Мультиплексный анализ аллерген-специфических иммуноглобулинов человека на биологическом микрочипе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат наук Фейзханова, Гузель Усмановна

  • Фейзханова, Гузель Усмановна
  • кандидат науккандидат наук
  • 2014, Москва
  • Специальность ВАК РФ03.01.03
  • Количество страниц 90
Фейзханова, Гузель Усмановна. Мультиплексный анализ аллерген-специфических иммуноглобулинов человека на биологическом микрочипе: дис. кандидат наук: 03.01.03 - Молекулярная биология. Москва. 2014. 90 с.

Оглавление диссертации кандидат наук Фейзханова, Гузель Усмановна

Оглавление

Список сокращений

1 Введение

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Аллергические реакции

2.1.1 Аллергические реакции I типа

2.1.2 Аллергические реакции II типа

2.1.3 Аллергические реакции III типа

2.1.4 Аллергические реакции IV типа

2.2 Методы аллергодиагностики

2.2.1 In vivo методы

2.2.2 In vitro методы

2.2.3 Анализ аллерген-специфических иммуноглобулинов на микрочипах

2.3 Биологические микрочипы

2.3.1 Белковые микрочипы

2.3.2 Методы иммобилизации белков на микрочипах

2.3.3 Гидрогелевые Микрочипы

3 Материалы и методы

3.1 Приборы и реактивы

3.2 Очистка экстрактов аллергенов

3.3 Осаждение белков ТХУ

3.4 Белковый электрофорез

3.5 Изготовление биочипов

3.6 Получение конъюгата антител с флуоресцентными красителями

3.7 Иммуноанализ на биологических микрочипах

3.8 Флуоресцентные измерения

3.9 Иммуноферментный анализ сывороток крови

3.9.1 Определение содержания общего IgE в сыворотке с помощью ИФА

3.9.2 Определение содержания slgE в сыворотке с помощью ИФА

4 Результаты и их обсуждение

4.1 Выбор аллергенов

4.2 Одновременное определение набора slgE на биочипе

4.2.1 Подбор условий иммобилизации аллергенов

4.3 Разработка метода одновременного анализа slgE на биочипе

4.4 Количественное определение slgE и общего IgE

4.4.1 Использование для расчета концентраций * б^Е «статистических»

калибровочных кривых

4.4.2 Расчет концентраций б^Е при помощи калибровочной кривой для общего ^Е

4.5 Анализ частоты встречаемости аллергических заболеваний

4.6 Анализ индивидуальных аллергенных белков на биочипе

4.7 Количественное определение 22-х б^Е на биочипе

4.8 Оценка аналитических характеристик метода

4.9 Сравнение разрабатываемого метода с коммерческой референсной тест-системой

5 ВЫВОДЫ

6 Благодарности

7 Список литературы

Список СОКРАЩЕНИЙ

Bind Silane - (З-метоксисилил)пропилметакрилат ELISA - твердофазный иммуноферментный анализ IgE - иммуноглобулин Е

IT AM - иммунорецепторный тирозин-активируемый мотив MAST - множественный аллергосорбентный тест МНС - главный комплекс гистосовместимости PBS - фосфатно-солевой буфер

PBST - фосфатно-солевой буфер с 0,1% содержанием Tween-20

PVA - поливиниловый спирт

PVP - поливинилперилидон

RAST - радиоаллергосорбентный тест

ROC-анализ - анализ с применением характеристических кривых (ROC-кривых)

slgE - аллерген-специфический иммуноглобулин Е

TEMED - тетраметилэтилендиамин

АПК - антиген-презентирующие клетки

АПК - антиген-презентирующие клетки

АСИТ - аллерген-специфическая иммунотерапия

БСА - бычий сывороточный альбумин

ДСН - додецилсульфат натрия

ИМБ РАН - Институт Молекулярной Биологии им. В.А. Энгельгардта РАН

ИФА - иммуноферментный анализ

KB - коэффициент вариации

ME - международные единицы

ПААГ - полиакриламидный гель

ТХУ - трихлоруксусная кислота

ЭР - эндоплазматический ретикулум

Рекомендованный список диссертаций по специальности «Молекулярная биология», 03.01.03 шифр ВАК

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Мультиплексный анализ аллерген-специфических иммуноглобулинов человека на биологическом микрочипе»

1 Введение

В настоящее время аллергические заболевания являются крайне важной медицинской и социальной проблемой во всем мире. Около 30% представителей европейской популяции страдают от различных проявлений аллергии. Распространение аллергии и рост заболеваемости связаны с состоянием окружающей среды и возрастающим количеством продуктов технологической деятельности людей, попадающих в организм человека вместе с пищей, питьевой водой и воздухом. За последние три десятилетия заболеваемость аллергией удваивается каждые 10 лет. Существует острая необходимость в полной и точной диагностике аллергических и связанных с ними заболеваний, а также в эффективном контроле состояния пациентов. Это может быть реализовано при использовании современных лабораторных методов, тест-систем нового поколения и инновационных технологий, включающих методы выделения и получения аллергенов, а также применение методов мультиплексного анализа на основе биологических микрочипов. Гидрогелевые биочипы, разрабатываемые в ИМБ РАН, могут обеспечивать проведение эффективного анализа различных биологических объектов. В настоящее время гидрогелевые биочипы находят применение в различных областях фундаментальных и прикладных наук, включающих молекулярную биологию, биохимию, медицину и др.

Целью диссертационной работы являлась разработка метода одновременного определения содержания аллерген-специфических иммуноглобулинов класса Е и общего иммуноглобулина Е в ходе одного анализа образца сыворотки крови человека на биологическом микрочипе.

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Аллергические реакции

Основная функция иммунной системы - распознавать и элиминировать инфекционные агенты (патогены), а также свести к минимуму вызываемые ими повреждения. Иммунная система, в том виде, в котором она существует сейчас, возникла под влиянием эволюционного давления со стороны патогенных микроорганизмов. По ряду причин защитная система может иметь врожденный или приобретенные дефекты, которые можно подразделить на несколько категорий: аутоиммунитет, иммунодефицит, гиперчувствительность. В случае гиперчувствительности иммунная система отвечает на безвредные для организма вещества. Зачастую, реакции на такие вещества могут вызвать гораздо более серьезные повреждения, чем любые патогены [1].

Обычно, реакцию гиперчувствительности иммунной системы на повторный контакт с антигеном называют аллергией. В первую очередь, аллергию можно классифицировать по времени, которое требуется для проявления эффектов гиперчувствительности после контакта с аллергеном [2]. Реакция немедленного типа проявляется в течение нескольких минут [3], реакция замедленного типа -вплоть до нескольких суток [4].

Традиционная классификация реакций гиперчувствительности была предложена Джеллом и Кумбсом в 1963 году [5]. В ее основе лежат различия в иммунологических механизмах клинических проявлений гиперчувствительности. Реакции гиперчувствительности можно разделить на четыре типа: реакции, опосредованные аллерген-специфическими иммуноглобулинами класса Е (I тип), реакции, основанные на взаимодействии антиген-антитело (II тип, или цитотоксическая гиперчувствительность), реакции с участием иммунных комплексов (III тип, или комплемент-опосредованная), и клеточная гиперчувствительность (IV тип). С точки зрения клинических проявлений IV тип аллергии отличается от трех других - именно клеточная гиперчувствительность является причиной задержанной реакции [6].

2.1.1 Аллергические реакции I типа

Наиболее изучаемыми реакциями гиперчувствительности являются реакции I типа из-за их распространенности, скорости реакции и потенциальной опасности. В настоящее время термин «аллергия» используют для определения реакции гиперчувствительности I типа. В свою очередь термин «аллерген» подразумевает некое вещество, способное стимулировать выделение плазматическими клетками специфичных к нему иммуноглобулинов класса Е и взаимодействовать с ними [7].

В норме иммуноглобулины Е (1§Е) являются способом защиты организма от паразитических инфекций (гельминтозов) [8]. Наличие паразитов вызывает повышение уровня как общего 1§Е, циркулирующего в крови, так и специфических иммуноглобулинов к антигенам паразитической природы. Механизм защиты заключается в индукции локальных воспалительных реакций в местах . присутствия чужеродных организмов с последующим привлечением иммунных клеток для их уничтожения. В ряде случаев возможна предрасположенность к развитию немедленной гиперчувствительности при воздействии наиболее распространенных антигенов окружающей среды, порой наследственная [9-11].

Любой патоген, попадая в организм, вызывает нормальную реакцию гуморальной иммунной системы и приводит к появлению и наработке специфичных к нему иммуноглобулинов - преимущественно, в и М классов [7]. Однако, при наличии предрасположенности к аллергии дефекты в системе регуляции продукции антител способствуют повышению уровня специфических к патогену ^Е, даже если антиген не имеет паразитарной природы [12]. Такие дефекты являются причиной аллергических реакций I типа [13,14].

В 1919 году было установлено наличие в сыворотке крови фактора, способного реагировать с аллергенами. Изучение реакций, наблюдаемых в организме после переливания крови, показали, что в случае наличия у донора гиперчувствительности к какому-либо веществу она передается реципиенту [15].

Иммуноглобулины 1§Е были независимо открыты двумя исследовательскими группами в Швеции и Америке в 1970-х годах. В ранних работах было показано,

что некие реагины (атопические антитела) ответственны за высвобождение гистамина под действием аллергенного вещества [16,17]. Впервые роль аллерген-специфических антител была приписана иммуноглобулинам класса D (IgD) [18,19], однако позже данная гипотеза была опровергнута. Дальнейшие эксперименты на лабораторных животных, проводившиеся группой Ишизака в США, показали, что существует компонент сыворотки, удаление которого снижает активность реагинов [20]. В то же время, было впервые выдвинуто предположение о нахождении аллерген-специфических антител ранее неизвестного класса, которые были определены, как класс Е иммуноглобулинов. Однако, молекулы IgE еще не были выделены и охарактеризованы.

Независимо от Ишизака и др. шведская исследовательская группа выделила и охарактеризовала неизвестный класс антител, проявляющий уникальную специфичность к ряду антигенов [21]. Позже оказалось, что антисыворотка, использованная группой Ишизака для удаления реагинов, реагирует с выделенными в Швеции иммуноглобулинами. В 1968 году Всемирная Организация Здравоохранения объявила об открытии нового класса антител [22].

Наработка IgE в количестве, необходимом для исследовательской работы, была затруднена его низкими концентрациями: 0,085-0,35 мкг/мл для здоровых людей [23]. Ситуация значительно облегчилась после нахождения IgE-миеломы [24], позволившей получать IgE in vitro [25]. Иммуноглобулины класса Е - гамма-глобулины, состоящие из четырех цепей (две легкие, две тяжелые), обладающие молекулярной массой приблизительно 190 кДа и состоящие на 12% из углеводов [26].

Иммуноглобулины IgE проявляют структурно-функциональные и физико-химические свойства, аналогичные другим иммуноглобулинам, однако отличаются уникальными особенностями - при низкой концентрации в сыворотке крови они с высокой авидностью связываются с базофилами и тучными клетками. Подобно иммуноглобулинам других классов, легкие и тяжелые цепи IgE начинаются вариабельным доменом; попарно, один вариабельный домен легкой и тяжелой цепи формируют антиген-связывающий сайт. Главное отличие

заключается в структуре Fc-фрагмента: иммуноглобулин Е тяжелее IgG (150 кДа), что объясняется наличием одного дополнительного концевого домена тяжелой цепи Се4 (СН4), играющего центральную роль в механизме аллергической реакции. На уровне четвертичной структуры IgE является мономером. Известные структуры Fc-фрагмента IgE установлены методом рентгено-структурного анализа [27].

Низкий уровень IgE, циркулирующего в сыворотке крови, объясняется как низким содержанием IgE-секретирующих плазматических клеток, так и малым периодом полураспада молекулы в организме, порядка нескольких суток [28,29].

Инкубация IgE или антител против IgE, меченых радиоактивной меткой, выявило два основных клеточных партнера - меченые пробы с высокой аффинностью взаимодействуют с базофилами и с тучными клетками [30]. Базофилы - циркулирующие в крови большинства позвоночных гранулоциты. Данные клетки имеют цитоплазматические гранулы, содержащие большое количество медиаторов воспаления. Тучные клетки (мастоциты) - рассеянные по соединительной ткани клетки иммунной системы, так же являются гранулоцитами. Они в большом количестве присутствуют в поверхностных слоях эпидермальной ткани, например в желудочно-кишечном тракте или респираторной системе [1].

В работе Ochiai и др. [31] впервые было показано наличие мембранных рецепторов на определенных клетках иммунной системы, внеклеточные домены которых способны образовывать комплекс с IgE. Базофилы, равно как и тучные клетки, экспрессируют два типа рецепторов - FceRI и FcsRII [32,33]. Оба рецептора обладают высокой изотипической селективностью, вступая в реакцию исключительно с IgE, однако значительно отличаются по термодинамическим параметрам комплексообразования и играют различную физиологическую роль.

FcsRI, или высокоаффинный IgE-рецептор, был найден в мембранах базофил, мастоцитов, клеток Лангергарнса и эозинофилах. Одна клетка базофилов человека имеет от 40000 до 90000 копий данного рецептора на своей мембране. Рецептор состоит из четырех полипептидных цепей, двух связанных цистиновыми

остатками у-цепей, одной а и одной (3-цепи [34]. Две у-цепи формируют ковалентный димер, играющий регуляторную роль - их С-концы расположены в цитозоле и несут так называемый иммунорецепторный тирозин-активируемый мотив (1ТАМ) [35], являющийся мишенью для фосфорилирования сигнальными тирозин-киназами и запускающими сигнальный каскад, приводящий к дегрануляции гранулоцита. Иммуноглобулин Е-связывающую функцию играет а-цепь, на 1Ч-конце которой, экспонированной во внеклеточное пространство, присутствуют два достаточно гомологичных ^Е-связывающих домена а1 и а2, относящихся к структурному типу иммуноглобулинов [36]. Самой протяженной является (3-цепь, четыре раза проходящая через мембрану и играющая роль каркасного полипептида, связывая лиганд-связывающую а-цепь и регуляторные (3-цепи в единую структуру.

Поверхность контакта с Бс-фрагментом иммуноглобулина Е осуществляется а1- и а2- попарно с двумя константными доменами Се4 тяжелой цепи 1§Е, при этом Бс-фрагмент антитела меняет свою конформацию. Эксперименты, проводимые с растворимым фрагментом высокоаффинного ^Е-рецептора вБсеМ показали, что образуемый комплекс имеет бинарную структуру и обладает достаточно низкой константой диссоциации - порядка 10"10 М [37]. Циркулирующий уровень свободных 1§Е в сыворотке составляет порядка 10"7 М, и высокая аффинность позволяет, не смотря , на низкую концентрацию иммуноглобулина Е, обеспечить его высокую степень связывания с соответствующими клетками иммунитета.

Роль РсеЮ в механизме гиперчувствительности I типа подтверждается в экспериментах с лабораторными животными. Мыши, нокаутные по соответствующим генам и не способные экспрессировать высокоаффинный ^Е-рецептор, имеют нормальный уровень мастоцитов и базофил и не проявляют каких-либо симптомов анафилаксии при иммунизации аллергенами и их последующими введениями [38].

Образование бинарного комплекса между 1§Е и РсеМ само по себе не является триггером для дегрануляции гранулоцитов. Экспериментально доказано,

что тирозин-киназный сигнальный путь, способствующий освобождению содержимого цитоплазматических гранул во внеклеточную среду, запускается кросс-линкингом двух рецепторов. Механизм кросс-линкинга заключается в образовании бинарных комплексов между двумя иммуноглобулинами Е одинаковой антиген-специфичности и двумя рецепторами, а так же связывания данных комплексов аллергеном через ЕаЬ-фрагменты ^Е [39]. Необходимый для запуска воспалительного процесса иммунный комплекс имеет тройную структуру «антитело-антиген-антитело», и, следовательно, з^Е должны обладать разной эпитоп-специфичностью (либо антиген должен иметь два идентичных эпитопа).

Цитоплазматические части Р- и у-полипептидов высокоаффинного рецептора ассоциированы с рядом протеинтирозинкиназ (РТК), активирующихся после кросс-линкинга двух рецепторов иммунным комплексом и фосфорилирующих остатки тирозина [40] как в 1ТАМ-последовательности у-полипептидов, так и (3-полипептидов. Параллельно осуществляется фосфорилирование и активация фосфолипазы С. Следующей стадией активации гранулоцитов является запуск ряда вторичных мессенджеров [41]. Запускаемый механизм метилирования мембранных липидов способствует повышению текучести клеточной мембраны и активации кальциевых каналов. За счет гидролиза фосфолипазой С фосфатидилинозитола, образуемый инозитолтрифосфат активирует кальциевые каналы эндоплазматического ретикулума (ЭР), что так же значительно повышает уровень , катионов Са в цитозоле. Запускается сборка микрофиломентов и микротрубочек, необходимых для транспорта гранул к клеточной мембране,

24*

параллельно Са -опосредованный сигнальный путь способствует анаболизму арахидоновой кислоты и повышению уровня простагландинов и лейкотриенов. Последующая активация мембран-связанных аденилат-циклаз способствует повышению уровня другого вторичного мессенджера,

циклоаденозинмонофосфата (сАМР). сАМР активирует ряд белков гранулярных мембран, обеспечивая возможность слияния гранул с клеточной мембраной. При этом, уровень сАМР для должного прохождения процесса дегрануляции должен упасть незамедлительно после активации сАМР-зависимых белков ЭР [42].

Один из препаратов, применяемых для купирования симптомов аллергий, натриевая соль кромоглициеновой кислоты, обладает аддитивным эффектом стабилизации мембран тучных клеток за счет как снижения цитоплазматического уровня Са , так и повышения и стабилизации уровня сАМР.

Первичная роль кросс-линкинга двух FcsRI-рецепторов подтверждается в лабораторных экспериментах над культурами мастоцитов или базофил in vitro. Искусственно высвобождение медиаторов воспаления можно вызвать действием на гранулоциты антиизотипических anti-IgE-антител [43]. Аналогичные результаты можно получить с применением сшивающих химических реагентов, либо воздействием ионофоров в среде с высоким содержанием Са .

Другой тип IgE-рецепторов, FcsRII, не влияет на симптоматику аллергических реакций и экспрессируется прежде всего в В-клетках [44]. Низкоаффинный IgE-рецептор, или CD23, играет прежде всего регуляторную функцию в синтезе IgE. Рецептор состоит из одной полипептидной цепи, С-конец которой располагается во внеклеточном пространстве [45], и обладает IgE-связывающим доменом структурного типа кальций-зависимых лектинов. Эксперименты с растворимым фрагментом, непосредственно лектиновым доменом данного рецептора sCD23, показали, что константа диссоциации комплекса с IgE составляет порядка 10"6 М [46]. С другой стороны, реакция комплексообразования не предполагает изменения конформации молекулы иммуноглобулина. Сайт связывания расположен в области между третьим и четвертым константными доменами Fc-фрагмента IgE, что способствует образованию комплекса между рецептором и иммуноглобулином в отношении 2:1. Кроме того, ближе к мембране N-конец рецептора имеет мотив лейциновой молнии, обеспечивающий возможность тримеризации рецептора и формирования структуры с высокой авидностью.

Однако связывание одного иммуноглобулина Е двумя лектиновыми доменами одного тримерного рецептора исключается исходя из структуры комплекса, полученного по результатам РСА. Кросс-линкинг двух В-клеточных FcsRII-рецепторов неким образом способствует запуску их пролиферации. Так же

кросс-линкинг должен осуществляться за счет взаимодействия двух б^Е с аллергеном, однако причины этого пока не выяснены.

Эндопептидазы, осуществляющие протеолиз рецептора во внеклеточной области, высвобождают активный, ^Е-связывающий фрагмент, так же показывающий способность к тримеризации. Его роль в регуляции пула 1§Е остается невыясненой, однако сравнение структур комплексов БсгИ и РсеЯН с иммуноглобулинами Е и эксперименты по конкурентному связыванию говорят об их взаимном исключении [47]. Не смотря на практически неперекрывающиеся области контактов с лигандом, рецепторам нужны различные конформации Рс-фрагмента антитела для формирования комплекса. Большинство случаев атопии сопровождается высоким уровнем экспрессии СБ23, и высоким титром зС023 в сыворотке крови [48,49].

Дегрануляция приводит к выбросу во внеклеточное пространство медиаторов воспаления - биологически активных соединений, влияющих локально на состояние клеток тканей и на будущие эффекторные клетки. В неатопическом случае ^Е-связанный иммунный ответ предполагает инициацию воспалительной реакции в области локализации патогена паразитической природы, запуская ряд защитных механизмов, например, оксигенацию сосудов и увеличение проницаемости их стенок. Приток крови способствует увеличению количества клеток иммунной системы, движущихся к патогену и уничтожающих его. Активация подобной системы в отсутствии патогена нежелательна и является причиной симптомов аллергий.

Наиболее распространенным медиатором, сопровождающим аллергические реакции, является гистамин - первичный медиатор воспаления, образующийся в результате декарбоксилирования гистидина. В тучных клетках гистамин составляет порядка 10% от сухого веса гранулы [50]. Являясь достаточно малой эффекторной молекулой он быстро диффундирует в среде и обеспечивает заметный биологический эффект в течение нескольких минут после активации гранулоцитов. Основной мишенью гистамина являются гистаминовые рецепторы I типа Н1, активация которых вызывает сокращение мышц гладкой мускулатуры

(кишечник, бронхи), повышает проницаемость сосудистых стенок и увеличивает секрецию слизи [51]. Однако базофилы и мастоциты в структуре клеточной мембраны содержат гистаминовые рецепторы II типа Н2, активация которых препятствует дегрануляции. Подобная обратная связь позволяет предотвратить чрезмерное повышение концентрации свободного гистамина в плазме крови и локализовать воспалительный процесс.

Лейкотриены и простагландины - вторичные медиаторы, обеспечивающие развитие воспалительного процесса после прекращения секреции гистамина активированными гранулоцитами. Лейкотриены - нециклические производные арахидоновой кислоты, вызывающие сокращение бронхов, повышение уровня секреции слизи и проницаемости стенок сосудов. Простагландины - производные арахидоновой кислоты, имеющие замещенный циклопентильный фрагмент, так же являются активаторами сокращения гладкой мускулатуры. В отличие от гистамина данные медиаторы обладают более продолжительным эффектом действия и эффективностью в целом, показывая сильный биологический эффект уже на наномолярных уровнях. Именно их действием обусловлена длительная симптоматика приступов бронхиальной астмы [52].

Кроме низкомолекулярных соединений, активация гранулоцитов приводит к высвобождению ряда цитокинов. Например, возникающий концентрационный градиент интерлейкинов 1Ь-4, 1Ь-5, 1Ь-6 и ТЫБ-а по механизму хемотаксиса привлекает эозинофилы и нейтрофилы [53]. 1Ь-4 так же способствует увеличению экспрессии ^Е В-клетками. ПМР-а, являясь многофункциональным противовоспалительным цитокином, способен действовать на широкий спектр разнообразных органов и тканей, непосредственно влияя на эндокринную систему, и во многом ответственен за возникновение анафилактического шока [54].

2.1.2 Аллергические реакции II типа

Реакции гиперчувствительности II типа являются цитоксическими. В их основе лежит взаимодействие антител с мембранными эпитопами клетки. Классический механизм заключается в активации системы комплимента и требует

участия специфических антител классов М или в. б^М являются более эффективными инициаторами цитоксической реакции, так как обладают высокой авидностью. Система эндопептидаз-конвертаз, привлеченная к иммунному комплексу на поверхности патогена, через протеолитический каскад формирует мономерные белки, способные к полимеризации в структуре клеточной мембраны [7]. Продукт подобной полимеризации представляет собой канал, через который возможен пассивный транспорт широкого спектра разнообразных соединений. Нарушение полупроницаемости мембраны приводит к осмотическому шоку и лизису патогена. При этом предполагается, что патоген имеет бактериальную природу. Однако в случае аутоиммунных расстройств (таких как системная красная волчанка) либо несовместимости групп крови при ее переливании (из-за различий в структуре гемаглютининов донора и реципиента) развивающаяся гиперчувствительность приводит к негативным последствиям, таким как, например, гемолиз.

С точки зрения аллергодиагностики интерес представляет гемолитическая анемия, иногда развивающаяся как реакция на лекарственные препараты и другие химические агенты [55,56]. Низкомолекулярные соединения и их метаболиты способны адсорбироваться на поверхности эритроцитов или белков, порой образуя прочные комплексы. Получаемый конъюгат имеет ту же природу, что и комплекс гаптен-носитель. Подобные комплексы, не являясь исключаемой антигенной детерминантой организма, могут приводить к возникновению специфичных к ним антител. Соответственно, адсорбция лекарств на мембранные белки красных кровяных телец может спровоцировать активации комплимента и привести к лизису родных клеток собственной иммунной системой [57]. Доказано, что при наблюдении симптомов гемолитической анемии, таких как повышение билирубина в крови, гипертензия легочной артерии и пр., отмена приема лекарственных препаратов приводит к их исчезновению. .

2.1.3 Аллергические реакции III типа

Аллергии III типа - реакции, наблюдаемые при большом избытке антигена по отношению к специфичным к нему антител [58]. Так как каждое антитело

имеет два антиген-связывающих фрагмента Fab, вариация размеров образуемых при контакте с антигеном иммунных комплексов достаточно велика. Большие иммунные комплексы, например, имеющие циклическую структуру, в норме фагоцитируются макрофагами. Подобные системы не способны распознать небольшие иммунные комплексы, образуемые при недостатке специфичных иммуноглобулинов. Однако их наличие может активировать СЗ-конвертазу, запуская каскад реакций, приводящий к активации многих белков системы комплимента. Данные соединения являются анафилотоксинами, вызывающими дегрануляцию тучных клеток взаимодействием с определенными рецепторами. Одновременно ряд белков комплемента-хемоаттрактантов привлекают к месту локализации иммунного комплекса нейтрофилов.

Подобные иммунные комплексы обычно имеют четкую локализацию и оседают на фильтрующих канальцах почечных клубочков, следовательно, их фагоцитирование затруднено. Из-за затруднений с фагоцитозом нейтрофилы осуществляют рилизинг литических ферментов, как следствие развивается не только воспалительная реакция за счет дегрануляции гранулоцитов, но и повреждение ткани из-за начала осуществления литических процессов в родных клетках. Данный тип гиперчувствительности - причина симптоматики многих аутоиммунных заболеваний, самый яркий пример которых - системная красная волчанка, обусловленная присутствием антител к ДНК [59,60]. Однако аналогичный механизм объясняет реакцию на пенициллин или сульфамиды.

2.1.4 Аллергические реакции IV типа

Уникальным примером реакций гиперчувствительности является гиперчувствительность IV типа. Ее отличие заключается в кардинально ином механизме, ключевую роль в котором играет клеточный иммунный ответ.

Антиген, попадающий в организм, в случае наличия специфичных антител опсонизируется ими, и иммунный комплекс фагоцитируется макрофагами. В дальнейшем после протеасом-зависимого гидролиза чужеродных белков их фрагменты презентируются на внешнюю сторону мембраны макрофага через главный комплекс гистосовместимости II типа (МНС II). Так же роль антиген-

презентирующих клеток (АПК) могут играть клетки Лангерганса, присутствующие в эпителии [61]. Реакцию можно разделить на две стадии - фазу сенсибилизации и эффекторную фазу. Экспонированный антиген, условно обладая двумя контактными поверхностями, одна из которых связана с МНС II АПК, взаимодействует с Т-клеточным рецептором (СВ4+)-Т-клетки. Практически сразу макрофаг или клетка Лангерганса начинает секретировать 1Ь-12, запускающий механизм пролиферации Т-клеток с рецептором соответствующей специфичности, Т-клетка же секретирует ряд цитокинов (1Ь-2, ШЫ-у), влияющих на пролиферацию клеток других кластеров дифференциации. В патологическом случае наступает своеобразный «цитокиновый шторм», запускающий дифференциацию моноцитов в макрофаги и формирующий градиент сигнальных молекулов-интерлейкинов для миграции клеток иммунной системы к очагу контакта. Параллельно АПК повышает уровень экспрессии МНС II, с еще большей эффективностью осуществляя экспозицию антигена и активацию соответствующих Т-клеток. Подобное усиление межклеточной сигнализации способствует развитию интенсивного воспалительного процесса, параллельно которому растущее число макрофагов приводит к формированию гранулемы и появлению многоядерных гигантских клеток. Секретируемые при этом в избыточном количестве литические ферменты неспецифически повреждают окружающие ткани, вызывая их некроз [62].

Похожие диссертационные работы по специальности «Молекулярная биология», 03.01.03 шифр ВАК

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Фейзханова, Гузель Усмановна, 2014 год

7 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Male D. et al. Immunology. Saunders, 2012. P. 482.

2. Cooke R.A. Allergy in Theory and Practice. Saunders, 1947. P. 572.

3. Grimbaldeston M.A. et al. Effector and potential immunoregulatory roles of mast cells in IgE-associated acquired immune responses. // Curr. Opin. Immunol. 2006. Vol. 18, №6. P. 751-760.

4. Salvin S., Smith R. The specificity of allergic reactions I. Delayed versus arthus hypersensitivity // J. Exp. Med. 1960. P. 465-483.

5. Gell P.G.H., Coombs R.R.A. Clinical Aspects of Immunology. Blackwell Scientific Publications Ltd., 1963. P. 883.

6. Uzzaman A., Cho S.H. Classification of hypersensitivity reactions. // Allergy Asthma Proc. 2012. Vol. 33 Suppl 1. P. S96-9.

7. Goldsby R.A. et al. Immunology, Fifth Edition. W. H. Freeman, 2002. P. 603.

8. Hagan P. IgE and protective immunity to helminth infections // Parasite Immunol. 1993. Vol. 15. P. 1-4.

9. Jackola D. Random allergen-specific IgE expression in atopic families: evidence for inherited "stochastic bias" in adverse immune response development to noninfectious // Mol. Immunol. 2007. Vol. 44, № 10. P. 2549-2557.

10. Misiak R.T., Wegienka G., Zoratti E. Are specific allergen sensitivities inherited? // Curr. Allergy Asthma Rep. 2010. Vol. 10, № 5. P. 336-339.

11. De Week A.L. et al. Dog Allergy, a Model for Allergy Genetics // Int. Arch. Allergy Immunol. Karger Publishers, 1997. Vol. 113, № 1-3. P. 55-57.

12. Turton J. IgE, parasites, and allergy // Lancet. 1976. Vol. 308, № 7987. P. 686.

13. Bennich H., Johansson S.G.O. Immunoglobulin E and immediate hypersensitivity //Vox Sang. 1970. Vol. 13, № 1. P. 1-13.

14. Gould H.J., Sutton B.J. IgE in allergy and asthma today. // Nat. Rev. Immunol. 2008. Vol. 8, № 3. P. 205-217.

15. Ramirez M.A. Horse asthma following blood transfusion // J. Am. Med. Assoc. American Medical Association, 1919. Vol. 73, № 13. P. 984.

16. Ishizaka K., Ishizaka T., Hathorn E.M. Blocking of Prausnitz-Kustner sensitization with reagin by "A chain" of human ylA-globulin // Immunochemistry. 1964. Vol. 1, № 3. P. 197-207.

17. Ishizaka K., Ishizaka T., Hornbrook M.M. Blocking of Prausnitz-Kustner sensitization with reagin by normal human |32A globulin // J. Allergy. 1963. Vol. 34, № 5. P. 395-403.

18. Rowe D.S., Fahey J.L. A New Class of Human Immunoglobulins. I. A Unique Myeloma Protein. //J. Exp. Med. 1965. Vol. 121. P. 171-184.

19. Rowe D.S., Fahey J. A New Class of Human Immunoglobulins: II. Normal Serum IgD // J. Exp. Med. 1965. Vol. 121, № l.P. 185-199.

20. Ishizaka K., Ishizaka T. Identification of gamma-E-antibodies as a carrier of reaginic activity. // J. Immunol. American Association of Immunologists, 1967. Vol. 99, №6. P. 1187-1198.

21. Stanworth D.R. et al. Inhibition of Prausnitz-Kustner Reaction by Proteolytic-Cleavage Fragments of a Human Myeloma Protein of Immunoglobulin class E // Lancet. 1968. Vol. 292, № 7558. P. 17-18.

22. Bennich H. et al. Immunoglobulin E, a new class of human immunoglobulin // Bull. World Heal. Organ. 1968. Vol. 38, № 1. P. 151-152.

23. Winter W.E., Hardt N.S., Fuhrman S. Immunoglobulin E: importance in parasitic infections and hypersensitivity responses. // Arch. Pathol. Lab. Med. 2000. Vol. 124, №9. P. 1382-1385.

24. Nilsson K., Bennich H. Established immunoglobulin producing myeloma (IgE) and lymphoblastoid (IgG) cell lines from an IgE myeloma patient // Clin. Exp. Immunol. 1970. Vol. 7, № 4. P. 477-489.

25. Sarfati M. et al. In vitro synthesis of IgE by human lymphocytes. III. IgE-potentiating activity of culture supernatants from Epstein-Barr virus (EBV) transformed B cells. // Immunology. 1984. Vol. 53, № 2. P. 207-214.

26. Bennich H., Johansson S.G. Structure and function of human immunoglobulin E. //Adv. Immunol. 1971. Vol. 13. P. 1-55.

27. Wan T. et al. The crystal structure of IgE Fc reveals an asymmetrically bent conformation. // Nat. Immunol. 2002. Vol. 3, № 7. P. 681-686.

28. Ogawa M. et al. Biologic properties of E myeloma proteins. // Am. J. Med. 1971. Vol. 51, №2. P. 193-199.

29. Vieira P., Rajewsky K. The half-lives of serum immunoglobulins in adult mice // Eur. J. Immunol. 1988. Vol. 18. P. 313-316.

30. Ishizaka T., Ishizaka K. Cell Surface IgE on Human Basophils Granulocytes // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1975. Vol. 254, № 1 Fifth Interna. P. 462-475.

31. Ochiai K. et al. A review on Fc epsilon RI on human epidermal Langerhans cells. // Int. Arch. Allergy Immunol. 1994. Vol. 104 Suppl, № 1. P. 63-64.

32. Malveaux F.J. et al. IgE receptors on human basophils. Relationship to serum IgE concentration. // J. Clin. Invest. 1978. Vol. 62, № 1. P. 176-181.

33. Ishizaka T., Ishizaka K. Activation of mast cells for mediator release through IgE receptors. // Prog. Allergy. 1984. Vol. 34. P. 188-235.

34. Ra C., Jouvin E., Kinet J. Complete structure of the mouse mast cell receptor for IgE (Fc epsilon RI) and surface expression of chimeric receptors (rat-mouse-human) on transfected cells. // J. Biol. Chem. 1989. Vol. 264, № 26. P. 1532315327.

35. Isakov N. ITIMs and ITAMs. The Yin and Yang of antigen and Fc receptor-linked signaling machinery. // Immunol. Res. 1997. Vol. 16, № 1. P. 85-100.

36. Garman S.C. et al. Structure of the Fc fragment of human IgE bound to its high-affinity receptor Fc epsilonRI alpha. // Nature. 2000. Vol. 406, № 6793. P. 259266.

37. McDonnell J.M. et al. The structure of the IgE Cepsilon2 domain and its role in stabilizing the complex with its high-affinity receptor FcepsilonRIalpha. // Nat. Struct. Biol. 2001. Vol. 8, № 5. P. 437-441. .

38. Prussin C., Metcalfe D.D. 5. IgE, mast cells, basophils, and eosinophils. // J. Allergy Clin. Immunol. 2006. Vol. 117, № 2 Suppl Mini-Primer. P. S450-6.

39. Scharenberg a M. et al. Reconstitution of interactions between tyrosine kinases and the high affinity IgE receptor which are controlled by receptor clustering. // EMBO J. 1995. Vol. 14, № 14. p. 3385-3394.

40. Hamawy M., Mergenhagen S., Siraganian R. Protein tyrosine phosphorylation as a mechanism of signalling in mast cells and basophils // Cell. Signal. 1995. Vol. 6568, №95. P. 535-544.

41. Broide D.H. Molecular and cellular mechanisms of allergic disease // J. Allergy Clin. Immunol. 2001. Vol. 108, № 2. P. S65-S71.

42. Kimura Y., Inoue Y., Honda H. Further studies on rat mast cell degranulation by IgE-anti-IgE and the inhibitory effect of drugs related to cAMP. // Immunology. 1974. Vol. 26, № 5. P. 983-988.

43. Dvorak A.M. et al. Human mast cells use conservation and condensation mechanisms during recovery from degranulation. In vitro studies with mast cells purified from human lungs. // Lab. Invest. 1986. Vol. 54, № 6. P. 663-678.

44. Delespesse G. et al. The low-affinity receptor for IgE. // Immunol. Rev. 1992. Vol. 125, № 125. P. 77-97.

45. Bettler B. et al. Molecular structure and expression of the murine lymphocyte low-affinity receptor for IgE (Fc epsilon RII). // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1989. Vol. 86, № 19. P. 7566-7570.

46. Bowles S.L. et al. Comparative binding of soluble fragments (derCD23, sCD23, and exCD23) of recombinant human CD23 to CD21 (SCR 1-2) and native IgE, and their effect on IgE regulation. // Cell. Immunol. Elsevier Inc., 2011. Vol. 271, №2. P. 371-378.

47. Dhaliwal B. et al. Crystal structure of IgE bound to its B-cell receptor CD23 reveals a mechanism of reciprocal allosteric inhibition with high affinity receptor FceRI. //Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2012. Vol. 109, № 31. P. 12686-12691.

48. Corominas M. et al. CD23 expression on B-lymphocytes and its modulation by cytokines in allergic patients. // Clin. Exp. Allergy. 1993. Vol. 23, № 7. P. 612617.

49. Paterson R.L. et al. Triggering through CD40 promotes interleukin-4-induced CD23 production and enhanced soluble CD23 release in atopic disease. // Eur. J. Immunol. 1996. Vol. 26, № 9. p. 1979-1984.

50. Riley J., West G. The presence of histamine in tissue mast cells // J. Physiol. 1953. Vol. 120. P. 528-537.

51. Hill S. Distribution, properties, and functional characteristics of three classes of histamine receptor // Pharmacol. Rev. 1990. Vol. 42, № 1. P. 45-83.

52. Engels F., Nijkamp F.P. Pharmacological inhibition of leukotriene actions. // Pharm. World Sci. 1998. Vol. 20, № 2. P. 60-65.

53. Ohkawara Y. et al. Cytokine and eosinophil responses in the lung, peripheral blood, and bone marrow compartments in a murine model of allergen-induced airways inflammation. // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1997. Vol. 16, № 5. P. 510-520.

54. Sicherer S.H. Advances in anaphylaxis and hypersensitivity reactions to foods, drugs, and insect venom // J. Allergy Clin. Immunol. 2003. Vol. Ill, № 3. P. S829-S834.

55. Harris J.W. Studies on the mechanism of a drug-induced hemolytic anemia. // J. Lab. Clin. Med. 1956. Vol. 47, № 5. P. 760-775.

56. Beutler E. Drug-Induced Hemolytic Anemia // Pharmacol. Rev. 1969. Vol. 21, № 1. P. 73-103.

57. Arndt P. a., Garratty G. The Changing Spectrum of Drug-Induced Immune Hemolytic Anemia // Semin. Hematol. 2005. Vol. 42, № 3. P. 137-144.

58. Raj an T.V. The Gell-Coombs classification of hypersensitivity reactions: a reinterpretation // Trends Immunol. 2003. Vol. 24, № 7. P. 376-379.

59. Deicher H., Holman H., Kunkel H. The precipitin reaction between DNA and a serum factor in systemic lupus erythematosus // J. Exp. Med. 1959. Vol. 109, № 1. P. 97-114.

60. Isenberg D.A. et al. Anti-DNA antibody idiotypes in systemic lupus erythematosus. // Lancet. 1984. Vol. 2, № 8400. P. 417-422.

61. Askenase P.W., Van Loverent H. Delayed-type hypersensitivity: activation of mast cells by antigen-specific T-cell factors initiates the cascade of cellular interactions // Immunol. Today. 1983. Vol. 4, № 9. P. 259-264.

62. Kalish R.S., Askenase P.W. Molecular mechanisms of CD8+ T cell-mediated delayed hypersensitivity: implications for allergies, asthma, and autoimmunity. // J. Allergy Clin. Immunol. 1999. Vol. 103, № 2 Pt 1. P. 192-199.

63. Trautmann a et al. New insights into the role of T cells in atopic dermatitis and allergic contact dermatitis. // Trends Immunol. 2001. Vol. 22, № 10. P. 530-532.

64. Biidinger L., Hertl M. Immunologic mechanisms in hypersensitivity reactions to metal ions: an overview // Allergy. 2000. Vol. 55, № 2. P. 108-115.

65. Thyssen J.P., Menne T. Metal allergy—a review on exposures, penetration, genetics, prevalence, and clinical implications. // Chem. Res. Toxicol. 2010. Vol. 23, №2. P. 309-318.

66. Bousquet J. et al. Uniform definition of asthma severity, control, and exacerbations: document presented for the World Health Organization Consultation on Severe Asthma. // J. Allergy Clin. Immunol. 2010. Vol. 126, № 5. P. 926-938.

67. Dolen W.K. Skin Testing Techniques // Immunol. Allergy Clin. North Am. 2001. Vol. 21, №2. P. 273-279.

68. Аллергология и иммунология: Национальное руководство / ed. Хаитов Р., Ильина Н. Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2009. Р. 656.

69. Wood R.A. et al. A comparison of skin prick tests, intradermal skin tests, and RASTs in the diagnosis of cat allergy. // J. Allergy Clin. Immunol. 1999. Vol. 103, № 5 Pt 1. P. 773-779.

70. Bernstein D.I. et al. Twelve-year survey of fatal reactions to allergen injections and skin testing: 1990-2001. // J. Allergy Clin. Immunol. 2004. Vol. 113, № 6. P. 1129-1136.

71. Norrman G., Falth-Magnusson K. Adverse reactions to skin prick testing in children - Prevalence and possible risk factors // Pediatr. Allergy Immunol. 2009. Vol. 20, №3. P. 273-278.

72. Johansson S.G.O. et al. Revised nomenclature for allergy for global use: Report of the Nomenclature Review Committee of the World Allergy Organization, October 2003. // J. Allergy Clin. Immunol. 2004. Vol. 113, № 5. P. 832-836.

73. Dos Santos R.V. et al. Suppression of histamine- and allergen-induced skin reactions: comparison of first- and second-generation antihistamines. // Ann. Allergy, Asthma Immunol. American College of Allergy, Asthma & Immunology, 2009. Vol. 102, № 6. P. 495-499.

74. Wide L., Bennich H., Johansson S.G.O. Diagnosis of Allergy by an in-vitro Test for Allergen Antibodies // Lancet. 1967. Vol. 290, № 7526. P. 1105-1107.

75. Ceska M., Lundkvist U. A new and simple radioimmunoassay method for the determination of IgE. // Immunochemistry. 1972. Vol. 9, № 10. P. 1021-1030.

76. Ewan P.W., Coote D. Evaluation of a capsulated hydrophilic carrier polymer (the ImmunoCAP) for measurement of specific IgE antibodies. // Allergy. 1990. Vol. 45, № 1. P. 22-29.

77. Hamilton R.G., Franklin Adkinson N. In vitro assays for the diagnosis of IgE-mediated disorders // J. Allergy Clin. Immunol. 2004. Vol. 114, № 2. P. 213-225.

78. Wachholz P. a, Dearman R.J., Kimber I. Detection of Allergen-Specific IgE Antibody Responses. // J. Immunotoxicol. 2005. Vol. 1, № 3. P. 189-199.

79. Cevdek A., Franko M. Comparison of CIM discs and CPG glass as solid supports for bioanalytical columns used in allergen detection. // Anal. Bioanal. Chem. 2010. Vol. 398, № 1. P. 555-562.

80. Jiang X.-D. et al. Correlation analysis of two serum-specific immunoglobulin E test systems and skin-prick test in allergic rhinitis patients from northeast China. // Am. J. Rhinol. Allergy. Vol. 25, № 2. P. 116-119.

81. Kemeny D.M. et al. Ultrasensitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of picogram quantities of IgE. // J. Immunol. Methods. 1989. Vol. 120, №2. P. 251-258.

82. Hirano T. et al. An improved method for the detection of IgE antibody of defined specificity by ELISA using rat monoclonal anti-IgE antibody. // J. Immunol. Methods. 1989. Vol. 119, № l.P. 145-150.

83. Kadooka Y. et al. A method for measuring specific IgE in sera by direct ELISA without interference by IgG competition or IgG autoantibodies to IgE. // Int. Arch. Allergy Immunol. 2000. Vol. 122, № 4. P. 264-269.

84. Mullin G.E. et al. Testing for food reactions: the good, the bad, and the ugly. // Nutr. Clin. Pract. 2010. Vol. 25, № 2. P. 192-198.

85. Braren I. et al. Generation of human monoclonal allergen-specific IgE and IgG antibodies from synthetic antibody libraries. // Clin. Chem. 2007. Vol. 53, № 5. P. 837-844.

86. Brunnee T. et al. Comparison between two automated systems to determine specific IgE: CAP and ELItest. // Clin. Exp. Allergy. 1996. Vol. 26, № 12. P. 1420-1427.

87. Bacarese-Hamilton T. Detection of allergen-specific IgE on microarrays by use of signal amplification techniques // Clin. Chem. 2002. Vol. 48, № 8. P. 1999-2002.

88. Kim T.-E. et al. Quantitative measurement of serum allergen-specific IgE on protein chip. // Exp. Mol. Med. 2002. Vol. 34, № 2. P. 152-158.

89. Mullenix M., Wiltshire S., Shao W. Allergen-specific IgE detection on microarrays using rolling circle amplification: correlation with in vitro assays for serum IgE // Clin. Chem. 2001. Vol. 1, № 10. P. 1917-1933.

90. Fall B.I. et al. Microarrays for the screening of allergen-specific IgE in human serum. // Anal. Chem. 2003. Vol. 75, № 3. P. 556-562.

91. Jahn-Schmid B. et al. Allergen microarray: comparison of microarray using recombinant allergens with conventional diagnostic methods to detect allergen-specific serum immunoglobulin E. // Clin. Exp. Allergy. 2003. Vol. 33, № 10. P. 1443-1449.

92. Ohyama K., Omura K., Ito Y. A Photo-immobilized Allergen Microarray for Screening of Allergen-specific IgE // Allergol. Int. 2005. Vol. 54, № 4. P. 627631.

93. Ito Y. et al. An automated multiplex specific IgE assay system using a photoimmobilized microarray. // J. Biotechnol. Elsevier B.V., 2012. Vol. 161, № 4. P. 414-421.

94. Harwanegg C., Hiller R. Protein microarrays for the diagnosis of allergic diseases: state-of-the-art and future development. // Clin. Chem. Lab. Med. 2005. Vol. 43, № 12. P. 1321-1326.

95. Ott H. et al. Microarray-based IgE detection in capillary blood samples of patients with atopy. // Allergy. 2006. Vol. 61, № 9. P. 1146-1147.

96. Goikoetxea M.J. et al. The importance of in vitro component-resolved diagnosis in paediatric patients // Allergol. Immunopathol. (Madr). 2010. Vol. 38, № l.P. 3740.

97. Heller M.J. DNA microarray technology: devices, systems, and applications. // Annu. Rev. Biomed. Eng. 2002. Vol. 4. P. 129-153.

98. Brown P.O., Botstein D. Exploring the new world of the genome with DNA microarrays. //Nat. Genet. 1999. Vol. 21, № 1 Suppl. P. 33-37.

99. Shendure J. a et al. Overview of DNA sequencing strategies. // Curr. Protoc. Mol. Biol. 2011. Vol. Chapter 7, № October. P. Unit7.1.

100. Nguyen D. V et al. DNA microarray experiments: biological and technological aspects. // Biometrics. 2002. Vol. 58, № 4. P. 701-717.

101. Jolma A. et al. Multiplexed massively parallel SELEX for characterization of human transcription factor binding specificities. // Genome Res. 2010. Vol. 20, № 6. P. 861-873.

102. Sampson T. Aptamers and SELEX: the technology // World Pat. Inf. 2003. Vol. 25, №2. P. 123-129.

103. Petach H., Gold L. Dimensionality is the issue: use of photoaptamers in protein microarrays // Curr. Opin. Biotechnol. 2002. Vol. 13, № 4. P. 309-314.

104. Brazas M., Hancock R. Using microarray gene signatures to elucidate mechanisms of antibiotic action and resistance // Drug Discov. Today. 2005. Vol. 10, № 18. P. 1245-1252.

105. Cui L. et al. DNA microarray-based identification of genes associated with glycopeptide resistance in Staphylococcus aureus. // Antimicrob. Agents Chemother. 2005. Vol. 49, № 8. P. 3404-3413.

106. Ramaswamy S., Golub T. DNA microarrays in clinical oncology // J. Clin. Oncol. 2002. Vol. 20, № 7. P. 1932-1941.

107. MacBeath G. Protein microarrays and proteomics. // Nat. Genet. 2002. Vol. 32 Suppl, № december. P. 526-532.

108. Kodadek T. Protein microarrays: prospects and problems. // Chem. Biol. 2001. Vol. 8, № 2. P'. 105-115.

109. Ekblad T., Liedberg B. Protein adsorption and surface patterning // Curr. Opin. Colloid Interface Sci. Elsevier Ltd, 2010. Vol. 15, № 6. P. 499-509.

110. Wilson D.S., Nock S. Functional protein microarrays. // Curr. Opin. Chem. Biol. 2002. Vol. 6, № l.P. 81-85.

111. Zhu H., Snyder M. Protein arrays and microarrays. // Curr. Opin. Chem. Biol. 2001. Vol. 5, № l.P. 40^45.

112. Ge H. UP A, a universal protein array system for quantitative detection of proteinprotein, protein-DNA, protein-RNA and protein-ligand interactions. // Nucleic Acids Res. 2000. Vol. 28, № 2. P. e3.

113. Reimer U., Reineke U., Schneider-Mergener J. Peptide arrays: from macro to micro // Curr. Opin. Biotechnol. 2002. Vol. 13, № 4. P. 315-320.

114. Sette A., Peters B. Immune epitope mapping in the post-genomic era: lessons for vaccine development. // Curr. Opin. Immunol. 2007. Vol. 19, № 1. P. 106-110.

115. Uttamchandani M., Yao S.Q. Peptide microarrays: next generation biochips for detection, diagnostics and high-throughput screening. // Curr. Pharm. Des. 2008. Vol. 14, № 24. P. 2428-2438.

116. VanMeter A. et al. Reverse-phase protein microarrays: application to biomarker discovery and translational medicine. // Expert Rev. Mol. Diagn. 2007. Vol. 7, № 5. P. 625-633.

117. Charboneau L. et al. Utility of reverse phase protein arrays: applications to signalling pathways and human body arrays. // Brief. Funct. Genomic. Proteomic. 2002. Vol. 1,№ 3. P. 305-315.

118. Nilsson P. et al. Towards a human proteome atlas: high-throughput generation of mono-specific antibodies for tissue profiling. // Proteomics. 2005. Vol. 5, № 17. P. 4327-4337.

119. Zajac A. et al. Protein microarrays and quantum dot probes for early cancer detection. // Colloids Surf. B. Biointerfaces. 2007. Vol. 58, № 2. P. 309-314.

120. Gonzalez-Angulo A.M., Hennessy B.T.J., Mills G.B. Future of personalized medicine in oncology: a systems biology approach. // J. Clin. Oncol. 2010. Vol. 28, № 16. P. 2777-2783.

121. Duburcq X. et al. Peptide-protein microarrays for the simultaneous detection of pathogen infections. //Bioconjug. Chem. 2004. Vol. 15, № 2. P. 307-316.

122. Rubina A Yu, Filippova MA, Feizkhanova GU, Shepeliakovskaya AO, Sidina EI, Boziev KhM, Laman, AG, Brovko FA, Vertiev YuV, Zasedatelev AS, Grishin EV. Simultaneous detection of seven staphylococcal enterotoxins: development of hydrogel biochips for analytical and practical application. // Anal. Chem. 2010. Vol. 82, № 21. P. 8881-8889.

123. Quintana F.J. et al. Functional immunomics: microarray analysis of IgG autoantibody repertoires predicts the future response of mice to induced diabetes. //Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2004. Vol. 101 Suppl . P. 14615-14621.

124. Joos T.O. et al. A microarray enzyme-linked immunosorbent assay for autoimmune diagnostics. // Electrophoresis. 2000. Vol. 21, № 13. P. 2641-2650.

125. Deinhofer K. et al. Microarrayed allergens for IgE profiling. // Methods. 2004. Vol. 32, №3. P. 249-254.

126. Lueking a et al. Protein microarrays for gene expression and antibody screening. // Anal. Biochem. 1999. Vol. 270, № 1. P. 103-111.

127. De Wildt R.M. et al. Antibody arrays for high-throughput screening of antibody-antigen interactions. // Nat. Biotechnol. 2000. Vol. 18, № 9. P. 989-994.

128. Silzel J., Cercek B., Dodson C. Mass-sensing, multianalyte microarray immunoassay with imaging detection // Clin. Chem. 1998. Vol. 44, № 9. P. 20362043.

129. Angenendt P. et al. Toward optimized antibody microarrays: a comparison of current microarray support materials. // Anal. Biochem. 2002. Vol. 309, № 2. P. 253-260.

130. Emmrich F. Reduction of non-specific human IgM binding in solid-phase assays. // J. Immunol. Methods. 1984. Vol. 72, № 2. P. 501-503.

131. Guschin D. et al. Manual manufacturing of oligonucleotide, DNA, and protein microchips. // Anal. Biochem. 1997. Vol. 250, № 2. P. 203-211.

132. Guzman N. a, Stubbs R.J. The use of selective adsorbents in capillary electrophoresis-mass spectrometry for analyte preconcentration and microreactions: a powerful three-dimensional tool for multiple chemical and biological applications. //Electrophoresis. 2001. Vol. 22, № 17. P. 3602-3628.

133. Mendoza L.G. et al. High-throughput microarray-based enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) // Biotechniques. 1999. Vol. 27, № 21811. P. 778788.

134. Afanassiev V., Hanemann V., Wölfl S. Preparation of DNA and protein micro arrays on glass slides coated with an agarose film. // Nucleic Acids Res. 2000. Vol. 28, № 12. P. E66.

135. Li J., Hu X.K., Lipson R.H. On-chip enrichment and analysis of peptide subsets using a maleimide-functionalized fluorous affinity biochip and nanostructure initiator mass spectrometry. // Anal. Chem. 2013. Vol. 85, № 11. P. 5499-5505.

136. Hinterwirth H., Lindner W., Lämmerhofer M. Bioconjugation of trypsin onto gold nanoparticles: effect of surface chemistry on bioactivity. // Anal. Chim. Acta. Elsevier B.V., 2012. Vol. 733. P. 90-97.

137. Gautrot J.E. et al. Protein-resistant NTA-functionalized polymer brushes for selective and stable immobilization of histidine-tagged proteins. // ACS Appl. Mater. Interfaces. 2010. Vol. 2, № 1. P. 193-202.

138. Péter M. et al. Flexible biochips for detection of biomolecules. // Langmuir. 2009. Vol. 25, №9. P. 5384-5390.

139. Khrapko K.R. et al. [Hybridization of DNA with oligonucleotides immobilized in a gel: a convenient method for recording single base replacements]. // Mol. Biol. (Mosk). Vol. 25, № 3. P. 718-730.

140. Arenkov P. et al. Protein microchips: use for immunoassay and enzymatic reactions. // Anal. Biochem. 2000. Vol. 278, № 2. P. 123-131.

141. Charles P.T. et al. Immobilization Strategy and Characterization of Hydrogel-Based Thin Films for Interrogation of Ligand Binding with Staphylococcal Enterotoxin B (SEB) in a Protein Microarray Format // Langmuir. 2004. Vol. 20, № 1. P. 270-272.

142. Rubina A.Y. et al. Why 3-D? Gel-based microarrays in proteomics. // Proteomics. 2008. Vol. 8, № 4. P. 817-831.

143. Rubina A.Y. et al. Hydrogel-based protein microchips: manufacturing, properties, and applications. // Biotechniques. 2003. Vol. 34, № 5. P. 1008-1014, 1016-1020, 1022.

144. Rubina A.Y. et al. Protein microchips // Dokl. Biochem. Biophys. 2001. Vol. 381, № 5. P. 701-704.

145. Способ полимеризационной иммобилизации биологических макромолекул и композиция для его осуществления. Патент РФ 2216547 [Online]. URL: http://www.fmdpatent.ru/patent/221/2216547.html (accessed: 10.02.2014).

146. Vasiliskov A., Timofeev E. Fabrication of microarray of gel-immobilized compounds on a chip by copolymerization // Biotechniques. 1999. Vol. 27, № 3. P. 592-598.

147. Zubtsova Z.I. et al. Hydrogel-based protein and oligonucleotide microchips on metal-coated surfaces: enhancement of fluorescence and optimization of immunoassay. // J. Biotechnol. 2009. Vol. 144, № 2. P. 151-159.

148. Rubina A.Y. et al. Quantitative immunoassay of biotoxins on hydrogel-based protein microchips // Anal. Biochem. 2005. Vol. 340, № 2. P. 317-329.

149. Laemmli U.K. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4 //Nature. 1970. Vol. 227, № 5259. P. 680-685.

150. Plebani M. et al. Receiver-operating characteristic (ROC) curves: a fundamental tool for improving the clinical usefulness of in vitro IgE tests // Allergy. 1996. Vol. 51, №6. P. 407^11.

Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.