Мониторинг Т-2 токсина в зерновых и грубых кормах Тюменской области и его токсикокинетика в организме животных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.06, кандидат ветеринарных наук Павлова, Наталья Сергеевна

• Павлова, Наталья Сергеевна
• кандидат ветеринарных наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Павлова, Наталья Сергеевна

Введение

1. Обзор литературы.

1.1. Токсигенные свойства грибов Fusarium sporotrichiella.

1.2. Продуценты Т-2 токсина и условия его образования.

1.3. Структура и физико-химические свойства Т-2 токсина.

1.4. Распространенность продуцентов Т-2 токсина и уровни контаминации микотоксином кормов в различных регионах.

1.5. Агроклиматичские условия и распространенность фузарий в Тюменской области.

1.6. Токсикология Т-2 токсина.

1.7. Методы обнаружения Т-2 токсина.

1.8. Особенности иммуно-ферментного анализа для определения Т-2 токсина.

1.9. Микроскопическое исследование популяций микроорганизмов. 36 Экспериментальная часть.

2. Место работы, материалы и методы. 39 Результаты исследовании.

3. Санитарно-миколргическое состояние зерна и грубых кормов Тюменской области.

3.1. Микофлора зернофуража.

3.2. Микофлора грубых кормов.

3.3. Особенности микофпоры в зависимости от вида корма и климатической зоны Тюменской области.

4. Способность выделенных штаммов грибов рода Fusarium продуцировать Т-2 токсин.

5. Контаминация Т-2 токсином зерна, сена и соломы. 66 5.1.Содержание Т-2 токсина в зернофураже.

5.2. Определение Т-2 токсина в грубых кормах.

5.3. Контаминация Т-2 токсином грубых кормов.

6. Динамика развития грибов рода Fusarium и накопления

Т-2 токсина в сене при хранении его в поле под снегом.

7. Токсичность Т-2 токсина для лабораторных животных.

7.1. Определение острой токсичности Т-2 токсина для крыс.

7.2. Клинические и патологоанатомические изменения у кроликов и крыс при экспериментальном остром Т-2 токсикозе.

8. Токсикокинетика Т-2 токсина в организме лабораторных животных.

8 1. Метод иммуно-ферментного определения Т-2 токсина в органах и тканых кроликов и белых крыс.

8.2. Токсикокинетика Т-2 токсина в организме кроликов.

8.3. Токсикокинетика Т-2 токсина в организме крыс. 94 9. Микроскопическое исследование грибов Fusarium sporotrichiella v. sporotrichioides продуцирующих и не продуцирующих Т-2 токсин.

10. Обсуждение результатов.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Мониторинг Т-2 токсина в зерновых и грубых кормах Тюменской области и его токсикокинетика в организме животных»

Последние десятилетия характеризуются усилением внимания общественности, государственных деятелей, международных организаций и ученых к вопросам контроля качества и безопасности продуктов питания и кормов для животных. В ряду наиболее опасных загрязнителей продовольственного и фуражного зерна, грубых и концентрированных кормов одно из ведущих мест принадлежит широко распространенным в природе токсическим метаболитам микроскопических грибов микотоксинам.

В связи с быстрым ростом населения земного шара возрастает потребность в производстве продуктов питания при сокращении посевных площадей. Поэтому возникла необходимость в резком увеличении производительности сельского хозяйства. Для осуществления этого внедряются новые технологии, химизация, используются новые сорта растений и породы животных с более высокой продуктивностью. Однако эт:о часто приводит к нежелательным последствиям таким, как снижение устойчивости к болезням и вредителям, чрезмерное их распространение, рост загрязнения продуктов и кормов в том числе и микотокеинами. Одним из наиболее часто встречающихся и опасных контаминантов кормов и продуктов растительного происхождения является Т-2 токсин, продуцируемый грибом Fusarium sporotrichioides.

Т-2 токсин относится к первому классу опасности с ЛД50 0,5-6,0 мг/кг для лабораторных животных. По химической структуре принадлежит к группе трихотеценовых микотоксинов.

Впервые заболевания человека, связанные с употреблением в пищу муки из перезимовавших под снегом хлебных злаков, отмечено в Казахстане в 1930 г. В 1932-1934 гг. такие случаи отмечены в Сибири и других регионах России (Д.Д. Саркисов с соавт., 1948). Исследования фузареоза зерна в Сибири проводились также К.Е. Мурашинским (1024) и Н.В. Перкелем (1956Д957).

В 1942-1944 гг. А.Х. Саркисовым (1945) было установлено, чгго причиной заболевания людей, употреблявших муку из перезимовавших хлебных злаков, является гриб F. sporotrishioides. Это заболевание, получившее наименование "септическая ангина" или алиментарная токсическая алейкия (АТА), характеризовалось некротическим поражением слизистой ротовой полости и глотки, выраженной лейкемией (СаркисовАХ. с соавт, 1948). Имели место также массовые отравления сельскохозяйственных животных и птицы зерновыми кормами, пораженными этим грибом. Они диагностировались как фузариотоксикоз и наносили животноводству страны большой ущерб (Курманов И.А.,

1971).

Во многих странах мира в настоящее время широко проводятся мониторинговые исследования по содержанию в кормах данного микотоксина. Санитарно-токсикологическое значение его особенно велико для условий России, так крс продуцируется он грибом при относительно низких температурах (Львова Л.С. с соавт., 1993; Мосты некий О.А. с соавт., 1997; Жильцов В.Г., 1976).

Т-2 токсин впервые был выделен в крсталлическом виде из культуры гриба F. tricinctum в 1960 г. Бамбургом с соавторами (196&,

1972), а в нашей стране - из культуры гриба F. sporotrishioides В.В. Ермаквым, НГА. Костюнийой и Й.А. Курмановым в 1976 г. (1978). Изучением его токсичности и разработкой методов анализа занимались В.В. Ермаков (1981), Н.П. Камарницкая (1990,1995), А.И.Котак и В.И.Труфанова (1987Д 991), В.В.Рухляда (1984), О.Ю.Караваев (1985, 1986).

Для обнаружения Т-2 токсина предложено большое количество методик, основанных на различных принципах: тесты на лабораторных животных и микроорганизмах, два варианта кожной пробы на кролике, метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) с химическим проявлением или биотестированием, газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с предварительным получением трифторпроизводных. Однако большинство из них имеет существенные недостатки: низкую чувствительность, слабую специфичность, невысокую точность или воспроизводимость, что часто приводит к получению неоднозначных результатов. В связи с этим часто возникают трудности при постановке диагноза на Т-2 токсикоз.

Проводившиеся ранее исследования позволяли выявить лишь довольно высокое содержание токсина, тогда как основная проблем связана с поступлением с кормами малых доз.

Разработка метода иммуноферментного анализа (ИФА) для Т-2 токсина (Кононенко ГЛ., Буркин А.А., Соболева Н.А., 1999) существенно расширила возможности его обнаружения в зерне и других кормах, а также изучения продуцирующей способности различных штаммов гриба. В связи с этим мы сочли возможным, используя разработанный метод, провести мониторинговые исследования по контаминации кормов, отобранных в различных районах Тюменской области, грибами рода Fusarium и Т-2 токсином, исследовать продуцирующую способность выделенных грибов.

Цель и задачи исследований. Изучить содержание в кормах, заготовлшвых в Тюменской области, грибов рода Fusarium, Т-2 токсина и исследовать его токсикокинетику в организме животных.

В задачи исследований входило: - установить видовую принадлежность выделенных грибов; определить способность выделенных штаммов грибов продуцировать Т-2 токсин;

- установить возможность использования метода ИФА для мониторинга Т-2 токсина в грубых кормах и обнаружения Т-2 токсина в организме животных; провести мониторинговое исследование контаминации кормов Т-2 токсином; изучить динамику развития фузарий и накопления Т-2 токсина при перезимовке пораженного продуцентами сена в поле; исследовать токсичность Т-2 токсина, содержащегося в культуре гриба для лабораторных животных, изучить клинические и морфологические изменения в организме; провести сравнительное электронномикроскопическое исследование штаммов F. sporotrishioides, продуцирующих и не продуцирующих Т-2 токсин.

Научная новизна. Впервые проведен мониторинг зерна и грубых кормов, выращенных в Тюменской области на Т-2 токсин, с параллельным исследованием их глубинной микофлоры, изучена динамика смены микофлоры сена и накопления в нем Т-2 токсина при хранении в полевых условиях в осенне-зимний период. Исследована токсикокинетика Т-2 токсина в организме белых крыс и кроликов. Проведено сравнительное изучение морфологической структуры грибов F. sporotrichioides, продуцирующих и не продуцирующих Т-2 токсин с использованием световой и электронной сканирующей микроскопии.

Практическая ценность. Материалы исследований могут быть использованы при разработке мероприятий по предотвращению микотоксикозов животных, а также прогнозированию их возникновения. Полученные результаты показали возможность применения метода ИФА для мониторинга грубых кормов и определения содержания микотоксина в тканях животных с целью постановки диагноза на отравления, разработке регламентов по срокам убоя животных, перенесших отравление и проведения ветсанэкспертизы продуктов убоя. Апробация работы. Материалы диссертации доложены на координационном совещании по ветеринарной санитарии (ВНИИВСГЭ, Москва, 2000 г.) и межлабораторном совещании (ВНИИВСГЭ, Москва, 2002 г).

1. Обзор литературы.

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза», Павлова, Наталья Сергеевна

11. выводы.

1. Продовольственное и фуражное зерно (овес, ячмень, пшеница), грубые корма (сено солома), заготовленные в Тюменской области, в значительной степени контаминированы грибами секции Fusarium sporotrichiella - потенциальным и продуцентами Т-2 токсина. Грубые корма (сено, солома) поражены грибами рода Fusarium интенсивнее по сравнению с зерновыми. Из зерновых культур наиболее часто и интенсивно поражены зерносмеси (из овса с ячменем или пшеницей) и овес. Одновременно из некоторых проб выделяли до пяти видов фузарий. Грибы рода Fusarium обнаруживали в 55 % проб грубых кормов и 37 % проб зерна.

2. Из зерна и грубых кормов наиболее часто выделяли грибы F. sporotrichiella. var. роае (33-35 % от выделенных гибов рода Fusarium), F. sp.var.sporotrichioides (14-20,5 %), F. avenaceum (1315 %) и F.sp.var.tricinctum (10-13 %). Способность продуцировать Т-2 токсин в лабораторных условиях выражена у грибов F. sp. var. роае (66 % исследованных штаммов), F.sp.var.tricinctum (33 %) и F. sp.var.sporotrichioides (23 %).

3. Модифицирована методика определения Т-2 токсина с помощью иммуно-ферментного анализа для грубых кормов и тканей животных. Подобраны режимы экстракции микотоксина и определены условия его определения в экстрактах и непосредственно в сыворотке крови и моче. Для снижения помех, создаваемых коэкстрактивными веществами, в стандартные растворы , используемые для построения калибровочного графика вносили экстракты контрольных проб, аналогичных исследуемым (сено, сыворотка крови кролика).

4. Изучена степень контаминации Т-2 токсином зерна и грубых кормов, произведенных в Тюмнской области. Максимальное содержание Т-2 токсина в зерне не превышало 60 мкг/кг. Наиболее часто микотоксин был обнаружен в зерносмесях из овса с пшеницей или ячменем ( до 50 % проб) и в овсе ( до 21 % проб). В грубых кормах Т-2 токсин обнаруживали в 54 % исследованных проб с максимальным уровнем содержания до 310 мкг/кг.

5. Исследована динамика накопления Т-2 токсина в сене при хранении его в осенне-зимний период в стогах в полевых условиях. Установлено, что наиболее интенсивное накопление Т-2 токсина происходит в марте-апреле, когда его содержание возрастает в 4-5 раз.

6. Показатели острой токсичности Т-2 токсина, выделенного из культуры гриба F. sporotrishioides 111р для белых крыс соответствуют показателям токсичности крислаллического токсина. LDso Т-2 токсина при его однократном введении составляет 3,37 мг/кг, LD16 - 2,7, LDm - 4,18.

7. Клиника интоксикации Т-2 токсином при однократном введении внутрь экстрактов из культуры гриба-продуцента проявляется в общем угнетении, отказе от корма, нарушении координации движений, парезах и параличах. Гибель крыс при введении токсина в смертельных дозах наступает через 7-72 часа.

8. При остром отравлении крыс Т-2 токсином отмечено значительное повышение свертываемости крови, незначительное увеличение содержания в крови эритроцитов и гемоглобина. В первые 3-8 часов после затравки имеет место увеличение

118 количества лейкоцитов с 5940 до 7165 в мм, в последующем имеет место постепенное их снижение до 3 943 в мм к 24 часам.

9. При введении внутрь кроликам и белым крысам Т-2 токсина в токсических дозах он обнаруживается в сыворотке крови уже через 30 мин. с максимальным уровнем содержания через 3-9 часов после введения. Методом ИФА через 24 часа после введения в органах и тканях животных Т-2 токсин обнаружить на удалось.

10. Микроскопическое исследование колоний грибов F.sp.var. sporotrichioides выявило образование в них общих покровов гиф мицелия на 3-5 сутки культивирования и последующее формирование из них мощных тяжей на 5-7 сутки и поверхностей (пленок) - на 7-9 сутки. Ярких морфологических отличий между продуцирующими и не продуцирующими Т-2 токсин колониями не установлено, однако вышеописанные структуры выражены в последних слабее.

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Павлова, Наталья Сергеевна, 2002 год

1. Абульханова В.Ш., Абульханов А.Г., Тремасов М.Я., и др. Методические рекомендации по индикации Т-2 токсина в зернофураже с помощью газо-жидкостной хроматографии.// ГУВ М. 1990.

2. Алисова З.И., МироновС.Г., Общетоксическое действие перезимовавших в поле злаков. И Тр. ин-та эпидем.и микробиол.,1956, в.2, С. 17-22

3. Башмакова Е.В. Общетоксические свойства и местное действие на лабораторных животных кормов с различными сроками развития на них F. sporotrichiella.// Сб. работ Сев.-Кавк. зон. н.-и ин-та. Иып. 14. 1967/1968. С. 111-114

4. Беляева Л Л., Тремасов М.Я. Идентификация микотоксинов методом ИФА. Обзор литературы.// Ветеринария.- 1995. № 1.- С. 26-30

5. Беляева Л.Л., Тремасов М.Я., Равилов А.В. Разработка метода ИФА для индикации микотоксинов.// Тез. докл. 2-ой междунар. науч.-пршкт. конф. «Актуальные проблемы ветеринарно-санитарного контроля с.-х. ф^дукции». -М. 1997. Ч. 2.-С.48

6. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. -Л.: Издательство мед. литературы. 1963.-148 с.

7. Билай В.И. Виды Fusarium на зерне хлебных злаков и их токсические свойства.// Микробиол., 1947,N16, с.42

8. Билай В.И., Ядовитые грибы на зерне хлебных злаков. // Киев: шд-во АН УСС^, 1953,-65с.

9. Билай В.И. Микотоксикозы человека и сельскохозяйственных животных,- Киев: Изд-во АН УССР, I960,- 243 с.

10. Билай В.И. Фузарии. II Киев'Наукова думка, 1977.- 422 с.

11. Билай В.И., Пидопличко Н.М. Токсинообразующие микроскопические грибы. //Киев:Наукова думка. 1970.- 291с.

12. Билай В.И., Тутельян В.А., Элланская И.А. и др. Компонентный состав трихотеценов, продуцируемых Fusarium sporotricMella Bilai. //Микробиол. журн.,1983, Т.45, 5, с.45-49

13. Бордюг В.Ф. Экспериментальный фузарио- и Т-2 токсикоз свиней. // Факторы повышения продуктивности с.-х. животных. Омск, 1988.-С. 55-59

14. Волков Н.В. Метод определения токсигенности микромицетов.// Микробиол. журнал. 1992. 54. № 6 Стр. 78-81

15. Воронин М.С., В кн.: Тр. 8-го съезда русских естествоиспытателей и врачей.//Спб, 1890,- с. 13-21

16. Временная методика определения Т-2 токсина в кормах с применением иммуноферментного анализа. -М. 1996.

17. Губин И.Е. К методике выделения чистых культур гриба Fusarium sporotrichiella Bilai var. sporotrichioides (Sherb) Bilai. //Сборник науч. трудов. Рязанский с-х. институт. Вып. 21. 1970, С. 197-200

18. Губин И.Е. Биологические особенности гриба F. sp. var. sporotrichioides и их значение в профилактике фузариотоксикоза. // Автореф. к.в.н. Рязань. 1971,- 18 с.

19. Ермаков В В., Костюнина Н.А., Курманов И.А. Выделение и идентификация микотоксина Т-2, продуцируемого F. sporotrichiella. // Докл. ВАСХНИЛ. 1978. № 3. С. 36-38

20. Ермаков В.В., Костюнина Н.А. Хроматографическое определение микотоксина зеараленона в мясе и кукурузе.// Вопр. питания, 1981. № 2. С. 19-20

21. Жильцов В.Г. Микофлора фуражного зерна и источники его заражения микроскопическими грибами.// Докл. ТСХА, 1976, Вып.220, С. 220-225

22. Зелнова Н.Г. Влияние некоторых факторов на токсичность фузареозного зерна. // Тр. аграрн. ун-т, 1991, Вып. 319. С. 98-103

23. Зотова Е.В. и др. Методика экспресс-анализа зернофуража и комбикормов на содержание остротоксичных трихотеценов. //Деп.вет. РФ,1996

24. Зубарева Г.Н. Отравление овец сеном, пораженнымтоксичным грибом Fusarium sporotriehiella // Тр. Свердловск, научн.-исслед. вет. станции. -1958, в. 5.- С.259-263

25. Иващенко В.Г., Шапилова Н.П., Карцидели И.Ю. Экологический мониторинг возбудителей фузареоза семян зерновых культур на северо-западе России. II Микол. и фитопат. 1997. Т. 31., Вып. 2., С. 64-69

26. Иващенко В.Г., Шапилова Н.П., Левитин М.М. Видовой состав грибов рода Fusarium на злаках в Азиатской части России.// Микол. и фитопат. 2000. Т. 34., В. 4., С. 54-58

27. Камарницкая Н.П., Иванов В.Г., Коотин В.В. Токсин Т-2 в культурах грибов рода Fusarium. // Ветеринария. 1982. № 5. С. 65-66

28. Камарницкая Н.П. и др. Методика определения микотоксинов в фуражном зерне.// Ветеринария. 1990. № 10. С. 57-58

29. Камарцицкая Н.П. Одновременное определение Т-2 и Ф-2 в

30. Караваев 0.Ю. Тдщршостъ Т-2 токсина для лабораторных животных и свиней. // Доклады ВАСХНИЛ. 1985. №8, -С. 32-34

31. Караваев О.Ю. Действие Т-2 токсина на куриные эмбрионы.// Ветеринария. 1986. № 8. С. 72-74

32. Карпова Л .И. Санитарно-микологическое состояние кормов климатических зон Тюменской области и разработка методовповышения их качества.// Дисс. канд.вет.наук., 1980, 173 с.

33. Квашнина Е.С. Токсико-биологические свойства грибов рода Fusarium и вызываемые ими микотоксикозы животных и человека. // Афтореф. дис.докт.биол.наук.М. 1972.- 31 с.

34. Кетти Д., Райнундалиа Ч. Иммуноферментный анализ. В кн.: Антитела. Методы. //Под ред. Кетти Д. М.:«Мир» 1991 Т.2.- С. 152239

35. Колыванова Т.Е. Терратогенное и эмбриотоксическое действие Т-2 токсина на организм белых крыс.В кн.: Профилактика незаразных и паразитарных болезней животных.//Новосибирск. 1983. С. 70-72

36. Кононенко Г. П., Буркин А. А., Соболева Н.А., Зотова Е. В. Иммуно-ферментный метод определения Т-2 токсина в контаминированном зерне.// Прикл. биохим. и микробиол. 1999Л. 35.№ 4. С. 457-462.

37. Кононенко Т.П., Буркин А. А. Перспективы использования методической схемы «экстракция ИФА» для определения микотоксинов в кормах.// Тез. докл. междунар. научн. конф. Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. М. 1999,- С. 144-145

38. Коржевенко Л.А. Использование аквариумных рыб Lebistes reticulatus для определения токсичности грибов рода Fusarium секции Sporotrishiella.// Тр. ВНИИВС. 1971. Т. 39.- С. 57-59

39. Костюнина Н.А. Токсинообразование у грибов рода Fusarium (зеараленона и Т-2 токсина) на зерне.// Сб. тр. ВНИИВС. 1979. Т. 63.-С. 123-126

40. Котик А.И., ТруфановаВ.А. Определение трихотеценовых микотоксинов в кормах и культурах грибов биоавтографическимметодом. //Тр.ВИЭВ, 1987, т.65, С.127-131

41. Кратасюк В.А., Львова Л.С., Егорова О.И. и др. Влияние фузариотоксинов на бактериальную биолюминисцентную систему in vitro.// Прикл. биохим. и микробиол. 1998, Т. 34. № 2.- С.207-211

42. Кроякова Е.А. и др. Обнаружение токеигенных штаммов Fusarium, продуцирующих Т-2 токсин, в микофлоре зерна пшеницы микробиологическим методом.// Вопр. питания. 1989. № 2. С. 54-57

43. Кузнецова Е.Г., Борзионов В.Д., Красоткина А.С. Определение DON и Т-2 токсина методом ИФА.// Вирусные болезни с.-х животных. Владимир, 1995, 228 с.

44. Курманов И.А. Экспериментальный фузареотоксикоз крупного рогатого скота Л Тр. ВНИИВС- 1964. т. 23. С. 167-201

45. Курманов И.А. Экспериментальный фузареотоксикоз овец. // Ветеринария. 1970, № 1 - С.76-78

46. Курманов И. А. Фузариотоксикозы сельскохозяйственных животных.// Афтореф. дис.докт.вет.наук,М., 1971

47. Курманов И.А. Грибы рода Fusarium на кормах некоторых зон СССР.// Сб. Тр. ВНИИВС. 1971.Т. 39,- С.53-56

48. Курманов И. А., ТалановГ.А. К методике определения токсичности комбикормов, пораженных микроскопическими грибами.// Тез.докл.регион.симп. Микотоксины.Оренбург, 1977, -€.99-101

49. Кушнарев А.В. Влияние физических и химических факторов на жизнеспособностьмикромицетов в кормах .//Тезисы докл.научн.практ. конференции. Экологические проблемы ветеринарной санитарии. М.1993. 4.2, С.96-97.

50. Лапенис Ю.Б. Токсическое действие гриба F. sp. var. sporotrichioides на организм свиней и некоторые данные к направленному воздействию на восстановительные процессы в организме. // Автореф. на . к.б.н., Каунас, 1974. 24 с.

51. Левитин М.М., Иващенко В.Г., Шапилова Н.П., Гагкаева Т.Ю. О видовом и внутривидовом разнообразии грибов рода Fusarium на зерновых культурах.// Совр. пробл. микол., альгол. и фитопат. 1998. -С 64-66

52. Левицкая А.Б. Характеристика изменения гематологических показателей при Т-2 микотоксикозе. В кн.: Окружающая среда и здоровье населения. //Таллин. 1984. С. 90-91

53. ЛеоновА.Н. и др. Дерматотоксическое действие структурно-близких трихотеценов грибов Fusarium. 11 Докл.ВАСХНИЛ. 1990, Ш 2. С. 52-56

54. Леонов А.Н. и др. Хромато-масс- спектрометрическая идентификация четырех 12,13-эпокситрихотец-9-ен-8-онов в образце фузареозного зерна. // Химия природн. соед., 1988. № 2, С. 313-314

55. Леонов А.Н., Малиновская Л.С., Соболева Н. А., Кононенко Г. П. Совершенствование ветеринарно-санитарных мер по профилактике фузареотоксикозов у сельскохозяйственных животных. 11 Вестник с.-х. науки. М., 1990. № 10. С. 73-78

56. Львова Л.С., Омельченко М.В., Орлова Н.Ю. и др. Санитарно-гигиеническое состояние фузареозного зерна пшеницы, его прием, хранение и переработка.//Вестник С.-х. науки. 1990. № 10

57. Львова Л.С., Орлова Н.Ю., Быстрякова З.К. Распространение токсигенных грибов и микотоксинов в зерне разных культур. //Прикл.биохимия и микробиол. 1993. 29. № 1 С. 70-79.

58. Львова Л.С. Образование микотоксинов в фузареозной пшенице при неблагоприятных условиях уборки // Приют, биохимия и микробиология , 1994. Т-30. Вып. 4-5. С. 686-694

59. Малиновская Л.С. Санитарно-микологический контроль кормов в профилактике микотоксикозов сельскохозяйственных животных в промышленном животноводстве.- М. 1975 С. 187-194

60. Малиновская Л.С. Санитарно-микологическая характеристика и оптимальные режимы хранения обогащенных комбикормов.// Автореф.дис. . к.биол. н,- М., 1969 17 с.

61. Малиновская Л.С., Пирязева Е.А. Распространенность грибов из рода Fusarium на зернофураже в уральском регионе.// Тез. докл. междунар. научн. конф. Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. М. 1999.- С. 146-147.

62. Мишустин Е.Н., Трисвятский Л. А. Микробы и зерно. // М.:Хлебиздат, 1963, 115 с.

63. Методические указания по микологическому исследованию фузареозного зерна пшеницы.// Утв. ГУВ Госагропрома СССР 20.01.1989.,-5с.

64. Методические указания по санитарно-микологической оценке и улучшению качества кормов. //Утв. ГУВ Госагропрома СССР 25.02.1985.

65. Методические указания по определению токсичности мяса животных, вынужденно убитых при фузариотоксикозе.// Утв. 27.12.76. М. 1977. 4 с. Разр. Войковым Ю.И., Хасановой Э.М.

66. Методические указания по микологическому исследованию фузареозного зерна пшеницы. Утв. ГУВ ГАП СССР 02.01.1981.

67. Мостынский В.А., Материалы к вопросу об изменениях продуктовпри плесневении.// Тр. Харьковского вет. ин-та, 1898,N6, С. 1-115.

68. Монастырский О.А. Состояние и проблемы исследования опасных для теплокровных микотоксинов. // Вестн. РАСХН. 1993. № 6. С. 26-29

69. Мостынский О.А., Евтушенко Л.А., Кузнецова Е.В. Токсинообразование видов и штаммов фузариев, поражающих колос пшеницы. Сообщение 1. //Агрохимия. 1997. № 1. С. 73-75

70. Мостынский О. А., Евтушенко Л. А., Кузнецова Е.В. Токсинообразование видов и штаммов фузариев, поражающих колос пшеницы. Сообщение 2. // Агрохимия. 1997. № 2. С. 76-80

71. Мостынский О.А. Факторы эволюции высокотоксигенных штаммов фузариев в агроценозе.// Бробл. оптим. фитосан. сост. рсат-ва СПб, 1997.- С. 342-347

72. Мотылева С.В. Иммунофпуоресцентная идентификация токсигенных фузариев. // Автореф. к.в.н.- М. 1981,-15 с.

73. Мурашинский К.Е. Материалы по изучению фузареоза хлебов. Виды Fusarium на хлебах Сибири.// Тр.Сибир.с.-х. акад. Омск, 1924. Т. З.-С. 87-120

74. Мюллер Э , Леффлер В. Микология.//М.: «Мир». 1995. С. 106-111

75. НаумовИ.А., Меры борьбы с пьяным хлебом. В кн.: Болезни сельскохозяйственных растений.// М., Сельхозгиз, 1937,- С.35

76. Ображей А.Ф. Т-2 токсикоз кур.// Ветеринария 1997.№ 12. С. 4750

77. ПальчевскийН.А., Болезни культурных злаков Южно-Уссурийскош края.// Спб,1891, 79с.

78. Перкель Н.В. Изучение токсигенности забайкальских штаммов F. sporotrichiella в связи с этиологией уровской (Кашина-Бека) болезни. // Тез. докл. совещ. по микотоксикозам. Киев. 1956.

79. Перкель Н.В. Токсичность некоторых форм гриба Fusarium sporotriehiella, выделенных из зерна Восточной Сибири.//Вопр. питания -1957. № 16 -С.4

80. Петрович С.В. Фузариотоксикозы. В кн.: Микотоксикозы животных.// М.: Росагропромиздат. 1991,-С. 124-131

81. Пирязева Е.А. Распространенность грибов рода Fusarium link в зернофураже из хозяйств Западно-Сибирского экономического района.// Сб. науч. тр. Всерос.НИИ ветер, саниарии, гигиены и экологии. 2000. Т. 109,- С. 111-122

82. Профилактика микотоксикозов животных.// М.: Агропромиздат, 1985.-271 с.

83. Рубинштейн Ю.И., Лясс А.С., Об этиологии алиментарно-токсической алейкии.//Гигиена и санит.,1948,№, С.ЗЗ

84. Рубинштейн Ю.И., Пищевые фузариотоксикозы. В кн.: Микотоксикозы человека и сельскохозяйственных животных.// Киев: щр-во АН СССР,1960,- С.71.

85. Рухляда В.В. Биосинтез Т-2 токсина грибом F. sporotriehiella Bilai на различных растительных субстратах. 11 Микология и фитопатология. 1984. Т. 18. Вып. 1. -С. 73-75

86. Рухляда В.В. Хронический фузариотоксикоз поросят. // Свиноводство. 1988. № 3,- С. 41-42

87. Рухляда В.В. Экспериментальный Т-2 токсикоз крупного рогатого скота. М Ветеринария. 1989. № 2.- С. 52-53

88. Рухляда В.В., ТруфановаВ.А. Чувствительность лабораторных животных и рыб гуппи к Т-2 токсину F.sporotrichiella bilai.// Ж.Микологияи фитопатол. 1993,27, В.2,- С.32-36

89. Рухляда В.В. Распределение Т-2 токсина в организме поросят.// Инф. бюлл. Укр. акад. аграрн. наук. Ин-т эксп. клин. вет. мед., 1994.1. С. 330-331

90. Рекомендации по борьбе с фузареозом пшеницы и других зерновых колосовых культур, использованию пораженного зерна и определению содержания в нем микотоксинов.// ГосАгропром СССР. М. 1988.

91. Саркисов А.Х. К вопросу об этиологии так называемой «септической ангины». 11 Тез. докл. на республ. совещ. по алиментарной токсической алейкии. М., 1945

92. Саркисов А.Х., Квашнина Е.С. Токсикобиологические свойства фузариум споротрихиоидес.// Перезимовавшие под снегом зерновые кудыуры. М., 1948

93. Саркисов А.Х. Микотоксикозы. // МСельхозгиз., 1954,136 с.

94. Саркисов А.Х. Диагностика грибных болезней (микозов и микотощрсозов) животных. 7/ М.:Колос, 1971, 312 с.

95. Сергейчев А.И., Тремасов М.Я., Сметов П.К. Экологический подход к изучению фузареозов.// Тезисы докл. научн.-практ. конференции. Экологические проблемы ветеринарной санитарии. МЛ 993. 4.2, С.61-62.

96. Спесивцева Н.А. Микозы и микотоксикозы животных. 11М. .Колос,1964, 517 с.

97. Рпесивцева Н.А., Хмелевский Б.Н. Санитария кормов. М.: Колод,1975. 334 с.

98. Соболев B.C., Эллер К.И., Болтянская Э.В., Дмитриева И.В., Тутельян В.А. Изучение токсинообразования у F. sporotrichiella. 11 Изв. АН СССР, Сер. биол.,1984,1, С.137-141

99. Таланов Г.А., Кононенко ГЛ., Рубченков П.Н. Пути получения экологически безопасных продуктов и кормов.// Тез. докл. междунар. научн. конф. Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены иэкологии. М. 1999.- С. 24-25

100. ТостановскаяА.А., РотманскаяЮ.М., Допитания про токсичность зерна, зараженного деякеими грибами в роду Fusarium.// Микробиол .журн. ,1951,13,- С .47

101. Тремасов М.Я., Сметов П.К., Сергейчев А.И., Цедендамбаев А.И. Роль микотоксинов в этиологии алиментарных токсикозов животных.// Рацион, методы проф., диагн. и терапии незаразн. болезней жив-х. Казань. 1993.- С. 59-61

102. Тремасов М.Я., Сергейчев А.И., Сметов ILK. и др. Сравнительная характеристика методов определения Т-2 токсина в кормах.// Ветеринария. 1997. № 10. С.45-47

103. Тремасов М.Я., Беляева Л .Л., Абульханов А.Г., Равилов А.З. Синтез конъюгата-иммуногена для идентификации Т-2 токсина.// Ветеринария. 1999. № 10. С. 24-25

104. Тремасов М.Я., Сергейчев А.И., Равилов А.З. Изучение токсиногенеза F. sporotrichiella при повышенной температуре культивирования.//Микология и фитопат., 2000. Т. 34, вып. 4,- С. 5961

105. Тремасов М.Я., Равилов А.З., Камалов Б.В., Иванов А.В. Случай сочетанного микотоксикоза свиней.// Ветеринария.М. 2000. № 11. -С.15-16

106. Тутельян В .А., Эллер К. И., Соболев B.C. Методические указания по обнаружению, идентификации и определению содержания Т-2 токсина в пищевых продуктах и продовольственном сырье.//Минздрав СССР. М., 1984

107. Тутельян В.А., Левицкая А.В., Ляшенко В.А., Сходова С.А. Сравнительное изучение влияния Т-2 и НТ-2 токсина на кдеточный и гуморальный иммунитет.// Санитария и гигиена. 1985. №4.- С. 66-68.

108. Тутельян В.А., Кравченко Л.В. Микотоксины.// М.Медицина, 1985,-319 с.

109. УгловВ.А. О пьяном хлебе. В кн.: Тр. Амурской экспедиции. // СпбД913, С.21-23

110. Фадеева Л.М. Микотоксикологическая характеристика зерна хлебных злаков позднего сбора в ряде областей Казахстана. Афтореф. дис.канд.вет.наук,- Алма-Ата, 1969, -21с.

111. Фомина Л.М. Определение токсичности концентрированных кормов и выделение из них грибов на парамецияхю В кн.: Профилактика и меры борьбы с незаразными болезнями сельхоз животных и птицы в зоне Северного Кавказа.- Новочеркасск. 1988. -С. 123-134.

112. Хасанова Э.М. Ветеринарно-санитарная экспертиза туш и органов животных при фузариотоксикозе./ Автореф. дис. к.в.н,- М., 1975. -22.с.

113. Шестакова Т.П. Гистоморфологические изменения внутренних органов свиней при экспериментальном Т-2 токсикозе. // Факторы повышения продуктивности с.-х. животных. Омск, 1988,- С. 67-70

114. Шестакова Т.П. Морфологические изменения в органах иммунной системы свиней, больных фузарио- и Т-2 токсикозом. // Профилактика инфекц. болезней с.-х. животных. Омск, 1988.- С. 6770

115. Эллер К.И., Соболев B.C. Идентификация и количественное определение трихотеценовых микотоксинов методом капиллярной ГЖХ. // Журн. анал .химии, 4,1983

116. Юнусов М.Ю. Токсинообразование грибов рода Fusarium на искусственных питательных средах.// Тр. ВНИИВС. Т. 32. 1969. С. 111-115

117. Ячевский А.А. Рожь пьяный хлеб. // Ежегоднюсведен. о болезнях и повреждениях культ, и дикораст. полезных растений. Спб,1904, -С.16-17.

118. Bamburg J.R, Riggs N. V., Strong F. МЛ Tetrahedron. 1968. v. 24. N 8,- P.3329-3336.

119. Bamburg J.R. The biologicalactivities and detection of naturally occuring 12,13-epoxy~A9-trichothexenes.// Clinical toxicol. 1972. Vol/ 5(4).- P. 495-515

120. Bamburg J.R., In: Mycotoxins and other fungal relaited food problems.// 1976,- P. 144-162.

121. Chi M.S., Robinson T.S., Mirosha C.J. et al.11 Tocsicol. Appl. Pharmacol., 1981, vol. 45, -P. 391-402

122. Chiba J., Kawamura O., Kajii H. at al.// Food addit. Cotam.1988. V. 5. N4.-P. 629-639.

123. ChristensenC., StarmanE. Relation of Fusarium and Helmintosporium in barley seed to sekseling blight and yield. //Phytopathology, 1935,v.25,-p.257.

124. Chu, F.S. et al. Production of antibody against T-2 toxin.// Appl. and Env. Microbiol.,Jan. 1979, P. 104-108.

125. Chung C.W., Trucksess M.W., Giles A.L., Friedman Jr.L. Rabbit-skin test of estimation of T-2 toxin and other skin-irrritating toxins in contaminated corn.//Journ. AOAC. 1974. Vol. 57. N 5. P. 1121-1127.

126. Gartwaite I. et al. Food quality of the farm: immunological detection of mycotoxins in New Zealand pastoral agroculture.//Food and Agroc.Immunol.,1994, 6, P. 123-129

127. Gionggiosine H. A., Barna-Vetro I., Solti L. Monoclonalis ellenanyag eloaHitasu Fusarium T-2 toxin ELISA vizsgalatahoz II Allattenyesztes es takarmanyozes, 1992. V. 41. N 4,- P. 329-336.

128. Glavits R., Vanyi A., Fekete S., Taraas J. Acute toxicological experiment of T-2 toxin in rabbits. II Acta vet. hung. 1989. Vol. 37. N 1/2. -P. 75-79

129. Gorley R.A., Swanson S.P., Buck W.B. Glucuronide conjugates of T-2 toxin and metabolits in swine bile and urine.// J. Agric. Food Chem. 1985/ 33,-P. 1086-1089.

130. ELISA for deoxinivalenola in maise and wheat.// Jornal of the AOAC, 1988, sept/oct, P.945-953.

131. Harold, D.R., William, B.B. and Steven, P S. Gas-hromatography method detection for T-2 toxin, diacetoxiscirpenole, dioxinivalenole and relativ trichotecenes in animals feedstaff. //J. of AOAC May/june, 1988, Vol. 71, no. 3,- P. 432-439.

132. Hack R et al. A monoclonal antibody to the trichothecene T-2 toxin: screening for the antibody by a direct enzime immunoassay // J. vet. med. 1987. Vol. 34. N 7.- P. 538-544

133. Hassan, N.M. et al. Naturally occur of Fusarium toxins in New Zeland maise. Food additives and contaminants., 1989, Vol. 6, no.l, P. 49-58.

134. Hunter K.W., Brimfield A. A., Miller M., Finkelman F. D., Chu F.-S.// Appl. Environ. Microbiol. 1985. V. 49. N l.-P. 168-172

135. Jankinson P., Psrry D.W.Isolation of Fusarium species from common broad-leavid weeds and their pathogenety winter wheat.// Mycol. Res. 1994. Vol. 98, N 7,- P. 777-780

136. Kosuri N.R., Smalley E.B., Nichols RE. Toxicological studies of Fusarium tricinctum (Corda) Snyder and Hansen from moldy comИ Amer. J. vet. res. 1971. vol. 32. N 11- P. 1843-1850.

137. Kawamura, 0.,Nagoyama, S. et al. Survey of T-2 toxin in cereals by an inderect enzyme-linced immunosorbent assay J I Food and Agric. Immunol. (1990) 2, P. 173-180.

138. Marasas W.F., Smaller E.B., Deguse P.E., Bamburg J.R., Nichols R.E. Acute toxicity to rainbow (Sahtio gairdneri) of metabolite produced by fungus F. tricinctum//Nature. 1967. Vol. 214. N 5090. P. 817-818.

139. Matsumoto H., Ito Т., Ueno Y // Japan. J.Exp, med.,1978, vol. 48, -P.393-398

140. MiroshaC.J. In: Conference on mycotoxinsin animal feeds and grains relaited to animal health.// FDA/BVM ,1979, P.289-373

141. Nagoyama, S., Kawamura, O., et al. Aplication of enzyme-liked immunosorbent assay for screening of T-2 toxin-produciny Fusarium spp.// Appl. and Env. Microbiol., May 1988, P. 1302-1305.

142. Neish, G.A., Famwords, E.R. and Cohen,H. Zearalenone and trihotecenes production by some Fusarium species associated with Canadian grains. //Canadian Jornal of Plant Pathology, Vol.4, 1982, -P.191-195.

143. Ohtani K., Kawamura, O., Kajii H. at al.// Proc. Jpn. Assoc. Mycotoxicol. 1985.V. 22. N 1.- P. 31-32.

144. Peters, H., Dierich, M.P. and Dose, K. Ensyme-linked immunosorbent assay for detection of T-2 toxin.// Hoppe-Seyler s Z.Phisiol Chtm.Bd.363, Desember 1982. P.1432-1441.

145. Rabie C.F., Sydenham E.W., Thiel P.G. et al. T-2 in production by Fusarium acuminatum isjlated from oast and barley // Appl. envirom. Microbiol. 1986. Vol. 52. N 3,- P. 594-596

146. Roche B. et al., Feeding scab-infected barley.// Abs.in Phytopathology, 1930,20, -32 p.

147. SatoN., UenoY. Comparative toxicities of trichothicenes// Mycotoxins in Human and animals health. Pathotox Publchers inc., 1977. P. 296-307.

148. S^toN., UenoY., Ueno I. // J.Toxicol.Sci., 1977, v.2, P.261-271

149. Smalley E.B., Marasas W.F., Strong F.M., Bamburg J.R., Nichols R.E.,

150. Kosuri N.R. Myccotoxicosis associated with moldi corn.// Pric. first U.S.Japan coference on toxic microorganisms. 1970. P. 163-173.

151. Sundheim L. et al. Trichotecenes and zearalenone in Norvegian barley and wheat. 8 p.

152. Trenholm H.L., Prelusky,D.B. et al. A practical guide to the prevention of Fusarium micotoxin grain and animal feedstaffs. //Arch. Env. Contam. Toxicol.,18,1989,- P.443-451.

153. Ueno Y. Mycotoxins in humen and animal health.// Rathotox. Rubl., 1977.-P. 189-207

154. Ueno Y.// Fimgam. Appl. Toxicol., 1984, v4, P. 124-132

155. Ueno Y., Kato Y., Enomoto M. // Jap. J.Exp.Med.,1975, v45, P. 525527

156. Ueno Y., Sato N., Ishii K., Sakai K., Tsunoda H., Enomoto M. Biological and chemical detection of trichothecene mycotoxins of Fusarium species// Appl. microbiol. 1973. Vol. 25. N 4.-P. 699-704.

157. Vanyi A., Bata A., Fekete S., Tamas J. Study of the metabolism and exkretion of T-2 toxin, a trichotecene fusariotoxin, in rabbit.// Acta vet. hung. 1988. Vol. 36, N 3 / 4,- P. 213-220

158. Williams, P.P. et al. Influense of T-2 toxin on gastroenteral tissu: survey in vivo and in vitro models.// Arch. Env. Contam.Toxicol., 18, 1989, P. 374-387.

159. Wittetberg K.M. et al. Chitin analysis of hay as a means of determinine fungal invasion during storage//Anim. Feed.Sci.Technol. 1989. Vol. 27. N 1 12.- P. 101-110

160. Wu W., Cook M.E., Chu F.S., Butteles Т., Hunger J., Sutheerland P. Case study of bovine dermatites caused by oat straw infected with Fusarium sporotrichioides.//Veter. Rec., 1997. Vol. 140. N 15. P. 399400135

161. YagenB., Joffe A.Z., Norn P., Мог N., Lutsky LI. Toxin from a strain involved in ATA// Mycotoxins in human and animals health. Pathotox Publchers inc., 1977. P. 329-336.

162. Yates S.G., Tookey H.L., Ellis H.J., Burkhardt H. Mycotoxins produced by Fusarium nivale, isolated from tall (Festica afimginacea Scherb) // Phytochemistry. 1968. Vol. 7.-P. 139-146.

163. Yang Hiianhe et al. A survey of T-2 toxin by an inderect ELISA. 1989

164. Ylimaki A., Koponen H., Hintikka E.-L., Niku- Paavola M.-E., Ilus Т., Enari T.-M. Mycoflora and occurence of Fusarium toxins in furnish grain J J Technical research centre Of Finland. Material and Processing Technology/ Publication. N 21. 1979. 28 p.

165. Yu W., Yu F., Undersunder D.S., Chu F.S. Immunoassays of selected of mycotoxins in hay, siloge and mixed feed.// Food agr. Immunol. 1999. vol. 11. N4. -P. 307-319

166. Рисунок 3.1. Посев пробы зерносмеси на сусло-агар. Шесть суток культивирования. Колонии фузарий розового цвета.

167. Рисунок 3.2. Посев пробы сена на сусло-агар. Пять суток культивирования.

168. Рисунок 3.3. Вторичный посев фузарий, выделенных из проб зерна, на сусло-агар. Пять суток культивирования F.sp.var.poae (167/1,2), F.sp.var.sporotrishioides (163/1).

169. Рисунок 3.4. Вторичный посев фузарий, выделенных из сена, на сусло-агар. Пять суток культивирования.

170. Рисунок 9.1. Нетоксигенный штамм F. sporotrichiella v. sporotrichioides 3 сутки культивирования в тонком слое сусло агара. Световая микроскопия, увеличение X 200

171. Рисунок 9.2. . Нетоксигенный пггамм F. sporotrichiella v. sporotrichioides 7 сутки культивирования в тонком слое сусло агара. Световая микроскопия, увеличение X 200

172. Рисунок 9.3. Образование тяжей нетоксигенным штаммом F. sporotrichiella v. sporotrichioides на 7 сутки кулитивирования на сусло-агаре на мембранном фильтре электронно сканирующая микроскопия. Увеличение X {ООО

173. Рисунок 9.4. Образование пленок нетоксигенным штаммом F. sporotrichiella v. sporotrichioides на 12 сутки кулитивирования на сусло-агаре на мембранном фильтре электронно сканирующая микроскопия Увеличение X 40 ООО

174. Рисунок 9.5. Токсигенный штамм F. sporotrichiella v. sporotrichioides7 сутки культивирования в тонком слое сусло агара. Световая микроскопия, увеличение X 200

175. Рисунок 9.6. Токсигенный штамм F. sporotrichiella v. sporotrichioides 11 сутки культивирования в тонком слое сусло агара. Световая микроскопия, увеличение X 200

176. Российская академия сельскохозяйственных наук Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии.

177. Методические рекомендации по лабораторной диагностике Т-2 токсикоза животных.1. Утверждаю:академик-секретарь Отделения ветеринарной медицины РАСХН, Академик РАСХН1. Москва 20021. Введение.

178. Краткая характеристика Т-2 токсина и вызываемого им токсикоза.

179. При попадании внутрь с кормом Т-2 токсин быстро всасывается из желудочно-кишечного тракта и подвергается разрушению в печени. Наибольшие количества микотоксина обнаруживаются в содержимом желудочно-кишечного тракта и печени.

180. Правила отбора проб кормов и патологического материала.

181. Паталогический материал направляют в лабораторию сразу после взятия. Если сделать это невозможно, то консервируют его ректифицированным спиртом, вместе с пробами высылают 50-100 г спирта, которым консервировали материал.

182. Поступивший в лабораторию материал распределяют по частям в зависимости от предполагаемого исследования. Одну часть опечатывают и сохраняют для контроля в случае возникновения спорных вопросов.3. Проведение исследований.

183. Содержимое желудочно-кишечного тракта. 25 г содержимого желудочно-кишечного тракта помещают в колбу на 250 мл, заливают 125 мл экстракционной смеси и исследуют далее по п.3.1.

184. Печень. 25 г гомогенизированной печени помещают в колбу на 250 мл и заливают 125 мл экстракционной смеси. Проводят анализ по п. 3.1.

185. При расчете содержания Т-2 токсина в пробах учитывают их разведение при экстракции.

186. Оценка результатов и постановка диагноза.

187. При использовании кормов, хранившихся в течение зимнего периода под открытым небом, плохая поедаемость кормов животными, развитие