Мутагенное действие излучений с разной ЛПЭ на клетки млекопитающих и хромосомная нестабильность HPRT-мутантных субклонов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.01, кандидат биологических наук Кошлань, Игорь Владимирович

• Кошлань, Игорь Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Кошлань, Игорь Владимирович

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 2. БИОЛОГИЧЕСКИЕ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Условия культивирования клеток

2.2. Источники излучений и их физические характеристики

2.3. Культивирование клеток для оценки выживаемости и частоты мутаций

2.4. Селекция HPRT-мутантов для проведения цитогенетического анализа

2.5. Приготовление препаратов для цитогенетического анализа

2.6. Статистическая обработка данных

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Летальное и мутагенное действие излучений с разной ЛПЭ на клетки млекопитающих

3.2. Цитогенетические характеристики спонтанных и радиационно-индуцированных HPRT-мутантных субклонов

3.2.1. Продолжительность роста HPRT-мутантных субклонов

3.2.2. Хромосомные аберрации в клетках HPRT-мутантных субклонов

3.2.2.1. Спонтанные HPRT-мутантные субклоны

3.2.2.2. Радиационно-индуцированные HPRT-мутантные субклоны

3.2.3. Спектры хромосом HPRT-мутантных субклонов

3.2.4. Тетраплоидные HPRT-мутантные субклоны

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Мутагенное действие излучений с разной ЛПЭ на клетки млекопитающих и хромосомная нестабильность HPRT-мутантных субклонов»

Актуальность проблемы

Проблема биологического действия ионизирующих излучений с разными физическими характеристиками продолжает оставаться весьма актуальной в радиобиологии. Огромное по своим масштабам и быстро развивающееся во времени использование ядерных материалов вовлекло в контакты с ионизирующим излучением широкие контингента населения. Это обусловило необходимость решения важнейших практических задач, связанных с радиоэкологическими проблемами, вопросами нормирования лучевых нагрузок у персонала, работающего в смешанных полях ионизирующих излучений, проблемами радиационной безопасности длительных космических полетов человека, использования различных источников ионизирующих излучений для лучевой терапии онкологических заболеваний и др.

По мере развития ядерной физики, строительства новых ускорителей и атомных реакторов перед радиобиологами возникали многочисленные задачи. Если на первых порах было необходимо выяснить такие важнейшие показатели, как допустимые и летальные дозы облучения, то в последующем необходимо было решать вопросы, связанные с выяснением механизмов воздействия этих излучений на живой организм и, в особенности, на человека. В настоящее времА проблема радиационного риска волнует человечество сильнее, чем 15-20 лет назад. Взаимодействие ионизирующего излучения с веществом включает процессы, происходящие на атомарном и молекулярном уровнях, растянутые во времени и предшествующие появлению повреждений, регистрируемых многочисленными и разнообразными критериями. Радиация при воздействии в высоких дозах , облучения вызывает серьезнейшие поражения тканей, а при малых дозах может способствовать возникновению рака и индукции генетических дефектов, которые могут проявиться и у детей и даже у более отдаленных потомков облученного человека. Усилия ученых многих специальностей сосредоточены на изучении закономерностей действия радиации на живые объекты и поиске путей борьбы с ее вредным влиянием. Уже первые работы, проведенные в этом направлении, показали, что исход лучевого поражения не фатален и может быть изменен определенными профилактическими мерами.

Проблема генетического действия ионизирующей радиации является одной из важнейших в этом направлении. Наименее изучено мутагенное действие излучений на клетки высших эукариотов, в том числе человека. Хотя, это явление было обнаружено еще в середине 20-х годов XX века, оно все еще остается слабо изученным. И, прежде всего, это касается мутагенного действия разных видов плотно ионизирующих излучений, в частности, ускоренных тяжелых ионов. Как было выяснено, ионизирующая радиация индуцирует наиболее широкий спектр мутационной изменчивости по сравнению с другими мутагенами. Она увеличивает частоту хромосомных аберраций, генных и геномных мутаций.

Способность к наследственной изменчивости, в основе которой лежат мутационные и рекомбинационные изменения генотипа, является одним из основных свойств живых организмов. У каждого вида эволюционно сложился и закрепился определенный, возможно, оптимальный уровень спонтанного мутирования. Однако техногенное развитие цивилизации привело к появлению в среде обитания соединений и источников ионизирующих излучений, которые обладают высоким мутагенным действием. Индуцированный мутагенез представляет реальную опасность для жизни и здоровья человека, поскольку вновь возникающие мутации оказывают не только непосредственное негативное влияние, но влияют и на последующие поколения. Мутагены физической и химической природы индуцируют широкий спектр различных наследуемых повреждений, которые, по общепризнанному мнению, лежат в основе злокачественного перерождения клеток и возникновения в последующих поколениях наследственных заболеваний. Причем в обоих случаях биологические последствия существенно отдалены по времени от момента непосредственного действия вызывающих их повреждающих агентов. Имеются данные (Бочков Н.П. и Чеботарев А.К, 1989), свидетельствующие о том, что от 79 до 94 % хромосомных болезней человека являются следствием вновь возникающих мутаций в половых клетках здоровых родителей, при этом большинство их являются рецессивными (Kaplan R.W., 1984) и не проявляются в первом поколении. По мере их накопления, вследствие процессов авторепродукции и распространения в генофонде человеческой популяции, будет повышаться и доля наследственных заболеваний.

Задача изучения мутагенного действия ионизирующего излучения, особенно на клетки млекопитающих и человека, весьма сложна и требует создания новых методов и использования различных подходов для ее решения. К настоящему времени разработан ряд методов (ПЦР, блот-анализ) и тест-систем для оценки мутаций резистентности клеток млекопитающих и человека к ряду химических соединений. С их помощью

• зарегистрированы мутации отдельных генов, анализ которых позволяет судить о мутагенезе клеток высших эукариотов. Выявлен ряд мутантов по локусам HPRT, APRT, ТК и других, возникающих как спонтанно, так и при воздействии ионизирующих излучений. При этом данные по радиационно-индуцированному мутагенезу получены, в основном, при воздействии редко ионизирующих электромагнитных видов излучений (у-и рентгеновские лучи). В настоящее время во многих научных лабораториях проводятся исследования разных типов мутаций отдельных генов, возникающих в клетках млекопитающих при воздействии ионизирующих излучений. Что касается мутагенного действия плотно ионизирующих излучений и особенно тяжелых ионов, то оно остается слабо изученным. Имеются весьма немногочисленные и несистематичные сведения по данному вопросу.

В связи с изложенным, учитывая актуальность, научную и практическую значимость изучения генетического действия ионизирующих излучений разного качества, а также неполноту сведений в этой области, мы провели сравнительные исследования закономерностей мутагенного действия на клетки млекопитающих разных видов излучений в широком диапазоне значений линейной передачи энергии (ЛПЭ). Нами также исследованы особенности цитогенетических характеристик HPRT-мутантных субклонов, выращенных из одиночных клеток, сохраняющих возникшие в них HPRT-мутации в последующих поколениях.

Цель и основные задачи исследования

Целью настоящего исследования явилось изучение закономерностей мутагенного действия на клетки млекопитающих редко и плотно ионизирующих излучений в широком диапазоне значений их ЛПЭ (у-лучи, протоны высоких энергий, ускоренные ионы гелия, углерода и азота с разными энергиями).

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить дозовые зависимости частоты HPRT-мутаций клеток китайского хомячка, индуцированных у-лучами и ускоренными тяжелыми ионами в широком диапазоне значений ЛПЭ;

2. Изучить индукцию HPRT-мутаций в клетках китайского хомячка в зависимости от ЛПЭ исследованных излучений;

3. Выявить и выделить клетки с мутациями в локусе HPRT, индуцированными у-лучами, протонами с энергией 1 ГэВ и ионами азота с энергией 50 МэВ/нуклон, и вырастить из них радиационно-индуцированные HPRT-мутантные субклоны;

4. Выявить и выделить HPRT-мутантные клетки в интактной культуре клеток китайского хомячка и вырастить спонтанные мутантные субклоны;

5. Провести цитогенетический анализ спонтанных и радиационных HPRT-мутантных субклонов, индуцированных излучениями, различающимися по величине ЛПЭ;

6. Провести сравнительный анализ по цитогенетическим показателям спонтанных и радиационных HPRT-мутантных субклонов, индуцированных излучениями с разной величиной ЛПЭ;

7. Оценить по цитогенетическим показателям специфику мутагенного действия на клетки млекопитающих редко и плотно ионизирующих излучений с разной величиной ЛПЭ.

Научная новизна В работе впервые:

1. Проведено систематическое исследование закономерностей образования мутаций в клетках китайского хомячка при индукции редко и плотно ионизирующими излучениями: у-лучами, ускоренными ионами гелия с ЛПЭ 20, 50 и 78 кэВ/мкм и ионами углерода с ЛПЭ 214 и 367 кэВ/ мкм;

2. Получены HPRT-мутантные субклоны клеток китайского хомячка, индуцированные протонами с энергией 1 ГэВ (ЛПЭ -0.218 кэВ/мкм), и исследованы их цитогенетические характеристики;

3. Получены HPRT-мутантные субклоны при индукции тяжелыми ионами азота 14N с энергией 50 МэВ/нуклон (ЛПЭ ~ 77 кэВ/мкм) и исследованы их цитогенетические характеристики;

4. Проведен сравнительный анализ по цитогенетическим показателям спонтанных и радиационных HPRT-мутантных субклонов, индуцированных у-лучами, протонами с энергией 1 ГэВ и ионами азота 14N: выявлена их гетерогенность, геномная (по числу хромосом) и хромосомная (по уровню аберраций) нестабильность;

5. Выявлено снижение хромосомной нестабильности HPRT-мутантных субклонов, индуцированных плотно ионизирующими ионами азота 14N с энергией 50 МэВ/нуклон, по сравнению с мутантами, индуцированными редко ионизирующими излучениями Су-лучами и протонами с энергией 1 ГэВ), и спонтанными мутантами.

Научно- практическая значимость работы

Результаты проведенного исследования имеют как фундаментальное, так и прикладное значение. Прежде всего, они пополняют сведения о мутагенном действии ионизирующих излучений разного качества на клетки высших эукариотов, в том числе плотно ионизирующих излучений с разной величиной ЛПЭ. Они могут иметь значение для установления количественных и качественных закономерностей формирования мутаций в клетках млекопитающих и человека. Результаты работы могут быть использованы для оценки отдаленных последствий воздействия ионизирующих излучений с разными физическими характеристиками на клетки млекопитающих и человека. Такие сведения важны для уточнения критериев при гигиеническом нормировании воздействия излучений с разными физическими характеристиками при работе человека в радиационных условиях на Земле и в Космосе, для научного обоснования предельно допустимых уровней облучения человека такими видами радиации. Результаты исследования могут быть использованы также для радиобиологического обоснования применения разных видов излучений, в том числе плотно ионизирующих, в терапии новообразований у человека в онкологической практике.

Заключение диссертации по теме «Радиобиология», Кошлань, Игорь Владимирович

выводы

1) Исследованы выживаемость и индукция HPRT-мутаций в клетках китайского хомячка (линия FAF 28, клон 431) при облучении ионизирующими излучениями с разными физическими характеристиками: у-лучи 60Со и ускоренные ионы гелия 4Не с ЛПЭ - 20, 50 и 78 кэВ/мкм и углерода 12С с ЛПЭ - 214 и 367 кэВ/мкм. Изучены цитогенетические характеристики HPRT-мутантных субклонов (линия V-79): спонтанных и индуцированных разными дозами у-лучей, протонов с энергией 1 ГэВ (ЛПЭ - 0.218 кэВ/мкм) и ионов азота ,4N с энергией 50 МэВ/нуклон (ЛПЭ - 77 кэВ/мкм). Выявлены количественные и качественные особенности мутагенного действия ускоренных заряженных частиц в широком диапазоне ЛПЭ.

2) Показана линейно-квадратичная зависимость от дозы для выживаемости клеток и индукции HPRT-мутаций при воздействии у-лучами и ионами 4Не с ЛПЭ - 20 и 50 кэВ/мкм и линейный характер зависимости эффектов при индукции тяжелыми ионами с ЛПЭ >78 кэВ/мкм.

3) Показано, что зависимость ОБЭ от ЛПЭ тяжелых ионов при оценке по выживаемости и индукции HPRT-мутаций описывается кривой с локальным максимумом в области ЛПЭ около 80 кэВ/мкм. Эффективность ионов 4Не и 12С с ЛПЭ 20-214 кэВ/мкм по индукции мутаций в два и более раз выше, чем при оценке по выживаемости клеток.

4) Выявлена гетерогенность спонтанных и индуцированных протонами, ионами азота 14N и у-лучами HPRT-мутантных субклонов по цитогенетическим показателям: митотической активности, спектрам хромосом в клетках, модальному числу хромосом, уровням хромосомных аберраций.

5) Выявлена хромосомная нестабильность мутантных субклонов. Являясь наиболее высокой при спонтанном мутагенезе, она снижалась с увеличением ЛПЭ индуцирующих излучений. Доля мутантов с повышенными в 1.5-3 и более раз уровнями хромосомных аберраций (по сравнению с субклонами интактного контроля) уменьшалась от 81% при спонтанном мутагенезе до 44%, 36% и 19% при индукции у-лучами, протонами и ионами азота, соответственно.

6) Среди радиационно-индуцированных мутантных субклонов выявлены образцы со сниженными в 2-4 раза уровнями хромосомных аберраций по сравнению с интактным контролем. Их доля увеличивалась с ростом ЛПЭ излучений: от 1576

20% при индукции у-лучами и протонами до 40% (в среднем) при индукции ионами азота. Среди спонтанных мутантов они не обнаружены.

7) Выявлено, что хромосомная нестабильность мутантных субклонов изменяется в зависимости от дозы при индукции редко ионизирующими излучениями (протоны и у-лучи). С увеличением дозы она снижается от уровня, соответствующего спонтанному мутагенезу, до минимальных значений при дозах 2-3 Гр. При последующем увеличении индуцирующих доз до 7 Гр она повышается, приближаясь к уровню хромосомной нестабильности спонтанных мутантов.

8) Выявлена высокая анеуплоидия мутантных субклонов вплоть до полной плоидии. Доля мутантов с широкими спектрами хромосом (менее 60% клеток модального класса) была наибольшей при индукции редко ионизирующими протонами и у-лучами (до 70%) и снижалась при индукции ионами азота до 40%. При спонтанном мутагенезе она составляла ~50%.

9) Обнаружены медленно растущие HPRT-мутанты среди всех исследованных типов мутантных субклонов. Их доля увеличивалась с увеличением индуцирующей дозы и ЛПЭ излучений: до 90-100% при высоких дозах редко ионизирующих протонов и у-лучей и при всех исследованных дозах (1-3 Гр) плотно ионизирующих ионов азота.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Настоящее исследование является результатом работы, выполненной в Отделении радиационных и радиобиологических исследований Объединенного института ядерных исследований. Оно стало возможным благодаря использованию высоко энергетичных заряженных частиц, генерируемых базовыми установками ОИЯИ - протонов релятивистских энергий на синхрофазатроне Лаборатории высоких энергий, ускоренных ионов гелия и углерода на ускорителе У-200 и ионов азота на ускорителе У-400М Лаборатории ядерных реакций имени академика Г.Н.Флерова. Облучение у-лучами 60Со проведено на терапевтической установке "Рокус" Лаборатории Ядерных проблем.

В работе излагаются результаты проведенных исследований по изучению количественных закономерностей мутагенного действия на клетки млекопитающих ионизирующих излучений разного качества: у-лучей 60Со, протонов с энергией 1 ГэВ, ускоренных заряженных ионов 4Не, 12С, 14N с разными ЛПЭ. Проведена оценка ОБЭ ионов гелия и углерода в широком диапазоне ЛПЭ (20-367 кэВ/мкм) по индукции HPRT-мутаций и выживаемости клеток китайского хомячка. Исследованы цитогенетические характеристики HPRT-мутантных субклонов, индуцированных разными дозами у-лучей, протонов с энергией 1 ГэВ (ЛПЭ - 0.218 кэВ/мкм) и ионов азота I4N с энергией 50 МэВ/нуклон (ЛПЭ - 77 кэВ/мкм), а также спонтанных мутантов. Проведен сравнительный анализ мутантных субклонов по цитогенетическим показателям.

Диссертация изложена на 92 страницах машинописного текста, состоит из введения, 4-х глав и выводов, содержит 14 таблиц, 14 рисунков. Список литературы включает 144 наименований, из которых 47 - на русском языке и 97 - на английском языке.

Выражаю глубокую благодарность начальнику ОРРИ доктору биологических наук, профессору Е.А.Красавину за содействие и постоянное внимание к работе; начальнику Отдела радиационных исследований, кандидату физико-математических наук В.Е.Алейникову, кандидату физико-математических наук Г.Н.Тимошенко и начальнику ускорительных установок А.П.Череватенко, обеспечившим проведение экспериментов и дозиметрию на пучках заряженных частиц при облучении образцов клеток млекопитающих. Выражаю большую благодарность коллегам Группы радиобиологии клеток млекопитающих кандидату биологических наук Н.Л.Шмаковой, младшим научным сотрудникам Т.А.Фадеевой и Н.А.Кошлань, которые своим содействием, помощью, личным участием способствовали выполнению проводимых исследований.

Самую искреннюю признательность и благодарность выражаю моему научному руководителю кандидату биологических наук Р.Д.Говорун за постоянное внимание и помощь, личное участие во всех этапах выполнения данной работы. По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Говорун Р.Д., Кошланъ КВ., Красавин Е.А., Шмакова H.JI. Мутагенное действие у-излучения на клетки китайского хомячка. Цитогенетическая характеристика мутантов по локусу HPRT. //Радиобиология. Радиационная экология. 1996. Т. 36. Вып.6. С. 852-859.

2. Говорун Р.Д., Красавин Е.А., Шмакова H.JI, Кошланъ КВ. Нестабильность хромосом спонтанных и радиационно-индуцированных у-лучами HGPRT- мутантов клеток млекопитающих. Chromosome instability of spontaneous and radiation-induced mammalian cell mutants. // В: Проблемы биохимии, радиационной и космической биологии. (Тез. Межд. симпоз.) РАН, ОИЯИ. М., Дубна. 1997. С. 47. Р. 126.

3. Govorun R.D., Krasavin Е.А., Shmakova N.L., Koshlan'I.V. Chromosome instability of spontaneous and y-ray-induced mammalian cell mutants. // Тр. Межд. симпоз. Проблемы биохимии, радиационной и космической биологии. Т.2, РАН, ОИЯИ. Дубна, 1997, С.34-42.

4. Shmakova N.L., Krasavin Е.А., Govorun R.D., Fadeeva Т. A., Koshlan'I.V. The influence of radiation quality on the survival and chromosome damage of mammalian cells. // Там же. С. 4348.

5. Шмакова Н.Л., Красавин Е.А., Говорун Р.Д., Фадеева Т.А., Кошланъ КВ. Летальное и мутагенное действие излучений с разной ЛПЭ на клетки млекопитающих. // Радиобиология. Радиационная экология. 1997, Т.37, Вып.2, С. 85-91.

6. Кошланъ КВ., Говорун Р.Д. Анализ хромосомных аберраций радиационно-индуцированных у-лучами и спонтанных HPRT-мутантов клеток млекопитающих. // Тр. Первой открытой научной конференции молодых ученых и специалистов ОИЯИ. ОИЯИ, УНЦ, ОМУС. Дубна. 1997, С. 178-182.

7. Кошланъ KBи Кошланъ НА., Говорун Р.Д. Цитогенетический анализ мутантов клеток млекопитающих, индуцированных ускоренными ионами азота 14N. // Тр. Второй открытой научной конференции молодых ученых и специалистов ОИЯИ. ОИЯИ, УНЦ, ОМУС. Дубна. 1998. С.154-156.

8. Кошланъ КВ. Радиационно-индуцированная геномная нестабильность // Тр. Третьей открытой научной конференции молодых ученых и специалистов ОИЯИ. ОИЯИ, УНЦ, ОМУС. Дубна. 1999. С.187-189.

9. Когилань И.В., Кошланъ Н.А. /Различия мутантов, индуцированных излучениями с разными ЛПЭ, по цитогенетическим показателям // Тр. Четвертой открытой научной конференции молодых ученых и специалистов ОИЯИ. ОИЯИ, УНЦ, ОМУС. Дубна. 2000. С. 203-204 .

10. Кошланъ И.В., Кошланъ Н.А., Говорун Р.Д. Геномная нестабильность мутантов клеток млекопитающих, спонтанных и индуцированных гамма-лучами и ускоренными протонами и ионами азота. // В: Горизонты физико-химической биологии. (Тез. Школы-конф.). Т.1. Пущино. 2000. С. 296-297.

11. Кошланъ И.ВГоворун Р.Д., Кошланъ Н.А., Красавин Е.А., Шмакова H.JI. Индукция HPRT-мутантов клеток млекопитающих излучениями с разной ЛПЭ. Induction of HPRT-mutants of the mammalian cells by radiation with different LET. // В: Проблемы радиационной генетики на рубеже веков. (Тез. Межд. Конф.). Москва. 2000. С. 36-37.

12. Кошланъ И.Ви Говорун Р.Д., Кошланъ Н.А Индукция HPRT-мутантов клеток млекопитающих излучениями с разной ЛПЭ. // Тр. Пятой открытой научной конференции молодых ученых и специалистов ОИЯИ. ОИЯИ, УНЦ, ОМУС. Дубна. 2001. С. 120-122.

13. Кошланъ Н.А., Кошланъ И.ВГоворун Р.Д. Продолжительность роста HPRT-мутантов, индуцированных излучениями с разной ЛПЭ. // Тр. Пятой открытой научной конференции молодых ученых и специалистов ОИЯИ. ОИЯИ, УНЦ, ОМУС. Дубна. 2001. С. 123-125.

14. Говорун Р.Д., Кошланъ И.В., Кошланъ Н.А., Красавин Е.А, Фадеева Т.А., Шмакова H.JI. Закономерности мутагенного действия на клетки млекопитающих у-лучей и тяжелых ионов. Геномная нестабильность HPRT-мутантов. Тез. IV съезд по радиационным исследованиям (радиобиология, радиоэкология, радиационная безопасность). Москва. 2001. С. 718.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Кошлань, Игорь Владимирович, 2002 год

1. Арендаревский Л.Ф. Культура тканей в онкологии. // М.: ИЭКО АМН СССР, 1968. С. 143-148.

2. Ауэрбах Ш. Проблемы мутагенеза. // М.: Мир, 1978. 464с.

3. Беляев И.Я., Акифъев А.П. И Генетика. 1988. Т. 24. С. 1384-1389

4. Бочков Н.П., Демин Ю.С., Лучник Н.В. Классификация и методы учета хромосомных аберраций в соматических клетках. // Генетика. 1972. Т. VIII. № 5. С. 133-141.

5. Бочков Н.П. и Чеботарев А.И. Наследственность человека и мутагены внешней среды. //М.: Медицина, 1989.270 с.

6. Бреслер С.Е., Носкин Л.А., Суслов А.В. Изучение индукции двунитевых разрывов ДНК в клетках под действием у-излучения и их репарация в клетках Escherichia coli. // Радиобиология. 1981. Т. 21. № 1. С. 3-8.

7. Бахтин Ю.Б. Генетика соматических клеток. // Л.: Наука, 1974. 256с.

8. Бахтин Ю.Б. Генетическая теория клеточных популяций. // Л.: Наука, 1980. 168с.

9. Воробьева М.В. Исследование радиочувствительности хромосом облученныхродителей. // Автореферат канд. дисс. Санкт-Петербург, 1995,16 стр.

10. Говорун Р.Д. Цитогенетические нарушения и мутагенез в клетках млекопитающих и человека, индуцированные ионизирующими излучениями с различной ЛПЭ. // Радиационная биология. Радиоэкология. 1997. Т. 37. Вып. 4. С. 539-548.

11. Елисова Т.В., Феоктистова Т.П. Изучение закономерностей индукции рентгеновскими лучами мутаций резистентности к 6-иогуанину в культуре клеток китайского хомячка в условиях применения цистеамина. // Генетика. 1981. Т. 17. № 6. Стр. 1044-1051.

12. Захаров А. Ф., Какпакова Е.С., ЕголинаН.А. Взаимоотношение числовой и структурной изменчивости кариотипа в культивируемых клетках китайского хомячка. // Цитология. 1966, а. Т. 8. №2. С. 193-201.

13. Захаров А.Ф. Поздняя редупликация хромосом в культивируемых анеуплоидных клетках китайского хомячка. // Цитология. 1966, б. Т. 8. № 2. С. 201-207.

14. Захаров А. Ф. Хромосомная изменчивость и клеточный отбор в популяциях длительно культивируемых клеток. Докт. дисс. (биол. наук) // Ин-т экспериментальной и клинической онкологии АМН СССР, М., 1970. 333 с.

15. Календо Г.С. Может ли пострадиационное слияние клеток быть фактором защиты клеточной популяции? // Радиобиология. 1993. Т. 33. Вып. 1. Стр. 76-80.

16. Календо Г.С., Демидова Н.И. Кинетика образования поликарионов в культуре клеток HeLa после облучения в дозах 5 и 10 Гр. // Радиационная биология. Радиоэкология. 1994. Т. 34. Вып. 1. Стр. 94-99.

17. Календо Г.С. Системная защитная реакция популяции опухолевых клеток на облучение в больших дозах. // Радиационная биология. Радиоэкология. 1997. Т. 37. Вып. 4. Стр. 532-535.

18. Корогодш В.К, Близник КМ. Закономерности формирования радиорас у дрожжевых организмов. 1. Радиорасы диплоидных дрожжей Saccharomyces ellipsoideus (vini). // Радиобиология. 1972,а. Т. XII. Вып. 2. Стр. 163-171.

19. Корогодин В.К, Близник К.М., Капулъцевич Ю.Г. Закономерности формирования радиорас у дрожжевых организмов. 2. Пути расообразования. // Радиобиология. 1972,6. Т. XII. Вып. 3. Стр. 416-424.

20. Корогодин В.К, Близник КМ., Капулъцевич Ю.Г. Закономерности формирования радиорас у дрожжевых организмов. 11. Факты и гипотиза. // Радиобиология. 1977. Т. XVII. Вып. 4. Стр. 492-499.

21. Красавин Е.А. Проблема ОБЭ и репарация ДНК. // М.: Энергоатомиздат, 1989.193с.

22. Красавин Е.А., Казубек С. Мутагенное действие излучений с разной ЛПЭ. // М.:

23. Энергоатомиздат, 1991. 182с.

24. Лучник Н.В., Бочков Н.П., Севанькаев А.В. Влияние гамма-облучения на хромосомы человека. Статистический анализ распределения аберраций по клеткам. // Генетика. 1969. Т. 5. № 1.С. 129-135.

25. Мамаева С.Е. Цитогенетика клеток в культуре. // В кн.: Биология клеток в культуре. Ред. А.С. Трошин. Л.: Наука, 1984. Стр. 195-234.

26. Пелевина И.И., Готлиб В.Я., Кудряшова О.В., Антощина М.М., Серебряный A.M. Свойства потомков облученных клеток. // Цитология. 1998. Т. 40. № 5. Стр. 467-476.

27. Пелевина И.И., Готлиб В.Я., Кудряшова О.В., Антощина М.М. Развитие отдаленных последствий в потомках облученных клеток млекопитающих // Онтогенез. 2001. Т. 32. № 1. Стр. 51-57.

28. Порошенко Г.Г. Популяционные подходы к изучению устойчивости опухолей к химиотерапии. // В кн.: Генетика человека. Т. 3. Ред. Н.П. Бочков. М.: Наука, 1978. Стр. 193-218.

29. Репин М.В., Говорун Р.Д., Красавин Е.А. и др. Стабильные и нестабильные хромосомные аберрации в лимфоцитах крови человека in vitro после у-облучения. // Радиационная биология. Радиоэкология. 1996. Т.36. Вып. 6. С. 848-851.

30. Севанькаев А.В., Саенко А.С. Соматический мутагенез как биологический дозиметр радиационного воздействия. // Радиационная биология. Радиоэкология. 1997. Т. 37.1. Вып. 4. Стр. 560-564.

31. Спитковский Д.Ю. Концепция действия малых доз ионизирующих излучений на клетки и ее возможные приложения к трактовке медико-биологических последствий. // Радиационная биология. Радиоэкология. 1992. Т. 32. Вып. 3. Стр. 382-400.

32. Тимофеев-Рессовский Н.В., Савич А.В., Шальное М.И. Введение в молекулярную радиобиологию. М.: Медицина. 1981.

33. Тырсина Е.Г., Календо Г.С., Сланина С.В. Резкое повышение пролиферативной активности у потомков опухолевых клеток, выживших после облучения большими дозами. // Докл. АН СССР. 1996. Т. 347. № 5. Стр. 699-703.

34. Шевченко В.А. Последствия Чернобыльской катастрофы: Здоровье человека. / Под ред. Бурлаковой Е.Б. // М.: ЦЭПР, 1996. Стр . 50-67.

35. Abbondandolo A. Prospects for evaluation genetic damage in mammalian cells in culture. // Mutation Research. 1977. V. 42. P. 279-298.

36. Aghamohammadi S.Z., Morris Т., Stevens D.L., Thacker J. Rapid screening for deletion mutations in the HPRT gene using the polymerase chain reaction X-ray and a-particle mutant spectra. // Mutation Research. 1992. V. 269. P. 1-7.

37. Bradley W.E. C., Gareau J.L.P., Seifert A.M., Messing K. Molecular characterization of 15 rearrangements among 90 human in vivo somatic mutants shows that deletions predominate. // Molecular and Cellular Biology. 1987. V.7. № 2. P. 956-960.

38. Breimer L.H. Ionizing radiation-induced mutagenesis. // Br. J. Cancer. 1988. V. 57. P. 6-18.

39. Carver L.H, Dewey W.C., Hopwood L.E. X-ray-induced mutants to 8-azaguanine. I. Effects of cell density and expression time. // Mutation Research. 1976. V. 34. P. 465-479.

40. Chang W.P. and Little J.B. Evidence that DNA double-strand breaks initiate the phenotype of delayed reproductive death in Cinese hamster ovary cells. // Radiation Research. 1992. V. 131. P. 53-59.

41. Chris H.M., deBruyn M. Hypoxanthine-Guanine Phosphoribosyl Transferase Deficiency // Hum. Genet. 1976. V-31. P 127-150.

42. Collussi N., van Leeuwen X., Lohman P.H.M. Similar mutational spectra in the HPRT gene of human and hamster cell lines after exposure to either low dose rate or high dose rate X-rays. // Mutation Research. 1998. V. 401. P. 89-97.

43. Cox R., Masson W.K. Mutation and inactivation of cultured mammalian cells exposed to beams of accelerated heavy ions. III. Human diploid fibroblasts. // Int. J. Radiat. Biol. 1979. V. 36. №2. P. 149-160.

44. Cremer Т., Lichter P., Borden J., Ward D.C., Manuelidis L. Detection of chromosome aberrations in metaphase and interphase tumor cells by in situ hybridization using chromosome-specific library probes. // Hum Genet. 1988. V. 80. P. 235-246.

45. Day J.P., Limoli C.L., Morgan W.F. Recombination involving interstitial telomere repeatlike sequences promotes chromosomal instability in Chinese hamster cells. // Carcinogenesis. 1998. V. 19. №2. P. 259-265.

46. Fearon E.R., Vogelstein В. A genetic model for colorectal tumorigenesis. // Cell. 1990. V. 61. P. 759-767.

47. Gennett I.N., Thilly W.G. Mapping large spontaneous deletion endpoints in the human HPRT gene. //Mutation Research. 1988. V. 201. P. 149-60.

48. Glickman B. W, RietveldK., Aaron C.S. Gamma-Ray induced mutational spectrum in the lacl gene of Escherichia coli: comparison of induced and spontaneous spectra at the molecular level.//Mutation Research. 1980. V. 69. P. 1-12.

49. Hakoda M., Hirai Y., Kyoizumi S., Akiyama H. Molecular analyses of in vivo hprt mutant T cells from atomic bomb survivors. // Environmental and Molecular Mutagenesis. 1989. V. 13. P. 25-33.

50. Hall E.J., Gross W., Dvorak R.F., Kellerer A.M., Rossi H.H. Survival curves and age response functions for Chinese hamster cells exposed to x-rays or high LET alpha-particles. // Radiation Research. 1972. V. 52. №1. P. 88-98.

51. Hann B.C. and Lane D.P. The dominating effect of mutant p53. // Nat Genet. 1995. V. 9. №3. P. 221-222.

52. Harper K, Lorimore S.A., Wright E.G. Delayed appearance of radiation-induced mutations at the Hprt locus in murine hemopoietic cells. // Exp. Hematol. 1997. V.25. P. 263-269.

53. Harris M. Cell culture and somatic variation. // Holt., Rinehart and Winston, New York. 1964.

54. Harvey M, Vogel H, Morris D, Bradley A, Bernstein A, Donehower LA. A mutant p53 transgene accelerates tumour development in heterozygous but not nullizygous p53-deficient mice. //Nat. Genet. 1995. V.9. № 3. P.305-311.

55. Heisterkamp N., Groffen J. Molecular insight into the Philadelphia translocation. // Hematol. Pathol. 1991. V. 5. № 1. P. 1-10.

56. Kadhim M.A., Walker C.A.,Plumb M.A. and Wright E.G. No association between p53 status and a-particle-induced chromosomal instability in human lymphoblastoid cells. // Int. J. Radiat. Biol. 1996. V. 69. P. 167-174.

57. Kaplan R. W. Mutationen fur die evolution. //Naturwiss. Rdsch. 1984. V. 37. P. 125-134.

58. Kaplan M.I., Morgan W.F. The nucleus is the target for radiation-induced chromosomal instability. // Radiation Research. 1998. V. 150. №4. P. 382-390.

59. Kiefer J., Schreiber A., Gutermuth F., Koch S., Schmidt P. Mutation induction by different types of radiation at the HPRT locus. // Mutation Research. 1999. V. 431. P. 429-448.

60. Kinashi Y., Nagasawa H., Little J.B. Molecular structural analyses of 417 HPRT mutations induced by restriction endonucleases in Cinese hamster ovary (CHO) cells. // Mutation Research. 1995. V. 326. P. 83-92.

61. Liber H.L., Call K.M., Little J.B. Molecular and biochemical analyses of spontaneous and X-ray-induced mutants in human lymphoblastoid cells. // Mutation Research. 1987. V. 178. P. 143-153.

62. Lichter P., Cremer Т., Borden J., Manuelidis L., Ward D.C. Delineation of individual human chromosomes in metaphase and interphase cells by in situ suppression hybridization using recombinant DNA libraries. // Hum Genet. 1988. V. 80. P. 224-234.

63. Limoli C.L., Corcoran J.J., Milligan J.R., Ward J.F., Morgan WF. Critical target and dose-rate responses for the induction of chromosomal instability by ionizing radiation. // Radiation Research. 1999. V. 151. №6. P. 677-685.

64. Little J.B., Nagasawa H., Pfenning Т., Vetrovs H. Radiation-induced genomic instability: delayed mutagenic and cytogenetic effects of X-rays and alpha particles. // Radiation Research. 1997. V. 148. P. 299-307.

65. Little J.B. Radiation-induced genomic instability. // Int. j. Radiat. Biol. 1998. Vol. 74. № 6. P. 663-671.

66. Loeb L.A. Mutator phenotype may be required for multistage carcinogenesis. // Cancer Res. 1991. V. 51. P. 3075-3079.

67. Loeb L.A. Microsatellite instability: marker of a mutator phenotype in cancer. // Cancer Res. 1994. V. 1. № 54(19). P. 5059-5063.

68. Manti L., Jamali M., Prise K.M., Michael B.D. and Trott K.-R. Genomic instability in Cinese hamster cells after exposure to X-rays or alpha particles of different mean linear energy transfer. // Radiation Research. 1997. V. 147. P. 22-28.

69. Melo J. V. The molecular biology of chronic myeloid leukaemia. // Leukaemia. 1996. V. 10. № 5. P. 751-756.

70. Melton D.W., Konecki D.S., Brennand J., Caskey C.T. Structure, expression and mutation of the hypoxantine phosphoribosyltransferase gene. // Proc. Natl. Acad. Sci. (USA). 1984. № 81. P. 2147-2151.

71. Michalik V. Model of DNA damage induced by radiations of various qualities. // Int. J. Radiat. Biol. 1992. V. 62. P. 9-20.

72. Metting N.F., Palayoor S.T., Macklis R.M., Atcher R. W., Liber H.L., Little J.B. Induction of mutation by bismuth-212 a particles at two genetic loci in human B-lymphoblasts. // Radiation Research. 1992. V. 132. P. 339-345.

73. Morgan W.F., Day J.P., Kaplan M.I., McGhee E.M., Limoli C.L. Genomic instability induced by ionizing radiation. // Radiation Research. 1996. V. 146. № 3. P. 247-258 .

74. Nelson J.A., Carpenter J.W., Rose L.M., Adamson D.J. Mechanisms of action of 6-thioguanine, 6-mercaptopurine and 8-azaguanine. // Canser Research. 1975. V. 35. P. 28722878.

75. Nelson S.L., Giver C.R., Grosovsky A.J. Spectrum of X-ray-induced mutations in thehuman hprt gene. // Carcinogenesis. 1994. V. 15. P. 495-502.

76. Noel В., Quack В., Mottet J., Nantois Y., Dutrillaux В. II Selective endoreduplication or branched chromosome? Exper. Cell Res. 1997. V. 104. № 2. P. 423-426.

77. O'Neill J.P., Niclas J.A., Hunter T.C. // In: Mammalian Cells Mutagenesis. M.M. Moore et al. Eds. Banbury Report 28. 1987. NY, Cold Spring Harbor. P. 249-260.

78. O'Neill J.P., Hunter T.C., Sullivan L.M. et al. Southern-blot analyses of human T-lymphocyte mutants induced in vitro by gamma-irradiation. //Mutat. Res, 1990. V. 240. P. 143-149.

79. Paquette B. and Little J.В., In vivo enhancement of genomic instability in minisatellite sequences of mouse C3H/10T1/2 cells transformed in vitro by X-rays. // Cancer. Res. 1994. V. 54. № 12. P. 3173-3178.

80. ParkM. S., Hanks Т., Jaberaboansari A. and Chen D.J. Molecular analysis of gamma-ray induced mutations at the hprt locus in Primary human skin fibroblasts by multiplex polymerase chain reaction. // Radiation Research. 1995. V. 141. P. 11-18.

81. Patel P.I., Framson P.E., Caskey C.T., Chinault A.C. Fine structure of the human hypoxantine phosphoribosyltransferase gene. // Mol. Cell Biol. 1986. № 6. P. 393-403.

82. Pinkel D., Straume Т., Gray J.W. Cytogenetic analysis using quantitative, high-sensitivity, fluorescence hybridization. // Proc Natl Acad Sci USA. 1986. V. 83. P. 29342938.

83. Preston R.J. Telomeres, telomerase and chromosome stability (review). 11 Radiation Research. 1997. V. 147. P. 529-534.

84. Риск T.T., Marcus P.I. Action of X-rays on mammalian cells. // J. Exptl. Med. 1956. V. 103. № 5. P. 653-678.

85. Pui C.H., Crist W.M., Look A.T. Biology and clinical significance of cytogenic abnormalities in childhool acute lymphoblastic leukemia. // Blood, 1990. V. 76. № 8. P. 1449-1463.

86. Rabbitts Т.Н., Chromosomal translocations in human cancer. // Nature. 1994. V. 372. № 6502. P. 143-149.

87. Rossi A.M., Thijssen J.C.P., Tates A.D., Vrieling H, Natarajan A.T., Lohman P.H.M., van Zeeland A.A. Mutation affecting RNA splising in man are detected more frequently in somatic then in germ cells. // Mutation Research. 1990. V. 244. P. 353-357.

88. Rossiter B.J.F., Fuscoe J.C., Muzny D.M., Fox M, Caskey C.T The Chinese hamster HPRT gene: restriction map, sequence analysis, and multiplex PCR deletion screen. // Genomics. 1991. V. 9. P. 247-256.

89. Sankaranarayanan K. Ionizing radiation and genetic risks. Ill Nature of spontaneous and radiation-induced mutations in mammalian in vitro systems and mechanisms of induction of mutations by radiation. //Mutation Research. 1991. V. 258. P. 75-97.

90. Schmidt P., Kiefer J. Deletion-pattern analysis of a-particle and X-ray induced mutation at the HPRT locus of V-79 Chinese hamster cells. // Mutation Research. 1998. V. 421. P. 149-161.

91. Schwartz J.L., Rotmensch J., Sun J., An J., Xu Z., Yu Y., Hsie A. W. Multiplex polymerase chain reaction-based deletion analysis of spontaneous, gamma ray-and alpha- induced hprt mutants of CHO-K-lcells. // Mutagenesis. 1994. V. 9. № 6. P. 537-540.

92. Selvanayagam C.S., Davis C.M., Cornforth M.N., Ullrich R.L. Latent expression of p53 mutations and radiation-induced mammary cancer. // Cancer Res. 1995. V. 55. № 15. P. 3310-3317.

93. Shapiro N.I., Varshaver N.B. Mutagenesis in cultured mammalian cells. // Method in cell Biology. Ed. D. M. Prescott. V.10. N.Y.: Acad. Press, 1975. P. 209-243.

94. Skarsgard L.D., Kihlman B.A., Parker L., Pujara C.M., Richardson S. Survival, chromosome abnormalities, and recovery in heavy-ion- and X-irradiated mammalian cells. // Radiation Research. 1967. Supplement №7. P. 208-221.

95. Skulimowski A.W., Turner D.R., Morly A.A. et al. Molecular basis of X-ray-induced mutation at the HPRT locus in human lymphocytes. //Mutat. Res. 1986. V. 162. P. 105-112.

96. Stoll V., Schneider E., Kranert Т., Kiefer J. Induction of HPRT mutants in Chinese hamster V79 cells after heavy ion exposure. // Radiat Environ Biophys. 1995. V. 34. P. 9194.

97. Suzuki K., Hei Т.К. Mutation induction in y-irradiated primary human bronchial epithelial cells and molecular analysis of the HPRT mutants. // Mutation Research. 1996. V. 349. P. 33-41.

98. Thacker J., Stephens M.A., Stretch A. Factors affecting the efficiency of purine analogues as selective agents for mutants of mammalian cells induced by ionising radiation. // Mutation Research. 1976. V. 35. P. 465-478.

99. Thacker J., Stretch M., Stephens M. The induction of thioguanine-resistent mutants of Cinese hamster cells by y-rays. // Mutation Research. 1977. V. 42. P. 316-326.

100. Thacker J., Stretch A., Stephens M.A. Mutation and inactivation of cultured mammalian cells exposed to beams of accelerated heavy ions. II. Chinese hamster V-79 cells. // Int. J. Radiat. Biol. 1979. V. 36. № 2. P. 137-148.

101. Thacker J., Ganesh A. Molecular analisis of spontaneous and EMS-induced mutations of the hprt gene in hamster cells. //Mutation Research. 1989. V. 210. P. 103-112.

102. Thacker J., Fleck E.W., Morris Т., Rossiter B.I.F., Morgan T.L. Localization of deletion break-points in radiation-induced mutants of the hprt gene in hamster cells. // Mutation Research. 1990. V.232. P. 163-170.

103. Timoschenko G.N., Bamblevski V.P., Krylov A.R. The technique of measuring of relativistic proton absorbed dose in thin biological samples. // ОИЯИ, El6-99-47, 1999,10c.

104. Todd P. Heavy ion-irradiation of cultured human cells. // Radiation Research. 1967. Supplement №7. P. 196-207.

105. Tokarova В., Amirtayev K.G., KozubekS., Krasavin E.A. Mutagenic action of heavy ions on Escherichia coli cells. // Mutat. Res. 1989. V. 227. P. 199-205.

106. Trott K.R., Jamali M., Manti L., Teibe A. Manifestation and mechanisms of radiation-induced genomic instability in V-79 Cinese hamster cells. // Int. J. Radiat. Biol. 1998. V. 74. №6. P. 787-791.

107. Turner D.R., Morley A.A., Haliandros M., Kutlaca R., Sanderson B.J. In vivo somatic mutations in human lymphocytes frequently result from major gene alterations. // Nature (L). 1985. V. 315. № 6017. P. 343-345.

108. Whaley J.M., Little J. В. Molecular characterization of hprt mutants induced by low- and high-LET radiations in human cells. // Mutation Research. 1990. V. 234. P. 35-45.

109. Wojcik A., Bonk K., Mutter W.U., Obe G„ Streffer C. Do DNA double-strand breaks induced by Alu I lead to development of novel aberrations in the second and third post-treatment mitoses? // Radiation Research. 1996. V. 145. №2. P.l 19-127.

110. Yamada Y., ParkM. S., Okinaka R. Т., Chen D. J. Molecular analysis and comparison of radiation-induced large deletions of the HPRT locus in Primary human skin fibroblasts. // Radiation Research. 1996. Vol. 145. P. 481-490.

111. Yandell D.W., Dryja T.P., Little J.B. Somatic mutations at a heterozygous autosomal locus in human cells occur more frequency by intragenic structural alterations. // Somat. Cell Mol. Genet. 1986. V. 12. P. 255-263.

112. Yang T.C.-H., Graise L.M., Mei M.-T., Tobias C.A. Neoplastic Cell transformation by heavy charged particles. // Radiation Research. 1985. V. 104. P. 177-187.

113. Zhu L.X., Waldren C.A., Vannais D., Hei Т.К. Cellular and molecular analysis of mutagenesis induced by charged particles of defined linear energy transfer. // Radiation Research. 1996. V. 145. P. 251-259.