Морфофункциональные изменения слизистой оболочки рубца во взаимосвязи с процессами пищеварения и всасывания питательных веществ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.13, доктор биологических наук Грушкин, Александр Георгиевич

• Грушкин, Александр Георгиевич
• доктор биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации доктор биологических наук Грушкин, Александр Георгиевич

ВВЕДЕНИЕ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Процессы превращения углеводов в преджелудках жвачных животных, роль микроорганизмов. , Образование и использование летучих жирных кислот, как основных источников энергии у жвачных животных, влияние на эти процессы факторов кормления.

Строение стенки рубца. Механизм поглощения питательных веществ и их трансформация руменоцитами слизистой оболочки. Существующие представления о транспорте питательных веществ в стенке рубца и его регуляции.

Значение ЛЖК для моногастричных животных. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Условия проведения опытов и характеристика подопытных животны. Методы биохимических исследований биологических сред: рубцовая жидкость, кровь, лимфа, слюна, моча (общие и отдельные ЛЖК, аммиак, серотонин).

Методы морфологических исследований: Методика биопсии слизистой оболочки рубца; Методика приготовления гистологических препаратов слизистой оболочки рубца для изучения в световой и электронной микроскопии.

2.4. Выбор модели для изучения процессов всасывания в рубце, оценка проницаемости эпителия с помощью трейсера.

2.5. Методика приготовления препаратов для электронно-гистохимического выявления летучих жирных кислот. К

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Физиолого-биохимические исследования динамики процессов рубцового метаболизма в разные временные интервалы после кормления животных.

3.1.1. Образование ЛЖК в рубце и их всасывание в кровь и лимфу.

3.1.2. Влияние интенсивности процессов рубцового метаболизма на транспорт и обмен питательных веществ.

3.2. Морфологические изменения слизистой оболочки рубца во взаимосвязи с процессами метаболизма и всасывания питательных веществ.

3.2.1. Результаты исследований полученных методом световой микроскопии.

3.2.2. Результаты исследований полученных методом электронной микроскопии.

3.2.3. Этапы всасывания и кругооборот питательных веществ в организме.

3.2.4. Пути транспорта питательных веществ в слизистой оболочке рубца.

3.2.5. Результаты электронно-гистохимической

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Морфофункциональные изменения слизистой оболочки рубца во взаимосвязи с процессами пищеварения и всасывания питательных веществ»

Повышение молочной и мясной продуктивности животных в условиях интенсификации производства в значительной степени зависит от развития кормовой базы и сбалансированного кормления.

В этой связи знание процессов метаболизма и усвоения питательных субстратов в организме животных является основой их рационального кормления. Важное значение в превращении и усвоении питательных веществ у жвачных животных имеют преджелудки. Образующиеся в рубце продукты метаболизма в значительных количествах всасываются в кровь и лимфу непосредственно через слизистую оболочку рубца. В связи с этим изучение процессов образования и транспорта летучих жирных кислот, как основных рубцовых метаболитов, при переходе их через стенку рубца и влияние на эти процессы кормления имеет важное научное и практическое значение.

До настоящего времени имелись отдельные работы, посвященные изучению изменений структуры слизистой рубца в процессе пищеварения (Курилов Н.В.,1971; Вракин В.ФД963; Туревский A.T.1964;Tcachi Sacata, Hideo Tamate, 1974), однако они не дают полного представления об изменениях происходящих в слизистой оболочке при переходе рубцовых метаболитов в кровь и лимфу в динамике абсорбции. Вместе с тем, эти данные необходимы для теоретического обоснования проблемы субстратного обеспечения метаболизма, разрабатываемой отечественными учеными, в том числе на кафедре физиологии и биохимии животных МСХА, в составе отраслевой тематики.

Источником обменной энергии у жвачных животных помимо углеводов являются летучие жирные кислоты. Утилизация большого количества низкомолекулярных жирных кислот, всасываемых непосредственно из преджелудков, - главная особенность тканевого обмена у жвачных животных. За счет их окисления жвачные животные удовлетворяют до 70% необходимой обменной энергии.

Слизистая оболочка рубца активно участвует в процессах всасывания и образования новых веществ. Исследование морфо-функционального состояния ее эпителия в суточной динамике представляет безусловный научный и практический интерес, поскольку Ттранспорт и обмен метаболитов в слизистой оболочке рубца является сложным физиологическим процессом, существенно влияющим на межуточный обмен.

Цель исследований:

Изучить структурные изменения слизистой оболочки рубца в процессе всасывания питательных веществ в различные интервалы времени после приема животными корма и связь этих изменений с происходящими в рубце биохимическими процессами.

Задачи исследований:

1. Изучить закономерности и взаимосвязи физиолого-биохимических, морфологических процессов, происходящих в рубце жвачных животных при разной интенсивности пищеварения.

2. Изучить в суточной динамике влияние разной интенсивности процессов пищеварения и всасывания питательных веществ на морфоструктуру слизистой оболочки рубца из разных отделов

3. Проследить возможные пути транспорта питательных веществ, на примере ЛЖК, через стенку рубца с помощью трейсера коллоидного лантана и их значение в процессах всасывания.

4. Исследовать содержание ЛЖК в крови и лимфе в связи с суточной динамикой рубцового пищеварения.

5. Исследовать влияние тканевых гормонов на процессы абсорбции и его механизм 7

Научная новизна.

В нашей работе впервые дана сравнительная морфо-функциональная характеристика разных отделов слизистой оболочки рубца. Показана взаимосвязь биохимических изменений содержимого рубца и их влияние на ультраструктуру слизистой до кормления (при условном состоянии натощак) и в разные интервалы времени после приема животными корма. Изучено в суточной динамике влияние продуктов рубцового метаболизма, в процессе их всасывания, на структуру слизистой рубца жвачных животных с использованием методов световой и электронной микроскопии. Показаны: морфофункциональные изменения митохондрий, пластинчатого комплекса Гольджи и межклеточных пространств при разной активности всасывания Рубцовых метаболитов (в том числе ЛЖК), что позволяет судить об интенсивности внутриклеточных процессов и дает представление о путях транспорта питательных веществ из полости рубца в кровь и лимфу.

Впервые показаны с использованием методов электронной микроскопии, пути транспорта питательных веществ в многослойном ороговевающем эпителии слизистой оболочки рубца жвачных животных, а методом электронной гистохимии доказан парацеллюлярный транспорт летучих жирных кислот из рубца в кровь и лимфу. Исследованы количественные показатели образования в рубце и поступления ЛЖК в кровь и лимфу. Установлена положительная корреляция между содержанием ЛЖК в слюне и крови, что позволяет предположить наличие их кругооборота, подобно азотистым веществам, в системе рубец-кровь-слюна-рубец. Результаты нашей работы раскрывают новые морфофункциональные аспекты структуры слизистой оболочки рубца жвачных животных связанных с процессами всасывания питательных веществ. На примере тканевых гормонов гистамина и серотонина, экспериментально показан механизм гормональной регуляции процессов транспорта летучих жирных кислот в рубце жвачных животных.

Практическая значимость

Проведенные исследования по изучению морофо-функциональных изменений эпителия слизистой оболочки рубца во взаимосвязи с суточной динамикой процессов пищеварения и всасывания продуктов рубцового метаболизма представляет безусловный интерес, в связи с важной ролью преджелудков в переваривании клетчатки. Полученные результаты могут быть использованы при дальнейшем изучении процессов пищеварения и всасывания питательных веществ у жвачных животных. Данные об ультраструктуре слизистой оболочки рубца раскрывают ее морфо-функциональные особенности и позволяют целенаправленно регулировать процессы всасывания и транспорта продуктов метаболизма.

Основные положения выносимые на защиту

- Сопряженность процессов образования и всасывания ЛЖК в преджелудках жвачных животных в суточной динамике

- Роль крови и лимфы в транспорте ЛЖК

- Взаимосвязь процессов образования и всасывания ЛЖК с морфоструктурными изменениями в слизистой оболочке рубца

- Пути транспорта ЛЖК в слизистой оболочке рубца, роль межклеточных пространств в этом процессе

- Роль тканевых гормонов в процессах образования и всасывания ЛЖК у жвачных животных

9 ■

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Процессы превращения углеводов в преджелудках жвачных животных и роль микроорганизмов в этом процессе Пищеварительная система жвачных животных характерна существенными морфофизиологическими особенностями. Если в однокамерном желудке переваривание питательных веществ только начинается, а всасывания почти не происходит, то у жвачных животных более 50% питательных веществ рациона переваривается и всасывается еще до попадания в тощую кишку.

Главной особенностью пищеварения жвачных является наличие в их преджелудках симбиотической микрофлоры, при участии которой переваривается значительная часть поступившего корма. Одним из наиболее важных процессов, происходящих в рубце, является сбраживание клетчатки при действии на нее микрофлоры. Известно, что в преджелудках жвачных животных отсутствуют пищеварительные железы. И только благодаря микрофлоре, вырабатывающий фермент гидролизующий целлюлозу, происходит расщепление клетчатки и использование ее для энергетических и пластических целей.

Ранее существовало мнение, что клетчатка у травоядных животных проходит через желудочно-кишечный тракт без изменений. В 1854 году Хаубнер опроверг это мнение, добавляя в рацион животных бумагу с опилками и наблюдая в кале лишь незначительное количество добавок. В последующем Тайпентер в 1882 году, установил, что расщепление клетчатки в желудочно-кишечном тракте жвачных животных осуществляется путем бактериальной ферментации, аГеннебер в 1922 году выделил около пятнадцати видов микроорганизмов, обладающих целлюлозолитической активностью. Только под влиянием ферментов, вырабатываемых целлюлозолитическими микроорганизмами, происходит

10 переваривание углеводов растительных кормов в рубце, включая полисахариды. В процессе анаэробного микробиального расщепления сложных углеводов и сбраживании простых Сахаров освобождается энергия, необходимая для жизнедеятельности микроорганизмов, и образуются летучие жирные кислоты. В процессе эволюции органов пищеварения в преджелудках жвачных животных сформировались симбиотические взаимоотношения с населяющей желудочно-кишечный тракт микрофлорой, которая обеспечивает ферментативное расщепление труднопереваримых компонентов корма растительного происхождения. В зависимости от вида корма в нем может содержаться от 40 до 80 % углеводов, причем значительную их часть представляют нерастворимые в воде полисахариды, которые расщепляются только бактериальными ферментами до более простых соединений (Алиев A.A., 1997; Дубинин A.B. и др. 1987; Отава A.M., Скорохид В.И., 1992).

В рубце переваривается до 95% простых Сахаров и крахмала и до 54% переваримой клетчатки корма и только до 40% потребленной клетчатки переходит в нижележащие отделы желудочно-кишечного тракта (Алиев A.A., 1997). Поступившие в рубец сложные углеводы подвергаются ферментативному гидролизу до ди- и моносахаридов, которые в дальнейшем сбраживаются до летучих жирных кислот. Присутствие в рубце разнообразных видов бактерий дает возможность осуществления различных путей расщепления углеводов, но в итоге всегда образуются летучие жирные кислоты - уксусная, пропионовая и масляная, янтарная и молочная, а также некоторые другие соединения (Алиев A.A., 1997; Курилов Н.В., Кроткова А,П. 1971; Отава A.M., Скорохид В.И., 1992). Из них в количественном отношении преобладают ЛЖК, что объясняется низким содержанием кислорода в преджелудках жвачных и небольшой глубиной окисления моносахаридов и других субстратов брожения. Причем летучие жирные кислоты могут образовываться не только при И различных типах брожения углеводов, но и при распаде гликопротеидов, белков, липидов и нуклеиновых кислот, которые также присутствуют в рубце жвачных (Дубинин А.В. и др.,1987).

Клетчатка под действием ферментов микроорганизмов вначале деполимеризуется, а затем идет расщепление до моносахаридов, глюкоза через пировиноградную кислоту превращается в уксусную, а через щавелево-уксусную и янтарную в пропионовую (Clark R.,1953; Doetseh R., Robinson R.,1953). Уксусная кислота, являясь основной способствует образованию масляной, а, соединяясь с пропионовой образует валериановую (Kaufman R.,1961).

Установлено, что в рубце подвергается разложению 60-65% клетчатки, 80-95% легкопереваримых углеводов - крахмала и растворимых Сахаров (Медведев А.Ю., Материкин А.М.,1995), 40-80% белков корма (Синещеков А.Д.,1965).

A.А. Алиев (1997) считает, что в преджелудках переваривается и всасывается в кровь до 53,5-69% сухих веществ корма

Основными продуктами, образующимися в рубце в результате сложных процессов бактериального расщепления корма, являются летучие жирные кислоты, аммиак, аминокислоты и газы (Курилов Н.В., Кроткова А.П.,1971).

Источником энергии для анаэробных микроорганизмов рубца, осуществляющих процессы распада и синтеза, является адснозиптрифосфорная кислота. Поэтому рост микроорганизмов пропорционален количеству АТФ, образующейся при ферментации углеводов. Таким образом, углеводы, превращаясь в ЛЖК, обеспечивают синтез значительного количества АТФ и служат основным источником биологически доступной обменной энергии.

12

Всасывание ЛЖК является следствием низкого содержания сахара в крови, так как в кровь всасывается не глюкоза, а короткоцепочечные жирные кислоты, как продукт гидролиза полисахаридов, играющих важную роль в энергетическом обмене и синтетических процессах организма (Курилов Н.В., Кроткова А.П.,1971; Sommer A. et al., 1975).

Н.В. Куриловым и др. (1971) показано, что количество летучих жирных кислот с возрастом увеличивается, а уровень сахара снижается и основным источником глюкозы становится глюкогенез в стенке преджелужков и печени.

Большинство исследователей сходятся во мнении, что у жвачных животных потребность в глюкозе, как в одном из энергетических материалов, обеспечивается за счет процессов глюкогенеза из низкомолекулярных короткоцепочечных жирных кислот и некоторых аминокислот.

Низкое содержание сахара в крови компенсируется летучими жирными кислотами, которые, образуясь в рубце, обильно поступают через стенки преджелудков в кровь и лимфу.

Летучие жирные кислоты удовлетворяют до 60-70% потребности жвачных животных в энергии (Kaufman W.,1961).

Расчет энергетической ценности летучих жирных кислот, показывает, что уксусная кислота обеспечивает примерно 40% общей энергии ЛЖК, доля пропионовой, масляной и валериановой кислот составляет, соответственно 24,16 и 10% от общей энергии (Шоу Д., 1961). Кроме этого, ЛЖК являются основными

13 предшественниками составных частей жира молока. Скорость процесса образования ЛЖК в преджелужках, и количество отдельных кислот в них имеют большое значение для продуктивности жвачных животных.

По химической классификации летучие жирные кислоты относят к группе алифатических монокарбоновых кислот от уксусной до капроновой с длиной углеродной цепи С2-С6. Свое название они получили за свойство высокой летучести, то есть упругости паров при комнатной температуре. ЛЖК относятся к кислотам средней силы и, следовательно, при физиологических значениях рН в значительной степени диссоциированы. Таким образом, они представлены, как своей молекулярной формой, так и соответствующим анионом. Летучие жирные кислоты образуют соли с основаниями Бернстеда, обычно это соли натрия и кальция, которые без ограничений растворимы в воде и образуют довольно прочные водородные связи, как с молекулами воды, так и между собой. Однако, будучи амфолитами, они способны растворяться и в значительно менее полярных средах. Благодаря этому обстоятельству ЛЖК должны легко проникать через липидные мембраны и межклеточные пространства вместе с током воды. Сахаролитические анаэробы способны продуцировать полный набор ЛЖК. Анаэробный метаболизм моносахаридов можно рассматривать, как процесс окислительно-восстановительного диспропорционирования. В качестве примера можно привести уравнение процесса брожения глюкозы: 34,5 С бН 12 О 6 -> 48 ацетат +11 пропионат + 5 бутират + 23,75 СН4 + 34,25 С02 + 10,5 Н20. Многие бактерии продуцируют какую-нибудь одну жирную кислоту этой группы и, как правило, уксусную. Анаэробная сахаролитическая микрофлора продуцирует ЛЖК, сбраживая моносахариды, обычно в рамках ферредоксин-зависимого пути. Сахаролитические анаэробы снабжены необходимым для гидролиза полисахаридов ферментным аппаратом, то есть внеклеточными

14 ^ гликозидами - гидролазами, способными расщеплять гликозидные связи как экзо-, так и эндо-типа. В результате гидролиза полисахаридов обычно образуется набор моно- и дисахаридов, транспортирующихся в бактериальные клетки и там подвергающихся брожению. Основным источником пищевых субстратов для сахаролитической микрофлоры являются кормовые полисахариды и гликаны, гликопротеиды, гликолипиды являющиеся фрагментами клеток слущенного эпителия и погибших бактериальных клеток (Дубинин A.B. и др., 1987).

Основная масса энергии растительных кормов, потребляемых жвачными животными, представлена углеводами, которые состоят из moho-, ди-, три-и полисахаридов, которые ферментируются до летучих жирных кислот. В течение суток в рубце овцы образуется от 200 до 500 г. ЛЖК (Алиев А.АД997; Bergmaen E.N., 1990; Sutton J.D.,1980). В рубце лактирующей коровы на сено-концентратном рационе продуцируется от 1500 до 3500 г. ЛЖК, которые дают 17980 ккал энергии. Методом изотопного анализа установлено, что до 50% ЛЖК используются на нужды энергии, окисляясь до конечных продуктов - С02 и воды, а остальная часть используется в синтетических процессах, главным образом при образовании липидов. Уксусная кислота, всасываясь из преджелудков мало задерживается печенью и используется как для энергетического обеспечения организма, так и для синтеза высокомолекулярных жирных кислот, являясь предшественником жира молока (Грушкин А.Г., Шемораков A.B., 1998). Уксусная кислота в организме жвачных животных, наряду с использованием на синтез высокомолекулярных жирных кислот, расходуется на синтез заменимых аминокислот , холестерина и желчных кислот, а также холина в печени и слизистой оболочки рубца (Алиев А.А, 1997).

Е.Ф.Эннисон и Д.Льюис в опыте на овцах установили, что общая энергия летучих жирных кислот, поступающих в кровь, составляет 25,3 ккал энергии в час, причем на уксусную кислоту приходится 5,7, пропионовую - 6,6 и масляную-12 ккал/час.

Большое количество ЛЖК образуется в рубце при кормлении рационами, богатыми легкопереваримыми углеводами (Курилов Н.В.,1972). Максимум кислот брожения отмечается обычно через 2-3 часа после кормления (Тосев А.,1974; Orth A., Kaufman W., 1961). При содержании овец на сено-концентратном рационе максимальный уровень летучих жирных кислот в рубце наблюдается через 3-6 часов после кормления (Радев Т., Стоянов И.,1962; Gray F., Pilgrim F.,1951). Balch D., Rowland S. (1957) установили, что для разных рационов максимум концентрации жирных кислот колеблется от 11,4 до 21,3 мэкв/100мл рубцовой жидкости. Этот максимум соблюдается и в разное время после кормления. На рационе, богатом легкоформентируемыми углеводами - через 2-3 часа после кормления, на крахмальном рационе - 4-6 часов. Самое низкое содержание ЛЖК оказалось на сенном рационе.

По данным Курилова Н.В. (1971), Herschberger Т. et al. (1970) концентрация ЛЖК в рубце у овец колеблется от 5 до 15 мМ/100мл. Самая низкая концентрация этих кислот наблюдалась до кормления, а после приема корма повышалась. Соотношение отдельных кислот брожения в рубце колеблется в определенных пределах. В большинстве случаев в рубце преобладает уксусная кислота, затем пропионовая и масляная. Они неизменно присутствуют в рубце в среднем соотношении: 65% уксусной, 20% пропионовой и 15% масляной.

Преобладание уксусной кислоты над другими кислотами наблюдается почти при всех рационах. Уксусная кислота составляет в энергетическом отношении 50% всех ЛЖК и может утилизироваться во всех тканях; масляная кислота изменяется уже в преджелудках, а пропионовая в печени превращается, в основном, в гликоген. Уксусную кислоту все клетки тела используют предпочтительнее, чем глюкозу (Reid R.,1950).

16

Рационы богатые крахмалом и сахаром, благоприятствуют образованию пропионовой кислоты и вызывают образование меньших количеств уксусной кислоты (Курилов Н.В.,1977; Storry et al.,1974). По мнению Reid et al. (1957) понижение значения pH в рубце способствует быстрому размножению микроорганизмов, образующих пропионовую кислоту. В этом случае, как правшю, после кормления наблюдается увеличение процента пропионовой кислоты среди общей суммы ЛЖК, хотя самый высокий уровень пропионовой кислоты совпадает с максимальным увеличением общего пула ЛЖК. Джонсоном (1951) убедительно продемонстрировано, образование пропионовой кислоты при сбраживании клетчатки, глюкозы и молочной кислоты. Лактат, сбраживаясь, образует пропионовую кислоту путем фиксирования углекислоты и декарбоксилирования янтарной, а также прямым восстановлением без фиксации углекислоты, через акриловую кислоту. На подобные механизмы образования пропионовой кислоты указывают Orth A., Kaufman (1961) и Вракин В.Ф. (1962). Помимо уксусной, пропионовой и масляной кислот в рубце найдены: пировиноградная, о кс и п иро в и но град и ая, альфа-кетоизовалериановая, щавелевоуксусная, альфа-кетоглютаровая и др. кислоты (Horst С.,1961).

Ферментативные процессы в рубце протекают лишь в том случае, когда в рационе соблюдается определенное соотношение между легко и трудно растворимыми углеводами, между содержанием белков и углеводов (Каплан В.А.,1962; Семенютин В.П.,1968).

Н.В. Курилов (1971) установил, что оптимальным соотношением сахара к протеину в рационе является, такое, когда количество сахара равно количеству протеина или несколько превышает его, т.е. сахаро-протеиновое отношение должно быть равно 1 или 1,4.

Процессы сбраживания углеводов в рубце способствуют понижению pH, так как образуется много молочной, пропионовой и масляной кислот путем

17 реконденсации уксусной кислоты (Phillipson А.Т.,1952; Orth А.,1961. Молочная кислота при нормальных условиях кормления присутствует в рубце в виде следов (Waldo А.,1956), видимо, потому, что легко превращается в пропионовую, масляную и уксусную кислоты (Gohn А.Т.,1951; Waldo А.,1956).

Содержание низкомолекулярных жирных кислот в различных отделах пищеварительного тракта также различно. В рубце, где наибольшее количество микроорганизмов, отмечено наибольшее количество летучих жирных кислот, меньше в сетке и книжке (Алиев A.A.,1967). Образование летучих жирных кислот происходит также в слепой кишке и проксимальном отделе толстого кишечника (Чернов К.П.,1968; Packett E.V. eetal.,1966).

1.2. Образование и использование ЛЖК, как основных источников энергии у жвачных животных. Влияние на эти процессы факторов кормления

На процессы пищеварения и всасывания продуктов углеводного обмена в рубце большое влияние оказывают количество и соотношение питательных веществ корма, поступающего в организм жвачных животных. Питательные вещества, в зависимости от своего состава определяют характер обмена веществ в организме. Как правило, продукты брожения, образующиеся в рубце всасываются в кровь и лимфу и включаются в обменные процессы. Содержание летучих жирных кислот в рубце и количество каждой в отдельности зависят от состава рациона.

Основная доля ЛЖК, образующихся в преджелудках при сбраживании углеводов, приходится на уксусную, пропионовую и масляную кислоты. Кислоты с длиной цепи более четырех атомов углерода составляют незначительную часть.

Соотношение трех основных низкомолекулярных кислот в преджелудках зависит от структуры рациона и соотношения питательных веществ в нем, то есть от соотношения легко и труднорастворимых углеводов, белков и углеводов, которые создают более или менее благоприятные условия для развития уксуснокислых, пропионовокислых или маслянокислых бактерий (Курилов Н.В., Кроткова А.П., 1971). В рубцовом содержимом овец, получающих зимний сено-концентратный рацион, уксусная кислота составляет -60%, пропионовая -22%, масляная -15% остальные - 3% (Апшвоп ЕЛ7., ЫпгеН 1964). При содержании овец на рационе из сена соотношение ЛЖК в их рубце : уксусная кислота составляет -81%, пропионовая -13%, масляная -4,3%, изомасляная -1,6%, 2-метилмасляная -0,3%, валериановая -0,3% (Атшоп ЕЛ7., ЬтгеП ЬХ., 1964). По другим данным, при сено-концентратном типе кормления в содержимом рубца овец перед утренним кормлением на уксусную кислоту приходилось 67,4%, пропионовую -21,3%, масляную -11,3%. Через 3 ч после кормления соотношение ЛЖК изменилось: уксусная кислота -64,9%, пропионовая -23,6% и масляная -11,5% (Алиев А.А., 1997).

Изменение концентрации летучих жирных кислот в содержимом рубца и изменение рН находится в прямой зависимости от рациона. В нормальных условиях рН содержимого рубца колеблется в пределах 5,6-7,5. Повышение рН происходит при поступлении в рубец большого количества белка. Разрушение белка приводит к образованию аммиака, в результате чего происходит сдвиг рН в щелочную сторону (Курилов Н.В., Кроткова А.П., 1971).

В опытах, проведенных на кафедре физиологии и биохимии животных МСХА установлено, что подкормка животных комплексом микроэлементов / Со, Сц, Мп и 2п / оказывала более благоприятное влияние на рост Рубцовых микроорганизмов, азотистый обмен, переваримость питательных веществ рациона и уровень образования ЛЖК

19 образования JDKK в рубце (Грушкин А.Г., Шемораков А.В., 1998; Шевелев Н.С., 1969).

Неблагоприятное действие на микробиальные процессы оказывает пастбищный период первых дней. Избыток легкоферментируемых углеводов и протеина в сочной траве, низкое содержание клетчатки снижает метаблические процессы микроорганизмов рубца. При выгоне на весеннее пастбище у коров изменяется характер брожения в рубце, при этом снижается концентрация уксусной и увеличивается доля пропионовой и масляной кислот. С увеличением в пастбищной траве клетчатки (до 22-23% в сухом веществе) соотношение кислот брожения в рубце изменяется: молярный процент уксусной кислоты повышается, а пропионовой и масляной - снижается. Подкормка пасущихся коров гранулированными концентратами вместе с соломенной резкой не предупреждает снижения концентрации уксусной кислоты в рубце и падения жира в молоке (Курилов Н.В., Кроткова А.П., 1971).

При скармливании рационов с низким содержанием грубых кормов соотношение кислот в рубцовом содержимом меняется в сторону уменьшения доли уксусной и увеличения пропионовой кислот. Исключение из рациона сочных кормов приводит к уменьшению образования низкомолекулярных жирных кислот (Даугерт Р.К.,1972; Соловьев А.М., 1967).

Скармливание силоса увеличивает в рубце доли масляной и пропионовой кислот. Благоприятное влияние на продукцию летучих жирных кислот в рубце оказывает включение в рацион корнеплодов: сахарной, кормовой свеклы, картофеля, турнепса (Соловьев A.M., Курилов Н.В., 1971).

При содержании жвачных животных на рационах, в которых преобладают грубые корма мм они являются единственным видом корма, соотношение кислот в преджелудках изменяется в сторону увеличения уксусной кислоты, уровень которой может достигать 80% и выше

X 20 ! г

Annison E.F., 1964). В крови овец и коров, получавших рацион с высоким уровнем грубого корма, уровень ацетата был выше, а пропионата и изобутирата ниже. Содержание масляной кислоты не зависело от состава рациона (Trompson D.J., Beever D.E., 1980).

На образование ацетата в преджелудках оказывает влияние уровень клетчатки в рационе. Максимальной способностью к перевариванию клетчатки обладает микрофлора, формирующаяся при 17% клетчатки в, рационе. Способность складывающейся в преджелудках ассоциации микробных видов к образованию ацетата из целлюлозы находится в прямой зависимости от уровня клетчатки в рационе . Оптимальные условия для переваривания клетчатки и образования ацетата в преджелудках создаются при содержании 17-22% клетчатки, или когда в сухом веществе рациона на концентраты приходится не более 44% (Курилов Н.В., Кроткова А.П., 1971; Соловьев A.M., Курилов Н.В., 1971).

При включении в рацион жвачных повышенных норм концентрированных кормов уровень кислот и соотношение их меняется. При содержании коров на высококонцентратном рационе и небольшом количестве грубого корма в рубцовом содержимом снижается молярное отношение ацетат-пропионат.

У телок на высококонцентратном рационе в сравнении с рационом, в котором преобладает сено, содержимое рубца существенно отличалось по кислотности, общему содержанию и соотношению ЛЖК. На высококонцентратном рационе, скармливаемом в течении длительного периода времени, образование ЛЖК в рубце угнетается до 33,5-41% от переваримой энергии против, примерно, 50% на рационе из сена и концентратов (Стояновский C.B., 1985).

В опытах на овцах установлено, что концентратный тип кормления приводил к повышению уровня ЛЖК в содержимом рубца, а максимальная доля уксусной кислоты была при рационе, состоящем из концентратов,

21 зеленой травы и соломы. При кормлении валухов полнорационными гранулами с различным содержанием стержней початков кукурузы ( 45, 35, 25 и 15%) и концентрированых кормов установлено снижение рН в рубце при увеличении доли концентратов. При этом молярная доля ацетата была наиболее низкой, а пропионата наибольшей при скармливании высококонцентратного рациона.

На процессы ферментации в преджелудках большое влияние оказывает измельчение грубого корма и скармливание его в ввде рассыпной кормосмеси или в форме гранул, что приводит к изменению рН содержимого рубца, а также соотношения ЛЖК.

При скармливании коровам люцерновой муки в гранулированной форме рН в рубце снижается с 6,9 до 6,0, а при замене люцерновым сеном - с 6,28 до 5,22 (Алиев А.А., 1997).

Измельчение и гранулирование сена для коров понижает в рубце уровень ЛЖК, изменяет существенным образом соотношение кислот в сторону меньшего образования уксусной и увеличения пропионовой и масляной кислот. Одновременно с этим в рубце повышаются доли кислот с разветвленной цепью (Алиев А.А., 1997). При скармливании коровам рациона, состоящего из гранулированного ячменя полной и восковой спелости (60%), сенажа (30%) и корнеплодов (10%), в содержимом рубца снижалась концентрация уксусной кислоты и повышалась масляной, пропионовой и изомасляной. Вместе с тем понижалось содержание уксусной кислоты в крови. При кормлении овец гранулами, состоящими из измельченного лугового сена (41,8%), ячменя (25,28%), опилок (15,37%), меляссы (14,93%), мочевины (1,32%) и витаминно-минеральных добавок (1,24%), общее количество ЛЖК в рубце повышалось (Шевелев Н.С., 1969).

На образование ЛЖК в преджелудках жвачных животных оказывает влияние соотношение белкового и небелкового азота. Содержание овец на рационе с соотношением белкового азота к небелковому 2:1 приводит к усилению образования в рубцовой жидкости ЛЖК, повышению поступления последних в кровь воротной вены и лимфу кишечного ствола, при этом молярное соотношение кислот сдвигается в сторону пропионовой и масляной кислот.

Скармливание баранам сенной муки и пропаренного овса приводит к увеличению в рубце содержания пропионой и уменьшению уксусной кислот.

Введение в рацион силоса значительно изменяет рубцовое пищеварение и заметно оказывает влияние на показатели обмена веществ. В опытах при кормлении коров силосом, наблюдалось увеличение содержания в рубцовой жидкости масляной кислоты и относительного уменьшения пропионовой (Курилов Н.В., Кроткова А.П., 1971).

Долманов И.И. и др. (1966) утверждают, что при содержании овец на рационе из соломы, кукурузного силоса и муки, у них отмечается понижение моторики рубца и уменьшается целлюлезолитическая активность.

Опыты на дойных коровах (Алексеев Н.П., 1963) показывают, что повышение общей питательности рациона путем введения кормов, богатых легкопереваримыми углеводами, сопровождается усилением образования ЛЖК, увеличением в рубцовой жидкости доли пропионовой кислоты и уменьшение процента масляной.

Опытами Соловьева A.M. (1968), при сравнении уровней ЛЖК в рубцовой жидкости овец, содержавшихся на сено-концентратном, силосно-сено-концентратном и сено-корнеплодо-концентратном рационах установлено, что наиболее высокая концентрация ЛЖК в рубце, отмечена через 3 часа после кормления, наблюдалось у овец получавших сахарную свеклу, и наиболее низкий уровень ЛЖК в рубце был при содержании овец на силосно-сено-концентратном рационе. Это связано с тем, что микрофлора рубца может быстро утилизировать легкопереваримые углеводы сахарной свеклы и превращать их в большом количестве в ЛЖК и часть энергии испС^зовать для переваривания других питательных веществ. При даче животным сена, богатого труднопереваримыми углеводами, или силоса, содержащего меньше углеводов, процессы расщепления кормов проходят более медленно, в результате чего уменьшается общее количество низкомолекулярных кислот.

В зависимости от состава рациона менялось и процентное отношение кислот брожения в рубцовой жидкости. Скармливание овцам сена с концентратами обусловливает увеличение молярных процентов пропионовой и масляной кислот и уменьшение уксусной кислоты. Это присходит в связи с тем, что в первые часы после кормления перевариваются в основном концентраты, при расщеплении которых и образуются пропионовая и масляная кислоты. Сено переваривается медленнее и поэтому содержание уксусной кислоты находится на более низком уровне.

Добавление к основному рациону свеклы оказывает значительное влияние на соотношение ЛЖК в рубце. Присутствие в корме легкопереваримых углеводов вызвало увеличение уксусной и пропионовой кислот и уменьшение масляной. Это связано с тем^ глюкоза в рубце у жвачных животных быстро расщепляются до триоз, которые затем трансформируются в уксусную и пропионовую кислоты.

Расщепление в рубце питательных веществ корма с образованием ЛЖК и глюкозы предполагает образование и молочной кислоты, как одного из основных промежуточных продуктов углеводного обмена в рубце жвачных. В обычных условиях кормления молочная кислота не присутствует в больших количествах в рубце, так как быстро превращается в летучие жирные кислоты, особенно в пропионовую и масляную кислоты (Waldo A., Shultz L., 1956; Montgomery M.J.,Baumgardt B.R.,1963).

Образование ЛЖК в преджелудках тесно связано со всасыванием их из рубца в кровь и лимфу. Поэтому об интенсивности процесса всасывания и превращения веществ рубцовой стенкой можно судить по изменению состава рубцового содержимого и состава притекающей и оттекающий от рубца крови и лимфы.

В опытах Полухина Ф.С. (1966) скармливание силосно-сено-концентратного рациона вызывало снижение уровня сахара в крови в первый час после приема животными корма. Механизм этого явления, по-видимому, заключается в том, что малые количества глюкозы образующиеся в рубце при данном рационе, полностью используются микроорганизмами для собственных нужд, в результате чего всасывания в кровь не происходит.

Однако в слизистой оболочке рубца активно протекают процессы всасывания продуктов метаболизма и кетогенеза, требующие для своего течения определенного количества глюкозы. В связи с этим отмечается уменьшение сахара в оттекающей от рубца крови.

Таким образом, из вышеизложенного следует, что рационы обогащенные сочными кормами, богатыми легкопереваримыми углеводами, благотворно сказывается на обменные процессы, улучшает использование питательных веществ и тем самым способствует повышению продуктивности сельскохозяйственных животных.

Вопрос о роли отдельных низкомолекулярных кислот в процессах метаболизма привлек внимание исследователей. В процессе образования и всасывания каждая летучая жирная кислота играет характерную роль.

Изучая влияние введения в рубец уксусной кислоты Joynson R.B. (1955) показал, что при этом в крови увеличивалось количество кетоновых тел, а уровень сахара почти не изменялся. Такой же эффект получился и при внутривенном введении уксусной кислоты.

В опытах Севастьяновой H.A. (1969) показано, что внутрирубцовое и внутривенное введение ацетата натрия, вызывает повышение уровня кетоновых тел и понижение количества сахара в венозной крови. Опыты Соловьева A.M. (1968) по введению в рубец ацетата натрия показали, что он очень хорошо всасывается в кровь и почти не используется стенкой рубца в качестве энергетического материала. Увеличение ацетата в рубцовой жидкости обусловило уменьшение молярного процента пропионовой и масляной кислот. Аналогичные результаты получили и Гжицкий С.З., Назаркевич З.П. (1966), показавшие, что ацетат снижает уровень масляной и пропионовой кислот. Увеличение концентрации уксусной кислоты в рубце вызывало повышение уровня кетоновых тел в оттекающий от рубца крови в основном за счет ее превращения в ацетон и ацетоуксусную кислоту. В исследованиях Соловьева A.M. (1968) отмечено, что энергетические затраты на всасывание и превращение нутриентов осуществлялось в стенке рубца в основном за счет глюкозы, количество которой в циркулирующей крови во время перфузии снизилось более, чем в три раза. Введение ацетата в кровь также обусловило появление в крови повышенного количества кетоновых тел, в результате превращения уксусной кислоты в ацетон и ацетоуксусную кислоту, а последних в бетаоксимасляную. Этот опыфоказал, что энергетические затраты связанные с процессами транспорта и обмена в слизистой оболочке рубца

26 покрываются не только путем использования уксусной кислоты, но и за счет глюкозы, образовавшейся в процессе глюкогенеза из ЛЖК, так как во время опыта количество ЛЖК в крови уменьшилось незначительно, а содержание глюкозы резко снизилось.

Введение в рубец пропионата вызывает снижение уровня уксусной и масляной кислот. Увеличение всасывания прпионовой кислоты тесно связано с уменьшением кетоновых тел и повышением концентрации сахара в оттекающей от рубца крови. Эти процессы обусловлены обменом пропионата в слизистой оболочке рубца. Всасываясь, пропионат активизируется коэнзимом А и превращается в пропионил-КоА, который с присоединением молекулы С02 преобразуется в сукцинат, последний же через цикл трикарбоновых кислот обусловливает образование глюкозы и одновременно части кетоновых тел. Полученные данные (Roafat М.А., Verbeke R.,1963) подтверждают, что обмен пропионата идет только через сукцинат.

В опытах Соловьева А.М. (1968) показан процесс глюкогенеза из пропионата после введения его в рубец. Увеличение уровня сахара и уменьшение кетоновых тел при внутрирубцовом введении пропионата наблюдали и другие авторы.

Johnson R.B. (1955), Annison E.F. et al. (1963) показали, что пропионат, введенный в рубец, обладает способностью увеличивать концентрацию глюкозы в крови и понижать уровень кетоновых тел.

Курилов Н.В.(1971) установил, что при введении 1 Моля пропионата натрия в рубец, отмечается заметное уменьшение количества кетоновых тел и увеличение сахара в оттекающей от рубца крови. В опытах Емельянова А. М. (1966) также отмечалось выраженное увеличение сахара и уменьшение ацетоновых тел в крови, после введения в рубец пропионовой кислоты.

Введение пропионата в кровь и влияние его на углеводный обмен в организме жвачных животных изучалось как на интактных животных путем инъекций пропионата в яремную вену, так и методом перфузии с последующим анализом проб крови, взятых из этого сосуда.

Так Jonhson R.B. (1955) установил, что пропионовая кислота, введенная внутривенно вызывает повышение в крови уровня сахара и снижение кетоновых тел. Такое же действие пропионата наблюдали в своих опытах и Курилов Н.В. и Кроткова А.П. (1971).

Известно, что введение пропионовой кислоты увеличивает концентрацию глюкозы, но это увеличение гораздо ниже, чем после инъекций масляной кислоты. Превращение пропионата в глюкозу в этих экспериментах, по-видимому, идет не в стенке пищеварительного тракта, а в печени, в результате чего в крови и появляется повышенное содержание глюкозы.

Это предположение получило подтверждение в опытах Соловьева A.M. (1968), где показано, что превращение пропионата идет, по-видимому, иным путем, так как при введении его в циркулирующую кровь во время пер—фузии, не наблюдалось образования глюкозы, а снижался уровень ЛЖК и кетоновых тел.

При введении бутирата в рубец резко увеличивается количество масляной кислоты и уменьшается уровень уксусной и пропионовой кислот в его содержимом. Увеличение общей концентрации ЛЖК в рубце, главным образом идет за счет масляной кислоты, обусловливающей их интенсивное всасывание в кровь. В процессе транспорта масляная кислота

28 подвергается различным превращениям, в результате которых в крови появляется большое количество кетоновых тел и понижается уровень сахара. Этот механизм превращения можно представить следующей схемой: п - бутират - ацетоацетат - ацетон - пировиноградная кислота. Последняя обратным гликолитическим путем превращается в глюкозу. Усиленное образование кетоновых тел и глюкогенез после введения в рубец бутирата наблюдали многие авторы. >

Емельянов A.M. (1966); Курилов Н.В., Кроткова А.П. (1971) установили, что бутират введенный в просвет рубца, приводит к заметному увеличению сахара и ацетоновых тел в крови оттекающей от рубца. Несомненным подтверждением кетогенеза и глюкогенеза из бутиратов явились изменения обменных процессов обусловленные введением их в кровь и рубец. Введение бутирата в кровь вызывает некоторое уменьшение ЛЖК в крови и повышает образование кетоновых тел и сахара. Такое уменьшение ЛЖК в крови указывает на то, что бутират непосредственно в руменоцитах превращается в ацетоновые тела и глюкозу

1.3. Строение стенки рубца. Механизм поглощения питательных веществ и их трансформация руменоцитами слизистой оболочки

Стенка рубца состоит из трех оболочек: слизистой, мышечной и серозной. Наружный слой стенки рубца представлен серозной оболочкой. Средний (мышечная оболочка) составляют мышцы, расположенные в разных направлениях, что обеспечивает мощную моторику рубца. Внутренний слой стенки рубца представлен слизистой оболочкой. Доля слизистой оболочки в общей массе органа у овец составляет 51-75% (Sinclair I.H., Kunkel Н.О.,1959), а по весу 0,6 кг. (Jacson H.D. et al.,1964).

При изучении возрастной морфологии стенки рубца ягнят Севастьяновой H.A. и Столяровой А.Г. (1969) отмечены значительные изменения эпителиального слоя, наблюдавшиеся, в основном за период с первого дня рождения до 17-25 дневного возраста. Рубец новорожденного ягненка выстлан многослойным кубическим эпителием, поверхность которого отличается рыхлым расположением клеток и поэтому недостаточно защищен от механических воздействий. Размер эпителия ягнят в удва раза превышает его у взрослых овец и состоит из 20-25 клеточных слоев, достигая толщины 500-600 микрон. Однако эпителиальный слой уплотняется довольно быстро по мере роста животного. Начиная с второго дня жизни, клетки поверхностных слоев располагаются более компактно. С нарастанием уплотнения и компактного расположения эпителиальных клеток отмечается постепенное истоныпение, уменьшение толщины слизистой оболочки. Что становиться хорошо заметным, начиная с 12-дневного возраста. Одновременно увеличивается складчатость слизистой. В возрасте 17 дней слизистый покров значительно истончен, приближен к нормальным размерам взрослого животного и представлен в виде узкого многослойного плоского эпителия. В возрасте 25 дней, в отличие от предыдущих сроков, процесс ороговения поверхностных слоев клеток эпителия более выражен и уже наблюдается явление десквамации.

Полная морфологическая и физиологическая стабилизация функций пищеварительного тракта овец, характерная для взрослых животных, наступает к 7-8 месячному возрасту (Кожебеков З.К.,1956; Базанова Н.У., Прокудин A.B., 1963; Свидинский A.A., 1997).

У взрослых животных слизистая оболочка рубца выстлана многослойным плоским ороговевающим эпителием, толщина которого может достигать 0,05 мм. Количество слоев эпителиальных клеток варьирует от 15 до 20. По данным Туревского A.A. (1964) эпителий слизистой оболочки рубца состоит из двух слоев клеток производящего и защитного; кроме этого автору удалось выделить и третий промежуточный слой клеток. Наличие этих клеток не было постоянным и автор предположил, что при посторонних воздействиях набухание клеток вызывает закрытие межклеточных пространств, выполняя роль одного из механизмов, регулирующих поступление в организм питательных веществ через межклеточные пространства. Поверхностные клетки эпителия плоские и подвергаются ороговению.

В литературе существуют две точки зрения на происхождение эпителия слизистой оболочки преджелудков. Согласно одной (Немилов A.B., 1936) слизистая рассматривается как образование кожного типа, произошедшего из эпителия закладки ротовой полости. Сторонники этой теории считают, что слизистая оболочка преджелудков выстлана плоским многослойным ороговевающим эпителием кожного типа, состоящего из трех слоев: рогового, блестящего и цилиндрического, причем блестящий слой может отсутствовать. Сторонники другой точки зрения рассматривают эпителий преджелудков как образование эндодермального происхождения. Работы Макиной З.Н. (1952) и Лазаренко Ф.М. (1959) подтвердили отличие слизистой оболочки преджелудков жвачных животных от эпителия кожного типа. В связи с установлением всасывательной функции слизистой рубца было получено еще одно доказательство, что в сравнении с эпидермисом эпителий преджелудков имеет очень тонкий слой ороговевших клеток, отсутствие блестящего слоя и жировой защиты предохраняющей от проникновения воды. Эти данные подтвердили Ильин П.А. (1964) и Туревский A.A. (1964) показав на отсутствие глубокого ороговения эпителия преджелудков. Доказано, что всасывание воды и растворенных в ней питательных веществ в желудочно-кишечном тракте в основном зависит от строения его стенки, степени ее васкуляризации и площади соприкосновения с пищевой массой (Michel G., 1978).

31

Исследуя гистологическую структуру эпителия рубца у овец Barcroft I., (1943); McAnally R.A. (1944); Phillipson A.T. (1944) установили, что слой ороговевших клеток в рубце очень тонкий по сравнению с эпидермисом и не превышает толщины 3-4 клеток, блестящий слой отсутствует, а зернистый не всегда обнаруживается. Эпителий преджелудков полностью не ороговевает, имея участки лишенные плоских клеток. Эти данные подтвердились исследованиями Henrikson R., et al., (1961) на преджелудках крупного рогатого скота. Толщина эпителия в преджелудках в 5-8 раз меньше, чем в пищеводе, где всасывание незначительно.

Предложена следующая терминология для слоев слизистой оболочки преджелудков: роговой, зернистый, шиповатый и базальный (Рис.1). Туревский A.A. (1964) выделяет в биоптических пробах ткани два слоя: защитный и производящий. Производящий слой состоит из метаболичеси' активных клеток, прочно связанных друг с другом десмосомами, а защитный слой из отмирающих клеток, заполненных фибриллярным белком кератином (Албертс А. и др., 1987).

Защитный (роговой) слой эпителия рубца жвачных состоит из 3-5 р!дов плоских клеток, имеющих полигональную форму и четко выраженные границы, у крупного рогатого скота веретенообразные, а у овец и коз более круглые. Клетки рогового слоя слизистой оболочки преджелудков имеют характерную форму благодаря цитоплазматическим выступам (Scott А.,1973; Schnorr В., et al.,1967). Размеры клеток рогового слоя достигают 811 мм (Gardner К., et al., 1971). Межклеточные пространства отчетливо видны (Шеянова Т.М.,1980; Linde В.,Sperber 1.Д959; Hyden S.,1965). В клетках рогового слоя выросты и складки цитоплазмы покрыты аморфными пленками, состоящими из мельчайших чешуек (Lavker et al., 1969). За счет складок увеличивается всасывательная поверхность эпителия рубца (подобно кишечным микроворсинкам) (Tamate Н.,1971; Tamate Н., et al.,1971;1979). ч • V •

32 \ ' Поверхностные клетки рогового слоя отторгаются как целыми пластами, так и отдельными элементами. Клетки этого слоя обладают характерной особенностью - набуханием, выраженным не только увеличением их объема, но и изменением химических свойств (Туревский А.А.1964). При увеличении объема клеток происходит сужение межклеточных щелей, что, по мнению автора, является ответной защитной реакцией на воздействие неблагоприятных факторов.

Havser Н. (1929) исследовал структуру верхних слоев эпителия преджелудков крупного рогатого скота, овец и коз и показал, что клетки подвержены набуханию, которое, по его мнению, происходит в две фазы. Первичное набухание имеет место в зоне между шиповатым и роговым слоями, а вторичное в поверхностных клетках эпителия. Их разделяет зона плоских ороговевших клеток.

Производящий слой эпителия состоит из одного ряда базальных клеток, расположенных на базальной мембране и 1-5 рядов шиповатых клеток. Однако в местах выпячивания собственного соединительного слоя слизистой оболочки (Stratum proprium) наблюдается отсутствие шиповатых клеток.

Базальный слой состоит из высоких призматических клеток, которые могут вклиниваться апикальными полюсами в вышележащий шиповатый слой клеток. Границы соседних клеток четко обозначены, хорошо просматриваются широкие межклеточные щели. Ядра крупные, овальные, ядерная мембрана извилиста (Туревский A.A. 1964). Клетки этого слоя расположены на базальной мембране толщиной 30-50 нм отделенной от них светлым пространством до 20 нм (Tamate Н., Shiomura V.,1979). В клетках базального слоя выявлено множество пиноцитотических пузырьков (Шеянова Т.М.,1980; Rodolfo V.E.,1972). В базальном слое Steven D.N., Marchall AV. (1972) между эпителиальными клетками обнаружили отросчатые мононуклеарные клетки, напоминающие

33 : лейкоциты. Много митохондрий особенно в надъядерной зоне, ориентированы вдоль оси клеток (Hyden S. et al., 1965). Между митохондриями расположено очень много свободных рибосом (Lavker R. et al., 1969). Параллельно клеточной мембране иногда располагаются маленькие пучки микрофиламентов (Steven D.H., Marchall A.B., 1972).

Дистальные концы базальных клеток довольно часто образуют большое количество пальцеобразных отростков длиной около 0,1 мкм. В базальном слое (Schnorr В. et al., 1967) обнаружено значительное число десмосом между базальными клетками, что, по мнению авторов, придает большую целостность всей структуре. В базальном слое обмен между клетками и просветом капилляров осуществляется посредством диффузии и пиноцитоза. По мнению Rodolfo V.E. (1972) на этом уровне осуществляется обмен жирных кислот.

Над базальными клетками находится несколько слоев крупных шиповатых клеток. Такое название они получили благодаря своему строению: их многочисленные десмосомы с отходящими от них пучками кератиновых волокон (тонофиламентами) выглядят как шипы на поверхности клеток (Албертс А. и др., 1987). Шиповатый слой образован крупными полигональными клетками. Ядра крупные, как и в базальном слое. Обращают на себя внимание широкие межклеточные пространства, достигающие ширины 0,2мкм. Клетки контактируют между собой посредством пальцеобразных выростов (Поликар А., 1962).

Разветвленные цитоплазматические отростки клеток при помощи десмосом соединяются с подобными отростками соседних клеток. Dobson et al., (1961) и Туревский A.A. (1964) связывают функциональную активность клеток производящей части эпителия с наличием большого количества митохондрий, сконцентрированных по данным Linde В.,

Рис. 1 Расположение клеточных слоев эпителия рубца жвачных 1. Просвет рубца 2. Роговой слой 3. Зернистый слой 4. Шиповатый слой $. Базальный слой 6. Базальная мембрана 7. Капилляр 8. Соединительная ткань 9. Мышечный слой 10. Зона фильтрации бактерий 11. Зона селективного всасывания 12. Зона формирования кератинизации 13. Зона наиболее интенсивного всасывания 14. Артериола (по Стивену и Маршалу, 1970)

35

Sperber I. (1959) в апикальной части клеток, куда поступают продукты рубцоаого метаболизма раньше всего (Ленинджер А., 1966; Milner 1,1976).

Зернистый слой расположен параллельно поверхности просвета, с незначительными межклеточными пространствами. По мнению Rodolfo V.E. (1972), клетки зернистого и рогового слоев эпителия участвуют в активном переносе растворенных в воде питательных веществ.

Слизистая оболочка рубца образует на поверхности множество выростов, которые у разных авторов имеют различные названия: сосочками -Лихачев А.И. (1956,1959,1962) - ворсинками, Фокин И.М. (1956) -листочками, а Вракин В.Ф. - папиллами. По форме эти выросты делятся на: бородавчатые, языкообразные, почковидные, пальцевидные, ланцетовидные, клиновидные и листовидные. Эти выросты занимают до 80-85% поверхности слизистой оболочки рубца.

Складки слизистой оболочки имеются, как между сосочками, так и на них. Однако количество и степень развития сосочков зависит от многих факторов. По данным Henrikson R. (1970), сосочки бывают в виде узелков высотой от 1 мм маятникообразных выпячиваний до 5 мм длины (Груздев В.П.,1998).

Установлено, что у телят, находившихся на молочной диете, рубец имеет меньший объем и менее развитые сосочки, чем у телят получавших грубые корма (Stalcup О.Т. et al.,1990).

Количество ворсинок и степень их развития влияет на продуктивность животных. Сосочки увеличивают площадь всасывания в 10-15 раз. Найдена значительная корреляция между длиной сосчков, плотностью их расположения и привесами. Вракин В.Ф. (1963) отмечает, что количество папилл на 1 см в различных отделах рубца неодинаково. В каудальных мешках, например, их больше, чем в преддверии рубца. Эти данные согласуются с исследованиями Туревского A.A. (1964), который также показал, что наибольшее количество сосочков располагается в показал, что наибольшее количество сосочков располагается в вентральном отделе рубца. Исходя их этих данных, можно предположить, что разные отделы рубца играют разную роль в процессе пищеварения и всасывания (Weyrach К., Shnorr В.,1979,1980; Frieling J.,1989).

Развитие сосочков зависит от наличия в рубце летучих жирных кислот. Туревский Á.A. (1964) и Capote F. et al.,(1963) считают, что не грубый корм сам по себе, а продукты его бактериального расщепления - летучие жирные кислоты являются специфическим стимулятором роста и развития сосочков рубца (Dirksen G. et al., 1984).

Строение степень развития и количество выростов слизистой имеет большое значение для процесса всасывания, а наличие большой контактной поверхности слизистой оболочки рубца и существование специальных образований - сосочков, напоминающих по своей функции ворсинки кишечника, свидетельствуют о большой резорбционной способности (Туревский А.А.,1964; Weyrach K.,Schorr В., 1980).

Эпителиальный слой слизистой оболочки рубца разделен с собственной пластинкой соединительной тканью базальной мембраной. Сеть капилляров вплотную подходит к эпителиальной ткани, но не проникает в нее.

Стенка кровеносных капилляров состоит из одного слоя эндотелиальных клеток, окруженных базальной мембраной Эндотелиальные клетки соединены между собой межклеточным веществом - капиллярным цементом. По данным Weyrach K.D. (1979) существуют два типа капилляров: одни крупные, просвет которых всегда открыт для тока крови, а другие мелкие и открываются лишь в момент функциональной активности органа (Поленов С.А.,1999).

При исследовании кровеносных капилляров было установлено, что внутренняя поверхность их покрыта микроворсинками. Края эндотелиальных клеток косо срезаны и налегают друг на друга.

37 ' - ' ' >

В норме стенка капилляра способна пропускать белки, являющи. ся крупномолекулярными веществами, низкомолекулярные белкд/^ и альбуминад(Груздев И.П., 1995).

Чолмерсом М.И. и др. (1980) было высказано предположение, что проницаемость капилляров зависит от эндотелиального цемента, который изменяется под воздействием физико-химических свойств крови. Поскольку сосуды выполняют функцию транспорта и обмена питательных веществ между кровью и тканями, насыщенность тканей капиллярной сетью определяет интенсивность работы органа. В лимфатических капиллярах базальная мембрана отсутствует. По данным Pulinger B.D., Florey H.W. (1935) при повышении тканевого давления просветы сосудов открываются, при этом внутри сосуда создается как бы вакуум. Все это способствует всасыванию веществ в лимфатические капилляры. В слизистой оболочке рубца до и после кормления отмечаются некоторые мор^фоструктурные изменения структуры тканевых элементов. Находясь в контакте с содержимым рубца, слизистая оболочка тонко реагирует на сдвиги рубцовой среды (Ruiz R.,1989; Lane M.A., Jesse B.W.,1997).

Причины, обуславливающие различные изменения в структуре слизистой оболочки рубца у жвачных животных до кормления и после, влияют на функциональное состояние клеток (Michel G., 1978). Впервые изучение влияния фактора кормления на слизистую оболочку рубца и определения морфологических изменений клеток в процессе всасывания были проведены исследования Ф.М. Лазаренко (1959), который показал, что эпителиальная ткань слизистой оболочки рубца представляет собой непрерывную цепь последовательно измененных элементов характерных именно для данного органа. Гистологические изменения структуры слизистой рубца под влиянием фактора кормления были описаны A.A. Туревским (1963; 1964), который установил зависимость между шириной

38 межклеточного пространства, набуханием клеток, размерами и количеством в них вакуолей в процессе проникновения питательных веществ через стенку рубца.

На высоте рубцового пищеварения цитоплазма клеток производящей части эпителия слизистой оболочки рубца, особенно зернистого слоя, сильно вакуолизируется, что указывает на интенсификацию всасывания (Минееца Т.И.,1974; Shiomura V., Tamate Н.,1980). Царяду с вакуолизацией эпителия через 2-3 часа после приема корма наступает деполимеризация мукополисахаридов, что является убедительным доказательством процессов активного всасывания (Иванова JI.И.,Виноградов В.В.,1962). Кроме деполимеризации мукополисахаридов происходит изменения и липоидного обмена. В цитоплазме появляется большое количество жировых капель, что также подтверждает интенсивное всасывание. Данные A.A. Туревского (1964) свидетельствуют, что жир в преджелудках может синтезироваться уже в цитоплазме руменоцитов в процессе всасывания. Takachi Sacata и Hideo Tamate (1974) показали, что до утреннего кормления или после голодания клетки защитного слоя слизистой рубца овец выглядит несколько набухшими, а межклеточные щели слабо выражены. Цитоплазма богата мелкими базофильными гранулами. В клетках базального слоя отмечены редкие вакуоли. Апикальная цитолема образует короткие выступы. Межклеточные щели сужены. После приема корма поверхностные клетки эпителия рубца оказываются сжатыми. Базофильные зерна замещаются множеством мелких жировых включений, цитоплазма клеток становиться пенистой за счет увеличения в ней вакуолей. На дистальных концах клеток базального слоя появляются большое количество язычковидных выростов. Межклеточные щели становятся шире. Однако не всегда вышеперечисленные факты, носяТ ярко выраженный характер. По-видимому, это связано с тем, что полость рубца никогда не бывает свободной от пищевых масс и интервалы между кормлениями у некоторых животных разные. Авторы показали, что проксимальная зона цитоплазмы клеток базального слоя является наиболее реактивной частью, где часто заметны структурные сдвиги (Tamate Hideo et al., 1971). Kauffold R., Piatkowski В. (1971) исследовали влияние кормления на тип образования, толщину слоя кератинизации клеток. Они установили, что слизистая оболочка рубца жвачных животных, , получавших только концентрированные и гранулированные корма, имела мало складок и была более плотной. Это первоначально было принято за гиперкератоз. Биохимические показатели менялись следующим образом: соотношение летучих жирных кислот: пропионат понижался до 1:1 или 1,7:1 по сравнению с их соотношением у животных получавших концентрированные грубые корма, где оно было 3,5:1. Слизистая оболочка по данным Capote F.A., Hentgens I.F. (1967), обладала более развитыми роговым и зернистым слоями. У животных получавших корма с высоким уровнем протеина наблюдали лучшее развитие соединительной ткани и кровеносных сосудов. Недостаток фосфатов в кормах, наоборот, тормозит их развитие.

При изменении нормальных процессов пищеварения в преджелудках, вызванных такими факторами как длительное голодание или выпадение фистул с потерей части рубцового содержимого, нарушения анаэробных условий, замечено появление набухших клеток замыкающих межклеточное пространство (Кребс Т., 1962). Это явление обусловлено тем, что при нарушении нормальных условий для жизнедеятельности микрофлоры происходит накопление неспецифических продуктов, всасывание которых оказывает негативное воздействие на физиологическое состояние животного. Клетки смыкаются и межклеточное пространство закрывает доступ токсичным продуктам.

40

Такая реакция эпителия свидетельствует о существовании своеобразного механизма, регулирующего процессы всасывания. Регуляция проницаемости может осуществляться и путем изменения активности ферментов, блокированием сульфгидрильных или других групп (КоштоянцХ.С.,1952). При нормальном течении рубцового пищеварения эти морфологические и биохимические изменения, как правило, отсутствуют. ,

Изучение структуры слизистой оболочки рубца и влияние фактора кормления показало, что эпителий преджелудков реагирует на состояние рубцового пищеварения определенными морфологическими сдвигами а факторами, которые вызывают изменения слизистой, следует считать всасывание и транспорт продуктов брожения в рубце (Ога§иНс1 У.,1986). Процесс всасывания в клетках слизистой рубца на электронно-микроскопическом уровне представлен в литературе довольно разрозненно, некоторые данные имеются лишь в отдельных не связанных: друг с другом работах. Изучение этого вопроса, особенно в динамике процесса пищеварения и всасывания даст возможность выяснить пути и механизм транспорта питательных веществ через слизистую оболочку преджелудков жвачных животных.

Роль различных участков ЖКТ в процессах всасывания далеко неоднозначна. Интенсивность течения резорбционных процессов зависит от особенностей морфологической структуры органов пищеварения, скорости эвакуации резорбируемых веществ, площади соприкосновения их со стенками пищеварительного тракта, состава питательных веществ и многих других факторов.

Исследования строения стенки рубца помогают нам понять его физиологическую роль в процессе всасывания. Впервые ТгаиШапп А.

РОССИ'ЛСКАЯ • •• • ч- : гоСУИ*»СТ8ЁННАЙ .„ . библиотека

Ч 41 V

1933) в опыте на козах доказал на примере атропина и пилокарпина принципиальную возможность всасывания через многослойный, плоский , орговевающий эпителий рубца, что послужило основанием для проведения ряда исследований по выяснению уровня всасывания различных соединений, в том числе летучих жирных кислот. Barcroft I. (1943), МсAnally R. (1944), Phillipson А. (1944) установили в остром опыте на овцах, что кровь оттекающая от рубца, содержит более высокую концентрацию летучих жирных кислот, чем кровь периферических сосудов.

Доказано, что большинство продуктов углеводного, липидного, азотистого и минерального обмена образующихся в результате рубцовой микробиальной ферментации, всасывается в рубце. Курилов Н.В., Кроткова А.П. (1971), Калачнюк Г.И. и др. (1985) установили, что слизистая оболочка рубца обладает амилазной и пептидазной активностью. Принимая во внимание факт неспособности слизистой рубца вырабатывать специальные пищеварительные ферменты, авторы полагают, что ферментативная активность, в частности амилазная и сахаразная связана с наличием микрофлоры. Таким образом, авторами показано, что в преджелудках жвачных, кроме полостного пищеварения имеет место контактный гидролиз питательных веществ, который является одним из этапов завершающим расщепление углеводов корма. Саяпин В.П. (1968) подчеркивает, что именно от характера расщепления веществ, при контактном пищеварении зависит степень всасывания продуктов микробиального гидролиза углеводов.

Эпителий рубца проницаем для ЛЖК в обоих направлениях, и низкомолекулярные кислоты из крови поступают в рубец при условии, если свободные от ЛЖК растворы вводить в промытый рубец (Dobson А., 1961), то есть если концентрация ЛЖК в крови превышает ее в рубце,

42 ■ ч что в нормальных условиях практически не встречается. Концентрация ЛЖК в рубце всегда больше чем в крови (Курилов Н.В., Щеголев С.Я., Коршунов В.Н., 1978; BeeverD., 1978).

Кормовая масса, покидающая преджелудки, содержит в 7-20 раз меньше кислот брожения по сравнению с их содержанием в рубце. Курилов Н.В. и др. (1971) установили, что 81%, образовавшихся в рубце кислот всасывается стенкой преджелудков. ■

Большая роль рубца во всасывании питательных веществ и особенно метаболитов углеводного обмена доказана тем, что после ферментации корма в рубце, в сычуг переходит очень малое количество летучих жирных кислот, значит основная часть образующихся летучих жирных кислот всасывается в предыдущих отделах, то есть в рубце. По данным Синещекова А.Д. и др. (1965) и Коншина В.Д. (1979) от 60 до 80% углеводов перевариваривается и всасывается в рубце.

Скорость всасывания ЛЖК повышается с повышением молекулярного веса кислот (Danielli G. et al.,1964). В.Ф. Вракин (1960) и Ю.В. Кононов (1968) в исследованиях на изолированном участке рубца установили, что скорость всасывания короткоцепочечных кислот зависит от их концентрации в рубце. По их данным, растворы с низкой концентрацией всасывались сильнее, чем растворы с высокой. Но абсолютное количество кислот все же больше всасывалось из растворов более высокой концентрации, хотя процент всасывания был ниже по сравнению с низкими концентрациями. Не было отмечено существенной разницы в интенсивности всасывания уксусной и пропионовой кислот. Их колебания не превышали 10%. Несколько интенсивнее всасывался слабый раствор масляной кислоты по сравнению со слабыми растворами уксусной и пропионовой кислот. Основные ЛЖК всасывались через 5 часов до 82-96% (Щеголев С.Я., Коршунов В.Н., Курилов Н.В., 1975).

С помощью С14-ацетата и бутирата было установлено, что при введении в рубец KCl или ионообменной смолы, скорость всасывания ацетата составляла 26,9 и 1,8 мМ/час , скорость всасывания бутирата - 24,0 и 19,7 мМ/час. соответственно (Ward G. Et al.,1976). Pfander W. и Phillipson А. (1953) изучали всасывание ЛЖК в условиях, близких in vivo. Смеси уксусной, пропионовой и масляных кислот в различных соотношениях, при контролируемом pH, вводили по каплям в рубец овцы со скоростью обеспечивающей физиологическую стабильность. При этих условиях, скорость введения ЛЖК в рубец отражала скорость их всасывания из рубца.

Очень интересным наблюдением было обнаружение в рубце хлорида и бикарбоната при введении в рубец водных растворов натриевых солей ЛЖК (Masson М., Phillipsjn А., 1951). Была показана линейная зависимость между убылью ацетата и приростом бикарбоната, причем всасывание двух молекул ацетата сопровождалось поступлением в рубец одной молекулы бикарбоната. Это наблюдение иллюстрирует тесную интеграцию процессов переноса через эпителий рубца.

В серии исследований изолированного рубца Гжицкий С.З. и др. 1961;1963) установили и двустороннюю проницаемость стенки рубца для многих химических веществ, направленную на поддержание гомеостаза химического состава среды. В опытах на овцах Danielli I.F. et al. (1945) изучали всасывание натриевых солей уксусной, пропионовой и масляной кислот, введенных в рубец через фистулу. Авторы установили, что всасывание зависит от pH рубцовой жидкости. В обычных физиологических условиях содержимое рубца согласно наблюдениям большинства авторов имеет, кислую реакцию (5,5-6,5). По данным Wheeler W. (1980) самые низкие показатели pH обнаружены через 3-6 часов после приема корма.

44

БашеШ е1 а1. (1945), изучая механизм всасывания ЛЖК, показали, что при рН 6,4 в рубцовой жидкости овец присутствуют как анионы жирных кислот, так и недиссоциированые жирные кислоты, которые могут всасываться через стенку рубца. При рН 7,5 пропорции недиссоциированых жирных кислот уменьшаются, а при достижении рН 5,8 значительно увеличиваются. Таким образом, регулируя рН, авторы изучили отдельно всасывание свободных жирных кислот и их солей. При щелочном значении рН 7,5 быстрее всех всасывается ацетат, затем припионат и в последнюю очередь бутират. Если содержимое рубца кислой реакции рН 5,8 преимущественно имеются свободные летучие жирные кислоты. Скорость всасывания при этом быстро меняется: быстро исчезает бутират, затем пропионат и, наконец, ацетат. Авторы считают, что анионы кислот всасываются в водных растворах, а свободные кислоты проникают главным образом через мембраны эпителиальных клеток.

Определенное влияние на течение резорбционных процессов оказывает не только концентрация и объем вводимых веществ, но и рН среды и другие факторы (\Veeler \¥.,1980). При раздельном введении летучих жирных кислот при показателях рН 2,9 всасываются за 5 часов 90-95% всех основных кислот. По скорости всасывания кислоты располагаются следующим образом: масляная, пропионовая, уксусная. Из растворов смеси летучих жирных кислот (рН 2,9) они всасываются в той же последовательности и в тех же размерах, как и при раздельном введении.

Иная картина наблюдается при введении раствора смеси ЛЖК с рН 7,1, в этом случае кислоты всасываются вдвое меньше по сравнению с всасыванием их из раствора рН 2,9, но интенсивность всасывания отдельных кислот по отношению друг к другу остается прежней. Отмечено, что из растворов с низкой концентрацией вводимые вещества всасываются быстрее, но через 5 часов интенсивность всасывания уменьшается независимо от концентрации (Сивкова К., Русев М., 1979).

В опытах Курилова Н.В. и Кротковой А.П. (1971) при временном прекращении доступа слюны в рубец отмечалось резкое торможение моторики преджелудков и снижение всасывания ЛЖК в кровь. Одновременно наблюдалось понижение pH в рубце до 5,0-5,5 и увеличение в нем концентрации ЛЖК.

На процессы всасывания низкомолекулярных жирных кислот оказывают влияние многие другие факторы и, прежде всего, уровень ЛЖК в содержимом рубца (Rüssel J.B.,1998). Чем выше концентрация ЛЖК в рубце, тем значительнее повышение содержания их в оттекающей от рубца крови. Используя методику перфузии рубца, как одну из наиболее точных, Соловьев A.M. и др. (1968) показали, что ЛЖК всасывается из рубца в кровь прямопропорционально их образованию в рубце (Sutton I., Morant S.,1978). Danielli Т. et al. (1945), занимаясь вопросами всасывания из рубца пришли к заключению, что скорость исчезновения свободных летучих жирных кислот из рубца повышается с увеличением молекулярного веса этих кислот.

Всасывание ЛЖК зависит от скорости тока крови через рубец. Dobson А., Phillipson А. (1956) доказали, что приток крови к рубцу находится под влиянием концентрации водородных ионов содержимого рубца. Введение свободных летучих жирных кислот или снижение pH в присутствии летучих жирных кислот вызвало увеличение скорости оттекающей от рубца крови.

Всасывание замедляется при голодании. У голодной овцы отмечено при введении смеси ЛЖК быстрое всасывание масляной кислоты, как активизирующего звена в процессах обмена в стенке рубца, а уже в последующем всасывание и других жирных кислот (Armstrong D. et al.,1957; Garwacki S. et al.,1970).

При определении скорости образования и всасывания летучих жирных кислот методом перфузии установлено, что скорость образования уксусной, пропионовой и масляной кислот составляла соответственно 2,61; 1,16 и 0,89 г/ч, соотношение же количества этих кислот в венозной крови, оттекающей от рубца, составляло - 0,51; 0,26 и 0,28 г/ч (Соловьев A.M., 1967).

При перфузии рубца установлено, что всасывание низкомолекулярных жирных кислот из рубца происходит в тех же соотношениях, в которых они представлены в рубце (Курилрв Н.В. и др., 1971; Соловьев A.M. и др., 1971).

При использовании ангиостомии, а также катетеризации глубоколежащих сосудов представилась возможность исследования процессов всасывания и превращения продуктов углеводного обмена на уровне органа или системы органов в динамике пищеварения. Наивысшая концентрация летучих жирных кислот в рубцовом содержимом и крови воротной вены наблюдалась через 3 ч после кормления (Шевелев Н.С., Грушкин А.Г.,1999; 2000). В крови воротной вены доля уксусной кислоты составляла от 75 до 84% , пропионовой - от 11 до 21%, тогда как в крови сонной артерии доля уксусной кислоты достигала 96% в общем количестве ЛЖК (Annisjn E.F. et al.,1964).

С увеличением концентрации ЛЖК в рубцовом содержимом повышается их концентрация и в крови. Понижение или повышение рН рубцового содержимого оказывает значительное влияние на скорость всасывания метаболитов рубца. При понижении рН рубцового содержимого увеличивается скорость всасывания кислот, уменьшается количество уксусной, пропионовой и масляной кислот. Постоянство рН содержимого рубца довольно устойчиво при нормальном физиологическом состоянии животных и равно 5,6-7,5 (Курилов Н.В., 1971). Устойчивость рН в рубце в значительной степени обуславливается притоком щелочной слюны, а также быстрым всасыванием низкомолекулярных жирных кислот.

47

V- ' v

На скорость всасывания ЛЖК влияет и их соотношение в рубце. При раздельном введении их в рубец интенсивное всасывание ацетата происходит в присутствии бутирата, а всасывание бутирата увеличивается в присутствии пропионата и подавляется ацетатом.

Образование и всасывание низкомолекулярных жирных кислот находится под влиянием гормональной системы. При гипотериозе вызванном введением 6-метилтиоурацила, через 24-27 часов после кормления концентрация ЛЖК в артериальной крови увеличилась на 45%, а в крови воротной вены - на 46%. При введении адреналина в яремную вену овец в дозе 0,02 мг на 1 кг живой массы, после 24-27 часов голодной диеты, уровень низкомолекулярных кислот в артериальной крови поднялся с 5,3 до 7,2 мг% то есть на 46,4 % (Отава A.M., Скорохид В.И.,1992).

Ввиду того, что основная масса ЛЖК у жвачных животных образуется в рубце, откуда они всасываются в кровь, следует обратить внимание на роль рубцовой стенки в превращении уксусной кислоты. Рубцовая стенка способна метаболизировать лишь 5% ацетата, в то время как пропионат и бутират метаболизируются в более значительной степени - 7,5% и 27,5% соответственно. В рубцовой стенке ацетат может использоваться как для энергетических целей, так и для синтетических. При инкубации эпителия рубца овцы с 14С-ацетатом радиоактивный углерод обнаруживается в 14 СОг и различных фракциях липидов (Отава А.М, СкорохидВ.И.,1992; Seto Katsuo et al., 1972). Ацетат используется для синтеза гликогена, фосфолипидов, нейтральных жиров, холестерина и др. соединений, что указывает на важную роль рубцовой стенки в использовании продуктов рубцовой ферментации для синтетических целей (Отава А.М, СкорохидВ.И.,1992; Seto Katsuo et al., 1972).

При введении 14С-бутирата в книжку уже через 5-10 мин в левой желудочной вене обнаруживалось максимальная радиоактивность, причем

48

V . ■' бутират частично превращался в стенке книжки в уксусную кислоту и лактат.

Ацетат стенкой кишечника может использоваться и у др. видов животных. С помощью 2- 14 С-ацетата установлено, что у поросят ацетат используется для синтеза липидов и наиболее метаболически активными в этом плане является слизистая оболочка как толстого, так и тонкого отделов кишечника (Отава A.M., (^корохид В.И. 1992).

Данные по всасыванию в рубце аммиака (конечного продукта расщепления мочевины, аминокислот, пептидов и белков) впервые показал McDonald I. (1948). В кровь рубцовой вены поступает значительное количество аммиака, а в периферической крови обнаружены только следы его. По этим данным основная часть аммиака непосредственно из рубца всасывается в венозную кровь и поступает в печень. Некоторое количество всосавшегося аммиака возвращается в рубец в виде мочевины со слюной. В последующем была установлена тесная зависимость между изменениями концентрации аммиака в рубце и крови воротной вены (Cheng К., Wallace R.,1979). Концентрация аммиака в крови воротной вены возрастала, как криволинейная функция концентрации аммиака в рубце (Bauchat С. et al., 1980). Количество всасываемого азота в виде аммиака у овец за сутки может достигать 3-4 г (Lana R.P. et al.l998). Дальнейшие исследования, Lewis D. et al. (1957), проведенные на овцах с катетером портальной вены показали, что количество всасываемого аммиака может доходить до 14 г. за сутки (Курилов Н.В., Коршунов В.Н., Щеголев С.Я.,1978).

Скорость всасывания аммиака зависит от концентрации водородных ионов. Из щелочной среды всасывание происходит быстрее чем из кислой. По данным Hogan I.P. (1961) и Bloomfield R.A. et al. (1963) аммиак в ионной форме не абсорбируется клеточной мембраной, может диффундировать только его неионизированная молекула. Всасывание аммиака равно нулю при рН 4,5. С увеличением рН ионы NH4

49 превращаются в NH3 который может быстро всасываться. Показателем для величины всасывания служит не только уровень аммиака в рубце, а прежде всего концентрация недиссоциированных молекул аммиака.

Изменения концентрации азотистых веществ зависит от характера рациона и времени после кормления, например, при скармливании рациона богатого легкорасщепляемыми белками, концентрация аммиака понимается до наибольшей величины (через 2-4 часа после кормления), а затем падает (Karn-Vezuanch I. et al.,1981).

Кратность кормления животных также оказывает влияние на уровень образования аммиака в рубце. При удлинении промежутка между кормлениями количество аммиака в рубце нарастает (Michalowski Т.,1979).

Показано, что двукратное кормление сопровождается несколько большим увеличением аммиака в рубце, чем при трех и четырехкратном кормлении. Это можно связать с недостаточным снабжением энергией микрофлоры при больших перерывах в кормлении (Курилов Н.В., Кроткова А.П., 1971).

Результаты опытов Чалмерс М. И. и др. (1980) свидетельствовали о быстром прохождении аммиака через эпителий рубца в оттекающую от рубца венозную кровь. Bloomfeld R.A. (1963) предполагает, что молекулы аммиака способны более легко проникать через липидный слой слизистой рубца. Hogan I.P. (1969), считает, что ток воды через стенку рубца не оказывает никакого влияния на всасывание аммиака.

В настоящее время существует положение о превращении в стенке желудочно-кишечного тракта метаболитов углеводно-жирового происхождения (Попов Н.Ф.,1964; Солдатенков П.Ф., Емельянов А.М.Д964; Соловьев А.М.,1968; Schulz Z.,1968; Allen M.S.,1997).

Исходя из этого положения, стало известно, что в слизистой оболочке пищеварительного тракта

50 протекают процессы гликолиза, глюкогенеза, кетогенеза, переаминирования и др.

Исследованиями И.Г. Пупиным и М.И. Матейко (1964) установлено, что слизистая рубца способна использовать глюкозу и гликоген с образованием молочной кислоты, которая является конечным продуктом в цепи реакции по пути Эмбдена-Мейергофа. Дальнейшими исследованиями установлено, что глюкозо-1-фосфат, глюкозо-6-фосфат и фруктозо-6-фосфат преобразовываются по пентозному пути. Использование слизистой оболочкой рубца глюкозо-бфосфата сопровождается накоплением кетопентоз и седодешулозы — веществ, типичных для пентозного цикла расщепления гексоз.

Ford C.I. (1965) установил, что у овцы с живым весом 50 кг. из ЖКТ поступает в среднем 20г. глюкозы в сутки, тогда как потребность организма равна 180г. глюкозы в сутки. Автор считает, что 30-50% необходимой глюкозы образуется из пропионата, бутирата, лактата и пирувата, а остальная часть из белков.

Соловьев А.М. (1968), Емельянов A.M. (1969) при изучении влиянии ацетата на уровень сахара в крови показали, что ацетат, введенный в рубец, заметно снижает уровень сахара, а стенка рубца использует сахар из притекающей крови. В виду того, что основная масса ЛЖК образуется в рубце, откуда они всасываются в кровь необходимо указать на роль слизистой оболочки рубца в превращении летучих жирных кислот.

Эпителий рубца способен метаболизировать лишь 5% ацетата, в то время как пропионат и бутират метаболизируются в более значительной степени - 7,5% и 27,5% соответственно (Pennington R.I.,1952). В рубцовой стенке ацетат может использоваться как для энергетических целей, так и для синтетических. При инкубации эпителия рубца овцы с иС-ацетатом, радиоактивный углерод обнаруживается в 14СОг и различных фракциях липидов (Чернов К.П.,1968; Seto Katsuo et al.,1972). Ацетат используется

51 для синтеза гликогена, фосфолипидов, нейтральных жиров, холестерина и др. соединений, что указывает на важную роль слизистой рубца в использовании продуктов рубцовой ферментации для синтетических целей (Отава A.M., Скорохид В.И.,1992). Ennison E.F. et al. (1963), используя меченый углерод, показали, что наибольшей глюкогенной активностью по включению в глюкозу и гликоген обладает пропионат. При введении его в рубец наблюдалось увеличение сахара в крови (Соловьев А.М.,1968).

Kiddle P. et al. (1951) впервые показали, что концентрация бутирата в крови, оттекающей от рубца, была заметно меньше, чем можно было ожидать, исходя из снижения концентрации его в рубце. Это позволило предположить, что бутират используется стенкой рубца. Использование бутирата слизистой оболочкой рубца было доказано в дальнейших исследованиях Pennington R. et al. (1952).

Поскольку в нормальных условиях бутират всасывается с такой же скоростью, как и пропионат, но более низкая доля бутирата в крови воротной вены свидетельствует об интенсивном превращении этой кислоты в эпителии рубца.

В организме жвачных животных кетоновые тела образуются при распаде жирных кислот и некоторых аминокислот. При этом образуется ацетил-КоА, который конденсируется в ацето-ацетил-КоА. Последний при помощи фермента деацилазы расщепляется на ацетоуксусную кислоту и КоА. После отщепления СОг от ацетоуксусной кислоты образуется ацетон.

Низкомолекулярные жирные кислоты рубца оказывают непосредственное влияние на образование кетоновых тел.

Введение в рубец уксусной кислоты вызывает увеличение кетоновых тел в крови. Pennington R. I. (1962) обнаружил образование кетоновых тел из уксусной кислоты при инкубировании стенки рубца овцы. Емельянов A.M. (1966) показал, что при введении в рубец уксусной кислоты образование ацетоуксусной кислоты из уксусной происходит в слизистой оболочке рубца очень интенсивно. Главным источником образования кетоновых тел является масляная кислота. Pennington R. (1952), инкубируя ткань рубцовой стенки показал, что бутират усваивается эпителием рубца до 27,5% с образованием кетоновых тел.

Исследованиями Кусень С.И. (1963) показана важная роль слизистой оболочки в связывании и ^ преобразовании аммиака, поступающего из рубца. Надо отметить, что в слизистой рубца происходит превращение азотистых веществ. Так Кусень С.И., Пупин Н.Г. (1961) на основании определения содержания азотистых веществ в слизистой оболочке рубца пришли к выводу. Что в стенке рубца происходит интенсивное превращение аммиака с образованием мочевины или связь его с образованием амидного азота белков.

Подобные данные по превращению аммиака в мочевину в слизистой оболочке рубца были получены Кошаровым А.Н. (1967) и Tillman А. (1969), Lana R.P. et al. (1998).

Таким образом, из вышеизложенного следует, что Обогащенные сочными кормами богатыми легкопереваримыми углеводами благотворно сказывается на обменных процессах и улучшает использование питательных веществ тем самым, способствуя повышению продуктивности сельскохозяйственных животных.

АЩШ

Исходя из содержащихся в литературе^известно, что непосредственно в руменоцит^ах, параллельно процессу всасывания идет интенсивный обмен летучих жирных кислот и глюкозы. Необходимо подчеркнуть, что рубцовая стенка очень мало использует ацетат в качестве энергетического вещества, расходуя для этой цели в основном глюкозу. В связи с этим, обмен ацетата в стенке рубца, по-видимому, незначителен и направлен лишь в сторону образования кетоновых тел.

В отличие от ацетата, в руменоцитах происходит обмен пропионата. При больших концентрациях его со стороны слизистой оболочки образуется повышенное количество глюкозы, а при увеличении пропионата в крови -высших жирных кислот.

Можно считать установленным факт, что бутират в рубцовой стенке превращается в кетоновые тела и глюкозу, а также, что глюкоза всасывается и используется; рубцовой стенкой. При введении ее в рубце образуется повышенное количество молочной кислоты, а в крови увеличивается уровень кетоновых тел.

1.4. Существующие представления о транспорте питательных веществ в стенке рубца и его регуляции.

Транспорт питательных веществ из рубца в кровь и лимфу обеспечивается и регулируется слизистой оболочкой. По характеру переноса питательных веществ через стенку рубца различают несколько видов транспорта. В классических работах для характеристики механизма транспорта учитывалась главным образом физическая сторона этой проблемы (Versar В. et al., 1936).

К факторам, определяющим всасывание, относится пассивная диффузия и активный транспорт. В основе пассивной диффузии лежит тепловое движение молекул, и перенос веществ через мембрану происходит по градиенту концентрации. До недавнего времени этот путь в «клетку» рассматривался, как основной для большинства веществ. Быстрое проникновение через клеточную мембрану воды и малых молекул возможно, по-видимому, лишь при наличии в мембране небольших пор, заполненных жидкостью (Lindemann S.,1962; Smyth D., Wright G.,1966; Solomon A., 1968). Финеан Д. (1970) предполагает существование в мембранах пор или канальцев, выстланных белком, через которые

54 осуществляется поступление веществ в клетку путем диффузии через водную или липидную фазу мембран. Известно, что липо-растворимость веществ во многих случаях коррелирует со скоростью проникновения в клетку. В настоящее время предполагают, что большинство веществ транспортируется через поры липидного слоя мембран, заполненных водой. Свободные жирные кислоты всасываются двумя путями: некоторая

часть их всасывается через поры наполненные водой, но основное

1 ;. количество жирных кислот, по данным Danielli J.F. et al. (1945), проходят через жировые мембраны эпителиоцитов.

Однако для полноты картины всасывания необходимо обсудить и химическую сторону этого процесса, изложенную в литературных источниках, так как вопрос о механизмах переноса летучих жирных кислот, как основных рубцовых метаболитов через эпителий преджелудков до сих пор остается открытым. Общеизвестна тесная корреляция между концентрациями ЛЖК в рубцовой жидкости и крови. Считается, что решающим факторов в этом процессе служит высокое напряжение углекислого газа в рубце (Frens A.M., 1968). Так же известно, что при диффузии через эпителий рубца низкомолекулярные жирные кислоты должны всасываться преимущественно в виде недиссоциированных кислот, чья транспортная способность, намного выше, чем у анионов (Powell D.W., 1979). В исследованиях Stevens С.Е., Stettier B.K. (1966) показано, что при сравнении действия трансэпителиальных химических и электрических градиентов аниона и свободной кислоты ткань рубца имеет непроницаемый барьер для пассивной диффузии анионов ацетата. На эти процессы оказывает активное влияние pH среды так, если при низких его значениях перенос ЛЖК через рубцовую стенку еще можно объяснить пассивной диффузией, то высокая скорость их всасывания при показателях pH 6,7-7,5, когда практически все кислоты должны быть диссоциированы, не объясняет этого. Поэтому целый ряд авторов рассматривает транспорт летучих жирных кислот, как активный процесс (Вебер А.Э. и др., 1984; Diernes L et al.,1992; Gabel G. et al.,1988; OshioS.,Tahata J.,1984; Thorlacius S.O., Lodge G.A.,1973). При нейтральном значении pH показано, что исчезновение двух эквивалентов ЛЖК связано с появлением одного эквивалента бикарбоната внутри рубца (Masson V.J., Phillipson А.Т.,1951). В дальнейшем пришли к выводу, что половина ацетата транспортируется через слизистую оболочку рубца как анион, а другая - в виде свободной кислоты (Ash R.W., Dobson А., 1963).

При исследовании всасывания ЛЖК из искусственных растворов установили, что количество исчезнувших из полости рубца низкомолекулярных жирных кислот в эквивалентном выражении равно сумме всосавшихся катионов и рециркулированных анионов, что указывает на их диссоциированное состояние (Вебер Э.А.,1984; Gabel G.,et al.,1988). Stevens C.E. и Stettier B.K. (1966) установили, что мембрана обращенная к полости рубца, проницаема лишь для аниона^ а мембрана, обращенная внутрь для недиссоциированной кислоты.

Большое физиологическое значение придается транспорту бикарбонатов со стороны эпителия, что обусловлено высоким их уровнем в крови жвачных животных. Согласно предположению Н.Е.Качанова (1982) одна часть анионов бикарбоната вместе с катионами натрия и калия переходит в кровь и поддерживает щелочной резерв организма, при условии, что их избыток выводится с калием через почки. А другая часть бикарбоната возвращается в полость рубца в обмен на анионы летучих жирных кислот с помощью бикарбонат зависимой АТФ-азы, что подтверждается наличием в обкладочных клетках и стенках кровеносных капилляров рубца высокой активности карбоангидразы (Galfi Р. et al.,1988; Parsons D.S., 1973). По мнению ряда авторов (Вебер Э.А.,1984; Oshio S., Tahata J.,1984), летучие жирные кислоты увлекаются потоком растворов из полости рубца в кровь, а фосфаты увеличивают проницаемость поверхносной части эпителия рубца, состоящей из бислойных фосфолипидов. К настоящему времени остались невыясненными процессы и действия механизма всасывания летучих жирных кислот в зависимости от характера и времени кормления, а также и от состояния внутреннего гомеостаза у жвачных животных (Малышев A.B.,1995).

Другой вид транспорта включает в себя перенос веществ через мембрану, благодаря соединению его с химическими комдлексами мембраны и не требует затраты энергии. Согласно этой концепции молекула субстрата прикрепляется к молекуле переносчика, которая либо диффундирует сквозь мембрану, либо поворачивается внутри липидной фазы и обеспечивает перенос молекулы субстрата с наружной поверхности на внутреннюю.

В отличие от пассивного транспорта активный транспорт может проходить и против градиента концентрации, то есть наблюдается проникновение веществ, концентрация которых в среде ниже, чем в клетке. Активно транспортируются из просвета желудочно-кишечного тракта многие сахара, аминокислоты, нуклеотиды и другие вещества, транспорт которых требует затрат энергии в отличие от пассивного (Yano F. et al., 1978).

В работах Crane R. (1965) и Schultz L. (1965) и Gabel Gotthold et al. (1999) отмечен перенос Сахаров, аминокислот и других веществ за счет использования градиента в распределении между клеткой и средой ионов натрия. На апикальном конце клетки в мембране локализованы переносчики, которые работают одновременно на натрий и сахар или на натрий и аминокислоту. Их сродство к сахару обеспечивается только при соединении переносчика с натрием, с одной стороны и натрий не транспортируется в отсутствии сахара, то есть для натрия речь идет о переносчиковом транспорте по градиенту концентрации из среды в клетку, а не об активном транспорте натрия. Следовательно, натрий входит в

57 \ клетку по градиенту и одновременно обеспечивает поступление внутрь сахара против градиента концентрации. Механизм транспорта натрия из клетки и сопряженный с ним транспорт калия в клетку сопровождается распадом АТФ, причем АТФ-азной активностью обладает вероятно, какой-то липопротеиновый комплекс мембраны, связанный одновременно с переносом на него фосфора от АТФ и ионов натрия (Tudon I., Ahmed К. ,1964). у ,

Необходимо также отметить явление пиноцитоза, как один из видов транспорта веществ в клетку. Механически это выглядит, как захват клеткой микро- и субмикроскопических капелек растворов. Это явление было описано Lewis W.H. в 1931 году. Дальнейшими исследованиями Хантера (1960), использовавшего методы меченых атомов показано, что путем пиноцитоза попадать в клетку может не только вода, но и растворы питательных веществ. На возможность проникновения в клетку путем пиноцитоза указывает также Bennet H.S. (1963). Процесс пиноцитоза начинается с адсорбции вещества на поверхности клетки, приводящий к впячиванию мембраны. А затем полному отшнуровыванию внутрь клетки вакуоли окруженной мембраной (везикуле). Многие исследователи склонны рассматривать пиноцитоз, как универсальный механизм для поглощения клеткой крупномолекулярных веществ (Никольский Н.Н.,1967).

Считается, что всасывание таких веществ, как жиры, коллоидные растворы белка, без предварительного их расщепления происходит с помощью пиноцитоза (Чукчиев И.Н.,1965; Шеянова Т.М.,1980).

Механизм резорбции жира зависит от цитоплазматической вакуолярной системы клеток. Путь проникновения липидов внутрь клеток и роль в этом процессе микропиноцитоза описан в работах Яременко Е.Е (1968) и Palay , Karlin (1959).

58 \ Пиноцитоз индуцируется положительно зараженными веществами, в том числе и белками. По данным Трошина A.C. (1964) важная роль в процессе пиноцитоза отводится цитоплазматической мембране. Исходя из новых данных, пересмотрены теории мембранной и сорбционно-клеточной проницаемости, которые касаются, как кинетики поступления, так и механизмов распределения веществ между клеткой и средой.

Несмотря на большое число работ, посвященных изучению всасывания, истинный механизм и пути транспорта питательных веществ через слизистую оболочку рубца остается неясными.

Предположительно существуют два основных пути транспорта нутриентов через многослойный ороговевающий рубцовый эпителий. Первый (трансцеллюлярный, эндоцеллюлярный) представлен участием эпителиальных клеток и системой межклеточных контактов. Второй (парацеллюлярный) гипотетически предполагает перенос веществ по межклеточным пространствам эпителия, минуя зоны плотных контактов. Кроме транспорта питательных веществ из просвета рубца во внутреннюю среду, через эпителий идет довольно мощный поток и в обратном направлении (Алиев A.A., 1998).

Рассматривая эндоцеллюлярный транспорт веществ из просвета желудочно-кишечного тракта во внутреннюю среду организма, необходимо выделить несколько принципиально разных механизмов: трансмембранный перенос и везикулярный транспорт. Существует ряд концепций, объясняющих механизм трансмембранной проницаемости. Различают активный транспорт, который в зависимости от источника энергии может быть первичным, вторичным или третичным: диффузию простую, облегченную, ограниченную, обменную, ультрафильтрацию, конвекцию и др. (Бандуренко Jl.H.,1984).

59 • \

Диффузия через слизистую оболочку рубца может происходить как из рубца в кровь, так и обратно. Направление и величина субстанций зависит от падения концентраций веществ.

Содержимое рубца жвачных по отношению к крови оказалось электрически отрицательным. На рубце овец установлена разница потенциалов от 16 до 29 mv. (Sellers A.F., Dobson А., 1960). Электрический потенциал благоприятствует всасыванию анионов и тормозит всасывание катионов. Практически имеет значение тот факт, что катионы могут только тогда всасываться, когда их концентрация в содержимом рубца значительно превышает уровень в крови. В то же время анионы могут всасываться как по- так и против градиента концентрации. Для недиссоциированных веществ мерилом служит только падение концентраций. Следовательно, транспорт веществ из крови в преджелудки не должен рассматриваться как особый, отличающийся от всасывания процесс (Hornicke Н., 1964).

Активный транспорт, будучи энергозависимым процессом, характеризуется способностью к переносу субстратов против электрохимического градиента концентрации. Полагают, что активный транспорт субстратов через апикальную мембрану эпителиоцитов сопряжен с транспортом натрия (Crane R.K.,1977). Рассматривают также возможность натрий независимого транспорта по типу облегченной диффузии или обменной диффузии, которая не требует затрат энергии (Bennett G.,1981). Особенностью активного транспорта, обменной и облегченной диффузии является необходимость участия специфических переносчиков или транспортеров (Fyssan Н.,1985). Помимо указанных механизмов трансмембранного транспорта рассматривают возможность и переноса через мембраны эпителиоцитов путем простой или ограниченной электродиффузии, а также по типу ультрафильтрации или конвекции с потоком воды. С помощью этих механизмов перенос веществ, как

60 : полагают, может осуществляться или непосредственно через липидно -бислойную плазматическую мембрану, если вещество липорастворимо, или через гидрофильные поры (Wartiovaara V., Collander Т., 1960). Вместе с тем, установлено, что величина мембранных пор не превышает 0,4-0,6 нм Это может заметно ограничивать возможность трансмембранного транспорта значительной части крупномолекулярных субстратов (Никольский Н.Н.Д977; Sjifert J. et al.,1977). Следует отметить, что представленные здесь механизмы трансмембранного транспорта, в большинстве своем являются гипотетическими и не имеют пока достаточно весомых доказательств, чтобы лечь в основу теории всасывания.

Что касается везикулярного механизма всасывания, то и здесь нет единой точки зрения о вкладе этого механизма в транспорт питательных веществ в рубце, хотя известно, что он является широко распространенным цито-физиологогическим транспортным механизмом в кишечнике (Лысиков Ю.А.,1985). В настоящее время везикулярный транспорт рассматривают, в основном, как канал для переноса макромолекул через эпителиоциты. Ряд исследователей считает, что везикулярный механизм всасывания характерен для млекопитающих в неонатальный период и прекращается или существенно уменьшается при переходе жвачных животных на дефинитивное питание.

В процессе регуляции пищеварения жвачных одно из видных мест принадлежит гормональной системе. Роль желез внутренней секреции в регуляции пищеварительных процессов хорошо изучена на моногастричных животных. Работ же посвященных выяснению влияния различных гормонов на обменные процессы в желудочно-кишечном тракте и его стенке жвачных довольно мало.

В исследованиях Соловьева A.M. (1968) проведено изучение углеводного обмена в стенке рубца жвачных после введения в кровь тироксина,

61 инсулина и гидрокортизона. Хорошо известно, что щитовидная железа оказывает огромное влияние на обмен веществ в организме жвачных. Она регулирует пищеварение, бродильные процессы в преджелудках и моторную деятельность (ПершинВ.А.,1959; Поляков В.Н.,1966).

Лубнин А.И. (1964) изучая обмен ЛЖК, ацетоновых тел и сахара в стенке желудочно-кишечного тракта у овец, в суточном ритме, при экспериментальном гипер- и гипотиреозе установил, что после скармливания овцам тиреоидина наблюдается усиление всасывания ЛЖК, уменьшение количества кетоновых тел и повышение уровня сахара в крови воротной вены.

Образование и всасывание низкомолекулярных жирных кислот находится под влиянием гормональной системы. По данным Цюпко В.В. и др. (1962) установлено, что концентрация летучих жирных кислот в крови под влиянием тироксина уменьшается, а при гипотериозе - увеличивается. Введением в организм тиреотропного гомона или тироксина в дозе 10-15 мг. В.А. Першин (1962) повышал у коз молочную продуктивность. Тироксин или йодированный белок повышает не только удой и жирность молока, но и влияет на состав микрофлоры в преджелудках и, следовательно, на образование и всасывание короткоцепочечных жирных кислот (Соловьев А.М.,1968). По данным Солдатенкова П.Ф. и Никодимова В.К. (1967) при гипотериозе, вызванном введением 6-метилтиоурацила, через сутки после кормления концентрация летучих жирных кислот в артериальной крови увеличилась на 45%, а в крови воротной вены на 46%.

Результаты исследования Соловьева А.М. (1968) по влиянию тироксина, на уровень летучих жирных кислот показали, что тироксин усиливает бродильные процессы в рубце, в результате которых возрастает общее количество ЛЖК в его содержимом. Наряду с этим, тироксин значительно улучшает всасывание ЛЖК из рубца и концентрация их в крови значительно повышается. По-видимому, тироксин одновременно способствует усилению процессов всасывания и глюкогенеза в слизистой оболочке рубца. При изучении метаболизма кетоновых тел и роли в этом процессе тироксина установлено, что тироксин в отличие от тиреоидина вызывает повышение концентрации ацетоновых тел в крови, что указывает на активные обменные процессы протекающие в руменоцитах в процессе i . ' У всасывания.

В регуляции обмена веществ жвачных большую роль играет инсулин, при помощи которого в основном и осуществляется обмен глюкозы. Инсулин оказывает так же, как и тироксин, влияние на бродильные процессы и интенсивность моторной деятельности рубца (Солдатенков П.Ф. и др., 1961; Куимов Д.К.1965). Эти авторы показали, что введение инсулина увеличивает количество ЛЖК и уменьшает концентрацию ацетоновых тел и сахара в крови воротной вены. Солдатенков П.Ф. и Сбродов Ф.М. (1965, 1966), Соловьев A.M. (1968), Holtenius К. et al. (1994) изучая влияние инъекции инсулина на обмен сахара и низкомолекулярных жирных кислот в стенке пищеварительного тракта, пришли к выводу, что с введением инсулина усиливается всасывание и увеличивается выделение в кровь летучих жирных кислот, повышаются окислительные процессы в трикарбоновом цикле.

Данные Соловьева A.M. (1968), по введению инсулина в кровь подтверждают это. Экспериментально доказано, что инсулин, обладает гипогликемическим действием, значительно снижая концентрацию сахара в крови. В результате этих процессов происходит уменьшение всасывания глюкозы из рубца и повышение ее уровня в слизистой оболочке. Не всосавшаяся глюкоза используется микрофлорой рубца и следствием этого является увеличение общего количества ЛЖК в рубце и усиленное всасывание его в кровь. С другой стороны известно, что инсулиновая

63 гипогликемия возбуждает парасимпатическую нервную систему, усиливающую всасывание низкомолекулярных жирных кислот и повышающих их уровень в крови (Томов Т.А.,1966).

Известно, что кетоновые тела являются нормальными промежуточными продуктами углеводного обмена, образующимися при окислении летучих жирных кислот, альдегидов и некоторых аминокислот, а также при синтезе жирных кислот. Так, по данным Куимова Д.К (1965) инсулин тормозит окисление жиров, уменьшает распад белков и повышает окисление углеводов. Результатом этих процессов является снижение уровня их в крови.

Изучая действие адреналина, Dobson A., Phillipson А. (1956) установили, что инъекция адреналина увеличивает кровоток в стенке рубца, вследствие чего увеличивается и скорость всасывания низкомолекулярных жирных кислот. Вводя адреналин в яремную вену овец в дозе 0,02 мг. сухого вещества на 1 кг. живого веса в растворе 1:1000, П.Ф. Солдатенков (1970) нашел, что при инъекции адреналина животным, голодавшим сутки, уровеньлетучих жирных кислот в артериальной крови увеличился на 36% , а в венозной на 46%. Емельяновым A.M. (1969) было высказано предположение, что аденокортикотропный гормон способствует превращению низкомолекулярных жирных кислот в высшие жирные и первой стадией этого процесса в стенке пищеварительного тракта является превращение ацетоуксусной кислоты в В-оксимасляную.

Корковая часть надпочечников, является одним из основных регуляторов обмена веществ в организме, так как ее гормоны действуют не только на обмен воды и электролитов, но и участвуют в регуляции углеводного и белкового обменов.

Установлено, что у подопытных лабораторных животных кортизон вызывает увеличение сахара в крови и отложение гликогена в печени, изменение белкового, жирового, солевого и водного обмена, понижение

64 концентрации водородных ионов в крови и некоторых других показателей углеводного обмена ( Поляков В.Н., 1966).

Результаты исследований Соловьева А.М. (1968), по введению гидрокортизона в кровь показали, что он оказывает значительное влияние на углеводный обмен в рубце овец. Под его действием возрастает количество ЛЖК в РЖ и увеличивается интенсивность их всасывания в кровь.

Гидрокортизон, также вызывает значительное увеличение в крови сахара. Это, по-видимому, объясняется усилением всасывания его из рубца, так как при интенсивных процессах расщепления корма увеличивается его образование в рубце, а также глюкогенезом в рубцовой стенке из других продуктов обмена. Под влиянием гидрокортизона обменные процессы в стенке рубца протекают очень активно. Об этом говорит тот факт, что образование кетоновых тел и появление их в циркулирующей крови не превышает нормальных физиологических границ.

Кроме вышеперечисленных, такие тканевые гормоны, как гистамин и серотонин обладают, соответственно, стимулирующим и ингибирующим действием на процессы всасывания в рубце. Гистамин, обладая высокой активностью, вызывает расширение капилляров в ЖКТ и увеличивает проницаемость их стенок. Механизм положительного ионотропного действия гистамина связан с повышением проницаемости мембран для ионов Са, а также с усиленным образованием цАМФ принимающего участие в формировании каналов переноса кальция (Вайсфельд И.Л. и др.,1981). Одновременно в этом процессе возбуждается мозговой слой надпочечников, выделяя адреналин, который в свою очередь влияет на углеводный и липвдный обмен, увеличивая потребление кислорода и НЭЖК. При этом интенсивно утилизируются жиры и углеводы.

65

В противоположность гистамину серотонин вызывает сокращение гладкой мускулатуры и сужает просветы кровеносных капилляров (Машковский Д.М. и др.,1977).

1.5. Значение ЛЖК для моногастричных животных.

Летучие жирные кислоты являются наиболее важными метаболитами анаэробной микрофлоры, необходимыми для осуществления нормальной физиологии желудочно-кишечного тракта моногастричных животных и человека. Согласно современным представлениям ЛЖК играют ведущую роль не только в росте и развитии преджелудков, но и слепой кишки. Они стимулируют обновление и дифференцировку эпителиоцитов и митотический индекс слизистой оболочки желудка (Sakata Т., 1986). ЛЖК оказывают влияние на процесс транспорта воды, электролитов и растворов (Binder H.I., Mehta P., 1989; Cummings J.H., 1981; Engclharolt W.V., Rechkemmer J., 1983; Sakata Т., 1986), участвуют в поддержании рН (Cummings J.H., 1984) и усилению кровотока (Dobson А., 1984; Kvietus P.R., Jrunger D.N., 1981), служат также основным источником энергии для эпителиальных клеток желудочно-кишечного тракта (Курилов Н.В., Кроткова А.П., 1971; Roediger W.E.W. et al., 1986), то есть являются трофическим фактором для ЖКТ. Есть данные о том, что выделение инсулина стимулируется непосредственно пропионатом.

В желудочно-кишечном тракте моногастричных животных и человека при участии микроорганизмов так же образуются низкомолекулярные метаболиты газы : - Н г , СО2 , СН4, NH3 ; монокарбоновые кислоты С 2 -С 6 - летучие жирные кислоты, янтарная и молочная кислота; аминокислоты ф-аланин, у-аминомасляная, глутаминовая и др.). Из них в количественном отношении преобладают ЛЖК, что объясняется низким содержанием кислорода в ЖКТ и небольшой глубиной окисления моносахаридов и других субстратов брожения органических соединений.

В организме человека ЛЖК образуются не только при различных типах брожения углеводов, но и при распаде гликопротеидов, белков, липидов и нуклеиновых кислот. Существенным источником исходных субстратов брожения у человека является и сам организм, а именно, десквамированные^ отмершие клетки эпителия и белки.

Образование ЛЖК в процессе пищеварения у человека известно уже давно, однако физиологический смысл их присутствия был неясен. Лишь сравнительно недавно было показано, что энергообеспечение эпителиоцитов осуществляется за счет именно этих метаболитов, а нарушение процесса взаимного обмена Сахаров и ЛЖК является одной из основных причин этиопатогенических факторов в развитии функциональных и воспалительных заболеваний (Дубинин A.B. и др., 1987).

В организме человека большая часть летучих жирных кислот (до 98%) утилизируется эпителием толстого кишечника, так что их содержание в портальной вене примерно в 500 раз, а в периферической крови в 1000 раз меньше, чем в содержимом кишечника (Дубинин A.B., 1987). Летучие жирные кислоты в значительной мере удовлетворяют энергетические потребности эпителиальных клеток. Они всасываются слизистой оболочкой в виде анионов и в форме нейтральных молекул, а затем утилизируются митохондриями эпителиоцитов в цикле трикарбоновых кислот. Снижение энергообеспечения эпителиальных клеток летучими жирными кислотами являются одной из причин патогенеза и иммунных заболеваний (Алиев A.A., 1997). Следует отметить, что в сравнении с уровнем всасывания ЛЖК, абсорбция других низкомолекулярных метаболитов значительно ниже. В частности, при определенных патологиях желудочно-кишечного тракта наблюдается повышенная проницаемость слизистой оболочки и рост уровня ЛЖК в крови делают возможным проникновение токсичных для человека метаболитов, таких как фенолы, аммиак и меркаптаны (Отава A.M., Скорохид В.И.,1992).

Низкомолекулярные метаболиты, особенно ЛЖК, а также лактат обладают заметным бактериостатическим эффектом. При нормальной концентрации они не только ингибируют рост патогенов, но и препятствуют их, адгезии к эпителию. Еще один эффект связан со способностью пропионата, бутирата, изобутирата и янтарной кислоты подавлять "метаболический взрыв" в нейтрофилах и их хемотаксис в ответ на формил-Мет-Лей-Фен, а также высвобождение лизоцима, что может играть роль в регуляции воспалительного ответа и защите анаэробных представителей микрофлоры от фагоцитоза. Эти функции ЛЖК еще более ярко выражены у жвачных, лошадей, зайцеобразных и других млекопитающих, питающихся растительными кормами.

Наряду с обеспечением энергетических потребностей организма ЛЖК выполняют и более тонкие регуляторные функции. Если уксусная кислота ответственна главным образом за поддержание энергетического статуса, то пропионовая играет важную роль местного регулятора микроциркуляции кровотока, управляя тонусом сфинктеров венул и артериол. В последнее время стали появляться данные, свидетельствующие о том, что пропионовая кислота каким-то образом регулирует секрецию и удержание воды через цАМФ-зависимые системы. Что касается масляной кислоты, то она является тканевым регулятором пролиферации и дифференцировки эпителиальных клеток. Выяснено, что бутират способен нормализовать метаболический статус опухолевых клеток. Также известно, что масляная кислота, являясь синергистером ГАМК, способна моделировать работу ГАМК-эргических • синапсов в центральной нервной системе. Дополнительный свет на способность ЛЖК поддерживать энергетику организма пролило обнаружение факта их участия в функционировании

68 цикла: свободные жирные кислоты - глюкоза (Дубинин А.В. и др., 1987; Минушкин О.Н.,Ардатская М.Д., 1999).

Приведенные данные показывают важную роль летучих жирных кислот в процессе метаболизма не только жвачных и моногастричных животных, но и человека. Адаптивные механизмы образования ЛЖК обеспечивают не только энергетические и пластические потребности организма, создавая оптимальные условия для жизнедеятельности симбиотической микрофлоры желудочно-кишечного тракта, но и другие более тонкие процессы, не относящиеся к области пищеварения. Слизистая оболочка ЖКТ является главным регуляторным барьером в процессе поступления летучих жирных кислот во внутреннюю среду организма животных и человека.

Заключение

Таким образом, приведенные выше данные свидетельствуют об активном процессе обмена веществ в слизистой оболочке рубца и ее важной биологической функции, осуществление которой связано с затратой значительного количества энергии. Очень важным источником последней у жвачных животных помимо углеводов являются летучие жирные кислоты, за счет окисления которых жвачные получают более 70% всей необходимой энергии. Утилизация 1 большого количества низкомолекулярных жирных кислот, всасываемых непосредственно из преджелудков - главная особенность тканевого обмена у жвачных животных.

Слизистая оболочка рубца активно участвует в процессе всасывания и образования новых веществ. Исследование строения эпителия рубца в суточной динамике представляет безусловный интерес в связи с большой \ активностью этого органа в процессе пищеварения. Транспорт и обмен продуктов метаболизма в слизистой оболочке рубца является сложным физиологическим процессом, активно влияющим на межуточный обмен в организме жвачных животных.

Всасывание и обмен летучих жирных кислот рубцовой стенкой являются сложными биологическими процессами, активно влияющими на промежуточный 4 обмен и морфоструктуру руменоцитов в организме жвачных животных.

Всасывание летучих жирных кислот находится в прямой зависимости от их образования в рубце, которое в свою очередь обусловлено приемом корма.

Установлено, что стенка рубца активно участвует в межуточном обмене веществ, оказывая на всасывающиеся через нее вещества определенное влияние. Так уксусная и масляная кислоты, проходя через руменоциты обуславливают образование кетоновых тел, в то время как пропионовая кислота таким эффектом не обладает. Основным веществом, из которого организм жвачных синтезирует глюкозу, является пропионовая кислота. А в связи с тем, что у жвачных через пищеварительный тракт мало всасывается глюкозы, роль пропионовой кислоты, как источника глюкозы, является очень важной.

Выяснено, что гормоны щитовидной и поджелудочной желез оказывают влияние на превращение углеводов в рубце жвачных.

Несмотря на важную практическую роль процессов абсорбции и транспорта Рубцовых метаболитов, в основном ЛЖК, данный вопрос изучен недостаточно и более полное освещение этой проблемы требует более высокого методологического подхода.

2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2Л. Условия проведения опытов и характеристика подопытных животных.

Для выполнения поставленных задач были проведены морфо-физиологические исследования на 6 овцах цигайской породы в возрасте с 3 до 4 лет живой массой 36-40 кг; 4 валухах породы ромни-марш, с 1 до 2 летнего возраста, породы ромни-марш, живой массой 50 кг и 6 быка^астр^т/^ черно-пестрой породы, в возрасте с 1Z до 18 месяцев, живой массой 350-500 кг. См. общую схему (Рис.2) Подопытные животные содержались в условиях вивария кафедры физиологии и биохимии животных МСХА, получали сено-концентратно-корнеплодный рацион, сбалансированный по общей питательности, сахаро-протеиновому отношению и минеральным элементам, согласно . детализированным нормам кормления (Калашников А.П., Клейменов Н.И., 1988). Кормление животных три раза в сутки, поение без ограничений. Состав рациона и его питательность представлена в таблицах 1, 2 и 3. Подопытным животным, в зависимости от цели опыта, предварительно были наложены фистулы рубца, «лодочки» на сонную артерию, катетеры на рубцовую и воротную вены (Рис.3) и желудочный лимфатический проток (Рис.4) (см. Алиев A.A., 1988), Контроль физиологического состояниия животных осуществлялся постоянно. Пробы рубцового содержимого, слизистой оболочки рубца, крови^ лимфы, слюны и мочи брали за 1 час до утреннего кормления, затем через 1, 3, 5 и 7 часов после приема животными корма.

73

Рис. 3 Воротная система печени жвачных. — печень. II — селезенка. III — дорсальный мешок рубца. 111' — вентральный мешок рубца. IV — сетка. V — книжка. VI — сычуг. VII — двенадцатиперстная кишка. VIII — тощая кишка. IX— подвздошная к. X— слепая к. XI— спиральная кишка. XII— прямая кишка, а — расположенная в воротах печени часть воротной в. 5 — часть воротной в., направленная к тазу, с — желудочнодвенадпатиперстная в. JI — правая желудочная в. в — прямая желудочносальниковая в. Г — поджелудочнодвенадцатиперстная краниальная в. д — желудочноселезеночный ствол. И—селезеночная в. г— правая рубцовая в. А:—ее коллятеральная ветвь—левая рубцовая в. 1—в. сетки т—левая желудочная в. т'—ее ствол, т" — левая желудочносальниковая в. п — панкреатические ветви, о — большая панкреатическая в! р — каудальная подже-лудочнодвенадцатиперстная в.: д. — средняя кишечная, а' — левая кишечная в. г — илеоцекальный ствол. 8— венозный тощий ствол. <—его коллятеральная ветвь. V — его подвздошная ветвь, и — венозный кишечный ствол . и"—кишечный ствол конечной петли толстой кишки, и"—кишечные ветви спиральной кишки. V — собственная кишечная ветвь. V я ч" — ее конечные' веточки, и — илеоцекальная в. х, х' — ее цекальные ветви, у, у' — ее подвздошные ветви, г — общая брыжеечная в.

74

11£

Рис. 4 Пути оттока лимфы от желудка овцы 1- грудной проток, 2- задняя полая вена, 3- брюшная аорта. 4- левая почечная вена, 5- правая рубцовая артерия, 6- левая рубцовая артерия, 7-правая желудочная артерия, 8- левая желудочная артерия, 9- чревная артерия, 10- лимфатический узел печени, 11- печеночный лимфатический проток, 12- лимфатические узлы рубца, 13- лимфатические узлы сетки, 14-лимфатические узлы книжки, 15- лимфатические узлы сычуга, 16-лимфатический проток сычуга, 17- кишечный лимфатический ствол, 18-общий желудочный проток, 19- брыжеечный лимфатический проток,20-млечная цистерна. Стрелками и кружком показаны места для наложения катетеров.ПоА. А. Алиеву(1982).

75

Таблица 1

Состав и питательность рациона овец цигайской породы

Норма Сено-злаково- Комбикорм 0,4 кг Итого в рационе

Показатели разнотр. 1,5

Корм. ед. 0,9 0,7 0,372 1,07

ЭКЕ 1,0 1,08 0,396 1,48

Сух.в-во кг 1,4 1,245 0,344 1,58

Сыр. прот. г 150 126 53,6 179,6

Пер. прот. г 85 70,29 46,5 116,79

Сыр. кл. 306 351 33,48 384,48

Сахар г 126 53 14,6 67,6

Соль г 9 6,6 7,56 14,16

Кальций г 6 10,35 4,36 14,71

Фосфор г 4 2,55 2,3 4,85

Магний г 0,5 3,15 0,08 3,23

Сера г 3,5 2,7 0,66 3,36

Каротин мг 10 37,5 - 37,5

Вит. Д мг 500 600 17,8 617,8

Железо мг 48 285 55,5 340,5

Медь мг 10 3,15 4 7,15

Цинк мг 34 27,3 16 43,3

Кобальт мг 0,43 0,285 0,8 1,08

Марганец мг 53 84 8 92

Иод мг 0,43 0,435 1,6 2,035

Сырой жир 56 30 3,04 33,04

76

Таблица 2

Состав и иитатнльность рациона быков-кастратов показатели сено свекла комбикор отруби итого в злаково- полусаха м рационе разнотра рная

Количество корна кг 7,0 4.0 2.8 2,0

Корм. ед. 3,2 0,7 2,7 1.5 7.6

ЭКЕ 4.4 0,8 2,3 1,8 9,3

Сухое вещество кг 5,7 0,6 2.4 1.7 10,4

Сырой протеин г 588,0 64,0 314,2 302,0 1268,2

Переваримый протеин г 287,0 36,0 250.9 194,0 767,8

Сырая клетчатка г 1638,0 34,0 168,5 176,0 2016,3

Крахмал г 84,0 16.0 840,0 0.0 940.0

Сахара г 245.0 320,0 84,0 94,0 743,0

Сырой жир г 182,0 4,0 0,0 82,0 268,0

Поваренная соль г 50,0

Кальций г 39,9 3,6 21.7 3,0 68,2

Фосфор г 15,8 1,6 25,9 16,6 48,0

Магний г 10,4 1,2 5,9 5,9 23.4

Калий г 157,1 17.2 15,6 19,8 209,7

Сера г 12,6 1,2 6,7 3,8 24,3

Железо мг 411,4 52,0 508,9 219,0 11913

Медь мг 45,2 4,4 13.7 17,1 80,4

Цинк мг 146,6 21,6 126,6 163,4 458,2

Кобальт мг 1,3 0.1 2,0 0.2 3,6

Марганец мг 196,4 38,8 210,1 263,5 708,8

Иод мг 1,9 0,3 0,3 3.0 5.5

Каротин мг 175,0 0.8 8,4 5,2 189,4

Витамин Д, тыс. МЕ 2,8 0,0 0.0 0,0 2,8

Витамин Е мг 294.0 2,0 72,8 41,8 410,6

77

Таблица 3

Состав и питательность рациона валухов породы ромни-марш показатели норма сено злаково-разнотрав ное свекла комбик орм итого в рацио не

Корма кг 1.5 0.5 0.4 2,4

Корм.ед. 1.250 0.7 0.085 0.372 1,16

ЭКЕ 1.300 1.08 0.096 0.396 1. 57

Сух.вещ-во.кг 1.700 1.245 0.085 0.344 1.670

Сырой протеин.г 165 126 8 53.6 187.6

Перев. протеин, г 100 70.29 4.500 46.5 121.3

Сырая клетч.г 425 351 5.500 33.48 389.9

Сахар, г 175 53 40 14.600 107.6

Соль.г 13 6.600 0.95 7.560 15.110

Кальций г 7 10.350 0.45 4.360 15.16

Фосфор г 4 2.550 0.2 2.300 5.050

Магний г 0.7 3.150 0.15 0.08 3.380

Сера г 3.500 2.700 0.15 0.66 3.510

Каротин мг 15 37.5 0.1 — 37.6

Вит. Д мг. 700 600 — 17.800 617.8

Железо мг 70 285 6.500 55.5 347

Медь мг 16 3.150 0.550 4 7.700

Цинкмг 52 27.300 2.700 16 46

Кобальт мг 0.65 0.285 0.01 0.8 1.095

Марганец мг 75 84 4.850 8 96.85

Сырой жир 68 30 1,55 9,2 40,75

Йод мг 0.64 0.435 0.02 1.600 2.055

78

2.2. Методы биохимических исследований биологических сред

Общее количество ЛЖК в рубцовой жидкости определяли методом паровой дистилляции в аппарате Маркгамма, описанным А.П. Кротковой и Н.И. Митиным (1957).

В крови, лимфе и слюне ЛЖК определяли методом дистилляции безбелкового фильтрата,

1Нз - методом Къельдаля

Хроматографическое разделение летучих жирных кислот в рубцовой жидкости, крови, лимфе и слюне проводили на газожидкостном хроматографе методом разработанным в лаборатории межуточного обмена ВНИИФБиП. Тканевые гормоны гистамин и серотонин в моче определяли по Герасимовой Ц.И., (1977). Экскретируемые с мочей свободный гистамин и серотонин отражают скорость их эндогенного образования и концентрацию в организме" животных (Вайсфельд И. Л. Кассиль Г.Н.,1981)

Для статистической обработки экспериментального материала использовали метод Стьюдента (Асатиани В.С.,1965; ПлохинскийН. А., 1961).

Поскольку вышеперечисленные методы в литературе подробно описаны и числятся в категории общеизвестных, детальнее остановимся на новом экспресс методе определения низкомолекулярных жирных кислот, разработаннкм авторским коллективом научно-исследовательской фирмы «УЛЬТРАСАН» (Иконников Н.С. и др., 1999).

Суть метода заключается в количественном определении продуктов жизнедеятельности бактерий - рубцовых метаболитов, в частности летучих жирных кислот, с помощью хроматографа Ультрасан-Хромо.

К преимуществам метода можно отнести его чувствительность и специфичность за счет высокой разрешающей способности прибора,

79

К преимуществам метода можно отнести его чувствительность и специфичность за счет высокой разрешающей способности прибора, применения компьютерной обработки данных хроматографического исследования и использования математического аппарата для статистической обработки. Положительным фактором является также высокая скорость выполнения анализа и комплексный подход к интерпретации полученных результатов.

Для биохимического анализа исследуемых биологических сред применяется следующий порядок действий:

1. Образец РЖ или плазмы крови для хроматографических исследований массой 2 г взвешивают в центрифужной пробирке с точностью до 3-го знака после запятой.

2. Образец подкисляют 2 мл 1Н соляной кислоты и добавляют 1 г раствора стандарта.

3. Рассчитывают концентрацию внутреннего стандарта в образце по формуле:

-М стандарта

С стандарта —

М стандарта -М- образца где С стандарта - концентрация стандарта, г М стандарта -масса стандарта, г м образца - масса образца, г

4. Образец центрифугируют 10 минут при скорости 10 ООО об/мин

5 .Надосадочную жидкость при помощи одноразового капилляра отбирают и вводят в испаритель, снимают хроматограмму при помощи программы на компьютере. б.Компьютер автоматически выдает концентрации отдельных летучих жирных кислот. Результаты обрабатывают по программе математической статистики.

2.3. Методы морфологических исследований.

С целью витального изучения морфо-физиологических процессов, протекающих в эпителии слизистой оболочки рубца в динамике пищеварения и всасывания, использовались образцы слизистой оболочки, полученные методом биопсии через фистулу рубца от оперированных животных в хронических опытах. Это дало возможность избежать временных артефактов и значительно повысить точность исследований.

Пробы слизистой оболочки брали из латеральных стенок рубца в вентральном и дорсальном мешках, а также в области верхушки дорсального мешка, где скапливаются рубцовые газы и нет постоянного контакта с пищевыми массами и фундальной части рубца для сравнения. Отбор проб осуществлялся через хроническую фистулу левой боковой стенки дорсального мешка. С помощью хирургического зажима захватывали участок стенки рубца и подтягивали к отверстию, где под визуальным наблюдением отсекали кусочек слизистой.

Методика приготовления гистологических препаратов слизистой рубца для изучения в световой микроскопии.

Образцы слизистой фиксировали в жидкости Ценкера с формалином, что наиболее пригодно для слизистой желудочно-кишечного тракта. Фиксирующую жидкость готовили перед употреблением из жидкости Ценкера (95 мл) и 40% формалина (5 мл). Жидкость Ценкера, в свою очередь готовили из расчета: 5 г сулемы, 2,5 г хвухромовокислого калия и 1г сернокислого натрия на 100мл. дистиллированной воды. Фиксацию проводили в течение суток в темном месте. После фиксации кусочки

81 слизистой промывали в течение суток в проточной воде для удаления из материала двухромовокислого калия. Из воды образцы переносили в 50% спирт на 5 часов. По истечении указанного срока проводили обработку фиксируемового материала 0,4% раствором йода в 70% спирте. Йодирование производили с целью удаления сулемы, кристаллы которой могли исказить окраску и затруднить изучение препарата. Затем гистологический материал обезвоживали и заливали в царафин.

Парафиновые срезы толщиной в 5 мкм были получены на санном микротоме. Депарафинизацию срезов проводили последовательно, путем погружения на 2-3 минуты в ксилол и смесь ксилола с абсолютным этиловым спиртом. После растворения парафина срезы поочередно Переносили в растворы нисходящих спиртов концентрацией - 100%, 96%, 70% на 2-3 минуты в каждом и затем споласкивали водой. Окраску проводили гематоксилин-эозином. Для микросъемок исследуемых образцов использовали микроскоп МБИ-6, объектив 40, 65 и окулярЮ.

Методика приготовления гистологических препаратов слизистой оболочки рубца для электронно микроскопических исследований.

В наших опытах, в некоторых случаях, фиксация материала проводилась в 2% забуференом растворе глютаральдегида в течение 3 часов с последующей дофиксацией в 1% растворе четырехокиси осьмия в течение 1 часа. Промывку и обезвоживание проводили в восходящих спиртах 70%, 96% и двух сменах 100% по 10 минут в каждом. После фиксации и обезвоживания материал пропитывали поочередно в двух смесях:

1 смесь: 1 часть смолы + 2 части ацетона

2 смесь: 2 части смолы + 1 часть ацетона

Затем 3 часа образцы выдерживали в смоле. Материал заключали в смесь смол: ЭПОН-812 и аралдита составленную по прописи МоПепЬаиег (1964): ЭПОН-812 - 25 мл, ББ8А (додецилянтарный ангидрид) - 55 мл, АРАЛДИТ М - 15 мл, ДИБУТИЛФТАЛАТ - 2 мл и ДМП-30 (тридиметиламинофенол) - 2 мл. Препараты переносили в приготовленную смесь и помещали их в термостат для полимеризации при температуре 60° на 24 часа. Ультратонкие срезы получали на ультратоме ЬКВ-З. Контрастирование проводили уранилацетатом и свинцом по ЯеипоИз Е.Э. (1963). Сеточки со срезами, вначале помещали в 2% водный раствор уранилацетата на 2 часа, а затем в раствор свинца на 10-15 минут. После просушки, готовые препараты просматривали в электронном микроскопе. Фотографирование проводили при увеличении 4300, 14400 и 24000. Полученые электроннограммы морфометрировали для анализа морфо-функциоенальных изменений клеточных структур.

В качестве основного фиксатора использовали 4% раствор параформальдегида, приготовленный на буфере Хенкса рН 7,4. Преимуществом данного фиксатора является его высокая скорость проникновения в ткани, хорошие свойства, дающие высокую стабильность при хранении. Установлено, что 4% раствор параформальдегида является оптимальным по концентрации и дает наилучшее качество фиксации (Кгаешег Я. е!:. а1., 1983). Важное значение при фиксации имеют такие параметры фиксирующего раствора как молярность, рН, температура и осмолярность. Как было показано изменения в ткани при фиксации в большей степени зависят от осмотической концентрации буфера, чем от типа фиксатора (КазтшБОп К. Е., 1974). Для успешной фиксации рекомендуют применять слегка гиперосмотический фиксатор, причем, отмечено, что повышенная осмолярность повреждает клеточные структуры меньше, чем пониженная (Нипс^еп У.,1973).

При фиксации слизистой оболочки рубца осмолярность фиксирующего раствора подчас имеет решающее значение, так как время от времени приходится сталкиваться с осмотическими повреждениями эпителия, возникающими, как правило, на вершине среза и проявляющимися в набухании стромы или отслойке эпителиального пласта. Это явление связано не только с недостаточной осмотичностью фиксатора, но и с изменяющейся осмолярностью стромы. Известно, что в период активного всасывания в апикаль-ном направлении осмолярность ткани может достигать 1000-2200 мосМ, тогда как у основания она остается изотоничной по отношению к плазме (7ос1а1 М. е1 а1., 1978). По видимому, осмотическое повреждение ткани возникает в начальный момент фиксации, когда существует значительный градиент осмотического давления между фиксатором и тканью. Применение гипертонического фиксатора предотвращало набухание ткани, однако могло приводить к дегидратации и сморщиванию.

Хорошая сохранность ткани и менее существенные осмотические нарушения бывают при фиксации 4% параформальдегидом, в который добавляли 0з04 до конечной концентрации 0,2% (Лысиков Ю.А.,1985). Присутствие осьмия в составе альдегидного фиксатора способствовало лучшей сохранности структуры эпителиальных клеток и компонентов пристеночного слоя. Возможно, что влияние осмия на фиксацию связано с тем, что он снижает чувствительность ткани к градиенту осмотического давления.

Вторым важным условием, обеспечивающим сохранность структуры, является быстрота фиксации. Использование метода биопсии позволило сократить время между остановкой кровообращения в исследуемом участке слизистой оболочке рубца и началом фиксации до одной минуты. Применение различных методов фиксации показало, что скорость проникновения фиксатора со стороны слизистой оболочки рубца к

84 основанию практически не зависит от плотности ткани. Фиксатор с одинаковой скоростью двигался как через клетки, так и в пространствах между ними. Время проникновения фиксатора можно сократить, если предварительно отмыть поверхность слизистой оболочки от наложений химуса и слизи.

Поскольку методы приготовления гистопрепаратов слизистой оболочки рубца для электронной микроскопии в сельскохозяйственной морфологии используются редко, мы сочли возможным описать их более детально.

Образцы слизистой оболочки рубца фиксировали в охлажденном до 0+4°С растворе параформальдегида на буфере Хенкса, рН 7,4 (или параформальдегида с ОбОД По завершении фиксации, которая продолжалась в течение трех часов, при пониженной температуре, исследуемый препарат слизистой отмывали от фиксатора в буфере Хенкса и лезвием бритвы разрезали на участки толщиной 1-2 мм.

Дофиксацию ткани проводили в 1% растворе 0в04 на буфере Хенкса в течение 3 часов при температуре 0+4°С. Увеличение времени осьмирования заметно снижало экстракцию липидов из ткани при ее обезвоживании в органических растворителях. После отмывания образцов от осмия в буфере Хенкса их обезвоживали в ацетоне с нарастающей концентрацией и заливали в смесь эпоксидных смол по вышеописанной методике. При заливке кусочки слизистой располагали таким образом, чтобы добиться оптимальной ориентации структуры при изготовлении срезов на ультратоме. Общая схема обработки ткани:

1. Фиксация в 4% растворе параформальдегида на буфере Хенкса - 3 часа

2. Ополаскивание в буфере Хенкса -2x10 мин.

3. Постфиксация в 1% 0в04 на буфере Хенкса при 0+4°С - 3 часа

4. Ополаскивание в буфере Хенкса -3x5 мин.

5. Обезвоживание в 70% ацетоне -3x15 мин.

85 "

6. Обезвоживание в 90% ацетоне

7. Обезвоживание в 100% ацетоне

8. Пропитывание в смеси смола: ацетон

9. Заливка в смесь эпоксидных смол и полимеризация

-3x15 мин. -3x10 мин. -12 часов -48 часов

Проводку материала без существенного изменения качества можно было ускорить за счет сокращения примерно на треть времени фиксации образцов, исключая стадии обезвоживания в 70 и 90% ацетоне, пропитывании в смеси смола : ацетон и полимеризации при 100°С.

Полутонкие срезы для контроля в световой микроскопии толщиной около 2 мкм окрашивали толуидиновым синим. Ультратонкие срезы последовательно контрастировали в 2,5% водно-спиртовом растворе ацетата уранила 10 минут и 0,2% водном растворе цитрата свинца 5 минут при комнатной температуре. тжт

Заключение диссертации по теме «Физиология», Грушкин, Александр Георгиевич

ВЫВОДЫ

Комплексный морфо-физиологический подход с использованием современных биохимических», гистологических и электронно-гистохимических методов в сочетании с методом физиологической хирургии (катетеризация рубцовой и воротной вен, желудочного лимфатического протока, выведение под кожу сонной артерии, наложение фистул на рубец) позволил в хронических экспериментах изучить суточную динамику образования, абсорбции и пути транспорта через стенку рубца у жвачных животных. Результаты исследований позволяют сделать следующие основные выводы:

1. Наибольшее количество летучих жирных кислот образуется в рубце в период с 3-его до 5-го часа после приема животными корма (пик рубцового пищеварения), когда их уровень повышается в 1,5 раза в сравнении с условным состоянием натощак. Соотношение отдельных ЛЖК в содержимом рубца, а также в крови и лимфе показывает во всех случаях преобладание уксусной кислоты, на долю которой приходится 6070% от общего количества кислот; на долю пропионовой и масляной кислот - (18-20% и 10-15%, соответственно).

2. Концентрация ЛЖК в крови и лимфе, достигают максимума (как и в РЖ) в пик рубцового пищеварения, что свидетельствует о сопряженности процессов образования и всасывания ЛЖК в преджелудках жвачных животный. Наиболее интенсивно они всасываются в кровь; их содержание в лимфе ниже в 1,3 раза, чем в крови.

3. Уксусная кислота из рубца в кровь и лимфу всасывается предпочтительнее других низкомолекулярных кислот, что связано с

213 ч незначительной ее утилизацией в стенке рубца. Пропионовая и масляная кислоты всасываются в лимфу в меньшей степени, что подтверждается разным соотношением их концентраций в рубце и лимфе.

4. Интенсивное всасывание бутирата не вызывает отложения гликогена или жира в слизистой оболочке, так как оно связано с потребностью эпителия рубцовой стенки в энергии, которая удовлетворяется за счет утилизации руменоцитами этой кислоты.

5. Динамика концентрации летучих жирных кислот в слюне тесно связана с интенсивностью процессов рубцового метаболизма и их содержанием в рубцовой жидкости и крови. В пик рубцового пищеварения концентрация ЛЖК в слюне повышается в 1,7 раза в сравнении с условным состоянием натощак. Установлен факт активного извлечения ЛЖК слюнными железами из крови и их кумуляции в слюне. Содержание ЛЖК в слюне в полтора раза выше чем в крови.

6. При максимальной активности метаболических процессов в рубце и соответственно высокой концентрации ЛЖК в рубцовой жидкости увеличиваются размеры руменоцитов и толщина слизистой оболочки в целом, что на наш взгляд, связано с повышением интенсивности транспортных процессов в ней.

7. Начальный этап всасывания характеризуется концентрацией питательных веществ, включая ЛЖК, в пристеночной зоне слизистой оболочки рубца, богатой остатками клеточных структур десквамированных руменоцитов, пищевых частиц и микроорганизмов.

8. Интенсивность образования и всасывания рубцовых метаболитов, в том числе ЛЖК, влияет на цитоплазматические мембраны, увеличивая количество и извилистость пальцеобразных выростов цитолеммы. В структуре межклеточных соединений отсутствуют зоны плотных контактов, клетки контактируют посредством десмосом, поэтому межклеточные пространства проницаемы для гидрофильных молекул летучих жирных кислот.

9. Морфометрические показатели ширины межклеточных пространств и размера клеточных органелл, ответственных за процессы всасывания (митохондрии, пластинчатый комплекс Гольджи), достигали максимальных размеров в пик рубцового пищеварения, что свидетельствует о повышении <их функциональной активности.

10. Летучие жирные кислоты всасываются из рубца парацелюллярным путем, что подтверждено визуализацией короткоцепочечных жирных кислот (методом электронной гистохимии) в расширенных межклеточных пространствах.

11. При интенсивном всасывании ширина межклеточных пространств достигает 750-1500 нм, что превышает размеры частиц трейсера (коллоидного лантана) и делает возможным его проникновение в сторону базальной мембраны. Это, наряду с методом визуализации ЛЖК, подтверждает наличие парацеллюлярного транспорта питательных веществ в слизистой оболочке рубца жвачных животных.

12. Установлена положительная корреляция концентрации гистамина с изменениями размеров клеточных органелл, осуществляющих транспортную функцию в слизистой оболочке рубца и интенсивностью всасывания ЛЖК, что позволяет судить о его причастности к регуляции процесса всасывания в рубце.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Использованный нами комплексный подход с применением современных биохимических, гистологических и электронног гистохимических методов в сочетании с методом физиологической хирургии можно рекомендовать для более глубокого изучения процессов переваривания и абсорбции питательных веществ в желудочно-кишечном тракте животных.

2. Полученные данные о количественных параметрах образования ЛЖК в рубце и путях их поступления в кровь и лимфу могут быть использованы в научных исследованиях по проблеме субстратного обеспечения метаболизма у жвачных животных. Результаты исследований можно также использовать в учебном процессе по курсам: «Морфология» и «Физиология» животных.

3. Представляется перспективным дальнейшее изучение роли тканевых гормонов в механизме транспортных процессов и регуляции абсорбции питательных веществ в преджелудках жвачных животных.

216

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В диссертации представлены результаты многолетних экспериментальных исследований обмена и всасывания летучих жирных кислот у жвачных животных, выполняющих первостепенную роль в энергетических и пластических цроцессах и активно влияющих на морфоструктуру слизистой оболочки преджелудков. Особое внимание уделялось вопросам динамики и интенсивности процессов образования летучих жирных кислот во взаимосвязи со структурными изменениями слизистой оболочки рубца, закономерности всасывания, путям транспорта питательных веществ и их гормональной регуляции. На фистулированных и катетеризированных животных изучали показатели биохимического состава: рубцовой жидкости, крови, лимфы, слюны и мочи содержание рН, ЛЖК, аммиака, уровень тканевых гормонов, а также проводили гистологический анализ образцов слизистой оболочки рубца в динамике пищеварения (до утреннего кормления, через 1, 3, 5 и 7 часов после приема корма). Все животные содержались на сено-концентратно-корнеплодном рационе, соответствующим по питательности принятым нормативам.

Исследования показали, что в рубцовой жидкости, крови, лимфе и слюне самый низкий уровень летучих жирных кислот имеет место перед утренним кормлением. После кормления образование ЛЖК в рубцовой жидкости повышается в 1,5 раза. Максимальное количество низкомолекулярных кислот в рубцовой жидкости обнаружено в интервале 3-5 часов после кормления (пик рубцового пищеварения). Это связано с более интенсивной микробной ферментацией углеводов корма в 3-5 -часовой период и соответственно образованием большего количества ЛЖК. При определении количеств отдельных низкомолекулярных жирных кислот в рубцовой жидкости у овец, содержавшихся на сено-концентрато

206 \ корнеплодном рационе, получена картина аналогичная суммарному уровню ЛЖК, когда показатели концентраций уксусной, пропионовой и масляной кислот достигали максимума также в пик рубцового пищеварения.

После кормления животных увеличивалось количество ЛЖК в крови и лимфе. Это указывает на интенсивный транспорт ЛЖК слизистой оболочкой из полости рубца в кровь и лимфу. Наибольшей интенсивности процессы всасывания достигали к 3-5 часу после кормления животных, то есть в пик рубцового пищеварения.

Таким образом, установлено содержание ЛЖК у овец в рубцовой жидкости, крови и лимфе: образование ЛЖК в преджелудках -всасывание их в кровь (рубцовая и воротная вены) - всасывание ЛЖК в лимфу (желудочный лимфатический проток).

Динамика всасывания летучих жирных кислот в кровь и лимфу прямо пропорциональна динамике их образования в рубце. Исходя из полученных нами данных, высказано предположение, что увеличение скорости всасывания ЛЖК из смеси кислот, в известной мере, вызвано наличием бутирата. Последний,- по-видимому, используется тканями рубца в качестве энергетического материала, так как поглощение его не связано с отложением в стенке рубца гликогена или жира.

Уровень ЛЖК в лимфе был в среднем в 1,3 раза ниже, чем в крови воротной вены. Содержание летучих жирных кислот в лимфе у подопытных животных составляло: до утреннего кормления - 0,75, в пик пищеварения - 1,43 и 1,30, а к 7-му часу пищеварения - 0,94 мМ/л. Отсюда можно сделать вывод, что закономерности транспорта ЛЖК лимфой, непосредственно связаны с процессами в рубце. Летучие жирные кислоты постоянно поступают из пищеварительного тракта в лимфу. Их концентрация так же, как и в крови достигает своего максимума в пик рубцового пищеварения. Уксусная кислота из рубца в лимфу всасывается активнее других низкомолекулярных кислот, что связано с прямым ее транспортом через стенку рубца без каких - либо превращений. Пропионовая и масляная кислоты в лимфу всасываются в меньшей степени, что подтверждает факт их утилизации руменоцитами слизистой оболочки рубца для энергетических целей обеспечивающих транспортные процессы.

Нами установлено, что наряду с мочевиной и бикарбонатами в рубец со слюной возвращается и часть летучих жирных кислот, что возможно, может оказывать определенное влияние на их обмен и использование в организме. Проведенные нами исследования показали, что концентрация ЛЖК в слюне овец после кормления повышается: в 1,7 раза в сравнении с состоянием натощак. Максимальное количество этих кислот обнаружено в пик рубцового пищеварения, то есть через 3-5 часов после приема животными корма. Увеличение содержания ЛЖК в слюне происходило параллельно повышению их концентраций в РЖ и крови. Важно при этом заметить, что концентрация летучих жирных кислот в слюне в 1,5 раза превышала их содержание в крови, из чего можно сделать заключение об активном извлечении ЛЖК слюнными железами, без существенных изменений в соотношении отдельных низкомолекулярных кислот. Это указывает на более сложный механизм поступления ЛЖК в слюну, чем простая диффузия. В процессе метаболизма у жвачных животных летучие жирные кислоты, по-видимому, осуществляют, подобно азотистым веществам, частичный кругооборот в системе: рубец - кровь - слюна -рубец.

Полученные нами методом световой и электронной микроскопии данные по изучению слизистой оболочки разных отделов рубца (латеральных стенок вентрального и дорзального мешков) особых различий не выявили. В верхней стенке дорзального мешка, где скапливаются рубцовые газы, и нет постоянного контакта с пищевыми

V 208 массами, роговой слой к 3-5 часу после кормления увеличивается по сравнению с предыдущим периодом и выглядит рыхлым с явными следами десквамации. В зернистой слое межклеточные пространства сильно расширяются и производящий слой занимает большую площадь. Межклеточные щели базального слоя к 3-5 часу после приема животными корма более сужены, чем в шиповатом и зернистым слоях. Эти морфофункциональные изменения менее выражены, по сравнению с фундальной частью рубца.

Полученные нами данные убедительно доказывают, что пику рубцового пищеварения соответствует наиболее активная функциональная стадия тканевых структур, ответственных за транспорт питательных веществ из просвета рубца в кровь. Из всех образующихся рубцовых метаболитов ЛЖК считаются наиболее ответственными за морфологические изменения, происходящие в слизистой рубца. Повышение их концентрации приводит к увеличению числа и размеров митохондрий, что является показателем общей энергетической активности руменоцитов.

Летучие жирные кислоты влияют и на размеры межклеточных пространств, так как одним из условий, обеспечивающих высокую проницаемость эпителиального пласта, является увеличение размеров межклеточных щелей и гидрофильность низкомолекулярных жирных кислот. Наши исследования подтверждают факты, что в слизистой оболочке рубца в зависимости от периода после приема животными корма меняются размеры межклеточных пространств. До кормления они сужены, а в пик рубцового пищеварения их размеры увеличиваются более чем в 1,5 раза.

Исходя из полученных нами результатов можно предположить, что транспорт рубцовых метаболитов осуществляеться тремя путями:

209 ■ \ интерцеллюлярным, (парацеллюлярным) - по межклеточным пространствам, эндоцеллюлярным - от клетки к клетке по цитоплазматическим мостикам, и смешанным путем. Летучие жирные кислоты способны растворяться не только в воде, но и в значительно менее полярных средах. Благодаря этому обстоятельству они могут легко проникать через липидные мембраны и межклеточные пространства вместе с током воды. В литературе рассматривается возможный путь транспорта питательных веществ по межклеточным пространствам, где оговорено, что для всасывания мономеров - моносахаридов, жирных кислот, аминокислот и других метаболитов необходимы два основных условия: их водо - и липорастворимость и наличие относительно широких межклеточных пространств.

Нами была показана прямая зависимость увеличения ширины межклеточных пространств от концентрации ЛЖК в рубцовом содержимом и крови. Общепринятой гистологической методикой выявлен тонкодисперстный материал в просвете рубца и особенно в его пристеночной зоне. Аналогичное по своему строению тонкодисперстное вещество обнаруживается и в межклеточных пространствах защитного слоя. Этому проникновению исследуемого вещества вглубь эпителия не препятствуют структуры межклеточных соединений типа десмосом. Вследствие этого межклеточные контакты проницаемы как для воды, так и для гидрофильных молекул летучих жирных кислот. Поэтому, контрастируемый материал просматривается и в межклеточных пространствах более глубоко лежащих структурах слизистой оболочки производящего слоя. Мы предполагаем, что обнаруженное мелкодисперсное вещество, по-видимому, состоит из осмиофильных молекул летучих жирных кислот (доминирующих среди рубцовых метаболитов) в комплексе с хвостовой частью молекул белка. Таким образом, высказанное ранее предположение, о проницаемости питательных веществ по межклеточным пространствам (парацеллюлярный транспорт) получило в наших опытах экспериментальное морфологическое подтверждение.

Для изучения проницаемости слизистой оболочки рубца в качестве диффузной метки использовали трейсер (коллоидный лантан), размер частиц которого составляет около 2 нм. В основе этого метода лежит высокая электронная плотность лантана. Кроме того, лантан является опосредованным индикатором локализации кальция в тканях и клетках. При гистохимической обработке стенки рубца быков-кастратов, частицы лантана сорбируются на апикальной поверхности руменоцитов рогового слоя и обнаруживались в расширенных пространствах как защитного, так и производящего слоев. Они свободно проникали по межклеточным пространствам вплоть до собственной пластинки слизистой оболочки рубца, то есть до просвета кровеносных и "лимфатических капилляров. Диффузное проникновение лантана в структуры защитного и производящего слоев свидетельствует о том, что межклеточные пространства, не являются препятствием для частиц, размер которых не превышает 2 нм. Полученные нами результаты позволяют предположить наличие межклеточного транспортного пути по градиенту концентрации не только частиц лантана, но и продуктов рубцового метаболизма с размером молекул не превышающих размеры межклеточных пространств. Для окончательного подтверждения нашей гипотезы о парацеллюлярном транспорте летучих жирных кислот было проведено электронно гистохимическое исследование, которое наглядно показало путь всасывания фиксированных гистохимически окрашенных молекул ЛЖК из полости рубца в просвет кровеносных капилляров по межклеточным пространствам. Для визуализации летучих жирных кислот была применена реакция с образованием гидроксамовых кислот, модифицированной по методу Адамса для выявления этерифицированных жирных кислот. Положительную реакцию при ¿той схеме дают лишь гидрофильные фосфолипиды и триглицериды образованные кислотами с короткой цепью Сг-Сб, то есть летучими жирными кислотами. Общая схема реакции может быть представлена следующим образом: экзогенный субстрат -исследуемое вещество - нерастворимый продукт реакции -захватывающий агент - электронноплотный материал.

Проведенные нами исследования показали, что гистамин и серотонин вероятно обладают, соответственно, стимулирующим и ингибирующим действием на транспортные процессы в рубце. Гистамин, обладая высокой активностью, вызывает расширение капилляров стенки ЖКТ и увеличивает проницаемость эндотелия. Механизм положительного ионотропного действия гистамина связан, по-видимому, с повышением проницаемости мембран за счет формирования каналов переноса кальция. Нашими исследованиями установлено, что в пик рубцового пищеварения концентрация кальция достигает своего максимума. При этом интенсивно утилизируются жиры и углеводы. Так как основные энергетические процессы клеточного метаболизма связаны с митохондриями, то их размер и количество является показателем интенсивности транспортных процессов в рубце.

Серотонин, в противоположность гистамину тонизирует гладкую мускулатуру и сужает просветы кровеносных капилляров. Ингибирующий эффект серотонина осуществляется, по-видимому, центральными механизмами через монооксидазу.

Основным итогом нашей работы является доказательство сопряженности процессов переваривания, всасывания и транспорта Рубцовых метаболитов. Определены механизмы и пути их переноса через

V • '• • ' V '"С ■:'■" 212 "С слизистую оболочку рубца, представленную многослойным, плоским, ороговевающим эпителием.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Грушкин, Александр Георгиевич, 2001 год

1. Азимов Г.И., Крииицин Д.А., Попов Н.Ф. Физиология сельскохозяйственных животных. М., 1958.

2. Албертс А. и др. Молекулярная биология клетки. М. Мир. 1987. тЗ. с.115-120., т. 4 с.151-156.

3. Алиев A.A. Ли>;пидный обмен и продуктивность жвачных. М. Колос. 1980.

4. Алиев A.A. Лимфа и лимфообращение у продуктивных животных Л. Наука. 1982, с.40-50.

5. Алиев A.A. Обмен веществ у жвачных животных. М. НИЦ «Инженер», 1997.

6. Алиев A.A. Экспериментальная хирургия. М.- НИЦ. «Инженер», 1998.

7. Алов И.А., Брауде А.И., Аспиз М.Е. Основы функциональной морфологии клетки. М. Медицина. 1966, с. 190-196.

8. Акаевский А.И. Анатомия домашних животных. Сельхозиздат. М., 1962.

9. Александров В.Я. Поведение клеток и внутриклеточных структур. «Знание», М., 1975.

10. Антошина Л.П. Функциональная морфология слизистой оболочки стенки тонкой кишки новорожденных телят черно-пестрой породы. Дисс. канд. Саранск, 1996.

11. Архипенко В.И. и др. Структура и функции межклеточных контактов. Киев. Здоровье. 1982, с. 15-30.

12. Айнсосн Э.И. Влияние серотонина на обмен липидов у овец. Обмен липидов и липидное питание с.-х. животных. Боровск. 1982., с. 127-130.

13. Бабин В.Н. и др. Биохимические и молекулярные аспекты симбиоза человека и его микрофлоры. Ж. Росс. хим. о-ва Менделеева. 1994, т. 40, № 2. с. 68-78.

14. Бабин В.Н. и др. «Российский химический журнал», 1994. т. 38.№ 6 стр.66-68. < 1

15. Базанова Н.У., Прокудин Ф.В. К вопросу о развитии функции рубца у ягнят. Вопросы физиологии пищеварения и лактации. Труды института физиологии, изд. Ан. Каз. ССР, т.5, Алма-Ата., 1963.

16. Базанова Н.У., Измаилов Т.У. О пристеночном гидролизе питательных веществ в пищеварительном тракте у крупного рогатого скота. Мат. 3-конфю физиологов Средней Азии и Казахстана. Душанбе, 1966, с. 54-55.

17. Бергельсон Л.Д. Биологические мембраны. М. Наука, 1975, с. 101125.

18. Бергнер X., Кетц Х.А. Научные основы питания сельскохозяйственных животных. «Колос», М., 1973.

19. Бирих В.К. Характеристика внутриутробного развития крупного рогатого скота. Сб. закономерности индивидуального развития сельхоз. животных, вып. 1, М., 1962, с. 35-37.

20. Блекстер К.Л. Питание жвачных животных. Новое в физиологии домашних животных, т. 1, с. 11-56, М.-Л., 1958.

21. Богатко Л.М., Шевчук П.Ф. Физико-химическая характеристика содержимого рубца при различных типах откорма. Тез. Белая Цепковь, 1985, с.11-12.

22. Булгакава В.А и др. Совидиагностика нарушенй и коррекций гомеостаза. Тр. Респ. Центра Функц. хирург, гастроэнтер. Краснодар 1999, стр. 28-36.218

23. Вайсфельд И.JI., Кассиль Г.Н. Гистамин в биохимии и физиологии. М. Наука. 1981, с.62-69.

24. Вракии В.Ф. К вопросу изучения процессов всасывания в рубце жвачных животных. Труды MB А т. ХХУ, 1960.

25. Вракин В.Ф. О всасывании в изолированном участке рубца жвачных. Доклады ТСХА, вып. 51, 1960, с. 223-228.

26. Вракин В.Ф. Разработка метода операции изолированного рубца и данные по всасыванию. Дисс. канд. ,1961.

27. Вракин В.Ф. Морфологическое строение стенки различных мешков рубца крупного рогатого скота в связи с возрастом. Конф. 60-летию Казанского вет. ин-та. Казань, 1963.

28. Гаер Г. Электронная гистохимия М. Мир. 1974.

29. Гальперин Ю.М., Лазарев П.И. Пищеварение и гомеостаз М. Наука. 1986. с. 245-251.

30. Герасимова Ц. И. Определение серотонина, триптофана, 5-окси триптофана, 5-оксииндол уксусной кислоты, гистамина и гистидина в одной пробе биологического материала. Лаб. дело № 1, М. 1977. с. 14-20.

31. Герке П.Я. Развитие желудка млекопитающих. Тр. ит-та экспер. мед. Латв. ССР, т.11, с. 3-36,1956.

32. Гжицкий С.З., Скороход В.И. Резорбция и секреция ткани малого рубца у крупного рогатого скота. Докл. Укр. С.-Х. наук, № 6, 1959, с.31-33.

33. Гжицкий С.З., Розгони Н.И. Новые данные в обмене веществ у крупного рогатого скота в норме и при нарушении пищеварения. Мат. Всес. конф. по биохимии с.-х. животных М., 1961, с. 28-29.

34. Гжицкий С.З. и др. Исследование функций стенки рубца у крупного рогатого скота. Тез. 2 респ. конф. по физиологии и биохимии с.-х. жив. Львов, 1963, с. 2021.

35. Гжицкий С.З. Гистология и всасывание Сахаров в стенке рубца крупного рогатого скота. Докл. АН Укр. ССР, т.1, 1964.219' :

36. Гжицкий С.З. Биохимические процессы в преджелудках жвачных. М. 1966. с. 192-196.

37. Груздев П.В. и др. Характеристика сосудистого русла эпителиосоединительнотканных образования слизистой оболочки преджелудков домашних и диких жвачных животных. Актуаль. пробл. ветер. Барнаул. 1995, с.48.

38. Груздев П.В. , Беляев В.А. Морфология слизистой оболочкиvрубца якв в различные возрастные периоды. Вестн. ветер. 1997, № 6 (4), с. 44-46.

39. Груздев П.В. и др. Морфогенез слизистой оболочки рубца желдка крупного рогатого скота в пре- и постнатальном онтогенезе. Межд. ассоц. Морф. 1998,113. №3, с. 40.

40. Давлетова Л.В. Гликоген в органах пищеварения плодов овец. Эмбриональное развитие с.-х. животных МОИП т.26, 1967.

41. Давлетова Л.В. Биологическое развитие органов пищеварения жвачных и всеядных животных. М. «Наука», 1974, с. 47-66.

42. Давлетова Л.В. и др. Ультраструктура эпителия слизистой оболочки преджелудков овец и локализация в нем щелочной фосфатазы. Док. АН СССР т.253, № 2, 1980, с.475-481

43. Даугерт Р.К. Молочная продуктивность и состав молока коров при введении в рацион ацетата, пропионата и бутирата натрия. «Биохимия и физиология питания животных». Рига, 1972. с. 67-73.

44. Дубинин A.B. и др. Журнал «Клиническая медицина» № 7. 1987. с. 140-144.45. де Дюв К. Путешествие в мир живой клетки. М. Мир, 1987, с. 35-74.

45. Ерсков Е.Р. Протеиновое питание жвачных животных. М. Агропромиздат, 1985, с. 23-26.

46. Жданов Д.А., Шахмалов В.А. Ультраструктура ворсинки тонкой кишки обезьян. Конф. анатомов, гистологов и эмбриологов с.-х. вузов вып.11,М., 1963.

47. Жданов Д.А. К функциональной анатомии кровеносных капилляров. Архив Анат.,гистол. эмбр. Львов, 1964.

48. Жеребцов П.И. (ред) Физиологические основы рационального кормления жвачных животных М.Колос. 1964.

49. Иванова Л.И., Виноградов В.В. Гистологические особенности мукополисахаридов интерстициальной ткани мозгового вещества почки. Арх. Анат. гистол. эмбр? т.43, № 11,1962, с. 18-23. ,

50. Измаилов Т.У. Процессы пищеварения и продуктивность животных. Алма-Ата. Кайнар. 1971. с. 23-35.

51. Измаилов Т.У. Полостной и мембранный гидролиз питательных веществ у жвачных животных. Биоморфология с.-х. и промысловых животных., 1985, с.57-59.

52. Ильин П.А. К возрастной морфологии и гистохимии тканей переднего отдела пищеварительного канала крупного рогатого скота. Сб. науч. метод, конф. анат. гистол. эмбр. с.-х. вузов, М., 1963.

53. Ильин П.А. Возрастная морфология и гистохимия органов переднего отдела пищеварительного канала плодов крупного рогатого скота. Тр. Омского вет. ин-та, т.22,1964, с.11-18.

54. Ильин П.А. Морфофункциональная дифференцировка тканей преджелудков крупного рогатого скота. Дисс. док. 1973.

55. Исмаилов A.C. Биологические особенности постэмбрионального развития овец. Дисс. канд. 1961, Баку.

56. Кадиров Ш.К. Механизмы трансформации ферментного и пептидного спектров слюны и роль слюнных желез в ферментном гомеостазе. Дисс. док. Андидан, 1999, с. 364-367.

57. Калашников А.П. Кормление сельскохозяйственных животных. М. Росагропромиздат, 1988.

58. Калачнюк Г.И., Савка О.Г., Лаукова А., Кметь В. Пристеночное пищеварение в рубце и его устойчивость. Укр НИИФиБ с.-х. жив., 1985, т. 72, с.28-33.

59. Климов А.Ф. Анатомия домашних животных т. 1 , М., 1950.

60. Кожебеков З.К. Некоторые особенности пищеварения ягнят. Дисс. канд. Алма-Ата, 1956.

61. Козлов В.Н. Васкуляризация слизистой оболочки преджелудков крупного рогатого скота. Дисс. канд., М., 1970.

62. Коннов М.Г. Развитие желудочков у плодов крупного рогатого скота. Тр. ТСХА .1944.

63. Коншин В.Д. Рост и развитие преджелудков у овец. Сб. тр. СХИ, М. т.15,вып.З, 1979, с. 107-111.

64. Кочанов Н.Е. Физиология питания и обмен веществ лося Сыктывкар. 1992, с. 51-62.

65. Коштоянц Х.С. Белковые тела, обмен веществ и и нервная регуляция. Тр. ин-та им. Северцева А.Н., вып. 5, М. 1952, с. 7-18.

66. Кравцов И.Л. Гистологические исследования органов пищеварения у плодов новорожденных телят, полученных от коров содержащихся на различных рационах. Тр. Омского с.-х. ин-та № 30, 1973, с. 63-64.

67. Крвавика С. Локализация холинэстеразы в слизистой оболочке рубца.У межд. конгр. биохим.АН СССР, М. 1961, с. 393-395.

68. Кребс Т. Факторы ограничивающие интенсивность клеточного дыхания. Сб. Регуляция клеточного обмена. М., 1962, с. 7-26.

69. Криницин Д.Я. О некоторых анатомо-физиологтческих особенностях пищеварительной системы жвачных животных. Тр. Омского с.-х. ин-та., т. 76, 1968.

70. Криницкий А.Ф. Расчетные и справочные таблицы для биохимических и клинических лабораторий. Госмедиздат УССР. Киев, 1958.

71. Курилов Н.В. и др. Изучение пищеварений у жвачных животных (Мет. указ.) Боровск .1987, с. 40-59.

72. Курилов Н.В., Кроткова А.П. Физиология и биохимия пищеварения жвачных. «Колос», М. 1971.

73. Кусень С.И., Пупин И.Г. Биохимические процессы в ткани рубца крупного рогатого скота. Тр. УМБК. т.2, 1961.

74. Кусень С.И., Дора В.Я., Породко Т.О. Синтез сечовины слизистой оболонци рубця великои рогатой худобы. Доп. АН УССР, № 4,1963, с.508-511.

75. Кушак Р.И. Пишеварительно-транспортная система энтероцитов. Зинатне. Рига. 1983. с. 143-157.

76. Лазаренко М.Ф. Закономерности роста и превращения тканей и органов в условиях культивирования их в организме. «Медгиз», М.,1959.

77. Леви А., Сикевиц Ф. Структура и функция клетки М. Мир. 1971. с.498-553.

78. Лемешко А.М. Кислые мукополисахариды в стенке различных отделов пищеварительного тракта и мочевого пузыря крупного рогатого скота. Тез. 2 конф. по физиологии и биохимии с.-х. животных. Львов, 1963.с. 58-63.

79. Лемешко А.М. и др. Морфологические и гистохимические изменения внутренних органов бычков при скармливании изобутилендимочевины и мочевины. Тр. УСХА. Киев, вып. 216. 1979, с. 69-70.

80. Ленинджер А. Митохондрии, М., 1966.

81. Ленинджер А. Биохимия, М. Мир, 1974.

82. Лихачев А.И. Структура рубца в связи с жирообразованием и жирномолочностью у жвачных. Сб. док. Новосиб. СХИ, 1956.

83. Лихачев А.И. Лоси Западной Сибири. Тр. Новосиб. СХИ, т.18, 1959.223

84. Лихачев А.И. Структура слизистой оболочки рубца у жвачных с различной продуктивностью. Сб. закономерности развития с.-х. животных M.,1962, с. 14-15.

85. Лысиков Ю.А. Субмикроскопические аспекты транспорта нутриентов в тонкой кишке Дисс. канд. М. 1991.

86. Лысов В.Ф. Обмен веществ и энергии у крупного рогатого скота в связи с прдуктивност^ю. Казань .1983. с. 11-41. ,

87. Мартюшов В.М., Алиев А.А., Блинов В.И. Включение С14 уксусной кислоты в липиды содержимого желудочно-кишечного тракта овец при кормлении их гранулированными кормами. Бюлл. ВНИИФБиП с.-х. животных Боровск. 1976.

88. Материкин A.M. Изучение особенностей всасывания углеводов. Методы исследований питания сельскохозяйственных животных. BiFiP , Боровск .1998, с. 163-166.

89. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М. Медицина. 1977. т.1 стр.532-533, т.2 с.40-41.

90. Медведев А.Ю., Материкин A.M. Процессы рубцового метаболизма при введении в рацион коров крахмала и глюкозы. Тр. Свердл. вет станци, 1995, вып. 10, с. 193-196.

91. Медди Э. Биохимические исследоваения мембран М. Мир. 1979.

92. Мещеряков Ф.А. О моторной деятельности пищеварительного тракта овец мериносов. Тез. Всес. сов. по физиологии и биохимии с.-х. животных. М.-Л., 1959, с.87.

93. Минеева Т.И. Электронная микроскопия и гистохимическая характеристика энтероцитов тонкого отдела кишечника новорожденных телят в норме и при токсической диспепсии. Канд дисс. М., 1974.

94. Минушкин O.H., Ардатская М.Д. и др. Исследование короткоцепочечных жирных кислот. Тр.27 гастроэнтерологической конференции. Смоленск. 1999. с. 226-231.

95. Миронов А.А, Комиссарчик Я.Ю., Миронов В.А. Методы электроной микроскопии в биологии и медицине. Наука С.-П, 1994, с.212-215.

96. Морозов H.A. и др. Электронномикроскопическое исследование проницаемости энтероцитов тонкой кишки для коллоидного лантана. Физиол. журн. СССР. 69. 9. 1982, с. 1261-1268.

97. Моро/зов И.Д. и др. Всасывание и секреция в тонкой кишке (субмикроскопические аспекты) М. Медицина. 1988. стр.76-121.

98. Морозов H.A. Структура и функции слизистого слоя тонкой кишки. РАН М. 1998. с. 143-157.

99. Мухин Г.Ф. Развитие пищеварительных органов и связи их с экстерьером и конституцией у осетинских овец при отгоно пастбищном содержании. Тр. Сев Осет. СХИ.,1953, т. 16.

100. Мякина З.М. Развитие и строение сетки крупного рогатого скота. Тр. Чкаловского СХИ, Оренбург, 1952, т.5, с. 112-127.

101. Науменко У.В., Попова Н.К. Серотонин и меланин в регуляции эндокринной системы. Наука. Новосибирск. 1975. с.15-180.

102. Немилов A.B. Гистохимия. Сельхозиздат. М. 1936.

103. Никольский H.H. Механизмы клеточной проницаемости. Мат. симп. Структуры и функции митохондрий. М., 1967.

104. Овсянников А.И. Методика обработки опытных данных по зоотехнии. М. 1966.

105. Отава A.M., Скорохид В.И. Биологическая роль короткоцепочечных жирных кислот в организме жвачных животных. Сельскохозяйственная биология. 1992, № 2, с. 122-129.

106. Пиатковский В. Использование питательных веществ жвачными животными М. Колос. 1978. с. 63-110.

107. Пивняк И.Г., Тараканов Б.В. Микробиология пищеварения жвачных. М. Колос, 1982.

108. Правила проведения работ с использованием экспериментаных животных Москва. 1981.

109. Поликар А. Субмикроскопические структуры клеток и тканей в норме и патологии. Медгиз Л. 1962.

110. Поленов С.А. Спланхническое кровообращение. Росс. журн. гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктоллогии. т.9, № 4, 1999, с.93-10. , ,

111. Поликар А. Элементы физиологии клетки М. Наука .1971.

112. ИЗ. Поликар А. Молекулярная цитология мембранных систем животной клетки. М. Мир, 1972.

113. Поликар А. Молекулярная цитология мембран животной клетки и ее микроокружение. Наука. Новосибирск. 1975.

114. Попов Н.Ф. К физиологсфвцы. ЕНИО, М., 1932.

115. Прокудин A.B. Возрастные изменения Некоторых пищеварительных процессов в рубце овец. Дисс. канд. Омск. 1961.117. де Робертис Э. и др. Биология клетки. М. Мир., 1973, с. 156-160.

116. Саяпин В.П. Регуляция всасывательной функции рубца. Дисс. канд. 1968.

117. Свенсон К., Уэбстер П. М. Клетка. Мир, 1980, с. 115-119.

118. Свидинский A.A. Динамика массы преджелудков и сычуга овец в эмбрионильный период развития. Омский агроунив. Омск. 1997, с. 76-81.

119. Свидинский A.A. Возрастная и породная динамика рубца и сычуга овец в эмбриональный период развития.Научн осн. разв. жив. Омск, 1997, с.58-61.

120. Севастьянова H.A. Столярова А.Г. Некоторые вопросы морфогенеза преджелудков ягнят в ранний постнатальный период развития. Бюлл. ВНИИФБиП с.-х. жив. вып. 1 (9) , Боровск, 1969, с.55-59.

121. Сивкова К., Русев В. Переваривание кормов разной физической формы в рубце. Жив. науки. 16,1, София., 1979.

122. Синещеков А.Д. Биология питания с.-х. животных. Колос, М., 1965.

123. Соловьев A.M. Всасывание и обмен ЛЖК и сахара рубцовой стенкой у овец. Дисс. канд. 1968.

124. Соловьев A.M., Курилов Н.В.Обмен основных энергетических веществ в стенке рубца жвачных. Вопросы адаптации с.-х. животных. Кроснодар, 1971. с. 203-205.

125. Стояновский Q.B. Биоэнергетика сельскохозяйственных животных. Особенности и регуляция. М. 1985.

126. Студенцов А.П. Ветеринарное акушерство и гинекология. Сельхозгиз. М., 1949.

127. Трошин A.C. Современное состояние проблемы клеточной проницаемости. Мат. конф. физиология и патология всасывания в желудочно кишечном тракте. Одесса, 1964, с. 3-7.

128. Тулупов Г.В. Влияние условия кормления на динамику летучих жирных кислот в рубце овец. Тр. Коми АН СССРД978, с. 87-94.

129. Туревский A.A. Кровоснабжение преджелудков крупного рогатого скота. Док. АН УССР, № 11,1963.

130. Туревский A.A. Морфологические и гистохимические данные о функциональной деятельности преджелудков КРС. Мат. конф. АГЭ» с.-х. вузов, М., 1963.

131. Туревский A.A. Сравнительная цитохимия щелочной фосфатазы пищевода, кожи и преджелудков КРС. Док. 19 конф Львов,1963, с. 45-56.

132. Туревский A.A. К вопросу о васкуляризации и инервации проджелудков жвачных животных. Мат. конф. АГЭ с.-х. вузов вып. 2. М., 1963.

133. Туревский A.A. Структурные и гистохимические основы функциональной деятельности преджелудков КРС в онтогенезе Дисс. 1964.

134. Уголев A.M. Физиология и патология пристеночного (контактного) пищеварения. «Наука», Л., 1967.''227 ■1. V ' V

135. Уголев A.M. Организация и регуляция процессов мембранного пищеварения и транспорта. Физиол. жукн. СССР, т.56, № 4, 1970, с.571-662.

136. Уголев A.M. Мембранное пищеварение. «Наука» JI., 1972.

137. Финеан Д. Биологические ультраструктуры. М. Мир, 1970

138. Фокин И.М. К вопросу онтогенеза желудка КРС. Тр. МТИТГП, вып. У1, Пищепромиздат, М., 1959. ^

139. Фокин И.М. Происхождение и развитие желудка КРС. Док. ТСХА вып. 27, 1957.

140. Фрей-Висслинг А. Сравнительная органеллография цитоплазмы. М. Мир, 1976, с.42-49.

141. Чалышев A.B. Всасывание летучих жирных кислот из рубца сетки овец и северных оленей. Сыктывкар. 1995, с. 9-17.

142. Черных А.М, Александров П.Н. ,Алексеев О.В. Микроциркуляция. Медицина, М., 1984, с. 201-204.

143. Чолмерс М.И., Трант И., Войт Ф. Прохождение Na через стенку пищеварительного тракта. Белковый обмен и питание. М. 1980.

144. Чирвинский Н.П. Изменение сельскохозяйственных животных под влиянием обильного и скудного кормления. 1884.

145. ЧукичевИ.П. Физиология человека. М., 1965.

146. Шахламов В.А. Капилляры. М. Медицина. 1971, с.41-83.

147. Шевелев Н.С. Влияние кобальта, меди, марганца и цинка на обмен азота и некоторых микроэлементов у крупного рогатого скота. Автореферат канд. дисс. М. 1969.

148. Шевелев H.C., Грушкин А.Г. К вопросу о механизме всасывания питательных веществ в рубце жвачных животных. Доклад ТСХА, 2000г., вы-п,271., с.248-251.

149. Шевелев Н.С., Грушкин А.Г. Динамика ЛЖК в слюне и крови у валухов в связи с процессами пищеварения и всасывания. Мат. Междунар. Конф. Современные проблемы животноводства. Казань 2000. с.293-295.

150. Шевелев Н.С„ Морозов И.А. Грушкин А.Г. К вопросу о,транспорте питательных веществ рубцовой стенкой. Доклады ТСХА вып.272. М.МСХА 2000, с. 187-190.

151. Шевелев Н.С., Грушкин А.Г., Черемуха Е.Г. Образование, всасывание и пути транспорта ЛЖК у овец. Тез. Третья междунар. Конф. Актуальные проблемы биологии в животноводстве. Боровск. 2000, с. 253255.

152. Шевелев Н.С., Мартюшов В.М., Грушкин А.Г. Роль летучих жирных кислот в обмене веществ и энергии у жвачных животных. Известия ТСХА. Вып. 2. М.2001, с. 160-177.

153. Шевелев Н.С. ,Грушкин А.Г., Черемуха Е.Г. Суточная динамика образования и всасывания ЛЖК в рубце у валухов. Материалы методической и научной конференции МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. М. 2001, с. 192-194.

154. ШевелевН.С., Морозов И.А., Грушкин А.Г., Ветрова Л.Ю. Гормональная регуляция транспортных процессов в слизистой оболочке рубца жвачных животных. Известия ТСХА вып.4. М. 2001, с. 152-159.х 229 ч

155. Шевелев Н.С., Грушкин А.Г., Черемуха Е.Г. Метаболизм ЛЖК в организме валухов. Сб. научн. трудов «Современные проблемы в зоотехнии». МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. М. 2001 с.34-42.

156. Шевелев Н.С., Грушкин А.Г., Полякова Е.П., Черемуха Е.Г. Образование, всасывание и пути транспорта ЛЖК у овец. Доклады международной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве». Боровск. 2001, с. 215-223. ,

157. Шевелев Н.С. Морозов И.А., Грушкин А.Г., Черемуха Е.Г. Визуализация летучих жирных кислот в слизистой рубца овец при использовании методов электронной гистохимии. Доклады ТСХА вып. 273,ч.2, М. 2001, с.43-46.

158. Шевелев Н.С., Морозов И.А., Грушкин А.Г., Черемуха Е.Г. Морфо-функциональные изменения слизистой рубца жвачных в динамике всасывания питательных веществ. Тез. докл. 18 съезда физиологичекого общества им. И.П. Павлова. Казань. 2001, с. 457.

159. Шеремет З.И. Пищеварительные и обменные функции желудочно-кишечного тракта у КРС. Физиология питания с.-х. животных. М.,1958.

160. Шеянова Т.М. Микроскопические и ультраструктурные механизмы транспорта питательных веществ через эпителий преджелудков овец. Сб. Функц. макро- и микростр. орган, физиол. и биохим. иссл. 1980, с. 133-134.

161. Шубникова Е.А. Функциональная морфология тканей. М. 1981, стр. 76-80.

162. Щеголев С.Я., Коршунов В.Н., Курилов Н.В. Всасывание продуктов рубцовой ферментации в кровь при разных соотношениях грубых и концентрированных кормов в рационе бычков. Бюлл. ВНИИФБиП с.-х. жив. вып. 1 (53), 1979, с. 13-14.

163. Шульц Б.Д. К вопросу эмбриогенеза и кровоснабжения желудка крупного рогатого скота. Дисс. 1964.х 230

164. Эннисон Е.Ф., Льюис Д. Обмен веществ в рубце. Сельхозиздат. М., 1962

165. Яремко Е.Е.Изменение ультраструктуры микроворсинок кишечного эпителия при всасывании глюкозы. Физиол. журн. СССР т. 54, 1968, с.603-606.

166. Allen M.S. Relationship betwen fermentation acid production in the rumen and the reguirement for phyysically effective fiber. J. Dairy Sc., 1997, v. 80, №7, p. 1447-1462

167. Annison E.F.and Rennigton R.I The metabolism of n-valeric aicd and some branched chain acids by sheep tissues in vitro. The biochemical journal, 1952, v.52, №.1, IX.

168. Annison E.F., Linzell J.Z. The oxidation and utilisation of glucose and acetate by the mammary gland of the goat in relation to their over-all metabolism and to milk formation. J. Physiol (Eigl), 1964, 175, №3, p. 372-385.

169. Armstrong D.G., Blaxter K.L., Graham N.M. The heat increments of mixtures of steam volatile fatty acids in fasting sheep. Brit.J.Nutrit., 1957, v.l 1, №.4, p.392-408.

170. Baldvin R.L. Use of isolated ruminal epithelial cells in the study of rumen metabolism. J. Nutrit.,1998, v. 128, № 25. p.2935-2863.

171. Bahr G.F. Continued studies about the fixation with osmium tetroxide. Electr Stains IV, Exp. Cell Research, 1955, 9, p. 277-285

172. Bahr G.F. Quantrastive electron microsoopy. Academic Prese, Sew York and London, 1966, p. 137-151.

173. Barcroft I. Physiological action of acetic acid in living tissues. Nature, 1943, v.l51,№ 3828, p.304.

174. Bauman D.E. et al. Propionate production in the rumen of cows fed cither a control or high-grain, lowfiber diet. "J. Dairy Sci", 1971,54, 9, p. 1282-1287.

175. Baumber J., Denjes A. Acetat-i-C14 utilisation by brown fuot from hamsters in cold esposure and hibernation. Canad. J. Biochem., 1964, 42, 10, p. 1397-1401.

176. Mc. Analli R.A. Absorption of volotile acids from the alementary troch of the sheep and other animale. The Journal of Experimental biology, 1944. v,20, № 2, p. 120-129.

177. Phillpson A. T. The absorption of sodium ortfao-j odohippurate from the rumen of lambs The Journal of rxperimental Biology, 1944. v.20, №.2, p. 132134.

178. Beever D. Prediction on the end products of digestion. Ruminant digestion and feed evaluation, 1978,9,1-9,16.

179. Bergmaen E.N. Physio. Rev., 2,1990, p. 567-590.

180. Binder H.J., Mehta P. "Gastroenterology".-1989.-Vol. 96.- p.989-996.

181. Bines J.H., Hatr J.C. The response of plasma insulin and other hormones to intraruminal infusion of VFA mixtures in caltle. Can. J. Animal Sci, 1984, 64, p. 304-305.

182. Bloomfield R. A. Kearly E.O., Creash D.O., Muhrer M.E. Ruminal ph and absorption of ammonia and VFA. J.Animal Sci., v.22, № 3, 833, 1963.

183. Bouchat C. et al. Effect of fasting on blood composition and nitrogen losses in the adult sheep depending on previous diet and body weirht. Reprod.Nutrit. Developm., 1980, 20, IA 77-92.

184. Capote F.A. Hentges I. F. Diet effect on ruasinant forestomach structure., Ceiba, 1967, 13, №1,9-37.

185. Carroll E.F., Hungate R.E. The magnitude of the microbial fernentation in the bovine rumen. Applied Microbiol, 1954,2, № 4, 205-214.

186. Cheng K.E., Wallace R. The nechanism of passage of endjgenous urea through the rumen wall and the role ureolitic epithelia bacteria in the urea flux. Brit.J, Nutrit., 1979,42, 3. 553-557.

187. Crane R. K., Forstner G., Eicholz A. Studies on the mechnisms of the intestinal absorption of eugars. Biochcem. Biophis. Acta, 1965, v.109,№ 2., p.467-477

188. Cummings J.H. "Jut.-1981.-Vol.22.- p.763-779.

189. Cummings J.H. "Scan J. Gastroenterol.-1984.-Vol.19, p.89-99.

190. Danielli I.F., Hitchcock M., Marshall R.A., Phillipson A.T. The mechanism of absoapption from the rumen ar by the behayiour of acetic, propionic and buteric acids, J. Jxp. Biol., 1945. 22, 1-2, p.75-94.

191. Dobson M.S., Broun W.C.B., Dobson A., Phillipson A.T. A histological study of the organization of the rumen epithelium of sheep. Guart. Exptl., Physiol, 1956,41, № 3, p.247-?53.

192. Dobson A. Digestive Physiolory and Nutriction of the Ruminant, London, 1961, p. 68-78

193. Dobson A. Blood flow and absorbtion from the rumen Qiarterly J. Experimtntal Physiology, 1984, 69. p.599-606.

194. Dragulici V. Modificari Histopatalogice in mucosa rumenului la mieii indrasati cu concentrate. Seminarul «Ameliorarea, tehnologia si patologia rumegatoarelor», Cluj-Napoca, 1986, t. 11, p. 245-247.

195. Elliot J.M. Propionate metabolism and vitamin B12. Digestive physiology and metabolism in ruminants. MTP Pcess LTD., Lancaster, 1980, p.485-503.

196. Ellenberger W. Hanndbucb ver vergleichender Mikroskopischen anatomie der Hauatiere. Berlin, Paul Parey, 1911, Bd.3, S,144»

197. Elsden S.R. and Phillipson A.T. Ruminant digestion.Annual Review of Biochemistry, 1948, v. 17, p. 705-726

198. Engclharolt W.V., Rechkemmer J. Absorbtion of inorganic ions and short chain fatty acid in the colon of mammals. Intestinal transport. Berlin ocnd Heidelberg, Spinger-Verlag, 1983, p.26-45.

199. Engelhardt W.V.-in: Philiipson A.T. Physiology of digestion and metabolism in the ruminant oriel press. 1970, S. 132.

200. Enzinger W., Hartfiel W. Auswirkunden destrigeiter Energie- und Proteingehalte dès Futters auf Fermentationsprodukte, Fauna und Schleimhsut des Pansens vonWildwiederkauem im Vergleich zu Hauswiederkauem. Z. Jagdwiss., 1998,44, № 4 p. 201-220.

201. Flatt W., Warner R., Loosli I. Evaluation of several ttchniques used in the study of developing rumen function. Cornell University Agricultural Experimental .Station Memoir, 361 ,1959 p. 3-30.

202. Gabel G., Butter H., Martens H. Regulatory role of AMP in transport of Na+, CI* and short-chain fatty acida across ruminai epithelium. Exp. Physiol., 1999,84,№2p. 333-345.

203. Gardner K., Ssott A. The aurface of the ovin omasum as seen with the scaning electron microscope. Z. Morphol. Tiere, 1971, 70 № 3, p. 229-237

204. Gartner K., Decker P., Hill H. Untersuchungen über die Passage von Harnstoff und ammoniak durch die Hansenwand von Ziegen. Pflugers Arch, ges. Physiol., 1961, 274, p. 281-289.

205. Garvacki S., Krasicka R., Wiechtete M. Wplyw glodzenia na poziom LKT i amoniaku w zwaczu owiec. Weterinaria Warzawe, 1979, 9, s. 67-73.

206. Gemmel R.T. Langerhgans etil in the ruminai epithelium of the sheep. J. Ultrastruct. Res., 1973,42, № 3-4, p.256-259.

207. Gray F. V. The absorption of volatile acids from the rumen. J. Exp. Biol., 1947, № 1-2.

208. Grey F.V. The absorption of volatile fatty acids from the rumen. The inflluence of pH on on absorption. J. Exp. Biol., 1948, p. 25, 135.

209. Gray F.V., Pilgrim A.T., Rodda H.L., Weller R.A. Volatile fatty acids in the rumen of the aheep. Natur. 1951, p. 167-954.234

210. Grey F.V. et al. Functions of the omazum in the stomach of the sheep. J. Exp. Biol., 1954, v. 31 № 1.

211. Habel R.E. The presence of lipids in the epithelium of the ruminant forestomach. American J. Of Veterinary Research. 1959, v. 20, № 76, p. 437441.

212. Hale E.B., Duncan C.W., Huffman C.F. Rumen digeation in the bovine with some obseryation on the digestibility of alfaltor hay. J. Of dairy Sei. 1940 v.23,3 10, p. 953-967.

213. Halse K., Velle W. The relativ Rates of formation of acetic, propionic and butyric acids in the rumen of syeep. Acta Physiol. Scand.,1956, 37, p.3 80-390.

214. Harrop C.F., Phillipson A.T. Nitrogen metabolism in the bovin stomach 1, J. Agr. Sei., 1974,82, p. 399-417

215. Havser H. Uber interessante Eracheinungen am Epithel der Wiedercauervormagen. Zeitsch rift fur microskopischanatomische Forschung, 1929, Bd. 17, H 34, p.533-612.

216. Henrickson R., Habel R.E. The morphology and sulphydryl and disulphide reactions of the epithelium of the bovine forestomach during postnatal development. Anatomical Record. 1961, v. 139, №4, h. 499-507.

217. Henrickson R.C. Developmental changes in thestructure perinatal ruminal epithelium: basal infodings, glycogen, and glycocalyx. Z. Zellforsch. 1970, 109, № 1, h. 15019.

218. Henrickson R.C. Ultrastructure of jvine ruminal epithelium and localization of sodium in tissue. J. Ultrastructur Res., 1970,30, № 3-4, h. 385401.

219. Henrickson R.C. Ruminal epithelium: transport of solutes in the absence of tight jungtions (zonulae occludentes). J. Anat. (London) 106,199,1970.

220. Henrickson R.C. Ultrastructure of ovine ruminal epithelium and localization of sodium in the tissue. J. Ultrastruct. Res. 1971, 30, p.3 85-401.

221. Henrickson R.C., Stacy B.D. A barrier diffusion across ruminal epithelium: a study by EM usinghorseradish. J. Ultrastruct. Res., 1971,24, p.72-82

222. Hogan I.P. The absorotion of ammonia through the rumen of the sheep. Aust. J. Biol. Aci., v.14, № 3, p.448-460, 1961.

223. Holtenius K., Ridderstrale Y., Ekman S. Effecks of short chain fatty acids on the rumen mucosa and on the plasma level of insulin and glucagon. Swed. J. agr., 1994, v. 24, № 2, p. 85-93.

224. Houpt T.R., Houpt K.A. Transfer of urea nitrogen scross the rumen wall. Amer.J.Physiol., 214,1968, p.1296.

225. Huber I.T., Jacobson N.L. Utilization of carbogydrates posterior in the rumen-reticulum of the bovine. J.Dairy Sci., 1960,43,№ 6 p. 875.

226. Huntington J.B. Reynolds P.J., Dairy Sci., 1983, Vol. 66, p.86.

227. Hyden S., Sperber G., Dougherty R.W. (Ed.) Physiology of digestion in the ruminant, p.51. Butterworths, Washington, 1965.

228. Jacson H.D., Taylor I.A., Hatcher B.W., Carter I.H. Formation of ketone bodies from long-chain fatty acids in rumen Epithelium and liver from ketonic sheep. Arch. Biochem. Biophys. V. 105, № 3, 1964, p.575-581.

229. Johnston R.P., Kesler E.M. and Mc Carty R.D. Absorption of organic acids from the omasum . J. Dairy Sci. 1961, v.44, № 2, p. 331-339.

230. Sudan J.D., Ahmed K. The biochemistry of sodium transport. Biol. Rev.,1964, 39, №2, p. 160-193.

231. Kang-Mezuarich I.H. Effect of ingremental urea supplementation on ruminal ammonia concentration and bacterial protein formation. Animal Sci. V. 51, №2,1981, p.422-431.

232. Kauffold P., Piatkowski B. Zur Morphologie der Pansen-mucjsa junger Wiederkauer interschiedlicher Putterung. Arcy. Tierernahr, 1971,21, № 2, p.171-181.

233. Kauffold R. Strukturen und Pfnstnschleimhaut erwechsener Wiederkäuer und ihre Besinflussung durch Ernarungsfactoren. Jena, 1975.

234. Kuenzle C., Jenny E. Biochemie der micro diellen Vormagenverdauung beim Wiederkäuer. 1. Das Verdauungsprinzip der Wiederkäuer. Schweiz. Arch. Tierheilk., 1979,121,10, p.503-519.

235. Kvietus P.R., Jrunger D.N. " Gastroenterology", 1981.-Vol.80, p.962-969.

236. Lana R.P., Rüssel J.B., Van Amburgh M.E. The role of pH in regulating ruminal methane and ammonia production. J.anim. Sc., 1998, v. 76, № 8, p. 2190-2196.

237. Lane M. A., Jesse B.W. Effect of volatile fatty acid influsion on development of the rumen epithelium in neonatal sheep. J. Dairy Sc., 1997, v. 80, № 4, p. 740-746.

238. Lavcer R., Chalupa W., Dickey I.F. An electron microscopic investigation of rumen mucosa. Ultrastructure Research 28,115, 1969

239. Liebich H.-G., Dircsen G., Arbel A. Futterungsabhangige Veranderrungen der Pansenschleimhaut von Hochleistungskungen im Zeitraum von der Trockentellung bis acht Wochen post patrum J.veter. Med. Ser.,A, 1987, T. 34, № 9, p.661-672.

240. Linde B. And Sperber I. A note on the structure of rumen tpithelium. Kungl. Lantruks-Hogskolahs Annaler., 1959,v. 25, p. 321-325.237

241. Lindemann B., Solomon A.K. Permeability of lumial surface of interstinal mucosae cells. J. Ctnner. Physiol., v. 45, № 4, part 1 p. 803-810, 1962.

242. Masson M., Phillipson A.T. The absorption of acetat, propionat and butirate from the rumen of sheep. J. Physiol., 1951,113, 2-3, p. 189-206.

243. Masson M.I., Phyllipson A.T. The composition of the digesta leaving the abomazum of sheep. J. Physiol. 1952, v.l 16, № 1, p. 89-111.

244. Mc Anally R., Phillipson A. Absorption of volatile, acids from the rumen of the sheep. J. Physiol. 1942, v. 101, № 4, p. 13.

245. Mc Carthy R.D., Shaw I.S., Mc Carthy J. et al. Production and absorption of organic acids by the perfustd goat rumen. Proc. Of the Soc. For Exp. Biol. And Med., 1958, 99 № 3, p. 556-559.

246. Mc Donald I.W. The absorption of ammonia from the rumen of the sheep. Biochem. J.,42,p. 584-587,1948.

247. Milner I. The functional development of mammalian mitochondria. Biol. Rev., 1976, v. 51, № 2, p. 181-209.

248. Michel G. Zur functionellen Morphologie der Pansenschleimhaut dtr Wiederkauer. Wiss. Z. Naturwiss. R.,1978, 27, № 2, p. 117-124.

249. Mollerhauer H. Plastic embedding miatures for use in tltctron microscopy. Stain Technol., 1964, 39, № 2, p. 111-113.

250. Orskov E.R. in Digestive Physiology and Metabolism in Ruminants. 1980., p.309-324.

251. Palay S.L., Karlin L.I. An electron microacopy study of the intestinal villus. The pathway of fat absorption. J. Biophys. And Biochem. Cutol., v.5 № 3, p. 373-384, 1959.238 . .

252. Phillipson A.T. The passage of digestion from abomasum of sheep. J. Physiol., 1952, v. 116, № 1, p. 84-87.

253. Pulllinger B.D. and Florey H.W. Some observation of functions of lymphatics. Their behaviour in local oedema. Brit. J. Exp. Path.,v. 16,1935, p.49-61

254. RenMingqiang et al. J. Nayning Agr. Univ., 1998, 21, № 3 p. 76-79.

255. Reynolds E.S. The use of lead citrat at high pH as an electron opagu stain in electron microscopy. J. Cell. Biol., 1963, 171, p. 208-212.

256. Richards F.M., Knowles I.R. Glutaraldehyde as protein crosslinking reagent. J. Mol. Biol., 1968, 37, p. 231-233.

257. Rodolfo Valleyos Escobar. Colmenares Aura. Ultrastructure and functions of the rumen epithelium in adult dj vines. Acta cient. Venez., 1972,23, № 4, p. 148-154.

258. Roediger W.E.W. et al., "Quart J. Exp. Physiol.- 1986.- Vol. 71. p. 195204.

259. Ruis R. Effect of the consumption of high levels of molasses on the structure and function of the ruminal wall of bulls. Cub. J. agr. Sc., 1989, № 1, p. 79-92.

260. Russel J.B. The importansce of pH in the regulation of acetate to propionate ratio and methane production in vitro. J. Dairy Sc., 1998, v. 81, № 12, p. 3222-3230.

261. Schambye P., Phillipson A.T. Volatile fatty acids in portal blood of sheep. Natur, 1949,164, p. 1094.

262. Schnorr B., Volmehrhaus B. Die Feinstructur des Pansenepithels von Ziege un Rind Zbl. Veterinarmed., 1967, 14, № 9, p. 789-818.

263. Sqhnorr B., Wille K.H. Zonulae occludentes im Pansenepithel der Ziege. Z. Zellforsch., 1234, 1972, p. 39-43.

264. Schruder B., Vussing S., Breves G. In vitro studies on active calcium absorption from ovine rumen. Journal of Comparative Physiology B.v.169 I. 7. 1999. p. 487-494.

265. Scott A., Gardner Isobel C., Fulton D.R., Meinroy G.B. Tight junctions in the stratum basal of ruminal epithelium. Zell-forsch., 1972, 131, № 26, p. 199203.

266. Scott A., Gardner Isobel C. Pappilar form in the forestomach of the sheep. J. Anat., 1973, 116, № 2, p. 255-267.

267. Shiomura Yoco, Tamate Hideo An occurence of a gystlike structure in the sheep ruminal mucosa. Tococu Journal of Agricultural Research, 1980, v. 31, № 2, p. 106-108.

268. Sinclair John H., Kuncel H.O. Variations in post-weanning dtvtlopment of ruminal mucosa lambs. Proc. Soc. Exper. Biol. Med., v. 102, № 1,1959, p. 5761.

269. Smyh D.H., Wrigth G.M. Streaming Potentials in the ratamall intestine. J. Physiol., v. 182, № 3, p. 591-602, 1996.240

270. Solomon A.K. Characterization of biological membranes by eguivalent pores. J. Physiol., v. 51, № 5, part 2, p.3353-3648, 1969.

271. Stallcup O.T., Kreider D.L., Races J.M. Histological development and histochemical localization of enzymes in rumen and reticulum in bovine fetuses. J. anim. Sc., 1990, v. 68, № 6, p.1773-1789.

272. Steven D.H., Marchall A.B. Organisation of the rumen ephithelium. New. Castl7upon-Tyle, Oriel Press, 1970.

273. OSutton J.D., Digestive Physiology and metabolism in Ruminants. Lancaster MFP Press Ltd. 1980.

274. Symposium: Energy utilisation and metabolism of the lactating cow. -J. Dairy Sci., 1985,12, p. 3376-3410.

275. Tacachi Sacata, Hideo Tamate Effect of the intermittent feeding on the mitotic index and the ultrastructure of basal cells of ruminant epithelium in the sheep. Tohoku J. of agricultural research, v. 25, № 3,4, p. 156-163, 1974.

276. Tamate Hideo et al. Scaning electron microscopic observation on the surface structure of the bovine rumen mucosa. Arch. Hystol. Jap., 1971, v. 33, № 4, p. 273-282.

277. Tamate Hideo, Kikuchi Tacei. Presense of the expensive fold-lice structures on the luminal surface of the rumen epithelium. Jap. J. Zootechn. Sci., 1971, v. 42, p., № 6.

278. Tamate H., Chiomura V., Sacata T. Scaning electron microscopic observation of the sheep ruminal mucosa at its epithelium cennective tissue interface. Tocoku241

279. J. Agr. Res., 1979, v. 30, № 2, p. 57-65.

280. Tamate H., Sacata T. Epithelium-propria interface of ruminant forestomach. Ann.Rech. vt., 1979,v. 10, № 2, 3, p. 482-484.

281. Tillman Allen D., Sidnhy Kirpal S. Nitrogen metabolism in ruminants: rate of ruminal ammonia production utilization by ruminants. a review/ J. Animal. Sei., 1969, v. 28, № 5, p. 689-697.

282. Trautmann A. Beitrage zur Physioligie des Wiedtr kauermagens. Arch. Tierernahrung und Tierzucht, 1933, Bd. 9, H. 2, p. 178-193.

283. Trompson D.J., Beever D.E. In Digestive Physiology and metabolism un Ruminants. Lancaster: MFP Press Ltd. 1980.

284. Versar B., Mc Dugall E. Absorption from the investine. London, 1936.

285. Volmehrhaus B., Schnorr B. Electronmikroscopische Untersuchungen an Lisosomos im Pansen epithel der Ziege, 111 Milt, zur Hauswiederkauer. Ztbl. Vetermed.,14№8, 1967.

286. Varner R., Loosli I. Dietary factors influencing the development of the ruminant stomach. J. Agricultural and Food Chemistry, v. 4, № 9, 1956, p. 788792.

287. Weyrauch K.D., Schnorr B. Der Papillär corper der Wormagenschleimhaut Bei Schlaf und Ziege. Lbl. Veterinarmed., 1979,v. 8, № 3,p. 248-261.

288. Weyrauch K.D., Schnorr B. Rasterelektronenmicroskopische Darstellung des Papillarkopers derVormagenschleimhaut Bei Schlaf und Ziege. Anat. Anz., 1980,148, p. 597-601.

289. Wheeler W. Gastrointestinal Tract pH environment and the influence of the buffering materials on the performance of ruminants. J. Anim. Sei., 1980, 51, p. 224-235.

290. Wille K.- H., Schummer A., Schnorr B. Uber das metrschichtige Plattenepithel der Vorderdarmes von Schwein, Pferd and Hauswiederkauer. Schweis. Arch. Tiererheilk., 1971, p. 113.242

291. Wille K.- H., Sch norr B., Merl E. Uber die Feinstructur des Epithels der pars proventicularis von Pferd. Lbl. Veterinarmed., 1973, c.2, № 1, p. 61-77.

292. Yano F et al. Transport of calcium, phosphorum and magnesium across the rumen wall. Japan. J. Zootechn. Sei., 1978, v. 49 № 9 p. 680-686.

293. Zitnan R. et al. Vplyv prijmu rozneho mnozstva a struktury a\sacharidov na vyvoj bachorovych papil teliat. J.of farm animal sei.- Nitra, 1998, № 31, p. 119-125.