Морфофункциональная характеристика гранулярных клеток предсердия брюхоногого моллюска Achatina fulica тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат биологических наук Шабельников, Сергей Владимирович

• Шабельников, Сергей Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шабельников, Сергей Владимирович

Список принятых сокращений.

Введение.

Обзор литературы.

Кровеносная система брюхоногих моллюсков.

Особенности организации кровеносной системы брюхоногих моллюсков.

Строение сердца брюхоногих моллюсков.

Иннервация и нейрогуморалъный контроль сердца брюхоногих моллюсков.

Гранулярные клетки брюхоногих моллюсков.

Гуморальные защитные факторы моллюсков.

Нейроиммунные взаимодействия у моллюсков.

Молекулярные основы нейроиммунных взаимодействий.

Реакции гемоцитов на медиаторы.*.

Стрессорные реакции моллюсков.

Нейроиммунные реакции на вторжение патогена.

Материалы и методы.

Объект исследования.

Световая микроскопия.

Антитела.

Иммуногистохимия.

Электронная микроскопия.

Иммуноэлектронная микроскопия.

Фармакологические эксперименты на изолированном сердце A. fúlica.

Перфузия сердца in situ и электрическая стимуляция сердечного нерва.

Приготовление тотального нейрокардиального препарата.

Экстракция белка из перфузата.

Электрофорез в ПААГ.

Окрашивание электрофоретических гелей.

Окрашивание кумасси G250.

Окрашивание нитратом серебра.

Окрашивание ПАФ.

Иммуноблотинг.

Получение поликлональных антител к белку 16 кДа.

Получение сыворотки.

Аффинная очистка поликлональных антител.

Выделение нативного белка 16 кДа из предсердия.

Гелъфилыпрационная хроматография.

Ионообменная хроматография.

Определение антибиотической активности препарата Е250.

Определение опсонизирующей активности препарата Е250.

Получение гемолимфы.

Приготовление монослоев гемог/итов.

Приготовление дрожжей меченых FITC.

Исследование фагоцитарной активности гемоцитов in vitro.

Определение агглютинирующей активности препарата Е250.

Методы статистического анализа.

Результаты.

Морфологическая характеристика ГК.

Локализация ГК в сердце ахатины.

Особенности ультраструктурной организации ГК.

Иммунолокализация нейромедиаторов в предсердии.

Локализация пептидных медиаторов.

Локализация ацетилхолина и норадреналина.

Иммуноцитохимическая локализация белка теплового шока 70 кДа.

Анализ лизата предсердия методом иммуноблоттинга.'.

Исследование влияния Hsp70 и ANP на частоту сердечных сокращений у моллюска.

Влияние стимуляции сердечного нерва на секреторную активность сердца.

Содержание общего белка в перфузате.

Белковый состав перфузата.

Морфологические изменения ГК при стимуляции сердечного нерва.

Иммунолокализация белка 16 к Да.

Выделение нативного белка 16 кДа из предсердия.

Характеристика белка 16 кДа.

Антибиотическая активность.

Опсонизирующая активность.

Агглютинирующая активность.

Обсуждение.

Секреторная функция ГК.

Морфологическая характеристика ГК.

Иммунолокализация пептидных медиаторов в ГК.

Иммунолокализация норадреналина в ГК.

Иммунолокализация белка теплового шока 70 кДа в ГК.

Взаимодействие ГК с нервной системой.

Морфологическая характеристика контактов ГК с нервными терминапями.

Иммунолокализация пептидных медиаторов в нервных терминалях.

Иммунолокализация ацетилхолина и норадреналина в нервных терминалях.

Влияние стимуляции сердечного нерва на секреторную активность ГК.

Участие ГК в продукции гуморальных защитных факторов.