M.N. The evolution of hormonal signalling systems // Сотр. Biochem. Physiol. 1991. V. 100. P. 775-787.

190. Pertseva M.N., Plesneva S.A., Shpakov A.O., Rusakov Yu.I., Kuznetsova L.A.1.volvement of adenylyl cyclase signalling system in the action of insulin and mollusc insulinlike peptide//Сотр. Biochem. Physiol. 1995. V. 112. P. 689-695.

191. Pertseva M., Shpakov A., Kuznetsova L., Plesneva S., Omeljaniuk E. Adenylyl cyclase signaling mechanisms of relaxin and insulin action: similarities and differences // Cell Biol. Int. 2006. V. 30. P. 533-540.

192. Pertseva M.N., Shpakov A.O., Plesneva S.A., Kuznetsova L.A. A novel view on the mechanisms of action of insulin and other insulin superfamily peptides: involvement of adenylyl cyclase signaling system // Сотр. Biochem. Physiol. 2003. V. 134. P. 11-36.

193. Pieroni J.P., Harry A., Chen J., Jacobowitz O., Magnusson R.P., Iyengar R. Distinct characteristics of the basal activities of adenylyl cyclases 2 and 6 // J. Biol. Chem. 1995. V. 270. P. 21368-21373.

194. Pitt S., Vehovszky A., Szabo H., Elliott C.J. Second messengers of octopamine receptors in the snail Lymnaea If Acta Biol. Hung. 2004. V. 55. P. 177-183.

195. Raisley В., Zhang M., Hereld D., Hadwiger J.A. A cAMP receptor-like G protein-coupled receptor with role in growth regulation and development // Dev. Biol. 2004. V. 265. P. 433-445.

196. Reisine T. Pertussis toxin in the analysis of receptor mechanisms. Biochem. Pharmacol. 1990. V. 39. P. 1499-1504.

197. Rezaei K., Saar K., Soomets U., Valkna A., Nasman J., Zorko M., Akcrman K., Schroeder Т., Bartfai Т., Langel U. Role of third intracellular loop of galanin receptor type 1 in signal transduction // Neuropeptides. 2000. V. 34. P. 25-31.

198. Rodriqucz E., Lazaro M.I., Renaud F.L., Marino M. Opioid activity of P-endorphin-Iike proteins from Tetrahymena // J. Eukaryot. Microbiol. 2004. V. 51. P. 60-65.

199. Roeder T. Octopamine in invertebrates // Prog. Neurobiol. 1999. V. 59. P. 533-561.

200. Roelofs J., Snippe H., Kleineidam R.G., Van Haastert P.J. Guanylate cyclase in Dictyostelium discoideum with the topology of mammalian adenylate cyclase // Biochem. J. 2001. V. 354. P. 697-706.

201. Roovers E., Vincent M.E., van Kesteren E., Geraerts W.P., Planta R.J., Vreugdenhil E., van Hccrikhuizcn H. Characterization of a putative molluscan insulin-related peptide receptor // Gene. 1995. V. 162. P. 181-188.

202. Salomon Y., Londos C., Rodbell M.A. Highly sensitive adenylate cyclase assay // Anal. Biochem. 1974. V. 58. P. 541-548.

203. Sanborn B.M., Dodge K.L., Yue C., Ku C.Y. Relaxin and scaffolding proteins in signaling crosstalk. In: Tregear G.W., Ivell R., Bathgate R.A., Wade J.D., eds. Relaxin-2000. Dordrecht-Boston-London: Kluwer Acad. Publ., 2001. P. 279-283.

204. Sato M., Blumer J.B., Simon V., Lanier S.M. Accessory proteins for G proteins: partners in signaling// Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2006. V. 46. P. 151-187.

205. Schicss N., Csaba G., Kohidai L. Chemotactic selection with insulin, di-iodotyrosine and histamine alters the phagocytotic responsiveness of Tetrahymena II Сотр. Biochem. Physiol. 2001. V. 128. P. 521-530.

206. Schultz J.E., Klumpp S. Cyclic nucleotides and calcium signaling in Paramecium II Adv. Second Messenger Phosphorylation Res. 1993. V. 27. P. 25-46.

207. Schwabe C., Le Roith D., Thompson R.D., Shiloach J., Roth J. Relaxin extracted from protozoa (Tetrahymena pyriformis) И J. Biol. Chem. 1983. V. 258. P. 27778-2781.

208. Schwartz T.W., Frimurer T.M., Hoist В., Roscnkilde M.M., Elling C.E. Molecular mechanism of 7TM receptor activation a global toggle switch model // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2006. V. 46. P. 481-519.

209. Scebcck Т., Gong K., Kunz S., Schaub R., Shalaby T. and Zoraghi R. cAMP signalling in Trypanosoma brucei // Int. J. Parasitol. 2001. V. 31. P. 491-498.

210. Shipilov V.N., Shpakov A.O., Rusakov Yu.I. Pleiotropic action of insulin-like peptides of mollusk Anodonta cygnea II Ann. N.Y. Acad. Sci. (Trends in Comparative Endocrinology and Neurobiology). 2005. V. 1040. P. 464-465.

211. Shirai H., Takahashi K., Katada Т., Inagami Т. Mapping of G protein coupling sites of the angiotensin II type 1 receptor// Hypertension. 1995. V. 25. P. 726-730.

212. Shpakov A.O. Molecular basis of the functional coupling of receptors to GTP-binding proteins // Membr. Cell Biol. 1996. V. 9. P. 467-488.

213. Shpakov A., Pertseva M., Kuznetsova L., Plesneva S. A novel, adenylate cyclase, signaling mechanism of relaxin H2 action // Ann. N.Y. Acad. Sci. 2005b. V. 1041. P. 305-307.

214. Smit A.B., Kesteren R.E., Li K.W., Minnen J., Spijker S. Towards understanding the role of insulin in the brain: lessons from insulin-related signaling systems in the invertebrate brain // Progr. Neurobiol. 1998. V. 54. P. 35-54.

215. Sossin W.S., Diaz-Arrastia R., Schwartz J.H. Characterization of two isoforms of protein kinase С in the nervous system of Aplysia californica // J. Biol. Chem. 1993. V. 268. P. 57635768.

216. Srinivasan J., Gundersen R.E., Hadwiger J.A. Activated G subunits can inhibit multiple signal transduction pathways during Dictyostelium development // Dev. Biol. 1999. V. 215. P. 443-452.

217. Strassheim D., Palmer Т., Houslay M.D. Genetically acquired diabetes adipocyte guanine nucleotide regulatory protein expression and adenylate cyclase regulation // Biochim. Biophys. Acta. 1991. V. 1096. P. 121-126.

218. Sun Q.Q., Dale N. G-proteins are involved in 5-HT receptor-mediated modulation of N- and P/Q- but not T-type Ca2+ channels // J. Neurosci. 1999. V. 19. P. 890-899.

219. Sunahara R.K., Taussig R. Isoforms of mammalian adenylyl cyclasc: Multiplicities of signaling // Mol. Interv. 2002. V. 2. P. 168-184!

220. Sweet M.T., Carlson G., Cook R.G., Nelson D., Allis C.D. Phosphorylation of linker histones by a protein kinase Л-like activity in mitotic nuclei // J. Biol. Chem. 1997. V. 272. P. 916-923.

221. Takahara H., Fujimura M., Tanigichi S., Hayashi N., Nakamura Т., Fujimiya M.

222. Changes in serotonin levels and 5-HT receptor activity in duodenum of streptozotocin-diabetic rats // Am. J. Physiol. 2001. V. 281. P. 798-808.

223. Tanaka Т., Kohno Т., Kinoshita S., Mukai H., Itoh H., Ohya M., Miyazawa Т., Higashojima Т., Wakamatsu K. a-helix content of G protein a-subunit is decreased upon activation by receptor mimetics // J. Biol. Chem. 1998. V. 273. P. 3247-3252.

224. Taussig R., Gilman A.G. Mammalian membrane-bound adenylyl cyclases // J. Biol.Chem. 1995. V. 270. P. 1-4.

225. Taylor J.M., Neubig R.R. Peptides as probes for G protein signal transduction // 1994. V. 6. P. 841-849.

226. Tesmer J.J.G., Sunahara R.K., Gilman A.G., Sprang S.R. Crystal structure of the catalytic domains of adenylyl cyclase in a complex with Gsa-GTPyS // Science. 1997. V. 278. P. 19071916.

227. Thcvclein J.M., de Winde J.H. Novel sensing mechanisms and targets for the cAMP-protein kinase Л pathway in the yeast Saccharomyces cerevisiae II Mol. Microbiol. 1999. V. 33. P. 904918.

228. Thompson M.D., Burnham W.M., Cole D.E. The G protein-coupled receptors: pharmacogenetics and disease//Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. 2005. V. 42. P. 311-392.

229. Van Poycr W., Torfs H., Poels J., Swinnen E., De Loof A., Akcrman K., Van den Broeck

230. J. Phenolamine-dependent adenylyl cyclase activation in Drosophila Schneider 2 cells // Insect Biochem. Mol. Biol. 2001. V. 31. P. 333-338.

231. Wade S.M., Dalman H.M., Yang S., Neubig R.R. Multisite interactions of receptors and G proteins: enhanced potency of dimeric receptor peptides in modifying G protein function // Mol. Pharmacol. 1994. V.45. P. 1191-1197.

232. Wakamatsu K., Okada A., Miyazawa Т., Ohya M., Higashijima T. Membrane-bound conformation of mastoparan-X, a G-protein-activating peptide // Biochemistry. 1992. V. 31. P. 5654-5660.

233. Weber J.H., Vishnyakov A., Hambach K., Schultz A., Schultz J.E., Linder J.U. Adenylyl cyclases from Plasmodium, Paramecium and Tetrahymena are novel ion channel/enzyme fusion proteins // Cell. Signal!. 2004. V. 16. P. 115-125.

234. Weber L.P., MacLeod K.M. Influence of streptozotocin diabetes on the alpha-1 adrenoreceptor and associated G proteins in rat arteries // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997. V. 283. P. 1469-1478.

235. Wess J. Molecular basis of receptor/G protein-coupling selectivity // Pharmacol. Ther. 1998. V. 80. P.231-264.

236. Wettschureck N., Offcrmanns S. Mammalian G proteins and their cell type specific functions // Physiol. Rev. 2005. V. 85. P. 1159-1204.

237. Wichelhaus A., Russ M., Petersen S., Eckel J. G protein expression and adenylate cyclase regulation in ventricular cardiomyocytes from STZ-diabetic rats // Am. J. Physiol. 1994. V. 267. P. 548-555.

238. Wilson M., Burt A.R., Milligan G., Anderson N.G. Wortmannin-sensitive activation of p70S6K by endogenous and heterologously expressed Gj-coupled receptors // J. Biol. Chem. 1996. V. 271. P. 8537-8540.

239. Winslow J.W., Shih A., Bourcll J.H., Weiss G., Reed В., Stults J.T., Goldsmith L.T. Human seminal relaxin is a product of the same gene as human luteal relaxin // Endocrinology. 1992. V. 130. P. 2660-2668.

240. Wu D., Jiang H., Simon M.I. Different ai-adrenergic receptor sequences required for activating different Ga subunits of Gq class of G proteins // J. Biol. Chem. 1995. V. 270. P. 98289832.

241. Xue Y., Batlle M., Hirsch J.P. GPR1 encodes a putative G protein-coupled receptor that associates with the Gpa2p Ga subunit and functions in a Ras-independent pathway // EMBO J. 1998. V. 17. P. 1996-2007.

242. Yang C.S., Spudich J.L. Light-induced structural changes occur in the transmembrane helices of the Natronobacterium pharaonis Htrll transducer // Biochemistry. 2001. V. 40. P. 14207-14214.

243. Yano H., Nakanishi S., Kimura K., Hanai N., Saitoh Y., Fukui Y., Nonomura Y., Matsuda Y. Inhibition of histamine secretion by wortmannin through the blockage of phosphoinositol 3-kinase in RBL-2H3 cells // J. Biol. Chem. 1993. V. 268. P. 25846-25856.

244. Zhang C.C. Bacterial signalling involving eukaryotic-type protein kinases // Mol. Microbiol. 1996. V. 20. P. 9-15.

245. Zhang L., Wu J., Ruan K.H. Solution structure of the first intracellular loop of prostacyclin receptor and implication of its interaction with the C-terminal segment of Gas protein // Biochemistry. 2006. V. 45. P. 1734-1744.

246. Zheng X.L., Guo J., Wang H.Y., Malbon C.C. Expression of constitutively activated Gja2 in vivo ameliorates streptozotocin-induced diabetes // J. Biol. Chem. 1998. V. 273. P. 2364923651.

247. Zhu B.H., Sakai Y. Alteration of contractile properties to serotonin in gastric smooth muscle isolated from STZ-induced diabetic rats // J. Smooth Muscle Res. 1996. V. 32. P. 165-173.